JP3615705B2

JP3615705B2 - 皮膚及び／又は毛髪の色素形成を刺激するための少なくとも１つのシュンギク属の抽出物の使用

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Publication number: JP3615705B2
Application number: JP2000511481A
Authority: JP
Inventors: マルタン，リシャール; ベルクール−カストロ，ベアトリス
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 1997-09-18
Filing date: 1998-09-14
Publication date: 2005-02-02
Anticipated expiration: 2018-09-14
Also published as: WO1999013856A1; FR2768343A1; EP1014934B1; AU9167798A; ATE211905T1; CN1270513A; AU739954B2; EP1014934A1; PL339663A1; DE69803200D1; FR2768343B1; DE69803200T2; ES2172194T3; HUP0004420A2; DK1014934T3; JP2001516710A; RU2197945C2; CA2303141A1; HUP0004420A3; BR9814937A

Description

【０００１】
本発明は、皮膚及び／又は毛髪の色素形成を補助するための組成物における、少なくとも１つのシュンギク属植物の少なくとも１つの抽出物の用途に関する。
【０００２】
ヒトの毛髪及び皮膚の色は、種々の要因、特に、季節、人種、性別及び年齢によって異なる。それは主としてメラニン細胞（メラノサイト）によって生産されるメラニンのケラチン細胞中の濃度により決定される。メラニン細胞は、特定のオルガネラであるメラノソームによりメラニンを合成する特殊な細胞である。
メラニンの合成、すなわちメラニン形成（ｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ）は特に複雑であり、次の主工程を概略含む。
チロシン→ドーパ→ドーパキノン→ドーパクロム→メラニン
チロシナーゼ（モノフェノール−ジヒドロキシル−フェニルアラニン：酸素酸化還元酵素／ＥＣ１，１４，１８，１）は、この連鎖反応に介在する必須の酵素である。この酵素は特にチロシンをドーパ（ジヒドロキシフェニルアラニン）に転換させる反応とドーパをドーパキノンに転換させる反応とを触媒する。
【０００３】
表皮において、メラニン細胞は、約３６の隣接するケラチン細胞（ケラチノサイト）により囲まれたメラニン細胞を含む表皮性メラニンユニットに関係している。フォトタイプ（ｐｈｏｔｏｔｙｐｅ）の違いに関係なく、あらゆる個人は、所定の皮膚領域においてほぼ同数のメラニン細胞を有する。色素形成の点で、人種の違いはメラニン細胞の数によるものではなく、それらのメラノソームの性質による。メラノソームは凝集して複合体になっており、大きさは小さい。これらは高度に特殊化されたオルガネラであり、その独特の機能はメラニンの生産にある。それらはプレメラノソームと呼ばれる球状空胞の形態の小胞体から発生する。プレメラノソームは無定型タンパク質基質を含むが、メラニン形成酵素は含有しない。プレメラノソームが成熟するにつれ、無定型基質は、メラノソームの長軸に配向した繊維状構造に器質化する。メラノソームの発達の４つの段階は、メラニン沈着の強さに応じて区別される。メラニンはメラノソームの内部繊維状網目構造に均一に付着し、オルガネラの不透明度が飽和するまで増加する。メラノソーム内でメラニンが合成されると、これらはメラニン細胞の核周囲から樹状突起の末端に向けて移動する。ファゴサイトーシスにより、樹状突起末端はケラチン細胞に捕捉され、膜が退化し、メラノソームはケラチン細胞内に再分配される。
【０００４】
メラニンレベルはある種族と他の種族とでは異なるが、チロシナーゼの量はあまり違わず、チロシナーゼのメッセンジャーＲＮＡレベルは白い皮膚又は黒い皮膚において同一である。よって、メラニン形成の違いは、チロシナーゼの活性度、又はケラチン細胞のメラノソームに対する食作用の能力の違いによる。
【０００５】
多くのヒトにおいて、皮膚を褐色にし、また毛髪の色調を一定に保持することは大切な願望であることが知られている。
さらに、例えば色素形成欠損に関連して、皮膚に白い部分が表れることが特徴の自己免疫疾患である白斑のような色素形成疾患が存在する。
よって、皮膚及び／又は毛髪の色素形成を容易にし、及び／又は改善する製品が必要とされている。
【０００６】
人工着色の分野においては、実用的な外来性着色剤の供給により天然である着色に可能な限り近い着色を皮膚及び／又は毛髪に付与することにより、また、自然の着色の分野においては、色素形成の自然の経路を刺激することによる、多くの解決法が提案されている。
例えば、国際公開９５１７１６１号、国際公開９５１１００３号、国際公開９５０１７７３号、国際公開９４０４６７４号、国際公開９４０４１２２号、欧州特許公開第５８５０１８号、国際公開９３１０８０４号、国際公開９２２０３２２号又は国際公開９１０７９４５号公報においては、ホスホジエステラーゼインヒビターを含有する組成物、プロスタグランジンの使用、ＤＮＡフラグメント又はさらにはチロシン誘導体の使用という種々の解決法が提案されている。
【０００７】
実際、優れた結果が従来から提案されている解決法により得られるが、しばしば使用される化合物には無視できない副作用があるか、又は何ら特異性を持たない複合混合物であったりする。
不都合な副作用を持たず、皮膚及び／又は毛髪の色素形成に効果を有する物質を発見することが、主たる研究の目的である。
【０００８】
本出願人は、少なくとも１つのシュンギク属の植物の少なくとも１つの抽出物が、メラニン形成を活性化させる効果を有していることを見出した。
シュンギク属植物は、従来技術においては、色素脱失特性を有する組成物（日本国特許第０７０２５７４５号、日本国特許第０７０２５７４６号）、毛髪の成長を補助する、及び／又は抜毛に抗する組成物（仏国特許第２６５９０１４号、欧州特許第５６９６６７号、独国特許第４３３０５９７号、独国特許第４３１２１０９号、日本国特許第８０８１３３６号、日本国特許第８４１５４５９８号、日本国特許第０２０４８５１４号）、抗フケ組成物（韓国特許第９００６８２４号、日本国特許第６２１５３２１１号）又は皮膚の柔軟性、保湿及び輝きを保持するための組成物（日本国特許第６２０４８６１１号）に使用されている。カナダ国特許出願第１０９４２７８号及びカナダ国特許出願第１０９４２７９号は、ナチュラルな毛髪のトリートメント用組成物に関するものである。これらの組成物は種々の特性（毛髪の装飾、固定、血液循環の促進及び毛髪の成長、殺菌、抗掻痒、抗フケ）を有しており、そのなかで抗白髪作用を挙げることができる。実際、これらの組成物は各々少なくとも９つの植物の抽出物からなる２成分の混合物であり、列挙した多くの特性の一つについてあるものが他のものよりも良好であるということはできない。
【０００９】
本出願人の知るところでは、シュンギク属植物の抽出物の活性成分の用途が、皮膚及び／又は毛髪の色素形成を補助することであるものは、未だ出願されていない。
よって、本発明は、活性成分として、十分量の少なくとも１つのシュンギク属植物の少なくとも１つの抽出物の、化粧品用組成物における、又は製薬用組成物の調製における使用に関するもので、この抽出物又は組成物は皮膚及び／又は毛髪の色素形成の増加を意図したものである。
同様に、本発明は、メラニン形成を補助する活性成分として、十分量の少なくとも１つのシュンギク属植物の少なくとも１つの抽出物の、化粧品用組成物における、又は製薬用組成物の調製における使用に関する。
【００１０】
少なくとも１つのシュンギク属植物の抽出物は、シュンギク属植物から派生する任意の植物材料から調製された任意の抽出物であってよい。
組成物は、インビトロ培養から生じた、又はインビボにおいて栽培された植物から生じた物質から得られる、少なくとも１つのシュンギク属植物の少なくとも１つの抽出物を含有することができる。
【００１１】
インビボ栽培とは、従来型の任意の栽培又は培養、すなわち戸外の土壌、又は温室、又は土壌以外による培養を意味すると理解されるものである。
よって、例えば本発明においては、植物がインビボで栽培されたものであろうとインビトロで培養されたものあろうと、植物の異なる部位、葉、花、茎、根、未分化細胞の抽出物を、単独で又は混合物として使用することができる。
インビトロにおける植物細胞の成長中に物理化学的条件により課せられる淘汰圧により、インビボ栽培で栽培された植物とは異なり、標準化され一年を通じて入手可能である植物材料を得ることが可能になる。
インビトロ培養とは、植物又は植物の一部を人工的に取得することを可能にする、当業者に既知のあらゆる技術を意味するものと理解される。
好ましくは、インビボで栽培された植物性材料から得られる抽出物が使用され、さらに好ましくはインビボで栽培されたシュンギク属植物の葉から得られた抽出物が使用される。
【００１２】
シュンギク属は、それ自身はキク目（Ａｓｔｅｒａｃａｅ）（又はＡｓｔｅｒａｌｅｓ）に属するキク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する。
シュンギク属には、ヨーロッパ又はアジア原産の約２００種が含まれ、クリサンセマン・ホルトルム（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｈｏｒｔｏｒｕｍ）、クリサンセマン・モリフォリウム（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ）、クリサンセマン・コロナリウム（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｃｏｒｏｎａｒｉｕｍ）、クリサンセマン・マイコニス（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｍｙｃｏｎｉｓ）、クリサンセマン・サジトゥム（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｓａｇｉｔｕｍ）、クリサンセマン・インディキュム（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｉｎｄｉｃｕｍ）、又はクリサンセマン・セゲトゥム（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｓｅｇｅｔｕｍ）を挙げることができる。
本発明においてはクリサンセマン・モリフォリウム種から派生した植物が好適に使用される。
クリサンセマン・モリフォリウム種には多数の変種が含まれ、中でも本発明で優先的に使用される変種サイネンス（ｖａｒｉｅｔｙｓｉｎｅｎｓｅ）を挙げることができる。
【００１３】
少なくとも１つのシュンギク属植物の抽出物とは、粗く断片にした植物の一部と抽出溶媒の粗混合物、並びに抽出中に溶解した活性成分から生産された調製物の両方を意味すると理解されるものである。本発明において特に利用可能な抽出物は、植物の一部を細かくすりつぶし、続いて抽出溶媒中で解離させ、最終的に濾過することにより産出される。本発明の抽出物はこのようにして得られた抽出物の各々をそれ自体で使用しても、一又は複数の他の抽出物との混合物として使用してもよいことは明らかである。
【００１４】
本発明では、当業者に公知の任意の抽出方法を使用することができる。
特に水性及びアルコール抽出、特にエタノール抽出、及び水性−アルコール抽出が挙げられる。
使用を意図した抽出物の形態が何であれ、それを得るために使用される技術は、一般に従来において開示されており、当業者によく知られているものである。
【００１５】
同様に、仏国特許出願第９５−０２３７９号に記載されている方法により調製された抽出物を使用することもできる。
例えば、第１工程において、植物材料を低温の水溶液中で粉砕し、第２工程において、第１工程で得られた水溶液から懸濁液中の粒子を取り除き、第３工程において、第２工程で得られた水溶液を滅菌する。この水溶液は、抽出物に相当する。
他方、第１工程を、有利には、簡単な植物組織の凍結操作（例えば−２０℃）に置き換えてもよく、これに上述した第２及び第３工程に代わる水性抽出が続く。
【００１６】
本発明で使用される調製態様がどのようなものであれ、保存及び／又は安定化を補助することを目的とした次工程を、抽出物の実際の性質を結局のところは変化させないで、加えることができる。例えば、得られた抽出物を、任意の従来の凍結乾燥法により凍結乾燥することができる。このようにしてパウダーが得られ、直接使用するか、使用前に適切な溶媒中に混合することができる。
本発明では水性抽出物が優先的に使用される。
本発明で使用可能な抽出物の調製方法の詳細は、実施例においてさらに付与される。
【００１７】
もちろん、本発明の組成物中に含まれるシュンギク属の少なくとも１つの植物の量は、所望する効果と、組成物に使用される抽出物の形態とによって変わる。よって、この量は広範囲に変わり得る。
目安を述べると、その種類が何であれ、組成物は、組成物の全重量に対して０．０１〜１５重量％、好ましくは組成物の全重量に対して１〜５重量％の量の、少なくとも１つのシュンギク属植物の抽出物を含有可能である。
【００１８】
本発明の組成物は、本質的に、皮膚及び／又は毛髪の色素形成の増加及び／又はメラニン形成の刺激を意図している。その種類が何であれ、本発明の組成物は、本質的に、皮膚（身体の任意の皮膚領域）及び／又は毛髪に適用される。
【００１９】
投与形態に応じて、本発明の組成物は通常使用される任意の製薬的形態で存在し得る。
皮膚への局所適用用として、組成物は、特に、水性又は油性の溶液、又はローション又は漿液型の分散液、水相に脂肪相を分散させる（Ｏ／Ｗ）か、逆（Ｗ／Ｏ）によって得られるミルク型の液体又は半液体状のコンシステンシーのエマルション、水性もしくは無水クリーム又はゲル型の希薄なコンシステンシーのエマルション又は懸濁液、又はマイクロカプセル又は微小粒子、又はイオン性及び／又は非イオン性の小胞分散液の形態にすることができる。
同様に、それらは、水性、アルコール又は水性−アルコール溶液の形態、又はクリーム、ゲル、エマルション又はフォームの形態、又は加圧下で噴霧剤をさらに含有するエアゾール組成物の形態で毛髪に使用することもできる。
【００２０】
本発明の組成物の種々の成分の量は、考慮される分野において従来から使用されている量である。
【００２１】
これらの組成物は、顔、手、脚、主要な解剖学上のヒダ又はボディ用の、クレンジング、保護、トリートメント又は手入れ用クリーム（例えば、デイクリーム、ナイトクリーム、メークアップ除去用クリーム、クリームファンデーション、サンタンクリーム）、リキッド・ファンデーション、メークアップ除去用ミルク、保護又は手入れ用のボディミルク、サンタンミルク、皮膚の手入れ用のフォーム、ゲル、又はローション、例えばクレンジングローション、サンタンローション、人工的な日焼け用ローション、入浴用組成物、殺菌剤を含有する脱臭用組成物、アフターシェービング用ローション又はゲル、除毛用クリーム、虫さされ防止用組成物、鎮痛用組成物、ある種の皮膚病、例えば湿疹、しゅさ、乾癬、苔蘚、及び激しい痒みを処置する組成物を形成する。
【００２２】
また、本発明の組成物は、クレンジング石鹸又はケーキを形成する固体状調製物からなる。
さらに、組成物は、加圧下で噴霧剤をさらに含有するエアゾール組成物の形態に包装することもできる。
またさらに、本発明の組成物は、毛髪の手入れ用組成物、特に、シャンプー、ヘアセット用ローション、トリートメントローション、ヘアスタイリングクリーム又はゲル、染色用シャンプーの形態であってもよい染色用組成物（特に、酸化染料）、髪型の再生用ローション、パーマネントウエーブ用組成物（特に、パーマネントウエーブ処理の第１工程用の組成物）、抜け毛防止用ローション又はゲル、駆虫用シャンプー等であってもよい。
【００２３】
組成物がエマルションである場合、脂肪相の割合は、組成物の全重量に対して５重量％〜８０重量％、好ましくは５重量％〜５０重量％である。エマルションの形態の組成物に使用される油、ロウ、乳化剤及び共乳化剤は、化粧品の分野で従来より使用されているものから選択される。乳化剤と共乳化剤は、組成物の全重量に対して０．３重量％〜３０重量％、好ましくは０．５〜２０重量％の範囲内の割合で組成物中に存在する。エマルションは、さらに、脂質小胞体を含有してもよい。
組成物が、油性ゲル又は溶液の場合、脂肪相は組成物の全重量に対して９０重量％より多くすることができる。
【００２４】
公知の方法で、化粧品用組成物は、化粧品の分野における常套的なアジュバント、例えば親水性又は親油性のゲル化剤、親水性又は親油性の添加剤、防腐剤、酸化防止剤、溶媒、香料、増量剤（ｂｕｌｋｉｎｇａｇｅｎｔｓ）、遮蔽剤、臭気吸収剤及び着色物質をさらに含有することができる。これら、種々のアジュバントの量は、化粧品の分野において従来より使用されている量、例えば組成物の全重量に対して０．０１〜１０％である。これらのアジュバントは、それらの性質により、脂肪相、水相及び／又は脂質小胞体に導入することができる。
本発明で使用可能な油又はロウとしては、鉱物性油（流動パラフィン）、植物性油（カリテバターの液状留分、ヒマワリ油）、動物性油（ペルヒドロスクワレン）、合成油（プルセリン油：Ｐｕｒｃｅｌｌｉｎｏｉｌ）、シリコーン油又はロウ（シクロメチコーン）及びフッ化油（ペルフルオロポリエーテル）、ミツロウ、カルナウバロウ又はパラフィンロウを挙げることができる。また、脂肪アルコール及び脂肪酸（ステアリン酸）を、これらの油に加えることもできる。
【００２５】
本発明で使用可能な乳化剤としては、例えば、ステアリン酸グリセロール、ポリソルベイト（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）６０、及びガッテフォセ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ）社からテフォース（Ｔｅｆｏｓｅ）６３（登録商標）の名称で販売されているＰＥＧ−６／ＰＥＧ−３２／ステアリン酸グリコールの混合物を挙げることができる。
【００２６】
本発明で使用可能な溶媒としては、低級アルコール、特にエタノール及びイソプロパノール、及びプロピレングリコールを挙げることができる。
【００２７】
本発明で使用可能な親水性のゲル化剤としては、カルボキシビニルポリマー（カーボマー：ｃａｒｂｏｍｅｒ）、アクリルコポリマー、例えばアクリラート／アルキルアクリラートのコポリマー、ポリアクリルアミド、多糖類、例えばヒドロキシプロピルセルロース、天然ゴム及びクレー類を挙げることができ、また親油性のゲル化剤としては、変性クレー類、例えばベントーン、脂肪酸の金属塩、例えばステアリン酸アルミニウム、及び疎水性シリカ、エチルセルロース及びポリエチレンを挙げることができる。
【００２８】
また組成物は、他の親水性の活性剤、例えば、タンパク質又はタンパク質の加水分解物、アミノ酸、多価アルコール、尿素、アラントイン、糖類及び糖類誘導体、水溶性ビタミン類、植物抽出物、及びヒドロキシ酸を含有してもよい。
使用可能な親油性の活性剤は、レチノール（ビタミンＡ）及びその誘導体、トコフェロール（ビタミンＥ）及びその誘導体、必須脂肪酸、セラミド、精油、サリチル酸及びその誘導体である。
【００２９】
本発明において、組成物は、特に皮膚疾患の処置及び／又は防止を意図した他の活性剤を含有することができる。これらの活性剤としては、例えば：
− 皮膚の分化及び／又は増殖を低減する薬剤、例えばレチノイン酸及びその異性体、レチノール及びそのエステル類、ビタミンＤ及びその誘導体、エストロゲン、例えばエストラジオール；
− 抗菌剤、例えばリン酸クリンダマイシン、エリスロマイシン又はテトラサイクリン類の抗生物質；
− 駆虫剤、特にメトロニダゾール、クロタミトン又はピレスロイド；
− 抗真菌剤、特にイミダゾール類に属する化合物、例えばエコナゾール、ケトコナゾール又はミコナゾール又はその塩類、ポリエン化合物、例えばアンホテリシンＢ、アリルアミン類の化合物、例えばテルビナフィン、又はオクトピロックス（ｏｃｔｏｐｉｒｏｘ）；
− 抗ウィルス剤、例えばアシクロビル；
− ステロイド系の抗炎症剤、例えばヒドロコルチゾン、吉草酸ベタメタゾン又はプロピオン酸クロベタゾール、又は非ステロイド系の抗炎症剤、例えばイブプロフェン及びその塩類、ジクロフェナク及びその塩類、アセチルサリチル酸、アセトアミノフェン又はグリシルレチン酸；
− 麻酔剤、例えば塩酸リドカイン及びその誘導体；
− 止痒剤、例えばテナルジン、トリメプラジン又はシプロヘプタジン；
− 角質溶解剤、例えばα−及びβ−ヒドロキシカルボン酸、又はβ−ケトカルボン酸、その塩類、アミド類又はエステル類、特にヒドロキシ酸、例えばグリコール酸、乳酸、サリチル酸、クエン酸及び一般的な果実酸と呼ばれているもの、及びｎ−オクタノイル−５−サリチル酸；
− 抗フリーラジカル剤、例えばα−トコフェロール又はそのエステル類、スーパーオキシド−ジスムターゼ、ある種の金属キレート剤、又はアスコルビン酸及びそのエステル類；
− 抗脂漏剤、例えばプロゲステロン；
− 抗フケ剤、例えばオクロピロックス又はジンクピリチオン；
− 抗ざ瘡剤、例えばレチノイン酸又は過酸化ベンゾイル；
− 皮膚及び／又は毛髪の色素形成を補助する薬剤、例えばチロシナーゼ活性を有する少なくとも１つの酵素の基質、例えばチロシン又はその誘導体、又は３，４−ジヒドロキシフェニル−α−アラニン（ＤＯＰＡ）、６位が置換されたピリミジン−３−オキシドの誘導体、例えば次の一般式（Ｉ）：
【化１】

［上式中、
Ｒ_１及びＲ_２は同一でも異なっていてもよく、水素原子又はＣ_１−Ｃ_１２アルキル基であり；
Ｒ_３及びＲ_４は同一でも異なっていてもよく、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル基であるか、又はそれらが結合している窒素原子と共同して複素環を形成可能であり；
Ｒ_３及びＲ_４が共同してピペリジノ環系を形成する場合に、Ｒ_１又はＲ_２基の少なくとも１つは水素原子と異なるものでなくてはならない］
に相当し、仏国特許出願第９６−１１３１６号に記載されているもの、中でも：
２−アミノ−４−プロピルアミノ−６−ジメチルアミノピリミジン−３−オキシド、
２−アミノ−４−メチルアミノ−６−ピペリジノピリミジン−３−オキシド、
２，４−ビス−プロピルアミノ−６−ジメチルアミノピリミジン−３−オキシド、
２，４−ビス−プロピルアミノ−６−ピペリジノピリミジン−３−オキシド、
２，４−ビス−メチルアミノ−６−ジメチルアミノピリミジン−３−オキシド、
２，４−ビス−エチルアミノ−６−ジメチルアミノピリミジン−３−オキシド；
細菌由来の抽出物、例えば非光合成糸状菌の抽出物、例えばビトレオシラ・フィリフォルミス（Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａｆｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、
を挙げることができる。
【００３０】
よって、本発明の組成物は、抗菌剤、駆虫剤、抗真菌剤、抗ウィルス剤、抗炎症剤、止痒剤、麻酔剤、角質溶解剤、抗フリーラジカル剤、抗脂漏剤、抗フケ剤及び抗ざ瘡剤、細胞の増殖及び／又は分化を調節する薬剤、及び／又は皮膚及び／又は毛髪の色素形成を補助する薬剤から選択される少なくとも１つの薬剤をさらに含有することができる。
【００３１】
また、組成物は特にアンチ・キャンサー社（ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒＩｎｃ．）により１９９４年１０月１３日に出願された国際公開９４／２２４６８号に記載されているようなリポソームの形態であると考えることもできる。しかして、リポソームに封入された化合物は毛髪の小胞レベルに選択的に送達せしめ得る。
【００３２】
本発明は、化粧品的に許容可能な媒体に少なくとも１つのシュンギク属植物の少なくとも１つの抽出物を含有する化粧品用組成物を、皮膚及び／又は毛髪に適用する、皮膚及び／又は毛髪の色素形成を増加させる美容処理方法に関する。
化粧品的に許容可能な媒体とは、皮膚、粘膜、爪及び毛髪と融和性のある媒体を意味すると理解されるものである。
【００３３】
【実施例】
以下の実施例により本発明を例証するが、いかなる場合においても本発明の範囲を限定することを意図したものではない。
実施例１：クリサンセマン・モリフォリウム変種サイネンスの抽出物の調製：
温室で栽培されたクリサンセマン・モリフォリウム変種サイネンスの葉を取り、４５℃の温度の換気孔のあるオーブン中で４８時間乾燥させる。
ついで、乾燥した葉を、キュラッチ（Ｃｕｌａｔｔｉ）型のナイフ・グラインダーで挽いてパウダー状にする。
得られたパウダーを、直径１ｍｍの孔を有するグリルを通してふるい分けする。このふるい分けられたパウダーを、抽出物の調製に使用する。
【００３４】
プロトコール１：
パウダーを、ライフ・テクノロジー社（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から販売されている細胞培地であるＤＭＥＭ／Ｆ１２．３：１により形成された水性抽出溶媒と、溶媒１００ｍｌ当り乾燥パウダー５グラムの濃度比で混合する。混合物を雰囲気温度で４時間攪拌する。ついで、混合物を１０００回転／分で８分間遠心分離し、上清を取り出し、遠心分離／サンプリングの２回の同じサイクルにかける。
最後に取り出された上清を、無菌状態でミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）型の０．２２μｍフィルターを通して濾過した後、滅菌して、使用するまで４℃の温度に維持する。
【００３５】
プロトコール２：
パウダーを６．５のｐＨを有する滅菌された脱塩水と、水１００ｍｌ当り乾燥パウダー２．５ｇの濃度比で混合する。混合物を雰囲気温度で３０分間攪拌する。ついで、混合物をワットマン社（Ｗｈａｔｍａｎｎ）から販売され、０．７μの孔を有するＧＦＤ膜を通して濾過する。ついで、得られた濾液を無菌状態でナルゲン（Ｎａｌｇｅｎｅ）型の０．２２μｍのフィルターを通して濾過した後、滅菌し、使用するまで４℃に維持する。
【００３６】
プロトコール３：
水をライフ・テクノロジー社から販売されている細胞培地であるＤＭＥＭ／Ｆ１２．３：１により形成される水性の抽出溶媒に換えて、先のプロトコールを実施する。
【００３７】
プロトコール４：
プロトコール２で得られた抽出物を、−２０℃で凍結する前に３０℃で凍結乾燥させる。得られたパウダーは直接使用される。
【００３８】
実施例２：実施例１のプロトコール２で得られた抽出物のメラニン形成におけるモジュレータ効果の測定：
実施例１のプロトコール２で得られた抽出物のメラニン形成におけるモジュレータ効果を仏国特許第９５０６４９１号に記載された方法に従い、正常なヒトのケラチン細胞／メラニン細胞の共培養で試験した。メラニン合成率はＣ^１４で標識されたチオウラシルを導入することにより評価する。トリチウム化ロイシンの導入により測定されるタンパク質合成を細胞毒及び増殖の指標として取り出す。
【００３９】
材料及び方法
−細胞培養：
包皮からの正常なヒトのケラチン細胞（ＮＨＫ）と正常なヒトのメラニン細胞（ＮＨＭ）を培養する。２種類の細胞を増殖させ、凍結して保管する。テスト８日前に、再度、各種類の細胞を、ケラチン細胞（ＮＨＫ）用であるギブコ社（Ｇｉｂｃｏ）のＫＧＭ培地、及びメラニン細胞（ＮＨＭ）用であるドクター・オルソン（ＤｒＯｌｓｓｏｎ）のＭ２培地［オルソン・エム・ジェイ（ＯｌｓｓｏｎＭ．Ｊ．）ら，Ｌａｎｃｅｔ（１９９２），３４０，９８１］において培養する。培地は２日毎に交換する。
集密４８時間前にＮＨＫのＫＧＭ培地を、分化培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２３：１、１０％の子ウシ血清、１０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ、０．４μｇ／ｍｌのヒドロコルチゾン、５μｇ／ｍｌのインスリン）に換える。
【００４０】
−植物抽出物
実施例１（プロトコール２）の植物抽出物を１．２５・１０^−４、２．５・１０^−４、５・１０^−４、１．２５・１０^−３、２．５・１０^−３、５・１０^−３％の濃度で試験する。
【００４１】
−メラニン形成の変調
２５００００の正常なヒトのケラチン細胞と８００００の正常なヒトのメラニン細胞を混合し、２４−ウェルプレート［コスター（Ｃｏｓｔａｒ）型］のウェルに植え、特殊培地で３日間培養する。次の３日間の間、培養培地を、Ｃ^１４で標識されたチオウラシル０．０３７ＭＢｑ／ｍｌ（１μＣｉ／ｍｌ）を含有する定義付けされた試験用培地［ＤＭＥＭ／Ｆ１２．３：１、１０ｎｇ／ｍｌの上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）、１０ｎｇ／ｍｌのβ型繊維芽細胞増殖因子（βＦＧＦ）］と毎日交換する。
【００４２】
次の対照についても行う：
−培養対照：試験される生成物を含有しない；
−メラニン形成を刺激する正の対照：１ｍＭのチロシン；
−メラニン形成を阻害する正の対照：０．５ｍＭのコウジ酸。
【００４３】
タンパク質に導入された総放射能をトリチウム化ロイシンの導入により算出する。取り出し前日に、０．０３７ＭＢｑ／ｍｌ（１μＣｉ／ｍｌ）のトリチウム化ロイシンを試験用培地に添加する。
一晩後、細胞をリン酸バッファーですすぐ。タンパク質を５％のトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）で沈殿させ、洗浄し、フリーの放射能を算出する。タンパク質を、トリス−ＨＣｌ−トリトン−ＥＤＴＡバッファーに１００μｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫが入った溶液と４０℃で一晩インキュベートする。全部で５０μｌの抽出物を取り出し、２４−ウェルプレート［ワラック社（Ｗａｌｌａｃ）］に移し、５００μｌのシンチレーション流体［オプティフェイズ社（Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ）の「スーパーミックス（Ｓｕｐｅｒｍｉｘ）」］を添加する。
【００４４】
残りの抽出物、すなわち９５０μｌをＤＥＡＥフィルターマット（Ｆｉｌｔｅｒｍａｔ）濾材で濾過する。すすいだ後、固体シンチラント（ｓｏｌｉｄｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）で覆われた「メルチレックス（Ｍｅｌｔｉｌｅｘ）」フィルターをプレート上に移す。放射能をワラック（Ｗａｌｌａｃ）カウンターで計測する。結果を次の式：
｛［（１４ＣＰ／３ＨＰ）−（１４ＣＴ／３ＨＴ）］／（１４ＣＴ／３ＨＴ）｝ｘ１００
［上式中：
^１４ＣＰは生成物（Ｐ）で処理された３つの同様のウェルにおける^１４Ｃチオウラシルの１分当りの分解度（ｄｐｍ）の平均であり；
^３ＨＰは対応^３Ｈロイシンのｄｐｍの平均であり；
^１４ＣＴは３つの同様の対照ウェル（Ｔ）における^１４Ｃチオウラシルのｄｐｍの平均であり；
^３ＨＴは対応^３Ｈロイシンのｄｐｍの平均である］
に従い、対照に対するパーセンテージとして表す。
【００４５】
結果：
【表１】

【００４６】
結論：
この生成物は試験した濃度では細胞毒性がなく（^３ＨＬｅｕの導入に有意の変動はない）、１．２５・１０^−３％からメラニンの合成を誘発する（^１４ＣチオＵの導入における増加）。
【００４７】
実施例３：少なくとも１つのシュンギク属植物の少なくとも１つの抽出物を含有する組成物の例
これらの組成物は、化粧品業又は製薬業で一般的に使用されている常套的な技術により得られる。

【００４８】

【００４９】

このローションは、１日に１〜２回、適用毎に１ｍｌの割合で頭皮に適用される。
【００５０】

この増粘したローションは、１日に１〜２回、適用毎に１ｍｌの割合で頭皮に適用される。
【００５１】

このローションは、１日に１〜２回、適用毎に１ｍｌの割合で頭皮に適用される。
【００５２】

この増粘したローションは、１日に１〜２回、適用１回当り１ｍｌの割合で頭皮に適用される。

Claims

少なくとも１つのシュンギク属植物の葉から得られた少なくとも１つの水性、アルコール又は水性アルコール抽出物からなる、皮膚及び／又は毛髪の色素形成の増加を意図した薬剤。
少なくとも１つのシュンギク属植物の少なくとも１つの抽出物からなる、メラニン形成を刺激するための薬剤であって、前記植物がインビボ栽培の場合には花を除くものである薬剤。
前記植物が、クリサンセマン・ホルトルム、クリサンセマン・モリフォリウム、クリサンセマン・コロナリウム、クリサンセマン・マイコニス、クリサンセマン・サジトゥム、クリサンセマン・インディキュム又はクリサンセマン・セゲトゥムの種から選択されることを特徴とする請求項１又は２に記載の薬剤。
前記植物がクリサンセマン・モリフォリウム種であることを特徴とする請求項３に記載の薬剤。
前記植物が変種サイネンスであることを特徴とする請求項４に記載の薬剤。
前記抽出物が、組成物の全重量に対して０．０１〜１５重量％、好ましくは組成物の全重量に対して１〜５重量％の量であることを特徴とする請求項１ないし５のいずれか１項に記載の薬剤。
化粧品的に許容可能な媒体中に少なくとも１つのシュンギク属植物の葉から得られた少なくとも１つの水性、アルコール又は水性アルコール抽出物を含有してなる化粧品用組成物を、皮膚及び／又は毛髪に適用することを特徴とする、皮膚及び／又は毛髪の色素形成を増加させるための美容処理方法。