CN1165303C - 作为抗肿瘤剂的结合dna的吲哚衍生物,前药及其免疫轭合物 - Google Patents

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Abstract

本发明是关于可用作抗肿瘤药和标记DNA的新的DNA烷基化试剂和它们的前药。这些化合物是羟基吲哚寡肽和它们的前药，而这里的单个组成成份是从单环和双环芳香基团而来的。

Description

作为抗肿瘤剂的结合DNA的吲哚衍生物， 前药及其免疫轭合物
发明背景
本发明是关于可用作抗肿瘤剂及DNA标记剂的新的DNA烷基化试剂及其前药。
CC-1065(图1)是首先由Upjohn公司(Hanka等，J.Antibiot.(1978)，31：1211；Martin et al.，J.Antibiot.(1980)33，902；Martin et al.，J.Antibiot.(1981)，34：1119)在1981年从Zelensis链霉菌中分离得到的。它在体外和动物实验中都具有很强的抗肿瘤和抗菌活性(Li等，Cancer Res.1982，42：999；等，1981)。CC-1065在双链B-DNA的小沟中(Swenson等，Cancer Res.1982，42，2821)有选择性地结合于5′-d(A/GNTTA)-3′和5′-d(AAAAA)-3′的序段上并用其分子中的CPI基团烷化腺嘌呤的N3位置(Hurley et al.，Secience 1984，226，843)。虽然CC-1065有很强和广谱的抗肿瘤活性，但由于它在实验动物中引起慢性延缓死亡，所以不能用于人类。
许多CC-1065的类似物已被合成，其中包括U-73975(图1，adozelesin，Aristoff，Adv.in Med.Chem.1993，2，67)，U-77779(bizelesin，Aristoff，1993)，U-80244(图1，carzelesin，Aristoff，1993)，KW-2189(Ogasawara et al.，Jpn.J.Cancer Res.，1994，85，418)，YW-052，YW-053，(图1，Wang and Lown，Book of Abstracts-209th Amer.Chem.Soc.National Meeting，1995)，CBI-CDPI1 and CBI-CDPI2(Boger and Johnson，Proc.Natl.Acad，Sci.U.S.A.1995，92，3642)。U-73975，U-77779和U-80244正在美国进行临床试验(Aristoff，1993)，而KW-2189正在日本进行临床试验(Niitani et al.，Proceeding.Amer.Asso.Cancer Res.1995，243)。CC-1065的单克隆抗体的偶联物，DC1(图3，Chari，R.V.J.，等，Cancer Res.，(1995)55：4079)最近已有报道。
另一类相关的化合物包括netropsin(Julia，M.，et al.，Acad.Sci.，1963，257，1115)和distamycin(Arcamone，F.M.，et al.，Gazz.Chim.Ital.，1967，97，1097)。它们的结构见图2。这两个化合物都带有正电荷。因其疗效较低，这两个化合物不能用作抗肿瘤试剂。这类化合物的类似物，FCE-245 17(图2，Arcamone，F.M.，et al.，J.Med.Chem.，1989，32，774)已有报道。FCE-24517苯甲酸氮芥和寡聚吡咯的轭合物，正在进行临床试验。
目前使用的抗肿瘤药的缺点是缺乏对正常组织中肿瘤细胞的选择性。因此，理想的是提供对正常组织中肿瘤细胞有选择性的高活性化合物。可以选择性地标记DNA的标记试剂应是非常有用的。本发明就是针对这些需要而完成。
本发明概述
本发明提供的化合物具有通式：
R1-(C(O)-R2-R3-NH)m-(C(O)-R3-NH)n-R4其中：
R1选自下列基团：
Figure C9719486200051
其中：
每个R2相同或不相同，且为价键或是二价的烃基；
每个R3相同或不相同，且为二价单环或双环的杂环芳香基；
m和n是0到3的整数，且m加n小于或等于3；而
R4独立地选自：
H；C1-C6烷基；C1-C6羟基烷基；C1-C6羟基环烷基；羟苯基，羟甲基苯基；羟苄基；C1-C6氨烷基；C1-C6烷氨基C1-C6烷基；二-(C1-C6)-烷氨基C1-C6烷基；C1-C6脲基烷基；带有正电荷取代基的烷基；Z，其为X或Y，而X具有式I所示的结构：
而Y具有式II所示的结构：
或C(O)R5，其中R5独立地选自：
NH2；C1-C6烷基；C1-C6羟基烷基；C1-C6羟基环烷基；羟苯基，羟甲苯基；羟苄基；C1-C6氨烷；C1-C6烷氨基C1-C6烷基；二-(C1-C6)-烷氨基C1-C6烷基；C1-C6脲基烷基；带有正电荷取代基的C1-C6烷基；C1-C6烷基-NHZ；C1-C6环烷基-NHZ；苯基-NH2；-CH2-苯基-NHZ；-苯基-CH2-CHZ；L-S，其中L是一个连接基团，S是酶底物；C1-C6烷基-OR6；C1-C6环烷基-OR6；苯基-OR6；-CH2-苯基-OR6；或-苯基-CH2-OR6；其中R6选自下列基团：
条件是，当R4是H或C1-C6烷基或R5是NH2，C1-C6烷基或C1-C6氨烷基时，R1不是CPI或CPI-Cl，其中一个或多个R3是吡咯或咪唑；而当R4是H或C1-C6烷基或R5是NH2或C1-C6烷基时：
(1)当m+n＝1和R3是异喹啉或吲哚时，R1不是CPI或CPI-Cl；
(2)当m+n＝2和两个R3都是吲哚时，R1不是CBI或CBI-Cl或CPI或CPI-Cl；
条件是，当R4是H或C1-C6烷基时：
(1)当m+n＝1和R3是吲哚时，R1不是CBI或CBI-Cl；
(2)当m+n＝2和R3的其中一个是吲哚或苯并呋喃时，R1不是CPI或CPI-Cl。
本发明也提供有关上述化合物的前药，尤其是其中化合物与酶底物和抗体相连的前药。本发明也提供了用所述化合物抑制肿瘤生长的办法。除此之外，这里所公开的化合物及其它们的衍生物也可用于烷基化及标记DNA，以利于DNA的检测，纯化及分离。
                      附图的简单描述
图1示出了CC-1065，adozelesin，YW-052，YW-053和U-80244，CBI-CDPI①，CBI-CDPI②，KW-2189和U-77779的结构。
图2示出了netropsin，distamycin和FCE-24517的结构。
图3示出了DC1和它的单克隆抗体轭合物的结构。
图4标出了氮芥葡萄糖酸和阿霉素β-内酰胺前药的化学结构。
图5标出了葡萄糖酸前药激活的机理。
图6标出了β-内酰胺前药激活的机理。
图7列出了用于构造本发明中CC-1065类似物及其前药的吲哚衍生物的合成路线。
图8列出了CC-1065类似物及其前药的合成路线。
图9列出了本发明化合物体处对U937细胞的半致死量IC50的值。
图10列出了头霉类前药YW-285的合成路线。
图11列出了YW-242-单克隆抗体轭合物的合成路线。
                    优选实施方案的说明
下列定义用来解释和介定本发明中所用各术语的意义和范围。
术语“烃基”指由连接有氢和其它元素的碳链所组成的有机机团。此术语包括烷基，烯基，炔基和芳香基，带有饱和与不饱和键的基团，碳环和这些基团结合的基团。它们可以是直链，带有支链，环状结构或组合。
术语“烷”是指带有支链或直链非环状的单键饱和的1至20个碳原子的烃基。
“低级烷基”是指具有1至6个碳原子的烷基。此术语的示例性基团包括甲基，乙基，正丙基，异丁基，第二丁基，正丁基和叔丁基，正己基和3-甲基戊基。
“烯基”是指具有至少一个碳-碳双键的不饱和烃基，包括直链，支链和环状基团。
术语“炔基”是指具有至少一个碳-碳三键的烃基，包括直链，支链和环状基团。
术语“低级”是指至多并包括6个碳原子的有机基团或化合物，优选至多并包括1-4个碳原子。它们可以是直链或带有支链的。
术语“芳基”是指具有单环(如苯基)或多个稠合环(如萘基)的芳香碳环化合物。
术语“杂环芳香基”指环上至少带有一个杂原子，如氮，氧或硫的芳香单环或多环基团。例如，典型的具有一个或多个氮原子的杂芳基是四唑基，吡咯基，吡啶基(如4-吡啶基，3-吡啶基，2-吡啶基)，哒嗪基，吲哚基，喹啉基(如2-喹啉基，3-喹啉基等等)，咪唑基，异喹啉基，吡唑基，吡嗪基，嘧啶基，吡啶酮基或哒嗪酮基；典型的具有氧原子的氧杂芳香基团有2-呋喃基，3-呋喃基和苯并呋喃基；典型的硫杂芳香基团有噻吩基，苯丙噻吩基；典型的混杂原子杂芳香基团有呋咱基，噁唑基，噻唑基和吩噻嗪基。进而，有的情况下，这些基团也包括那些环中的杂原子被氧化的基团，例如，N-氧化物或硫砜。
术语“脲基”是指-NH-C(O)-NH2基团。
术语“连接基”是指任何可以连接本发明化合物和抗体或酶底物的化学或生物相容共价的原子基团。一般来讲，优选的连接基团具有0至20个碳原子，较好的是0-8个碳，而更好的是0-3个碳或和0-10个杂原子(NH，O，S，P等)。它们可以是带有支链的或是直链的或带有环的。连接基团可以设计为疏水的或是亲水的。连接基团可以包括单键和/或双键和饱和或芳香环。连接基团可以包括酰胺、酯、磷酸酯、醚、硫醚、二硫醚、胺等等。“ω-取代烷基”是指取代基在烷基链的末端碳原子上。
本发明包括新型DNA烷化剂及它们前药的合成，生物活性试验及治疗应用。不需酶激活的原药，在体外试验中具有很强的抗U937白血病细胞和黑素瘤细胞B16的活性(表1-2)。
表1.本发明化合物对U937细胞的细胞毒性
    化合物    ICcn(nM)
    阿霉素    100
    YW-161    5
    YW-198    0.2
    YW-200    0.01
    YW-201    0.07
    YW-202    0.2
    YW-210    0.3
    YW-212    0.05
    YW-213    0.2
    YW-214    0.6
    YW-215    0.09
    YW-216    0.09
    YW-222    0.5
    YW-231    0.6
    YW-235    0.7
    YW-242    0.09
    YW-247    1.4
    YW-249    0.55
    YW-254    0.1
    YW-258    0.08
    YW-259    0.09
    YW-284    9
    YW-285    0.9
    YW-286    5.5
表2.  本发明化合物地B16黑素瘤的细胞毒性
    化合物    ICcn(nM)
    阿霉素    780
    YW-200    7.2
    YW-231    4.0
    YW-242    11.0
这些化合物对小鼠体内的肿瘤细胞同样有效并可延长存活率达91％。没有迹象显示这些化合物引起延期死亡，而这种现象却限制了天然产物CC-1065的临床应用。其它不会引起延期死亡的CC-1065类似物U-73975，U-77779，U-80244和KW-2189正在进行临床试验。
这些新的化合物的优点之一是支链上的羟基和氨基增强了它们的水溶性。增加水溶性是非常重要的，因为低的水溶性常常在抗肿瘤药的剂型制造及药的摄入过程中造成困难，甚至引起副作用。
这些化合物的另外一个优点是杂环侧链末端上的酰胺键或连接DNA烷基化部分和杂环侧链的双键增加了这些分子与DNA的结合能力，从而提高了它们的抗肿瘤活性。改善了水溶性和增强了DNA结合能力则进一步提高了这些化合物的抗肿瘤活性。
不同于CC-1065的是，这些新化合物是由不同的杂环所组成。CC-1065结合于DNA的富含AT序列的部位。而这些新化合物既结合于DNA富含AT的序列上也结合于DNA的像CG或混合的AT及CG序列的其它序列上。因此，这些化合物可以结合并标记DNA。
本发明的化合物具有下列通式：
R1-(C(O)-R2-R3-NH)m-(C(O)-R3-NH)n-R4其中：
R1可从下列基团中选择：
其中：
每个R2是相同或不相同，且为价键或是二价的烃基；
每个R3是相同或不相同，且为二价单环或双环的杂环芳香基；
m和n是0到3的整数，且m加n小于或等于3，而R4独立地选自：
H；C1-C6烷基；C1-C6羟基烷基；C1-C6羟基环烷基；羟苯基，羟甲基苯；羟苄基；C1-C6氨烷基；C1-C6烷氨基C1-C6烷基；二-(C1-C6)-烷氨基C1-C6烷基；C1-C6脲基烷基；带有正电荷取代基的烷基；Z，其为X或Y，而X具有式I所示的结构：
方程式I：
Figure C9719486200131
而Y具有式II所示的结构：
方程式II：
或C(O)R5，其中R5独立地选自：
NH2；C1-C6烷基；C1-C6羟基烷基；C1-C6羟基环烷基；羟苯基；羟甲苯基；羟苄基C1-C6；氨烷基；C1-C6烷氨基C1-C6烷基；二-(C1-C6)-烷氨基C1-C6烷基；C1-C6脲基烷基；带有正电荷取代基的C1-C6烷基；C1-C6烷基-NHZ；C1-C6环烷基-NHZ；苯基-NH2；-CH2-苯基-NHZ；-苯基-CH2-CHZ；L-S，其中L是连接基团，S是酶底物；C1-C6烷基-OR6；C1-C6环烷基-OR6；苯基-OR6；-CH2-苯基-OR6；或-苯基-CH2-OR6，其中R6选自下列基团：
Figure C9719486200141
条件是，当R4是H或C1-C6烷基或R5是NH2，C1-C6烷基或C1-C6氨烷基，一个或多个R3是吡咯或咪唑时，R1不是CPI或CPI-Cl；而当R4是H或C1-C6烷基或R5是NH2或C1-C6烷基时：
(1)当m+n＝1和R3是喹啉或吲哚时，R1不是CPI或CPI-Cl；
(2)当m+n＝2和两个R3都是吲哚时，R1不是CBI或CBI-Cl或CPI或CPI-Cl；
条件是当R4是H或C1-C6烷基时：
(1)当m+n＝1和R3是吲哚时，R1不是CBI或CBI-Cl；或
(2)当m+n＝2和R3的其中一个是吲哚或苯并呋喃时，R1不是CPI或CPI-Cl。
具有代表性的烷基包括(但不局限于)CH3，CH3CH2-，CH3CH2CH2-，CH3CH(CH3)-，CH3CH2CH2CH2-，CH3CH(CH3)CH2-和CH3CH3CH(CH3)CH2-。
具有代表性的羟烷基包括(但不局限于)-CH2OH，-CH2CH2OH，-CH2CH2CH2OH，-CH2CH(CH3)OH，-CH2CH2CH2CH2OH，-CH2CH(CH3)CH2OH，-CH2CH2CH(CH3)CH2OH，-C6H10OH，-C6H4OH，和CH2C6H4OH。
具有代表性的氨基烷基包括(但不局限于)如下基团：-CH2NH2，-CH2CH2NH2，-CH2CH2CH2NH2，-CH2CH(CH3)NH2，-CH2CH2CH2CH2NH2，-CH2CH(CH3)CH2NH2，-CH2CH2CH(CH3)CH2NH2，-C6H10NH2，-C6H4NH2，和-CH2C6H4NH2。
本发明的单克隆抗体轭合物和酶底物轭合物提供了新的高效的化合物。应用单克隆抗体导引的酶前药治疗(ADEPT，Bagshawe，Br，JCancer 1989，60：272)或抗体导引的催化法(ADC，Jungheim and shephed，chem.Rev.1994，94：1553)，这些轭合物可用于抑制或阻止肿瘤生长。在这些方法中，酶与肿瘤特异性抗体轭合。抗体选择地将酶定位于肿瘤细胞表面。随后导入作为酶底物的前药，在肿瘤位点释放出游离药物。这种方法解决了控制药物释放并解决了与单一使用抗体-药物轭合物有关的生物化学，控制药物释放和较差的抗体渗入等问题。另外，由于药物释放是一种酶解的过程，故而应用单一的酶即可产生大量的有效药物。
本文所用的药物是高活性的化合物。因此，可以使用小量抗体和药物即可。应用低剂量抗体可以减轻免疫副反应及消除制剂中的问题，增加药物渗入预定组织的可能性，同时亦可减少成本。
图4显示与本发明有关的两个实施例。第一个实施例是应用β-葡糖苷酸酶完成ADEPT方法。氮芥葡糖苷酸被β-葡糖苷酸或β-葡糖苷酸酶-抗体轭合物激活而产生酚氮芥。酚芥对细胞毒性强于母体化合物。(Wang，S.M等，Cancer Res，1992，52：4484)。第二个实施例是应用β-乳胺酶裂解β-乳胺而释出阿霉素(Jungheim，L.N.等，Heterocycles，1993，35：339)。
本申请所发明的新型DNA烷基化剂为迄今所报告过的最强力的抗肿瘤试剂之一。本发明的前药是首例在ADEPT方法中应用这类高活性分子。这种前药具有多种优点。首先，药物需要量少。其次，由于单克隆抗体-酶轭合物的需量减到最少，故而减少了由于免疫源而导致的问题。
在本发明中所有的前药的毒性均低于相应的自由药物。在如葡糖苷酸酶或β-乳胺酶等相关酶或单克隆抗体-酶轭合物存在的条件下，这些前药可以被激活而释出自由药物(图5-6)。
相对于低活性试剂来说，应用这些高活性分子进行单克隆抗体-药物轭合物具有很多优点。肿瘤特异性抗体会携带这些分子特异性地导至肿瘤细胞，从而增强这些化合物的治疗效率。单克隆抗体-药物轭合物对肿瘤细胞仍具很强毒性。在体外已测定Mab-YW-242轭合物对人肝肿瘤细胞系HepG2细胞的毒性。应用3H-腺苷掺入的方法测定细胞增殖的IC50值。结果示于表3。
表3  Mab-药物轭合物的IC50值(μM)
    细胞     YW-242     Mab-242     阿霉素
    HepG2     0.2     0.5     6
一般来说，本发明的DNA烷基化试剂与酶底物或抗体的结合是通过一双官能的连接基团。“连接基团”应为酶底物和抗体与DNA烷化剂之间的“化学臂(基团)”。如本领域普通技术人员所识，为构成所要求的化学结构，每个反应体必须含有必需的活性基团。
具有代表性的此类活性基团有形成酰胺连接基的氨基与羧基，或形成酯键的羧基与羟基，或形成烷基氨基连接的卤化物和氨基，或形成二硫醚的硫醇与硫醇，或是形成硫醚的硫醇与顺丁烯二酰亚胺或烷基卤化物。很明显，羟基、羧基、氨基或其它原来分子中不存在的功能基团可以通过已知的方法引入。同样地，本领域普通技术人员可以认识到，大量其它种类的连接基团也可以应于此目的。连接药物或药物衍生物和酶底物与抗体的连接基团结构，应是由稳定的共价键相联的。在某些情况下，为了增强配体和受体的特性结合，其中的连接基团可以设计为疏水或亲水性的。在配体和连接基团所处的溶液条件下，共价连接体基团应该比较稳定。一般较理想的连接基团应具有1-20个碳原子和0-10杂原子(NH，O，S)，可为支链，亦可为直链。不限前述，对本领域普通技术人员来说，可以很明显地看出，只有化学相容的原子的结合才能构成连接基团。例如，以碳-碳键的结合的酰氨、酯、硫醚、硫酯、酮、羟基、羧基、醚等基团，是化学相容的连接基团。其它包含连接基团的化学相容的化合物，见美国专利5,470,932(第2列和4-7)列；5,470,843(第11-13列)；以及5,470,932。
通过酰化或烷基化末端氧或氮原子而与酶底物结合的代表性化学基团有：-CH2OH，-CH2CH2OH，-CH2CH2CH2OH，-CH2CH(CH3)OH，-CH2CH2CH2CH2OH，-CH2CH(CH3)CH2OH，-CH2CH3CH(CH3)CH2OH，-C6H10OH，-C6H4OH和-CH2C6H4OH；以及-CH2NH2，-CH2CH2NH2，-CH2CH2NH2，-CH2CH(CH3)NH2，-CH2CH2CH2CH2NH2，-CH2CH(CH3)CH2NH2，-CH2CH3CH(CH3)CH2NH2，-C6H10NH2，-C6H4NH2，和-CH2C6H4NH2。
除了葡糖苷酸酶和β-乳胺酶底物外，其它能与本发明的DNA烷基化试剂结合的底物和其相应的酶包括：谷氨酸和糖肽酶，磷酸和碱性磷酸酶，α-半乳糖和α-半乳糖苷酶，硝基苯甲基羧酸盐(-C(O)OCH2C6H5NO2)和硝基还原酶。
本发明中的化合物可用作为抗肿瘤剂。此处所示的体内和体外的抗肿瘤活性可证明此一结论。这些化合物亦可用于烷基化，标记，识别和分离DNA。
这样，本发明的新的化合物和轭合物可溶于水溶液而用于注射(静脉，皮下注射等)或静脉输入或制成药膏而通过皮肤和粘膜而导入。本发明的轭合物以治疗有效剂量导入体内，即：当给药所需的哺乳动物体内时，所用剂量足以产生治疗效果(例如，减轻或治疗疾病，即当治疗肿瘤时，控制或抑制肿瘤生长)。此处所述的活性化合物和盐的给药可用任何可接受的给药方法。
如本领域普通技术人员所识，药物在制剂中的含量可变范围很大。即基于总制剂的量，药物可占0.01％(％w)到99.99％w，和赋形剂占0.01％(％w)到99.99％w。理想的药物量是占10％(％w)至70％w。
一般来说，可接受的每日剂量为每公斤体重约0.04微克至50毫克，较理想的低剂量为0.08微克至10微克。这样，对于一位70公斤体重的病人给药，每人用药量的范围约为每天28微克至3 5克。这样的应用剂量和最佳化对本领域普通技术人员来说是熟知的(Fleming，等，JNat.Cancer Institute，1994，86(5)：368)。
药物导入可经任何可接受的内吸或局部途径。例如：通过非肠道、静脉、鼻腔、支气管吸入(即，气溶胶制剂)，皮下或粘表面等途径给药剂型可为固体、半固体、液体等形式，例如：片剂、栓剂、丸剂、胶囊、粉剂、溶液、悬液、气溶胶、乳剂等。所有剂型均应为单位剂量以便用药时的精确剂量计算。理想的给药形式为静脉或皮下注射。最常用的是溶液剂型。这些化合物和交联物制剂可用非毒性、惰性，制药上可接受的载体介质制成剂型。理想的pH范围为3-8，更理想的pH范围是6-8。一般来说，溶液制剂就与培养液或喷洒液相配。构成成份应包括常规的药物载体或赋形剂，化合物或DNA烷基化剂的轭合体。另外，亦可加入其它药物、药品剂、载体、佐剂等。载体可选用不同的油，包括石油、动物、植物或人工合成油，如花生油、豆油、矿物油、芝麻油等。用于注射用溶液，理想的液体载体为水、盐水、葡萄糖水溶液或甘露醇水溶液。乙二醇是优选的液体载体，特别是作为注射溶液。适宜的药物载体包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、半乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、石膏、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、氯化钠、干燥去脂奶、甘油、丙二醇、水、乙醇等。其它适宜的药物载体和相应制剂见Reminton’s Pharmaceutical Sciences (E.W.Martin，1985)。
如果需要，给药的药物组合物中亦可含有小量的非毒性的辅助剂，如润湿剂、乳化剂、pH缓冲剂等。例如乙酸钠、山梨醇单月桂酸酯、油酸三乙胺等。
本发明的化合物通常以药物组合物给药，其药物组合物包括药用赋形剂与DNA烷基化剂或其轭合物的结合体。较理想的药物配方中轭合物应为本领域普通技术人员可应用的全部范围，即药物占全部制剂的约0.01-99.99％(重量)，赋形剂占约0.01-99.99％(重量)。优选地，制剂中药物活性化合物约占3.5-60％(重量)，余为合适的药物赋形剂。
所谓“药用盐”可为任何有机或无机酸或碱所形成的盐。盐可源于酸或碱。
酸加成盐源于无机酸，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸(包括硫酸盐和硫酸氢盐)、硝酸、磷酸等，以及有机酸，例如乙酸、丙酸、乙醇酸、三聚氰酸、草酸、苹果酸、琥珀酸、马来酸、反丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、苯丙醇酸、甲磺酸、乙磺酸、水杨酸、对甲苯磺酸等。
碱加成基源于有机碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氨水氢氧化锂、氢氧化钙、氢氧化镁等。源于有机碱的阳离子包括：胺的阳离子，如：异丙醇胺、二乙胺、三乙胺、吡啶、环己胺、来自伯、仲和叔乙二胺单乙醇胺、双乙醇胺、三乙醇胺等。
此处所用的对脯乳动物的一种疾病和/或一种状况的“治疗”或“医治”一词意为：
(i)预防疾病或症状的发生，即避免疾病的临床症状的发生。
(ii)抑制疾病或症状的发展，即阻止临床症状的发展或加重和/或
(iii)减轻疾病或症状，即加速临床症状的消退。
此处所用的“治疗有效量”指对哺乳动物以有效治疗的所给药的本发明化合物的量，所述化合物作为抗肿瘤剂，抗微生物剂或DNA烷基化试剂。构成“治疗有效量”的药物量依化合物，疾病与状况的严重程度，被治疗哺乳动物的体重，年龄的情况而变化。本领域普通技术人员可根据常规技术和本发明的公开确定。
下述实施例用来阐述本发明优选实施方案和应用。除非所附权利要求中另有说明，此实施例并不限制本发明的应用范围。
化合物通常制备如下：应用保护基团，将R2与杂环芳香基R3按已设计好的顺序连接，然后，与R1基团连接。在某种情况下，R4基团可作为保护基团。应用浣的肽键形成反应完成链上不同单位的偶合，即通常所知的通过碳化二亚胺偶合的连接条件。其它本文未提及的保护基团，可见有机合成中的保护基团，第二版(John Wiley and Sons公司，纽约，1991)。合成序例的范例见图7和图8。
可用任何可行的适宜的分离和纯化手段如过滤、萃取、结晶、柱层析、制备高压液相色谱(制备性HPLC)，薄层色谱，厚层色谱或这些方法的组合来完成所述的化合物和中间体的分离和纯化。(其后被引作“常规方法”)下述实施例可提供可行性分离和纯化方法的实用参考。然而，亦可选用其它等同的分离纯化方法。
制备本发明的化合物的初始原料及试剂可从化学公司购买，如Aldrich化学公司等，或参考下列文献所述的方法内本领域普通技术人员制备：“Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis，”1-15卷；John Wiley and Sons，1991；“Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds”，1-5卷和增补。Elsevier Science Publishers，1989；“Organic Reactions”，1-40卷，John Wiley and Sons，1991；“Comprehensive HeterocyclicChemistry”，1-8卷，Katritzki and Rees，Pergamon Press，1984。
例1：吲哚衍生物的合成(图7)
5-乙酰氨基吲哚-2-羧酸乙酯(3)
将5-硝基吲哚-2-羧酸乙酯(1，1克，4.27毫摩尔)溶于乙酸乙酯(100毫升)，然后加入5％Pd/C(100毫克)。在室温和每平方英寸60磅的压力下，将反应混合物氢化1小时。将反应混合物过滤。真空除去溶剂。所得灰色粉末2可不经进一步纯化而使用。向2(0.417克，2.04毫摩尔)于DMF(2毫升)，二氯甲烷(5毫升)和三乙胺(339毫升，2.44毫摩尔)的溶液中，在氮气保护和0℃下，滴加乙酰氯(174毫升，2.44毫摩尔)于二氯甲烷(5毫升)中的溶液。将反应混合物加热至室温，搅拌2小时，加水(30毫升)。用乙酸乙酯提取混合物(40毫升×2)。用硫酸钠干燥溶液，真空除去溶剂。获得灰色粉末3(437毫克，产量87％)。分析用的样品用乙酸乙酯重结晶。mp：202-203℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.74(s，1H，NH)，9.78(s，1H，NH)，7.99(s，1H，Ar-H)，7.38-7.30(m，2H，Ar-H)，7.09-7.08(m，1H，Ar-H)，4.36-4.30(q，2H，J＝7.0，13.7Hz，CH2CH3)，2.03(s，3H，CH3CO)，1.36-1.31(t，3H，J＝7.0Hz，CH2CH3)。元素分析(C13H14N2O3)，C，H，N。
5-乙酰氨基吲哚-2-羧酸(4)
向3(250毫克，1.02毫摩尔)于甲醇(7毫升)中制成溶液中，加入3N氢氧化钠(2毫升)。在室温下，将反应物混合物搅拌过夜。反应混合物蒸发后加水(5毫升)。用20％的盐酸中和调节溶液pH至2，过滤沉淀物并用水洗涤。获得灰色粉末4(158毫克，产率71％)。mp：260℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.62(s，1H，NH)，9.77(s，1H，NH)，7.98-7.97(d，1H，J＝1.4Hz，Ar-H)，7.36-7.28(m，2H，Ar-H)，7.02(d，1H，J＝1.5Hz，Ar-H)，2.03(s，3H，CH3CO)，元素分析(C11H10N2O30·6H2O)，C，H，N。5-[[5-(乙酰氨基)-1H-吲哚-2-基羰基]氨基]-1H-吲哚-2-羧酸(6)
向2(94毫克，0.46毫摩尔)和4(101毫克，0.46毫摩尔)溶于DMF(3毫升)的溶液中加入1-(3-二甲氨丙基)-3-乙基碳酰二亚胺(EDCI，268毫克)。在室温下，搅拌反应混合物过夜。加入乙酸乙酯(40毫升)，用饱和碳酸钠溶液洗涤混合物(10毫升)，再用水(20毫升×2)洗涤两次。用硫酸钠干燥所得溶液，真空除去溶剂，获得灰色粉末5(129毫克，产率69％)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.82(s，1H，NH)，11.57(s，1H，NH)，10.09(s，1H，NH)，9.77(s，1H，NH)，8.13-7.15(m，8H，Ar-H)，4.38-4.32(q，2H，J＝7.0，13.7Hz，CH2CH3)，2.04(s，3H，CH3CO)，1.37-1.33(t，3H，J＝7.0Hz，CH2CH3)。MS(离子扩散，M/z)404。将5(103毫克，0.25毫摩尔)溶于甲醇(15毫升)和DMF(3毫升)的溶液中，无需进一步纯化，加入3N氢氧化钠。在室温下，将反应物混合物搅拌过夜。反应混合物蒸发后加水(5毫升)。用20％盐酸中和调节溶液pH至2，过滤沉淀物并用水洗涤。获得灰色粉末6(45毫克，产率48％)。mp：＞300℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：12.80(br，1H，COOH)，11.69(s，1H，NH)，11.57(s，1H，NH)，11.06(s，2H，NH)，9.77(s，1H，NH)，8.12-7.09(m，8H，Ar-H)，2.05(s，3H，CH3CO)，元素分析(C20H16N4O41·2H2O)，C，H，N。
5-乙酰氨基苯并呋喃-2-羧酸甲酯(9)
将5-硝基苯并呋喃-2-羧酸甲酯(13，0.5克，2.26毫摩尔，制备于5-硝基苯并呋喃-2-羧酸，Trans World化学公司)溶解于乙酸乙酯(40毫升)后加入5％Pd/C(30毫克)。在室温，60英镑/平方英寸的压力下，氢化反应混合物1小时。过滤反应混合物，真空除去溶剂，残留物溶于丙酮(10毫升)。无需进一步纯化即可使用。加入乙酐(0.86毫升，9.1毫摩尔)和二乙酰氨吡啶(20毫克)。在室温下，搅拌反应混合物1小时。加入水(20毫升)。用乙酸乙酯提取混合物，用硫酸钠干燥溶液，真空除去溶剂，获得灰色粉末9(321毫克，产率61％)。分析样品经乙酸乙酯重结晶。mp：158-159℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：10.03(s，1H，NH)，8.19-8.18(d，1H，J＝1.6Hz，Ar-H)，7.76-7.75(d，1H，J＝1.1Hz，Ar-H)，7.65-7.63(d，1H，J＝9.0Hz，Ar-H)，7.55-7.52(dd，2H，J＝2.3，8.9Hz，Ar-H)，3.89(s，1H，OCH3)，2.07(s，3H，CH3CO)，元素分析(C12H11NO4)，C，H，N。
5-乙酰氨基苯并呋喃-2-羧酸(10)
向9(302毫克，1.3毫摩尔)溶于甲醇(20毫升)的溶液中加入3N氢氧化钠(2毫升)。在室温下，将反应物混合物搅拌48小时。蒸发除去溶剂，加水(20毫升)。用20％盐酸中和调节溶液pH至2，过滤沉淀物并用水洗涤。获得灰色粉末10(231毫克，产率81％)。mp：＞300℃。1HNMR(DMSO-d6，ppm)：13.30(s，1H，COOH)，10.01(s，1H，NH)，8.16-8.15(d，1H，J＝1.9Hz，Ar-H)，7.65-7.60(m，2H，Ar-H)，7.53-7.50(dd，2H，J＝1.6，8.4Hz，Ar-H)，2.07(s，3H，CH3CO)，元素分析(C11H9NO40·2H2O)，C，H，N。
5-[[5-(乙酰氨基)-1H-苯并呋喃-2-羰基]氨基]-1H-吲哚-2-羧酸(12)
向2(186毫克，0.91毫摩尔)和16(200毫克，0.91毫摩尔)溶于DMF(3毫升)和THF(3毫升)的溶液中加入EDCI(523毫克)。在室温下，搅拌反应混合物过夜。加入乙酸乙酯(40毫升)。用饱和碳酸钠溶液(10毫升)洗涤混合物，依次用水(20毫升×2)，稀盐酸(10毫升)和水(20毫升)洗涤。用硫酸钠干燥溶液，真空除去溶剂，加入乙醚(20毫升)获得灰色粉末11(270毫克，产率73％)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.84(s，1H，NH)，10.38(s，1H，NH)，10.03(s，1H，NH)，8.15-7.15(m，8H，Ar-H)，4.38-4.32(q，2H，J＝6.9，13.7Hz，CH2CH3)，2.08(s，3H，CH3CO)，1.37-1.33(t，3H，J＝6.8Hz，CH2CH3).MS(离子扩散，M+2H)460。将粉末11(140毫克，0.35毫摩尔)溶于甲醇(15毫升)，DMF(2毫升)，丙醇(10毫升)和水(5毫升)中。无需进一步纯化，将3N氢氧化钠(3毫升)加入溶液中。在室温下，将反应物混合物搅拌过夜。反应混合物蒸发后加水(20毫升)。用20％盐酸中和调节溶液pH至2，过滤沉淀物并用水洗涤。获得灰色粉末12(54毫克，产率41％)。mp：＞300℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：12.80(br，1H，COOH)，11.72(s，1H，NH)，10.36(s，1H，NH)，11.03(s，2H，NH)，8.15-7.10(m，8H，Ar-H)，2.08(s，3H，CH3CO)，元素分析(C20H14N3O51·1H2O)，C，H，N。
2-羟甲基-5-硝基吲哚(13)
氮气保护下，在0℃，向氢化锂铝(1.89克)溶于THF(100毫升)的溶液中滴加浓硫酸(1.27毫升)。搅拌反应混合物20分钟。将1(2克，8.5毫摩尔)的THF(80毫升)溶液加入反应混合物中，搅拌反应混合物30分钟。小心加入冰(10克)后过滤混合物。滤饼用乙酸乙酯(200毫升)洗涤。真空除去溶剂和水。将残留物溶于乙酸乙酯。溶液通过硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤(200毫升)。溶剂通过真空除去，从而获灰色固体7(1.48克，产率90％)。分析样品给乙酸乙酯重结晶。mp：156-157℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.77(brs，1H，NH)，8.49-8.48(d，1H，J＝3.5Hz，Ar-H)，7.97-7.93(dd，1H，J＝2.4，9.0Hz，Ar-H)，7.49-7.46(d，1H，J＝9.2Hz，Ar-H)，6.57(s，1H，Ar-H)，5.42-5.39(t，1H，J＝5.6Hz，OH)，4.66-4.64(d，1H，J＝5.5Hz，CH2OH)，元素分析(C9H8N2O3)，C，H，N。
5-氨基-2-羟甲基吲哚(14)
向13(862毫克，4.49毫摩尔)的甲醇(50毫升)溶液中加入5％Pd/C(50毫克)，并将反应混合物在50英镑/平方英寸的压力下氢化约1小时。将反应混合物用硅藻土过滤并用甲醇洗涤。真空除去溶剂，得到707毫克(产率97％)的灰色粉末14。mp：159-160℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：10.44(s，1H，NH)，7.01-6.99(d，1H，J＝8.5Hz，Ar-H)，6.60(d，1H，J＝2.0Hz，Ar-H)，6.43-6.40(dd，1H，J＝2.4，8.5Hz，Ar-H)，5.97(brs，1H，Ar-H)，5.07(brs-1H，OH)，4.50(brs，2H，CH2OH)，4.30(brs，2H，NH2)，元素分析(C9H10N2O)，C，H，N。
5-乙酰氨基-2-羟甲基吲哚(15)
向冷至0℃的14(200毫克，1.25毫摩尔)，二甲胺吡啶(20毫克)和三乙胺(0.94毫升)的THF溶液中逐滴加入乙酰氯(0.30毫升，4.16毫摩尔)的THF(5毫升)溶液。将反应物混合物升温至室温并搅拌3小时。真空除去THF并加入乙酸乙酯(40毫升)。将溶液用水洗涤(20毫升×2)。用硫酸钠干燥并将溶剂真空除去。残渣溶于甲醇(5毫升)并加入3NNaOH溶液(1毫升)。反应过夜。将反应混合物蒸发并加入水(10毫升)。用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取产物并将溶剂真空除去。产品用乙酸乙酯结晶并用乙醚洗涤。得到128毫克(产率50％)灰色粉末15。mp：161℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：10.84(s，1H，NH)，9.62(s，1H，NH)，7.75(d，1H，J＝2.1Hz，Ar-H)，7.22-7.10(m，2H，Ar-H)，6.20(s，1H，Ar-H)，6.43-6.40(dd，1H，J＝2.4，8.5Hz，Ar-H)，5.18-5.15(t，1H，J＝5.5Hz，OH)，4.57-4.56(d，2H，J＝5.4Hz，CH2OH)，2.01(s，3H，CH3)，元素分析(C11H12N2O2)，C，H，N。
5-乙酰氨基-2-吲哚甲醛(16)
向15(100毫克，0.5毫摩尔)的乙醇(10mL)溶液中加入MnO2(250毫克)并将反应物混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物过滤并乙醇洗涤固体。真空除去溶剂后得到灰色固体16(97毫克，产率100％)。mp：200℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：10.80(s，1H，NH)，9.84(s，1H，NH)，9.81(s，1H，CHO)，8.09(s，1H，Ar-H)，7.38-7.32(m，3H，Ar-H)，2.04(s，3H，CH3)，元素分析(C11H10N2O20.4H2O)，C，H，N。
5-乙酰氨基-2-吲哚丙烯酸(18)
将16(14毫克，0.7毫摩尔)加入到(C6H5)3P＝CHCO2CH3(257毫克，0.77毫摩尔)的甲苯(30毫升)溶液中并将反应混合物加热回流3天。冷却后将溶剂除去。向残液中加入乙酸乙酯(10毫升)并将所得17沉淀过滤。MS(离子扩散)(M+H)259。将未经纯化的17溶于DMF(3毫升)中并加入甲醇(5毫升)，加入3N NaOH溶液(2毫升)后将反应混合物搅拌过夜。除去溶剂并加入水(10毫升)。用20％盐酸中和溶液，将所得沉淀过滤并用水洗涤。得到44毫克(产率26％)黄色的固体18。mp：238-239℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：12.25(brs，1H，COOH)，11.42(s，1H，NH)，9.74(s，1H，NH)，7.88(s，1H，Ar-H)，7.55-7.50(d，1H，J＝1.60Hz，CH＝CH)，7.28(s，2H，Ar-H)，6.80(d，1H，J＝2.0Hz，Ar-H)，6.44-6.40(d，1H，J＝15.8Hz，CH＝CH)，2.03(s，3H，CH3)，元素分析(C13H12N2O30.3H2O)，C，H，N。
5-[(1H-苯并呋喃-2-羰基)氨基]-2-羟甲基吲哚(20)
向2(169毫克，1.04毫摩尔)和苯并呋喃-2-羧酸19(168毫克，1.04毫摩尔)的DMF(2毫升)溶液中加入EDCI(597毫克)。反应混合物于室温下搅拌过夜。向反应混合物中加入乙酸乙酯(40毫升)并用饱和碳酸钠(8毫升)溶液洗涤混合物，然后再用水(20毫升×2)洗。用硫酸钠干燥溶液并真空除去溶剂。用乙酸乙酯作溶剂将产物用快速柱层析法纯化，然后用乙醚结晶得到灰色粉末20(223毫克，产率70％)。mp：164-165℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：1H NMR(DMSO-d6，ppm)：10.96(s，1H，NH)，10.27(s，1H，NH)，7.93-7.29(m，8H，Ar-H)，6.27(s，1H，Ar-H)，5.22-5.19(t，1H，J＝5.6Hz，OH)，4.61-4.60(d，2H，CH2)，元素分析(C18H14N2O3)，C，H，N。
5-[(1H-苯并呋喃-2-羰基)氨基]-2-吲哚甲醛(21)
向20(1 00毫克，0.33毫摩尔)的乙醇(15毫升)溶液中加入MnO2(0.5克)并将反应混合物于室温下搅拌4小时。反应混合物经硅藻土过滤后用乙醇洗涤所得固体。真空除去溶剂后得到灰色固体21(54毫克，产率54％)。用于分析用的样品于乙酸乙酯中重结晶。mp：253℃(dec)。1HNMR(DMSO-d6，ppm)：10.60(brs，1H，NH)，9.85，(s，1H，NH)，8.26(s，1H，CHO)，7.84-7 35(m，9H，Ar-H)，元素分析(C18H12N2O30.3H2O)，C，H，N。
5-[(1H-苯并呋喃-2-羰)基氨基]-2-吲哚丙烯酸甲酯(22)
向(C6H5)3P＝CHCO2CH3(120毫克，0.36毫摩尔)的甲苯(30毫升)溶液中加入21(100毫克，0.33毫摩尔)并将反应混合物加热回流4天。冷却后将溶剂除去。反应产物于丙酮和乙醚溶液中结晶析出。母液经快速柱色谱纯化，用乙酸乙酯和己烷(1/2，v/v)作洗脱液。共得到78毫克的黄色固体22(产率66％)。mp：259-260℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.57(s，1H，NH)，10.38(s，1H，NH)，8.07-7.35(m，9H，Ar-H，CH＝CH)，6.93(s，1H，Ar-H)，6.57-6.53(d，1H，J＝15.8Hz，CH＝CH)，3.74(s，3H，CH3)，元素分析(C21H16N2O4)，C，H，N。
5-[(1H-苯并呋喃-2-羰基)氨基]-2-吲哚丙烯酸(23)
将22(60毫克，0.167毫摩尔)溶解于DMF(1.5毫升)中，然后加入乙醇(3毫升)。向反应混合物中加入3N氢氧化钠溶液(1.5毫升)并将其搅拌过夜。将溶剂除去并加入水(10毫升)。将溶液用20％盐酸中和。沉淀物过滤后用水洗涤。得到黄色固体23(53毫克，产率92％)。mp：268℃(分解)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：12.27(brs，1H，COOH)，11.53(s，1H，NH)，10.38(s，1H，NH)，8.07-7.35(m，9H，Ar-H，CH＝CH)，6.88(s，1H，Ar-H)，6.48-6.44(d，1H，J＝16.2Hz，CH＝CH).元素分析(C20H14N2O40.4H2O)，C，H，N。
5-[(4-羟基)丁酰氨基]吲哚-2-甲酸(25)
向1(2.5克，10.7毫摩尔)的乙酸乙酯(200毫升)溶液中加入10％Pd(于活性炭上)(0.6克)，并将其于室温下氢化1小时。反应混合物经硅藻土过滤后用乙酸乙酯洗涤所得滤饼。有机溶液合并后经真空浓缩。未经进一步纯化，所得的油状产物溶解于丁内酯(20毫升)中并将所得溶液于130℃下搅拌18小时。产物经快速柱色谱分离并用乙酸乙酯和己烷作洗脱剂洗脱后得到黄色固体24(1.37克，产率44％)。1H NMR(DNSO-d6，ppm)：11.72(s，1H NH)，9.73(s，1H，CONH)，8.00-7.07(m，4H，Ar-H)，4.47-4.44(t，1H，J＝4.8Hz，OH)，4.36-4.30(q，2H，J＝7.0，14.2Hz，CH2CH3)，3.47-3.42(q，2H，J＝6.1，11.4Hz，HOCH2)，2.36-2.32(t，2H，J＝7.4Hz，COCH2)，1.77-1.73(m，2H，CH2CH2CH2)，1.36-1.32(t，3H，J＝7.2，CH2CH3)。向产物24(1.0克，3.4毫摩尔)的甲醇(150毫升)溶液中加入3N氢氧化钠(20毫升)并将所得反应混合物于室温下搅拌18小时。溶液经真空浓缩。加水(100毫升)。溶液用20％盐酸中和并将沉淀过滤，获得棕色固体25(723毫克，产率65％)。mp 194-195℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：12.80(brs，1H，COOH)，11.60(s，1H，NH)，9.72(s，1H，CONH)，7.99-7.02(m，4H，Ar-H)，3.47-3.43(t，2H，J＝6.8，HOCH2)，2.37-2.32(t，2H，J＝7.4，COCH2)，1.77-1.73(m，2H，CH2CH2CH2).元素分析(C13H14N2O4)，C，H，N。
5-[(4-(羟基)丁酰氨基)]吲哚-2-甲酸苯甲酯(26)
向反应物7(810毫克，3.1毫摩尔)的DMF(15毫升)溶液中加入碳酸氢钠(1.6克，19毫摩尔)和苄基溴(540毫升，4.5毫摩尔)并将反应混合物于室温下搅拌18小时。反应用水(80毫升)终止后将产物用乙酸乙酯(50毫升×5)萃取。溶液经硫酸钠干燥后于真空下浓缩。反应产物经快速柱色谱分离并经50％己烷/乙酸乙酯溶液洗脱后得到固体26(778毫克，产率71％)。mp 191-192℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.78(s，1H，NH)，9.73(s，1H，CONH)，8.00-7.14(m，9H，Ar-H)，5.37(s，2H，CH2C6H5)，4.46-4.44(t，H，J＝5.2Hz，OH)，3.47-3.42(q，2H，J＝6.6，11.7Hz，HOCH2)，2.36-2.32(t，2H，J＝7.4，COCH2)，1.78-1.71(m，2H，CH2CH2CH2).元素分析(C20H20N2O40.3H2O)，C，H，N。
5-[4-(2，3，4-三-O-乙酰-1-脱氧-β-D-葡萄糖酸甲酯)丁酰氨基]吲哚-2-甲酸(29)
向化合物26(778毫克，2.21毫摩尔)的THF(20毫升)和二氯甲烷(20毫升)溶液中加入分子筛(1克)，并在氮气保护下将温度降至-60℃。依次加入2，3，4-三-O-乙酰-1-溴-1-脱氧-α-D-葡萄糖酸甲酯(27，1.32克，3.3毫摩尔)，三氟甲磺酸银(852毫克，3.3毫摩尔)和碳酸银(922毫克，3.3毫摩尔)并将反应混合物搅拌10分钟。反应温度回升至室温后于黑暗条件下继续搅拌2小时。反应混合物用硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤滤饼。溶液经硫酸钠干燥后真空浓缩。反应产物经快速柱色谱分离并用含50％己烷的乙酸乙酯溶液洗脱后得到白色泡沫状物28。1HNMR(丙酮-d6，ppm)：8.88(s，1H，CONH)，7.95(s，1H，Ar-H)，7.47-7.21(m，9H，Ar-H)，5.86-5.85(d，1H，J＝4.5Hz，sugar C1-H)，5.38(s，2H，CH2C6H5)，5.22-5.21(t，1H，J＝2.4Hz，sugar C2-H)，5.16-5.14(m，1H，sugar C4-H)，4.34-4.30(m，2H，sugar C3-H，C5-H)，3.76(s，3H，COOCH3)，3.63-3.59(m，OCH2)，2.47-2.44(t，2H，J＝6.7Hz，CH2CO)，2.17(s，3H，CH3CO)，2.08(s，3H，CH3CO)，2.03-2.00(m，2H，CH2CH2CH2)，1.75(s，3H，CH3CO)。未经进一步纯化，将所得泡沫状物溶解于乙酸乙酯(15毫升)中，并向其加入10％Pd(于活性炭上)(0.6克)。将反应混合物于室温下氢化1小时。反应混合物用硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤所得固体。将所得有机溶液合并，真空浓缩后得到泡沫状物。然后经石油醚结晶析出29。mp 94-96℃。1HNMR(DMSO-d6，ppm)：11.43(s，1H，NH)，9.69(s，1H，CONH)，7.94-6.91(m，4H，Ar-H)，5.99-5.87(d，1H，J＝4.2Hz，sugar C1-H)，5.09-5.07(t，1H，J＝3.2Hz，sugar C2-H)，5.05-5.02(m，1H，sugar C4-H)，4.42-4.40(d，1H，J＝6.2Hz，sugar C5-H)，4.36-4.35(t，1H，J＝3.3Hz，sugar C3-H)，3.69(s，3H，COOCH3)，3.51-3.48(t，2H，J＝6.4Hz，OCH2)，2.37-2.33(t，2H，J＝7.6Hz，CH2CO)，2.05(s，3H，CH3CO)，2.02(s，3H，CH3CO)，1.82-1.79(m，2H，CH2CH2CH2)，1.65(s，3H，CH3CO)。
5-[特丁氧羰基氨基]-吲哚-2-甲酸乙酯(30)
向化合物1(2.5克，10.7毫摩尔)的乙酸乙酯(200毫升)溶液中加入10％Pd(于活性炭上)(0.2克)并于室温下将反应混合物氢化1小时。反应混合物用硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤所得滤饼。将所得有机溶液合并并真空浓缩。将残物溶解于乙酸乙酯(150毫升)中并用二特丁基二碳酸酯(5.8克，26.6毫摩尔)处理，然后将反应混合物于室温下搅拌18小时。反应经水(40毫升)终止并用乙基乙酸盐分离。溶液用硫酸钠干燥，真空浓缩后得到黄色固体30(2.61克，产率80％)。mp 190-192℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.69(s，1H，NH)，9.13(s，1H，CONH)，7.79-7.04(m，4H，Ar-H)，4.35-4.30(q，2H，J＝6.8，13.9Hz，CH2CH3)，1.48(s，9H，C(CH3)3)，1.35-1.31(t，3H，J＝6.7，CH2CH3).元素分析(C16H20N2O4)，C，H，N。
5-[特丁氧羰基氨基]-吲哚-2-甲酸乙酯(31)
向化合物30(2.61克，8.6毫摩尔)的乙酸乙酯(200毫升)溶液中加入3N氢氧化钠溶液(50毫升)并将反应混合物于室温下搅拌18小时。除去溶剂并加入水(100毫升)。溶液用20％盐酸中和。过滤沉淀物得到黄色固体31(2.03克，产率86％)。mp 192-193℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：12.83(brs，1H，COOH)，11.69(s，1H，NH)，9.13(s，1H，CONH)，7.79-7.04(m，4H，Ar-H)，1.48(s，9H，C(CH3)3)，元素分析(C14H16N2O40.5H2O)，C，H，N。
5-[特丁氧羰基氨基]-吲哚-2-甲酸苯甲酯(32)
化合物31(2.03克，7.4毫摩尔)溶于DMF(50ml)的溶液用碳酸氢钠(1.8克，21.4毫摩尔)和溴化苄(4毫升，33.6毫摩尔)处理。反应物在室温下搅拌18小时。加水(50毫升)后用乙酸乙酯萃取(80毫升×3)。溶液经硫酸钠干燥，真空浓缩后获得白色固体化合物32(2.27克，产率84％)。mp：180-182℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.93(s，1H，NH)，7.51-7.02(m，9H，Ar-H)，5.38(s，2H，CH2C6H5)，1.48(s，9H，C(CH3)3)，元素分析(C21H22N2O40.25H2O)，C，H，N。
5-[[5-[4-(羟基)丁酰氨基]-1H-吲哚-2-羰基]氨基]-1H-吲哚-2-甲酸苯甲酯(34)
化合物33(280毫克，0.77毫摩尔，经32制得)的DMF(1毫升)溶液用25(200毫克，0.76毫摩尔)和1-(3-双甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI，440毫克，2.3毫摩尔)处理。反应物在室温下搅拌18小时。加水(20毫升)后用乙酸乙酯(50毫升×3)提取。有机层用硫酸钠干燥并经真空浓缩。产物用快速柱层分离并用乙酸乙酯溶液洗脱后得到淡黄色粉末34。mp：242-243℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.87(s，1H，NH)，11.55(s，1H，NH)，10.08(s，1H，CONH)，9.71(s，1H，CONH)，8.13-7.22(m，13H，Ar-H)，5.39(s，2H，CH2C6H5)，4.47-4.45(t，1H，J＝5.1Hz，OH)，3.48-3.44(q，2H，J＝6.4，11.9Hz，HOCH2)，2.38-2.33(t，2H，J＝7.5Hz，COCH2)，1.78-1.74(m，2H，CH2CH2CH2)。
5-[[5-[4-(羟基)丁酰氨基]-1H-吲哚-2-羰基]氨基]-1H-吲哚-2-羧酸(35)
34(230mg，0.45毫摩尔)的DMF(1毫升)和甲醇(20毫升)的溶液用10％Pd(于活性炭上)(20毫克)于室温下氢化处理1小时。反应混合物用硅藻土过滤并用甲醇洗涤滤饼。将所得有机溶液合并及真空浓缩后得到白色固体35(160毫克，产率84％)。mp 249-251℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：12.75(s，1H，COOH)，11.68(s，1H，NH)，11.54(s，1H，NH)，10.05(s，1H，CONH)，9.70(s，1H，CONH)，8.12-7.09(m，8H，Ar-H)，4.47-4.44(t，1H，J＝5.4Hz，OH)，3.49-3.44(q，2H，J＝6.4，11.0Hz，HOCH2)，2.38-2.34(t，2H，J＝7.4Hz，COCH2)，1.80-1.74(m，2H，CH2CH2CH2)。
5-[[5-[4-(2，3，4-三-O-乙酰-1-脱氧-β-D-葡萄糖甲酯)]丁酰氨基]-1H-吲哚-2-羰基]氨基]-1H-吲哚-2-甲酸苯甲酯(37)
加热回流化合物32(280毫克，0.77毫摩尔)的以氯化氢饱和的乙酸乙酯(20毫升)溶液30分钟。悬浮液用真空浓缩后获得一固体，此固体用三乙胺(6毫升)的乙酯(20毫升)溶液处理。反应混合物在室温下搅拌10分钟并过滤。溶液浓缩后得到33。未经纯化的33溶于DMF(1毫升)，加入36(200毫克，0.35毫摩尔)，1，3-双环己烷碳二亚胺(DCC，214毫克，1.04毫摩尔)和1-羟基苯并三唑水合物(HOBT，140毫克，1.04毫摩尔)。反应物在室温搅拌2小时后，加水(10毫升)稀释并用乙酸乙酯(50毫升×3)提取。溶液用硫酸钠干燥并经真空浓缩。产物用快速色谱分离并用乙酸乙酯溶液洗脱后得到黄色固体37(230毫克，产率80％)。mp 143-145℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.87(s，1H，NH)，11.56(s，1H，NH)，10.08(s，1H，CONH)，9.73(s，1H，CONH)，8.14-7.22(m，13H，Ar-H)，5.89-5.88(d，1H，J＝4.4Hz，sugar C1-H)，5.39(s，2H，CH2C6H5)，5.09-5.08(t，1H，J＝2.9Hz，sugar C2-H)，5.05-5.02(m，1H，sugar C4-H)，4.43-4.41(d，1H，J＝6.7Hz，sugar C5-H)，4.37-4.35(t，1H，J＝3.4Hz，sugar C3-H)，3.69(s，3H，COOCH3)，3.52-3.49(t，2H，J＝6.4Hz，OCH2)，2.39-2.34(t，2H，J＝7.7Hz，COCH2)，2.05(s，3H，CH3CO)，2.03(s，3H，CH3CO)，1.84-1.80(m，2H，CH2CH2CH2)，1.66(s，3H，CH3CO)。
5-[[5-[4-(2，3，4-三-O-乙酰-1-脱氧-β-D-葡萄糖酸甲酯)丁酰氨基]-1H-吲哚-2-羰基]氨基]-1H-吲哚-2-羧酸(38)
向37(230毫克，0.28毫摩尔)的乙酸乙酯(35毫升)溶液中加入10％Pd(于活性炭上)(20毫克)并将反应物于室温下氢化1小时。反应混合物用C-盐过滤并用乙酸乙酯洗涤所得固体。将所得有机溶液合并及真空浓缩后得到油状物。此油状物在乙醚中结晶析出产物38(176毫克，产率86％)。mp 76-79℃。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：12.81(brs，1H，COOH)，11.67(s，1H，NH)，11.54(s，1H，NH)，10.05(s，1H，CONH)，9.72(s，1H，CONH)，8.12-7.08(m，8H，Ar-H)，5.89-5.88(d，1H，J＝4.7Hz，sugar C1-H)，5.09-5.08(t，1H，J＝3.0Hz，sugar C2-H)，5.05-5.03(m，1H，sugar C4-H)，4.42-4.41(d，1H，J＝6.6Hz，sugar C5-H)，4.37-4.35(t，1H，J＝3.2Hz，sugar C3-H)，3.69(s，3H，COOCH3)，3.52-3.49(t，2H，J＝5.8Hz，OCH2)，2.39-2.34(t，2H，J＝7.8Hz，COCH2)，2.05(s，3H，CH3CO)，2.03(s，3H，CH3CO)，1.84-1.80(m，2H，CH2CH2CH2)，1.66(s，3H，CH3CO)。
5-[[5-[[5-[4-(2，3，4-三-O-乙酰-1-脱氧-β-D-葡萄糖酸甲酯)丁酰氨基]-1H-吲哚-2-羰基]氨基]-1H-吲哚-2羰基]氨基]-1H-吲哚-2-甲酸苯甲酯(39)
39是由和合成37的相似方法合成的。39为黄色固体(产率98％)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.88(s，1H，NH)，11.66(s，1H，NH)，11.58(s，1H，NH)，10.12(s，1H，CONH)，10.07(s，1H，CONH)，9.73(s，1H，CONH)，8.16-7.23(m，17H，Ar-H)，5.89-5.88(d，1H，J＝4.5Hz，sugar C1-H)，5.40(s，2H，CH2C6H5)，5.09-5.08(t，1H，J＝2.5Hz，sugar C2-H)，5.05-5.04(m，1H，sugar C4-H)，4.43-4.41(d，1H，J＝6.6Hz，sugar C5-H)，4.37-4.35(t，1H，J＝3.4Hz，sugar C3-H)，3.69(s，3H，COOCH3)，3.52-3.49(t，2H，J＝6.4Hz，OCH2)，2.39-2.34(t，2H，J＝7.7Hz，COCH2)，2.05(s，3H，CH3CO)，2.03(s，3H，CH3CO)，1.84-1.80(m，2H，CH2CH2CH2)，1.66(s，3H，CH3CO)。
5-[[5-[[5-[4-(2，3，4-三-O-乙酰-1-脱氧-β-D-葡萄糖酸甲酯)丁酰氨基]-1H-吲哚-2-羰基]氨基]-1H-吲哚-2-羰基]氨基]-1H-吲哚-2-羧酸(40)
40的合成过程和38的合成过程相似，40为黄色固体(产率86％)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.66(brs，1H，NH)，11.60(s，1H，NH)，11.47(s，1H，NH)，10.09(s，1H，CONH)，10.08(s，1H，CONH)，9.73(s，1H，CONH)，8.14-6.97(m，12H，Ar-H)，5.89-5.88(d，1H，J＝4.4Hz，sugar C1-H)，5.10-5.08(t，1H，J＝3.1Hz，sugar C2-H)，5.06-5.03(m，1H，sugar C4-H)，4.43-4.41(d，1H，J＝6.6Hz，sugar C5-H)，4.38-4.36(t，1H，J＝3.3Hz，sugar C3-H)，3.69(s，3H，COOCH3)，3.54-3.51(t，2H，J＝6.3Hz，OCH2)，2.39-2.35(t，2H，J＝7.8Hz，COCH2)，2.05(s，3H，CH3CO)，2.03(s，3H，CH3CO)，1.86-1.80(m，2H，CH2CH2CH2)，1.66(s，3H，CH3CO)。
例2
3-[[5-(乙酰氨基)-1H-吲哚-2′-羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-198)
将EDCI(58毫克)加入到41(23毫克，0.1毫摩尔)和化合物4(23毫克，0.11毫摩尔)的DMF(1毫升)溶液中。41是用已发表的方法合成的(Aristoff，et al.，J.Med.Chem.，1993，1956)。反应混合物在室温下搅拌过夜。产物用快速柱层分离并用乙酸乙酯溶液洗脱后得到灰色粉状产物YW-198(9.5毫克，产率22％)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.57(s，1H，NH)，10.52(s，1H，OH)，9.89(s，1H，NH)，8.25-7.23(m，9H，Ar-H)，4.90-4.85(dd，1H，J＝9.6，11.0Hz，NHH)，4.75-4.71(dd，1H，J＝1.8，10.6Hz，NHH)，4.35-4.28(m，1H，ClCH2CHCH2)，4.14-4.10(dd，1H，J＝3.4，11.1Hz，CHHCl)，3.97-3.92(dd，1H，J＝8.0，11.1Hz，CHHCl)，2.12(s，3H，CH3)。
例3
3-[[5-[[5-(乙酰氨基)-1H-吲哚-2-羰基]氨基]-1H-吲哚-2-基]羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]-吲哚(YW-200)
YW-200的合成过程和YW-198的合成相似。不同的是使用6得到产物，为灰色粉末(产率80％)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.63(s，1H，NH)，11.61(s，1H，NH)，10.5 1(s，1H，OH)，10.12(s，1H，NH)，9.84(s，1H，NH)，8.38-7.29(m，13H，Ar-H)，4.92-4.86(dd，1H，J＝9.6，11.0Hz，NHH)，4.77-4.74(dd，1H，J＝1.8，10.6Hz，NHH)，4.36-4.28(m，1H，ClCH2CHCH2)，4.15-4.11(dd，1H，J＝3.0，10.8Hz，CHHCl)，3.98-3.93(dd，1H，J＝7.9，11.0Hz，CHHCl)，2.04(s，3H，CH3)。
例4
3-[[5-[[5-(乙酰氨基)-1H-苯并呋喃-2-羰基]氨基]-1H-吲哚-2-羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]-吲哚(YW-201)。
YW-201的合成过程相同于YW-198，不同的是用12代替4。产物为灰色粉末(产率53％)。1HNMR(DMSO-d6，ppm)：11.67(s，1H，NH)，10.52(s，1H，OH)，10.50(s，1H，NH)，8.45-7.31(m，14H，Ar-H)，4.93-4.87(t，1H，J＝11.0Hz，NHH)，4.77-4.74(dd，1H，J＝2.0，11.0Hz，NHH)，4.36-4.28(m，1H，ClCH2CHCH2)，4.15-4.11(dd，1H，J＝3.6，11.1Hz，CHHCl)，3.99-3.93(dd，1H，J＝7.8，11.1Hz，CHHCl)。
例5
N2-[[5-[[5-(乙酰氨基)-1H-苯并呋喃-2-基]羰基]氨基]-1H-吲哚-2-基]羰基]-1，2，9，9a-四氢环丙烷并[c]-苯并[e]吲哚-4-酮(YW-213)
将YW-201溶解于乙腈(3毫升)，三乙胺(1毫升)溶液及水(1毫升)中，并在室温下搅拌1小时。溶剂经真空除去后，产物用快速柱层分离并用乙酸乙酯和己烷(3/1，v/v)溶液洗脱后得到灰色固体8.7毫克。1HNMR(DMSO-d6，ppm)：11.66(s，1H，NH)，10.51(s，1H，OH)，10.46(s，1H，NH)，10.10(s，1H，NH)，8.42-7.30(m，13H，Ar-H)，4.92-4.88(t，1H，J＝10.2Hz，NHH)，4.77-4.74(dd，1H，J＝1.8，10.9Hz，NHH)，4.36-4.28(m，1H，ClCH2CHCH2)，4.15-4.11(dd，1H，J＝2.7，10.7Hz，CHHCl)，3.98-3.93(dd，1H，J＝7.7，11.0Hz，CHHCl)。
例6
3-[[5-(乙酰氨基)-1H-吲哚-2-基]丙烯酰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-202)
YW-202的合成过程和YW-198的相似，不同的是用化合物18，产物为灰色粉状(产率13％)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.69(s，1H，NH)，10.52(s，1H，OH)，9.82(s，1H，NH)，8.28-6.90(m，11H，Ar-H)，4.55-4.54(d，1H，J＝4.7Hz，NHH)，4.27-4.23(m，2H，NHH，ClCH2CHCH2)，4.12-4.08(dd，1H，J＝3.1，11.0Hz，CHHCl)，3.91-3.85(dd，1H，J＝8.8，11.1Hz，CHHCl)，3.12(s，3H，CH3)。
例7
3-[[5-[(1H-苯并呋喃-2-基丙烯酰基]-1H-吲哚-2-基]羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-215)
YW-215的合成过程和YW-198的相似，不同的是用化合物23，产物为灰色粉末(产率55％)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.82(s，1H，NH)，11.68(s，1H，NH)，10.51(s，1H，OH)，10.45(s，1H，NH)，8.43-6.98(m，16H，Ar-H)，4.90-4.87(dd，1H，J＝9.2，11.1Hz，NHH)，4.77-4.74(dd，1H，J＝2.2，10.9Hz，NHH)，4.36-4.28(m，1H，ClCH2CHCH2)，4.15-4.11(dd，1H，J＝3.3，11.3Hz，CHHCl)，3.99-3.93(dd，1H，J＝8.1，10.8Hz，CHHCl)。
例8
3-[[5-[(4-羟基)丁酰氨基]-1H-吲哚-2′-基]羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-231)
YW-231的合成过程和YW-198的相似，不同的是用化合物25，产物为黄色固体(产率36％)。1H NMR(丙酮-d6，ppm)：10.73(s，1H，NH)，9.27(s，1H，Ar-H)，9.08(s，1H，CONH)，8.27-7.20(m，9H，Ar-H)，4.84-4.80(m，2H，NCH2)，4.33-4.26(m，1H，ClCH2CH)，4.09-4.05(dd，1H，J＝3.6，11.2Hz，ClCHH)，3.85-3.79(dd，1H，J＝8.5，11.2Hz，ClCHH)，3.73-3.69(t，1H，J＝5.6，CH2OH)，3.66-3.61(q，2H，J＝5.9，11.5Hz，CH2OH)，2.51-2.47(t，2H，J＝7.1Hz，COCH2)，1.92-1.89(m，2H，CH2CH2CH)。
例9
3-[[5-[4-(2，3，4-三-O-1-脱氧-β-D-葡萄糖酸甲酯]-丁酰氨基]-1H-吲哚-2′-基]羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-247)
YW-247的合成过程和YW-198的相似，不同的是用化合物29，产物为黄色固体(产率12％)。1H NMR(DMF-d6，ppm)：11.56(s，1H，NH)，10.5(brs，1H，OH)，9.84(s，1H，CONH)，8.25-7.23(m，9H，Ar-H)，5.99-5.98(d，1H，J＝4.1Hz，sugar C1-H)，5.22-5.20(t，1H，J＝2.9Hz，sugar C2-H)，5.15-5.13(m，1H，sugar C4-H)，4.90-4.84(t，1H，J＝8.6，NCHH)，4.75-4.71(dd，1H，J＝1.1，12.2Hz，NCHH)，4.51-4.48(m，2H，sugar C3-H，C5-H)，4.33-4.28(m，1H，ClCH2CH)，4.14-4.10(dd，1H，J＝2.6，10.6Hz，ClCHH)，3.96-3.91(dd，1H，J＝7.8，10.9Hz，ClCHH)，3.77(s，3H，COOCH3)，3.63-3.59(t，2H，J＝6.9Hz，OCH2)，2.50-2.46(t，2H，J＝7.1Hz，COCH2)，2.10(s，3H，CH3CO)，2.08(s，3H，CH3CO)，1.96-1.90(m，2H，CH2CH2CH2)，1.72(s，3H，CH3CO)。
例10
3-[[5-[[5-[4-(羟基)丁酰氨基]-1H-吲哚-2-基]羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-254)
YW-254的合成过程和YW-198的相似，不同的是用化合物35，产物为黄色固体(产率19％)。1H NMR(DMF-d6，ppm)：11.74(s，1H，NH)，11.62(s，1H，NH)，10.47(s，1H，Ar-OH)，10.44(s，1H，CONH)，9.89(s，1H，CONH)，8.43-7.06(m，13H，Ar-H)，4.95-4.86(m，1H，NCHH)，4.76-4.72(m，1H，NCHH)，4.60-4.54(brs，1H，CH2OH)，4.34-4.28(m，1H，ClCH2CH)，4.15-4.11(dd，1H，J＝3.2，10.7Hz，ClCHH)，3.98-3.93(dd，1H，J＝8.2，11.1Hz，C`CHH)，3.66-3.64(m，2H，CH2OH)，2.52-2.48(t，2H，J＝7.4Hz，COCH2)，1.92-1.85(m，2H，CH2CH2CH2)。
例11
3-[[5-[[5-[4-(2，3，4-三-O-乙酰-1-脱氧-β-D-葡萄糖酸甲酯)-丁酰氨基]-1H-吲哚-2-基]羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-249)
YW-249的合成过程和YW-198的相似，不同的是用化合物38，产物为黄色固体(产率15％)。1H NMR(DMF-d6，ppm)：11.61(s，2H，2 NH)，10.20(s，1H，CONH)，9.79(s，1H，CONH)，8.38-7.27(m，13H，Ar-H)，5.99-5.98(d，1H，J＝4.6Hz，sugar C1-H)，5.22-5.20(t，1H，J＝3.1Hz，sugar C2-H)，5.16-5.13(m，1H，sugar C4-H)，4.91-4.86(t，1H，J＝8.7Hz，NCHH)，4.77-4.73(dd，1H，J＝1.8，11.4Hz，CHHCl)，4.51-4.48(m，2H，sugar C3-H，C5-H)，4.34-4.32(m，1H，ClCH2CH)，4.15-4.11(dd，1H，J＝3.4，11.2Hz，ClCHH)，3.63-3.59(t，2H，J＝6.6Hz，OCH2)，2.50-2.46(t，2H，J＝7.3Hz，COCH2)，2.10(s，3H，CH3CO)，2.08(s，3H，CH3CO)，1.94-1.90(m，2H，CH2CH2CH2)，1.72(s，3H，CH3CO)。
例12
3-[[5-[[5-[4-(2，3，4-三-O-乙酰-1-脱氧-β-D-葡萄糖酸甲酯]-丁酰氨基]-1H-吲哚-2-基]羰基]氨基]-1H-吲哚-2-基]羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-258)
YW-258的合成过程和YW-198的相似，不同的是用化合物40，产物为黄色固体(产率8％)。1H NMR(DMF-d6，ppm)：11.66(s，1H，NH)，11.62(s，1H，NH)，11.56(s，1H，NH)，10.56(brs，1H，OH)，10.25(s，1H，CONH)，10.18(s，1H，CONH)，9.82(s，1H，CONH)，8.37-7.29(m，17H，Ar-H)，5.99-5.98(d，1H，J＝4.4Hz，sugarC1-H)，5.22-5.20(t，1H，J＝3.1Hz，sugar C2-H)，5.15-5.12(m，1H，sugarC4-H)，4.92-4.87(t，1H，J＝8.8Hz，NCHH)，4.77-4.72(dd，1H，J＝1.8，11.5Hz，NCHH)，4.51-4.48(m，2H，sugar C3-H，C5-H)，4.34-4.32(m，1H，ClCH2CH)，4.16-4.12(dd，1H，J＝3.4，11.3Hz，ClCHH)，3.99-3.93(dd，1H，J＝8.0，11.2Hz，ClCHH)，3.77(s，3H，COOCH3)，3.63-3.59(t，2H，J＝6.7Hz，OCH2，partially obscured by H2O)，2.50-2.46(t，2H，J＝6.8Hz，COCH2)，2.11(s，3H，CH3CO)，2.08(s，3H，CH3CO)，1.95-1.91(m，2H，CH2CH2CH2)，1.73(s，3H，CH3CO)。
例13
3-[[5-[[5-[[5-[4-(羟基)丁酰胺基]-1H-吲哚-2-羰基]氨基-1H-吲哚-2-羰基]氨基-1H-吲哚-2-基]羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-259)
向YW-258(6.5毫克，0.006毫摩尔)的DMF(2毫升)溶液中加入被氯化氢(0.25毫升)饱和的乙酸乙酯(40毫升)溶液。将其在室温下搅拌3小时。真空除去溶剂后用乙醚洗涤产物得到黄色固体YW-259(4.2毫克，产率91％)。1H NMR(DMF-d6，ppm)：11.77(s，1H，NH)，11.67(s，1H，NH)，11.62(s，1H，NH)，10.54(s，1H，Ar-OH)，10.31(s，1H，CONH)，10.23(s，1H，CONH)，9.82(s，1H，CONH)，8.40-7.29(m，16H，Ar-H)，6.54(s，1H，Ar-H)，4.93-4.87(t，1H，J＝8.5Hz，NCHH)，4.77-4.74(dd，1H，J＝1.6，11.1Hz，NCHH)，4.56-4.53(t，1H，J＝4.9Hz，CH2OH)，4.36-4.32(m，1H，ClCH2CH)，4.15-4.11(dd，1H，J＝3.5，11.1Hz，ClCHH)，3.98-3.93(dd，1H，J＝7.9，11.2Hz，ClCHH)，3.63-3.57(q，2H，J＝6.1，11.4Hz，CH2OH)，2.51-2.47(t，2H，J＝7.5Hz，COCH2)，1.91-1.87(m，2H，CH2CH2CH2)。
例14
3-[(5-氨基-1H-吲哚-2′-基)羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-242)
将5-硝基吲哚-2-甲酸乙酯(18毫克，87毫摩尔)(Eastman化学公司)用氢氧化钠水解，然后将水解产物用盐酸中和后得到5-硝基吲哚-2-甲酸。再将后者与41偶合。反应混合物于室温下搅拌过夜，用薄层层析法分离并用含50％己烷的乙酸乙酯溶液作展开剂。产物未经进一步纯化直接溶解于DMF(0.5毫升)中。向溶液中依次加入乙酸乙酯(5毫升)和10％Pd/C(10毫克)并将其于室温和一个大气压下氢化1小时。反应混合物过滤后用甲醇(20毫升)洗涤滤饼。真空去除溶剂后加入乙醚。将固体过滤并洗涤后得到产物YW-242(13毫克，产率44％)。mp＞300℃。1H NMR(DMF-d7，ppm)：11.16(brs，1H，NH)，10.46(s，1H，OH)，8.24-6.81(m，9H，Ar-H)，4.84-4.79(dd，1H，J＝9.3，11.1Hz，NHH)，4.71-4.67(m，3H，NCHH，NH2)，4.31-4.21(m，1H，CH2ClCHCH2N)，4.18-4.12(dd，1H，J＝1.0，18.7Hz，ClCHH)，3.93-3.88(dd，1H，J＝7.9，11.2Hz，ClCHH)。
例15
3-[(5-(维生素H-氨基)-1H-吲哚-2′-基]羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-235)
将N-羟基琥珀酰亚氨基维生素H(5.2毫克，15.3毫摩尔)加到YW-242(2毫克，5.1毫摩尔)于DMF(0.2毫升)的溶液中，在常温下将反应混合物搅拌48小时。产物用薄层层析法分离，用甲醇和乙酸乙酯(4/1，v/v)作展开液得到灰色固体YW-235(1.5毫克，产率48％)。1H NMR(DMF-d7，ppm)：11.56(brs，1H，NH)，10.55(s，1H，OH)，9.91(s，1H，NH)，8.25-7.21(m，9H，Ar-H)，6.32(s，1H，biotin NH)，6.24(s，1H，biotin NH)，4.90-4.85(t，1H，J＝11.0Hz，NHH)，4.74-4.70(dd，1H，J＝2.0，11.0Hz，NHH)，4.49-4.45(m，1H，biotin H)，4.32-4.28(m，2H，ClCH2CHCH2，biotin H)，4.14-4.10(dd，1H，J＝3.6，11.1Hz，CHHCl)，3.96-3.91(dd，1H，J＝7.8，11.1Hz，CHHCl)，3.20-3.27(m，1H，biotin H)，2.45-2.41(t，2H，J＝7.7Hz，COCH2)，1.8-1.5(m，6H，CO(CH2)3)。
例16
头孢金素-YW-242前药(YW-285)
将YW-242(9毫克)溶于DMF(0.3毫升)中，并用特丁基-7b-(2-(噻吩-2-基)乙酰氨基)-3-[[[4-硝基苯氧基)羰基]氧基]甲基]-3-头孢-4-羧酸酯-1-亚砜(15毫克)，后者是根据已知方法合成的(图10，Rodrigues，等，Gancer Res.1995，55：63)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，经薄层层析分离并用乙烷和乙酸乙酯(3/1，v/v)作展开液后获得12毫克产物。将5毫克产物溶解于DMF(0.2毫升)中并依次加入二氯甲烷(1毫升)和三氟乙酸(1毫升)。反应混合物在室温下搅拌2小时。真空除去溶剂后加入乙醚。将产物过滤并用乙醚洗涤得到固体YW-285(3.7毫克)。1H NMR(DMF-d7，ppm)：11.63(s，1H)，11.56(s，1H)，11.50(brs，1H)，8.28-8.23(m，1H)，8.17-8.12(m，1H)，8.07-8.01(m，1H，partially obscured by DMF)，7.94-7.91(d，1H，J＝8.5Hz)，7.58-7.52(m，2H)，7.46-7.38(m，3H)，7.24(s，1H)，7.05-6.99(m，2H)，6.07-6.03(dd，1H，J＝4.8，9.0Hz)，5.40-5.37(d，1H，J＝13.2Hz)，5.08-5.06(d，1H，J＝4.4Hz)，4.90-4.0(m，1H)，4.74-4.70(d，1H，J＝13Hz)，4.35-4.27(m，1H)，4.19-3.75(m，6H)。
例17
1，2，9，9a-2-[[5-[(1H-苯并呋喃-2-基羰基)氨基]-1H-吲哚-2-基]羰基]四氢环丙烷并[c]-苯并[e]吲哚-4-酮(YW-211)
将YW-199(10毫克)溶解于DMF(0.5毫升)中并依次加入三乙胺(0.5毫升)，水(0.5毫升)及乙腈(0.5毫升)。在室温下将反应混合物搅拌30分钟。真空除去溶剂后用水洗涤。加入乙醚并过滤而得到产物YW-211(7毫克)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.71(s，1H，NH)，10.32(s，1H，NH)，8.21-6.88(m，14H，Ar-H)，4.66-4.62(dd，1H，J＝4.6，10.0Hz，NHH)，4.52-4.49(d，1H，J＝10.2Hz，NHH)，3.05-2.95(m，1H)，1.79-1.75(dd，1H，J＝4.4，7.9Hz)，1.72-1.70(t，1H，J＝4.8Hz)。
例18
1，2，9，9a-2-[5-[[5-(乙酰氨基)-1H-苯并呋喃-2-羰基)]氨基]-1H-吲-2-基]羰基]四氢环丙环并[c]-苯并[e]吲哚4-酮(YW-213)
YW-213的合成过程相同于YW-211，不同的是用YW-201作反应物。产物为灰色固体(产率85％)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：11.77(s，1H，NH)，11.45(s，1H，NH)，10.28(s，1H，NH)，8.21-6.96(m，13 HAr-H)，4.66-4.61(dd，1H，J＝4.6，10.0Hz，NHH)，4.52-4.49(d，1H，J＝10.3Hz，NHH)，3.05-2.95(m，1H)，2.08(s，3H)，1.77-1.73(dd，1H，J＝4.4，7.9Hz)，1.72-1.70(t，1H，J＝4.8Hz)。
例19
3-[(4-氨基-1-甲吡咯-2-基羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-284)
YW-286的合成过程相同于YW-198。不同的是1-甲基-5-硝基吡咯-2-羧酸作反应物(产率85％)。将YW-286(20毫克)溶于DMF(0.5毫升)并依次加入乙酸乙酯(5毫升)和10％Pd/C(10毫克)。在常温和一个大气压下将反应混合物氢化1小时。反应混合物过滤后用甲醇(20毫升)洗涤滤饼。真空除去溶剂后加入乙醚。将产物过滤得到YW-284(15毫克)。1H NMR(DMSO-d6，ppm)：10.26(s，1H，OH)，8.10-6.17(m，7H，Ar-H)，4.51-4.41(dd，1H，J＝8.5，11.6hz，NHH)，4.33-4.30(d，1H，J＝9.9Hz，NCHH)，4.02-3.93(m，3H，CH2ClCHCH2N，ClCHH)，3.76-3.66(m，4H，ClCHH，CH3)。
例20
3-[(4-乙酰氨基-1-甲基吡咯-2-基)羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-161)
YW-161的合成过程相同于YW-198。不同的是用5-乙酰氨基-1-甲基吡咯-2-羧酸作反应物(产率25％)。1H NMR(DMF-d7，ppm)：10.49(S，1H，OH)，9.88(s，1H，NH)，8.23-6.64(m，7H，Ar-H)，4.58-4.52(dd，1H，J＝8.5，11.6Hz，NHH)，4.47-4.30(d，1H，J＝9.9Hz，NCHH)，4.15-4.03(m，3H，CH2ClCHCH2N，ClCHH)，3.88-3.80(m，4H，ClCHH，CH3)，2.04(s，3H，COCH3)。
例21
3-(4-丁酰氨基-1-甲基-2-吡咯丙烯酰氧基羰基]-1-(氯甲基)-5-羟基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚(YW-222)
YW-222的合成过程相同于YW-198。不同的是4-丁酰氨基-N-甲基-2-吡咯丙烯羧酸作反应物(产率20％)。1H NMR(DMF-d7，ppm)：10.46(s，1H，OH)，9.77(s，1H，NH)，8.22-6.81(m，9H，Ar-H，CH＝CH)，4.54-4.51(m，2H，NCH2)，4.28-4.20(brs，1H，CH2ClCHCH2N)，4.10-4.06(dd，1H，J＝3.4，11.2Hz，ClCHH)，3.91-3.85(dd，1H，J＝8.6，11.1Hz，ClCHH)，3.79(s，3H，NCH3)，2.31-2.27(t，2H，J＝14.6Hz，CH3CH2CH2)，1.69-1.63(m，2H，CH3CH2CH2)，0.95-0.91(t，3H，J＝14.6Hz，CH3CH2CH2)。
例22
对癌细胞的毒性
试验一些新化合物对癌细胞的毒性。它们的IC50是由U937细胞来测定的。试验是在96孔平底酶标板里进行的并重复三次。5000个在RPMI-1640及10％FCS培养液中的细胞被分别接种于每个孔中。然后加入药物并将总体积调整至每孔0.2毫升。细胞培养的时间是48小时，但24小时后加入3H-腺嘧啶。细胞收获后用β射线测定仪测定放射性。实验结果用对细胞抑制的百分比来表示。实验结果见图9。
例23
YW-242-单克隆抗体轭合物的合成
YW-242是通过结合DNA的小沟中而起抗肿瘤作用的，因此该药物必须在进入细胞后能从其单克隆抗体轭合物中释放出来。一个二硫醚键可以满足此种要求，所以在此用它来连接YW-242和单克隆抗体3A5(见图11)。
a.单克隆抗体的疏基化。
单克隆抗体3A5是根据已知的方法制备而成(Li等，ActaPharmaceutica Sinica 1993，28：260)。向3-(2-吡啶二硫代)丙酸和N-羟基琥珀酰亚氨酯的乙醇溶液(50μl)中加入单克隆抗体3A5(2毫克)的PBS(2毫升)溶液。反应混合物在37℃下培养30分钟。然后冷却至0℃并加入二硫化苏糖醇(0.45毫克在50μl PBS里)。将反应物在4℃下进行15分钟。疏基化的单克隆抗体通过胶过滤层析(Sephadex-G 25)分离获得。
b.YW-242的疏基化
将YW-242(0.5毫克于83μl的DMF里)加入SPDP(5.3毫克，1摩尔，相当于YW-242在0.263毫升的乙醇里)并将反应在37℃下进行30分钟。产物未经进一步纯化而直接使用。
c.单克隆抗体和药物的轭合
将疏基化的YW-242加入已疏基化的单克隆抗体的PBS溶液中。反应混合物在4℃下反应过夜。然后在PBS(1000毫升)中透析6小时(PBS需每2小时更换)。结合于单克隆抗体的药量用UV吸收来测定。每个抗体轭合有2.7个药物分子。
例24
YW-242-单克隆抗体轭合物对肝肿瘤细胞HepG2的毒性试验研究
进行轭合物体外抗肝肿瘤细胞HepG2性试验。对细胞繁殖的IC50值是通过测定3H胸腺嘧啶的摄取而获得的。向96孔培养板的每孔中加入含有4万个细胞的含在10％FCS的DMEM培养液0.1毫升。在37℃下培养4小时至细胞黏附在培养板上，加入含有药物的PBS溶液10μl并在37℃培养1小时。将培养液除去及用0.2毫升PBS洗涤细胞。加入新鲜培养液0.1毫升及3H-胸腺嘧啶(10毫升)。将细胞在37℃下培养过夜，在37℃下用胰蛋白-EDTA处理细胞15分钟，并将细胞用细胞收获器收获。测定放射性并决定IC50值，结果见表3。
YW-242单克隆抗体免疫轭合物的毒性小于原药YW-242 2.5倍。在这种试验条件下，轭合物的毒性通常总是比原药的低，所以，这个结果是原来所预期的。这个结果表明轭合物结合到细胞上并在细胞内将原药释放出来。此轭合物的毒性比阿霉素要强10倍。
为了清楚和便于理解，本发明的一些细节已用解释和例子加以说明。显然，本领域的技术人员可以在本发明的所附权利要求书范围内进行修改。因此，以上的解释和例子只是为了加以说明，而不是去限制本发明的范围。所以，本发明的范围不能用以上说明来决定，而应该根据本发明所附权利要求及其等同物来决定。
本发明专利申请中所引用的所有专利，专利申请和已发表的文章作为一个整体而于所有的目的和每个专利，专利申请及已发表的文章分别引用的程度是相等的。

Claims (7)

1.具有下列通式的化合物：
R1-(C(O)-R2-R3-NH)m-(C(O)-R3)
其中：
R1由下列基团组成：
其中：
每个R2可以相同或不同，并且是一个价键或双价烃基；
每个R3可以相同或不同，并且是一个双价单环或双环杂环芳香基团；
m和n是从0到3的整数。
2.如权利要求1的化合物，其中R2是一个价键或选自于C1-C6烷基；C1-C6烯基；C1-C6炔基和邻-，间-，或对位-连结的芳香基团的双价烃基。
3.如权利要求2的化合物，其中R2是CH2，CH2CH2，CH＝CH(顺或反)或-C≡C-。
4.如权利要求1的化合物，其中R3是选自吲哚，被取代的吲哚，苯并呋喃，被取代的苯并呋喃，苯并噻吩，被取代的苯并噻吩，吡咯，被取代的吡咯，咪唑，三唑，吡唑，噻唑，噻吩，呋喃，异鎓唑，鎓唑的基团。
5.权利要求1的化合物在制备用于控制患者肿瘤生长的药物中应用。
6.权利要求1的化合物在制备用于治疗患者由细菌介入疾病的药物中的应用。
7.权利要求1的化合物在制备用于烷基化体内特异性DNA序列的药物中的应用。
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