JP2001136974A - 生理活性ピロールイミダゾール誘導体のスクリーニング方法 - Google Patents
生理活性ピロールイミダゾール誘導体のスクリーニング方法Info
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
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- G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、これらの人工の化学種を用い
て細胞などのＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する
セグメントＡ（化学種Ａ）の作用をスクリーニングする
方法を提供するものである。 【解決手段】 本発明は、一般式（Ｉ） Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種の１種又は２種以
上を用いて、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する
化学種Ａの作用を検出または同定する方法、そのための
キット、及びそれに用いるプレートに関する。
て細胞などのＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する
セグメントＡ（化学種Ａ）の作用をスクリーニングする
方法を提供するものである。 【解決手段】 本発明は、一般式（Ｉ） Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種の１種又は２種以
上を用いて、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する
化学種Ａの作用を検出または同定する方法、そのための
キット、及びそれに用いるプレートに関する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、天然のＤＮＡ又は
ＲＮＡの塩基配列を認識することができる非天然型の塩
基を含有する化学構造を有する化学種を用いて、細胞な
どのＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する作用を検
出または同定する方法、そのためのキット、及びそれに
もちいるプレートに関する。
ＲＮＡの塩基配列を認識することができる非天然型の塩
基を含有する化学構造を有する化学種を用いて、細胞な
どのＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する作用を検
出または同定する方法、そのためのキット、及びそれに
もちいるプレートに関する。
【０００２】
【従来の技術】ヒトゲノムプロジェクトにより我々の
「生命の設計図」である全遺伝子の塩基配列が数年内に
解明されようとしている。この設計図に傷があったり、
後天的に傷がはいると、病気や老化を引き起こすことが
知られている。ヒトゲノムプロジェクトの進展により癌
を含む多くの疾病はＤＮＡレベルで理解されるようにな
り、診断、予防などを中心とした医学全体が、革命的に
変化するものと考えられる。さらに、これらの疾病のＤ
ＮＡレベルでの理解に基づいた治療法、すなわち病因遺
伝子やその産物をターゲットとした医薬品の開発への期
待も大きいが、基礎研究を臨床研究に生かしてゆくため
の橋渡し的な研究は、まだ途についたばかりである。現
在、用いられている抗癌剤は、スクリーニングによって
選択された抗生物質が多く、もともと癌細胞を殺すため
に微生物が産生したものではなく、癌の分子生物学的知
見に基づいたものはほとんどない。細胞内の特定遺伝子
の発現を細胞外から自由自在にコントロールすることが
可能になれば、究極の遺伝子レベルでの治療法となると
考えられる。
「生命の設計図」である全遺伝子の塩基配列が数年内に
解明されようとしている。この設計図に傷があったり、
後天的に傷がはいると、病気や老化を引き起こすことが
知られている。ヒトゲノムプロジェクトの進展により癌
を含む多くの疾病はＤＮＡレベルで理解されるようにな
り、診断、予防などを中心とした医学全体が、革命的に
変化するものと考えられる。さらに、これらの疾病のＤ
ＮＡレベルでの理解に基づいた治療法、すなわち病因遺
伝子やその産物をターゲットとした医薬品の開発への期
待も大きいが、基礎研究を臨床研究に生かしてゆくため
の橋渡し的な研究は、まだ途についたばかりである。現
在、用いられている抗癌剤は、スクリーニングによって
選択された抗生物質が多く、もともと癌細胞を殺すため
に微生物が産生したものではなく、癌の分子生物学的知
見に基づいたものはほとんどない。細胞内の特定遺伝子
の発現を細胞外から自由自在にコントロールすることが
可能になれば、究極の遺伝子レベルでの治療法となると
考えられる。
【０００３】本発明者らは、最近抗生物質デュオカルマ
イシンがディスタマイシンなどの他種分子とへテロダイ
マーを形成し協同的にＤＮＡの分子認識を行ない、デュ
オカルマイシン単独の場合とは異なる塩基配列を効率よ
くアルキル化することを発見した（Proc.Natl.Acad.Sc
i.USA 93,14405,1996）。この結果をもとにデュオカル
マイシンのアルキル化部分にＤＮＡ認識部位としてピロ
ール−イミダゾールポリアミドを結合させ、任意の塩基
配列でＤＮＡを選択的にアルキル化する分子の合成に成
功し、特許出願をした（特願平１０−２６０７１０
号）。
イシンがディスタマイシンなどの他種分子とへテロダイ
マーを形成し協同的にＤＮＡの分子認識を行ない、デュ
オカルマイシン単独の場合とは異なる塩基配列を効率よ
くアルキル化することを発見した（Proc.Natl.Acad.Sc
i.USA 93,14405,1996）。この結果をもとにデュオカル
マイシンのアルキル化部分にＤＮＡ認識部位としてピロ
ール−イミダゾールポリアミドを結合させ、任意の塩基
配列でＤＮＡを選択的にアルキル化する分子の合成に成
功し、特許出願をした（特願平１０−２６０７１０
号）。
【０００４】しかし、デュオカルマイシンのアルキル化
部分にＤＮＡ認識部位としてピロール−イミダゾールポ
リアミドを結合させだけの化合物ではアルキル化能が十
分なだけではなく、これらの化合物は１本鎖の塩基配列
しか認識できないものであった。そこで、本発明者ら
は、これらの化合物の分子動力学などのコンピュータモ
デリングを用いてこれらの分子とＤＮＡとのアルキル化
を詳細に検討し、デュオカルマイシンの反応性のあるシ
クロプロパン部分（セグメントＡ）にビニル基などのリ
ンカーを導入することにより、２本鎖ＤＮＡを同時にア
ルキル化し切断することを見出した（特願平１１−８３
５９１号）。
部分にＤＮＡ認識部位としてピロール−イミダゾールポ
リアミドを結合させだけの化合物ではアルキル化能が十
分なだけではなく、これらの化合物は１本鎖の塩基配列
しか認識できないものであった。そこで、本発明者ら
は、これらの化合物の分子動力学などのコンピュータモ
デリングを用いてこれらの分子とＤＮＡとのアルキル化
を詳細に検討し、デュオカルマイシンの反応性のあるシ
クロプロパン部分（セグメントＡ）にビニル基などのリ
ンカーを導入することにより、２本鎖ＤＮＡを同時にア
ルキル化し切断することを見出した（特願平１１−８３
５９１号）。
【０００５】これらの天然のＤＮＡやＲＮＡの塩基配列
を認識する人工の化学種は、天然のＤＮＡやＲＮＡの特
定の塩基配列に認識して当該特定の位置においてセグメ
ントＡの作用をＤＮＡやＲＮＡに及ぼすものであること
から、天然のＤＮＡやＲＮＡの部分配列に代えてこれら
の人工の化学種を応用することができることを見出され
た。
を認識する人工の化学種は、天然のＤＮＡやＲＮＡの特
定の塩基配列に認識して当該特定の位置においてセグメ
ントＡの作用をＤＮＡやＲＮＡに及ぼすものであること
から、天然のＤＮＡやＲＮＡの部分配列に代えてこれら
の人工の化学種を応用することができることを見出され
た。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、これらの人
工の化学種を用いて細胞などのＤＮＡ又はＲＮＡを含有
する物質に対するセグメントＡ（化学種Ａ）の作用をス
クリーニングする方法を提供するものである。
工の化学種を用いて細胞などのＤＮＡ又はＲＮＡを含有
する物質に対するセグメントＡ（化学種Ａ）の作用をス
クリーニングする方法を提供するものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、一般式（Ｉ） Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種を用いて、ＤＮＡ
又はＲＮＡを含有する物質に対する化学種Ａの作用を検
出または同定する方法に関する。
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種を用いて、ＤＮＡ
又はＲＮＡを含有する物質に対する化学種Ａの作用を検
出または同定する方法に関する。
【０００８】より詳細には、本発明は、多数のウェルを
有するプレート中の各ウェルにＤＮＡ又はＲＮＡの塩基
配列を認識することができる一般式（Ｉ）で表される化
合物を存在させ、当該プレートの各ウェルにＤＮＡ又は
ＲＮＡを含有する物質を導入し、一般式（Ｉ）で表され
る化合物とＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質とを充分に
作用させた後、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態
を測定することからなるＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物
質に対する化学種Ａの作用を検出または同定する方法に
関する。
有するプレート中の各ウェルにＤＮＡ又はＲＮＡの塩基
配列を認識することができる一般式（Ｉ）で表される化
合物を存在させ、当該プレートの各ウェルにＤＮＡ又は
ＲＮＡを含有する物質を導入し、一般式（Ｉ）で表され
る化合物とＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質とを充分に
作用させた後、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態
を測定することからなるＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物
質に対する化学種Ａの作用を検出または同定する方法に
関する。
【０００９】さらに詳細には、本発明は、前記の方法に
おいて、各ウェルに存在させる一般式（Ｉ）で表される
化合物が、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質のＤＮＡ又
はＲＮＡの異なる塩基配列を認識することができるもの
であり、各ウェルに導入されるＤＮＡ又はＲＮＡを含有
する物質が同じ物質である前記した方法に関する。ま
た、本発明は、前記した方法において、各ウェルに存在
させる一般式（Ｉ）で表される化合物が、ＤＮＡ又はＲ
ＮＡを含有する物質のＤＮＡ又はＲＮＡの特定の１種類
の塩基配列を認識することができるものであり、各ウェ
ルに導入されるＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質が異な
る物質である前記した方法に関する。
おいて、各ウェルに存在させる一般式（Ｉ）で表される
化合物が、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質のＤＮＡ又
はＲＮＡの異なる塩基配列を認識することができるもの
であり、各ウェルに導入されるＤＮＡ又はＲＮＡを含有
する物質が同じ物質である前記した方法に関する。ま
た、本発明は、前記した方法において、各ウェルに存在
させる一般式（Ｉ）で表される化合物が、ＤＮＡ又はＲ
ＮＡを含有する物質のＤＮＡ又はＲＮＡの特定の１種類
の塩基配列を認識することができるものであり、各ウェ
ルに導入されるＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質が異な
る物質である前記した方法に関する。
【００１０】また、本発明は、前記た各種の方法を行う
ための、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する化学
種Ａの作用を検出または同定用のキットに関する。より
詳細には、本発明は、一般式（Ｉ） Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種、及び作用後のＤ
ＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態を測定する手段の
ための器具又は試薬からなる、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有
する物質に対する化学種Ａの作用を検出または同定する
ためのキットに関する。
ための、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する化学
種Ａの作用を検出または同定用のキットに関する。より
詳細には、本発明は、一般式（Ｉ） Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種、及び作用後のＤ
ＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態を測定する手段の
ための器具又は試薬からなる、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有
する物質に対する化学種Ａの作用を検出または同定する
ためのキットに関する。
【００１１】さらに、本発明は、複数のウェルを有する
プレート中の各ウェルに、一般式（Ｉ）、 Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種が存在してなる複
数のウェルを有するプレートに関し、当該プレートがＤ
ＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する化学種Ａの作用
を検出または同定するためのものであるプレートに関す
る。
プレート中の各ウェルに、一般式（Ｉ）、 Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種が存在してなる複
数のウェルを有するプレートに関し、当該プレートがＤ
ＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する化学種Ａの作用
を検出または同定するためのものであるプレートに関す
る。
【００１２】本発明の前記一般式（Ｉ）における、ＤＮ
Ａの塩基配列を認識することができる非天然型の塩基を
含有する化学構造であるＢは、置換基を有してもよいピ
ロール及び／又はイミダゾールから誘導される化学構造
が好ましい。ピロールやイミダゾールの置換基として
は、ＤＮＡの塩基配列を認識する妨げとならないもので
あれば特に制限はなく、例えば、炭素数１〜１０、好ま
しくは１〜５の直鎖又は分枝状のアルキル基、前記した
アルキル基から誘導されるアルコキシ基、水酸基、アミ
ノ基、前記したアルキル基から誘導されるＮ−アルキル
置換アミノ基、有機カルボン酸から誘導されるＮ−アシ
ルアミノ基、グアニジノ基、置換グアニジノ基などが挙
げられる。例えば、Ｎ−メチルピロール、Ｎ−メチルイ
ミダゾール、３−ヒドロキシピロール、Ｎ−メチル−３
−ヒドロキシピロールなどが挙げられる。
Ａの塩基配列を認識することができる非天然型の塩基を
含有する化学構造であるＢは、置換基を有してもよいピ
ロール及び／又はイミダゾールから誘導される化学構造
が好ましい。ピロールやイミダゾールの置換基として
は、ＤＮＡの塩基配列を認識する妨げとならないもので
あれば特に制限はなく、例えば、炭素数１〜１０、好ま
しくは１〜５の直鎖又は分枝状のアルキル基、前記した
アルキル基から誘導されるアルコキシ基、水酸基、アミ
ノ基、前記したアルキル基から誘導されるＮ−アルキル
置換アミノ基、有機カルボン酸から誘導されるＮ−アシ
ルアミノ基、グアニジノ基、置換グアニジノ基などが挙
げられる。例えば、Ｎ−メチルピロール、Ｎ−メチルイ
ミダゾール、３−ヒドロキシピロール、Ｎ−メチル−３
−ヒドロキシピロールなどが挙げられる。
【００１３】これらの天然の塩基配列を認識し得る非天
然型の塩基は、主鎖上又は主鎖に懸垂されていてもよ
い。これらの非天然型の塩基が主鎖上に存在する場合に
は、これらの非天然型の塩基自体が主鎖を形成するため
の官能基を有しており、例えば非天然型の塩基の一端に
カルボキシル基を有し、他端にアミノ基を有し、これら
がポリアミド構造を形成するようにすればよい。主鎖を
形成する構造は、前記ポリアミド構造に限定されるもの
ではなく、ポリエステル構造やポリイミン構造などの重
合体を形成し得るものであってもよい。また、主鎖に懸
垂される場合には、天然のＤＮＡやＲＮＡのように多糖
類の構造に懸垂されていてもよいし、合成の重合体の構
造に懸垂されていてもよい。好ましいＤＮＡの塩基配列
を認識することができる非天然型の塩基を含有する化学
構造であるＢとしては、より具体的にはピロール−イミ
ダゾールポリアミド結合が好ましい。ピロールやイミダ
ゾールの長さ（個数）は特に制限はないが、好ましくは
２〜３０個、より好ましくは２４〜１６個、さらに好ま
しくは４〜１６個程度である。
然型の塩基は、主鎖上又は主鎖に懸垂されていてもよ
い。これらの非天然型の塩基が主鎖上に存在する場合に
は、これらの非天然型の塩基自体が主鎖を形成するため
の官能基を有しており、例えば非天然型の塩基の一端に
カルボキシル基を有し、他端にアミノ基を有し、これら
がポリアミド構造を形成するようにすればよい。主鎖を
形成する構造は、前記ポリアミド構造に限定されるもの
ではなく、ポリエステル構造やポリイミン構造などの重
合体を形成し得るものであってもよい。また、主鎖に懸
垂される場合には、天然のＤＮＡやＲＮＡのように多糖
類の構造に懸垂されていてもよいし、合成の重合体の構
造に懸垂されていてもよい。好ましいＤＮＡの塩基配列
を認識することができる非天然型の塩基を含有する化学
構造であるＢとしては、より具体的にはピロール−イミ
ダゾールポリアミド結合が好ましい。ピロールやイミダ
ゾールの長さ（個数）は特に制限はないが、好ましくは
２〜３０個、より好ましくは２４〜１６個、さらに好ま
しくは４〜１６個程度である。
【００１４】ＤＮＡの塩基の一種に結合し得る化学構造
部分であるＡとしては、ＤＮＡやＲＮＡと相互作用をす
るものであれば種々の化学種を使用することができる。
好ましい化学種Ａ（セグメントＡ）の構造としては、抗
癌作用を有する化学物質の構造が挙げられる。抗癌作用
を有する化学物質としては、ＤＮＡに作用するアルキル
化剤が好ましい。より好ましくは、シクロプロパン環を
有する化学構造が挙げられ、デュオカルマイシンのアル
キル化部分がより好ましい。Ａ及びＢの化学構造を結合
させ得るリンカー部分Ｌとしては、セグメントＡとセグ
メントＢとを適当な距離で隔てることができ、かつ、ア
ルキル化活性を失活させないものが好ましい。好ましい
具体例としてはビニル基を含有する化学構造が挙げられ
る。
部分であるＡとしては、ＤＮＡやＲＮＡと相互作用をす
るものであれば種々の化学種を使用することができる。
好ましい化学種Ａ（セグメントＡ）の構造としては、抗
癌作用を有する化学物質の構造が挙げられる。抗癌作用
を有する化学物質としては、ＤＮＡに作用するアルキル
化剤が好ましい。より好ましくは、シクロプロパン環を
有する化学構造が挙げられ、デュオカルマイシンのアル
キル化部分がより好ましい。Ａ及びＢの化学構造を結合
させ得るリンカー部分Ｌとしては、セグメントＡとセグ
メントＢとを適当な距離で隔てることができ、かつ、ア
ルキル化活性を失活させないものが好ましい。好ましい
具体例としてはビニル基を含有する化学構造が挙げられ
る。
【００１５】これらの一般式（Ｉ）で表される化合物は
これを単独で使用することもできるが、これらの２種以
上を混合して使用することもできる。２種以上の一般式
（Ｉ）であらわされる化合物を混合して使用する場合に
は、種々の混合パターンがあるが、一般的には化学種Ｂ
（セグメントＢ）の異なる化学種を混合するのが好まし
いが、これに限定されるものではない。一般式（Ｉ）で
表される本発明の化合物の好ましいものとしては、次式
これを単独で使用することもできるが、これらの２種以
上を混合して使用することもできる。２種以上の一般式
（Ｉ）であらわされる化合物を混合して使用する場合に
は、種々の混合パターンがあるが、一般的には化学種Ｂ
（セグメントＢ）の異なる化学種を混合するのが好まし
いが、これに限定されるものではない。一般式（Ｉ）で
表される本発明の化合物の好ましいものとしては、次式
【００１６】
【化３】
【００１７】で表される化合物（以下、「ＰｙＰｙＬＤ
ｕ８６」という。）、又は
ｕ８６」という。）、又は
【００１８】
【化４】
【００１９】で表される化合物（以下、「ＩｍＰｙＬＤ
ｕ８６」という。）が挙げられる。前記した化合物は、
塩基配列ＴＧＡＣＧをはじめとするＩｍＰｙＬＤＵ８６
に対応する配列群、又はそれらの相補鎖を認識する。さ
らに、次式のＰｙＰｙＬＤｕ８６を基本構造とする｛Ｐ
ｙ又はＩｍ｝｛Ｐｙ又はＩｍ｝ＬＤｕ８６の構造を有す
る一般式（II）、
ｕ８６」という。）が挙げられる。前記した化合物は、
塩基配列ＴＧＡＣＧをはじめとするＩｍＰｙＬＤＵ８６
に対応する配列群、又はそれらの相補鎖を認識する。さ
らに、次式のＰｙＰｙＬＤｕ８６を基本構造とする｛Ｐ
ｙ又はＩｍ｝｛Ｐｙ又はＩｍ｝ＬＤｕ８６の構造を有す
る一般式（II）、
【００２０】
【化５】
【００２１】（式中、Ｘ及びＹはそれぞれ独立して−Ｃ
Ｈ＝又は−Ｎ＝を示す。）で表される化合物やこれらの
１：１混合物が挙げられる。以下の説明のためにこれら
の化合物又はこれらの混合物に次のように番号を付け
る。ＸがＣＨで、ＹがＣＨの場合の化合物を、化合物１
とし、ＸがＣＨで、ＹがＮの場合の化合物を、化合物２
とし、ＸがＮで、ＹがＣＨの場合の化合物を、化合物３
とし、ＸがＮで、ＹがＮの場合の化合物を、化合物４と
し、化合物１と化合物２の１：１の混合物を、化合物５
とし、化合物１と化合物３の１：１の混合物を、化合物
６とし、化合物１と化合物４の１：１の混合物を、化合
物７とし、化合物２と化合物３の１：１の混合物を、化
合物８とし、化合物２と化合物４の１：１の混合物を、
化合物９とし、化合物３と化合物４の１：１の混合物
を、化合物１０とする。また、次式のＰｙＰｙＰｙＬＤ
ｕ８６を基本構造とする｛Ｐｙ又はＩｍ｝｛Ｐｙ又はＩ
ｍ｝｛Ｐｙ又はＩｍ｝ＬＤｕ８６の構造を有する一般式
（III）、
Ｈ＝又は−Ｎ＝を示す。）で表される化合物やこれらの
１：１混合物が挙げられる。以下の説明のためにこれら
の化合物又はこれらの混合物に次のように番号を付け
る。ＸがＣＨで、ＹがＣＨの場合の化合物を、化合物１
とし、ＸがＣＨで、ＹがＮの場合の化合物を、化合物２
とし、ＸがＮで、ＹがＣＨの場合の化合物を、化合物３
とし、ＸがＮで、ＹがＮの場合の化合物を、化合物４と
し、化合物１と化合物２の１：１の混合物を、化合物５
とし、化合物１と化合物３の１：１の混合物を、化合物
６とし、化合物１と化合物４の１：１の混合物を、化合
物７とし、化合物２と化合物３の１：１の混合物を、化
合物８とし、化合物２と化合物４の１：１の混合物を、
化合物９とし、化合物３と化合物４の１：１の混合物
を、化合物１０とする。また、次式のＰｙＰｙＰｙＬＤ
ｕ８６を基本構造とする｛Ｐｙ又はＩｍ｝｛Ｐｙ又はＩ
ｍ｝｛Ｐｙ又はＩｍ｝ＬＤｕ８６の構造を有する一般式
（III）、
【００２２】
【化６】
【００２３】（式中、Ｘ、Ｙ及びＺはそれぞれ独立して
−ＣＨ＝又は−Ｎ＝を示す。）で表される化合物やこれ
らの１：１混合物が挙げられる。以下の説明のためにこ
れらの化合物又はこれらの混合物に次のように番号を付
ける。ＸがＣＨで、ＹがＮで、ＺがＮの場合の化合物
を、化合物１１とし、ＸがＣＨで、ＹがＮで、ＺがＣＨ
の場合の化合物を、化合物１２とし、ＸがＣＨで、Ｙが
ＣＨで、ＺがＣＨの場合の化合物を、化合物１３とし、
化合物１１と化合物１２の１：１の混合物を、化合物１
４とし、化合物１１と化合物１３の１：１の混合物を、
化合物１５とし、化合物１２と化合物１３の１：１の混
合物を、化合物１６とする。これらの化合物１〜１６に
ついて後述する試験を行った。
−ＣＨ＝又は−Ｎ＝を示す。）で表される化合物やこれ
らの１：１混合物が挙げられる。以下の説明のためにこ
れらの化合物又はこれらの混合物に次のように番号を付
ける。ＸがＣＨで、ＹがＮで、ＺがＮの場合の化合物
を、化合物１１とし、ＸがＣＨで、ＹがＮで、ＺがＣＨ
の場合の化合物を、化合物１２とし、ＸがＣＨで、Ｙが
ＣＨで、ＺがＣＨの場合の化合物を、化合物１３とし、
化合物１１と化合物１２の１：１の混合物を、化合物１
４とし、化合物１１と化合物１３の１：１の混合物を、
化合物１５とし、化合物１２と化合物１３の１：１の混
合物を、化合物１６とする。これらの化合物１〜１６に
ついて後述する試験を行った。
【００２４】本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物
は、公知の方法に準じて製造することができる。即ち、
Ａセグメント及びＢセグメントを常法により製造し、こ
れに順次リンカーセグメントＬを結合させ、次いで残り
のセグメントを結合させることにより製造することがで
きる。
は、公知の方法に準じて製造することができる。即ち、
Ａセグメント及びＢセグメントを常法により製造し、こ
れに順次リンカーセグメントＬを結合させ、次いで残り
のセグメントを結合させることにより製造することがで
きる。
【００２５】例えば、前記のＩｍＰｙＬＤｕ８６（７
ａ）及びＰｙＰｙＬＤｕ８６（７ｂ）の製造例を次の化
学反応式で示す。反応式中の各化合物の下の数字は化合
物の番号を示す。
ａ）及びＰｙＰｙＬＤｕ８６（７ｂ）の製造例を次の化
学反応式で示す。反応式中の各化合物の下の数字は化合
物の番号を示す。
【００２６】
【化７】
【００２７】反応式中のａ）はベンゾトリアゾール−１
−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム
ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）のＴＨＦ溶液で
の処理、次いでＮａＢＨ４処理を示し、ｂ）はＴＨＦ中
でのＭｎＯ２処理を示し、ｃ）はＴＨＦ中でのトリエチ
ルホスホノアセテート及びＮａＨ処理を示し、ｄ）は水
−メタノール中での水酸化ナトリウムによる処理を示
し、ｅ）はＤＭＦ中での１，１−カルボニルジイミダゾ
ールでの処理を示し、ｆ）はＤＭＦ中での水素化ナトリ
ウムを用いたＤＵ８６のセグメントＡとの処理を示す。
−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム
ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）のＴＨＦ溶液で
の処理、次いでＮａＢＨ４処理を示し、ｂ）はＴＨＦ中
でのＭｎＯ２処理を示し、ｃ）はＴＨＦ中でのトリエチ
ルホスホノアセテート及びＮａＨ処理を示し、ｄ）は水
−メタノール中での水酸化ナトリウムによる処理を示
し、ｅ）はＤＭＦ中での１，１−カルボニルジイミダゾ
ールでの処理を示し、ｆ）はＤＭＦ中での水素化ナトリ
ウムを用いたＤＵ８６のセグメントＡとの処理を示す。
【００２８】こうして合成されたＰｙＰｙＬＤｕ８６お
よび、ＩｍＰｙＬＤｕ８６のＤＮＡとの反応性を調べ
た。ＩｍＰｙＬＤｕ８６によるアルキル化の結果を図１
に示した。この実験に用いたＤＮＡ及び使用したＩｍＰ
ｙＬＤｕ８６を図２に示す。
よび、ＩｍＰｙＬＤｕ８６のＤＮＡとの反応性を調べ
た。ＩｍＰｙＬＤｕ８６によるアルキル化の結果を図１
に示した。この実験に用いたＤＮＡ及び使用したＩｍＰ
ｙＬＤｕ８６を図２に示す。
【００２９】右側の泳動図は２本鎖ＤＮＡの上のストラ
ンドの結果、中央の泳動図は下のストランドの結果であ
る。アルキル化の位置は加熱により切断バンドとしてみ
ることができる。その結果低濃度から主に２本鏡ＤＮＡ
はサイト１とサイト２で２本鎖の切断されていることが
わかり、アルキル化が２本鎖で同時に起っていることが
判断できる。このような切断を引き起こす化合物はこれ
までに例がなく、まさに人工の制限酵素ということがで
きる。また用いたＩｍＰｙＬＤｕ８６の量から７０％の
高率で切断が起っていることが判明し、以前に合成した
分子（特願平１０−２６０７１０号参照）にくらべて非
常に高い効率であることがわかる。
ンドの結果、中央の泳動図は下のストランドの結果であ
る。アルキル化の位置は加熱により切断バンドとしてみ
ることができる。その結果低濃度から主に２本鏡ＤＮＡ
はサイト１とサイト２で２本鎖の切断されていることが
わかり、アルキル化が２本鎖で同時に起っていることが
判断できる。このような切断を引き起こす化合物はこれ
までに例がなく、まさに人工の制限酵素ということがで
きる。また用いたＩｍＰｙＬＤｕ８６の量から７０％の
高率で切断が起っていることが判明し、以前に合成した
分子（特願平１０−２６０７１０号参照）にくらべて非
常に高い効率であることがわかる。
【００３０】ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質として
は、ＤＮＡやＲＮＡそれ自体を使用することもできる
が、生きている細胞を使用するのが好ましい。セグメン
トＡとして抗癌剤を用いる場合には癌細胞を使用するこ
とができる。一般式（Ｉ）におけるセグメントＢにおい
て、非天然型の塩基としてメチルピロール（Ｐｙ）及び
メチルイミダゾール（Ｉｍ）を使用する場合には、Ｐｙ
−ＩｍによりＣ−Ｇ塩基対が、Ｉｍ−ＰｙによりＧ−Ｃ
塩基対が、Ｐｙ−ＰｙによりＡ−ＴまたはＴ−Ａ塩基対
が認識されることが知られているから、メチルピロール
（Ｐｙ）及びメチルイミダゾール（Ｉｍ）を適宜組み合
わせることにより、目的の塩基配列を認識させることが
できる。即ち、メチルピロール（Ｐｙ）及びメチルイミ
ダゾール（Ｉｍ）を、３個（３量体）用いることにより
天然の３塩基の配列を認識することができ、４個（４量
体）用いることにより天然の４塩基の配列を認識するこ
とができる。また、これらのセグメントＢの配列有する
化合物の２種以上混合して使用することもできる。
は、ＤＮＡやＲＮＡそれ自体を使用することもできる
が、生きている細胞を使用するのが好ましい。セグメン
トＡとして抗癌剤を用いる場合には癌細胞を使用するこ
とができる。一般式（Ｉ）におけるセグメントＢにおい
て、非天然型の塩基としてメチルピロール（Ｐｙ）及び
メチルイミダゾール（Ｉｍ）を使用する場合には、Ｐｙ
−ＩｍによりＣ−Ｇ塩基対が、Ｉｍ−ＰｙによりＧ−Ｃ
塩基対が、Ｐｙ−ＰｙによりＡ−ＴまたはＴ−Ａ塩基対
が認識されることが知られているから、メチルピロール
（Ｐｙ）及びメチルイミダゾール（Ｉｍ）を適宜組み合
わせることにより、目的の塩基配列を認識させることが
できる。即ち、メチルピロール（Ｐｙ）及びメチルイミ
ダゾール（Ｉｍ）を、３個（３量体）用いることにより
天然の３塩基の配列を認識することができ、４個（４量
体）用いることにより天然の４塩基の配列を認識するこ
とができる。また、これらのセグメントＢの配列有する
化合物の２種以上混合して使用することもできる。
【００３１】本発明の方法は、一般式（Ｉ）で表される
化合物とＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質とを充分に作
用させた後、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態を
測定することにより、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質
に対する化学種Ａの作用を検出または同定することがで
きる。一般式（Ｉ）で表される化合物とＤＮＡ又はＲＮ
Ａを含有する物質とを充分に作用させる手段としては、
両者を適当な緩衝液中でインキュベーションするなどの
方法によりおこなうことができる。また、インキュベー
ションの後の、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態
を測定する手段としては、各種の標識化や着色法などの
手段により行うことができる。インキュベーションの後
の、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態に応じて適
宜その手段を選択することができる。ＤＮＡ又はＲＮＡ
を含有する物質として生きている細胞を用い、その生死
によって判定する場合には、細胞を着色する方法が簡便
で好ましい。市販のセルカウンティングキットを、又は
これと着色における吸光度とを併用することにより生存
細胞を定量化することもできる。
化合物とＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質とを充分に作
用させた後、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態を
測定することにより、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質
に対する化学種Ａの作用を検出または同定することがで
きる。一般式（Ｉ）で表される化合物とＤＮＡ又はＲＮ
Ａを含有する物質とを充分に作用させる手段としては、
両者を適当な緩衝液中でインキュベーションするなどの
方法によりおこなうことができる。また、インキュベー
ションの後の、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態
を測定する手段としては、各種の標識化や着色法などの
手段により行うことができる。インキュベーションの後
の、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態に応じて適
宜その手段を選択することができる。ＤＮＡ又はＲＮＡ
を含有する物質として生きている細胞を用い、その生死
によって判定する場合には、細胞を着色する方法が簡便
で好ましい。市販のセルカウンティングキットを、又は
これと着色における吸光度とを併用することにより生存
細胞を定量化することもできる。
【００３２】つぎに本発明の具体的な使用例について説
明する。図３は本発明の方法を例示したものである。図
３の左側に升目のように示されているのは、複数のウェ
ルを有するプレートであり、各升目が各ウェルを示して
いる。この例では９６穴のプレートが示されている。こ
の各ウェルに本発明の前記一般式（Ｉ）で表される化学
種を存在させておく。各ウェルに異なる塩基配列を認識
する本発明の一般式（Ｉ）で表される化学種を存在させ
ておく場合についてまず説明する。例えば、４量体で
は、一般式（Ｉ）で表される化学種のセグメントＢの部
分に、メチルピロール（Ｐｙ）及びメチルイミダゾール
（Ｉｍ）からなる非天然型の塩基を用いて、Ｐｙ−Ｐｙ
−Ｐｙ−Ｐｙ、Ｐｙ−Ｐｙ−Ｐｙ−Ｉｍ、Ｐｙ−Ｐｙ−
Ｉｍ−Ｐｙ、Ｉｍ−Ｉｍ−Ｉｍ−ＰｙなどのＰｙとＩｍ
からなるすべての順列組み合わせの構造（この例では１
６通りになる）を用いて異なる３塩基を認識し得るもの
ができる。一般式（Ｉ）のセグメントＡの部分にアルキ
ル化剤を結合させて、ビニル基を含むリンカーＬで結合
させる。
明する。図３は本発明の方法を例示したものである。図
３の左側に升目のように示されているのは、複数のウェ
ルを有するプレートであり、各升目が各ウェルを示して
いる。この例では９６穴のプレートが示されている。こ
の各ウェルに本発明の前記一般式（Ｉ）で表される化学
種を存在させておく。各ウェルに異なる塩基配列を認識
する本発明の一般式（Ｉ）で表される化学種を存在させ
ておく場合についてまず説明する。例えば、４量体で
は、一般式（Ｉ）で表される化学種のセグメントＢの部
分に、メチルピロール（Ｐｙ）及びメチルイミダゾール
（Ｉｍ）からなる非天然型の塩基を用いて、Ｐｙ−Ｐｙ
−Ｐｙ−Ｐｙ、Ｐｙ−Ｐｙ−Ｐｙ−Ｉｍ、Ｐｙ−Ｐｙ−
Ｉｍ−Ｐｙ、Ｉｍ−Ｉｍ−Ｉｍ−ＰｙなどのＰｙとＩｍ
からなるすべての順列組み合わせの構造（この例では１
６通りになる）を用いて異なる３塩基を認識し得るもの
ができる。一般式（Ｉ）のセグメントＡの部分にアルキ
ル化剤を結合させて、ビニル基を含むリンカーＬで結合
させる。
【００３３】そして、このセグメントＢの部分が異なる
１６種類の化学種を図３の左側にしめされるプレートの
各ウェルに入れる。次いで、各ウェルに癌細胞を入れ、
数時間〜数日間これをインキュベートさせると、癌細胞
の特定の塩基配列部分を認識した本発明の一般式（Ｉ）
で表される化学種は癌細胞のＤＮＡと反応してこれをア
ルキル化して癌細胞を殺すことになる。その結果を示し
たのが図３の右側である。図３の右側は、前記のインキ
ュベートが終了した後、各ウェルを着色し、細胞が生き
ている場合は着色剤により着色されて図３では黒く示さ
れているが、細胞が死んで着色剤により着色されない無
い場合には図３では白く示されている。図３の例ではセ
グメントＢとして８量体を使用した例であり、３種の非
天然型の塩基の配列において癌細胞が死滅したことが示
されている。各ウェルに存在させた非天然型の塩基の配
列は予め判っているから、この試験によりどの配列の場
合に癌細胞が死滅したかを知ることができる。
１６種類の化学種を図３の左側にしめされるプレートの
各ウェルに入れる。次いで、各ウェルに癌細胞を入れ、
数時間〜数日間これをインキュベートさせると、癌細胞
の特定の塩基配列部分を認識した本発明の一般式（Ｉ）
で表される化学種は癌細胞のＤＮＡと反応してこれをア
ルキル化して癌細胞を殺すことになる。その結果を示し
たのが図３の右側である。図３の右側は、前記のインキ
ュベートが終了した後、各ウェルを着色し、細胞が生き
ている場合は着色剤により着色されて図３では黒く示さ
れているが、細胞が死んで着色剤により着色されない無
い場合には図３では白く示されている。図３の例ではセ
グメントＢとして８量体を使用した例であり、３種の非
天然型の塩基の配列において癌細胞が死滅したことが示
されている。各ウェルに存在させた非天然型の塩基の配
列は予め判っているから、この試験によりどの配列の場
合に癌細胞が死滅したかを知ることができる。
【００３４】図３の例では、８量体が使用されており、
２の８乗、即ち２５６通りのセグメントＢ部分を有する
一般式（Ｉ）で表される化学種が各ウェルに存在させら
れており、この例ではこのうち３種類の配列のものが特
異的に癌細胞を死滅させていることがわかる。この３種
の配列はこの例では、ＰｙＩｍＰｙＰｙＰｙＩｍＰｙＰ
ｙ、ＰｙＩｍＰｙＰｙＰｙＩｍＩｍＰｙ、及び、ＩｍＩ
ｍＰｙＰｙＰｙＩｍＰｙＰｙ、であることがわかる。
２の８乗、即ち２５６通りのセグメントＢ部分を有する
一般式（Ｉ）で表される化学種が各ウェルに存在させら
れており、この例ではこのうち３種類の配列のものが特
異的に癌細胞を死滅させていることがわかる。この３種
の配列はこの例では、ＰｙＩｍＰｙＰｙＰｙＩｍＰｙＰ
ｙ、ＰｙＩｍＰｙＰｙＰｙＩｍＩｍＰｙ、及び、ＩｍＩ
ｍＰｙＰｙＰｙＩｍＰｙＰｙ、であることがわかる。
【００３５】癌細胞は、その種類や生物に応じて異なっ
ており、本発明の前記に示した方法によれば、測定され
た検体としての癌細胞に特異的に作用する抗癌剤を、短
時間で、簡便に検索することができる。また、癌細胞は
同じ組織の癌細胞であっても時期に応じて変異する場合
があり、このような場合においても変異した癌細胞に特
異的な抗癌剤を本発明の方法により簡便に検索すること
ができる。さらに、本発明の前記方法によれば、癌組織
の周囲の正常細胞に対する抗癌剤の作用をも同様な方法
で調べることができる。したがって、本発明の方法は、
正常細胞には影響を与えず、目的の癌細胞に特異的に作
用する抗癌剤を短時間で、簡便に検索することができる
方法を提供するものである。
ており、本発明の前記に示した方法によれば、測定され
た検体としての癌細胞に特異的に作用する抗癌剤を、短
時間で、簡便に検索することができる。また、癌細胞は
同じ組織の癌細胞であっても時期に応じて変異する場合
があり、このような場合においても変異した癌細胞に特
異的な抗癌剤を本発明の方法により簡便に検索すること
ができる。さらに、本発明の前記方法によれば、癌組織
の周囲の正常細胞に対する抗癌剤の作用をも同様な方法
で調べることができる。したがって、本発明の方法は、
正常細胞には影響を与えず、目的の癌細胞に特異的に作
用する抗癌剤を短時間で、簡便に検索することができる
方法を提供するものである。
【００３６】次に前記した化合物１〜１６についてその
活性を評価した。ピロール（Ｐｙ）、イミダゾール（Ｉ
ｍ）アミド部が合計２つ或いは３つで構成されている化
合物群を用いて細胞毒性試験を行った。前記の化合物１
〜１６の１６種類を用い、その効果を細胞の生存率で示
した結果を図４に示す。ヒト癌細胞ＬＣＬ−ｗｔ、ＨＬ
Ｃ−２、ヒト白血病細胞Ｊｕｒｋａｔ、を用いて一斉ス
クリーニングを行った場合、ＬＣＬ−ｗｔに対してのみ
化合物１４が高い細胞毒性を示し、ＪｕｒｋａｔとＨＬ
Ｃ−２に対しては有用な結果が示されなかった。図４
は、１００ｎＭの濃度におけるＬＣＬ−ｗｔとＪｕｒｋ
ａｔに対する化合物群１−１６の細胞毒性の試験結果を
示したものである。
活性を評価した。ピロール（Ｐｙ）、イミダゾール（Ｉ
ｍ）アミド部が合計２つ或いは３つで構成されている化
合物群を用いて細胞毒性試験を行った。前記の化合物１
〜１６の１６種類を用い、その効果を細胞の生存率で示
した結果を図４に示す。ヒト癌細胞ＬＣＬ−ｗｔ、ＨＬ
Ｃ−２、ヒト白血病細胞Ｊｕｒｋａｔ、を用いて一斉ス
クリーニングを行った場合、ＬＣＬ−ｗｔに対してのみ
化合物１４が高い細胞毒性を示し、ＪｕｒｋａｔとＨＬ
Ｃ−２に対しては有用な結果が示されなかった。図４
は、１００ｎＭの濃度におけるＬＣＬ−ｗｔとＪｕｒｋ
ａｔに対する化合物群１−１６の細胞毒性の試験結果を
示したものである。
【００３７】このように、本発明の一般式（Ｉ）で示さ
れる化合物の２種以上の混合物も特異的な活性を示すこ
とが明らかになり、このような混合物に対する試験方法
の例を図５に示す。図５は８×８の６４ウェルのもので
ある。セグメントＢの部分が３個の認識部位になる場合
を例示しており、認識コンポーネントとしてピロール系
（Ｐｙ）とイミダゾール系（Ｉｍ）を用いた場合には２
の３乗種類、即ち８種類の組み合わせが考えられる。こ
の８種を縦横各々２５μｌづつ各ウェルに入れる。例え
ば、プレートの１行目と１列目に各々２５μｌのＰｙ−
Ｐｙ−Ｐｙを入れ、次いでプレートの２行目と２列目に
各々２５μｌのＰｙ−Ｉｍ−Ｐｙを入れ、さらにプレー
トの３行目と３列目に各々２５μｌのＰｙ−Ｐｙ−Ｉｍ
を入れというように、８種の化合物を各々の行及び列に
入れてゆくことにより、プレートの対角線の部分のウェ
ルは１種類の化合物のみとなるが、対角線の部分以外の
ウェルには各々異なる２種類の化合物からなる１：１の
混合物が入れられたことになる。そして、図３に示した
方法と同様にして癌細胞とインキュベーションした後、
これを着色処理した結果が図５に例示されている。
れる化合物の２種以上の混合物も特異的な活性を示すこ
とが明らかになり、このような混合物に対する試験方法
の例を図５に示す。図５は８×８の６４ウェルのもので
ある。セグメントＢの部分が３個の認識部位になる場合
を例示しており、認識コンポーネントとしてピロール系
（Ｐｙ）とイミダゾール系（Ｉｍ）を用いた場合には２
の３乗種類、即ち８種類の組み合わせが考えられる。こ
の８種を縦横各々２５μｌづつ各ウェルに入れる。例え
ば、プレートの１行目と１列目に各々２５μｌのＰｙ−
Ｐｙ−Ｐｙを入れ、次いでプレートの２行目と２列目に
各々２５μｌのＰｙ−Ｉｍ−Ｐｙを入れ、さらにプレー
トの３行目と３列目に各々２５μｌのＰｙ−Ｐｙ−Ｉｍ
を入れというように、８種の化合物を各々の行及び列に
入れてゆくことにより、プレートの対角線の部分のウェ
ルは１種類の化合物のみとなるが、対角線の部分以外の
ウェルには各々異なる２種類の化合物からなる１：１の
混合物が入れられたことになる。そして、図３に示した
方法と同様にして癌細胞とインキュベーションした後、
これを着色処理した結果が図５に例示されている。
【００３８】図５の例では、３行３列目、２行６列目及
び６行２列目、並びに４行８列目及び８行４列目で癌細
胞の死滅が観察されている。これは、この癌細胞に対し
ては３行３列目これは対角線の部分のウェルであるか
ら、即ちＰｙ−Ｐｙ−Ｉｍの配単独で癌細胞を死滅させ
ていることがわかり、２行６列目及び６行２列目、並び
に４行８列目及び８行４列目は各々対角線に対して対象
の位置であり、前者ではＰｙ−Ｉｍ−ＰｙとＩｍ−Ｐｙ
−Ｉｍの１：１混合物であり、後者はＰｙ−Ｉｍ−Ｐｙ
とＩｍ−Ｉｍ−Ｉｍとの１：１混合物である。そしてこ
の例ではこの癌細胞に対してはこれらのセグメントＢを
有する化合物又は混合物が特異的に有効であることが示
されている。さらに、この例において重要なことは、一
般式（Ｉ）の化合物の癌細胞に対する有効性がこの化合
物を単独で使用する場合には示されないが、他の化合物
と混合して使用した場合に初めてその有効性が示される
場合があることを明らかにしているということである。
このような本発明の試験方法により、一般式（Ｉ）で表
される化合物を単独で用いた場合の結果を得ると同時
に、これらの化合物を混合して使用した場合の結果をも
得ることができる。
び６行２列目、並びに４行８列目及び８行４列目で癌細
胞の死滅が観察されている。これは、この癌細胞に対し
ては３行３列目これは対角線の部分のウェルであるか
ら、即ちＰｙ−Ｐｙ−Ｉｍの配単独で癌細胞を死滅させ
ていることがわかり、２行６列目及び６行２列目、並び
に４行８列目及び８行４列目は各々対角線に対して対象
の位置であり、前者ではＰｙ−Ｉｍ−ＰｙとＩｍ−Ｐｙ
−Ｉｍの１：１混合物であり、後者はＰｙ−Ｉｍ−Ｐｙ
とＩｍ−Ｉｍ−Ｉｍとの１：１混合物である。そしてこ
の例ではこの癌細胞に対してはこれらのセグメントＢを
有する化合物又は混合物が特異的に有効であることが示
されている。さらに、この例において重要なことは、一
般式（Ｉ）の化合物の癌細胞に対する有効性がこの化合
物を単独で使用する場合には示されないが、他の化合物
と混合して使用した場合に初めてその有効性が示される
場合があることを明らかにしているということである。
このような本発明の試験方法により、一般式（Ｉ）で表
される化合物を単独で用いた場合の結果を得ると同時
に、これらの化合物を混合して使用した場合の結果をも
得ることができる。
【００３９】以上の例は、癌細胞に特異的な抗癌剤を検
索する方法であるが、特定の塩基配列の位置において有
効性が知られている癌細胞をＤＮＡ又はＲＮＡを含有す
る物質として使用し、当該塩基配列に対応した本発明の
一般式（Ｉ）のセグメントＢの部分を有する化学種を調
製し、そのセグメントＡの部分に各種の抗癌剤の候補化
合物を結合させた、セグメントＡの部分が異なる複数種
の本発明の一般式（Ｉ）で表される化学種を各ウェルに
存在させ、これを前記の癌細胞とインキュベートさせる
ことにより、セグメントＡの部分の抗癌剤の候補化合物
の作用を検索することができる。即ち、本発明のひとつ
の実施形態としては、本発明の一般式（Ｉ）のセグメン
トＡの部分に抗癌剤の候補化合物を結合させることによ
り、癌細胞に対する抗癌作用をスクリーニングする方法
を提供するものである。
索する方法であるが、特定の塩基配列の位置において有
効性が知られている癌細胞をＤＮＡ又はＲＮＡを含有す
る物質として使用し、当該塩基配列に対応した本発明の
一般式（Ｉ）のセグメントＢの部分を有する化学種を調
製し、そのセグメントＡの部分に各種の抗癌剤の候補化
合物を結合させた、セグメントＡの部分が異なる複数種
の本発明の一般式（Ｉ）で表される化学種を各ウェルに
存在させ、これを前記の癌細胞とインキュベートさせる
ことにより、セグメントＡの部分の抗癌剤の候補化合物
の作用を検索することができる。即ち、本発明のひとつ
の実施形態としては、本発明の一般式（Ｉ）のセグメン
トＡの部分に抗癌剤の候補化合物を結合させることによ
り、癌細胞に対する抗癌作用をスクリーニングする方法
を提供するものである。
【００４０】また、本発明は、前記してきた各種の本発
明の方法を行うための、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物
質に対する化学種Ａの作用を検出または同定用のキット
を提供するものである。 より詳細には、一般式（Ｉ） Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種、及び作用後のＤ
ＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態を測定する手段の
ための器具又は試薬からなるＤＮＡ又はＲＮＡを含有す
る物質に対する化学種Ａの作用を検出または同定用のキ
ットを提供する。前述したように、本発明の一般式
（Ｉ）の化合物はこれを単独で使用してもよいが、この
２種以上を混合して使用できるようにしておいてもよ
い。
明の方法を行うための、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物
質に対する化学種Ａの作用を検出または同定用のキット
を提供するものである。 より詳細には、一般式（Ｉ） Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種、及び作用後のＤ
ＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態を測定する手段の
ための器具又は試薬からなるＤＮＡ又はＲＮＡを含有す
る物質に対する化学種Ａの作用を検出または同定用のキ
ットを提供する。前述したように、本発明の一般式
（Ｉ）の化合物はこれを単独で使用してもよいが、この
２種以上を混合して使用できるようにしておいてもよ
い。
【００４１】さらに、本発明は、複数のウェルを有する
プレート中の各ウェルに、一般式（Ｉ）、 Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種が存在してなる複
数のウェルを有するプレートを提供するものである。よ
り詳細には、本発明のプレートは、ＤＮＡ又はＲＮＡを
含有する物質に対する化学種Ａの作用を検出または同定
するためのプレートである。前記の一般式（Ｉ）で表さ
れる化合物は、この１種又は２種以上をプレートの各ウ
ェルに固定化しておくこともできる。また、溶液又はゲ
ル状にしておくこともできる。
プレート中の各ウェルに、一般式（Ｉ）、 Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種が存在してなる複
数のウェルを有するプレートを提供するものである。よ
り詳細には、本発明のプレートは、ＤＮＡ又はＲＮＡを
含有する物質に対する化学種Ａの作用を検出または同定
するためのプレートである。前記の一般式（Ｉ）で表さ
れる化合物は、この１種又は２種以上をプレートの各ウ
ェルに固定化しておくこともできる。また、溶液又はゲ
ル状にしておくこともできる。
【００４２】
【実施例】次に、具体的な試験例により本発明を詳細に
説明するが、本発明はこれらの具体例に限定されるもの
ではない。
説明するが、本発明はこれらの具体例に限定されるもの
ではない。
【００４３】実施例１（細胞毒性試験による制癌効果の
評価） 腫瘍細胞として、ヒト癌細胞ＬＣＬ−ｗｔとＨＬＣ−
２、ヒト白血病細胞、Ｊｕｒｋａｔ、ヒト子宮けい癌細
胞ＨｅＬａ ｃｅｌｌを用いた。ＬＣＬ−ｗｔとＪｕｒ
ｋａｔに対してはＰＲＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ Ｂ
ＲＬ）＋１０％牛胎児血清（ＪＲＨ ＢＩＯＣＩＥＮＣ
ＥＳ）＋１００μＵ／ｍｌペニシリンＧ−１００μＵ／
ｍｌストレプトマイシン硫酸塩（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）
を培養培地として用いた。ＨＬＣ−２に対してはＭＥＭ
＋１０％牛胎児血清（ＪＲＨ ＢＩＯＣＩＥＮＣＥＳ）
＋１００μＵ／ｍｌペニシリンＧ−１００μＵ／ｍｌ
ストレプトマイシン硫酸塩（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）を培
養培地として用いた。ヘラ細胞（ＨｅＬａ ｃｅｌｌ）
に対してはＲＢＭＩ＋１０％牛胎児血清（ＪＲＨ ＢＩ
ＯＣＩＥＮＣＥＳ）＋１００μＵ／ｍｌペニシリンＧ−
１００μＵ／ｍｌストレプトマイシン硫酸塩（Ｇｉｂｃ
ｏ ＢＲＬ）を培養培地として用いた。それぞれ細胞は
培養し対数増殖期にあるものを分散してスクリーニング
に用いた。スクリーニングは、初期細胞数を約２×１０
５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調整した細胞懸濁液を９６ウェル
のマルチプレートに５０μｌ／ウェル分注し、試験化合
物の試験溶液（１００μＭ、培地＋０．１％ＤＭＳＯ）
を添加し、３７℃、ＣＯ２濃度５％の条件下、インキュ
ベーターで２日間前培養を行い、その後細胞数をカウン
トした。細胞数は、マイクロプレートリーダー（Micro
Plate Reader）（ＭＰＲ−Ａ４ｉ、ＴＯＳＯＨ）と血球
計算板を用いて計算した。マイクロプレートリーダーを
用いた測定においては、セルカウティングキット８（Ce
ll Counting Kit-8）（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用い、測定
波長４５０ｎｍ（参照波長６００ｎｍ）で吸光度を測定
した。生細胞数、死細胞数のカウントはトリパンブルー
を用いた色素排除法により顕微鏡下で行った。マイクロ
プレートリーダーと血球計算板での測定結果を元に生存
率を以下の式により算出した。 生存率＝１００ｎｐ／ｎａ ここで、ｎｐは試料を添加した場合の生細胞数、ｎａは
コントロール生細胞数である。
評価） 腫瘍細胞として、ヒト癌細胞ＬＣＬ−ｗｔとＨＬＣ−
２、ヒト白血病細胞、Ｊｕｒｋａｔ、ヒト子宮けい癌細
胞ＨｅＬａ ｃｅｌｌを用いた。ＬＣＬ−ｗｔとＪｕｒ
ｋａｔに対してはＰＲＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ Ｂ
ＲＬ）＋１０％牛胎児血清（ＪＲＨ ＢＩＯＣＩＥＮＣ
ＥＳ）＋１００μＵ／ｍｌペニシリンＧ−１００μＵ／
ｍｌストレプトマイシン硫酸塩（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）
を培養培地として用いた。ＨＬＣ−２に対してはＭＥＭ
＋１０％牛胎児血清（ＪＲＨ ＢＩＯＣＩＥＮＣＥＳ）
＋１００μＵ／ｍｌペニシリンＧ−１００μＵ／ｍｌ
ストレプトマイシン硫酸塩（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）を培
養培地として用いた。ヘラ細胞（ＨｅＬａ ｃｅｌｌ）
に対してはＲＢＭＩ＋１０％牛胎児血清（ＪＲＨ ＢＩ
ＯＣＩＥＮＣＥＳ）＋１００μＵ／ｍｌペニシリンＧ−
１００μＵ／ｍｌストレプトマイシン硫酸塩（Ｇｉｂｃ
ｏ ＢＲＬ）を培養培地として用いた。それぞれ細胞は
培養し対数増殖期にあるものを分散してスクリーニング
に用いた。スクリーニングは、初期細胞数を約２×１０
５ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調整した細胞懸濁液を９６ウェル
のマルチプレートに５０μｌ／ウェル分注し、試験化合
物の試験溶液（１００μＭ、培地＋０．１％ＤＭＳＯ）
を添加し、３７℃、ＣＯ２濃度５％の条件下、インキュ
ベーターで２日間前培養を行い、その後細胞数をカウン
トした。細胞数は、マイクロプレートリーダー（Micro
Plate Reader）（ＭＰＲ−Ａ４ｉ、ＴＯＳＯＨ）と血球
計算板を用いて計算した。マイクロプレートリーダーを
用いた測定においては、セルカウティングキット８（Ce
ll Counting Kit-8）（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用い、測定
波長４５０ｎｍ（参照波長６００ｎｍ）で吸光度を測定
した。生細胞数、死細胞数のカウントはトリパンブルー
を用いた色素排除法により顕微鏡下で行った。マイクロ
プレートリーダーと血球計算板での測定結果を元に生存
率を以下の式により算出した。 生存率＝１００ｎｐ／ｎａ ここで、ｎｐは試料を添加した場合の生細胞数、ｎａは
コントロール生細胞数である。
【００４４】実施例２（細胞毒性試験） 本文中に記載した化合物１〜１６を用いて、本発明のプ
レートによりヒト癌細胞ＬＣＬ−ｗｔ、ＨＬＣ−２、ヒ
ト白血病細胞Ｊｕｒｋａｔ、を用いて一斉スクリーニン
グを行った。その結果を実施例１と同様に行って、各細
胞の生存率を計算した。結果を図４に示す。図４は試験
化合物の濃度が１００ｎＭの場合の結果を示す。この結
果によれば、ＬＣＬ−ｗｔに対してのみ化合物１４が高
い細胞毒性を示すことがわかった。
レートによりヒト癌細胞ＬＣＬ−ｗｔ、ＨＬＣ−２、ヒ
ト白血病細胞Ｊｕｒｋａｔ、を用いて一斉スクリーニン
グを行った。その結果を実施例１と同様に行って、各細
胞の生存率を計算した。結果を図４に示す。図４は試験
化合物の濃度が１００ｎＭの場合の結果を示す。この結
果によれば、ＬＣＬ−ｗｔに対してのみ化合物１４が高
い細胞毒性を示すことがわかった。
【００４５】実施例３（化合物の合成） 化合物１３の合成方法を次に示した。
【００４６】
【化８】
【００４７】反応及び精製に用いた試薬、溶媒は市販の
ものを用いた。プロトン核磁気共鳴スペクトル（ＮＭ
Ｒ）は日本電子ＪＮＭ−Ａ５００を使用し、テトラメチ
ルシラン（ＴＭＳ）を内部標準物質として化学シフトは
δ値（ｐｐｍ）で示した。シグナルの略号として、ｓ
（ｓｉｎｇｌｅｔ）、ｄ（ｄｏｕｂｌｅｔ）、ｔ（ｔｒ
ｉｐｌｅｔ）、ｑ（ｑｕａｒｔｅｒ）、ｍ（ｍｕｌｔｉ
ｐｌｅｔ）、ｂｒ（ｂｒｏａｄ）、ｂｒ ｓ（ｂｒｏａ
ｄ ｓｉｎｇｌｅｔ）を用いた。試薬、溶媒の略号は以
下のように用いた。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、
ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、カルボニ
ルジイミダゾールｅ（ＣＤＩ）、４−（ジメチル）アミ
ノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール（ＨＯＢｔ）、１−［３−（ジメチルアミノ）プ
ロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ
Ｉ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）。反応は特に示さ
ない限り、アルゴン雰囲気下或いは窒素雰囲気下で行っ
た。
ものを用いた。プロトン核磁気共鳴スペクトル（ＮＭ
Ｒ）は日本電子ＪＮＭ−Ａ５００を使用し、テトラメチ
ルシラン（ＴＭＳ）を内部標準物質として化学シフトは
δ値（ｐｐｍ）で示した。シグナルの略号として、ｓ
（ｓｉｎｇｌｅｔ）、ｄ（ｄｏｕｂｌｅｔ）、ｔ（ｔｒ
ｉｐｌｅｔ）、ｑ（ｑｕａｒｔｅｒ）、ｍ（ｍｕｌｔｉ
ｐｌｅｔ）、ｂｒ（ｂｒｏａｄ）、ｂｒ ｓ（ｂｒｏａ
ｄ ｓｉｎｇｌｅｔ）を用いた。試薬、溶媒の略号は以
下のように用いた。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、
ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、カルボニ
ルジイミダゾールｅ（ＣＤＩ）、４−（ジメチル）アミ
ノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール（ＨＯＢｔ）、１−［３−（ジメチルアミノ）プ
ロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ
Ｉ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）。反応は特に示さ
ない限り、アルゴン雰囲気下或いは窒素雰囲気下で行っ
た。
【００４８】（１）１−メチル−４−ニトロ−ピロール
−２−アルデヒド（２２） 発煙硝酸（１．５ｍｌ、３７．５ｍｍｏｌ）の無水酢酸
（２５ｍｌ）溶液を−３０℃に冷却し、同温下１−メチ
ルピロール−２−カルボキシアルデヒド２１（３．２７
ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）の無水酢酸（１０ｍｌ）溶液を
滴下し、同温で５時間攪拌した。その後析出した固体を
ろ取し、ニトロ体２２（８６０ｍｇ、１９％）を得た。
ろ液の溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシルカゲ
ルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン−酢酸エ
チル（４：１、ｖ／ｖ）溶出部より更に２２（６５０ｍ
ｇ、１４％）を得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ： 4.00(3H,s)、7.40(1
H、d、J=2.0Hz)、7.65(1H、d、J=2.0Hz)、9.61(1H、s)； ＩＲ（ＫＢｒ）υ：１６７８、１５３５、１５０８、１
４２３、１４０６、１３１１、１１００、８６４、８１
４、７７０、７５４ｃｍ−１
−２−アルデヒド（２２） 発煙硝酸（１．５ｍｌ、３７．５ｍｍｏｌ）の無水酢酸
（２５ｍｌ）溶液を−３０℃に冷却し、同温下１−メチ
ルピロール−２−カルボキシアルデヒド２１（３．２７
ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）の無水酢酸（１０ｍｌ）溶液を
滴下し、同温で５時間攪拌した。その後析出した固体を
ろ取し、ニトロ体２２（８６０ｍｇ、１９％）を得た。
ろ液の溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシルカゲ
ルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン−酢酸エ
チル（４：１、ｖ／ｖ）溶出部より更に２２（６５０ｍ
ｇ、１４％）を得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ： 4.00(3H,s)、7.40(1
H、d、J=2.0Hz)、7.65(1H、d、J=2.0Hz)、9.61(1H、s)； ＩＲ（ＫＢｒ）υ：１６７８、１５３５、１５０８、１
４２３、１４０６、１３１１、１１００、８６４、８１
４、７７０、７５４ｃｍ−１
【００４９】（２）Ｐｙ−Ｌ−ＣＯ２Ｅｔ（２３） ホスホノ酢酸トリエチル（０．３９ｍｌ、２．０ｍｍｏ
ｌ）のＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液に氷冷下６０％水素化ナ
トリウム（８３ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を加え１０分間
攪拌した。同温下ニトロ体２２（２００ｍｇ、１．３ｍ
ｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）溶液を滴下し、さらに４５
分同温で攪拌した。反応溶液中に水を加えた後、酢酸エ
チルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄した後、無
水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、
得られた残留物をシルカゲルカラムクロマトグラフィー
に付し、ヘキサン−酢酸エチル（１：４、ｖ／ｖ）溶出
部よりエステル２３（２２５ｍｇ、７７％）を得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ： 1.28(3H、t、J=7.5H
z)、3.75(3H、s)、4.24(2H、q、J=7.5Hz)、6.28(1H、d、J=16.0H
z)、7.09(1H、d、J=2.0Hz)、7.47(1H、d、J=16.0Hz)、7.54(1H、
d、J=2.0Hz)；１３ Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ： １４．３、３５．
４、６０．８、１０６． １、１１８．４、１２５．３、１２９．８、１３０．
１、１３６．７、１６６．５； ＩＲ（ＫＢｒ）υ：１７０９、１６３２、１５１０、１
４２７、１４１２、１３７３、１３１５、１２８２、１
１７６ｃｍ−１
ｌ）のＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液に氷冷下６０％水素化ナ
トリウム（８３ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を加え１０分間
攪拌した。同温下ニトロ体２２（２００ｍｇ、１．３ｍ
ｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）溶液を滴下し、さらに４５
分同温で攪拌した。反応溶液中に水を加えた後、酢酸エ
チルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄した後、無
水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、
得られた残留物をシルカゲルカラムクロマトグラフィー
に付し、ヘキサン−酢酸エチル（１：４、ｖ／ｖ）溶出
部よりエステル２３（２２５ｍｇ、７７％）を得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ： 1.28(3H、t、J=7.5H
z)、3.75(3H、s)、4.24(2H、q、J=7.5Hz)、6.28(1H、d、J=16.0H
z)、7.09(1H、d、J=2.0Hz)、7.47(1H、d、J=16.0Hz)、7.54(1H、
d、J=2.0Hz)；１３ Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ： １４．３、３５．
４、６０．８、１０６． １、１１８．４、１２５．３、１２９．８、１３０．
１、１３６．７、１６６．５； ＩＲ（ＫＢｒ）υ：１７０９、１６３２、１５１０、１
４２７、１４１２、１３７３、１３１５、１２８２、１
１７６ｃｍ−１
【００５０】（３）Ｐｙ−Ｐｙ−Ｌ−ＣＯ２Ｅｔ（２
４） エステル２３（１．１２ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のメタノ
ール溶液（４５ｍｌ）に室温下１０％パラジウム炭素
（２５０ｍｇ）を加えた。この混合物に１Ｎ水素化ホウ
素ナトリウム（８ｍｌ）を同温下加え、さらに１０分攪
拌した。アセトン（２ｍｌ）を加えた後、この懸濁液を
セライトに通して沈殿物を除去した。ろ液の溶媒を減圧
下留去し、得られた残留物に酢酸エチルを加えた。飽和
食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶
媒を減圧下留去し、得られた残留物を塩化メチレン（４
５ｍｌ）に溶解しさらなる反応に用いた。この溶液に１
−メチル−４−ニトロ−２−トリクロロアセチルピロー
ル（２．３５ｇ、７．０ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジイソプ
ロピルエチルアミン（１．３１ｍｌ、７．５ｍｍｏｌ）
を順次室温で加え、同温下３時間攪拌した。その後、反
応溶液中に水を加えた後、酢酸エチルで抽出した。有機
相を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで
乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシル
カゲルカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル溶
出部よりビスピロール２４（４８３ｍｇ、２８％）を得
た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： 1.
23(3H、t、J=7.0Hz)、3.59(3H、s)、3.94(3H、s)、4.14(2H、q、J
=7.0Hz)、6.01(1H、d、J=15.5Hz)、6.57(1H、d、J=2.0Hz)、7.2
7(1H、br s)、7.45(1H、d、J=15.5Hz)、7.46(1H、d、J=1.5Hz)、
7.50(1H、d、J=2.0Hz)、9.59(1H、br s)
４） エステル２３（１．１２ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のメタノ
ール溶液（４５ｍｌ）に室温下１０％パラジウム炭素
（２５０ｍｇ）を加えた。この混合物に１Ｎ水素化ホウ
素ナトリウム（８ｍｌ）を同温下加え、さらに１０分攪
拌した。アセトン（２ｍｌ）を加えた後、この懸濁液を
セライトに通して沈殿物を除去した。ろ液の溶媒を減圧
下留去し、得られた残留物に酢酸エチルを加えた。飽和
食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶
媒を減圧下留去し、得られた残留物を塩化メチレン（４
５ｍｌ）に溶解しさらなる反応に用いた。この溶液に１
−メチル−４−ニトロ−２−トリクロロアセチルピロー
ル（２．３５ｇ、７．０ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジイソプ
ロピルエチルアミン（１．３１ｍｌ、７．５ｍｍｏｌ）
を順次室温で加え、同温下３時間攪拌した。その後、反
応溶液中に水を加えた後、酢酸エチルで抽出した。有機
相を飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで
乾燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシル
カゲルカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル溶
出部よりビスピロール２４（４８３ｍｇ、２８％）を得
た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： 1.
23(3H、t、J=7.0Hz)、3.59(3H、s)、3.94(3H、s)、4.14(2H、q、J
=7.0Hz)、6.01(1H、d、J=15.5Hz)、6.57(1H、d、J=2.0Hz)、7.2
7(1H、br s)、7.45(1H、d、J=15.5Hz)、7.46(1H、d、J=1.5Hz)、
7.50(1H、d、J=2.0Hz)、9.59(1H、br s)
【００５１】（４）Ｐｙ−Ｐｙ−Ｐｙ−Ｌ−ＣＯ２Ｅｔ
（２６） ビスピロール２４（１７３ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の
メタノール−酢酸エチル（１０ｍｌ−１０ｍｌ）の懸濁
液に室温下１０％パラジウム炭素（５０ｍｇ）を加え
た。この混合物に１Ｎ水素化ホウ素ナトリウム（１．５
ｍｌ）を同温下加え、さらに２分攪拌した。この懸濁液
をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに通して沈殿物
を除去した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をＤ
ＭＦ（１０ｍｌ）に溶解しさらなる反応に用いた。この
溶液に４−アセトアミノ−１−メチルピロール−２−カ
ルボン酸のＨＯＢｔエステル２５（Z.-F.Tao, at el.,
J.Am.Chem.Soc., 121, 4961-4967（1999））（２０９ｍ
ｇ、０．７０ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（８５ｍｇ、０．７
０ｍｍｏｌ）を順次室温で加え、同温下３時間攪拌し
た。その後、溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシ
ルカゲルカラムクロマトグラフィーに付した。メタノー
ル−酢酸エチル（１：９、ｖ／ｖ）溶出部よりトリスピ
ロール２６（１２０ｍｇ、５０％）を得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ： 1.29(3H、t、J=7.0H
z)、2.06(3H、s)、3.59(3H、s)、3.81(3H、s)、3.84(3H、s)、4.2
0(2H、q、J=7.0Hz)、5.99(1H、d、J=15.5Hz)、6.51(1H、s)、6.5
8(1H、s)、6.61(1H、s)、6.94(1H、d、J=2.0Hz)、7.13(1H、s)、
7.32(1H、d、J=2.0Hz)、7.47(1H、d、J=15.5Hz)、7.78(1H、s)、
7.98(1H、s)、8.36(1H、s)
（２６） ビスピロール２４（１７３ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の
メタノール−酢酸エチル（１０ｍｌ−１０ｍｌ）の懸濁
液に室温下１０％パラジウム炭素（５０ｍｇ）を加え
た。この混合物に１Ｎ水素化ホウ素ナトリウム（１．５
ｍｌ）を同温下加え、さらに２分攪拌した。この懸濁液
をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに通して沈殿物
を除去した。溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をＤ
ＭＦ（１０ｍｌ）に溶解しさらなる反応に用いた。この
溶液に４−アセトアミノ−１−メチルピロール−２−カ
ルボン酸のＨＯＢｔエステル２５（Z.-F.Tao, at el.,
J.Am.Chem.Soc., 121, 4961-4967（1999））（２０９ｍ
ｇ、０．７０ｍｍｏｌ）とＤＭＡＰ（８５ｍｇ、０．７
０ｍｍｏｌ）を順次室温で加え、同温下３時間攪拌し
た。その後、溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシ
ルカゲルカラムクロマトグラフィーに付した。メタノー
ル−酢酸エチル（１：９、ｖ／ｖ）溶出部よりトリスピ
ロール２６（１２０ｍｇ、５０％）を得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ： 1.29(3H、t、J=7.0H
z)、2.06(3H、s)、3.59(3H、s)、3.81(3H、s)、3.84(3H、s)、4.2
0(2H、q、J=7.0Hz)、5.99(1H、d、J=15.5Hz)、6.51(1H、s)、6.5
8(1H、s)、6.61(1H、s)、6.94(1H、d、J=2.0Hz)、7.13(1H、s)、
7.32(1H、d、J=2.0Hz)、7.47(1H、d、J=15.5Hz)、7.78(1H、s)、
7.98(1H、s)、8.36(1H、s)
【００５２】（５）Ｐｙ−Ｐｙ−Ｐｙ−Ｌ−ＣＯ２Ｉｍ
（２７） トリスピロール２６（２４ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）
のメタノール−ＴＨＦ（１０ｍｌ−１０ｍｌ）の溶液に
室温下１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１．５）を加え室
温で５時間攪拌した。溶媒を減圧下留去し、得られた残
留物に１０％酢酸水溶液を加え、生じた沈殿物をろ取
し、加水分解体（１３．５ｍｇ）を得た。この加水分解
体はさらなる精製を行わずに次の反応に用いた。加水分
解体（１２．８ｍｇ）のＤＭＦ（１．５ｍｌ）溶液にＣ
ＤＩ（２４．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を室温で加
え、同温下一晩攪拌した。その後水を加え、生じた沈殿
をろ取してイミダゾールエステル２７（１３．５ｍｇ、
５４％）を得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： 1.96(3H、s)、3.7
7(3H、s)、3.82(3H、s)、3.85(3H、s)、6.85(1H、s)、7.08(1H、
s)、7.09(1H、s)、7.12(1H、d、J=15.0Hz)、7.14(1H、s)、7.22
(1H、s)、7.24(1H、s)、7.47(1H、s)、7.87(1H、d、J=15.0Hz)、
7.90(1H、s)、8.66(1H、s)、9.80(1H、s)、9.89(1H、s)、10.03
(1H、s)
（２７） トリスピロール２６（２４ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）
のメタノール−ＴＨＦ（１０ｍｌ−１０ｍｌ）の溶液に
室温下１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１．５）を加え室
温で５時間攪拌した。溶媒を減圧下留去し、得られた残
留物に１０％酢酸水溶液を加え、生じた沈殿物をろ取
し、加水分解体（１３．５ｍｇ）を得た。この加水分解
体はさらなる精製を行わずに次の反応に用いた。加水分
解体（１２．８ｍｇ）のＤＭＦ（１．５ｍｌ）溶液にＣ
ＤＩ（２４．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を室温で加
え、同温下一晩攪拌した。その後水を加え、生じた沈殿
をろ取してイミダゾールエステル２７（１３．５ｍｇ、
５４％）を得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： 1.96(3H、s)、3.7
7(3H、s)、3.82(3H、s)、3.85(3H、s)、6.85(1H、s)、7.08(1H、
s)、7.09(1H、s)、7.12(1H、d、J=15.0Hz)、7.14(1H、s)、7.22
(1H、s)、7.24(1H、s)、7.47(1H、s)、7.87(1H、d、J=15.0Hz)、
7.90(1H、s)、8.66(1H、s)、9.80(1H、s)、9.89(1H、s)、10.03
(1H、s)
【００５３】（６）Ｐｙ−Ｐｙ−Ｐｙ−Ｌ−ＤＵ８６
（１１） ＤＵ８６のＡ部２８（S.Nagamura,at el., J.Med.Che
m., 40, 972-979（1999））（６．２ｍｇ、０．０２４
ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）溶液に氷冷下６０％水素
化ナトリウム（２．０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を加
え、同温で１０分攪拌した。その後、同温下イミダゾー
ルエステル２７（１２．９ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）
のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液を加え、同温でさらに５時間攪
拌した。リン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．８６）
を加えた後、水を加え、塩化メチレンで抽出した。その
後、溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシルカゲル
カラムクロマトグラフィーに付した。メタノール−クロ
ロホルム（１：９、ｖ／ｖ）溶出部よりＰｙ−Ｐｙ−Ｐ
ｙ−Ｌ−ＤＵ８６ １１（７．７ｍｇ、４６％）を得
た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： 1.29-1.31(1H、
m)、1.97(3H、s)、2.07-2.11(1H、m)、2.47(3H、s)、3.72(3H、
s)、3.78(3H、s)、3.82(3H、s)、3.83(3H、s)、4.17-4.22(1H、
m)、4.27-4.32(1H、m)、6.57(1H、d、J=15.0Hz)、6.83-6.85(b
r s)、6.86(1H、s)、6.90(1H、s)、7.06(1H、s)、7.15(1H、s)、
7.24(1H、s)、7.39(1H、s)、7.57(1H、d、J=15.0Hz)、9.80(1H、
s)、9.89(1H、s)、9.94(1H、s)、12.36(1H、s)
（１１） ＤＵ８６のＡ部２８（S.Nagamura,at el., J.Med.Che
m., 40, 972-979（1999））（６．２ｍｇ、０．０２４
ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）溶液に氷冷下６０％水素
化ナトリウム（２．０ｍｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を加
え、同温で１０分攪拌した。その後、同温下イミダゾー
ルエステル２７（１２．９ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）
のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液を加え、同温でさらに５時間攪
拌した。リン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．８６）
を加えた後、水を加え、塩化メチレンで抽出した。その
後、溶媒を減圧下留去し、得られた残留物をシルカゲル
カラムクロマトグラフィーに付した。メタノール−クロ
ロホルム（１：９、ｖ／ｖ）溶出部よりＰｙ−Ｐｙ−Ｐ
ｙ−Ｌ−ＤＵ８６ １１（７．７ｍｇ、４６％）を得
た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ： 1.29-1.31(1H、
m)、1.97(3H、s)、2.07-2.11(1H、m)、2.47(3H、s)、3.72(3H、
s)、3.78(3H、s)、3.82(3H、s)、3.83(3H、s)、4.17-4.22(1H、
m)、4.27-4.32(1H、m)、6.57(1H、d、J=15.0Hz)、6.83-6.85(b
r s)、6.86(1H、s)、6.90(1H、s)、7.06(1H、s)、7.15(1H、s)、
7.24(1H、s)、7.39(1H、s)、7.57(1H、d、J=15.0Hz)、9.80(1H、
s)、9.89(1H、s)、9.94(1H、s)、12.36(1H、s)
【００５４】
【発明の効果】本発明は、簡便な方法により特定の細胞
に対して特異的に作用する物質を短時間でかつ高感度
で、しかも安価な手段によりスクリーニングできる方法
及びそのためのキット及びプレートを提供するものであ
る。本発明の方法によれば、患者の細胞、例えば癌細胞
に特異的に作用する薬物を短時間で簡便に知ることがで
き、患者の癌細胞に応じたテイラーメイドの治療薬を創
出することができ、患者に対してより副作用が少なく、
かつ効力の大きな治療薬を提供することができる。ま
た、本発明の方法によれば、ＤＮＡやＲＮＡに作用する
物質を簡便に、高感度でかつ安価にスクリーニングする
ことができる。また、ＤＮＡやＲＮＡに対する作用が既
知の物質におけるＤＮＡやＲＮＡにおける作用部位を本
発明の方法により簡便に知ることも可能となる。
に対して特異的に作用する物質を短時間でかつ高感度
で、しかも安価な手段によりスクリーニングできる方法
及びそのためのキット及びプレートを提供するものであ
る。本発明の方法によれば、患者の細胞、例えば癌細胞
に特異的に作用する薬物を短時間で簡便に知ることがで
き、患者の癌細胞に応じたテイラーメイドの治療薬を創
出することができ、患者に対してより副作用が少なく、
かつ効力の大きな治療薬を提供することができる。ま
た、本発明の方法によれば、ＤＮＡやＲＮＡに作用する
物質を簡便に、高感度でかつ安価にスクリーニングする
ことができる。また、ＤＮＡやＲＮＡに対する作用が既
知の物質におけるＤＮＡやＲＮＡにおける作用部位を本
発明の方法により簡便に知ることも可能となる。
【図１】図１は、本発明のＩｍＰｙＬＤｕ８６とＤＮＡ
との反応の結果を示した、図面に代わる写真である。
との反応の結果を示した、図面に代わる写真である。
【図２】図２は、図１の実験に使用したＤＮＡの塩基配
列及びＩｍＰｙＬＤｕ８６の化学構造を示したものであ
る。
列及びＩｍＰｙＬＤｕ８６の化学構造を示したものであ
る。
【図３】図３は、本発明のプレートを用いた癌細胞に特
異的な抗癌剤をスクリーニングする方法を例示したもの
である。
異的な抗癌剤をスクリーニングする方法を例示したもの
である。
【図４】図４は、本発明の化合物１〜１６の１００ｎＭ
の濃度における癌細胞の生存率を示したものである。
の濃度における癌細胞の生存率を示したものである。
【図５】図５は、本発明のプレートを用いて、本発明の
化合物を単独で使用した場合とこれらを混合して使用し
た場合を同時に試験する方法を例示したものである。
化合物を単独で使用した場合とこれらを混合して使用し
た場合を同時に試験する方法を例示したものである。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１１年１２月１７日（１９９９．１２．
１７）
１７）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正内容】
【発明の名称】 生理活性ピロールイミダゾール誘導
体のスクリーニング方法
体のスクリーニング方法
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B024 AA12 AA20 CA01 CA11 GA18 HA12 4B029 AA08 AA23 BB20 CC03 CC11 GA03 4B063 QA01 QQ42 QQ52 QQ57 QR41 QR54 4C050 AA01 AA08 BB04 CC04 EE02 FF02 FF03 GG03 HH04
Claims (21)
- 【請求項１】 一般式（Ｉ） Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種を用いて、ＤＮＡ
又はＲＮＡを含有する物質に対する化学種Ａの作用を検
出または同定する方法。 - 【請求項２】 多数のウェルを有するプレート中の各ウ
ェルにＤＮＡ又はＲＮＡの塩基配列を認識することがで
きる一般式（Ｉ）で表される化合物を存在させ、当該プ
レートの各ウェルにＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質を
導入し、一般式（Ｉ）で表される化合物とＤＮＡ又はＲ
ＮＡを含有する物質とを充分に作用させた後、ＤＮＡ又
はＲＮＡを含有する物質の状態を測定することからなる
ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対する化学種Ａの作
用を検出または同定する請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 各ウェルに存在させる一般式（Ｉ）で表
される化合物が、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質のＤ
ＮＡ又はＲＮＡの異なる塩基配列を認識することができ
るものであり、各ウェルに導入されるＤＮＡ又はＲＮＡ
を含有する物質が同じ物質である請求項２に記載の方
法。 - 【請求項４】 各ウェルに存在させる一般式（Ｉ）で表
される化合物が、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質のＤ
ＮＡ又はＲＮＡの特定の１種類の塩基配列を認識するこ
とができるものであり、各ウェルに導入されるＤＮＡ又
はＲＮＡを含有する物質が異なる物質である請求項２に
記載の方法。 - 【請求項５】 ウェルに一般式（Ｉ）で表される化合物
が固定化されている請求項１〜４のいずれかに記載の方
法。 - 【請求項６】 ＤＮＡ又はＲＮＡの塩基配列を認識する
ことができる非天然型の塩基を含有する化学構造が、Ｄ
ＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の天然のＤＮＡ又はＲＮ
Ａの連続する少なくとも２塩基を認識するものである請
求項１〜５のいずれかに記載の方法。 - 【請求項７】 ＤＮＡの塩基配列を認識することができ
る非天然型の塩基を含有する化学構造が、置換基を有し
てもよいピロール及び／又はイミダゾールから誘導され
る化学構造である請求項１〜６のいずれかに記載の方
法。 - 【請求項８】 置換基を有してもよいピロール及び／又
はイミダゾールから誘導される化学構造が、主鎖上又は
主鎖に懸垂されている請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】 ＤＮＡとの相互作用を有する化学構造を
有するＡが、抗癌剤の化学構造である請求項１〜８のい
ずれかに記載の方法。 - 【請求項１０】 抗癌剤が、アルキル化剤である請求項
９に記載の方法。 - 【請求項１１】 アルキル化剤が、シクロプロパン環を
有する化学構造である請求項１０に記載の方法。 - 【請求項１２】 Ａ及びＢの化学構造を結合させ得るリ
ンカーが、ビニル基を含有する化学構造である請求項１
〜１１のいずれかに記載の方法。 - 【請求項１３】 一般式（Ｉ）で表される化合物が次式 【化１】 又は 【化２】 で表される化合物である請求項７〜１２のいずれかに記
載の方法。 - 【請求項１４】 ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質が、
細胞である請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。 - 【請求項１５】 細胞が、癌細胞である請求項１４に記
載の方法。 - 【請求項１６】 ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状
態を測定する手段が、物質の生死を判定する方法である
請求項２〜１５のいずれかに記載の方法。 - 【請求項１７】 物質の生死を判定する方法が、物質の
着色によるものである請求項１６に記載の方法。 - 【請求項１８】 請求項１〜１７のいずれかに記載の方
法を行うための、ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対
する化学種Ａの作用を検出または同定用のキット。 - 【請求項１９】 一般式（Ｉ） Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種、及び作用後のＤ
ＮＡ又はＲＮＡを含有する物質の状態を測定する手段の
ための器具又は試薬からなる請求項１８に記載のキッ
ト。 - 【請求項２０】 複数のウェルを有するプレート中の各
ウェルに、一般式（Ｉ）、 Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識することができる
非天然型の塩基を含有する化学構造を示し、ＡはＤＮＡ
との相互作用を有する化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの
化学構造を結合させ得るリンカーを示す。）で表される
ＤＮＡの塩基配列を認識し得る化学種が存在してなる複
数のウェルを有するプレート。 - 【請求項２１】 ＤＮＡ又はＲＮＡを含有する物質に対
する化学種Ａの作用を検出または同定するためのプレー
トである請求項２０に記載のプレート。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32600799A JP2001136974A (ja) | 1999-11-16 | 1999-11-16 | 生理活性ピロールイミダゾール誘導体のスクリーニング方法 |
| US09/889,379 US6974668B1 (en) | 1999-11-16 | 2000-11-13 | Development of method for screening physiologically active pyrrole imidazole derivative |
| EP00974961A EP1152061B1 (en) | 1999-11-16 | 2000-11-13 | Method for screening physiologically active pyrrole imidazole derivative |
| DE60023269T DE60023269T2 (de) | 1999-11-16 | 2000-11-13 | Entwicklung eines Screeningverfahrens für ein physiologisch aktives Pyrrol-Imidazol-Derivat |
| PCT/JP2000/007992 WO2001036677A1 (fr) | 1999-11-16 | 2000-11-13 | Mise au point d'un procede de criblage de derives physiologiquement actifs du pyrrole imidazole |
| US10/285,030 US7378237B2 (en) | 1999-11-16 | 2002-11-01 | Development of method for screening physiologically active pyrrole imidazole derivative |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32600799A JP2001136974A (ja) | 1999-11-16 | 1999-11-16 | 生理活性ピロールイミダゾール誘導体のスクリーニング方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001136974A true JP2001136974A (ja) | 2001-05-22 |
Family
ID=18183062
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32600799A Pending JP2001136974A (ja) | 1999-11-16 | 1999-11-16 | 生理活性ピロールイミダゾール誘導体のスクリーニング方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
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| EP (1) | EP1152061B1 (ja) |
| JP (1) | JP2001136974A (ja) |
| DE (1) | DE60023269T2 (ja) |
| WO (1) | WO2001036677A1 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006018967A1 (ja) | 2004-08-18 | 2006-02-23 | Nihon University | ＴＧＦ－β遺伝子発現抑制剤 |
| US7067622B2 (en) | 2001-06-25 | 2006-06-27 | Japan Science And Technology Agency | Method of the solid phase synthesis of pyrrole-imidazole polyamide |
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| US7807844B2 (en) | 2003-09-04 | 2010-10-05 | Nihon University | TGF-β gene expression inhibitor |
| WO2015053413A1 (ja) | 2013-10-11 | 2015-04-16 | 千葉県 | ドライバーオンコジーンの遺伝子変異を標的にアルキル化する新規アルキル化剤 |
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2002
- 2002-11-01 US US10/285,030 patent/US7378237B2/en not_active Expired - Fee Related
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