CN116148456B - 聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法及应用,该检测方法,包括以下步骤:(1)向一系列浓度相同,体积不同的聚茴香脑磺酸钠溶液中加入柠檬酸钠溶液、氯化钙溶液和解冻过滤后的动物血浆混匀,水浴静置,观察混合溶液的凝固情况;(2)根据凝固情况,记录混合溶液发生凝固与不凝固凝固点时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的凝固点体积V;(3)根据得到的凝固点体积V,计算聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X。上述方法无需采用新鲜血液,样本更容易获得,且克服了个体差异,可定量检测聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价,提高了检测结果的准确性;可定量的评估不同批次聚茴香脑磺酸钠的抗凝性能,为聚茴香脑磺酸钠质量控制提供了技术支持。

Description

聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法及应用
技术领域
本发明涉及抗凝血技术领域,具体涉及聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法及应用。
背景技术
聚茴香脑磺酸钠是用于血液细菌培养瓶不可缺少的重要原料,它可以中和血液里的微量抗生素、抗体和补体,以提高血培养的阳性率。同时还具有抗凝血作用,它的抗凝血机理是:提高抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)的活性,抑制凝血过程中必须的丝氨酸蛋白酶、凝血酶和活化因子(FXa)的活性。
由于聚茴香脑磺酸钠来源于藻类硫酸多糖,其抗凝血性能存在较大的批间差异,对于其抗凝血性能目前可以采用抽取健康人员或动物的新鲜血液进行抗凝血测试,但该方法操作繁琐,样本获取困难,且存在个体差异,导致结果不准确,无法检测确切的效价。
因此,亟需研发一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法,以解决现有的聚茴香脑磺酸钠抗凝血检测中存在的问题。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题,提供了聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法,该方法采用解冻过滤后的动物血浆、柠檬酸钠溶液和氯化钙溶液对聚茴香脑磺酸钠的抗凝血活性进行检测,样本更容易获得,克服了个体差异,提高了检测结果的准确性。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:
本发明提供了一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法,包括以下步骤:
(1)向一系列浓度相同,体积不同的聚茴香脑磺酸钠溶液中加入柠檬酸钠溶液、氯化钙溶液和动物血浆混匀,水浴静置,观察混合溶液的凝固情况;
(2)根据步骤(1)的凝固情况,记录混合溶液发生凝固与不凝固凝固点时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的凝固点体积V;
(3)根据步骤(2)得到的凝固点体积,计算聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X。
优选地,步骤(1)中所述系列中浓度相同,体积不同的聚茴香脑磺酸钠溶液至少有10组,每组之间的体积间隔≤0.1mL。
进一步优选地,所述聚茴香脑磺酸钠溶液的浓度可以为0.01-0.1%。
进一步优选地,所述聚茴香脑磺酸钠溶液的体积为0.5-5mL。
更进一步优选地,所述系列中聚茴香脑磺酸钠溶液的浓度为0.0125%,所述聚茴香脑磺酸钠溶液的体积为1-2mL,每组之间体积的间隔为0.1mL,共包括11组。
优选地,步骤(1)中所述柠檬酸钠溶液的浓度为7-9%;进一步优选为8%。
优选地,步骤(1)中所述柠檬酸钠溶液的加入体积为10-30μL;进一步优选为20μL。
优选地,步骤(1)中所述氯化钙溶液的浓度为0.2-0.3%;进一步优选为0.25%。
优选地,步骤(1)中所述氯化钙溶液的加入体积为750-850μL,进一步优选为800μL。
优选地,步骤(1)中所述动物血浆为新鲜冷冻血浆(采血后6h内从全血中制备而成),使用前经解冻融化、过滤处理。所述的解冻融化为本领域常规的解冻技术,具体可选择在30-37℃的水浴中融化,至血浆完全融化为液体即可。所述过滤为本领域常规意义的过滤,可采用脱脂棉进行过滤,去除絮状物。
进一步优选地,所述新鲜冷冻血浆选自羊血浆、兔血浆、牛血浆、鸡血浆、猪血浆或马血浆中的任一种;更进一步优选的,所述新鲜冷冻血浆选自羊血浆、兔血浆或牛血浆中的任一种,最优选地,所述新鲜冷冻血浆为羊血浆。
优选地,步骤(1)中所述动物血浆的加入体积为1000μL。
优选地,步骤(1)中所述水浴静置的条件为:在37℃下水浴静置1h。
优选地,步骤(2)中所述凝固点体积V满足:V凝固<V<V不凝固
其中,V凝固为混合溶液出现凝固时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的最大体积;
V不凝固为混合溶液不发生凝固时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的最小体积。
优选地,步骤(3)中所述抗凝血效价X的计算公式为:X=V/V动物血浆
其中,V动物血浆为动物血浆的加入体积。
如无特殊说明,本发明中的百分数均为质量百分数。
本发明还提供了一种上述聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法在聚茴香脑磺酸钠质量控制中的应用。
优选地,所述应用中,通过比较上述聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法得到的抗凝血效价X的大小,进行不同批次间的聚茴香脑磺酸钠质量控制,具体地,抗凝血效价X的值越小,则该批次的聚茴香脑磺酸钠抗凝性能越好。
本发明所取得的技术效果是:
(1)本发明采用解冻后的动物血浆、柠檬酸钠溶液和氯化钙溶液对聚茴香脑磺酸钠的抗凝血活性进行检测,相比现有技术,无需采用新鲜血液,样本更容易获得,且克服了个体差异,可定量检测聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价,提高了检测结果的准确性。
(2)本发明的检测方法,操作简便,准确性高,重复性较好,适合规模化推广应用。
(3)本发明可定量的评判不同批次聚茴香脑磺酸钠的抗凝性能,且准确性更高,为聚茴香脑磺酸钠质量控制提供了技术支持。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式,本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用,本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用,在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前,应理解,本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案;还应当理解,本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案,而不是为了限制本发明的保护范围。
当实施例给出数值范围时,应理解,除非本发明另有说明,每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义,本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
值得说明的是,本发明中使用的原料均为普通市售产品,因此对其来源不做具体限定。
实施例1
一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法,包括以下步骤:
(1)取聚茴香脑磺酸钠(批号BCCB6102),配制成0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
(2)取刻度离心管(15mL)10支,依次加入0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液1.0mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL、1.6mL、1.7mL、1.8mL、1.9mL。
(3)向每支刻度离心管中加入8%柠檬酸钠溶液20uL、0.25%CaCl2800uL和羊血浆(新鲜冷冻血浆,使用前经解冻融化、过滤处理)1000uL,盖好胶塞并颠倒混匀4-5次,37℃水浴1h;水浴后检查各管的凝固程度,记录混合溶液发生凝固与不凝固凝固点时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的凝固点体积V,1.7mL<V<1.8mL。
(4)计算得到聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X为:(1.7-1.8)0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
实施例1-a一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法,其与实施例1的不同在于,步骤(3)中柠檬酸钠溶液和氯化钙溶液均在保护范围内,但浓度和用量略有不同,具体包括以下步骤:
(1)取聚茴香脑磺酸钠(批号BCCB6102),配制成0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
(2)取刻度离心管(15mL)10支,依次加入0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液1.0mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL、1.6mL、1.7mL、1.8mL、1.9mL。
(3)向每支刻度离心管中加入7%柠檬酸钠溶液30uL、0.2%CaCl2850uL和羊血浆(新鲜冷冻血浆,使用前经解冻融化、过滤处理)1000uL,盖好胶塞并颠倒混匀4-5次,37℃水浴1h;水浴后检查各管的凝固程度,记录混合溶液发生凝固与不凝固凝固点时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的凝固点体积V,为1.7mL<V<1.8mL。
(4)计算得到聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X为:(1.7-1.8)0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
实施例1-b一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法,其与实施例1的不同在于,步骤(3)中柠檬酸钠溶液和氯化钙溶液均在保护范围内,但浓度和用量略有不同,具体包括以下步骤:
(1)取聚茴香脑磺酸钠(批号BCCB6102),配制成0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
(2)取刻度离心管(15mL)10支,依次加入0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液1.0mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL、1.6mL、1.7mL、1.8mL、1.9mL。
(3)向每支刻度离心管中加入9%柠檬酸钠溶液10uL、0.3%CaCl2750uL和羊血浆(新鲜冷冻血浆,使用前经解冻融化、过滤处理)1000uL,盖好胶塞并颠倒混匀4-5次,37℃水浴1h;水浴后检查各管的凝固程度,记录混合溶液发生凝固与不凝固凝固点时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的凝固点体积V,为1.7mL<V<1.8mL。
(4)计算得到聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X为:(1.7-1.8)0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
实施例2重复性考察
取聚茴香脑磺酸钠(批号BCCB6102),由不同的人按照上述实施例1的检测方法进行检测,记录结果如下表所示。
表明,本发明的实验方法对操作者的要求较低,具有较好的重复性。
实施例3一致性考察
1、取聚茴香脑磺酸钠(批号BCCB6102),按实施例1的检测方法进行检测,其中,采用新鲜的人血代替进行测试新鲜冷冻血浆,计算得到聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X为:(1.7-1.8)0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
表明,本发明的检测方法可代替新鲜的人血,样本更容易获得,且克服了个体差异,可定量检测聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价。
2、按常规的检测方法对其凝血效果进行测试,具体为:
(1)将聚茴香脑磺酸钠(批号BCCB6102)配置成质量百分数为0.0375%的聚茴香脑磺酸钠溶液;
(2)使用无菌带负压的真空采血管采血,采集后2min内加入瓶中(以防采集完后出现凝血);
(3)向7.5ml的聚茴香脑磺酸钠溶液中加入无菌新鲜人血5ml,4h后无凝血继续加入5ml人血,重复步骤至凝血出现。
结果如下表所示。
用量 体积 加血量5ml 加血量10ml 加血量15ml
0.0375% 7.5ml 无凝血 无凝血 凝血
计算聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价为:(0.0375%*7.5ml)/10ml至(0.0375%*7.5ml)/15ml,得到聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价为:(0.5-0.75)0.0375%,即(1.5-2.25)0.0125%。
由上可知,本发明的检测方法得到的抗凝血效价在常规检测方法得到的效价范围内,且其平均值相差小于10%,具有较好的一致性,提高了检测结果的准确性。
实施例4不同批次原料质量评估
利用本发明的检测方法对两组不同批次聚茴香脑磺酸钠的质量进行定量,具体为:
按实施例1的检测方法,取A批次(批号BCCB6102)和B批次(批号BCCB6103)的聚茴香脑磺酸钠进行测试,得到A批次聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X为:(1.7-1.8)0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液;B批次聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X为:(1.5-1.6)0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液;由上可知,B批次的聚茴香脑磺酸钠的使用更少的0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液就可以抑制血浆凝固,具有更好的抗凝能力,因此,B批次的聚茴香脑磺酸钠的质量要优于A批次。
同时,为了进一步验证本发明所取得的技术效果,下面结合以下实施例对本发明的准确性进行阐述。
实施例1-c一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法,其与实施例1的不同在于,步骤(3)中柠檬酸钠溶液和氯化钙溶液的浓度和/或用量不在保护范围内,但二者加入的总量相同,具体包括以下步骤:
(1)取聚茴香脑磺酸钠(批号BCCB6102),配制成0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
(2)取刻度离心管(15mL)10支,依次加入0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液1.0mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL、1.6mL、1.7mL、1.8mL、1.9mL。
(3)向每支刻度离心管中加入4%柠檬酸钠溶液20uL、0.4%CaCl2700uL和羊血浆(新鲜冷冻血浆,使用前经解冻融化、过滤处理)1000uL,盖好胶塞并颠倒混匀4-5次,37℃水浴1h;水浴后检查各管的凝固程度,记录混合溶液发生凝固与不凝固凝固点时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的凝固点体积V,为1.4mL<V<1.5mL。
(4)计算得到聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X为:(1.4-1.5)0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
实施例1-d一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法,其与实施例1的不同在于,步骤(3)中柠檬酸钠溶液和氯化钙溶液的浓度和/或用量不在保护范围内,但二者加入的总量相同,具体包括以下步骤:
(1)取聚茴香脑磺酸钠(批号BCCB6102),配制成0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
(2)取刻度离心管(15mL)10支,依次加入0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液1.0mL、1.1mL、1.2mL、1.3mL、1.4mL、1.5mL、1.6mL、1.7mL、1.8mL、1.9mL。
(3)向每支刻度离心管中加入5%柠檬酸钠溶液50uL、0.2%CaCl2550uL和羊血浆(新鲜冷冻血浆,使用前经解冻融化、过滤处理)1000uL,盖好胶塞并颠倒混匀4-5次,37℃水浴1h;水浴后检查各管的凝固程度,记录混合溶液发生凝固与不凝固凝固点时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的凝固点体积V,为0.8mL<V<0.9mL。
(4)计算得到聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X为:(0.8-0.9)0.0125%聚茴香脑磺酸钠溶液。
结果发现,分别采用实施例1-c和实施例1-d的检测方法,对同批次聚茴香脑磺酸钠(批号BCCB6102)进行抗凝血效价检测,其得到的效价与常规的新鲜人血的检测方法得到的结果一致性较差,其中,虽然实施例1-c的检测方法得到的聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价在(1.5-2.25)0.0125%的范围内,但二者平均值相差17.3%,无法满足准确性更高的要求。
最后应当说明的是,以上内容仅用以说明本发明的技术方案,而非对本发明保护范围的限制,本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换,均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (8)

1.一种聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)向一系列浓度相同,体积不同的聚茴香脑磺酸钠溶液中加入柠檬酸钠溶液、氯化钙溶液和动物血浆混匀,水浴静置,观察混合溶液的凝固情况;
(2)根据步骤(1)的凝固情况,记录混合溶液发生凝固与不凝固凝固点时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的凝固点体积V;
(3)根据步骤(2)得到的凝固点体积V,计算聚茴香脑磺酸钠的抗凝血效价X;
步骤(1)中所述动物血浆为新鲜冷冻血浆,使用前经解冻融化、过滤处理;
步骤(2)中所述凝固点体积V满足:
V凝固<V<V不凝固
其中,V凝固为混合溶液出现凝固时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的最大体积;
V不凝固为混合溶液不发生凝固时所对应的聚茴香脑磺酸钠溶液的最小体积;
步骤(3)中所述抗凝血效价X的计算公式为:X=V / V动物血浆
其中,V动物血浆为动物血浆的加入体积。
2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(1)中所述聚茴香脑磺酸钠溶液至少有10组,每组之间的体积间隔≤0.1 mL。
3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(1)中所述柠檬酸钠溶液的浓度为7-9%,加入体积为10-30μL。
4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(1)中所述氯化钙溶液的浓度为0.2-0.3%,加入体积为750-850μL。
5.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,所述新鲜冷冻血浆选自羊血浆、兔血浆、牛血浆、鸡血浆、猪血浆或马血浆中的任一种。
6.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,所述动物血浆的加入体积为1000μL。
7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(1)中所述水浴静置的条件为:在37℃下水浴静置1h。
8.权利要求1-7任一项的聚茴香脑磺酸钠抗凝血效价的检测方法在聚茴香脑磺酸钠质量控制中的应用。
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