CN110095463A - 一种乳糜定性检测的试剂盒 - Google Patents

Abstract

发明涉及一种乳糜定性检测的试剂盒，所述试剂盒包括检验耗材和检验试剂，所述检验耗材包括离心管和玻片；所述检验试剂包括乙醚和苏丹Ⅲ染液。使用本发明的乳糜定性检测试剂盒所用检测标本量大大减少，而且检测结果不受标本量多少的影响。乙醚和苏丹Ⅲ染液的检测用量少，不仅节约检验试剂，更重要的是挥发出来的乙醚量也大大减少，保障使用者的身体健康。缩短了检验时间，操作简单无人为误差。通过数百次实验反复证明，改进后的乳糜定性检测的试剂盒极大的提升了检验结果的时效性和准确性。

Description

一种乳糜定性检测的试剂盒

技术领域

本发明属于生物检验技术领域，涉及一种乳糜定性检测的试剂盒。

背景技术

乳糜液是经肠道吸收的脂肪皂化后形成，是乳糜微粒与蛋白质混合而成的乳化状态的浑浊液体，临床上由于各种原因致淋巴引流不畅而未能进入血液循环，以至逆流至泌尿系淋巴管中时，可致淋巴管内压力升高，曲张破裂，乳糜液流入尿中使尿液形成不同程度的乳白色。另外我国的肝硬化发病率较高，临床上由于肝硬化合并的腹水多为单纯漏出液，乳糜腹水仅占0.5％～1.3％，如何快速准确地从大量的样本中检测出乳糜阳性的样本，这就成为一个很现实的问题。脂类包括脂肪和类脂两大类，脂肪是由各种不同的脂肪酸组成的三酰甘油的混合物；类脂是一类理化性质上与脂肪颇为相似的物质,包括磷脂、固醇、糖脂等,它们的共同物理特性是溶于乙醚等脂溶剂。

现有技术中淋巴管核素显像用于乳糜性胸腹水、乳糜性尿液定性诊断的价值虽然很大，但成本高，副作用大是其弊端。传统的乳糜定性检测实验是用乙醚抽提乳糜性标本中的脂类，再用苏丹Ⅲ溶液染色后在显微镜下观察是否有红色均匀脂肪小球。整个试验操作繁琐，需要的样本液量多，且使用的乙醚量也较多，单个样本检测的量一般为2-5ml，其挥发的量也越多，产生乙醚的不良反应也较多，长期低浓度吸入，有头痛、头晕、疲倦、嗜睡、蛋白尿、红细胞增多症；长期皮肤接触，可发生皮肤干燥、皲裂。真正临床检验的人员一天至少检测几十份样本，这对于天天需要实验检验人员来说不易接受。传统的乙醚抽提乳糜定性试验方法中需要检验人员取乙醚和标本交界层，这对人工操作来说有吸取时不准确或标本标本量不足等人为因素的影响降低了检验结果的准确性，很大的可能吸取了部分乙醚或标本。整个试验操作繁琐，样本从送检到回报结果往往需要较长时间。为了使操作简便易行,结果准确,不良反应少,更好地服务于临床，我们建立了一种新的乳糜定性试验试剂盒。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种简洁方便的乳糜定性检测的试剂盒，可以较快速且准确的检测出标本标本是否乳糜阳性。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1.一种乳糜定性检测的试剂盒，所述试剂盒包括检验耗材和检验试剂，所述检验耗材包括离心管和玻片；所述检验试剂包括乙醚和苏丹Ⅲ染液；按检测次数计，所述试剂盒内乙醚的体积为检测次数×30～检测次数×60ul，苏丹Ⅲ染液的体积为检测次数×30～检测次数×

60ul。

进一步，按检测次数计，所述试剂盒内乙醚的体积为检测次数×50ul，苏丹Ⅲ染液的体积为检测次数×50ul。

进一步，所述离心管和玻片的数量按检测次数配备。

进一步，所述试剂盒使用步骤为：取1-3ml标本于洁净离心管中，2000r/min-4000r/min离心5-10分钟，倒掉上清液，留取残渣，加入乙醚和苏丹Ⅲ染液各30-60ul，振摇混匀，1-3分钟后涂片，显微镜下观察即可。

进一步，所述苏丹Ⅲ染液为0.3-1％wt苏丹Ⅲ溶液。

进一步，所述苏丹Ⅲ染液为0.5％wt苏丹Ⅲ溶液。

进一步，所述0.3-1％wt苏丹Ⅲ溶液配置方法为：95％乙醇10ml,冰醋酸90ml,苏丹Ⅲ粉末0.3-1g，先将乙醇与冰醋酸混合,再加入苏丹Ⅲ粉未,充分溶解。

本发明的有益效果在于：提供一种简洁方便的乳糜定性检测的试剂盒，可以较快速且准确的检测出标本是否乳糜阳性。1、传统的乙醚抽提乳糜定性试验方法，首先需要至少5ml以上的标本，才能进行反应，有时候会因标本量不足而导致假阴性；而本发明改进后的乳糜定性检测试剂盒所用检测标本量大大减少，而且检测结果不受标本量多少的影响。2、减少乙醚的使用量，传统的乙醚抽提乳糜定性试验方法需要至少2ml的乙醚和标本进行反应，乙醚为无色透明液体，有特殊刺激气味、带甜味；更重要的是极易挥发，使用量大，其挥发的量也越多，产生乙醚的不良反应也较多，长期低浓度吸入，有头痛、头晕、疲倦、嗜睡、蛋白尿、红细胞增多症；长期皮肤接触，可发生皮肤干燥、皲裂。这对于天天需要实验检验人员来说不易接受。而本发明改进后的乳糜定性检测试剂盒检测标本时所用乙醚和苏丹Ⅲ染液的检测用量少，不仅节约检验试剂，更重要的是挥发出来的量也大大减少，几乎可以忽略不计。3、传统的乙醚抽提乳糜定性试验方法中需要检验人员取乙醚和标本交界层，这对人工操作来说有吸取时不准确或标本量不足等人为因素的影响降低了检验结果的准确性，很大的可能吸取了部分乙醚或标本；而本发明改进后的乳糜定性检测试剂盒直接将标本残渣加入乙醚和苏丹Ⅲ染液，缩短了检验时间，操作简单无人为误差。通过数百次实验和实际应用反复证明，改进后的乳糜定性检测试剂盒极大的提升了检验结果的时效性和准确性。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：

图1为实施例1样品检测阳性标本图；

图2为实施例2样品检测阳性标本图；

图3为实施例3样品检测阳性标本图；

图4为对照检测阳性标本图；

图5为原始标本样；

图6为采用传统的乳糜定性检测试剂盒及方法做的标本；

图7为取图6所示标本的交界层加苏丹III染色后于玻片上镜检；

图8为采用本发明试剂盒标本离心后的沉渣；

图9为取图8所示的标本沉渣加入乙醚再加苏丹III染色后的染色沉渣标本；

图10为直接取图9所示染色沉渣标本镜检。

具体实施方式

下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。

10T和50T代表试剂盒的规格；T全称TEST，这里指检测次数。

实施例1

一种乳糜定性检测试剂盒：20T

检验耗材：20个5ml离心管，20块玻片；

检验试剂：乙醚1000ul，苏丹Ⅲ染液1000ul；

苏丹Ⅲ染液的配制:95％乙醇10ml,冰醋酸90ml,苏丹Ⅲ粉末0.3-1g,先将乙醇与冰醋酸混合,再倾入苏丹Ⅲ粉未,使之充分溶解。

试剂盒还可以包括使用说明书。

本试剂盒使用方法：

取3ml标本于洁净离心管中，2000r/min离心五分钟，倒掉上清液，留取残渣，加入乙醚和苏丹Ⅲ染液各40ul，振摇混匀，1-3分钟后涂片，显微镜下观察结果。镜检观察是否有红色均匀脂肪球，阳性：镜下观察到红色脂肪小滴；阴性：镜下观察无红色脂肪小滴。

严格来讲有阳性和弱阳性之分，对应定量实验的低值和高值，红色脂肪小滴的数量与乳糜严重程度有关。从图1-图3也可以看出各标本红色脂肪小滴的数量各有不同，但本明只讨论定性检测的试剂盒。

传统的乙醚抽提乳糜定性试验方法：取5～10ml标本于洁净试管中，加2～3ml乙醚充分振摇混匀，使脂肪融于乙醚，静置数分钟后(一般是10-15分钟，时间短了脂肪未被抽提出，容易出现假阴性)，2000r/min离心五分钟，取乙醚和标本交界层涂片，滴加苏丹Ⅲ染液60-80ul，显微镜下观察结果。阳性：镜下观察到红色脂肪小滴。但由于在操作过程中使用乙醚的量较多，产生乙醚的不良反应也较多，实验检验人员不易接受。

实施例2

一种乳糜定性检测试剂盒：50T

试剂耗材：50个5ml离心管，50块玻片；

试剂：乙醚2500ul，苏丹Ⅲ染液2500ul；

试剂盒还可以包括使用说明书。

本试剂盒使用方法：

取3ml标本于洁净离心管中，2000r/min离心五分钟，倒掉上清液，留取残渣，加入乙醚和苏丹Ⅲ染液各50ul，振摇混匀，1-3分钟后涂片，显微镜下观察结果。镜检观察是否有红色均匀脂肪球，阳性：镜下观察到红色脂肪小滴；阴性：镜下观察无红色脂肪小滴。

实施例3

试剂耗材：20个5ml离心管，20块玻片；

试剂：乙醚800ul，苏丹Ⅲ染液800ul；

试剂盒还可以包括使用说明书。

本试剂盒使用方法：

取1ml标本于洁净离心管中，2000r/min离心五分钟，倒掉上清液，留取残渣，加入乙醚和苏丹Ⅲ染液各30ul，振摇混匀，1-3分钟后涂片，显微镜下观察结果。镜检观察是否有红色均匀脂肪球，阳性：镜下观察到红色脂肪小滴；阴性：镜下观察无红色脂肪小滴。

实施例4

取本院2018.10-2019.3这时间段的门诊及住院患者的标本140例标本，标本信息如表1所示，为了病人隐私，现将其ID号前4位以*表示。

使用实施例1-3的乳糜定性检测试剂盒及其方法分别对上述140例同样的标本进行检测，同时用传统乳糜定性试验方法进行检测做对照，分为实施例组和对照组，结果见表2：

表1标本信息

表2实验各组检测结果

标本	例数	实施例组1	实施例组2	实施例组3	对照组
						弱阳	7	7	7	7	6
阳性	78	78	78	78	77
						阴性	55	55	55	55	57

经过比对，使用传统的乳糜定性检测试剂盒及检测方法检测，将2例弱阳性判断为阴性，将1例阳性判断为弱阳性。而使用本发明的乳糜定性检测试剂盒及检测方法检测，结果完全一致，且正确率100％。图1-图3分别为使用实施例1、2、3试剂盒检测的各一例阳性结果图，都可清晰可见的红色(橘红色)脂肪小滴。图4为采用传统的乳糜定性检测试剂盒检测的一例阳性结果图。图5为原始标本样；图6为采用传统的乳糜定性检测试剂盒及方法做的标本；如图7所示，需要取乙醚和标本交界层加苏丹III染色后于玻片上镜检；图8为采用本发明的乳糜定性检测试剂盒，将标本离心后的沉渣标本；图9为取图8所示的标本沉渣加入乙醚再加苏丹III染色后的染色沉渣标本，直接吸取后涂片观察即可，方便简单，图10为直接取图9所示染色沉渣标本镜检。而且本发明的试剂盒中所需反应体系体积大幅度缩小，在1.5ml离心管中就可以进行检测实验。而传统的因体积较大，在试管中因取样也极其不方便。经过试验采用改进后的的乳糜定性检测试剂盒及检测方法，大幅度减少乙醚用量，减少医务工作人员吸入乙醚的伤害；节约检测时间，提高工作效率，并增加检测结果的可靠性和准确率。

最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (7)

1.一种乳糜定性检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检验耗材和检验试剂，所述检验耗材包括离心管和玻片；所述检验试剂包括乙醚和苏丹Ⅲ染液；按检测次数计，所述试剂盒内乙醚的体积为检测次数×30ul～检测次数×60ul，苏丹Ⅲ染液的体积为检测次数×30ul～检测次数×60ul。

2.根据权利要求1所述的一种乳糜定性检测的试剂盒，其特征在于，按检测次数计，所述试剂盒内乙醚的体积为检测次数×50ul，苏丹Ⅲ染液的体积为检测次数×50ul。

3.根据权利要求1所述的一种乳糜定性检测的试剂盒，其特征在于，所述离心管和玻片的数量按检测次数配备。

4.根据权利要求1所述的一种乳糜定性检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒使用步骤为：取1-3ml标本于洁净离心管中，2000r/min-4000r/min离心5-10分钟，倒掉上清液，留取残渣，加入乙醚和苏丹Ⅲ染液各30-60ul，振摇混匀，1-3分钟后涂片，显微镜下观察即可。

5.根据权利要求1-4任一项所述的一种乳糜定性检测的试剂盒，其特征在于，所述苏丹Ⅲ染液为0.3-1％wt苏丹Ⅲ溶液。

6.根据权利要求5所述的一种乳糜定性检测的试剂盒，其特征在于，所述苏丹Ⅲ染液为0.5％wt苏丹Ⅲ溶液。

7.根据权利要求5所述的一种乳糜定性检测的试剂盒，其特征在于，所述0.3-1％wt苏丹Ⅲ溶液配置方法为：95％乙醇10ml,冰醋酸90ml,苏丹Ⅲ粉末0.3-1g，先将乙醇与冰醋酸混合,再加入苏丹Ⅲ粉未,充分溶解。