CN105342867A - 一种本草组合物亚微米脂质载体及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种本草组合物亚微米脂质载体及其制备方法,以及在制备化妆品和/或护肤品中的应用。该亚微米脂质载体包括本草组合物和脂质,所述本草组合物包括天门冬提取物、地黄提取物和人参提取物的任意一种或几种组合。本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体,具有如下有益效果:1)提高了活性物的负载量;2)能够更好的控制药物释放;3)制备方法简单、重复性好;4)在水中的分散性好,稳定性高,在热水中分散后呈半透明状,可与其他护肤配方互配。因此,在药品、化妆品、食品等行业具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种脂质载体及其制备方法,尤其涉及一种本草组合物亚微米脂质载体及其制备方法。
背景技术
近年来,随着中国经济在全球地位的不断提升,本草类化妆品也孕育而生。与其他化妆品相比,本草类化妆品的有效成分含量较高,针对性强,这主要是添加了具有特殊作用的中草药。如,天门冬水提液具有较高的清除自由基能力和一定的抑菌作用,是一种天然抗氧化剂。天门冬水提液的自由基清除和抑菌能力随其浓度的增加而增强,其对金黄色葡萄球菌也具有较好的抑制效果。生地黄和熟地黄均具有清除DPPH自由基的能力,且熟地黄具有多种抗氧化成分。人参皂甙不仅具有自由基清除作用,而且随皂甙浓度增加,其清除自由基的能力增强。
单一本草的保养性能有限,一般会以本草组合物的形式添加到化妆品中,但是本草组合物在制备化妆品时,其渗透性和保湿性稍差。CN201210182239.6采用多重乳液包裹熊果苷的方法,但是多重乳液本身是一种不稳定的存在形式。内水相会向外运动,外水相则会向内运动,一旦平衡被打破,也就失去了稳定的结构。
脂质体(Liposome)是一种内部包含水相的闭合囊泡状结构,是磷脂及其类似物在水中自发形成的。固体脂质纳米粒(SLN)是以生物体可降解的、固体的天然或合成类脂质材料作为药物载体,将药物吸附、包裹或夹嵌于类脂核中制成的粒径约为50-1000nm的亚微粒输运系统,SLN还可以用于化妆品、食品等活性物的包裹。SLN主要由三大部分组成:脂质,乳化剂,活性物。当活性物熔点高于脂质熔点时,冷却时活性物会优先凝固形成活性物核,脂质包裹在活性物的外层;当活性物熔点低于脂质熔点时,冷却时脂质会优先重结晶形成脂质核,活性物分布在脂质核外层。固体脂质纳米粒中活性物以三种形式存在于载体中:(1)固体溶液型;(2)活性物富集于壳的核-壳型;(3)活性物富集于核的核-壳型。
但是由于SLN的完美晶型,在实际运用中,会存在如下缺陷:1)活性物的负载量较低,一般只有1-5wt%;2)存放过程中发生SLN粒径增大或活性物降解等现象;3)某些SLN包裹的活性物具有突释效应,即在很短的时间内完全释放或释放出大部分活性物。
发明内容
针对目前SLN在实际运用中存在的问题,本发明提供了一种本草组合物亚微米脂质载体及其制备方法。
本发明的第一个方面在于提供一种本草组合物亚微米脂质载体,所述亚微米脂质载体包括本草组合物和脂质,所述本草组合物包括天门冬提取物、地黄提取物和人参提取物的任意一种或几种组合。
作为本发明的一个优选实施例,所述本草组合物的质量百分比为0.1-10%,优选为0.5-8%,更优选为1-5%;所述脂质的质量百分比为1-20%,优选为5-15%,如7-10%;
其中,所述本草组合物中各物质的质量百分比为:
天门冬提取物为0-10%,优选为0.1-8%,优选为1-7%,如2-5%;
地黄提取物为0-10%,优选为0.1-9%,优选为1-8%,如3-6%;
人参提取物为0-10%,优选为1-9%,优选为2-8%;如5-7%;
余量为水。
作为本发明的一个优选实施例,所述本草组合物还可以包括如下组分中的任意一种或几种组合:三七、乳香、桔梗、艾叶、黄芪、菊花、黄精、枸杞、茯苓、仙人掌、芒果、橄榄、蒲公英、芍药、川芎、牡丹、石斛、当归、红花、木瓜、石榴皮、生姜、芦荟、椰子雪莲花、金盏花、茶、灵芝、甘草、玉米、连翘、葛根、胡桃、柠檬、黄瓜、甜瓜、丹参、樱桃、山药、天麻、丝瓜、赤豆、番木瓜、晚香玉、皂荚、冬虫夏草、佛手、茉莉、薄荷、薰衣草、月季(包括玫瑰)、两面针、麝香草、羊胎盘水解液、紫河车、沙棘、鹿茸、紫胶、绞股蓝、紫草、月见草、海藻、斑蝥酊。
其中,所述本草组合物中,各本草组分可以是水提物、醇提物、油提物、超临界CO2提取物、物理粉碎粉末、浸膏中的任意一种或几种的组合。
作为本发明的一个优选实施例,所述醇提物优选为乙醇提取物。
作为本发明的一个优选实施例,所述脂质可以为任意一种或几种脂质的组合,如可以为辛酸/癸酸甘油三酯、甘油硬脂酸酯、丁基辛醇水杨酸酯和甘油乙酸酯中的任意一种或几种组合。
作为本发明的一个优选实施例,所述亚微米脂质载体的平均粒径为100-500nm。
作为本发明的一个优选实施例,所述亚微米脂质载体还包括乳化剂、助乳化剂、稳定剂、防腐剂中的任意一种或几种组合。
作为本发明的一个优选实施例,所述亚微米脂质载体各组分的质量百分比为:
余量为水。
作为本发明的一个优选实施例,所述亚微米脂质载体各组分的质量百分比为:
余量为水。
作为本发明的一个优选实施例,所述乳化剂选自以下任意一种或者几种化合物组合:鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、山梨坦橄榄油酸酯、月桂醇聚醚-23、PEG-30二聚羟基硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、聚甘油-10五硬脂酸酯或者硬脂醇聚醚-21。
作为本发明的一个优选实施例,所述助乳化剂选自以下任意一种或几种化合物组合:乙氧基二甘醇、橄榄油PEG-7酯类或者聚甘油-3二异硬脂酸酯。
作为本发明的一个优选实施例,所述稳定剂选自以下任意一种或几种化合物组合:1,3-丁二醇、鲸蜡醇棕榈酸酯、山梨坦棕榈酸酯、山梨坦橄榄油酸酯或者氢化橄榄油、油橄榄果油、油橄榄油不可皂化物。
作为本发明的一个优选实施例,所述防腐剂选自以下任意一种或几种化合物组合:苯氧乙醇、乙基己基甘油、山梨酸及其盐、丙酸盐、对羟基苯甲酸酯、苯甲醇、苯甲酸及其盐、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、卡松、咪唑烷基脲、脱氢醋酸及其盐、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、2,2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇(布罗波尔)、异抗坏血酸及其盐、曲酸及其酯、壬二酸、松萝酸、间苯二酚。
本发明的第二个方面在于提供一种本草组合物亚微米脂质载体的制备方法,所述制备方法包括如下步骤:
步骤1、将天门冬、地黄、人参中的一种或几种混合,制备提取物得到本草组合物;其中,制备提取物的方法可以是水提取、油提取、醇提取、超临界二氧化碳提取中的任意一种或几种组合,更优选为水提取、醇提取中的任意一种或几种组合,更优选为乙醇水溶液回流提取;
将脂质、乳化剂、助乳化剂、稳定剂中的一种或几种组合加热、搅拌、混合,得到混合液1;
步骤2、向混合液1中加入本步骤1中得到的本草组合物,搅拌,得到混合液2;
步骤3、向步骤2获得的混合液2中加入水,搅拌,得到混合液3,冷却混合液3,得到本草组合物亚微米脂质载体。
作为本发明的一个优选实施例,所述制备方法,步骤3中还包括向冷却后的混合液3中加入防腐剂。
作为本发明的一个优选实施例,步骤1中所述回流的温度为40-80℃。
作为本发明的一个优选实施例,步骤1中所述搅拌的条件为转速200-600rpm,搅拌时间为5-15min。
作为本发明的一个优选实施例,步骤3中的搅拌速度为300-800rpm,搅拌时间为5-15min。
作为本发明的一个优选实施例,步骤3中将混合液3冷却至40-60℃,如50℃。
本发明的第三个方面在于提供一种本草组合物亚微米脂质载体的应用。
所述亚微米脂质载体优选为施用于皮肤外表面,更优选为应用于制备涂覆于皮肤外表面的制品。
其中,本发明所述中药组合物应用于制备日化用品,优选为应用于制备化妆品和/或护肤品。
本发明的第四个方面在于提供一种涂覆于皮肤外表面的制品,所述制品包括上述任意一种本草组合物亚微米脂质载体。
其中,本发明所述制品优选为日化用品,更优选为化妆品和/或护肤品。
其中,所述制品、优选为日化用品、更优选为化妆品和/或护肤品,优选为具有抗氧化和/或保湿效果。
作为本发明的一个优选实施例,所述化妆品和/或护肤品为霜剂、乳液、化妆水或面膜。
作为本发明的一个优选实施例,所述本草组合物作为添加剂分散于基质原料中。
其中,所述基质原料可以是油质原料、粉质原料、胶质原料、溶剂原料中的任意一种或几种组合。
所述油质原料可以是下述基质原料中的任意一种或几种:大豆油、橄榄油、杏仁油、蓖麻油、花生油、棉籽油、茶籽油、霍霍巴油、鳄梨油、椰子油、棕榈油、可可脂、米糠油、月见草油、小麦胚芽油、玉米胚芽油、棕榈蜡、木蜡、水貂油、海龟油、蛇油、蛋黄油、牛脂、马脂、猪脂、鹿脂、卵磷脂、羊毛脂、蜂蜡、鲸蜡、虫胶蜡、石蜡、凡士林、微晶蜡、地蜡、角鲨烷、羊毛脂蜡、羊毛脂醇、羊毛脂醇酯化物、乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、羊毛脂酸、羊毛脂酸酯化物、聚氧乙烯羊毛脂、聚氧乙烯羊毛醇醚、聚氧丙烯羊毛醇醚、氢化羊毛脂、烷氧基化氢化羊毛脂、硅油(如:二甲基硅油、八甲基硅油、甲基苯基聚硅氧烷)、聚硅氧烷-聚氧烷基嵌段共聚物、甲基含氢硅油、Cn脂肪酸及其酯、Cn脂肪醇及其酯;其中,n≥10,并优选为10-24,更优选为12-20,如14、16、17、18。
所述Cn脂肪酸如:月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、芥酸、癸酸。
所述Cn脂肪醇如:月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇、异硬脂醇、油醇、椰油醇。
所述Cn脂肪酸酯、Cn脂肪醇酯如:肉豆蔻酸异丙酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯、十四醇乳酸酯、十六醇乳酸酯、棕榈酸异丙酯、棕榈树异辛酯、硬脂酸丁酯、硬脂酸异辛酯、硬脂酸单甘油脂、硬脂酸聚乙二醇酯、油酸癸酯、辛酸甘油酯、癸酸甘油酯、甘油三油酸酯。
所述粉质原料可以是下述基质原料中的任意一种或几种组合:云母、碳酸镁、钛白粉、锌白粉、氢氧化钙、碳酸钙、高岭土、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酸镁、滑石粉、二氧化硅、氢氧化铝、焦磷酸钙、碳酸氢钙、膨润土。
其中,所述油脂原料可以是植物油质原料、动物油质原料、矿物油质原料、合成油质原料、半合成油质原料中的任意一种或几种。如:淀粉、环糊精、黄原胶、角叉胶、瓜尔豆胶、阿拉伯胶、黄芪胶、琼脂、虫胶、海藻酸钠、明胶、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、聚纤维素醚季铵盐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、聚氧乙烯、乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物、卡波树脂、硅酸铝镁、C12-15醇苯甲酸酯。
所述溶剂原料可以是下述基质原料中的任意一种或几种组合:水、乙醇、丙醇、异丙醇、异丁醇、乙二醇、1,2-丙二醇、环己烷、二氯二氟甲烷、四氟二氯乙烷、乙二醇单乙醚、二甘醇单乙醚、丙酮、甲基异丁基甲酮、醋酸乙酯、醋酸丁酯、乙酸戊酯、邻苯二甲酸二丁酯。
作为本发明的一个优选实施例,所述制品、优选为日化用品、更优选为化妆品和/或护肤品中,还可以包括:香精与香料、色素、保湿剂、紫外线吸收剂、螯合剂、收敛剂、助渗剂中的任意一种或几种组合。
其中,所述香精与香料可以选自如下组分中的任意一种或几种组合:1)天然香料,如苦艾油、桉叶油、八角茴香油、白柠檬油、白丁香浸膏、丁香油、白兰花油、白兰花浸膏、白兰叶油、柏木油、薄荷油、苍术硬脂、草木犀浸膏、橙叶油、丁香罗勒油、大花茉莉浸膏、冬青油、当归油、当归浸膏、地衣酸、地檀香油、玳玳花油、玳玳叶油、风信子浸膏、枫香浸膏、芳樟油、黄樟油、甘松油、桂花浸膏、红橘油、胡萝卜籽油、海狸香、黄葵油、黄兰油、藿香油、黄蒿油、九里香浸膏、金合欢浸膏、姜油、橘子油、椒样薄荷油、菊花浸膏、枯茗油、龙涎香、留兰香油、灵猫香、腊梅油、铃兰浸膏、木香根油、米兰花油、玫瑰香叶油、玫瑰油、茉莉浸膏、牡蛎油、墨红浸膏、墨红油、柠檬桉叶油、柠檬油、七里香浸膏、楠叶油、芹菜籽油、肉豆蔻油、肉桂油、山苍子油、水貂香膏酊、水仙浸膏、松针油、树苔浸膏、素馨浸膏、麝香、麝鼠香膏、甜橙油、檀香油、晚香玉油、晚香玉浸膏、万寿菊精油、小茴香油、血桧木油、香茅油、香叶油、康乃馨油、紫苏油、香紫苏油、香附油、香柠檬薄荷油、岩兰草油、香薷油、香薷草浸膏、悬钩子蔷薇花油、悬钩子蔷薇花浸膏、薰衣草油、月桂叶油、依兰依兰油、芫荽籽油、鱼香草油、岩蔷薇浸膏、岩桂油、柚皮油、鸢尾油、烟草花油、香橼叶油、栀子花浸膏、紫穗槐油、紫罗兰叶浸膏、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、天然香兰素、樟脑;2)合成香精,如柠檬烯、长叶烯、乙位石竹烯、异长叶烯、异长叶烯酮、异长叶烷酮、溴代苏合香烯、二苯甲烷、二苯醚、间甲基二苯醚、丁香酚、异丁香酚、乙位萘甲醚、乙位萘乙醚、对甲基茴香醚、异丁香酚苄醚、玫瑰醚、檀香醚、水仙醚(或茉莉醚)、降龙涎香醚、甲基柏木醚、环氧柏木烷、埃林塔尔、埃林塔尔N、3-己烯醇、癸醇、月桂醇、苯甲醇、苯乙醇、对甲氧基苄醇、肉桂醇、二甲基苄基甲醇、香叶醇、橙花醇、芳樟醇、玫瑰醇、松油醇、香茅醇、消旋薄荷脑、薄荷脑、冰片、柏木醇、柏木烷酮、甲基柏木酮、3,4-二氧亚甲基苯甲醇、α-甲基-3,4-二氢亚甲基苯丙醛、2-叔丁基-4-甲基环己醇、香紫苏醇、檀香醇、3-甲基-5-(2’,2’,3’-三甲基环戊烯-1’-基)戊-2-醇、苯甲醛、苯乙酮、苯乙酸、对甲基苯乙酮二苯甲酮、月桂醛、肉桂醛、肉桂酸、α-戊基-β-苯基丙烯醛、α-苯基丙醛、铃兰醛、新铃兰醛、兔耳草醛、3,4-二氧亚甲基苯甲醛、3,7-二甲基-6-辛烯醛、3,7-二甲基-7-羟基辛醛、柠檬醛、乙位环高柠檬醛、艾薇醛、柑青醛、4-羟基-3-甲氧基苯甲醛、α-二氢突厥酮、β-突厥烯酮、紫罗兰酮、6-甲基紫罗兰酮、橙花酮、香芹酮、胡椒基丙酮、覆盆子酮、药草酮、顺式茉莉酮、庚醛乙二醇缩醛、苯乙醛二甲缩醛、辛醛二甲缩醛、α-戊基桂醛二甲缩醛、柠檬醛二甲缩醛、柠檬醛二乙缩醛、茴香醛二甲缩醛、蘑菇醛、叶青素、风信子素、苹果酯、吉普缩酮、甲酸香叶酯、甲酸香茅酯、阿弗曼酯、乙酸叶醇酯、乙酸苄酯、乙酸苯乙酯、乙酸肉桂酯、乙酸松油酯、乙酸龙脑酯、乙酸芳樟酯、乙酸香叶酯、乙酸对叔丁基环己酯、乙酸邻叔丁基环己酯、乙酸香根酯、乙酸琥珀酯、乙酸阿弗曼酯、乙酸十氢萘酯、乙酸柏木酯、丙酸香叶酯、乙酸三氯甲基苯甲酯、丁酸苄酯、丁酸叶醇酯、丁酸香叶酯、2-甲基戊酸苯乙酯、异丁酸对甲酚酯、2-壬烯酸甲酯、苯甲酸乙酯、苯甲酸甲酯、苯甲酸叶醇酯、苯甲酸苄酯、苯乙酸乙酯、苯乙酸对甲酚酯、肉桂酸乙酯、水杨酸丁酯、水杨酸异丁酯、水杨酸异戊酯、水杨酸叶醇酯、水杨酸己酯、水杨酸苄酯、水杨酸苯乙酯、水杨酸环己酯、茉莉素、茉莉酯、2-戊基环戊酮醋酸甲酯、橙花素、γ-壬内酯、γ-十一内酯、香豆素、吲哚、3-甲基吲哚、3,7-二甲基-2,6-辛二烯腈、对甲氧基苯甲腈、二甲苯麝香、酮麝香、2,6-二硝基-3-甲氧基-4-叔丁基甲苯、1,1-二甲基-4-乙酰基-6-叔丁基茚满、六甲基三环异色满麝香、1,1,2,3,3,6-六甲基-5-乙酰基茚满、麝香-T、麝香-M、麝香-L、麝香-F、11-氧杂环十六内酯、吐纳麝香;3)香精,玫瑰香精、茉莉香精、檀香香精、白兰香精。
其中,所述色素可以是选自如下组分中的任意一种或几种组合:二氧化锆、醋酸铅、硝酸银、叶绿素、叶绿素铜、亚铁氰化铁、鸟嘌呤、坚牢红、食品红I、还原红I、胭脂红、食用杨梅红、食用樱桃红、食品红17、苋菜红、坚牢绿、食品黄3、食用柠檬黄、食用苏丹黄、食用靛蓝、食品蓝2、荧光桃红、β-胡萝卜素、指甲花、栀子红色素、栀子绿色素、栀子蓝色素、栀子黄色素、钛云母珠光颜料、氧化铁红、氧化铁黄、氧化铁黑、氧化铬绿、氧氯化铋、碱性桃红、银朱R、喹啉黄、紫草宁、紫胶红色素、群青、酸性红87、酸性绿25、酸性荧光黄、酸性橙7、金光红53、立索尔宝红BK、立索尔宝红2R、永固橙。
其中,所述紫外线吸收剂可以是选自如下组分中的任意一种或几种组合:吡哆醇盐酸盐、曲酸及其酯、芦丁、芦荟苷、咖啡氨酸、橙皮素、2-乙基己基水杨酸酯、2-乙基己基对二甲基氨基苯酸酯、2-乙基己基对甲氧基肉桂酸酯、水杨酸苯酯、基邻氨基苯甲酸酯、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸、2-羟基-4-辛氧基二苯甲酮。
其中,所述螯合剂可以是选自如下组分中的任意一种或几种组合:EDTA二钠盐、双吡啶硫酮锌、硫代硫酸钠。
其中,所述收敛剂可以是选自如下组分中的一种或几种:苯酚对磺酸锌、羟基氯化铝、硫酸铝、硫酸铝钾、硫酸锌、氯化铝、氯化锌、卡拉明。
其中,所述助渗剂可以是选自如下组分中的任意一种或几种组合:二甲基亚砜、1-正十二烷基氮杂环庚-2-酮、2-氨基乙醇。
其中,所述pH值调节剂可以是选自如下组分中的任意一种或几种组合:酒石酸、乳酸、硼酸、琥珀酸。
作为本发明的一个优选实施例,所述日化用品、优选为化妆品和/或护肤品中,还可以包括营养性添加剂。
其中,所述营养性添加剂可以是选自如下组分中的任意一种或几种组合:甲壳素、壳聚糖、丝肽、丝素、卵磷脂、表皮细胞生长因子、海藻糖、乳糖、珍珠粉、胶原蛋白、胶原水解物、透明质酸及其盐、蛋膜素、植物甾醇、氯化溶菌酶、硫酸软骨素钠、蜂乳、蜂胶、蜂蜜、甘草酸、甘草次酸、γ-亚麻酸、曲酸及其酯、赤霉酸、甘氨酸、L-天冬氨酸及其盐、L-胱氨酸及其盐、DL-丙氨酸、L-丝氨酸、DL-丝氨酸、L-蛋氨酸、DL-蛋氨酸、L赖氨酸盐酸盐、L苏氨酸、肌醇、麦芽醇、泛酸盐、D-泛醇、视黄醇醋酸酯、尿囊素、吡哆醇盐酸盐、可的松、烟酰胺、维生素、雌激素、苏木素、尿酸、乳清酸、芦荟苷、壬二酸、松香酸、松萝酸、昆布氨酸、胸腺素、茜草素、柠檬烯、黄芩黄素、脱氧胆酸、愈疮木萸、橙皮素、鞣酸、二硫化硒、茶皂苷、柠檬酸三乙酯、丁基羟基甲苯、植酸、聚氯化二甲基二烯丙基铵。
本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体,采用固、液混合脂质代替单一固态脂质,有效解决传统多重乳液热力学不稳定及固体脂质纳米粒难以包埋水溶性成分问题。本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体,具有如下有益效果:
1)提高了活性物的负载量;
2)能够更好的控制药物释放;
3)制备方法简单、重复性好;
4)在水中的分散性好,稳定性高,在热水中分散后呈半透明状,可与其他护肤配方互配。
因此,在药品、化妆品、食品等行业具有良好的应用前景。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚地理解,下面根据具体实施例并结合附图,对本发明作进一步详细的说明,其中
图1为本发明本草组合物以及天门冬提取物、地黄提取物、人参提取物对成纤细胞增殖影响能力对比;
图2为本发明本草组合物以及天门冬提取物、地黄提取物、人参提取物对皮肤细胞中SOD活性影响能力对比;
图3为本发明本草组合物以及天门冬提取物、地黄提取物、人参提取物对皮肤细胞中透明质酸合成酶HAS3活性影响能力对比。
图4为本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体的缓释功效评价图;
图5为本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体的渗透功效评价图;
图6为本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体的保湿功效评价图;
图7为本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体的超氧阴离子清除率实验功效评价图。
具体实施方式
天门冬提取物的制备
天门冬根茎粉碎,用10倍重量的水回流浸提,提取液在负压条件下(0.04至0.08MPa,75±6℃)去除溶剂,萃取得到提取物固体,喷雾干燥后,粉碎、过筛。
天门冬提取物也可以是从市场中购得的,或者按照中国《药典》中的标准、方法制备。
地黄提取物的制备
地黄粉碎,用8倍重量的水提取,提取液在负压条件下(0.04至0.08MPa,75±6℃)浓缩至比重为1.07至1.09g/cm3(75±6℃),喷雾干燥后,粉碎、过筛。地黄多糖重量含量≥50%。
地黄提取物也可以是从市场中购得的,或者按照中国《药典》中的标准、方法制备。
人参提取物的制备
人参根茎粉碎,70%乙醇回流提取,浓缩后干燥,粉碎、过筛。人参皂苷总重量含量≥8%。
人参提取物也可以是从市场中购得的,或者按照中国《药典》中的标准、方法制备。
本草组合物亚微米脂质载体的制备
实施例一
将天门冬、地黄、人参分别除杂、切片,按质量比为3:3:4的比例混合,用乙醇水溶液回馏,过滤,浓缩滤液、纯化、灭菌、干燥,得到提取物,包装备用。使用时,按照提取物:水/多元醇=1:70-90(质量比),使用纯水或多元醇进行溶解、过滤,得到本草组合物。也可以不经过浓缩、干燥,而根据比例加入水溶解,直接得到本草组合物。
称取5g辛酸/癸酸甘油三酯,2g丁基辛醇水杨酸酯,2g甘油硬脂酸酯,3g硬脂醇聚醚-21,3g月桂醇聚醚-23,6gPEG-30二聚羟基硬脂酸酯,6g乙氧基二甘醇,3g橄榄油PEG-7酯类,3g1,3-丁二醇,在60℃条件下搅拌混合,形成透明溶液,向溶液中加入5g制备的本草组合物,以400rpm的搅拌速度,搅拌15min,之后向其中加入61.25g水,以600rpm的搅拌速度,搅拌5min,冷却至50℃,之后向其中加入0.75%的苯氧乙醇、乙基己基甘油,搅拌均匀后冷却,得到淡黄色的本草组合物亚微米脂质载体。采用激光粒度仪测定该本草组合物亚微米脂质载体的粒径约为130nm。
实施例二
将天门冬、地黄、人参分别除杂、切片,按质量比为2:3:5的比例混合,用乙醇水溶液回馏,过滤,滤液浓缩、纯化、灭菌、干燥,得到提取物,包装备用。使用时,按照提取物:水/多元醇=1:70-90(质量比),使用纯水或多元醇进行溶解、过滤,得到本草组合物。也可以不经过浓缩、干燥,而根据比例加入水溶解,直接得到本草组合物。
称取7g辛酸/癸酸甘油三酯,2g甘油硬脂酸酯,2g甘油乙酸酯,2.5g鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、山梨坦橄榄油酸酯,2.5g月桂醇聚醚-23,5gPEG-30二聚羟基硬脂酸酯,5g乙氧基二甘醇,3g聚甘油-3二异硬脂酸酯,3g1,3-丁二醇,2g鲸蜡醇棕榈酸酯、山梨坦棕榈酸酯、山梨坦橄榄油酸酯,在70℃条件下搅拌混合,形成透明溶液,向溶液中加入3g制备的本草组合物,以500rpm的搅拌速度,搅拌20min,之后向其中加入62.25g水,以800rpm的搅拌速度,搅拌10min,冷却至45℃,之后向其中加入0.75%的苯氧乙醇、乙基己基甘油,搅拌均匀后冷却,得到淡黄色的本草组合物亚微米脂质载体。采用激光粒度仪测定该本草组合物亚微米脂质载体的粒径约为135nm。
实施例三
将天门冬、地黄、人参分别除杂、切片,按质量比为1:4:5的比例混合,用乙醇水溶液回馏,过滤,滤液浓缩、纯化、灭菌、干燥,得到提取物,包装备用。使用时,按照提取物:水/多元醇=1:70-90(质量比),使用纯水或多元醇进行溶解、过滤,得到本草组合物。也可以不经过浓缩、干燥,而根据比例加入水溶解,直接得到本草组合物。
称取2g辛酸/癸酸甘油三酯,5g丁基辛醇水杨酸酯,2g甘油乙酸酯,3g硬脂醇聚醚-21,2g月桂醇聚醚-23,8gPEG-30二聚羟基硬脂酸酯,3g乙氧基二甘醇,3g橄榄油PEG-7酯类,3g聚甘油-3二异硬脂酸酯,2g1,3-丁二醇,2g氢化橄榄油、油橄榄果油、油橄榄油不可皂化物,在80℃条件下搅拌混合,形成透明溶液,向溶液中加入5g本草组合物,以600rpm的搅拌速度,搅拌25min,之后向其中加入59.25g水,以800rpm的搅拌速度,搅拌10min,冷却至50℃,之后向其中加入0.75%的苯氧乙醇、乙基己基甘油,搅拌均匀后冷却,得到淡黄色的本草组合物亚微米脂质载体。采用激光粒度仪测定该本草组合物亚微米脂质载体的粒径约为150nm。
本草组合物脂质体的制备方法
准确称取一定量的大豆卵磷脂、Tween80、乙醇、1,2-丙二醇作为油相,将其置于45℃的磁力搅拌水浴锅中搅拌至完全熔融。同时根据成分的比例精确称取一定量的超纯水和草本组合物放置于相同温度的恒温水槽中作为水相。在使用IKARW20digital机械搅拌器进行高速搅拌状态下,向油相中缓慢加入同温水相,继续搅拌并冷却至室温即得草本组合物脂质体。
本草组合物水溶液的制备方法
将本草组合物和水按质量比为1:70-90混合,搅拌均匀,即得到本草组合物水溶液。
精华液配方及其制备方法
本草组合物亚微米脂质载体精华液配方:
方法与步骤
分别称取30g超纯水、0.1g汉生胶和3g1,3-丁二醇,混合均匀,以10000rpm高剪切1min,同时将60g本草组合物亚微米脂质载体与6.4g超纯水混合均匀。然后将两者搅拌,混合均匀,再向混合物中加入防腐剂。
本草组合物脂质体精华液、本草组合物水溶液精华液的配方与制备方法和本草组合物亚微米脂质载体精华液的相同,且得到的精华液中本草组合物的成分相同,含量相等。
本草组合物对成纤维细胞增殖活性的作用测试
材料与试剂
方法与步骤
用胰蛋白酶消化对数期的单层细胞,将细胞收集至细胞培养液中。
1000rpm,离心2min,弃上清。用培养液重新悬浮细胞,计数。调整细胞悬液的浓度至2.5×103至50×103个/mL,具体以细胞系的生长速度而定。
铺96孔板,每孔细胞悬液135μL。最终所铺的细胞孔数取决于样品数,每个样品3个复孔。最后留下3个孔不铺细胞,作为空白对照。
将96孔板置于37℃含有5%CO2的细胞培养箱中孵育24h。
用培养基将待测样品稀释加入后,继续培养48h。
每孔加入20μL的CCK8,继续培养0.5至4h。
轻轻摇晃96孔板,用酶标仪于450nm下测定吸光度。
测试结果
表1,天门冬、地黄、人参提取物及其组合物对成纤细胞增殖效果
参照图1和表1可以看出,0.1mg/ml的天门冬提取物和地黄提取物都能够促进成纤维细胞的增殖,人参提取物成纤维细胞增殖几乎没有作用。同时,天门冬、地黄、人参提取物的组合物能够促进成纤维细胞的增殖。
本草组合物对皮肤成纤维细胞中SOD水平的影响
材料与试剂
qPCR测定试剂盒
方法与步骤
铺板种细胞:用胰蛋白酶消化对数期的单层细胞,将细胞收集至细胞培养液中。用培养液重新悬浮细胞,计数。调整细胞悬液的浓度至5×104个/mL,具体以细胞系的生长速度而定。铺24孔板,每孔细胞悬液0.9mL。最终所铺的细胞孔数取决于样品数,每个样品4个复孔。
加待测物:加入待测物后继续培养12h。
提取细胞RNA,提取样本总RNA用超纯RNA提取试剂盒,每孔加150微升裂解液裂解细胞2分钟,结合RNA5分钟,用Washbuffer1洗涤一次,WashBuffer2洗涤2次,最后用30微升无RNA酶水洗脱。
CDNA反转录,取400ngRNA,3.5微升缓冲液,10微升体系反转录。
ABI7500检测实时荧光定量。
以GAPDH为内参计算调节倍数,采用2-△△CT法进行数据的相对定量分析。SOD水平F计算公式为:
F=2×待测组目的靶标平均Ct值-待测组管家内参[平均Ct值]-对照组目的靶标平均Ct值-对照组管家内参{[平均Ct值]}
测试结果
表2,天门冬、地黄、人参提取物及其组合物对皮肤成纤细胞内SOD水平影响
通过图2和表2可以看出,0.1mg/ml的天门冬提取物、地黄提取物、人参提取物以及本发明中草药组合物都能显著提高皮肤成纤维细胞中SOD水平,其中本发明中草药提取物组合活性最高,显示了较强的配伍协同作用。
综合以上测试结果可得出,本发明中草药组合物在促进皮肤成纤维细胞增殖和提高SOD水平方面有显著效果,因此,将本发明中草药组合物添加到护肤品中可发挥抗衰老的效果。
本草组合物保湿效果测试(皮肤透明质酸合成酶HAS3水平测试)
材料与试剂
qPCR测定试剂盒
方法与步骤
铺板种细胞:用胰蛋白酶消化对数期的单层细胞,将细胞收集至细胞培养液中。用培养液重新悬浮细胞,计数。调整细胞悬液的浓度至5×104个/mL,具体以细胞系的生长速度而定。铺24孔板,每孔细胞悬液0.9mL。最终所铺的细胞孔数取决于样品数,每个样品4个复孔。
加待测物:加入待测物后继续培养12h。
提取细胞RNA,提取样本总RNA用超纯RNA提取试剂盒,每孔加150微升裂解液裂解细胞2分钟,结合RNA5分钟,用Washbuffer1洗涤一次,WashBuffer2洗涤2次,最后用30微升无RNA酶水洗脱。
CDNA反转录,取400ngRNA,3.5微升缓冲液,10微升体系反转录。
ABI7500检测实时荧光定量。
以GAPDH为内参计算调节倍数,采用2-△△CT法进行数据的相对定量分析。HAS3水平(F)计算公式为:
F=2×待测组目的靶标平均Ct值-待测组管家内参[平均Ct值]-对照组目的靶标平均Ct值-对照组管家内参{[平均Ct值]}
结果
表3,天门冬、地黄、人参提取物及其组合物对皮肤成纤细胞内HAS3水平影响
通过图3和表3可以看出,0.1mg/ml的天门冬提取物以及本发明组合物都能显著提高皮肤成纤维细胞中透明质酸合成酶的水平,保水作用是透明质酸在人体内最重要的功能之一,因此,本发明组合物能够实现良好的皮肤保湿效果。而且,相比于单独三种组分,本发明组合物在提高皮肤成纤细胞HSA3水平能力方面,大于三种组分单独使用时效果的简单叠加,即获得了协同效果。
综上所述,本发明提供的本草组合物可以通过提高皮肤成纤细胞中SOD活性来达到良好的抗氧化和抗衰老效果,同时提升皮肤细胞本身透明质酸酶水平,具有良好的生物活性保湿效果,添加到化妆品/护肤品中可以达到抗氧化抗衰老和保湿的双重效果。
脂质载体稳定性试验
为了考察本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体的稳定性,取本发明提供的亚微米脂质载体,分别在-20℃、4℃、25℃、40℃、50℃、光照和高低温循环等条件下放置90天,分别在第3天、第7天、第15天、第30天、第60天和第90天考察样品的性状,结果如表1所示。
由表4结果可知,只有在较苛刻条件下,本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体的性状才会发生轻微变化,而在常温或较低温度下,放置90天,产品的性状无明显变化,因此,本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体总体上稳定性较好。
表4,本草组合物亚微米脂质载体的稳定性试验
其中“√”表示性状无明显变化。
脂质载体缓释功效评价
为了考察本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体的缓释功效,本实施例采取实验组和对照组,实验组一为本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体精华液,实验组二为本草组合物脂质体精华液,对照组为本草组合物水溶液精华液,各精华液的制备方法如前所述。
采用透析袋法评价各本草组合物的缓释功效,模拟释放环境,以生理盐水为释放介质,保持37℃水浴环境,定时检测透析袋外面的溶液。向三个透析袋中分别加入8mL待测液,作为实验组一、实验组二和对照组,透析1h、3h、5h、7h、9h、11h、23h、25h时取样进行紫外检测,并绘制体外释放曲线,结果如图4所示。
由图4可知,本草组合物水溶液精华液释放起始值较高,释放较快,而本草组合物亚微米脂质载体的精华液释放从起始值较低,之后逐步释放,整体较为平稳,呈现出缓释的特点。本草组合物脂质体精华液整体比较平缓,与本草组合物亚微米脂质载体的释放行为相似,释放总值更小,这说明本草组合物脂质体也起到了一定的缓释效果。
脂质载体渗透功效评价
为了考察本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体的渗透功效,本实施例采取实验组和对照组,实验组一为本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体精华液,实验组二为本草组合物脂质体精华液,对照组为本草组合物水溶液精华液,各精华液的制备方法如前所述。
采用透析池法评价各本草组合物的渗透功效。模拟释放环境,以生理盐水为释放介质,保持37℃水浴环境,在供应池内分别加入1mL待测液,作为实验组一、实验组二和对照组。经过24h的透析实验处理,剪碎兔皮定容至10mL并测定各接收池内的本草组合物含量,测定本草组合物含量时,取1mL定容后的待测液于10mL容量瓶内,并定容、超声破碎,测试结果如图5所示。
由图5可知,三个样品均有一定量透过皮肤,而本草组合物经脂质体或亚微米脂质载体包裹后制备的精华液,其皮肤滞留量相对较高。具体而言,本草组合物亚微米脂质载体滞留在皮肤里的含量为58.3%,经皮的含量为32.4%;本草组合物脂质体滞留在皮肤里的含量为46.8%,经皮的含量为47.5%;本草组合物水溶液滞留在皮肤里的含量为31.5%,经皮的含量为61.3%。因此,采用亚微米脂质载体对本草组合物包裹处理后,在一定程度上减少了透过皮肤的量,同时在一定程度上增加了滞留在皮肤里面的含量,起到更好的护肤作用。
脂质载体保湿功效评价
为了考察本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体的保湿功效,本实施例采取实验组和对照组,实验组一为本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体精华液,实验组二为本草组合物脂质体精华液,对照组为本草组合物水溶液精华液,各精华液的制备方法如前所述。
采用水分测试仪(数字皮肤水分油分检测仪,JY-204)测定。待测样品处理皮肤前,先测定皮肤含水量,作为皮肤含水量基值。涂抹上待测样品后定时测定皮肤含水量,计算出相对于基值的含水量随时间的变化情况。结果如图6所示。
图6表明,经过待测样品处理后,三组的皮肤水分含量均快速提升;但本草组合物水溶液组在0.5h后,皮肤内的水分含量开始迅速下降,由最大值46下降至28左右。而本草化合物亚微米脂质载体组与本草化合物脂质体组,在涂抹后的3h内,皮肤内的水分含量以及走势均较接近,但涂抹3h后,本草化合物脂质体组的皮肤内水分含量开始快速下降,下降趋势比本草化合物亚微米脂质载体组更明显。说明本草化合物亚微米脂质载体与本草化合物脂质体在皮肤保湿方面效果均较好,能够很好的防止皮肤水分流失,且本草化合物亚微米脂质载体比本草化合物脂质体有更好的保湿效果。
脂质载体超氧阴离子清除率功效评价
为了考察本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体的超氧阴离子清除率的功效,本实施例采取实验组、对照组和空白组,实验组一为本发明提供的本草组合物亚微米脂质载体精华液,实验组二为本草组合物脂质体精华液,对照组为本草组合物水溶液精华液,空白组为不加入本草组合物,其他条件相同,各精华液的制备方法如前所述。
采用邻苯三酚自氧化法测定待测样品的超氧阴离子清除功效。邻苯三酚在碱性条件下迅速自氧化,自氧化过程中产生O-2(超氧阴离子),O-2又加速邻苯三酚自氧化速率,同时产生有色中间产物,中间产物的积累滞后30-45s,且其含量与反应时间具有良好的线性关系,一般持续6min,随后减慢。当不存在O-2抑制剂时,邻苯三酚的自氧化会非常迅速,氧化速率时间曲线的斜率较大;但当系统中存在O-2清除物质时,O-2被部分清除从而减缓了邻苯三酚的自氧化,氧化速率曲线的斜率变小,斜率越小说明O-2被清除的越多。该有色产物在322nm处有强烈的紫外光吸收,因此可以在该波长下,测定待测样品的吸光度。利用该方法检测不同状态下本草组合物对超氧阴离子的清除能力,结果如图7所示。
由图7可知,加入待测样品后,邻苯三酚的自氧化速率大大降低,氧化曲线斜率由不加入待测样品的0.01792分别降低为0.01717、0.01755和0.01256,说明三个样品均具有超氧阴离子自由基清除作用。与本草组合物水溶液相比,本草化合物亚微米脂质载体和本草组合物脂质体对O-2的抑制率稍微偏低,将本草组合物包裹,会使本草组合物的自由基清除能力稍微降低,但并不会大幅度影响其自由基清除能力。而与脂质体包裹相比,亚微米脂质载体包裹可以更好的保护本草化合物,从而具有更强的自由基清除能力。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述,但其只是作为范例,本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言,任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此,在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改,都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (10)
1.一种本草组合物亚微米脂质载体,其特征在于,所述亚微米脂质载体包括本草组合物和脂质,所述本草组合物包括天门冬提取物、地黄提取物和人参提取物的任意一种或几种组合。
2.根据权利要求1所述的亚微米脂质载体,其特征在于,所述本草组合物的质量含量为0.1-10%;
其中,所述本草组合物中各物质的质量含量为:
天门冬提取物为0-10%,
地黄提取物为0-10%,
人参提取物为0-10%,
余量为水。
3.根据权利要求1或2所述的亚微米脂质载体,其特征在于,所述亚微米脂质载体的平均粒径为100-500nm。
4.根据权利要求1所述的亚微米脂质载体,其特征在于,所述亚微米脂质载体还包括乳化剂、助乳化剂、稳定剂、防腐剂中的任意一种或几种组合。
5.根据权利要求4所述的亚微米脂质载体,其特征在于,所述亚微米脂质载体各组分的质量百分比为:
6.一种如权利要求5所述的亚微米脂质载体的制备方法,所述制备方法包括如下步骤:
步骤1、将天门冬、地黄、人参中的一种或几种混合,制备提取物得到本草组合物;
其中,制备提取物的方法为水提取、油提取、醇提取、超临界二氧化碳提取中的任意一种或几种组合;
将脂质、乳化剂、助乳化剂、稳定剂中的一种或几种组合加热、搅拌、混合,得到混合液1;
步骤2、向步骤1得到的混合液1中加入步骤1得到的本草组合物,搅拌,得到混合液2;
步骤3、向步骤2获得的混合液2中加入水,搅拌,得到混合液3,冷却混合液3,得到本草组合物亚微米脂质载体。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,步骤3中还包括向冷却后的混合液3中加入防腐剂。
8.一种如权利要求1所述的亚微米脂质载体的应用,其特征在于,所述亚微米脂质载体应用于制备涂覆于皮肤外表面的制品。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述制品为化妆品和/或护肤品。
10.一种涂覆于皮肤外表面的制品,其特征在于,所述制品包括权利要求1-5所述任意一种本草组合物亚微米脂质载体。
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