CN1198671A - 绿卟啉免疫调节剂 - Google Patents

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A·陈孝晴
D·W·C·亨特
J·利维
M·O·K·奥博奇
A·里克特
G·O·西姆金
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University of British Columbia
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Abstract

本发明涉及在对特定抗原的免疫反应的活性期,绿卟啉具有抗原特异性免疫调节剂的作用,并能够干扰细胞间联系。这些作用发生在没有绿卟啉可吸收光的条件下。

Description

绿卟啉免疫调节剂
技术领域
本发明领域为通过在无光条件下使用绿卟啉来调节免疫反应。在对特异性抗原的反应过程中使用绿卟啉时，抗原特异性免疫反应得到了调节。此外，无光条件下，绿卟啉干扰细胞间联系，从而可以防止或治疗例如再狭窄。
背景技术
在一系列专利中公开了一类用于光动力疗法的化合物，总称为绿卟啉，这些专利包括美国专利5,283,255；4,883,790；4,920,143；5,095,030；和5,171,749，其公开内容都在此引用参考。这些绿卟啉通过血卟啉的狄尔斯-阿德耳反应(Diels-Alder action)和对形成产物的可选性重排或还原来制备。如上述专利中所述，这些绿卟啉的一种特别好的形式被认为是一种单酸形式的苯并卟啉衍生物，或“BPD-MA”。这种药现在正处于对各种肿瘤及其他疾病进行光动力疗法的临床试验阶段。
光动力疗法基于这样的假设，即，被使用的光活性化合物，此处是绿卟啉，在无光条件下是没有生理作用的。但是，被照射时，化合物的激发态会产生局部毒性。所以，例如对肿瘤的治疗来说，就利用了这些光活性化合物在从正常细胞中被清除后滞留在肿瘤组织中这一倾向性。还发现，即使在将化合物从正常组织清除之前，在新生血管区域的局部照射也是有效的。
现在发现，与它们在PDT中作为光活性剂的性能无关，绿卟啉具有免疫调节能力，并能干扰细胞间联系。本发明就利用了绿卟啉的这一新的性能。
本发明的内容
本发明利用了绿卟啉在无照射条件下参与对特定抗原的特异性免疫反应的能力。产生的免疫调节作用是抗原特异性的，在迟发型超敏反应中获得的结果证明了这一点。所以，受试者避免了对自身抗原，变应原等的不必要的反应，通常没有免疫损伤的不利性。此外，绿卟啉能干扰细胞间联系，例如下文所述会导致血栓形成的细胞间联系。绿卟啉还与已知以序列RGD为特征的整合蛋白具有构象类似性。这允许使用绿卟啉来防治或治疗以不需要的的细胞间联系为特征的疾病。
这样，一方面，本发明涉及一种调节抗原特异性免疫反应的方法，该方法包括在没有绿卟啉可吸收光的条件下，对正经历着对某抗原的激活免疫反应的受试者使用可有效调节所述针对某抗原的免疫反应的一定量绿卟啉，所述的使用是在对前述特异性抗原的免疫反应的活跃阶段。
另一方面，本发明涉及一种调节受试者体内细胞间联系的方法，该方法包括在没有绿卟啉可吸收光的条件下，对需要这种调节作用的受试者使用可有效调节细胞间联系的一定量的绿卟啉，所述的使用在不需要的细胞间联系过程中进行。
再一方面，本发明包括用于本发明方法的绿卟啉制剂。
附图说明
图1显示用于本发明方法的绿卟啉的代表性结构。
图2显示RGDA代表的构象族的重叠构象。
图3显示RGDB代表的构象族的重叠构象。
图4显示RGDC代表的构象族的重叠构象。
图5显示BPD-MA的三维结构与代表性RGDA构象的重叠。
图6显示BPD-MA的三维结构与代表性RGDB构象的重叠。
图7显示BPD-MA的三维结构与代表性RGDC构象的重叠。
图8显示在首次用于实验的，未剔须的Balb/c幼鼠中，四种BPD类似物对DTH反应的作用的比较。
本发明实施方式
有许多针对特定抗原的某种免疫反应是不期望的情况。这类情况中主要有变应反应，自身免疫反应和对器官移植、皮肤移植的免疫排斥等。本发明的绿卟啉由于在激发免疫反应的活性阶段是有效的，因而在与抗原接触后的时段内使用是有效的，或者，如果免疫反应持续处于活性阶段，则在该持续阶段有效。
绿卟啉在没有其可吸收照射的条件下产生作用。这意味着不使用对靶目标的有意照射。但仍然可以存在有微弱的背景光。如前文背景部分中所述，绿卟啉被广泛用于光动力治疗方案中。在这些方案中，特地对一群经修饰而含有大量绿卟啉的细胞或组织进行照射，所用的光具有绿卟啉化合物的吸收波长。绿卟啉对这些波长的吸收激活了这些分子，使得周围物质被破坏。据假设，在激活的化合物降解过程中产生了单态氧，这才产生了毒性。光活性剂本身被认为是没有毒性的。
在本发明方法中，方案中不包括利用可产生激发作用的光进行的照射。但是，没有必要使受治疗者完全避光。所以，本文中，“没有绿卟啉可吸收的光”指一般的环境条件，而不是完全无光。这就表明，在本发明方法中，没有使用已知的绿卟啉的光动力作用。
绿卟啉
在前文背景部分中引用的专利中描述了绿卟啉的特性。简而言之，这些是原卟啉IX的衍生物，得自与取代乙炔的狄尔斯-阿德耳反应，该反应可选性地被继以重排和/或还原。图1显示了由此获得的化合物的典型结构式。图1中较好的结构式实例是其中的环体系，如图1-3或1-4中所示的那些；和/或，其中的R1和R2各自选自烷酯基(2-6C)，烷基(1-6C)，芳基磺酰基(6-10C)，氰基；-CONR5CO，其中R5是芳基(6-10C)或烷基(1-6C)；R3各自是羧基，羧基烷基(2-6C)或盐，酰胺，酯或acylhydragone或是烷基(1-6C)；R4是CH＝CH2或-CH(OR4’)CH3，其中R4’是H，或烷基(1-6C)，该烷基可选性地被疏水性取代基所取代。当然，可以使用混合物。
尤其好的是图1-3和1-4所示的那些化合物，其中R1和R2各自是烷酯基(2-6C)；一个R3是羧基烷基(2-6C)而另一个R3是羧基烷基(2-6C)取代基的酯；R4是CH＝CH2或-CH(OH)CH3。
特别好的是图1-3所示的化合物，其中R1和R2是甲氧羰基；一个R3是-CH2CH2COOCH3而另一个R3是CH2CH2COOH；R4是CH＝CH2。后一种化合物被称为BPD-MA，苯并卟啉衍生单酸的缩写，其中，狄尔斯-阿德耳反应发生在A环。
治疗病症的特性
在对特定抗原的激活免疫反应过程中将绿卟啉使用于脊椎动物时，能够调节对特定抗原的免疫反应，不产生任何全面免疫抑制。如果受试者是首次使用所用的免疫原/抗原，那么，施用的时间选择易做到。例如在使用同种移植物的移植方案中发现有不需要的对特地使用的抗原的免疫反应，如在皮肤移植或器官移植、个体细胞移植如用于治疗糖尿病的胰岛素置换中使用的那些，以及其它外科方法或涉及有意向受试者注射引入异源细胞或组织的方法中。可能出现不需要的对特地使用的化合物的免疫反应的其它例子包括使用受试者蛋白质的异种蛋白等。在许多情况中，虽然使用了人源化抗体，但在人类治疗中仍然使用来自小鼠的单克隆抗体。利用本发明方法可调节不需要的针对这类抗体的免疫反应。在这种情况中，激活初次免疫反应，与此同时使用或在使用抗原后立即使用绿卟啉能够产生期望的效果。
另一种出现对异源抗原的免疫反应的情况是变应反应。虽然这些反应通常是二次免疫反应，但在此二次接触的同时或在其之后立即使用本发明的绿卟啉，同样有效。
在上述两种情况中，在使用抗原或变应原的同时，或在对此抗原的活性反应所需的时段内使用绿卟啉。通常，这段时间在使用抗原后的24至48小时内。
适合使用本发明方法的受试者通常是脊椎动物，尤其是哺乳动物。总之，脊椎动物通常利用相似的细胞间联系系统，而且以相似的方式组织免疫反应。尤其好的受试者是驯养的动物和鸟类，以及人类。合适的治疗方案，剂量和配方当然取决于受试者的特性。
抗原的使用
在使用绿卟啉的同时或之前的即刻使用抗原应根据变应原的特性而不同。对于特地使用的抗原，例如用于治疗或诊断的药物，单克隆抗体或其它异源蛋白，通常由使用抗原的目的来控制剂量水平和使用形式。抗原一般是以存在于合适的配制药物组合物中的形式，而且剂量水平和预定使用途径也是已知的。
对于同种移植来说，通常认为，受体的同种成员的组织或器官的细胞虽然是免疫原性的，但可能并不包含引发移植排斥的主要组织相容性抗原。这些组织或器官包括血管化的器官如心、肾、肝、肺等，以及内分泌腺如垂体、甲状腺、肾上腺、甲状旁腺和胰腺，以及皮肤移植物。而且，这些抗原被认为是由包括在移植细胞中的杂质的过客细胞例如白细胞携带的。
所以，可以在携带具有MHC细胞的自身移植同时或之后立即使用绿卟啉，或者可以预先单独使用相应的组织相容性抗原来对受试者加以保护，这种抗原可以以前文所述的蛋白质或被包含在其携带细胞的表面的形式被使用。然后在使用这些细胞或组织相容性抗原后立即使用绿卟啉。例如，人的组织相容性的主要决定族是MHCII类抗原中的HLA-DR。它们已被分成亚类，如果确定了供体的型别，就可以在移植前近乎同时使用DR亚型抗原和绿卟啉。
如果抗原是变应原，可以与绿卟啉同时或在其临使用前注射或口服。或者，可以模拟自然接触来进行使用，例如使受试者接近含有已知会在受试者中引发变应反应的花粉的植物。当受试者处于这种环境中时，同时使用绿卟啉，或在稍后立即使用。
如果抗原是自身抗原，例如被认为与包括类风湿性关节炎，多发性硬化，红斑狼疮、某种类型的糖尿病，或一般由自身抗原引起的炎性反应在内的多种病症有关的那些自身抗原，抗原的使用无法单独控制。本发明方法的效果取决于对体内供给的自身抗原的持续的活性免疫反应。此时，对患自身免疫疾病的受试者使用绿卟啉最好在免疫反应最明显的时候。
另一种被认为与自身免疫反应相关的病症是牛皮癣。本发明方法对治疗这种病症同样有效，尤其是外用时。
细胞间联系
本发明的绿卟啉除了能够调节免疫反应之外，还由于其与整合蛋白在形式上的相似性，能够干扰细胞间联系。如下文所述，本发明绿卟啉的三维结构与代表含有粘着序列RGD分子的最佳构象的三维结构相似。而且，绿卟啉被认为能够干扰血栓形成，已知这是以RGD为基础的化合物的性能。所以，本发明方法还适用于治疗细胞间联系对受试者产生不良影响的病症。
一种这类情况出现在手术或其它创伤性血管损伤后的再狭窄中。为此，可以在临手术，即在对此压力的反应中有形成血凝块风险的手术时使用本发明方法。这种使用通常是全身性的，时间设定为能够干扰血栓形成所需的细胞间联系。
配制与使用
本发明的绿卟啉可以以本领域已知的，通常适用于小分子药物的方式配制和使用，例如最新版的Remington’s药物科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)，Mack Publishing Company，Easton，PA，中所述。组合物中应含有对提供免疫调节作用或细胞间联系干扰作用有效的绿卟啉含量。剂量水平根据使用方式、配方、治疗病症和受试者的特性而不同；但是，通常，全身给药的绿卟啉量为10Tg/kg至100mg/kg，100Tg/kg至10mg/kg更好，约1mg/kg最好。如果是外用，组合物中的合适浓度在组合物的约5％至95％之间，约10％至50％更好。
全身给药的途径可以是注射，包括静脉注射、肌内注射、腹膜内注射等；使用合适赋形剂的口服、透粘膜给药或透皮给药等。局部给药也可以通过栓剂或皮肤膏药进行，或者，绿卟啉可以凝胶或药膏的形式外用。
全身给药时，以脂质体组合物为佳。可以利用标准方法来制备脂质体；它们通常由带负电荷的磷脂，例如磷脂酰甘油，磷脂酰丝氨酸，磷脂酰肌醇以及脂类本身和各种稳定剂制得。这些脂质体可以是多层或单层的，并在一定的大小范围内。脂质体组合物中绿卟啉的浓度通常为1-20％。
以下实施例是用于说明本发明而不是限定本发明。
                         实施例1
                   对MBP诱导的EAE的作用
将PL小鼠体内的实验性变应性脑脊髓炎(EAE)作为人的多发性硬化的模型。可以通过注射来自用髓磷脂碱性蛋白(MBP)致敏的供体小鼠的脾细胞来引发这种病症。如此制备脾细胞：将MBP(4mg/ml磷酸盐缓冲液)乳化在等体积的完全Freund’佐剂(不完全Freund’佐剂中含4mg的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)H37RA)中制备成混合物，给PL小鼠使用0.1ml此混合物。在小鼠尾根部进行皮下注射。免疫后10天，取出脾脏，将其粉碎成单细胞悬浮液。离心沉淀细胞，并在0.14M的NH4Cl中裂解去除红细胞。在75cm2的烧瓶中，将细胞(4×106/ml)培养在RPMI1640培养基中，其中含有5％胎牛血清，5×10-5M的2-巯基乙醇，1mM丙酮酸钠，20mM的1-谷氨酰胺，100U/ml青霉素，100Tg/ml链霉素和100Tg/mlMBP。在37℃，5％CO2中培养3天后，将培养物与人重组白细胞介素-2(rIL-2，50U/ml)混合，再在培养箱中培养48小时。然后收获细胞，用无血清培养基洗涤，给未免疫过的同源鼠静脉注射5×107个细胞。如此处理过的小鼠通常在细胞转移后18至25天内发生EAE。
4只对照鼠被注射以按上一节所述制备和培养的5×107个细胞。19至30天后，其中3个发生了特征性的与EAE有关的麻痹症。当MBP反应性T淋巴细胞侵入中枢神经系统时，会诱导这种病症。但是，在试验组中，4只小鼠，同样注射了用MBP致敏的和培养的细胞，在24小时后静脉内使用了BPD-MA。其中都没有发生EAE病症。但是，在注射用MBP致敏的和培养的细胞前使用相同剂量的BPD的小鼠显示出与对照组相同的EAE病程。
由于BPD注射只有在使用培养细胞后约24小时内使用才有效，BPD被证明直接作用于转移的活化T细胞，而不是作用于受体动物的内源细胞。
如本实施例第一节所述制备的脾细胞在用100Tg/ml MBP培养时，由于对MBP特异性和由它激活的T细胞的扩增，产生了增殖性反应。将使用无MBP培养的细胞的反应其指数定为0％，与之相比，该增殖性反应的指数为100％。当细胞培养在浓度为1ng/ml至1Tg/ml BPD中时，增殖作用被抑制。1ng/ml BPD时，增殖作用仅为20％；在10ng/ml时，指数降至0。超过100ng/ml，增殖反应弱于在无MBP培养的细胞中所见的。
已知，没有光时，所用浓度的BPD没有内毒性；所以，这些结果显示，BPD可以诱导MBP特异性T细胞的无反应性。
                          实施例2
                       BPD对DTH的作用
使用已有详细记载的迟发型超敏(DTH)模型。第0天，在无毛小鼠的腹股沟处用二硝基氟苯(DNFB)涂布。第5天，二硝基氟苯(DNFB)涂布在耳朵上，由此造成严重的炎性反应，包括耳朵肿胀，在以后的24小时内，由于抗原特异性T细胞而达到最严重程度。
在第0天用DNFB涂布的小鼠在-2，-1，0，+1，+3或+4天静脉注射剂量为1mg/ml的脂质体BPD-MA。第5天，小鼠用DNFB耳部涂布来激发，24小时后测量耳朵的肿胀情况。未致敏过的小鼠其耳朵肿胀最小。在用DNFB激发后，使用生理盐水而不是BPD的DNFM敏化过的小鼠显示出严重的耳朵肿胀反应。肿胀程度被记作肿胀百分比，或
[(激发后耳厚-激发前耳厚)/激发前耳厚]×100
肿胀程度通常高出对照水平60-90％。但是，在-2、-1、0、+1或+3使用BPD时，肿胀程度低于对照的50％。在第4天使用BPD，对DTH反应抑制作用约为25％。
在另一实验中，先用DNFB敏化的小鼠用不同的与致敏剂噁唑酮皮肤接触处理。随后，用DNFB和噁唑酮激发小鼠。用BPD治疗的小鼠显示出对DNFB反应的抑制。但是，在使用了BPD的小鼠中发现，噁唑酮引起的耳朵肿胀都没有减小。所以，BPD只对抗原特异性T细胞(对DNFB有反应性)起作用。尽管BPD治疗是与DNFB相结合的，小鼠保持了对第二抗原，噁唑酮的反应能力。
                              实施例3
                     BPD对纤维蛋白原结合的作用
按照经修改的Shattil等在血液(blood)(1987)70：307中所述的方法，用凝血酶激活血小板。简而言之，在22℃与100Tg/ml脂质体BPD或对照物预培养15分钟后，在纤维蛋白聚合反应抑制剂Gly-Pro-Arg-Pro(最终浓度为1.25mM)存在下，用I-凝血酶(最终浓度为10U/ml)在22℃处理具有柠檬酸盐的全血30分钟。用流式细胞计数法，用荧光素标记的抗纤维蛋白原多克隆抗体测定被结合的纤维蛋白原，由此测定血小板激活作用。结果列于表1，表示为抗纤维蛋白原阳性血小板的百分比(是三次实验的平均值加或减标准偏差)。
                              表1
                抗纤维蛋白原阳性血小板的百分比三次实验的平均值±标准偏差
   BPD-脂质体      脂质体      未处理
  无活化剂     2.9(0.8)     2.1(2.5)      2.2(2.2)
   凝血酶     28.9(2.0)     86.7(1.3)      86(2.2)
如表1所示，用凝血酶处理时，如果没有BPD，抗纤维蛋白原阳性血小板的百分比上升约2％至86-87％。但是，有100Tg/ml脂质体BPD存在时，激活水平下降约三分之二。
                          实施例4
                BPD对皮肤同种移植排斥的作用
根据Medewar和Billingham＿＿(1951)＿＿的方法进行有关MHC-不相容性小鼠间同种皮肤移植物的皮肤同种移植排斥实验。对照鼠(n＝16)在同种移植后11.1±1.9天，对移植物发生排斥。
实验组中，小鼠(n＝6)在同种移植后3至4小时静脉内注射一次0.25mg/kg的BPD-MA脂质体制剂，由此对排斥的耐受性延长至20.7+0.9天。另一组小鼠在第8天再注射一次0.25mg/kg的BPD，其中排斥降低时间的均值为23.3+1.9天。
所以，无照射时的BPD表现出对同种移植排斥的抑制作用。
                          实施例5
              BPD对类风湿性关节炎中粘附分子的作用
活化细胞中的细胞表面粘附分子ICAM-1增多。所以，这种分子的出现被认为是细胞活化的标志。
取自类风湿性关节炎病人的滑液与不同浓度的BPD在组织培养基中培养18小时，用抗ICAM-1处理后进行流式细胞计数。该实验的结果列于表2。
                                                 表2
 (BPD)ng/ml       非门控细胞(ungated cell)总数        淋巴细胞      单核细胞          PMN
    MED     +VE    MED   +VE   MED     +VE   MED     +VE
    0    24.4  (85.7％)    14.2   (23.7％)   478  (85.9％)   20.4   (99.3％)
   15    26.7  (87.7％)    13.6   (30.7％)   509  (95.9％)   22.0   (99.3％)
   25    26.7  (87.0％)    14.6   (29.1％)   496  (93.8％)   21.9   (99.5％)
   50    23.9  (84.5％)    12.9   (23.5％)   443  (94.2％)   20.0   (99.2％)
  100    14.9  (66.9％)    13.7   (22.7％)   309  (46.6％)   12.5   (69.0％)
+VE：ICAM-1阳性细胞百分比
MED：表达ICAM-1的细胞的荧光强度的均值
如表2所示，ICAM-1阳性的非门控细胞其百分比从无BPD的85.7％降至有100ng/ml BPD的66.9％。表达该分子的淋巴细胞的百分数相对地不受BPD的影响；但是，对单核细胞和多形核细胞来说，100ng/ml BPD显著降低了ICAM-1的表达。
除了理论之外，本申请者认为，BPD在暗环境中的抗原特异性免疫调节作用是由于其与活化造血细胞上表达的整合蛋白或粘附分子之间的相互作用，该作用干扰了细胞联系。
                           实施例6
             BPD-MA与整合蛋白结合化合物构象的关系
将两种已知整合蛋白拮抗剂，RGDS和乙酰化/酰胺化的CNPRGDYC(其中的酪氨酸作为甲基醚存在)就三维结构与BPD-MA比较。该比较由Alberta PettideInstitute进行。
RGDS的三维结构报告显示1584种可能的构象，根据它们的能量可分为7族。乙酰化/酰胺化的CNPRGDYC的三维结构报告显示1347种构象，根据能量可分为5族。
在两种肽的报告中有一子集的主族与实验发现的三种构象，RGDA，RGDB和RGDC类似。将这三种构象用作两种肽的代表性构象。
这些族中包括的构象重叠显示在图2-4中：图2显示RGDA；图3显示RGDB；图4显示RGDC。全部构象都具有12-13/的羧酸(Asp)至氮官能团(Arg)距离。图5至7分别显示BPD-MA与这三组的构象重叠。图5表示重叠到RGDA上的BPD；图6表示重叠到RGDB上的BPD-MA；图7表示重叠到RGDC上的BPD-MA。
全部这些重叠中，被重叠的结构都是平面的，天冬氨酸和精氨酸官能团重叠在BPD-MA上相应的羧酸和氮官能团上。
结果显示，BPD表现为具有数种官能团排列，它们与整合蛋白结合化合物的构象类似。
                          实施例7
             BPD类似物对DTH反应作用的实验性测试
利用实施例2中的方法，在没有直接光的条件下，比较BPD-MB、BPD-MA和BPD-DB对外用DNFB半抗原引起的DTH反应的作用。在未免疫过的，不剔须的Balb/c小鼠中评价这些化合物。每个处理组由4至5个小鼠组成。在DMSO中重构BPD类似物，在外用DNFB后24小时时使用。在实验的第5天对小鼠进行耳激发，1天后测定反应程度。DMSO的最终浓度为2％。对照鼠实验接受适当的，相应的溶剂。
结果列于表3和表4，总结于图8中。单BPD类似物强烈抑制DTH反应。双BPD类似物不抑制DTH反应。
                                表3不同BPD衍生物对CHS反应的作用
   BPD衍生物   ΔEarR(mm×10-2)     SD   Δ重量(g)
     MA0.1         4.02     1.54      0.2
     MA1.0         1.8     1.28      0.4
     MB0.1         2.32     0.69      0.3
     MB0.5         2.4     0.49      0.1
     DA0.1         6.46     3.6      0.8
     DA1.0         4.16     1.44     -0.1
     DB0.1         10.33     2.8     -0.4
     DB1.0         5.48     2.79     -0.7
    (+)对照         6.53     1.87     -0.7
     刺激物         1.78     0.59      0.5
  刺激物-MA1.0         1.5     0.23      0.3
  刺激物-DA1.0         1.78     0.29      0.6
  刺激物-DB1.0         0.85     0.47      0.4
                         表4
   化合物   剂量(mg/kg)    DTH反应的相对抑制
   BPD-MA        1.0           ++++
   BPD-MA        0.1            +++
   BPD-MB        0.5            +++
   BPD-MB        0.5            +++
   BPD-DA        1.0             -
   BPD-DA        0.1             -
   BPD-DB        1.0             -
   BPD-DB        0.1             -

Claims (15)

1.调节抗原特异性免疫反应的方法，包括给需要这种调节的受试者使用一定量的绿卟啉，这些绿卟啉能够在没有绿卟啉可吸收光的条件下调节对所述抗原的免疫反应，所述的使用在对所述抗原的免疫反应进行过程中进行。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的绿卟啉以脂质体组合物的形式全身使用。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述的抗原是自身抗原。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述的受试者是异源组织受体。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述的抗原与牛皮癣有关，所述的使用是外用。
6.根据权利要求1所述的方法，所述的抗原是超敏原。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述的绿卟啉是图1所示结构式的化合物，或其混合物，
其中R1和R2各自选自烷酯基(2-6C)、烷基(1-6C)、芳基磺酰基(6-10C)、氰基；和
-CONR5CO，其中R5是芳基(6-10C)或烷基(1-6C)；
每个R3各自是羧基，羧基烷基(2-6C)或盐、酰胺、酯或acylhydragone或是烷基(1-6C)；
R4是CH＝CH2或-CH(OR4’)CH3，其中R4’是H，或烷基(1-6C)，该烷基可选性地被疏水性取代基所取代。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述的绿卟啉是图1-3和1-4所示结构式的化合物或其混合物，其中R1和R2各自是烷酯基取代基(2-6C)；
一个R3是羧基烷基(2-6C)，另一个R3是羧基烷基(2-6C)的酯；
R4是CH＝CH2或-CH(OH)CH3。
9.根据权利要求8所述的方法，其中的绿卟啉是图1-3所示结构式的化合物，
其中R1和R2是甲氧基羰基；
一个R3是-CH2CH2COOCH3，另一个R3是CH2CH2COOH；
R4是CH＝CH2。
10.调节以不良的细胞间联系为特征的病症的方法，该方法包括给需要这种调节的受试者使用一定量的绿卟啉，这些绿卟啉能够在没有绿卟啉可吸收光的条件下调节所述的细胞间联系，所述的使用在所述的细胞间联系的发生过程中进行。
11.根据权利要求10所述的方法，所述的细胞间联系的结果是再狭窄。
12.根据权利要求10所述的方法，其中所述的绿卟啉以脂质体组合物的形式全身地使用。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述的绿卟啉是具有图1的结构式的化合物，或其混合物
其中R1和R2各自选自烷酯基(2-6C)，烷基(1-6C)，芳基磺酰基(6-10C)，氰基；和
-CONR5CO，其中R5是芳基(6-10C)或烷基(1-6C)；
每个R3各自是羧基，羧基烷基(2-6C)或盐、酰胺、酯或acylhydragone或是烷基(1-6C)；
R4是CH＝CH2或-CH(OR4’)CH3，其中R4’是H，或烷基(1-6C)，该烷基可选性地被疏水性取代基所取代。
14.根据权利要求10所述的方法，其中的绿卟啉是图1-3和1-4所示结构式的化合物或其混合物，其中R1和R2各自是烷酯基(2-6C)；
一个R3是羧基烷基(2-6C)，另一个R3是羧基烷基(2-6C)取代基的酯；
R4是CH＝CH2或-CH(OH)CH3。
15.根据权利要求14所述的方法，其中的绿卟啉是图1-3所示结构式的化合物，
其中R1和R2是甲氧基羰基；
一个R3是-CH2CH2COOCH3，另一个R3是CH2CH2COOH；
R4是CH＝CH2。
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