CN1241133A - 细胞外基质产生促进剂 - Google Patents

Abstract

本发明系有关一种可促进细胞外基质,更具体言的,可促进透明质酸等酸性粘多糖与胶原蛋白等纤维性蛋白质的产生,通过细胞外基质的活化与皮肤组织的正常化,及表皮与真皮间的结合力的强化而得以发挥防止皮肤老化效果的产品。此产品以得自属于柴胡等柴胡属的植物的提取物,或进一步以存在于此提取物的柴胡皂甙及柴胡皂甙原为有效成分。藉将此剂为皮肤外用剂使用,可促进上记的酸性粘多糖及纤维性蛋白质等对纤维母细胞等产生。

Description

细胞外基质产生促进剂

技术领域

本发明系有关皮肤外用剂等药剂的技术领域。更具体言之，本发明系有关促进由透明质酸等酸性粘多糖及胶原蛋白等纤维性蛋白质等所成的形成真皮的细胞外基质产生的皮肤外用剂等药剂的发明。

背景技术

真皮为于表皮之下，由结缔组织所成组织。真皮，不像表皮细胞那么紧密塞满，而是有许多细胞外空间，其部分由所谓“细胞外基质”的巨大分子的网络结构所充满。

上述细胞外基质是由真皮内的纤维母细胞等产生的，由透明质酸、硫酸软骨素等称为酸性粘多糖的多糖和胶原蛋白、弹性蛋白等纤维性蛋白质构成。

细胞外基质与皮肤的弹性、张力、娇嫩度、新陈代谢等直接有关，于纤维母细胞等细胞外基质的产生迟钝则皮肤失去弹性及娇嫩、变得易发生皱纹、小皱纹、皮肤变粗糙、造成皮肤老化的一个原因。

因此，现在，通过促进此细胞外基质的产生，尝试着找出保持具张力的娇嫩皮肤、提供年轻的肌肤的方法。

本发明欲解决的课题，如上述地，发现促进细胞外基质产生的成分在保持年轻的皮肤之中有极重要作用，通过以此成分为有效成分，提供可防止象征皮肤老化的皱纹、小皱纹、皮肤粗糙等，而且于安全性上无问题的皮肤外用剂等药剂。

发明的公开

本发明者针对此课题的解决进行刻意检讨的结果，发现柴胡等属于柴胡属的植物的提取物及含于其中的柴胡皂甙等成分通过作用于皮肤内的表皮细胞及纤维母细胞，具有促进细胞外基质的产生，使细胞外基质活化，使皮肤组织正常化的作用而完成了本发明。

亦即，本发明，提供以自属于柴胡属植物的提取物为有效成分的细胞外基质的产生促进剂(以下，亦称为本发明产生促进剂)，尤其是以属于柴胡属的植物为柴胡的本发明产生促进剂。

附图的简单说明

第1图为表示于人类表皮细胞的透明质酸产生试验的结果的图；

第2图为表示于来自人类皮肤的纤维母细胞的透明质酸产生试验的结果的图；

第3A图～第3C图为表示于人类表皮细胞的VII型胶原蛋白产生试验的结果的生物形态的照片；

第4A图～第4C图为表示于来自人类皮肤的纤维母细胞的VII型胶原蛋白产生试验的结果的生物形态的照片。

供实施发明的最佳形态

以下，就本发明的实施形态加以说明。

本发明产生促进剂，可将自属于柴胡属的植物的提取物作为其有效成分使用。

提供可作为本发明产生促进剂的有效成分的提取物的属于柴胡属的植物的植物体，只要含有柴胡皂甙或柴胡皂甙原，并无特别限定。例如可举得属于柴胡属(Bupleurum)的植物如柴胡(日本药局方第13改正记载名称：Bupleurum falcatum Linne)，别名以满州柴胡称呼的北柴胡(Bupleurum chinese DC.)、别名以奥柴胡称呼的狭叶柴胡(Bupleurumscorzonerifolium Willd.)、膜缘柴胡(Bupleurum marginatum Wall.exDC.)、长白柴胡(Bupleurum komarovianum Lincz.)、重叶柴胡(Bupleurumlongiradiatum Turcz.)、兴安柴胡(Bupleurum sibiricum Vest)、空心柴胡(Bupleurum longicaule Wall.ex DC.)、小柴胡(Bupleurum tenueBuch.-Ham ex D.Don)、别名称为穿叶柴胡的金黄柴胡(Bupleurum aureumFisch.)或多脉柴胡(Bupleurum mulutinerve DC.)等作为本发明产生促进剂的有效成分，作为提取物的原材料。

于上记植物体可选择的部位亦只要是含有柴胡皂甙或柴胡皂甙原的部位，并无特别限定。例如，上记柴胡的情形，选择已知含有柴胡皂甙及柴胡皂甙原的根部为优选。

又，作为此等植物体，当然可选择天然的植物体，人工培养的植物体，例如为提高柴胡皂甙乃至柴胡皂甙原的生成效率培养上记植物体的特定部位衍生的愈伤组织及再将此愈伤组织分化，进行特定部位的器官培养的植物体亦可使用。

另外，基因工程的手法，例如以使大量生成柴胡皂甙或柴胡皂甙原为目的，作出的基因导入株或细胞融合株亦可使用。

又，对于作为生成柴胡皂甙及/或柴胡皂甙原的植物，优选选择的柴胡，供植物培养的原生质体优选于含烟酸、盐酸吡哆醇、D-泛酸钙、对氨基苯甲酸、氯化胆碱、抗坏血酸、维生素A、维生素D₃、维生素B₁₂、丙酮酸钠、柠檬酸、苹果酸钠、富马酸或酪蛋白氨基酸中至少一种的维生素或有机酸的培养基中培养。(参照特开平2-245180号公报)。

又，对柴胡的根进行器官培养时，进行立即使继续此器官培养实质上已经至侧根的数目不增加的状态为止，将此器官培养培养基的糖类成分(蔗糖、葡糖或果糖等)的浓度限制于对于全部培养基不足2.0重量％加以培养，于此器官培养得以提高柴胡皂甙的生产效率的点而言为优选(参照特开平5-23069号公报)。另外，于培养基中添加香豆素、间羟基苯甲酸、邻羟基苯乙酸、对羟基苯乙酸、邻香豆酸、绿原酸、均苯三酚或伞形酮等酚衍生物亦于此器官培养上得以提高柴胡皂甙的生产效率的方面为佳(参照特开平5-18379号公报)。

而且，于对于柴胡等属于柴胡属的植物，导入例如得以提高柴胡皂甙的生成的柴胡皂甙合成基因等时，优选将含有关的遗传密码的DNA与基因导入对象的属于柴胡属的植物的原生质体共存，赋予电脉冲或添加细胞融合剂于有效率地得以实现基因导入(参照特开平6-90771号公报)。

如此所提供的属于柴胡属的植物的植物体提取物的制备，可通过为得此提取物的习知方法，例如溶剂提取等而进行。又，于此所谓提取物，显然可以来自植物体的破碎物的情形，当然亦包含来自进行器官培养等植物组织培养的培养基的情形。

作为有关的溶剂萃取所用的溶剂，可举例如纯化水等水；甲醇、乙醇等1元低级醇类；油醇、硬脂醇、辛基十二烷醇等1元高级醇类；乙二醇、丙二醇、甘油、1，3-丁二醇等多元醇类；丙酮等酮类；乙酸乙酯等酯类；己烷、氯仿、苯等烃系溶剂等，将此等单独或混合2种以上使用。于此等中，自可广泛地适用于生体的观点，以水、乙醇、甘油、1，3-丁二醇的单品或2种以上的混合物为适当。

如此，可得所希望的属于柴胡属的植物的植物体的提取物(以下亦称为提取物)。

于本发明产生促进剂的此提取物的配合量，可按照其具体的提取材料及本发明产生促进剂的剂型、尤其是按照意欲促进产生的细胞外基质的成分而适宜地选择，并无特别限定。

例如，将柴胡的根的提取物作为本发明产生促进剂的有效成分的情形，对于剂全体以提取物的固形分换算，大致优选于0.00001～10.0重量％的广范围加以适宜选择。

又，本发明产生促进剂中，可将已知含于上记提取物中的柴胡皂甙及/或柴胡皂甙原为有效成分配合。

柴胡皂甙已知为将上记的柴胡的根干燥而得的，自古以来为作为解热、解毒、镇痛、强壮、抗炎症的主要药物使用的重要的汉方原料的一的“柴胡”的主要药理成分。

此柴胡皂甙为齐墩果烷型三萜系皂甙，迄今，已分离鉴定出a，c，d，b₁，b₂等13种的结构。

本发明产生促进剂中，可配合以此等习知的方法分离的柴胡皂甙。

又，本发明产生进剂中，亦可配合实施过大量取得的手段的柴胡皂甙(柴胡皂甙，于上记的柴胡的天然根中只含有0.5～1.5重量％程度)。

作为此大量取得的手段的一例，可举将含柴胡皂甙之上记提取物使吸附于吸附剂之后，对于此采取种种手段，得以大量取得所希望的种类的柴胡皂甙。

更具体言的，将上记提取物与吸附剂接触，使柴胡皂甙吸附于吸附剂，将柴胡皂甙以外之上记提取物中的成分自此吸附剂除去后(吸附过程)，使吸附于此吸附剂的柴胡皂甙洗脱，可得纯化的天然型柴胡皂甙(由只于13位有双键者所代表的如此存在于天然物中的柴胡皂甙：柴胡皂甙a，柴胡皂甙c及柴胡皂甙d)。

又，此上记提取物吸附于吸附剂的吸附过程终了后，将铁(III)离子与柴胡皂甙接触[例如，可将氯化铁(FeCl₃)等铁(III)盐溶等铁(III)离子溶液直接与天然型柴胡皂甙接触。]、可得具二烯构造的柴胡皂甙(例如，于13位及14a位有双键型的柴胡皂甙的柴胡皂甙b₁、柴胡皂甙h及柴胡皂甙b₂等)。

其中，柴胡皂甙b₁为将天然型的柴胡皂甙a转换所得的具二烯构造的柴胡皂甙，同样地对于柴胡皂甙c对应的为柴胡皂甙h，对于柴胡皂甙d，对应地为柴胡皂甙b₂。

作为于此等过程所用的吸附剂，可举例如活性炭、苯乙烯-二乙烯基苯系的合成吸附剂、丙烯酸系的合成吸附剂等。又，亦可举硅胶与疏水基组合的素材的合成吸附剂，聚酰胺胶、经修饰的葡聚糖胶等。

使用适当的洗脱剂将吸附于此等吸附剂的所需皂甙的种类的柴胡皂甙洗脱，将此按须要需使用高效液相色谱法等纯化，可取得所要的柴胡皂甙。

除上述例子中的柴胡皂甙的外的其它柴胡皂甙，如柴胡皂甙e，柴胡皂甙f，柴胡皂甙g等也可按照习知的制备方法进行制备。

本发明产生促进剂亦可配合此等柴胡皂甙a、柴胡皂甙b₁、柴胡皂甙b₂、柴胡皂甙c、柴胡皂甙d、柴胡皂甙e、柴胡皂甙f、柴胡皂甙g或柴胡皂甙h的任何柴胡皂甙。

而此等柴胡皂甙中，柴胡皂甙a、柴胡皂甙b1、柴胡皂甙b₂、柴胡皂甙c或柴胡皂甙d，尤其有强的透明质酸产生促进作用，优选作为本发明产生促进剂的有效成分。

上记柴胡皂甙于本发明产生促进剂的配合量，可按照选择的柴胡皂甙的种类及本发明产生促进剂的具体剂型、更外，尤其是意欲促进产生的细胞外基质的成分加以适宜选择，并无特别限定，大体上，相对于制剂全体，优选为0.000001～10.0重量％的广大范围。

本发明产生促进剂中，亦可配合为上记柴胡皂甙的甙原成分的柴胡皂甙原。

柴胡皂甙原为上记的柴胡皂甙成分的甙原成分，亦即柴胡皂甙的非糖质部分。

具体言的，为柴胡皂甙b₁的甙原部分的柴胡皂甙原A，为柴胡皂甙h的甙原部分的柴胡皂甙原C，为柴胡皂甙h的甙原部分的柴胡皂甙原D，为柴胡皂甙c的甙原部分的柴胡皂甙原E，为柴胡皂甙a的甙原部分的柴胡皂甙原F，为柴胡皂甙d的甙原部分的柴胡皂甙原G等，亦可配合于本发明产生促进剂之中。

此等柴胡皂甙原，通过上记柴胡皂甙水解即可获得。

具体言的，藉于盐酸及硫酸等酸性条件下的脱糖反应，可得上记的柴胡皂甙原。

于本发明产生促进剂中之上记的柴胡皂甙原的配合量，可按照选择的柴胡皂甙原的种类及本发明产生促进剂的具体剂型，以及，尤其是意欲促进产生的细胞外基质成分加以适宜选择，并无特别限定，大致对于制剂的全体，优选为0.000001～10.0重量％的广范围。

为如此所制造之上述有效成分的属于柴胡属植物的提取物、柴胡皂甙或柴胡皂甙原，藉将其1种或2种以上组合，配合于剂中，而提供促进细胞外基质的产生，以及基于此细胞外基质的产生促进，亦可通过使皮肤组织正常化，可发挥抑制皱纹、小皱纹、防止皮肤变得不娇嫩、皮肤老化的优良效果的本发明产生促进剂。

通过本发明产生促进剂的作用，促进产生的细胞外基质，如上述主要由纤维母细胞产生，具体言的，以透明质酸、硫酸软骨素等酸性粘多糖及胶原蛋白、弹性蛋白、纤维蛋白原、层粘连蛋白(ラミリン)的纤维性蛋白质构成。

酸性粘多糖将大量水保持于其分子内，呈胶状，此胶内的水担任将营养成分、代谢产物、激素等自血管浸透至组织中的细胞的工作。因而，促进酸性粘多糖于细胞外基质的产生，则不只使肌肤变得娇嫩，而且可促进皮肤的新陈代谢，防止皮肤老化。

又，纤维性蛋白质，保持组织的形态、担任赋予皮肤弹性等机能。因而，促进细胞外基质的纤维性蛋白质的产生，则带给皮肤弹力，抑制皱纹及小皱纹。

本发明产生促进剂，可促进此两类细胞外基质构成成分的产生。

以此意义，本发明产生促进剂为有作为“酸性粘多糖产生促进剂”的侧面及作为“纤维性蛋白质产生促进剂”的侧面的两侧面的细胞外基质产生促进剂。

尤其，本发明产生促进剂，于酸性粘多糖之中，强力促进透明质酸的产生，于纤维性蛋白质之中，强力促进胶原蛋白的产生。

以此意义，有关上记的本发明的酸性粘多糖产生促进剂，特别地，1.具有作为“透明质酸产生促进剂”的侧面，有关本发明的纤维性蛋白质产生促进剂，特别地，2.具有作为“胶原蛋白产生促进剂”的侧面。

1.对于透明质酸等酸性粘多糖产生促进剂

透明质酸具有基于保持细胞间隙的水分、形成组织内胶冻状的基质而保持细胞，保持组织的润滑性与柔软性、抵抗机械性障碍等外力及防止细菌感染等许多机能(《生物产业》BIO INDUSTRY，第8卷，346页，1991年)。例如，皮肤的透明质酸量，随着年龄的增长而减少，伴随着出现所谓小皱纹及老年斑等皮肤老化。作为如此的老化皮肤的改善剂，提议出许多配合胶原蛋白及透明质酸的化妆品，但这些只发挥皮肤表面的保温效果，并非得以本质上改善老化肌肤。

本发明产生促进剂，通过促进为酸性粘多糖的透明质酸的纤维母细胞及表皮细胞等产生，将皮肤从内部活化，可解决此从来的技术所遭遇的问题。

将本发明产生促进剂，尤其是促进透明质酸等酸性粘多糖的产生作为目的使用，而且于以前述的提取物为有效成分的情形，提取物于本发明产生促进剂的配合量，可依其提取材料及本发明产生促进剂的剂型加以适宜选择，并无特别限定。

例如，将柴胡的根的提取物作为有效成分使用的情形，对于全体的剂，以提取物的固形部分换算，优选为0.00001～10.0重量％，特优选为0.00005～5.0重量％。

又，将本发明产生促进剂，尤其是促进透明质酸等酸性粘多糖的产生作用为目的使用，而且，于以前述的柴胡皂甙为有效成分的情形，柴胡皂甙于本发明产生促进剂中的配合量，可按照所选的柴胡皂甙的种类及本发明产生促进剂的具体剂型等加以适宜选择，并非得无异议地确定，对于全体的剂大致于0.000001～10.0重量％为优选，更优选地，于0.00001～1.0重量％的范围。

又，将本发明产生促进剂，尤其是促进透明质酸等酸性粘多糖的产生为目的使用，而且，于以前述的柴胡皂甙原为有效成分的情形，柴胡皂甙原于本发明产生促进剂的配合量，可依所选的柴胡皂甙原的种类及本发明产生促进剂的具体剂型等加以选择，并非一定无商议余地，对于全体的剂大致为0.000001～10.0重量％为优选，特优选地为0.00001～1.0重量％的范围。

又，上记的柴胡皂甙具皮肤赋活效果，从以前即已知(参照特公平4-36137号公报)，其皮肤赋活效果，只限于人类皮肤纤维母细胞的增殖促进效果及自此效果所衍生的大鼠创伤治疗促进效果及于人类实际使用试验的肌肤变粗的改善效果，对于纤维母细胞增殖促进作用以外的具体性作用机制完全不知道。

当然，柴胡皂甙的促进透明质酸等酸性粘多糖的产生的作用，对于细胞外基质的产生促进作用当然完全不知道。

2.对于胶原蛋白等纤维性蛋白质产生促进剂

皮肤大体上具有角质层、表皮、基底膜及真皮的结构。而，由电子显微镜观察的于基底膜与真皮的间的纤维性构造体为锚定纤维。一组锚定纤维的一端进入基底膜的致密层(ラミナデンサ)，另一端进入由含IV型胶原蛋白及层粘连蛋白等物质所成的“锚定斑(アンカリンゲプラ-ク”。又，别组的锚定纤维更深地伸入真皮内，与其他的锚定斑凝集，得以形成巨大的网状构造。如此的网状构造被认为于表皮与真皮间的结合中担任重要的任务(Keene，《细胞生物学杂志》J.Cell Biol.，104：611-621，1987)。

锚定纤维的主要构成成分已知为VII型胶原蛋白。据认为此VII型胶原蛋白分子由分子量约300KDa的α1链的3条链所成，分子间藉二硫键形成二聚体，此再缔合形成纤维。因而明白，此VII型胶原蛋白于表皮与真空间的结合占有非常重要的位置。于培养系，表皮细胞与纤维细胞皆为微量时仍会形成VII型胶原蛋白。然而，对于生体内的VII型胶原蛋白的代谢如何受控制亦有许多不明白的点。

作为解明锚定纤维于皮肤的任务的线索，可举已明白VII型胶原蛋白的变异为其原因的一的“先天性表皮水疱症”。于此疾患，由于VII型胶原蛋白基因上的变异，不能形成锚定纤维，表皮层与真皮层变成无法结合，其结果，维持本来的皮肤构造变为困难(Christiano，《自然遗传学》Nature Genet.4：62-66，1993)。

于正常的皮肤，有伴随生理上老化及光老化，锚定纤维的数目减少的报告(辻卓夫，日皮会志，105：963-975，1995，Tidman和Eady，《皮肤病学研究杂志》J.Invest.Dermatol.，83：448-453，1984)。于活体外培养系，亦报告来自排水高的皮肤的纤维母细胞的情形为锚定纤维的主成分的VII型胶原蛋白的产生蛋白质含量及mRNA含量皆下降(Chen.《皮肤病学研究杂志》J.Invest.Dermatol.，102：205-209，1994)。

借涂布维生素A酸可改善皱纹等象征老化的现象为所熟知，亦有报告将维生素A酸连续涂布于为紫外线所伤的皮肤，锚定纤维的数目显着地增加。此暗示锚定纤维数的恢复与皱纹的改善有关(Woodley，JAMA，263：3057-3059，1990)。

如此，通过明白锚定纤维与皮肤老化等相关性，于保持年轻肌肤的目的，再认识保持此锚定纤维数及质的重要性。

本发明产生促进剂，可通过促进为纤维性蛋白质的胶原蛋白于纤维母细胞及表皮细胞等产生，使提高锚定纤维的数与质，使细胞外基质活化及皮肤组织正常化，进一步充实表皮与真皮的间的结合，防止皱纹及小皱纹，恢复幼龄时的皮肤构造，又可防止皮肤的老化。

将本发明产生促进剂，特别是促进胶原蛋白等纤维性蛋白质的产生非为目的使用，且于以前述提取物为有效成分的情形，提取物于本发明产生促进剂中的配合量，依其提取材料及本发明产生促进剂的剂型，可适宜选择，并无特别限定。

例如，以柴胡的根的提取物作为有效成分使用的情形，对于全体的剂，以提取物的固形部分换算，优选为0.00001～10.0重量％，特优选为0.00005～5.0重量％。

又，将本发明产生促进剂，特别是促进胶原蛋白等纤维性蛋白质的产生为目的使用，且以前述的柴胡皂甙为有效成分的情形，柴胡皂甙于本发明产生促进剂的配合量，可依所选的柴胡皂甙的种类及本发明产生促进剂的具体剂型，加以适宜选择，并非得无异议地确定，对于全体的剂大致以0.000001～10.0重量％为优选，特优选地为0.00001～1.0重量％的范围。

又，将本发明产生促进剂，尤其是促进胶原蛋白等纤维性蛋白质的产生为目的使用，且于以前述的柴胡皂甙原为有效成分的情形，柴胡皂甙原于本发明产生促进剂中的配合量，可依所选的柴胡皂甙原的种类及本发明产生促进剂的具体剂型等，加以适宜选择，并非得无异议地确定，对于全体的剂大致以0.000001～10.0重量％为优选，特优选地为0.00001～1.0重量％的范围。

又，如前述，柴胡皂甙具皮肤赋活效果，从以前即为已知(参照特公平4-36137号公报)，其皮肤赋活效果，只限于人类皮肤纤维母细胞的增殖促进效果及自此效果所衍生的大鼠创伤治愈促进效果及人类实际使用时的改善肌肤变粗的效果，对于纤维母细胞增殖促进作用以外的具体的作用机制完全不知道。

当然，对于柴胡皂甙于促进胶原蛋白质等纤维性蛋白质产生的作用完全不知道。

本发明产生促进剂得采用例如水溶液、油液、其他溶液、乳液、霜、凝胶、悬浮液、微胶囊、粉末、颗粒、胶囊、固形剂等形式。以从来已习知的方法制备成此等形式后，作为洗剂(化妆水)、乳液剂、霜剂、软膏剂、硬膏剂、泥罨剂、气溶胶剂、水-油2层系、水、油-粉末3层系、注射剂、内服剂(片剂、散剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、糖锭剂等)、栓剂等，可涂布、贴附、喷雾、注射、饮用、插入于身体。此等剂型中，洗剂、乳液剂、霜剂、软膏剂、硬膏剂、泥罨剂、气溶胶剂等皮肤外用剂，为适宜本发明的目的的剂型。又，于此所记的皮外用剂包括医药品、医药外用品(软膏剂等)、化妆品[洗面料、乳液、面霜、凝胶、香精(美容液)、面膜等基础化妆品；粉底、口红等上妆用化妆品；口腔化妆品、芳香化妆品、毛发化妆品、身体化妆品等)，以下以同样的意义使用。

于得采用此等形式及剂型的本发明产生促进剂，按照所希望的剂型，可以适当添加通常习知的赋形剂及香料等为代表的油脂类、高级脂肪酸、高级醇、合成酯油、表面活性剂、防腐剂、金属离子阻断剂、水溶性高分子、增粘剂、颜料等粉末成分、紫外线防止剂、保湿剂、抗氧化剂、pH调整剂、洗净剂、干燥剂、乳化剂。另外，将其他的药效成分等成分配合于本发明产生促进剂，只要其配合不会损害所期望的效果的范围内即可。

作为油脂类，可举鳄梨油、山茶油、月见草油、甲鱼油、麦克第米亚核油(マカデミアナッツ油)、玉米油、貂油、橄榄油、菜籽油、卵黄油、麻油、杏仁油(パ-ミック油)、小麦胚芽油、山茶花油、蓖麻油、亚麻仁油、葵花籽油、棉籽油、苏子油、大豆油、花生油、茶籽油、榧子油、米糠油、中国桐油(シナギリ油)、日本桐油、西蒙得木油、胚芽油、三甘油、三辛酸甘油酯、三异棕榈酸甘油酯等液体油脂；可可脂、椰子油、马脂、硬化椰子油、棕榈油、牛脂、羊脂、硬化牛脂、棕榈核油、豚脂、牛骨脂、日本蜡核油、硬化油、牛脚油、日本蜡、硬化蓖麻油等固体油脂；蜂腊、小烛树蜡、棉蜡、巴西棕榈蜡、月桂子蜡、水蜡树蜡、鲸蜡、褐煤蜡、糠蜡、羊毛脂、木棉花蜡、乙酸羊毛脂、液状羊毛脂、甘蔗蜡、羊毛脂脂肪酸异丙酯、十二酸己酯、还原羊毛脂、西蒙得木蜡、硬质羊毛脂、虫胶蜡、聚氧乙烯(以下略为POE)羊毛脂醇醚、POE羊毛脂醇乙酸酯、POE胆固醇醚、羊毛脂脂肪酸聚乙二醇酯、POE氢化羊毛脂醇醚等等蜡类；液体石蜡、天然地蜡、角鲨烯、鲨肝油烷、石蜡、纯地蜡、凡士林、微晶性蜡等油分。

作为高级脂肪酸可举月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、山萮酸、油酸、12-羟基硬脂酸、十一烯酸、妥鲁酸(ト一ル酸)、异硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、廿碳五烯酸(EPA)、廿二碳六烯酸(DHA)等。

作为高级醇，可举例如月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇、山愈醇、肉豆蔻醇、油醇、鲸脂蜡醇等直链醇；一硬脂基甘油醚(鲨肝醇)、2-癸基十四醇、羊毛脂醇、胆固醇、植物固醇、己基十二醇、异硬脂醇、辛基十二醇等支链醇等。

作为合成酯油可举例如肉豆蔻酸异丙酯、辛酸鲸蜡酯、肉豆蔻酸辛基十二酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、月桂酸己酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、油酸癸酯、二甲基辛酸己基癸酯、乳酸鲸蜡酯、乳酸肉豆蔻酯、乙酸羊毛脂酯、硬脂酸异鲸蜡酯、异硬脂酸异鲸蜡酯、12-羟基硬脂酸胆固醇酯、二-2-乙基己酸乙二醇酯、二季戊四醇脂肪酸酯、一异硬脂酸N-烷基二醇酯、二癸酸新戊二醇酯、苹果酸二异硬脂酸酯、二-2-庚基十一酸甘油酯、三-2-乙基己酸三羟甲基丙烷、三异硬脂酸三羟甲基丙烷、四-2-乙基己酸季戊四醇酯、三-2-乙基己酸甘油酯，三异硬脂酸三羟甲基丙烷、鲸蜡基-2-乙基己酸酯、2-乙基己基棕榈酸酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三-2-庚基十一酸甘油酯、蓖麻油脂肪酸甲酯、油酸油酯、乙酸鲸蜡醇酯(セトステァリルアルコ-ル)、乙醇甘油酯、棕榈酸2-庚基十一酯、己二酸二异丁酯、N-月桂酰-L-谷氨酸-2-辛基十二酯、己二酸二-2-庚基十一酯、乙基月桂酸酯、癸二酸二-2-乙基己酯、肉豆蔻酸2-己基癸酯、棕榈酸2-己基癸酯、己二酸2-己基癸酯、癸二酸二异丙酯、琥珀酸2-乙基己酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、柠檬酸三乙酯等。

作为硅酮类举例如二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷、甲基氢聚硅氧烷等链状聚硅氧烷；十甲基聚硅氧烷、十二甲基聚硅氧烷等、四甲基四氢聚硅氧烷等环状聚硅氧烷；形成3维网络结构的硅氧烷树脂、硅橡胶等。

作为表面活性剂，可将阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、非阴离子界面活性剂的任一者配合于本发明产生促进剂。

作为阴离子表面活性剂可举例如肥皂用基剂、十二酸钠、棕榈酸钠等脂肪酸肥皂、十二基硫酸钠、十二基硫酸钾等高级烷基硫酸酯盐、POE十二基硫酸三乙醇胺、POE十二基硫酸钠等烷基醚硫酸酯盐、十二酰肌氨酸钠等N-酰基肌氨酸；N-肉豆蔻酰基-N-甲基牛磺酸钠、椰子油脂肪酸甲基牛磺酸钠、十二基甲基牛磺酸钠等高级脂肪酸酰胺磺酸盐；POE油基醚磷酸钠、POE硬脂基醚磷酸等磷酸酯盐；二-2-乙基己基磺基琥珀酸钠、单十二酰基单乙醇酰胺聚氧乙烯磺基琥珀酸钠、十二基聚丙二醇磺基琥珀酸钠等磺基琥珀酸盐；线性十二基苯磺酸钠、线性十二基苯磺酸三乙醇胺、线性十二基苯磺酸等烷基苯磺酸或其盐；N-十二酰基谷氨酸一钠，N-硬脂酰谷氨酸二钠、N-肉豆蔻酰基-L-谷氨酸一钠等N-酰基谷氨酸盐、硬化椰子油脂肪酸甘油硫酸钠等高级脂肪酸酯硫酸酯盐；土耳其红油等硫酸化油；POE烷基醚碳酸、POE烷基芳基醚碳酸盐、α-烯磺酸盐、高级脂肪酸酯磺酸盐、二级醇硫酸酯盐、高级脂肪酸烷基醇酰胺硫酸酯盐、十二酰基一乙醇酰胺琥珀酸钠、N-棕榈酰基天冬氨酸二三乙醇胺、酪蛋白钠等。

作为阳离子表面活性剂可举例如氯化硬脂基三甲铵、氯化十二基三甲铵等烷基三甲铵盐；氯化二硬脂基二甲铵等二烷基二甲铵盐；氯化聚(N，N’-二甲基-3，5-亚甲基哌啶鎓盐)，氯化十六基吡啶鎓盐等烷基吡啶鎓盐；烷基季铵盐，烷基二甲基苄铵盐，烷基异喹啉盐，二烷基吗啉盐，POE烷胺，烷胺盐，聚氨基脂肪酸衍生物，戊醇脂肪酸衍生物，氯苄烷铵、氯化苄乙氧铵等。

作为两性表面活性剂，可举例如2-十一基-N，N，N-(羟乙羧甲基)-2-咪唑啉钠、2-椰脂基-2-咪唑啉氢氧化物-1-羧羟乙氧基2钠盐等咪唑啉系两性表面活性剂；2-十七基-N-羧甲基-N-羟乙基咪唑啉甜菜碱、十二基二甲氨基乙酸甜菜碱、烷基甜菜碱、酰胺甜菜碱、磺基甜菜碱等甜菜碱系两性表面活性剂。

非离子表面活性剂可举例如脱水山梨醇单油酸酯、脱水山梨醇-异硬脂酸酯、脱水山梨醇一月桂酸酯、脱水山梨醇一棕榈脂酸酯、脱水山梨醇一硬脂酸酯、脱水山梨醇倍半油酸酯、脱水山梨醇三油酸酯、五-2-乙基己酸二甘油脱水山梨醇酯、四-2-乙基己酸二甘油脱水山梨醇酯等脱水山梨醇脂肪酸酯类；一棉籽油脂肪酸甘油酯、一芥酸甘油酯、倍半油酸甘油、一硬脂酸甘油、α，α’-油酸焦谷氨酸甘油、一硬脂酸甘油苹果酸酯等甘油聚甘油脂肪酸类；一硬脂酸丙二醇酯等丙二醇脂肪酸酯类；硬化蓖麻油衍生物，甘油烷基醚，聚氧乙烯一甲基聚硅氧烷基共聚物等亲油性非离子表面活性剂。

另外，可例示POE脱水山梨醇一油酸酯、POE脱水山梨醇一硬脂酸酯、POE脱水山梨醇一油酸酯、POE脱水山梨醇四油酸酯等POE脱水山梨醇脂肪酸酯类；POE山糖醇一月桂酸酯、POE山梨糖醇一油酸酯、POE山梨糖醇五油酸酯、POE山梨糖醇一硬脂酸酯等POE山梨糖醇脂肪酸酯类；POE甘油一硬脂酸酯，POE甘油一异硬脂酸酯，POE甘油三-异硬脂酸酯等POE甘油脂肪酸酯类；POE一油酸酯，POE二硬脂酸酯，POE一二油酸酯、硬脂酸乙二醇酯等POE脂肪酸酯类；POE十二基醚，POE油基醚，POE硬脂基醚，POE山萮基醚，POE 2-辛基十二基醚、POE胆甾烷醇醚等POE烷基醚类；POE辛苯基醚，POE壬苯基醚，POE二壬基苯醚等POE烷苯基醚类；普鲁洛尼克(プルロ二ツク)等普鲁洛尼克型类，POE·聚氧丙烯(以下略为POP)十六基醚，POE·POP 2-癸基十四基醚，POE·POP一丁基醚，POE·POP氢化羊毛脂，POE·POP甘油醚等POE·POP烷基醚类；四尼克(ラトロ二ツク)等四POE·四POP乙二胺缩合物类；POE蓖麻油，POE硬化蓖麻油，POE硬化蓖麻油一异硬脂酸酯，POE硬化蓖麻油三异硬脂酸酯；POE硬化蓖麻油一焦谷氨酸一异硬脂酸二酯、POE硬化蓖麻油马来酸等POE蓖麻油或硬化蓖麻油衍生物；POE山梨糖醇酯蜂蜡等POE蜂蜡·羊毛脂衍生物；椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、十二酸一乙醇酰胺、脂肪酸异丙醇酰胺等烷醇酰胺；POE丙二醇脂肪酸酯、POE烷基胺，POE脂肪酸酰胺，蔗糖脂肪酸酯、POE壬苯基甲醛缩合物，烷乙氧基二甲胺氧化物、三油基磷酸等亲水性非离子表面活性剂等。

作为防腐剂可举例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丁酯等。

作为金属离子阻断剂可举例如乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠盐等乙二胺四乙酸碱金属盐、乙二胺四乙酸钙盐等乙二胺四乙酸碱土金属盐等。

作为水溶性高分子，亦可将天然的高分子、半合成的高分子、合成的高分子、无机的高分子的任一者配合于本发明产生促进剂中。

天然的水溶性高分子，可举例如阿拉伯胶、黄蓍胶、半乳聚糖、奇露布(キヤロブ)胶、愈创木胶(ゲァ-ガム)、刺梧桐树胶、角叉胶、果胶、琼脂、女王子(ケインスシ-ド)(木瓜)(マホメロ)、藻胶(アルゲコロイド)(褐藻萃取物)、淀粉(米，玉蜀黍、马铃薯、小麦)等植物系高分子；葡聚糖、琥珀酰葡聚糖、果聚糖等微生物系高分子；羧甲基淀粉、羟丙甲基淀粉等淀粉系高分子；胶原蛋白、酪蛋白、白蛋白、明胶等动物系高分子等。

半合成的水溶性高分子可举例如甲基纤维素、硝基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素、羟乙基纤维素、纤维素硫酸钠、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠(CMC)，结晶纤维素、纤维素粉末等纤维素系高分子，藻酸钠、藻酸丙二醇酯等藻酸系高分子等。

合成的水溶性高分子，可举例如聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯甲基醚(PVM)、聚乙烯甲基醚、羧乙烯基聚合物(CARBOPOL等)的乙烯系高分子，聚氧乙烯系高分子；聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物系高分子；聚丙烯酸钠、聚丙烯酸乙酯、聚丙烯酰胺等丙烯酸系高分子；聚乙烯亚胺、阳离子聚合物；皂土、硅酸铝镁，矾辉石(ラポライト)、锂蒙脱石、硅酸酐等无机系水溶性高分子等。

作为增粘剂，可积极地使用上记的水溶性高分子，可举例如角叉胶、刺梧桐树胶、黄蓍胶、奇露布胶、女王子(木瓜)、酪蛋白、葡聚糖、明胶、果胶酸钠、藻酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素、CMC、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、PVA、PVM、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、聚丙烯酸钠、羟乙烯基聚合物、刺槐豆胶(ロ一カスビ一ソガム)、愈创木胶、罗望子胶、二烷基二甲基铵硫酸纤维素、呫吨胶、硅酸铝镁、皂土、锂蒙脱石等。

粉末成分可举例如滑石、高岭土、云母、绢云母、白云母、金云母、红云母、黑云母、氧化锂云母、蛭石、碳酸镁、硅酸锶、硅酸钡、硅酸钙、硅酸镁、钨酸金属盐、镁、二氧化硅、沸石、硫酸钡、烧结硫酸钙(烧石膏)、磷酸钙、氟磷灰石、羟基磷灰石、陶瓷粉、金属皂(肉豆蔻酸锌、棕榈酸钙、硬脂酸铝等)，氮化硼等无机粉末；

聚酰胺树脂粉末(尼龙粉末等)、聚乙烯粉末、聚甲基丙烯酸甲酯粉末、聚苯乙烯粉末、苯乙烯与丙烯酸的共聚物树脂粉末；苯并胍胺树脂粉末、聚四氟化乙烯粉末、纤维素粉末等有机粉末；

二氧化钛，氧化锌等无机白色颜料；氧化铁(氧化铁红)、钛铁等无机红色系颜料；γ-氧化铁等无机褐色系颜料；黄氧化铁、黄土等无机黄色颜料；里氧化铁、炭黑，次氧化钛等无机黑色系颜料；锰紫、钴紫等无机紫色系颜料；氧化铬、氢氧化铬；钛酸钴等无机绿色系颜料；群青、绀青等无机蓝色系颜料；氧化钛涂膜的云母，氧化钛涂膜的氧化铋、氧化钛涂膜的滑石，着色氧化钛涂膜的云母，三氯氧化铋、鱼鳞箔等珍珠色颜料；铝粉、铜粉等金属粉末颜料；

可举红色201号、红色202号、红色204号、红色205号、红色220号、红色226号、色228号、红色405号、橙色203号、橙色204号、黄色205号、黄色401号、蓝色404号、等有机颜愈；红色3号、红色106、红色227号、红色230号、红色401号、红色505号、橙色205号、黄色4号、黄色5号、黄色202号、黄色203号、绿色3号、蓝色1号等锆、钡或铝色淀等有机颜料；叶绿素，β-胡萝卜素等天然色素；钛黄，卡沙明(カ-サミン)、红花赤等色剂等。

抗紫外线剂(包括为化学性吸收紫外线的物质的“紫外线吸收剂”及藉物理作用将紫外线散射或反射的物质的“紫外线阻断剂”的两者)，可举例如对氨基苯甲酸等对氨基苯甲酸系紫外线吸收剂；氨茴酸甲酯等氨胺茴酸系紫外线吸收剂；水杨酸辛酯、水杨酸苯酯、水杨酸高酯等水杨酸系紫外线吸收剂；对甲氧基肉桂酸异丙酯、对甲氧基肉桂酸辛酯、对甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯、二对甲氧基肉桂酸一-2-乙基己酸甘油酯、[4-双(三甲硅氧基)甲基甲硅烷基-3-甲基丁基]-3，4，5-三甲氧基肉桂酸酯等肉桂酸系紫外线吸收剂；2，4-二羟基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸钠等二苯甲酮系紫外级吸收剂；尿刊宁酸、尿刊宁酸乙酯、2-苯基-5-甲基苯并噁唑、2-(2’-羟基-5’-甲苯基)苯并三唑、4-叔丁基-4’-甲氧基二苯酰甲烷等紫外线吸收剂。

又，亦可举与上记粉末成分重复者，例如氧化钛、滑石、洋红、皂土、陶土、氧化锌等紫外线阻断剂。

保温剂可举例如聚乙二醇、丙二醇、二丙二醇、1，3-丁二醇、己二醇、甘油、二甘油、木糖醇、多醇(マルチト一ル)、麦芽糖、D-甘露糖醇、水饴、葡萄糖、果糖、乳糖、软骨素硫酸钠、透明质酸钠、腺苷磷酸钠、乳酸钠、胆汁酸盐、吡咯烷酮碳酸、葡糖胺、环糊精等。

作为药效成分，首先可举维生素类，维生素A油、视黄醇、乙酸视黄醇、棕榈酸视黄醇等维生素A类；核黄素、丁酸核黄素，黄素腺嘌呤核苷酸等维生素B₂类；维生素B₆盐酸盐、维生素B₆二辛酸盐等维生素B₆类；L-抗坏血酸、L-抗坏血酸一棕榈酸酯、L-抗坏血酸二棕榈酸酯、L-抗坏血酸-2-硫酸钠、L-抗坏血酸磷酸酯、DL-α-生育酚-L-抗坏血酸磷酸二酯二钾、L-抗坏血酸硬脂酸酯、L-抗坏血酸-2-葡糖苷等维生素C类；泛酸钙、D-泛醇、泛醇基乙基醚、乙酰基泛醇乙基醚等泛酸类；维生素D₂(麦角骨钙化固醇)、胆钙化固醇等维生素D类；α-生育酚、乙酸生育酚、烟酸DL-α-生育酚、琥珀酸DL-α-生育酚等维生素E类；维生素P，生物素等。

又，亦可举胎盘提取物，谷胱甘肽、虎耳草提取物、熊果甙等美白剂；蜂王胶，感光素401号，幼牛血液提取物等皮肤赋活剂；壬酸戊酰胺、烟酸苄酯、烟酸β-丁氧基乙酯，辣椒素，姜酮，斑蝥酊，鱼石脂，咖啡因，鞣酸，α-冰片，肌醇六烟酸酯，环扁桃酯，肉桂三甲基甘氨酸，苄唑啉，乙酰基胆碱，维拉帕米，顶花防己碱，γ-谷维醇等血行促进剂；硫，2，7-二甲基噻蒽等抗脂漏剂；甘草酸衍生物，甘草次酸衍生物，愈、水杨酸衍生物，日扁柏醇、氧化锌、脲基海因等消炎剂；雌二醇，乙炔基雌二醇等雌激素剂；精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、酪氨酸、色氨酸等氨基酸类等抗炎剂；鞣酸、柠檬酸等收敛剂；L-薄荷醇，冰片等清凉剂；氯化溶菌酶等。

另外，可将具多样药效的各种提取物配合于本发明产生促进剂。例如，葡萄提取物、蕺菜提取物、锦葵、枇杷提取物、黄柏提取物、薏苡仁提取物、獐牙菜提取物、番红花提取物、川芎提取物、鸢尾花提取物、黄连提取物、黄香草木犀提取物、桦树提取物、百合花提取物、野芝麻提取物、甘草提取物、芍药提取物、肥皂草提取物、芒柄花根提取物、丝瓜提取物、辣椒提取物、金鸡纳提取物、当归提取物、陈皮提取物、虎耳草提取物、苦参提取物、萍蓬草提取物、茴香提取物、樱草提取物、玫瑰提取物、地黄提取物、柠檬提取物、大蒜提取物、射干提取物、紫草提取物、芦荟提取物、菖蒲根提取物、桉提取物、迷迭香提取物、问荆提取物、鼠尾草提取物、百里香提取物、茶提取物、海草提取物、黄瓜提取物、丁香提取物、悬钩子提取物、蜜蜂花提取物、胡萝卜提取物、七叶树提取物、桃提取物、桃叶提取物、桑提取物、矢车菊提取物、金缕梅提取物、生姜提取物、十六液玫瑰提取物、胎盘提取物、胸腺提取物、蚕丝提取液等。

又，此等药效成分之中，将雌二醇、乙炔基雌二醇等雌激素剂或射干提取物配合于本发明产生促进剂中，则可确认协同的透明质酸产生促进效果。

又，此等药效成分之中，将L-抗坏血酸、L-抗坏血酸一棕榈酸酯、L-抗坏血酸二棕榈酸酯、L-抗坏血酸-2-硫酸钠、L-抗坏血酸磷酸酯、DL-α-生育酚-L-抗坏血酸磷酸二酯二钾，L-抗坏血酸硬脂酸酯，L-抗坏血酸-2-葡糖苷等维生素C类配合于本发明产生促进剂，则可确认协同的胶原蛋白产生促进效果。

实施例

以下用实施例等，就本发明加以说明。但本发明的技术范围并非由此等实施例所限定。

[参考例]样品的制备

(1)试验样品的制备

将柴胡的干燥根500克，浸渍于10倍量的50％1，3-丁二醇水溶液，于70℃提取1天。将此静置于冷暗所，使成熟后，过滤，得上记干燥根的提取物(以下，称为柴胡提取物)4700克。

于制备此柴胡提取物的过程所得的滤液通过合成吸附剂[Diaion HP-2(三菱化学公司制)]的柱后，以40％氯化铁溶液，分别将柴胡皂甙a及柴胡皂甙d转变为柴胡皂甙b1及柴胡皂甙b₂。

以乙醇洗脱柴胡皂甙后，将其洗脱液减压浓缩，使干。此干物溶于甲醇后，进行硅胶柱分级处理及高效液相层析法处理，得柴胡皂甙b1(以下亦称为SSb1)。

柴胡皂甙原，任一者皆经由将如上所得的柴胡皂甙以前述的习知方法做脱糖反应而得。

[试验例A]透明质酸产生试验及实际使用试验

(1)对于人类表皮细胞的透明质酸产生能力的作用的评估

使用来自人类包皮的表皮细胞(克拉波(クラボウ)公司制品：以下，称为表皮细胞。)评估柴胡提取物及SSb1对表皮细胞的透明质酸产生能力的作用。亦即，将悬浮于KGM培养基(以下称为表皮细胞用培养基：仓敷纺绩公司制)的表皮细胞(5×10⁴细胞/孔)播种于24孔培养用培养板(Falcon公司制品)，培养至成会合培养(培养条件：37℃·5％ CO₂)。接着，换成含10.0微克/毫升的柴胡提取物或0.1微克/毫升的SSb1之上记表皮细胞用培养基(于对照组，换成无添加此等样品之上记表皮细胞用培养基)，于同样条件下培养48小时。48小时后，取培养上清液，测定培养上清液液中的透明质酸量。此透明质酸量，使用测定用试剂盒“透明质酸板‘中外’”(中外制药制)测定。

此结果示于图1。于图1，于含柴胡抽取物的体系及含SSb1的体系的任一者，与对照组相比，表皮细胞皆增加产生的透明质酸量。

因而，对柴胡提取物及SSb1的任一者，确认皆具促进人类表皮细胞的透明质酸产生的作用。

(2)对于人类皮肤纤维母细胞的透明质酸产生能力的作用的评估

使用来自人类皮肤纤维母细胞的[自外科手术所得的皮肤，以explant法所得者：以下称为纤维母细胞]，评估柴胡提取物及SSb1对于此纤维母细胞的透明质酸产生能力的作用。亦即，将悬浮于1％FBS/DMEM培养基[FBS培养基使用GIBCO公司制，DMEM培养基使用日水制药公司制]的纤维母细胞(1×10⁴细胞/孔)播种于24孔培养用培养板(Falcon制品)，培养至成会合培养(培养条件：37℃·5％ CO₂)。接着，换成含有各样品的含样品线纤母细胞用培养基。柴胡提取物的浓度为10.0微克/毫升，SSb1的浓度为0.1微克/毫升(于对照组，换成无添加此等样品之上记表皮细胞用培养基)，于同样条件下培养48小时。

48小时后，取培养上清液，测定培养上清液中的透明质酸量。此透明质酸量，使用测定试剂盒“透明质酸板‘中外’”(中外制药制)测定。

结果示于图2。于第2图，于含柴胡提取物的系及含SSb1的系的任一系，与对照组的情形比，纤维母细胞产生的透明质酸量皆增加。

因而，于柴胡提取物及SSb1的任一者，皆确认促进人类纤维母细胞的透明质酸产生。

(3)实际使用试验

对于示于第1A表的处方的实施例1A，实施例2A及比较例1A所得的剂，分别实施示于下面的使用试验。又，配合量为重量％。

第1A表

                                 实施例1A  实施例2A  比较例1A(1)  鲸蜡醇(セトステァリルアルコ-ル)    3.5       3.5      3.5(2)  角鲨烷                            40.0       40.0    40.0(3)  蜂蜡                               3.0       3.0      3.0(4)  还原羊毛脂                         4.0       4.0      4.0(5)  对羟基苯甲酸乙酯                   0.3       0.3      0.3(6)  聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单棕榈酸酯   2.0       2.0      2.0(7)  硬脂酸一甘油酯                     3.0       3.0      3.0(8)  柴胡提取物                         3.0        -        -(9)  柴胡皂甙b1                          -        0.05      -(10) N-硬脂酰谷氨酸钠                   0.5       0.5      0.5(11) 香料                               0.03      0.03     0.03(12) 1，3-丁二醇                        5.0       5.0      5.0(13) 聚乙二醇1500                       5.0       5.0      5.0(14) 纯水                               残余      残余     残余

<制法>将(1)～(11)的原料加热溶解，制备油相。一方面，将(12)及(13)溶于纯水，保持于70℃制备水相。而，将前记油相一面加至此水相中，一面搅拌。接着，进行匀浆机处理，使乳化粒子碎裂后，一面搅拌一面急速冷却，得所希望的霜剂。

此实际使用的试验，将随机提取的年龄30至71岁的健康成年女性作为受试者，一组为30名，令连续使用各实施例或比较例的剂历4周后，对于(甲)皮肤的娇嫩度的改善效果，(乙)皮肤的紧绷、松弛的改善效果，及(丙)对皱纹、小皱纹的改善效果，以以下的计点判断，评估30名的平均点数。

(甲)对皮肤的娇嫩度的改善效果的计点

非常改变  3点

改善 2点

稍微改善    1点

无改善效果  0点

恶化 -1点

(乙)对皮肤的紧绷·松弛的改善效果的计点

非常改善   3点

改善  2点

稍微改善   1点

无改善效果 0点

恶化  -1点

(丙)对皱纹·小皱纹的改善效果的计点

非常改变   3点

改善  2点

稍微改善   1点

无改善效果 0点

恶化 -1点

此实际使用试验的结果示于第2A表

第2A表

       娇嫩度    紧绷·松弛  雀斑·小皱纹实施例1A    2.8          2.7         2.3实施例2A    2.5          2.4         2.0比较例1A    0.7          0.6         0.5

此结果，于使用实施例1A或实施例2A的剂的组，对于任一评估项目，与使用比较例1A的剂的组比较，可认定优越的改善效果。

由以上3种试验，明白通过本发明的产生促进剂，促进细胞外基质成分的一的透明质酸的产生，另外通过此透明质酸的产生促进，将细胞外基质活化，皮肤组织亦正常化，本发明产生促进剂确认有防止皮肤老化的效果。

[试验例B]VII型胶原蛋白产生试验及实际使用试验

(1)对人类表皮细胞的VII型胶原蛋白产生能力的作用的评估

使用来自人类包皮的表皮细胞(克拉波公司制品；以下称为表皮细胞)，评估柴胡提取物及SSb1对表皮细胞的VII型胶原蛋白产生能力的作用。亦即将悬浮于KGM培养基(以下称为表皮细胞用培养基：仓敷纺绩公司制)的表皮细胞(5×10³细胞/孔)种于滑动室(Nunc公司制)，接着，换成含有10.0微克/毫升的柴胡提取物或0.1微克/毫升的SSb1之上记表皮细胞用培养基(于对照组，换成无添加此等样品之上记表皮细胞用培养基)，于37℃、5％ CO₂下培养48小时。

而，自体系除去表皮细胞培养用培养基后，表皮细胞以多聚甲醛固定，将此与对VII型胶原蛋白的单克隆抗体(Sakai，L.Y.，等，《细胞生物学杂志》J.Cell.Biol.，103，1577-1586，1986)及FITC标记二次抗体(Sigma公司制)反应，以荧光显微镜观察后，进行照片摄影。

结果示于第3A图(对照组)，第3B图(含SSb1的体系)及第3C图(含柴胡提取物的体系)[第3A图～第3C图任一者皆为生物的形态照片)。由此等照片可明白，于含柴胡提取物的系及含SSb1的体系的任一体系，与对照组的情形比较，被荧光标记的表皮细胞数多，显然地VII型胶原蛋白的产生增加。

(2)对人类皮肤纤维母细胞的VII型胶原蛋白产生能力的作用的评估

使用来自人类皮肤的纤维母细胞[自外科手术所得的皮肤，以explant法所得者)以下称为纤维母细胞]，评估柴胡提取物及SSb1对于此纤维母细胞的VII型胶原蛋白产生能力的作用。亦即，将悬浮于1％FBS/DMEM培养基[FBS培养基：GIBCO公司制，DMEM培养基：日水制药公司制：以下，称为纤维母细胞用培养基。]的纤维母细胞(5×10³细胞/孔)种于前述的滑动室，接着换成含有各样品的含样品的纤维母细胞用培养基。使柴胡提取物的浓度为231.5微克/毫升，SSb1的浓度为0.1微克/毫升(于对照组，换成无添加此等样品之上记表皮细胞用培养基)，于37℃、5％ CO₂下培养48小时。

而自系除去表皮细胞培养用培养基后，纤维母细胞以多聚甲醛固定，将其与对VII型胶原蛋白的单克隆抗体(Sakai，L.Y.，等，《细胞生物学杂志》J.Cell.Biol.，103，1577-1586，1986)及FITC标记二次抗体(Sigma公司制)反应，以荧光显微镜观察后，进行照片摄影。

结果示于第4A图(对照组)，第4B图(含SSb1的系)及第4C图(含柴胡提取物的系)[第4A图～第4C图任一者皆为生物的形态照片]。自此等照片可明白，于含柴胡提取物及含SSb1的系的任一系，与对照组的情形比较，显然被荧光标记的表皮细胞数多，VII型胶原蛋白的产生增加。

(3)于活体外于皮肤三维模型休系的对于VII型胶原蛋白产生能力的作用的评估

于由来自人类皮肤的纤维母细胞与表皮细胞所成的三维皮肤模式，进行柴胡提取物及SSb1对VII型胶原蛋白产生能力的作用的评估。

亦即，将纤维母细胞(1×10⁵细胞/毫升)悬浮胶原蛋白溶液(胶原蛋白使用高研公司的I-PA)于冰上制备后，于37℃使胶原蛋白胶凝。其后，自培养皿壁面剥离，以后于纤维母细胞用培养基中培养，使胶原蛋白凝胶收缩，制备真皮模型。

于此真皮模型上种2×10⁵细胞/平方厘米的表皮细胞，于5％FBS/DMEM-KGM培养基(FBS培养基：GIBCO公司制，DMEM培养基：日水制药公司制，KGM培养基：仓敷纺绩公司制)培养，制备皮肤模型。制备皮肤模型后，第1周换成添加样品的此培养基。又，使柴胡提取物的浓度为231.5微克/毫升，SSb1的浓度为0.1微克/毫升(于对照组，换成无添加此等样品之上记表皮细胞用培养基)，于37℃、5％ CO₂下培养2周。

皮肤模型于液氮中固定包埋，制备切片后，将此与对VII型胶原蛋白的单克隆抗体(Sakai，L.Y.，等，《细胞生物学杂志》J.Cell.Biol.，103，1577-1586，1986)及FITC标记二次抗体(Sigma公司制)反应，于荧光显微镜观察后，进行照片摄影(无图示)。

此结果，于柴胡提取物及SSb1的任一体系，与对照组的情形比较，明白被荧光标记的表皮细胞数多，VII型胶原蛋白的产生增加。

(4)实际使用试验

对于于示于第1B表所示的处方的实施例1B，实施例2B及比较例1B所得的剂，分别实施以下所示的实际使用试验。又，配合量为重量％。

第1B表

                              实施例1A    实施例2A  比较例1A(1)  鲸蜡醇                          3.5         3.5       3.5(2)  角鲨烷                          40.0        40.0      40.0(3)  蜂蜡                            3.0         3.0       3.0(4)  还原羊毛脂                      4.0         4.0       4.0(5)  对羟基苯甲酸乙酯                0.3         0.3       0.3(6)  聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单棕榈酸  2.0         2.0       2.0(7)  硬脂酸一甘油酯                  3.0         3.0       3.0(8)  柴胡提取物                      0.5          -         -(9)  柴胡皂甙b1                       -          0.1        -(10) N-硬脂酰谷氨酸钠                0.5         0.5       0.5(11) 香料                            0.03        0.03      0.03(12) 1，3-丁二醇                     5.0         5.0       5.0(13) 聚乙二醇1500                    5.0         5.0       5.0(14) 纯水                           残余         残余      残余

<制法>将(1)～(11)的原料加热溶解制备油相。一方面，将(12)及(13)溶于纯水，保持于70℃，制备水相。然后将前记油相一面搅拌一面添加至此水相中。接着，进行匀浆机处理，将乳化粒子碎裂后，一面搅拌一面急速冷却，得所希望的霜剂。

此实际使用试验，以随机提取的年龄36岁至69岁的健康成年女性为受试者，1组为30名，令连续使用各实施例或比较例的剂历4周后，对于(甲)皮肤的紧绷、松弛的改善效果及(乙)皱纹、小皱纹的改善效果以以下的计点判断，以30名的平均点评估。

(甲)对皮肤的紧绷·松弛的改善效果的计点

非常改变  3点

改善  2点

稍微改善   1点

无改善效果 0点

恶化-1点

(乙)对皱纹·小皱纹的改善效果的计点

非常改变   3点

改善  2点

稍微改善   1点

无改善效果 0点

恶化 -1点

此实际使用试验的结果示于第2B表。

第2B表

       紧绷·松弛      雀斑·小皱纹实施例1B       2.6             2.3实施例2B       2.7             2.2实施例1B       0.5             0.6

此结果，于使用实施例1B或实施例2B的剂的组，对于任一评估项目，可确认与使用比较例1B的剂的组比较，有优越的改善效果。

以上，从4种试验，通过本发明产生促进剂，促进细胞外基质成分的一的VII型胶原蛋白的产生，而且通过此VII型胶原蛋白的产生促进，活化细胞外基质，又使皮肤组织正常化，另外强化皮肤与真皮间的结合力，其结果，本发明产生促进剂以防止皮肤老化上有优越的效果。

以下，公开将种种处方的本发明产生促进剂作为处方例此等任一者的产生促进剂于上记的实际使用试验，可得与上记实施例同等“保持皮肤娇嫩度”、“防止皮肤紧绷、松弛”，另外“防止皮肤的雀斑”等结果。

[处方例1-1]乳液(1)

                                    配合量(重量％)硬脂酸                                     6.0脱水山梨醇一硬脂酸酯                       2.0聚氧乙烯(20摩尔)脱水山梨醇一硬脂酸酯       1.52-(2’-羟基-5’-甲苯基)苯并三唑            8.0丙二醇                                     10.0柴胡提取物                                 10.0防腐剂、抗氧化剂                           适量香料                                       适量纯水                                       余额

<制法>

于纯水中加丙二醇，加热保持于70℃(水相)。一方面，混合其他成分、加热溶融，保持于70℃(油相)。于前记水相中，一面搅拌，一面添加此油相，进行预先乳化。接着，以匀浆机将体系的乳化粒子碎裂，且使成均匀后，一面彻底搅拌一面急速冷却，得乳液。

[处方例1-2]乳液(2)

                                配合量(重量％)硬脂酸                                  6.0一硬脂酸脱水山梨醇酯                    2.0一硬脂酸聚氧乙烯(20摩尔)脱水山梨醇酯    1.52-(2’-羟基-5’-甲苯基)苯并三唑         8.0丙二醇                                  10.0柴胡皂甙b₂                             1.0防腐剂、抗氧化剂                        适量香料                                     适量纯水                                     余额

<制法>

与处方例1-1同样制备。

[处方例1-1]霜剂(1)

                                   配合量(重量％)聚氧乙烯(20摩尔)鲸蜡醇酯                  1.0甲苯基聚硅氧烷(20cs)                      2.0液体石蜡                                  3.02-羟基-4-甲氧基二苯甲酮                   5.0柴胡皂甙d                                 0.3丙二醇                                    5.0甘油                                      2.0乙醇                                     15.0羧乙烯基聚合物                            0.3羟丙基纤维素                              0.12-氨甲基丙醇                              0.1防腐剂                                   适量香料                                     适量纯水                                     适量

<制法>

于纯水中加丙二醇，加热、保持于70℃(水相)。一方面，混合其他成分，加热溶融，保持于70℃(油相)。于前记水相中，将此油相一面搅拌，一面添加进行预先乳化。接着，以匀浆机将体系的乳化粒子碎裂，且使均一后，一面彻底搅拌、一面急速冷却，得霜剂。

[处方例2-2]霜剂(2)

                                  配合量(重量％)聚氧乙烯(20摩尔)鲸蜡醇酯                1.0甲苯基聚硅氧烷(20cs)                    2.0液体石蜡                                3.02-羟基-4-甲氧基二苯甲酮                 5.0柴胡皂甙d                               0.5丙二醇                                  5.0甘油                                    2.0乙醇                                    15.0羧乙烯基聚合物                          0.3羟丙基纤维素                            0.12-氨甲基丙醇                            0.1防腐剂                                  适量香料                                    适量纯水                                    适量

<制法>

与处方例2-1同样制备。

[处方例3-1]防晒用美容液(1)

                                 配合量(重量％)硬脂酸                                   3.0鲸蜡醇                                   1.0羊毛脂衍生物                             2.0流动石蜡                                 2.0硬脂酸2-乙基己酯                         2.01，3-丁二醇                              6.0聚氧乙烯(10摩尔)一油酸酯                 2.0一硬脂酸甘油酯                           2.0三乙醇胺                                 1.02-羟基-4-甲氧基二苯甲酮                 3.0对甲氧基肉桂酸辛酯                      2.0柴胡皂甙a                               0.05香料                                    适量纯水                                    余额

<制法>

于纯水中加1，3-丁二醇及三乙醇胺，加热、保持于70℃(水相)。一方面，混合其他成分，加热溶融，保持于70℃(油相)。于前记水相中，将此油相一面搅拌，一面添加进行预先乳化。接着，以匀浆机将体系的乳化粒子碎裂，且使均一后，一面彻底搅拌、一面急速冷却，得防晒用美容液。

[处方例3-2]防晒用美容液(2)

                               配合量(重量％)硬脂酸                                  3.0鲸蜡醇                                  1.0羊毛脂衍生物                            2.0液体石蜡                                2.0硬脂酸2-乙基己酯                        2.01，3-丁二醇                             6.0聚氧乙烯(10摩尔)一油酸酯                2.0一硬脂酸甘油酯                          2.0三乙醇胺                                1.02-羟基-4-甲氧基二苯甲酮                 3.0对甲氧基肉桂酸辛酯                      2.0柴胡皂甙a                              0.001香料                                    适量纯水                                    余额

<制法>

与处方例3-1同样制备。

[处方例4-1]乳化型化妆粉底(W/O乳化型)(1)

                               配合量(重量％)有机改性蒙脱石                          0.5异辛酸鲸蜡酯                            2.0八甲基环四硅氧烷                        2.0十甲基环五硅氧烷                        5.0二甲基聚硅氧烷(6cs)                     5.0液体石蜡                                3.0氯化二(十八基)二甲基铵                  0.2聚氧烯基改性有机聚硅氧烷                5.04-叔丁基-4’-甲氧基二苯甲酰甲烷         0.3一-2-乙基己酰基二对甲氧基肉桂酸甘油酯   1.0微粒子氧化钛                            5.0油醇                                    0.5硬脂酸                                  0.5二异硬脂酸脱水山梨醇酯                  4.0抗氧化剂                                适量香料                                    适量滑石                                    1.5尼龙粉                                  1.0纯水                                    余额柠檬酸钠                                0.51，3-丁二醇                             5.0柴胡皂甙b₂                             0.5

<制法>

于纯水中加柠檬酸钠、1，3-丁二醇、柴胡皂甙b₂及抗氧化剂，于70℃加热搅拌(水相)。将微粒子氧化钛、滑石及尼龙粉充分混合粉碎(粉末部分)。将其他成分混合，加热融解，保存于70℃(油相)。前记水相中加粉末部分，于70℃，以匀浆机处理。再加油相，以匀浆机将乳化粒子碎裂均一化后一面彻底搅拌一面急速冷却，得乳化型化妆粉底。

[处方例4-2]乳化型化妆粉底(W/O乳化型)(2)

                                配合量(重量％)有机改性蒙脱石                         0.5异辛酸鲸蜡酯                           2.0八甲基环四硅氧烷                       2.0十甲基环戊硅氧烷                       5.0二甲基聚硅氧烷(6cs)                    5.0液体石蜡                               3.0氯化二(十八基)二甲基铵                 0.2聚氧烯基改性有机聚硅氧烷               5.04-叔丁基-4’-甲氧基二苯甲酰甲烷        0.3一-2-乙基己酰基二对甲氧基肉桂酸甘油酯  1.0微粒子氧化钛                           5.0油醇                                   0.5硬脂酸                                 0.5二异硬脂酸脱水山梨醇酯                 4.0抗氧化剂                               适量香料                                   适量滑石                                   1.5尼龙粉                                 1.0纯水                                   余额柠檬酸钠                               0.51，3-丁二醇                              5.0柴胡提取物                               5.0

<制法>

与处方例4-1同样制备。

[处方例5-1]粉状粉底(1)

                                 配合量(重量％)微粒子氧化钛                             7.0滑石                                     40.0云母                                     余额尼龙粉                                   10.0红氧化铁                                 1.0黄氧化铁                                 2.0黑氧化铁                                 0.2二甲基聚硅氧烷                           1.0棕榈酸-2-乙基己酯                        9.0倍半油酸脱水山梨醇酯                     1.0N，N-二甲基PABA辛酯                      0.3柴胡皂甙原A                              0.2防腐剂                                   适量抗氧化剂                                 适量香料                                     适量

<制法>

将微粒子氧化钛、滑石、云母、尼龙粉、红氧化铁、黄氧化钛、黑氧化铁及柴胡皂甙原A以配合机充分粉碎混合(粉末部分)。于此粉末部分加二甲基聚硅氧烷、棕榈酸-2-乙基己酯、倍半油酸脱水山梨醇酯、N，N-二甲基PABA辛酯，防腐剂抗氧化剂后，将香料喷雾均一混合。以粉碎机将此粉碎后，充填于容器、成型，得粉底。

[处方例5-2]粉状粉底(2)

                               配合量(重量％)微粒子氧化钛                             7.0滑石                                    40.0云母                                     余额尼龙粉                                  10.0红氧化铁                                 1.0黄氧化铁                                 2.0黑氧化铁                                 0.2二甲基聚硅氧烷                           1.0棕榈酸-2-乙基己酯                        9.0倍半油酸脱水山梨醇酯                     1.0N，N-二甲基PABA辛酯                      0.3柴胡皂甙原A                              5.0防腐剂                                   适量抗氧化剂                                 适量香料                                     适量

<制法>

与处方例5-1同样制备

[处方例6-1]油性粉底(1)

                               配合量(重量％)微粒子氧化钛                             10.0云母                                     22.4高岭土                                   10.0尼龙粉末                                  5.0红氧化铁                                  0.5黄氧化铁                                  0.5黑氧化铁                                 0.1液体石蜡                                余额二甲基聚硅氧烷                          10.0倍半油酸脱水山梨醇酯                     2.0甲氧基肉桂酸辛酯                         5.0柴胡皂甙原D                             0.01香料                                    适量微晶粒蜡                                 6.0巴西棕榈蜡                               3.0

<制法>

将微粒子氧化钛、云母、陶土、尼龙粉、红氧化铁、黄氧化钛、黑氧化铁以配合机充分粉碎混合(粉末部分)。另将香料以外的其他成份混合于其中，以85℃予以加热熔解(油相)。在此油相中将上述粉末在搅拌下添加的。而后添加香料，予以充份磨碎分散后，将其充填于容器中成型，获得油性粉底。

[处方例6-2]油性粉底(2)

                                配合量(重量％)微粒子氧化钛                             10.0云母                                     22.4陶土                                     10.0尼龙粉末                                  5.0红氧化铁                                  0.5黄氧化铁                                  2.0黑氧化铁                                  0.1液体石蜡                                 余额二甲基聚硅氧烷                           10.0倍半油酸脱水山梨醇酯                      2.0甲氧基肉桂酸辛酯                          5.0柴胡皂甙原D                             0.005香料                                     适量微晶粒蜡                                 6.0巴西棕榈蜡                               3.0

与处方例6-1同样制备。

产业上的利用可能性

本发明产生促进剂促进细胞外基质，更具体言的，透明质酸等酸性粘多糖与胶原蛋白等纤维性蛋白质的产生，细胞外基质的活化与皮肤组织的正常化，另外通过强化表皮与真皮间的结合力得以发挥发止皮肤老化的效果。

Claims (10)

1.一种细胞外基质的产生促进剂，其系以得自属于柴胡属植物的提取物为有效成分。

2.根据权利要求1的细胞外基质的产生促进剂，其中得自属于柴胡属植物的提取物的原料为该植物的根部。

3.根据权利要求1或2的细胞外基质的产生促进剂，其中该属于柴胡属的植物为柴胡。

4.一种细胞外基质的产生促进剂，其系以柴胡皂甙及/或柴胡皂甙原为有效成分。

5.根据权利要求1至4中任一项的细胞外基质的产生促进剂，其为皮肤外用剂。

6.根据权利要求1至5中任一项的细胞外基质的产生促进剂，其系促进酸性粘多糖及纤维性蛋白质的产生。

7.根据权利要求1至5中任一项的细胞外基质的产生促进剂，其系促进酸性粘多糖的产生。

8.根据权利要求1至5中任一项的细胞外基质的产生促进剂，其系促进纤维性蛋白质的产生。

9.根据权利要求6或7的细胞外基质的产生促进剂，其中该酸性粘多糖为透明质酸。

10.根据权利要求6或8的细胞外基质的产生促进剂，其中该纤维性蛋白质为胶原蛋白。

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