CN116286749B - 一种溶解剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种溶解剂。所述溶解剂包含酶制剂，所述酶制剂占溶解剂的质量分数为10～70％；所述酶制剂选自溶菌酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤维蛋白酶中的一种或多种。所述溶解剂解决了东风螺卵囊孵育过程中自溶破膜困难的问题，大大提高了孵化困难的卵囊的孵化率和孵化速度，同时减少了水体感染，增加了东风螺育苗的经济效益。
Description
技术领域
本发明属于螺培育的技术领域，更具体地，涉及一种溶解剂及其应用。
背景技术
东风螺属软体动物门，腹足纲，蛾螺科，东风螺属，俗称“花螺”、“海猪螺”和“南风螺”。东风螺分布于我国东、南沿海，东南亚及日本也有分布，我国东风螺主要养殖省份是海南、广东、福建、广西。东风螺一般分布于潮下带数米至数十米水深的海区，不同种类对底质的要求不同，一般是沙质、泥质或者泥沙质。东风螺为暖水种，生活在潮下带近岸浅海水深11-55米细沙和泥质的海底。我国的主要种类有方斑东风螺babylonia areolata、泥东风babylonia lutosa和台湾东风螺babylonia formosae三种。东风螺具有生长速度快、养殖周期短等优点，被认为是当今最有开发前景的海产养殖良种之一，近年来己在东南沿海为养殖者接受并逐步形成生产规模。其肉质鲜美、酥脆爽口，是国内外市场近年十分畅销的优质海产贝类，深受养殖户和消费者喜爱，是经济价值较高的名贵海珍品。由于市场需求，东风螺养殖规模和养殖面积逐年扩大，已成为了南方海水养殖的主要品种之一。
长期以来东风螺主要依靠海水捕捞，造成其自然资源严重衰退，依靠采捕天然贝已远远不能满足市场的需要。因此，只有通过人工育苗技术研究，大量培育苗种进行人工养殖，才能够满足市场对东风螺的大量需求，同时对东风螺自然资源的保护也起积极作用。
“方斑东风螺人工育苗技术，王国福，海南省水产研究所”公开了一种方斑东风螺的人工育苗方法，包括采卵、卵子孵化、幼体培育、饵料种类与幼体培育效果等步骤和事项，方案中东风螺幼体变态前的存活率、幼体变态的变态率不仅偏低，而且变态率的波动范围较大，难以符合满足市场对东风螺的大量需求。
在东风螺育苗过程中，经常会出现部分卵囊无法孵化或孵化困难的现象，其原因可能是卵囊膜太厚，幼虫活力差，卵囊的内源酶少活力差等。如果仅仅依靠东风螺卵囊自溶水解，随着自溶时间的延长，膜内幼虫和卵囊膜会感染，幼虫死在膜内，还影响污染了水体。
因此，如何解决东风螺卵囊膜自溶破膜困难的问题，提高东风螺的孵化速度、孵化时间，成为亟需解决的技术问题。
发明内容
针对上述现有的技术问题，本发明的首要目的在于提供一种溶解剂，尤其适用于东风螺卵囊膜的溶解，所述溶解剂解决了东风螺卵囊孵育过程中自溶破膜困难的问题，大大提高了孵化困难的卵囊的孵化率和孵化速度，同时减少了水体感染，增加了东风螺育苗的经济效益。
本发明的第二个目的在于提供上述溶解剂在提高东风螺孵化率和/或孵化速度中的应用。
本发明的第三个目的在于提供上述溶解剂在溶解东风螺卵囊膜中的应用。
本发明的第四个目的在于提供一种提高东风螺孵化率或孵化速度的方法。
为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：
一种溶解剂，所述溶解剂包含酶制剂，所述酶制剂占溶解剂的质量分数为10～70％；所述酶制剂选自溶菌酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、纤维蛋白酶中的一种或多种。
发明人通过对东风螺的孵育及其卵囊膜进行了长期的研究，发现在东风螺育苗过程中，经常会出现部分卵囊无法孵化或孵化困难的现象，发明人推测这可能是卵囊膜太厚，幼虫活力差，卵囊的内源酶少活力差等原因导致。进一步地，发明人通过大量实验和筛选，提供了一种由多种蛋白酶组成的酶制剂组合，基于此种酶制剂制备的溶解剂对于东风螺卵囊膜具有极其优异的溶解作用，解决了东风螺卵囊自溶破膜困难的卵囊问题，大大提高了孵化困难的卵囊的孵化率和孵化速度，同时具有一定的安全性，不会对东风螺卵囊和幼虫造成伤害。进一步地，发明人发现基于酶制剂制备的溶解剂中，酶制剂的质量分数需要控制在特定范围内，当酶制剂的质量分数低于10％时，在后续东风螺卵囊的实际孵化过程中，溶解剂对于卵囊膜的溶解效果较差；而酶制剂的质量分数高于70％时，在实际孵化过程中溶解剂过于粘稠，难以起到很好的孵化作用。
本申请中，所述酶制剂占溶解剂的质量分数为10～70％，更具体而言，可以为10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％等，本申请不限于此。
优选地，所述酶制剂包括溶菌酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和纤维蛋白酶。
进一步优选地，按质量份数计，所述酶制剂包括5.0～7.0份溶菌酶、1.5～2.0份风味蛋白酶、1.5～2.0份胰蛋白酶、1.0～2.0份木瓜蛋白酶、1.0～2.0份纤维蛋白酶；更具体而言，所述酶制剂包括6.0份溶菌酶、2.0份风味蛋白酶、1.5份胰蛋白酶、1.5份木瓜蛋白酶、1.0份纤维蛋白酶。
优选地，所述溶解剂还包括海水、电解质溶液和pH调节剂。
进一步优选地，按质量份数计，所述溶解剂包括5.0～7.5份海水、0.5～1.0份电解质溶液、0.1～0.5份pH调节剂和1.0～7.0份酶制剂。
发明人通过长期研究发现了一种包含多种蛋白酶组成的酶制剂组合，在此前提下，发明人进一步将海水、电解质溶液、pH调节剂作为组合的一部分制备溶解剂，电解质溶液不仅可以为东风螺幼虫提供合适的渗透压，而且其含有的多种营养物质有助于提高机体的免疫力和活力，调节代谢，促进生长发育；而组分中的pH调节剂可以为酶制剂提供合适的pH环境有助于提高酶活力；海水则作为载体。在上述组合的作用下，大大提高了孵化困难的卵囊的孵化率和孵化速度，孵化率达90％以上，孵化率提高10～34％，幼虫破膜天数减少了1～3天；此外，还减少了东风螺卵囊在水体中的感染，增加了东风螺育苗的经济效益。
优选地，所述电解质溶液选自无机盐、维生素、糖类、DMEM和速补100中的一种或多种。
进一步优选地，所述电解质溶液包括无机盐、维生素、糖类、DMEM和速补100。
进一步优选地，所述电解质溶液包括0.2～0.5g/L的氯化钾、0.1～0.5g/L的碳酸钙、0.15～0.5g/L的硫酸镁、0.5～1.0mg/L的维生素C、0.1～0.3g/L的复合维生素、0.1～0.3g/L的葡萄糖、3.0～5.0g/L的DMEM和0.2～0.4g/L的拜尔速补100。
进一步优选地，所述电解质溶液包括0.2～0.3g/L的氯化钾、0.1～0.3g/L的碳酸钙、0.15～0.3g/L的硫酸镁、0.5～0.7mg/L的维生素C、0.1～0.2g/L的复合维生素、0.1～0.2g/L的葡萄糖、3.0～4.0g/L的DMEM和0.2～0.3g/L的拜尔速补100。
最优选地，所述电解质溶液包括0.2g/L的氯化钾、0.1g/L的碳酸钙、0.15g/L的硫酸镁、0.5mg/L的维生素C、0.1g/L的复合维生素、0.2g/L的葡萄糖、3.0g/L的DMEM和0.2g/L的拜尔速补100。
优选地，所述pH调节剂为果酸；更具体地，可以为柠檬酸或苹果酸等。
进一步地，本发明还请求保护上述溶解剂在提高东风螺孵化率和/或孵化速度中的应用。
进一步地，本发明还请求保护上述溶解剂在溶解东风螺卵囊膜中的应用。
进一步地，本发明还请求保护一种提高东风螺孵化率或孵化速度的方法，东风螺卵囊预处理后，加入上述溶解剂进行溶解，当东风螺卵囊中有5～10％幼虫破膜而出时，东风螺卵囊中加入缓冲溶液浸泡中和，清洗，随后进行孵化。
优选地，所述溶解的条件为：温度25～31℃，盐度30～35，pH5～7。
优选地，所述溶解的时间为5～30min。
优选地，加入溶解剂以后，持续充入氧气，保持微沸腾状；当东风螺卵囊中有5～10％幼虫破膜而出时，停止充入氧气。
优选地，在加入溶解剂或加入缓冲溶液时，也可加入海水。
进一步优选地，东风螺卵囊和海水的质量体积比为0.5：0.5～4kg/L。
进一步优选地，所述海水为过滤后煮沸消毒的海水。
优选地，所述东风螺卵囊预处理为将东风螺卵囊与消毒溶液混合，随后用清水，海水进行冲洗。
进一步优选地，所述消毒溶液为聚维酮碘溶液，其浓度为20～40ppm。
优选地，消毒的时间为10～30s。
优选地，所述缓冲溶液为NH3·H2O-NH4Cl水溶液。
优选地，在孵化之前，还可以加入虾青素。虾青素能够有效地减少东风螺卵囊的应激，提高免疫力。
进一步地，所述东风螺卵囊可以为产后正常的东风螺卵囊，也可以为孵化困难的东风螺卵囊。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明提供了一种溶解剂，能有效地溶解东风螺卵囊膜，对幼虫不造成损伤，从而有效避免幼虫长期被困在膜内导致机能低下、缺氧窒息、容易感染死亡和减少了因腐烂感染影响其他卵囊和水体等问题。所述溶解剂能够有效地提高孵化率和孵化速度(幼虫破膜天数)，解决了东风螺卵囊自溶破膜困难的问题，大大提高了孵化困难的东风螺卵囊的孵化率，孵化率达90％以上，孵化率提高10～34％，幼虫破膜天数减少了1～3天；此外，还减少了东风螺卵囊在水体中的感染，增加了东风螺育苗的经济效益。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1溶解剂的制备
取一容器，依次加入6.0份海水、1.0份电解质溶液、0.5份pH调节剂和7.0份酶制剂，充分搅拌混匀，获得溶解剂；其中电解质溶液包括0.2g/L的氯化钾、0.1g/L的碳酸钙、0.15g/L的硫酸镁、0.5mg/L的维生素C、0.1g/L的复合维生素、0.2g/L的葡萄糖、3.0g/L的DMEM和0.2g/L的拜耳速补100；pH调节剂为柠檬酸；酶制剂包括6.0份溶菌酶、2.0份风味蛋白酶、1.5份胰蛋白酶、1.5份木瓜蛋白酶、1.0份纤维蛋白酶。
实施例2溶解剂的制备
取一容器，依次加入5.0份海水、0.5份电解质溶液、0.1份pH调节剂和1.0份酶制剂，充分搅拌混匀，获得溶解剂；其中电解质溶液包括0.2g/L的氯化钾、0.1g/L的碳酸钙、0.15g/L的硫酸镁、0.5mg/L的维生素C、0.1g/L的复合维生素、0.2g/L的葡萄糖、3.0g/L的DMEM和0.2g/L的拜耳速补100；pH调节剂为柠檬酸；酶制剂包括5.0份溶菌酶、1.5份风味蛋白酶、2.0份胰蛋白酶、1.0份木瓜蛋白酶、2.0份纤维蛋白酶。
实施例3溶解剂的制备
取一容器，依次加入7.5份海水、1.0份电解质溶液、0.5份pH调节剂和1.0份酶制剂，充分搅拌混匀，获得溶解剂；其中电解质溶液包括0.2g/L的氯化钾、0.1g/L的碳酸钙、0.15g/L的硫酸镁、0.5mg/L的维生素C、0.1g/L的复合维生素、0.2g/L的葡萄糖、3.0g/L的DMEM和0.2g/L的拜耳速补100；pH调节剂为柠檬酸；酶制剂包括7.0份溶菌酶、1.8份风味蛋白酶、1.8份胰蛋白酶、2.0份木瓜蛋白酶、1.5份纤维蛋白酶。
实施例4溶解剂的制备
本实施例与实施例1的区别在于：步骤(2)中，溶解剂中的酶制剂不添加溶菌酶。
实施例5溶解剂的制备
本实施例与实施例1的区别在于：步骤(2)中，溶解剂中的酶制剂不添加风味蛋白酶。
实施例6溶解剂的制备
本实施例与实施例1的区别在于：步骤(2)中，溶解剂中的不含有电解质溶液。
实施例7溶解剂的制备
本实施例与实施例1的区别在于：步骤(2)中，溶解剂中不含有酶制剂、电解质溶液、pH调节剂。
实施例8东风螺的孵化
(1)挑选出孵化困难的东风螺卵囊(指孵化时间过长，超出正常孵化时间，最后感染腐烂掉)，在浓度为30ppm的聚维酮碘溶液中消毒10s后，用洁净淡水和海水清洗干净；
(2)步骤(1)中清洗干净的东风螺卵囊与海水、实施例1中的溶解剂混合，搅拌均匀，保持水温29～30℃，盐度35，pH为6.5，并持续充入氧气，保持微沸腾状；
(3)当约有5％的东风螺卵囊有幼虫破膜而出时，停止充入氧气，将东风螺卵囊捞取出来放入另一个容器中，加入海水和缓冲溶液NH3·H2O-NH4Cl水溶液中和，浸泡20s，随后倒掉水，将东风螺卵囊取出放入孵化池中孵化；经2天孵化出幼虫，孵化率为95％。
实施例9东风螺的孵化
本实施例和实施例8的区别在于：步骤(1)中，东风螺卵囊为产后第3天的正常卵囊。其最终的孵化结果为：孵化天数4天，孵化率97％。
实施例10～12东风螺的孵化
实施例10～12和实施例8的区别在于：步骤(2)中，分别采用实施例4、实施例5、实施例6制备的溶解剂。
对比例1东风螺的孵化
本对比例和实施例8的区别在于：步骤(2)中，采用实施例7制备的溶解剂。其最终的孵化结果为：7天后全部发红发白溃烂，幼虫死亡，孵化率不足5％。
上述实施例8～12和对比例1的孵化率和孵化时间数据如下表1所示。
表1
本发明提供了一种包含多种蛋白酶组成的酶制剂组合，基于此种酶制剂制备的溶解剂对于东风螺卵囊膜具有极其优异的溶解作用，解决了东风螺卵囊自溶破膜困难的卵囊问题，同时具有一定的安全性，不会对东风螺幼虫造成伤害。在此前提下，发明人采用溶菌酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和纤维蛋白酶作为酶制剂组合；进一步将海水、电解质溶液、pH调节剂作为组合的一部分制备溶解剂，电解质溶液不仅可以为东风螺幼虫提供合适的渗透压，而且其含有的多种营养物质有助于提高机体的免疫力和活力，调节代谢，促进生长发育；而组分中的pH调节剂可以为酶制剂提供合适的pH环境有助于提高酶活力；海水则作为载体。在上述组合的作用下，大大提高了孵化困难的卵囊的孵化率和孵化速度，孵化率达90％以上，孵化率提高10～34％，幼虫破膜天数减少了1～3天；此外，还减少了东风螺卵囊在水体中的感染，增加了东风螺育苗的经济效益。
前述的实例仅是说明性的，用于解释本发明所述方法的一些特征。所附的权利要求旨在要求可以设想的尽可能广的范围，且本文所呈现的实施例为申请人真实试验结果加以论证。因此，申请人的用意是所附的权利要求不被说明本发明的特征的示例的选择限制。在权利要求中所用的一些数值范围也包括了在其之内的子范围，这些范围中的变化也应在可能的情况下解释为被所附的权利要求覆盖。
Claims (10)
1.一种溶解剂，其特征在于，所述溶解剂包含海水、电解质溶液、pH调节剂和酶制剂；所述酶制剂占溶解剂的质量分数为10～70%；按质量份数计，所述酶制剂包括5.0～7.0份溶菌酶、1.5～2.0份风味蛋白酶、1.5～2.0份胰蛋白酶、1.0～2.0份木瓜蛋白酶、1.0～2.0份纤维蛋白酶。
2.根据权利要求1所述溶解剂，其特征在于，按质量份数计，所述溶解剂包括5.0～7.5份海水、0.5～1.0份电解质溶液、0.1～0.5份pH调节剂和1.0～7.0份酶制剂。
3.根据权利要求1所述溶解剂，其特征在于，所述电解质溶液选自无机盐、维生素、糖类、DMEM和拜尔速补100中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述溶解剂，其特征在于，所述电解质溶液包括0.2～0.5g/L的氯化钾、0.1～0.5g/L的碳酸钙、0.15～0.5g/L的硫酸镁、0.5～1.0mg/L的维生素C、0.1～0.3g/L的复合维生素、0.1～0.3g/L的葡萄糖、3.0～5.0g/L的DMEM和0.2～0.4g/L的拜尔速补100。
5.根据权利要求1所述溶解剂，其特征在于，所述pH调节剂为果酸。
6.权利要求1～5任一所述溶解剂在提高东风螺孵化率和/或孵化速度中的应用。
7.权利要求1～5任一所述溶解剂在溶解东风螺卵囊膜中的应用。
8.一种提高东风螺孵化率或孵化速度的方法，其特征在于，东风螺卵囊预处理后，加入权利要求1～5任一所述溶解剂进行溶解，当东风螺卵囊中有5～10%幼虫破膜而出时，东风螺卵囊中加入缓冲溶液，浸泡中和，清洗，随后进行孵化。
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述溶解的条件为：温度25～31℃，盐度30～35，pH5～7。
10.根据权利要求8或9所述方法，其特征在于，加入溶解剂以后，持续充入氧气，保持微沸腾状；当东风螺卵囊中有5～10%幼虫破膜而出时，停止充入氧气。
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| GR01 | Patent grant | ||
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