CN116725179A - 一种助眠安神的本草酵素及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于功能酵素技术领域，提供了一种助眠安神的本草酵素及其制备方法。所述的助眠安神的本草酵素，包括以下重量计的原料组成：酸枣仁30‑50份，桑椹20‑40份，百合20‑40份，黑枣10‑30份，低聚异麦芽糖30‑50份。其制备方法包括：(1)通过蒸煮对原料组分进行预处理，得到原料液；(2)将菌种活化，接种于步骤(1)的原料液进行发酵；(3)过滤后进行离心得到本草酵素原液。本发明酵素采用药食同源原料，使用安全性高，所制酵素产品功效更强，可明显缩短入睡时间、延长睡眠时长，改善睡眠问题。

Description

一种助眠安神的本草酵素及其制备方法
技术领域
本发明属于功能酵素技术领域，具体涉及一种助眠安神的本草酵素及其制备方法。
背景技术
由于当前普遍生活节奏快，工作压力大等导致人们出现睡眠质量差、失眠等症状越来越多，而长期失眠会引发心率过高等诸多疾病，目前市场现有治疗失眠产品多为西药，极易造成依赖及停药反复现象，而传统的中药或保健品如酸枣仁膏、褪黑素等，由于配比或量的限制，对于改善失眠的效果却较为缓慢；而且长期服用安眠西药或中药都会导致一定程度的肝肾损伤、依赖性和耐药性，故需要研究具有助眠效果、增强免疫力，无副作用的产品，同时可长期服用，无需担心产生依赖性。
依据中药学和药食同源理论，可以选择有助眠效果的食材作为原料，帮助入睡，舒解紧张、焦虑、抑郁的心情，缓解记忆力减退、神经衰弱等症状。如酸枣仁的总皂苷可对各种病因引起的失眠症和神经衰弱症均有良好的效果，并且酸枣仁含有丰富维生素C，可以提高机体抗氧化作用，同时可增强巨噬细胞吞噬功能，进而增强机体免疫力；桑椹具有改善由于肝肾絮引起的失眠，桑椹中的氨基酸、维生素、膳食纤维等营养成分含量较高，具有补充营养的作用；百合性寒，味甘，入心经和肺经，既能养心肺之阴，又能清心肺之热，还有一定的安神作用，可以治疗虚热上扰引起的失眠、心悸、多梦、神志恍惚、口苦等症状；黑枣具有补中益气、养血安神的功效。将酸枣仁与桑椹、黑枣相结合能够达到滋补肝肾，养血安神的功效，从而改善睡眠。
目前对其应用大多采用直接发酵或酶解法处理，其中直接发酵法药物的有效成分利用率低，而酶解技术能够使药物当中的一些成分发生化学变化，使得药物成分原有的结构遭到破坏，有效成分结构的破坏大大降低了药物有效成分的纯度，最终导致产品的助眠效果不尽人意。
中国专利申请CN115444087A公开了一种具有助眠安神功效的酵素饮品及生产工艺，选择桑椹汁、酸枣仁、茯苓、百合、大枣等材料，使用酵母菌、植物乳杆菌和双歧杆菌进行直接发酵，其过程为厌氧发酵22-28天，后贮存2年以上时间得到酵素原液，其生产周期长；中国专利申请CN110507754A公开了一种酸枣仁助眠茶及其制备方法，采用酸枣仁、枸杞、龙眼玫瑰花冠等为原材料，不同原材料分别采用粉碎打浆、酶解、煎煮、压榨浓缩等步骤处理后混合，其操作步骤较为复杂。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种酸枣仁、百合、黑枣等为药食同源的材料，通过特殊二次蒸煮浸提方法处理原料，采用特定菌株及特定比例进行发酵得到的本草酵素产品，其工艺简单，发酵彻底、发酵时间短，可明显缩短低剂量组受试者的入睡时间、延长睡眠时长，改善受试者的睡眠问题，酸枣仁与桑椹、百合、酸枣仁等物质相结合，使有效成分更容易被人体吸收，实现预期效果。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明涉及一种助眠安神的本草酵素，按照1000份总重量计，包括如下重量份数的组分：酸枣仁30-50份，桑椹20-40份，百合20-40份，黑枣10-30份，低聚异麦芽糖30-50份和余量的水。
优选地，所述一种助眠安神的本草酵素，按照1000份总重量计，包括如下重量份数的组分：酸枣仁40-50份，桑椹30-40份，百合30-40份，黑枣25-30份，低聚异麦芽糖42-50份和余量的水。
本发明还涉及一种助眠安神的本草酵素的制备工艺，包括如下步骤：
(1)通过蒸煮对原料组分进行预处理，得到原料液；
(2)将菌种活化，接种于步骤(1)的原料液进行发酵；
(3)过滤后进行离心得到草本酵素原液；
(4)对酵素原液进行灭菌，装罐。
进一步，步骤(1)所述的蒸煮是将所有原料加入水中，煮沸进行水提；
优选地，所述制备工艺步骤(1)蒸煮工艺为：先将桑椹、百合、黑枣混合进行一次蒸煮，蒸煮50-80min，二次蒸煮加入酸枣仁，蒸煮10-30min；过滤并向滤液中加入低聚异麦芽糖混合均匀。
更优选地，步骤(1)所述的二次蒸煮工艺第一次蒸煮时间为60min，第二次蒸煮时间为20min。
更优选地，步骤(1)所述的二次蒸煮工艺，所用原料酸枣仁、桑椹、百合、黑枣蒸煮前在水中浸泡过夜。
更优选地，步骤(1)所述的二次蒸煮工艺，蒸煮后的原料液，经过115℃灭菌30min，灭菌后冷却至37℃。
优选地，步骤(2)中菌种活化培养基的配方为无水葡萄糖30-50g/L、酵母浸出物10-20g/L、酵母蛋白胨8-12g/L、L-苹果酸2-4g/L、一水柠檬酸1-3g/L、磷酸二氢钾1-3g/L、氯化钙0.3-0.7g/L、硫酸镁0.04-0.08g/L、硫酸锰0.005-0.015g/L的无菌水溶液。
更优选地，所述制备工艺步骤(2)菌种活化培养基的配方为无水葡萄糖35g/L、酵母浸出物15g/L、酵母蛋白胨10g/L、L-苹果酸3.2g/L、一水柠檬酸1.5g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、氯化钙0.5g/L、硫酸镁0.06g/L、硫酸锰0.01g/L的无菌水溶液。
优选地，所述制备工艺步骤(2)菌种活化采用的菌种为植物乳杆菌HCS03-001、罗伊氏乳杆菌HCS02-001、鼠李糖乳杆菌HCS01-013的混合菌种。
更优选地，所述制备工艺步骤(2)菌种活化采用的混合菌种按质量比为：植物乳杆菌HCS03-001：罗伊氏乳杆菌HCS02-001：鼠李糖乳杆菌HCS01-013＝(3-5)：(2-4)：(2-4)，接种量0.04-0.08％。
更更优选地，步骤(2)所述的活化菌种，采用的混合菌种按质量比，植物乳杆菌HCS03-001:罗伊氏乳杆菌HCS02-001:鼠李糖乳杆菌HCS01-013＝4:3:3，接种量0.06％。
优选地，所述制备工艺步骤(2)菌种活化装液量为50～80％，搅动培养，搅拌速度80-120r/min，通气量为0，初始气压0.02-0.03MPa，培养温度为37℃。培养时间16±1h，发酵进行15h开始，每半小时监控pH、OD600，菌液pH值＜4.05，OD600＞9.00。
更优选地，所述制备工艺步骤(2)菌种活化装液量为70％，搅动培养，搅拌速度100r/min，通气量为0，初始气压0.02MPa，培养温度为25-37℃。培养时间16±1h，发酵进行15h开始，每半小时监控pH、OD，菌液pH值＜4.05，OD600＞9.00。
优选地，所述制备工艺步骤(2)发酵过程：装液量50～75％，搅拌速度20-40r/min；通气量为0，初始气压0.02-0.03MPa，25-37℃发酵，发酵60±4h。
更优选地，所述制备工艺步骤(2)发酵过程：采用装液量60％，搅拌速度30r/min；通气量为0，初始气压0.02-0.03MPa，25-37℃发酵。
更优选地，步骤(2)所述的发酵过程，37℃下发酵进行56h开始，每小时监控发酵液pH值，当接连两次pH值相差＜0.10发酵结束；发酵终点pH值＜3.10；发酵液最终状态：红棕色液体，口感酸，略有桑椹类植物清香。
接连两次pH值相差＜0.10发酵结束，一般发酵时间为60±4h。
优选地，所述制备工艺步骤(3)采用离心参数为：13000r/min。
优选地，灌装前灭菌采用131℃，灭菌15s。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
1、本发明制备的本草酵素采用药食同源原料，安全性高；酸枣仁有宁心安神作用，可以帮助入睡，舒解紧张、焦虑、抑郁的心情，缓解记忆力减退、神经衰弱等症状；百合具有一定的安神作用，可以治疗虚热上扰引起的失眠、心悸、多梦、神志恍惚、口苦等症状；桑椹具有改善由于肝肾絮引起的失眠，桑椹中的氨基酸、维生素、膳食纤维等营养成分含量较高，具有补充营养的作用；黑枣具有补中益气、养血安神的功效。以上原料按照一定配比混合所制酵素产品功效更强，可明显缩短低剂量组受试者的入睡时间、延长睡眠时长，改善受试者的睡眠问题。
2、采用特殊二次蒸煮浸提方法处理原料，与一次蒸煮相比，更能析出有效成分，使有效成分利用率提高，且结构稳定不会遭到破坏；投料顺序为一次蒸煮先投入桑椹、百合、黑枣，二次蒸煮投入酸枣仁，最大程度保留原料有效成分。
3、选用低聚异麦芽糖为原料，低聚异麦芽糖能有效的促进人体内有益细菌双歧杆菌的生长繁殖，维持肠道正常细菌群平衡。降低血中胆固醇水平，防治高血压。增强人体免疫功能，预防抗生素类对人体各种不良副作用。
4、采用特定菌株及特定比例进行发酵，发酵速度快，发酵程度彻底，发酵时间短。
植物乳杆菌HCS03-001，该菌株分类命名为植物乳杆菌(又称植物乳植杆菌)，分类命名的拉丁文名称为Lactobacillus plantarum，于2018年8月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号No：CGMCC 16258；
罗伊氏乳杆菌HCS02-001，该菌株分类命名为罗伊氏乳杆菌(又称罗伊氏粘液乳杆菌)，分类命名的拉丁文名称为Lactobacillus reuteri，于2020年4月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号No：CGMCC 19746；
鼠李糖乳杆菌HCS01-013，该菌株分类命名为鼠李糖乳杆菌(又称鼠李糖乳酪杆菌)，分类命名的拉丁文名称为Lactobacillus rhamnosus，于2020年3月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号No：CGMCC 19510。
具体实施方式
值得说明的是，本发明中的水均为符合GB5749《生活饮用水卫生标准》的生活饮用水，所述的原料均应经过严格筛选的市售符合相应的国家标准或行业标准和国家规定的合格产品。
实施例1
一种助眠安神的本草酵素，包括如下重量份数的组分：酸枣仁40份，桑椹30份，百合30份，黑枣25份，低聚异麦芽糖42份和水833份。
一种助眠安神的本草酵素的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：所有原料在水中浸泡过夜，蒸煮2次；桑椹、百合、黑枣进行第一批次蒸煮60min，第二次蒸煮时加入酸枣仁20min；向滤液中加入低聚异麦芽糖混合均匀得到原料液；115℃灭菌30min，灭菌后冷却至37℃；
(2)菌种活化：将植物乳杆菌HCS03-001、罗伊氏乳杆菌HCS02-001、鼠李糖乳杆菌HCS01-013按质量比4:3:3混合成的菌粉，用无菌水溶解，以0.06％的接种量接种到培养基中；培养基的配方为水933.23g/L、无水葡萄糖35g/L、酵母浸出物15g/L、酵母蛋白胨10g/L、L-苹果酸3.2g/L、一水柠檬酸1.5g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、氯化钙0.5g/L、硫酸镁0.06g/L、硫酸锰0.01g/L；采用装液量为70％，搅动培养，搅拌速度100r/min，通气量为0，初始气压0.02MPa，培养温度为37℃。培养时间16h，发酵进行15h开始，每半小时监控pH、OD，菌液pH值＜4.05，OD600＞9.00。
(3)发酵：将活化后的菌种接种于步骤(1)原料液进行发酵，装液量为60％，搅拌速度为30r/min；通气量为0，初始气压0.02MPa；37℃下发酵进行56h开始，每小时监控发酵液pH值，当接连两次pH值相差＜0.10发酵结束，发酵终点pH值＜3.10，发酵时间60±4h；发酵液最终状态：红棕色液体，口感酸，略有桑椹类植物清香。
(4)过滤后进行离心，离心参数为：13000r/min(流速约1.5L/min)，得到本草酵素原液；
(5)对本草酵素原液进行灭菌后进行灌装；灭菌参数131℃，15s。
实施例2
一种助眠安神的本草酵素，包括如下重量份数的组分：酸枣仁30份，桑椹20份，百合20份，黑枣10份，低聚异麦芽糖30份和水890份。
一种助眠安神的本草酵素的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：所有原料在水中浸泡过夜，蒸煮2次；桑椹、百合、黑枣进行第一批次蒸煮50min，第二次蒸煮时加入酸枣仁10min；向滤液中加入低聚异麦芽糖混合均匀得到原料液；115℃灭菌30min，灭菌后冷却至37℃；
(2)菌种活化：将植物乳杆菌HCS03-001、罗伊氏乳杆菌HCS02-001、鼠李糖乳杆菌HCS01-013按质量比3:2:2混合成的菌粉，用无菌水溶解，以0.06％的接种量接种到培养基中；培养基的配方为水947.655g/L、无水葡萄糖30g/L、酵母浸出物10g/L、酵母蛋白胨10g/L、L-苹果酸2g/L、一水柠檬酸1g/L、磷酸二氢钾1g/L、氯化钙0.3g/L、硫酸镁0.04g/L、硫酸锰0.005g/L；采用装液量为70％，搅动培养，搅拌速度100r/min，通气量为0，初始气压0.02MPa，培养温度为37℃。培养时间16h，发酵进行15h开始，每半小时监控pH、OD，菌液pH值＜4.05，OD600＞9.00。
(3)发酵：将活化后的菌种接种于步骤(1)原料液进行发酵，装液量为60％，搅拌速度为30r/min；通气量为0，初始气压0.02MPa；37℃下发酵进行56h开始，每小时监控发酵液pH值，当接连两次pH值相差＜0.10发酵结束，发酵终点pH值＜3.10，发酵时间60±4h；发酵液最终状态：红棕色液体，口感酸，略有桑椹类植物清香。
(4)过滤后进行离心，离心参数为：13000r/min(流速约1.5L/min)，得到本草酵素原液；
(5)对本草酵素原液进行灭菌后进行灌装；灭菌参数131℃，15s。
实施例3
一种助眠安神的本草酵素，包括如下重量份数的组分：酸枣仁50份，桑椹40份，百合40份，黑枣30份，低聚异麦芽糖50份和水790份。
一种助眠安神的本草酵素的制备方法，包括如下步骤：
(1)原料预处理：所有原料在水中浸泡过夜，蒸煮2次；桑椹、百合、黑枣进行第一批次蒸煮80min，第二次蒸煮时加入酸枣仁30min；向滤液中加入35低聚异麦芽糖混合均匀得到原料液；115℃灭菌30min，灭菌后冷却至37℃；
(2)菌种活化：将植物乳杆菌HCS03-001、罗伊氏乳杆菌HCS02-001、鼠李糖乳杆菌HCS01-013按质量比5:4:4混合成的菌粉，用无菌水溶解，以0.06％的接种量接种到培养基中；培养基的配方为水907.205g/L、无水葡萄糖50g/L、酵母浸出物20g/L、酵母蛋白胨10g/L、L-苹果酸4g/L、一水柠檬酸3g/L、磷酸二氢钾3g/L、氯化钙0.7g/L、硫酸镁0.08g/L、硫酸锰0.015g/L的无菌水溶液；采用装液量为70％，搅动培养，搅拌速度100r/min，通气量为0，初始气压0.02MPa，培养温度为37℃。培养时间16h，发酵进行15h开始，每半小时监控pH、OD，菌液pH值＜4.05，OD600＞9.00；
(3)发酵：将活化后的菌种接种于步骤(1)原料液进行发酵，装液量为60％，搅拌速度为30r/min；通气量为0，初始气压0.02MPa；37℃下发酵进行56h开始，每小时监控发酵液pH值，当接连两次pH值相差＜0.10发酵结束，发酵终点pH值＜3.10，发酵时间60±4h；发酵液最终状态：红棕色液体，口感酸，略有桑椹类植物清香。
(4)过滤后进行离心，离心参数为：13000r/min(流速约1.5L/min)，得到本草酵素原液；
(5)对本草酵素原液进行灭菌后进行灌装；灭菌参数131℃，15s。
对比例1
一种助眠安神的本草酵素，包括如下重量份数的组分：酸枣仁25份，桑椹45份，百合30份，黑枣15份，低聚异麦芽糖40份和水845份。
制备方法同实施例1。
对比例2
与实施例1相比，区别仅在于制备方法采用一次性将桑椹、百合、黑枣、酸枣仁混合，蒸煮80min。
对比例3
与实施例1相比，区别仅在于制备方法采用一次性将桑椹、百合、黑枣、酸枣仁直接粉碎、混合，不进行蒸煮直接发酵。
对比例4
与实施例1相比，区别仅在于菌种采用单一植物乳杆菌HCS03-001。
对比例5
与实施例1相比，区别仅在于菌种采用单一罗伊氏乳杆菌HCS02-001。
对比例6
与实施例1相比，区别仅在于菌种采用单一鼠李糖乳杆菌HCS01-013。
对比例7
与实施例1相比，区别仅在于混合菌种采用植物乳杆菌HCS03-001：罗伊氏乳杆菌HCS02-001：鼠李糖乳杆菌HCS01-013＝1：4：5。
试验例
人群功效试验：
样品：本发明制备的本草酵素；样本性状：液体；包装规格：自立袋包装，每袋35mL(含原料10mL)，无安慰剂对照。
受试对象：收集25周岁至55周岁人群，根据睡眠质量标准填报信息，以自愿原则筛选130名受试者，试验过程中退出8人，最终有效样本122人。
改善评价标准：入睡时间可比试验前提前30min以上；总睡眠时间可比试验前提升30min以上；多梦问题改善；早醒问题比较试验前延后30min以上；白天精神状态体感较试验前提升。
试验方法：根据试验前数据比较，将所有人群分为两组，最终A组有效人群68人，B组有效人群54人。A组每人每天睡前1-2小时，服用本草酵素2袋(即高剂量组)；B组每人每天睡前1-2小时，服用本草酵素1袋(即低剂量组)。试验周期为10天，每日记录睡眠时间、入睡时间、多梦问题、早醒/惊醒、白天状态的改善情况。
经人群功效实验，以实施例1为例，有关试验结果如下：
A组和B组试验人群睡眠改善情况见表1，A5表示A组第5天，各项问题改善率；A10表示A组第10天，各项问题改善率；B5、B10类同；通过表1可知，无论A组(高剂量组)或者B组(低剂量组)，对于5项体感指标随着服用天数增多均有明显改善；此外A组(高剂量组)与B组(低剂量组)对比，可以看出，随剂量增加，服用时间的延长，体感数据成正相关。
表1实施例1A组和B组试验人群睡眠改善情况
B5 A5 B10 A10
总睡眠时间 44.4％ 57.4％ 55.6％ 63.2％
入睡时间 66.7％ 77.9％ 79.6％ 89.7％
多梦问题 72.2％ 72.1％ 81.5％ 85.3％
早醒/惊醒 68.5％ 77.9％ 70.4％ 77.9％
白天状态 75.9％ 83.8％ 81.5％ 89.7％
B组(低剂量组)入睡时间提前情况见表2，B组(低剂量组)总睡眠时长增加动态变化情况见表3；通过表2和表3可知，服用10天提前入睡时间和总睡眠时间改善值达到最高值，入睡提前改善率高达79.6％，总睡眠时长改善率高达55.6％。
表2实施例1B组(低剂量组)入睡提前时间t1情况统计(单位：人)
t1≤0.5h 0.5＜t1≤1h 1＜t1≤1.5h 1.5＜t1≤2h 2＜t1≤3.0h
服用第1天 27 15 12 0 0
服用第3天 25 19 7 3 0
服用第5天 18 17 10 8 1
服用第10天 11 9 25 4 5
表3实施例1B组(低剂量组)总睡眠时长t2增加情况统计(单位：人)
t2≤0.5h 0.5＜t2≤1h 1＜t2≤1.5h 1.5＜t2≤2h 2＜t2≤3h
服用第1天 29 19 6 0 0
服用第3天 31 13 7 1 2
服用第5天 30 7 6 8 3
服用第10天 24 11 9 7 3
其他实施例及对比例参照实施例1的试验方法进行了低剂量组的人群功效实验，受试者总人数280人，中途退出人数5人，去除未按时服用者，最终计入有效样本数30人/组。表4为实施例2-3和对比例1-7低剂量组10天的睡眠改善情况，实施例的睡眠改善率均高于对比例。由此可说明，本发明中通过各组分的选择及配比、发酵菌种选择及配比等制备方法的优化制备得到的本草酵素安神助眠效果显著，且原料均为药食同源的组分，使用安全性较高。
表4低剂量组试验人群第10天睡眠改善情况
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种助眠安神的本草酵素，其特征在于，按照重量份数计，包括以下原料组分：酸枣仁30-50份，桑椹20-40份，百合20-40份，黑枣10-30份，低聚异麦芽糖30-50份。
2.根据权利要求1所述的本草酵素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)通过蒸煮对原料组分进行预处理，得到原料液；
(2)将菌种活化，接种于步骤(1)的原料液进行发酵；
(3)过滤后进行离心得到本草酵素。
3.根据权利要求2所述的本草酵素的制备方法，其特征在于，步骤(1)中先将桑椹、百合、黑枣混合，蒸煮50-80min，再加入酸枣仁，蒸煮10-30min；过滤并向滤液中加入低聚异麦芽糖混合均匀，得到原料液。
4.根据权利要求2所述的本草酵素的制备方法，其特征在于，步骤(2)中菌种采用植物乳杆菌HCS03-001、罗伊氏乳杆菌HCS02-001和鼠李糖乳杆菌HCS01-013的混合菌种；
所述的植物乳杆菌HCS03-001，分类命名为植物乳杆菌，分类命名的拉丁文名称为Lactobacillus plantarum，于2018年8月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号No：CGMCC 16258；
所述的罗伊氏乳杆菌HCS02-001，分类命名为罗伊氏乳杆菌，分类命名的拉丁文名称为Lactobacillus reuteri，于2020年4月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号No：CGMCC 19746；
所述的鼠李糖乳杆菌HCS01-013，分类命名为鼠李糖乳杆菌，分类命名的拉丁文名称为Lactobacillus rhamnosus，于2020年3月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号No：CGMCC 19510。
5.根据权利要求4所述的本草酵素的制备方法，其特征在于，混合菌种按质量比，植物乳杆菌HCS03-001：罗伊氏乳杆菌HCS02-001：鼠李糖乳杆菌HCS01-013为(3-5)：(2-4)：(2-4)，接种量0.04-0.08％。
6.根据权利要求2所述的本草酵素的制备方法，其特征在于，菌种活化培养基的配方为无水葡萄糖30-50g/L、酵母浸出物10-20g/L、酵母蛋白胨8-12g/L、L-苹果酸2-4g/L、一水柠檬酸1-3g/L、磷酸二氢钾1-3g/L、氯化钙0.3-0.7g/L、硫酸镁0.04-0.08g/L、硫酸锰0.005-0.015g/L。
7.根据权利要求2所述的本草酵素的制备方法，其特征在于，菌种活化培养条件为装液量50～80％，搅拌速度80-120r/min，通气量为0，初始气压0.02-0.03MPa，培养温度为25-37℃。
8.根据权利要求7所述的本草酵素的制备方法，其特征在于，菌种活化培养时间16±1h，活化后得到的菌液pH值＜4.05，OD600＞9.00。
9.根据权利要求2所述的本草酵素的制备方法，其特征在于，发酵条件为装液量50～75％，搅拌速度20-40r/min；通气量为0，初始气压0.02-0.03MPa，发酵温度为25-37℃。
10.根据权利要求9所述的本草酵素的制备方法，其特征在于，当发酵56h后开始监控发酵液pH值，当接连两次pH值相差＜0.10发酵结束，发酵终点pH值＜3.10。
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