CN109609585A - 一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基及其制备方法和鉴别杂菌的方法 - Google Patents
一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基及其制备方法和鉴别杂菌的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109609585A CN109609585A CN201910005227.8A CN201910005227A CN109609585A CN 109609585 A CN109609585 A CN 109609585A CN 201910005227 A CN201910005227 A CN 201910005227A CN 109609585 A CN109609585 A CN 109609585A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture medium
- miscellaneous bacteria
- fermentation liquid
- identifying
- erythromycin fermentation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/045—Culture media therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基及其制备方法和鉴别杂菌的方法,该培养基包括以下原料:氯化钠,牛肉膏,酵母膏,葡萄糖,蛋白胨和硫酸镁;制备方法为将原料溶解于蒸馏水中后调pH,滴加苯酚红溶液至培养基呈深红色,将培养基分装于干净的空试管中并以胶塞或试管帽密封,灭菌后即得所述鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基;鉴别杂菌的方法为将需检查的红霉素发酵液样品接入培养基中培养,取样涂片在显微镜下检查,通过检查涂片上菌株的菌型判断是否含有杂菌。本发明培养基目的明确、营养协调丰富,制备方法简单、快捷、方便、高效,鉴别杂菌的方法简单、有效、准确度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基及其制备方法和鉴别杂菌的方法,属于微生物检测领域。
背景技术
培养基法是传统的空气微生物气溶胶检测方法,一般用自然沉降或采样器把微生物采样到液体、固体或半固体的采样介质上,再经过培养繁殖生长成菌落后计数,然后进行分离和纯化,通过检测鉴定,确定为何种微生物。
红霉素(Erythromycin)是1952年从红色链霉菌(Streptomyceserythreus)培养液中分离出来的一种碱性抗生素。红霉素具有广谱抗菌作用,对革兰阳性菌、如葡萄球菌、化脓性链球菌、绿色链球菌、肺炎链球菌、粪链球菌、梭状芽孢杆菌、白喉杆菌等有较强的抑制作用。对革兰阴性菌、如淋球菌、螺旋杆菌、百日咳杆菌、布氏杆菌、军团菌、以及流感嗜血杆菌、拟杆菌也有相当的抑制作用。我国从1957年试制成功并逐步投入大生产。
目前,国内已有关于红霉素发酵工艺的研究,随着高产菌株的投产及发酵方法的不断改进,使发酵单位水平不断提高,但仍然没有解决原料染杂菌菌后难以鉴别的问题,导致发酵液变质,品质变差。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基及其制备方法和鉴别杂菌的方法,采用如下技术方案:
一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基,以重量份数计,包括以下原料:氯化钠0.27~0.38份,牛肉膏0.27~0.38份,酵母膏0.27~0.38份,葡萄糖0.4~0.6份,蛋白胨1.0~1.2份,硫酸镁0.025~0.028份;优选的,包括:氯化钠0.3份,牛肉膏0.3份,酵母膏0.3份,葡萄糖0.5份,蛋白胨1.0份,硫酸镁0.025份。
本发明鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基各种原料均可从市场购得,其中,酵母膏富含完全蛋白质,均衡的必需氨基酸以及B族维生素、核苷酸、微量元素等,葡萄糖提供碳源,氯化钠和硫酸镁提供无机盐,牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素。本发明的培养基目的明确、营养协调丰富、理化因素适宜、原料来源广且经济节约,能够满足多种微生物的营养需求,以便简单直观的获得杂菌检测结果。
进一步,牛肉膏、酵母膏和蛋白胨为BR级试剂,葡萄糖、氯化钠和硫酸镁为AR级试剂。
采用上述进一步的有益效果在于,BR级试剂:生物试剂,指有关生命科学研究的生物材料或有机化合物,以及临床诊断、医学研究用的试剂;AR级试剂:分析纯试剂,主成分含量很高、纯度较高(99.7%),干扰杂质很低,适用于工业分析及化学实验。本发明选用BR级试剂牛肉膏、酵母膏和蛋白胨以及AR级试剂葡萄糖、氯化钠和硫酸镁,保证了培养基原料的安全性,提高了杂菌检测结果的准确性。
本发明还提供了上述鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基的制备方法,包括以下步骤:
(1)按上述的重量份数称取各原料;
(2)在搅拌条件下,将上述的原料加入至60~70℃的蒸馏水中溶解,优选为在60℃的蒸馏水中溶解,以1mol/L的NaOH溶液或1mol/L的HCL溶液调pH值至7.30~7.60,滴加苯酚红溶液(称取0.3~0.5g苯酚红指示剂用100ml无水乙醇溶解,优选为称取0.3g苯酚红指示剂)至培养基呈深红色;
(3)将培养基分装于干净的空试管中并以胶塞或试管帽密封,灭菌后即得所述鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基。
本发明的培养基生产方法简单、快捷、方便、高效,极大地方便了红霉素发酵工艺中的杂菌检测,为提高红霉素发酵液的质量打下良好基础。
进一步,步骤(3)还包括灭菌后检测所述培养基性能的操作,所述操作具体为:在36~37℃下,向培养基内滴加3~10滴自来水后塞上胶塞培养,观察肉汤12小时内的变色的灵敏性,若不在此范围则重新配制。
采用上述进一步的有益效果在于,在36~37℃下滴加自来水培养,用于检验肉汤变色的灵敏性,从而保证培养基检测杂菌的准确性。
本发明还提供了利用上述培养基鉴别红霉素发酵液杂菌的方法:将需检查的红霉素发酵液样品接入上述的培养基中,36~37℃下培养8-24h,取样涂片在显微镜下检查。通过检查涂片上菌株的菌型判断是否含有杂菌。
因为不同菌株的形态特征不同,所以通过显微镜涂片观察可以简单直观的判断红霉素发酵液是否染有杂菌。以此方法鉴别红霉素发酵液杂菌的方法不仅简单有效,而且对红霉素发酵液染菌判断最为准确,从而能够提早预防发酵液染菌带来的损失。
进一步,上述培养基鉴别红霉素发酵液杂菌的方法还包括在培养过程中对4~6个时间点的培养基取样进行涂片镜检的操作,涂片镜检的结果中连续三个点都有杂菌且菌型一致则判断该样品染菌。
采用上述进一步的有益效果在于,采用多个时间点进行取样检测,减少了误差,提高了检测结果的准确性。
进一步,上述培养基鉴别红霉素发酵液杂菌的方法还包括接入样品前将所制备的培养基空白培养的操作,所述培养的温度为36~37℃,时间为48~72h,培养后无菌落生成则培养基可使用。
采用上述进一步的有益效果在于,对培养基进行空白培养,排除了培养基自身存在杂菌的可能性。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
以下是实例中,牛肉膏、酵母膏和蛋白胨为BR级试剂,葡萄糖、氯化钠和硫酸镁为AR级试剂。
实施例1
鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基,包括以下重量的原料:氯化钠0.27kg,牛肉膏0.27kg,酵母膏0.27kg,葡萄糖0.4kg,蛋白胨1.0kg,硫酸镁0.025kg。
鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基的制备方法,包括以下步骤:
(1)按上述的重量称取各原料;
(2)在搅拌条件下,将所述原料加入至65℃的蒸馏水中溶解,以1mol/L的NaOH溶液或1mol/L的HCL溶液调pH值至7.30,称取0.4g苯酚红指示剂用100ml无水乙醇溶解后得到苯酚红溶液,然后滴加苯酚红溶液至培养基呈深红色;
(3)将培养基分装于干净的空试管中并以胶塞或试管帽密封,灭菌后在36℃下,向培养基内滴加3滴自来水后塞上胶塞培养,观察肉汤12小时内的变色的灵敏性,若不在此范围则重新配制,若在此范围即得鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基。
实施例2
鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基,包括以下重量的原料:氯化钠0.38kg,牛肉膏0.38kg,酵母膏0.38kg,葡萄糖0.6kg,蛋白胨1.2kg,硫酸镁0.028kg。
鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基的制备方法,包括以下步骤:
(1)按上述的重量称取各原料;
(2)在搅拌条件下,将所述原料加入至70℃的蒸馏水中溶解,以1mol/L的NaOH溶液或1mol/L的HCL溶液调pH值至7.60,称取0.5g苯酚红指示剂用100ml无水乙醇溶解后得到苯酚红溶液,然后滴加苯酚红溶液至培养基呈深红色;
(3)将培养基分装于干净的空试管中并以胶塞或试管帽密封,灭菌后在37℃下,向培养基内滴加10滴自来水后塞上胶塞培养,观察肉汤12小时内的变色的灵敏性,若不在此范围则重新配制,若在此范围即得鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基。
实施例3
鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基,包括以下重量的原料:氯化钠0.30kg,牛肉膏0.30kg,酵母膏0.30kg,葡萄糖0.5kg,蛋白胨1.0kg,硫酸镁0.025kg。
鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基的制备方法,包括以下步骤:
(1)按上述的重量称取各原料;
(2)在搅拌条件下,将所述原料加入至60℃的蒸馏水中溶解,以1mol/L的NaOH溶液或1mol/L的HCL溶液调pH值至7.50,称取0.3g苯酚红指示剂用100ml无水乙醇溶解后得到苯酚红溶液,然后滴加苯酚红溶液至培养基呈深红色;
(3)将培养基分装于干净的空试管中并以胶塞或试管帽密封,灭菌后在37℃下,向培养基内滴加5滴自来水后塞上胶塞培养,观察肉汤12小时内的变色的灵敏性,若不在此范围则重新配制,若在此范围即得鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基。
性能检测
鉴别红霉素发酵液杂菌试验:
将实施例1-3所制备的培养基分别在36℃下空白培养60h,培养后无菌落生成,培养基可使用。
将需检查的红霉素发酵液样品分为A、B、C三份,分别接入实施例1-3所制备的培养基中,37℃下培养20h,在培养过程中分别在4h、8h、12h、16h和20h取样,取样涂片在显微镜下检查进行涂片镜检的操作,通过检查涂片上菌株的菌型判断是否含有杂菌。
试验结果显示,红霉素发酵液样品A涂片镜检过程中,12h、16h和20h三个点都有杂菌且菌型一致,判断红霉素发酵液样品A染菌;
红霉素发酵液样品B涂片镜检过程中,8h、12h、16h和20h四个点都有杂菌且菌型一致,判断红霉素发酵液样品B染菌;
红霉素发酵液样品C涂片镜检过程中,4h、8h、12h、16h和20h五个点都有杂菌且菌型一致,判断红霉素发酵液样品C染菌。
试验结果证明,本发明所制备的鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基,具有良好的灵敏性和准确性,且鉴别方法简单易操作。
对所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (10)
1.一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基,其特征在于,以重量份数计,包括以下原料:氯化钠0.27~0.38份、牛肉膏0.27~0.38份、酵母膏0.27~0.38份、葡萄糖0.4~0.6份、蛋白胨1.0~1.2份及硫酸镁0.025~0.028份。
2.根据权利要求1所述的一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基,其特征在于,以重量份数计,包括以下原料:氯化钠0.3份、牛肉膏0.3份、酵母膏0.3份、葡萄糖0.5份、蛋白胨1.0份及硫酸镁0.025份。
3.根据权利要求1或2所述的一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基,其特征在于,所述牛肉膏、酵母膏和蛋白胨为BR级试剂,所述葡萄糖、氯化钠和硫酸镁为AR级试剂。
4.一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)按权利要求1至3所述鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基的原料重量份数称取各原料;
(2)在搅拌条件下,将所述原料加入至蒸馏水中溶解,调pH值至7.30~7.60,滴加苯酚红溶液至培养基呈深红色;
(3)将培养基分装于干净的空试管中并以胶塞或试管帽密封,灭菌后即得所述鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基。
5.根据权利要求4所述的一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述蒸馏水的温度为60~70℃;所述调pH值至7.30~7.60的操作为以1mol/L的NaOH溶液或1mol/L的HCL溶液调节pH值至7.30~7.60;所述苯酚红溶液的制备方法为称取0.3~0.5g苯酚红指示剂用100ml无水乙醇溶解。
6.根据权利要求5所述的一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述蒸馏水的温度为60℃,所述苯酚红溶液的制备方法为称取0.3g苯酚红指示剂用100ml无水乙醇溶解。
7.根据权利要求4所述的一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)还包括灭菌后检测所述培养基性能的操作,所述操作具体为:在36~37℃下,向培养基内滴加3~10滴自来水后塞上胶塞培养,观察肉汤12小时内的变色的灵敏性,若不在此范围则重新配制。
8.一种鉴别红霉素发酵液杂菌的方法,其特征在于,所述鉴别方法为:将需检查的红霉素发酵液样品接入权利要求1至3所述的培养基中,36~37℃下培养8-24h,取样涂片在显微镜下检查,通过检查涂片上菌株的菌型判断是否含有杂菌。
9.根据权利要求8所述的一种鉴别红霉素发酵液杂菌的方法,其特征在于,还包括在培养过程中对4~6个时间点的培养基取样进行涂片镜检的操作。
10.根据权利要求8所述的一种鉴别红霉素发酵液杂菌的方法,其特征在于,还包括接入样品前将所制备的培养基空白培养的操作,所述培养的温度为36~37℃,时间为48~72h,培养后无菌落生成则培养基可使用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910005227.8A CN109609585A (zh) | 2019-01-03 | 2019-01-03 | 一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基及其制备方法和鉴别杂菌的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910005227.8A CN109609585A (zh) | 2019-01-03 | 2019-01-03 | 一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基及其制备方法和鉴别杂菌的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109609585A true CN109609585A (zh) | 2019-04-12 |
Family
ID=66016029
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201910005227.8A Pending CN109609585A (zh) | 2019-01-03 | 2019-01-03 | 一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基及其制备方法和鉴别杂菌的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109609585A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110923290A (zh) * | 2019-12-04 | 2020-03-27 | 华熙生物科技股份有限公司 | 一种快速发现微生物发酵过程早期染菌的方法 |
CN113637567A (zh) * | 2021-06-29 | 2021-11-12 | 安徽曦强乳业集团有限公司 | 一种生产用发酵乳抽样杂菌检测装置 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101012477A (zh) * | 2007-01-26 | 2007-08-08 | 华南理工大学 | 一种快速检测食品内微生物的方法及培养基 |
CN105002260A (zh) * | 2015-08-18 | 2015-10-28 | 四川清香园调味品股份有限公司 | 用于检测引起酱油变质的微生物的培养基及检测方法 |
CN107058457A (zh) * | 2016-12-20 | 2017-08-18 | 陕西麦可罗生物科技有限公司 | 一种农用抗生素发酵过程中杂菌的检测方法 |
-
2019
- 2019-01-03 CN CN201910005227.8A patent/CN109609585A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101012477A (zh) * | 2007-01-26 | 2007-08-08 | 华南理工大学 | 一种快速检测食品内微生物的方法及培养基 |
CN105002260A (zh) * | 2015-08-18 | 2015-10-28 | 四川清香园调味品股份有限公司 | 用于检测引起酱油变质的微生物的培养基及检测方法 |
CN107058457A (zh) * | 2016-12-20 | 2017-08-18 | 陕西麦可罗生物科技有限公司 | 一种农用抗生素发酵过程中杂菌的检测方法 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
夏焕章等: "《发酵工艺学》", 31 August 2015, 北京:中国医药科技出版社 * |
宋超先等: "《微生物与发酵基础教程》", 31 May 2007, 天津:天津大学出版社 * |
曹文伟等: "红霉素发酵液中污染细菌的分离与鉴定及其对红霉素发酵的影响", 《中国抗生素杂志》 * |
蒋秀芬等: "抗菌素发酵生产中细菌污染的快速检查法", 《黑龙江医药》 * |
郑毅等: "《农业微生物及技术应用》", 31 July 2016, 长春:吉林大学出版社 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110923290A (zh) * | 2019-12-04 | 2020-03-27 | 华熙生物科技股份有限公司 | 一种快速发现微生物发酵过程早期染菌的方法 |
CN113637567A (zh) * | 2021-06-29 | 2021-11-12 | 安徽曦强乳业集团有限公司 | 一种生产用发酵乳抽样杂菌检测装置 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Drancourt | Detection of microorganisms in blood specimens using matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry: a review | |
CN101570783A (zh) | 水产品中9种致病性微生物检测试剂盒及检测方法 | |
CN109609585A (zh) | 一种鉴别红霉素发酵液杂菌的培养基及其制备方法和鉴别杂菌的方法 | |
CN101144775A (zh) | 细菌实时荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒及其应用 | |
CN102329879A (zh) | 荧光定量pcr对布鲁氏杆菌气溶胶的快速鉴定方法 | |
La Scolea Jr et al. | Diagnosis of bacteremia in children by quantitative direct plating and a radiometric procedure | |
CN110184372A (zh) | 一种检测牛源肺炎克雷伯菌特异性引物及其方法和应用 | |
Blackall | An evaluation of methods for the detection of carbohydrate fermentation in avian Haemophilus species | |
CN112683625A (zh) | 婴幼儿配方食品中游离生物素含量的检测方法 | |
CN102093963A (zh) | 富含磷壁酸的肺炎链球菌的培养方法 | |
CN1414112A (zh) | 用于鉴定血液中病原菌的基因芯片及其制造方法 | |
DIBB et al. | Evaluation of Rosco diagnostic β‐glucuronidase tablets in the identification of urinary isolates of Escherichia coli | |
CN101824462B (zh) | 一种食品中弯曲菌的定量检测方法 | |
Bannatyne et al. | Radiometric detection of bacteremia in neonates | |
Yagupsky | Blood cultures for the diagnosis of human Brucellosis | |
US5091307A (en) | Procedure for the counting, detection and identification of mycoplasms in general and urinogenital mycoplasms in particular and a biological medium specially adapted to this effect | |
Arzese et al. | Evaluation of an automated system for identification of anaerobic bacteria | |
CN109136395A (zh) | 一种b族链球菌核酸检测试剂盒 | |
EA036766B1 (ru) | Способ выявления патогенов | |
Muttawar et al. | Fatty acid profiling of enterococcal isolates by Fames analysis with reference to antibiotic resistance from clinical samples collected in the Chandrapur region | |
CN114196768B (zh) | 用于鉴别铜绿假单胞菌血清群的特异性分子靶标及其快速检测方法 | |
CN103305593B (zh) | 一种利用RNA恒温扩增的沙门氏菌(Sal.spp.)核酸检测试剂盒 | |
CN107083434A (zh) | 一种荧光pcr定量检测b族链球菌的样本前处理方法及应用 | |
CN111172305B (zh) | 一种检测大肠埃希菌的方法及试剂盒 | |
JPH0723794A (ja) | 細菌同定用培地及び細菌同定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190412 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |