CN101012477A - 一种快速检测食品内微生物的方法及培养基 - Google Patents
一种快速检测食品内微生物的方法及培养基 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种培养基，具体涉及一种快速检测食品内微生物的方法和培养基。本发明的培养基的组成为：每1000mL所述培养基中含胰蛋白胨4.5g～5.5g、酵母膏2.0g～3.0g、葡萄糖0.5g～1.5g、牛肉膏0.5g～1.5g、氯化钠0.3g～0.7g、琼脂10g～20g；所述培养基的pH值为7.2～7.8。所述的培养基1000mL中还可以含有15mg～25mg的TTC。每本发明的培养基能使细菌在短时间内生长出肉眼可见的菌落和在短时间内生长出更多的菌落，从而将食品中细菌总数的检测时间缩短至12h～18h。
Description
技术领域
本发明涉及一种培养基，具体涉及一种快速检测食品内微生物的方法和培养基。
背景技术
微生物学检测结果是判断食品是否符合质量要求和卫生学要求的一项重要标准。微生物学检测包括细菌总数检测、大肠菌群检测和致病菌检测。在实际生产中常以细菌总数检测最为常用，在许多食品工厂中，每天都必须进行多批次细菌总数检测。目前，我国检测食品细菌总数的方法为国标法[GB 4789.2]，在现代的食品工业生产中，要求细菌总数的检测结果要尽快的得到。目前国标法所采用方法需要48h，检测结果往往滞后，许多食品在生产当天就必须出售，现行国标法实际上已经不能满足现代食品工业生产的需要。目前国际上微生物快速检测方法主要有DNA/RNA探针法、基因重组法、ATP-生物荧光法等，但是这些方法的仪器较昂贵，而且试验操作较复杂，需要经过培训后的专业人员才能进行操作。
发明内容
为克服现有方法存在的上述缺陷，本发明提供一种快速检测食品中微生物的方法。本发明的一种快速检测食品内微生物的方法，包括以下步骤：
(1)取检样配制成均匀稀释液，然后再配制递增稀释液；
(2)根据待检食品的情况选择合适的稀释度，吸取该稀释度的稀释液置于灭菌平皿内；
(3)稀释液移入灭菌平皿后，将40℃～50℃的培养基加入灭菌平皿，稀释液与培养基的体积比为1∶10～20，混匀，然后静置冷却；
(4)待培养基凝固后，翻转平板，在30℃～40℃培养，培养时间为10h～24h；培养后取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每g(或mL)样品含菌数；
其中，所述步骤(3)中培养基含有的成分及其含量为：每1000mL所述培养基中含胰蛋白胨4.5g～5.5g、酵母膏2.0g～3.0g、葡萄糖0.5g～1.5g、牛肉膏0.5g～1.5g、氯化钠0.3g～0.7g、琼脂15g～20g；所述培养基的pH值为6.0～8.0。所述的培养基每1000ml还可以含有TTC 15mg～25mg。
本发明的方法，所述步骤(1)中取检样配制成均匀稀释液，最好为将检样配制成1∶10的均匀稀释液；所述步骤(1)中配制递增稀释液，最好是按10倍递增配制稀释液；
所述步骤(3)中稀释液与培养基的体积比最好为1∶15。
所述步骤(4)中的培养温度最佳为36℃，培养时间最佳为12h～18h。
本发明还提供一种快速检测食品内微生物的培养基，每1000mL所述培养基中含胰蛋白胨4.5g～5.5g、酵母膏2.0g～3.0g、葡萄糖0.5g～1.5g、牛肉膏0.5g～1.5g、氯化钠0.3g～0.7g、琼脂15g～20g；所述培养基的pH值为6.0～8.0。
本发明所述的一种快速检测食品内微生物的培养基，组分的组成最佳是：每1000mL所述培养基含胰蛋白胨5.0g、酵母膏2.5g、葡萄糖1.0g、牛肉膏1.0g、氯化钠0.5g、琼脂15.0g；所述的培养基的pH值最佳为7.5。
本发明所述的一种快速检测食品内微生物的培养基，每1000mL所述培养基还可以含有TTC 15mg～25mg；TTC的最佳含量是20mg；本发明所述的TTC是指2，3，5-氧化三苯基四唑。因为培养基是透明的淡黄色，而有的菌落本身是乳白色，这样就会给记数带来一定的困难，有一些个体较小的菌落计数时可能会漏数，为此添加一定量的TTC作为染色剂，以改善检测细菌总数时的目测条件，提高目测的准确性。
本发明所述一种快速检测食品内微生物的培养基可以由以下方法制得：在1000mL蒸馏水中加入胰蛋白胨4.5g～5.5g、酵母膏2.0g～3.0g、葡萄糖0.5g～1.5g、牛肉膏0.5g～1.5g、氯化钠0.3g～0.7g，搅拌溶解，调节pH值为6.0～8.0，然后加入琼脂15g～20g，加热溶解，然后灭菌即得所述的培养基。如果配制含TTC的培养基，可以在搅拌溶解前加入TTC。
本发明的快速检测食品中微生物的方法和培养基与现有技术相比具有以下有益效果：
1、本发明的培养基能使微生物在较短的时间内长出肉眼可见的菌落，从而达到快速检测的目的；
2、本发明的培养基添加TTC作染色剂后，改善了检测细菌总数时的目测条件，提高了目测的准确性；
3、本发明的培养基作用是给细菌提供了一种优良的生长条件，使细菌能够在短时间内生长出肉眼可见的菌落和在短时间内生长出更多的菌落，从而将食品中细菌总数的检测时间缩短至12h～18h，而目前的国标法对食品中细菌总数均需要48小时以上。
附图说明
图1是苹果汁细菌总数随时间变化曲线图；
图2是西红柿汁细菌总数随时间变化曲线图；
图3是原料奶细菌总数随时间变化曲线图；
图4是猪肉细菌总数随时间变化曲线图；
具体实施方式
以下列举本发明的一些优选的实施例，以对本发明做进一步的说明。
以下实施例中所用试剂的规格和来源分别为：
TTC(分析纯)：中国医药(集团)上海化学试剂公司
胰蛋白胨：广东环凯微生物科技公司
酵母膏：广东环凯微生物科技公司
葡萄糖：广东环凯微生物科技公司
牛肉膏：广东环凯微生物科技公司
氯化钠(分析纯)：广州化学试剂厂
无水乙醇(分析纯)：天津市百世化工有限公司
NaOH(分析纯)：广州市东红化工厂
HCl(分析纯)：广州市东红化工厂
琼脂条：中国医药(集团)上海化学试剂公司
实施例1本发明的培养基
在1000mL蒸馏水中加入胰蛋白胨5.0g、酵母膏2.5g、葡萄糖1.0g、牛肉膏1.0g、氯化钠0.5g，TTC 20mg，搅拌溶解，调节pH值为7.5，然后加入琼脂15g，加热溶解，然后在121℃下灭菌15min，即得本发明所述的培养基。
实施例2本发明的培养基
在1000mL蒸馏水中加入胰蛋白胨4.5g、酵母膏2.0g、葡萄糖0.5g、牛肉膏0.5g、氯化钠0.3g，搅拌溶解，调节pH值为6.0，然后加入琼脂18g，加热溶解，然后灭菌即得本发明所述的培养基。
实施例3本发明的培养基
在1000mL蒸馏水中加入胰蛋白胨5.5g、酵母膏3.0g、葡萄糖1.5g、牛肉膏1.5g、氯化钠0.7g，搅拌溶解，调节pH值为8.0，然后加入琼脂20g，加热溶解，然后灭菌即得本发明所述的培养基。
实施例4本发明的检测方法
(1)取检样配制成均匀稀释液，然后再配制递增稀释液；
(2)根据待检食品的情况选择合适的稀释度，吸取该稀释度的稀释液置于灭菌平皿内；
(3)稀释液移入灭菌平皿后，将46℃的实施例1的培养基加入灭菌平皿，稀释液与培养基的体积比为1∶15，混匀，然后静置冷却；
(4)待培养基凝固后，翻转平板，在36℃培养，培养时间为18h；培养后取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每g(或mL)样品含菌数。
实施例5本发明的检测方法
(1)取检样配制成均匀稀释液，然后再配制递增稀释液；
(2)根据待检食品的情况选择合适的稀释度，吸取该稀释度的稀释液置于灭菌平皿内；
(3)稀释液移入灭菌平皿后，将40℃的实施例2的培养基加入灭菌平皿，稀释液与培养基的体积比为1∶10，混匀，然后静置冷却；
(4)待培养基凝固后，翻转平板，在33℃培养，培养时间为12h；培养后取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每g(或mL)样品含菌数。
实施例6本发明的检测方法
(1)取检样配制成均匀稀释液，然后再配制递增稀释液；
(2)根据待检食品的情况选择合适的稀释度，吸取该稀释度的稀释液置于灭菌平皿内；
(3)稀释液移入灭菌平皿后，将50℃的实施例2的培养基加入灭菌平皿，稀释液与培养基的体积比为1∶20，混匀，然后静置冷却；
(4)待培养基凝固后，翻转平板，在40℃培养，培养时间为24h；培养后取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每g(或mL)样品含菌数。
实施例7应用本发明的方法和培养基对苹果汁中的微生物进行检测
1、在检测前，先将超净工作台的紫外光灯打开，照射超净工作台30min，进行紫外光灭菌，然后再以75％酒精棉球(V/V)擦拭超净工作台，以保证超净工作台处于无菌状态。实验时打开通风设备，保证超净工作台处于无菌状态。实验前双手用75％酒精棉球(V/V)擦拭，以免带入杂菌。
2、将新鲜的苹果先以用75％酒精棉球(V/V)消毒过的刀削去表皮，再用电动榨果汁机榨出新鲜果汁，所有操作均以无菌操作的方法来进行，确保样品不会带入污染。将果汁25mL放于有225mL无菌水的灭菌三角瓶中，振荡，配制成1∶10的均匀稀释液。
3、用1mL移液枪吸取1∶10稀释液1mL，注入含9mL无菌水的试管，配制成1∶100的均匀稀释液。
4、将1mL移液枪换用另一个灭过菌的移液枪枪头，按上述操作顺序，配制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用一个灭过菌的移液枪枪头，直至稀释度至10-5。
5、选择稀释度为10-3的稀释液，用1mL移液枪移1mL该稀释液于灭菌平皿内。
6、稀释液移入平皿后，及时将15mL 46℃的实施例1的培养基注入培养皿，并转动平皿使混合均匀，然后静至冷却。同时将培养基注入到加有1mL稀释液(不含样品)的灭菌平皿内做空白对照。
7、待培养基凝固后，翻转平板，置于36℃的恒温箱内。选择10h、12h、14h、16h、24h 5个时间进行观察，记录菌落总数。
步骤2～7均在超净工作台中进行，以实现无菌操作的目的。
表1是苹果汁样品中不同时间的菌落染色结果，图1是苹果汁细菌总数随时间变化曲线图。
表1苹果汁样品中不同时间的菌落染色结果
| 培养时间 | 10h | 12h | 14h | 16h | 24h |
| 染色结果 | (-) | (+) | (++) | (++) | (++) |
注：“-”：表示未显色；“+”：表示培养基已经染成淡红色，但染色效果不甚明显：“++”：表示培养基已经染成鲜红色，染色效果明显。
由检测结果可见，对于苹果汁而言，培养14h后，菌落长成鲜艳的红色，而培养基本身呈透明的淡黄色，观察起来十分方便。从图1中苹果汁细菌生长曲线可以看出，培养14h以后，生长曲线基本呈一条直线。培养14h后，所得到的菌落总数为培养24h后所得到的菌落总数的100％，也即是可以认为培养14h所得到的观察结果已足够，从而可以看出本发明的方法对苹果汁中的微生物检测时间只需要14h。
实施例8应用本发明的方法和培养基对西红柿汁中的微生物进行检测
按实施例7的步骤和参数操作对西红柿汁中的微生物进行检测。
表2是西红柿汁样品中不同时间的菌落染色结果，图2是西红柿汁细菌总数随时间变化曲线。
表2西红柿汁样品中不同时间的菌落染色结果
| 培养时间 | 10h | 12h | 14h | 16h | 24h |
| 染色结果 | (+) | (+) | (++) | (++) | (++) |
注：“-”：表示未显色；“+”：表示培养基已经染成淡红色，但染色效果不甚明显；“++”：表示培养基已经染成鲜红色，染色效果明显。
由检测结果可见，对于西红柿汁而言，培养14h后，菌落长成鲜艳的红色，而培养基本身呈透明的淡黄色，观察起来十分方便。从西红柿汁细菌生长曲线可以看出，培养14h以后，生长曲线基本呈一条直线。培养14h得到的菌落总数为培养14h后所得到的菌落总数的99％，也即是可以认为培养14h所得到的观察结果已足够，从而可以看出本发明的方法对西红柿汁中微生物的检测时间为14h。
实施例9对原料奶中的微生物快速检测
按实施例7的步骤操作，对操作台灭菌，然后取样原料奶25ml配制1∶10的稀释液，然后10倍递增配制递增稀释液直至稀释度为10-5，取10-3稀释度的稀释液1ml加15ml实施例1的培养基在37℃下进行培养，其中步骤7中的观察时间选择12h、14h、16h、18h、24h、36h、48h共7个时间进行观察。表3是原料奶样品中不同时间的菌落染色结果，图3是原料奶细菌总数随时间变化曲线图。
表3原料奶样品中不同时间的菌落染色结果
| 培养时间 | 12h | 14h | 16h | 18h | 24h | 36h | 48h |
| 染色结果 | (-) | (+) | (+) | (++) | (++) | (++) | (++) |
注：“-”：表示未显色；“+”：表示培养基已经染成淡红色，但染色效果不甚明显；“++”：表示培养基已经染成鲜红色，染色效果明显。
由检测结果可见，对于原料奶而言，培养18h后，菌落长成鲜艳的红色，而培养基本身呈透明的淡黄色，观察起来十分方便。从图3中原料奶细菌生长曲线可以看出，培养18h以后，生长曲线基本呈一条直线。培养18h所得到的菌落总数为培养48h后所得到的菌落总数的100％。也即是可以认为培养18h所得到的观察结果已足够，可见本发明的方法对原料奶中的微生物检测只需18h。
由检测结果看出，原料奶所需要的检测时间要稍长于水果，这与原料奶与水果中所含的微生物种类不同有关。
实施例10本方法在检测鲜肉细菌总数中的应用
按照实施例7的步骤操作对新鲜猪肉中细菌总数进行检测，其中鲜肉的递增稀释液直配制至稀释度为10-9，选择10-7稀释度的稀释液进行培养，步骤7中的观察时间选择12h、14h、16h、18h、24h、36h、48h共7个时间进行观察。
表4是猪肉样品中不同时间的菌落染色结果，图4是猪肉细菌总数随时间变化曲线图。
表4猪肉样品不同时间的菌落染色结果
| 培养时间 | 12h | 14h | 16h | 18h | 24h | 36h | 48h |
| 染色结果 | (-) | (+) | (+) | (++) | (++) | (++) | (++) |
注：“-”：表示未显色；“+”：表示培养基已经染成淡红色，但染色效果不甚明显；“++”：表示培养基已经染成鲜红色，染色效果明显。
由检测结果可见，对于猪肉而言，培养18h后，菌落长成鲜艳的红色，而培养基本身呈透明的淡黄色，观察起来十分方便。从图4中猪肉细菌生长曲线可以看出，培养18h以后，生长曲线基本呈一条直线。培养18h后，所得到的菌落总数均为培养48h后所得到的菌落总数的100％，也即培养18h所得到的观察结果已足够，因此可以看出本发明的方法对猪肉中微生物检测的时间为18h。
Claims (10)
1、一种快速检测食品内微生物的方法，包括以下步骤：
(1)取检样配制成均匀稀释液，然后再配制递增稀释液；
(2)根据待检食品的情况选择合适的稀释度，吸取该稀释度的稀释液置于灭菌平皿内；
(3)稀释液移入灭菌平皿后，将40℃～50℃的培养基加入灭菌平皿，稀释液与培养基的体积比为1∶10～20，混匀，然后静置冷却；
(4)待培养基凝固后，翻转平板，在33℃～40℃培养，培养时间为12h～24h；培养后取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每g(或mL)样品含菌数；
其中，所述步骤(3)中培养基含有的成分及其含量为：每1000mL所述培养基中含胰蛋白胨4.5g～5.5g、酵母膏2.0g～3.0g、葡萄糖0.5g～1.5g、牛肉膏0.5g～1.5g、氯化钠0.3g～0.7g、琼脂15g～20g；所述培养基的pH值为6.0～8.0。
2、根据权利要求1所述的一种快速检测食品内微生物的方法，其特征是，所述步骤(3)所述的培养基，每1000ml培养基还含有TTC 15mg～25mg。
3、根据权利要求1所述的一种快速检测食品内微生物的方法，其特征是，所述步骤(1)中取检样配制成均匀稀释液，是取检样配制成1∶10的均匀稀释液；所述步骤(1)中配制递增稀释液，是按10倍递增配制稀释液。
4、根据权利要求1所述的一种快速检测食品内微生物的方法，其特征是，所述步骤(3)中稀释液与培养基的体积比为1∶15。
5、根据权利要求1所述的一种快速检测食品内微生物的方法，其特征是，所述步骤(4)中的培养温度为36℃。
6、根据权利要求1所述的一种快速检测食品内微生物的方法，其特征是，所述步骤(4)中的培养时间为12～18h。
7、一种快速检测食品内微生物的培养基，其特征是，每1000mL所述培养基中含胰蛋白胨4.5g～5.5g、酵母膏2.0g～3.0g、葡萄糖0.5g～1.5g、牛肉膏0.5g～1.5g、氯化钠0.3g～0.7g、琼脂10g～20g；所述培养基的pH值为6.0～8.0。
8、根据权利要求7所述的一种快速检测食品内微生物的培养基，其特征是，每1000mL所述培养基含胰蛋白胨5.0g、酵母膏2.5g、葡萄糖1.0g、牛肉膏1.0g、氯化钠0.5g、琼脂15.0g，所述培养基的pH值为7.5。
9、根据权利要求7或8所述的一种快速检测食品内微生物的培养基，其特征是，每1000mL所述培养基还含有TTC 15mg～25mg。
10、根据权利要求7或8所述的一种快速检测食品内微生物的培养基，其特征是，每1000mL所述培养基还含有TTC 20mg。
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