CN115926887B - 一种可隐色香料、其制备方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种可隐色香料的制备方法，包括以下步骤：(1)制备植物发酵浆液；(2)制备粗提液；(3)利用酸性乙醇回溶粗提液得到回溶提取液；(4)将回溶提取液使用离子交换色谱柱上样吸附，然后用50wt％～70wt％酸性乙醇洗脱，并收集50wt％～70wt％酸性乙醇洗脱液；(5)减压浓缩洗脱液得到所述可隐色香料。本发明还公开了所述可隐色香料及用于卷烟材料中的用途。
Description
技术领域
本发明属于卷烟用香精香料技术领域，具体涉及一种可隐色香料、其制备方法及用途。
背景技术
卷烟是吸烟者通过点燃卷烟，抽吸卷烟烟气获得生理及心理需求满足的一种嗜好。卷烟烟气的pH值能够反映吸烟者感受到的烟气劲头、烟气刺激性和烟碱吸入量。通过大量研究表明，传统卷烟的烟气pH值主要集中在5.4～6.2之间。
卷烟降焦是卷烟生产的重要课题，伴随着焦油量的降低，烟味变淡，香气减弱，所以通常借助加料加香技术增加烟气浓度、提高卷烟香味。天然香料是烟用香精香料的主要来源之一，对卷烟主要起着增加烟气浓度，修饰烟香，改善烟气质量的作用。
天然香料主要来源于植物，具有安全、无毒、能提供特殊的芳香气味特点。天然香料中的某些色素为彩色，可以实现卷烟材料的色泽鲜艳等多彩功能。申请人发现有些含色素的天然香料可以随着pH值的变化而变色。开发随着pH值的变化彩色天然香料并用于卷烟材料如卷烟纸、接装纸、丝束等中，可增加卷烟产品辨识度，使消费者在抽吸卷烟时既能品味烟气烟香，又能得到卷烟外观随烟气的趣味性变化的视觉享受，提高对消费者吸引力。
为此提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于针对现有烟用香精香料功能种类不够丰富等问题，提供一种可隐色香料，并将其应用于卷烟材料如卷烟纸、接装纸、丝束、嘴棒颗粒等中，在赋予卷烟特殊花香和清甜香的同时，还能使消费者在抽吸卷烟时，感受卷烟视觉外观的颜色变化，提高趣味性和烟支辨识度。
除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。
本发明的技术方案如下：
(1)将新鲜植物材料粉碎灭菌后得到植物浆液，然后使用烟草黄色土源菌X7X菌剂进行发酵一段时间，得到植物发酵浆液；
(2)将步骤(1)得到的植物发酵浆液用10～20倍的水进行60～80℃回流提取，提取液进行分离，将得到的滤液进行减压浓缩至体积不再变化，得到粗提液；
(3)向步骤(2)得到的粗提液中加入4～8倍80wt％～95wt％的酸性乙醇，充分搅拌并进行冷冻沉降后，取上层清液进行减压浓缩至体积不再变化，得到回溶提取液；
(4)将阳离子交换树脂利用HCl溶液活化处理后装柱，并用去离子水洗涤至中性；将步骤(3)所制回溶提取液进行上样吸附0.5～2h，用去离子水洗涤去除杂质后，再用50wt％～70wt％酸性乙醇洗脱；收集50wt％～70wt％酸性乙醇洗脱液；
(5)减压浓缩步骤(4)所得洗脱液，得到所述可隐色香料。
优选地，步骤(1)烟草黄色土源菌X7X菌剂的制备方法为：每1000mL经扩大发酵培养的烟草黄色土源菌X7X发酵培养液以3500rpm/min离心10min，用无菌水洗涤沉淀，沉淀用20mL无菌水振荡均匀，使用时稀释10倍即为烟草黄色土源菌X7X菌剂。烟草黄色土源菌X7X，是从昆明市烟草生产基地的烟草根际土样中分离得到，微生物学分类命名为烟草黄色土源菌Flavisolibacter soli.X7X，已于2018年9月20日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称：CGMCC)保藏，保藏编号为CGMCC 16451，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所。
优选地，步骤(1)烟草黄色土源菌X7X菌剂进行发酵步骤为：每100g植物浆液接种10～20mL烟草黄色土源菌X7X菌剂，发酵24～72h后得到植物发酵浆液。
优选地，步骤(1)所述植物材料为：红色非洲菊、紫色杜鹃花、红色康乃馨、豇豆花、桃子皮、甘草根中的一种或多种。
优选地，步骤(3)和(4)中的酸性乙醇溶液的pH为3～5。
优选地，步骤(4)中阳离子交换树脂为110型弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂。
本发明第二方面公开了所述的制备方法制备得到的可隐色香料。
优选地，所述可隐色香料为固形物含量为60wt％～80wt％的澄清液体。
本发明第三方面公开了所述可隐色香料用于卷烟材料中的用途；所述卷烟材料包括卷烟纸、接装纸、嘴棒颗粒、丝束。
优选地，应用方法步骤如下：
(1)在卷烟纸中：将可隐色香料用蒸馏水稀释2～5倍；取真菌多糖5～15份、丙二醇55～65份和乙醇25～35份振荡1～5h混匀得到涂布液基质；将稀释后的可隐色香料与涂布液基质按1∶1质量比混匀得到可隐色香料涂布液；采用喷涂、辊轴凸印或定点喷印方式将所述可隐色香料涂布液涂布在卷烟纸上，得到含有可隐色香料的彩色卷烟纸；
(2)在接装纸中：将可隐色香料用蒸馏水稀释2～5倍；取真菌多糖5～15份、丙二醇55～65份和乙醇25～35份振荡1～5h混匀后加入混合液质量0.1～1wt％的油墨助剂，得到油墨基质；将稀释后的可隐色香料与油墨基质按1：1质量比混匀，即得到可隐色香料彩色油墨；采用凹版印刷、柔版印刷、辊轴凸印或喷墨打印的印刷方式印制在接装纸上，得到含可隐色香料的彩色接装纸；所述油墨助剂包括流平剂、消泡剂和爽滑剂中的一种或多种；
(3)在卷烟嘴棒颗粒中：将可隐色香料经冷冻干燥得到可隐色香料冻干粉末；将得到的香料冻干粉末与颗粒赋形剂按质量比1：1～1：10进行混匀后，置于流化床中进行喷雾造粒，造粒过程中喷洒浓度为4wt％～10wt％的粘合剂溶液，即得可隐色香料颗粒；将得到的可隐色香料颗粒添加于多元复合嘴棒的透明空腔中、或嘴棒丝束间隙中；所述颗粒赋形剂包括糖粉、糊精、乳糖、可溶性淀粉、微晶纤维素、甘露醇中的一种或多种；
(4)在卷烟丝束中：将可隐色香料经冷冻干燥得到可隐色香料冻干粉末；将所述香料冻干粉末按丝束纤维母料质量0.1wt％～3wt％的比例与纤维母料混匀后，经丝束生产工艺和嘴棒成型工艺形成含可隐色香料的彩色丝束；或者，将可隐色香料冻干粉末经乙醇稀释后，按1wt％～5wt％的比例添加于增塑剂三乙酸甘油酯中，经嘴棒成型设备喷加于丝束中，形成含可隐色香料的彩色嘴棒；所述纤维母料为醋酸二醋片、聚乳酸中的一种。
在应用可隐色香料溶液时，需加入一定量的碱性调节剂调节香料pH7～8，实现可隐色香料颜色转变，所述碱性调节剂包括碳酸钠、碳酸氢钠中的一种或多种。
在应用可隐色香料时，也可加入常规天然色素或其他可变色香料，以调配出更多色系的香料颜色。
为使可隐色香料具有更好的稳定性，可向其中添加0.02wt％～1wt％的稳定剂，以增强可隐色香料的着色稳定性，所述稳定剂包括抗坏血酸、异抗坏血酸钠、芦丁、丙二酸中的一种或多种。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明的植物材料包括非洲菊、杜鹃花、康乃馨、豇豆花、桃子皮、甘草，其呈现各具特色的香气或味觉特征。现有烟用香精香料生产技术中尚未见将上述植物材料制备成兼具pH变色及赋香双重功能植物香料的开发应用报道。
2、本发明利用微生物烟草黄色土源菌X7X对植物材料进行发酵后，再经回流提取、乙醇回溶和离子交换树脂精制处理，能使制得的可隐色香料除植物原有香味特征外，更具备发酵后特殊花香和清甜香味，应用于卷烟后，丰富了卷烟嗅香，并增加烟气烟香丰富性，香韵饱满立体，而且随着烟气的抽吸而颜色逐渐变为无色，颜色变化差异明显，视觉效果突出；而不发酵、或使用其他菌种进行的发酵，都没有这种效果或效果较差。研究表明，本发明可隐色香料含有丰富的植物色素，该类植物色素在pH<7的弱酸性环境中都为无色，pH≥7则随碱性增强黄色渐深；故当含该类色素的可隐色香料在弱碱性或中性条件下被应用于卷烟材料中时，会使卷烟材料的花纹图案呈现黄色，当制成卷烟并进行抽吸时，则会因烟气透过，受烟气弱酸性的中和影响，其黄色逐渐褪去，从而实现隐色效果。本发明的可隐色香料能赋予卷烟特殊外观，提高视觉趣味性，同时还能使烟香醇和，烟气协调且余味干净。
3、本发明的可隐色香料的制备方法充分利用易得植物资源，首次将非洲菊、杜鹃花、康乃馨、豇豆花、桃子皮、甘草制备成兼具视觉变化效果的烟用香料，丰富了烟用香精香料功能和种类，绿色安全，易于实现工业化。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1：一种可隐色香料制备方法，包括如下步骤：
(1)烟草黄色土源菌X7X菌剂的制备
1)烟草黄色土源菌X7X的扩大培养：将R2A液体培养基在121℃下灭菌25分钟，挑取烟草黄色土源菌X7X保藏培养基上部分菌丝体接入R2A液体培养基中，30℃震荡培养48h，获得液体菌种；
2)制备烟草黄色土源菌X7X菌剂：将烟草黄色土源菌X7X液体菌种按10％接种量转接到发酵培养基中，30℃摇瓶培养7天，所得培养液每1000mL以3500r/min离心10min，用无菌水洗涤沉淀，沉淀用20mL无菌水震荡均匀，稀释10倍即为烟草黄色土源菌X7X菌剂；
(2)植物发酵：将新鲜红色非洲菊和紫色杜鹃花按质量比1：1混合，研磨粉碎得到植物浆液，置于121℃灭菌锅中灭菌30min，每100g植物浆液接种20mL烟草黄色土源菌X7X菌剂，于22℃，60％的恒温恒湿箱发酵72h后，得到植物发酵浆液；
(3)回流提取：向植物发酵浆液中加入12倍的蒸馏水进行80℃回流提取3h；提取液趁热抽滤，所得滤液进行减压浓缩至体积不再变化，得到植物粗提液；
(4)乙醇回溶：向植物粗提液中加入6倍80wt％的酸性乙醇(pH＝4)，充分搅拌置于冰箱冷冻沉降12h，取上层清液进行减压浓缩至体积不再变化，得到回溶提取液。
(5)离子交换柱色谱精制：将110型弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂利用HCl溶液活化处理后装柱，用去离子水洗涤至中性。将步骤(4)所制回溶提取液加入到离子交换柱中，吸附1h后，先用去离子水洗涤去除杂质，再用60wt％酸性乙醇洗脱(pH＝5)；收集60wt％酸性乙醇洗脱液，减压浓缩获得固形物含量70wt％的澄清液体，添加液体质量0.02％的芦丁混匀即为所制可隐色香料。该香料带有特殊花香和清甜香味。
对比例1：同实施例1，但无发酵增香步骤。
按照实施例1中步骤(3)～(5)将新鲜的按质量比1：1混合的红色非洲菊和紫色杜鹃花进行粉碎后回流提取、乙醇回溶和大孔树脂精制得到植物提取物。
对比例2：同实施例1，但用木糖葡萄球菌(菌株编号：CICC 21445)代替烟草黄色土源菌X7X对新鲜的按质量比1：1混合的红色非洲菊和紫色杜鹃花进行植物材料发酵；然后按照实施例1中步骤(3)～(5)将新鲜红色非洲菊和紫色杜鹃花进行回流提取、乙醇回溶和大孔树脂精制得到植物提取物。
对比例3：同实施例1，但用酿酒酵母(菌株编号：CICC 1222)代替烟草黄色土源菌X7X对新鲜的按质量比1：1混合的红色非洲菊和紫色杜鹃花进行植物材料发酵；培养基配方为：NaNO3 2g/L，K2HPO4 1g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，KCl 0.5g/L，FeSO4·7H2O 0.01g/L，葡萄糖20g/L，pH 6.5，121℃灭菌锅中灭菌25min；然后按照实施例1中步骤(3)～(5)将新鲜红色非洲菊和紫色杜鹃花进行回流提取、乙醇回溶和大孔树脂精制得到植物提取物。
实施例2：实施例1、对比例1、对比例2、和对比例3得到的可隐色香料、植物提取物在卷烟纸中的应用，具体包括如下步骤：
(1)可隐色香料涂布液的制备
将实施例1、对比例1、对比例2、和对比例3所制可隐色香料、植物提取物，用蒸馏水稀释3倍，分别滴加碳酸氢钠饱和溶液至香料溶液pH略大于7，此时香料溶液颜色呈现明显黄色；分别取真菌多糖15份、丙二醇60份和乙醇25份，振荡2h混匀得到四种涂布液基质；再将稀释后的可隐色香料、植物提取物与涂布液基质按1：1质量比混匀即得到四种可隐色香料涂布液；
(2)含可隐色香料彩色卷烟纸的制备及应用
在卷烟纸印刷工艺中，进行图案设计、采用辊轴凸印，分别将上述四种可隐色香料涂布液印制在卷烟纸上，得到四种含可隐色香料彩色卷烟纸，再将该卷烟纸进一步卷制卷烟，作为试验样品，分别标记为试验卷烟、对照卷烟1#、对照卷烟2#、对照卷烟3#；并把未涂布任何可隐色香料涂布液的卷烟纸作为空白卷烟进行对比；
(3)评价结果如表1所示。
在外观方面，与空白卷烟相比，试验卷烟、对照卷烟的卷烟纸都呈现偏黄色的花纹图案。
在嗅香方面，未进行任何发酵制备的对照卷烟1#嗅闻时花香香味清淡；采用木糖葡萄球菌发酵制备的对照卷烟2#嗅闻时花香中带有木质杂气；采用酿酒酵母发酵制备的对照卷烟3#嗅闻时则清香中带有发酵酒糟味；而利用烟草黄色土源菌X7X制备的可隐色香料嗅闻时具有特殊混合花香和清甜香，使得含可隐色香料的试验卷烟嗅香也具有花香和清甜香。
在卷烟评吸方面，点燃烟支进行品吸时，相较空白卷烟，对照卷烟1#在抽吸时，烟气中花香稍有增加，余味有所下降，香气质量提升不明显。利用木糖葡萄球菌发酵制备的对照卷烟2#在抽吸时，烟气中花香有所增加，但杂气和刺激性也明显增加，香气品质显著下降。采用酿酒酵母发酵制备的对照卷烟3#在抽吸时，烟气清香有所增加，但杂气也明显增加，烟气协调性差，余味不佳。而烟草黄色土源菌X7X发酵制备的试验卷烟在抽吸时，试验卷烟烟气中花香和清甜香明显，烟香丰富性和烟气丰满度显著增加，烟香醇和，烟气协调且余味干净。
在颜色变化方面，其中未进行任何发酵制备的对照卷烟1#开始为极浅的黄色，着色度较低；随着抽吸过程的进行，颜色逐渐褪去，但颜色差异不大，视觉效果不够突出。对照卷烟2#和对照卷烟3#开始颜色是黄褐色，色调较暗，在抽吸过程中，颜色变为褐色，仍存在明显花纹图案，隐色效果不佳。而应用于试验卷烟的可隐色香料开始颜色是明黄色，着色力强，色调鲜亮；随着抽吸过程的进行，颜色逐渐褪去，颜色变化差异明显，视觉效果突出。
表1彩色卷烟纸涂布液的功能性评价
实施例3：实施例1、对比例1、对比例2、和对比例3得到的可隐色香料、植物提取物在接装纸中的应用，具体包括如下步骤：
(1)可隐色香料油墨的制备
取实施例1、对比例1、对比例2、和对比例3所制可隐色香料、植物提取物分别用蒸馏水稀释2倍，加入碳酸钠溶液调配pH＝7，得到偏黄色的可隐色香料溶液；分别取真菌多糖15份、丙二醇55份和乙醇30份振荡2h混匀后，分别加入混合液质量0.3wt％的流平剂聚丙烯酸酯混匀，得到四份油墨基质；再分别将可隐色香料溶液与油墨基质按1：1质量比混匀即得到四种可隐色香料油墨。
(2)含可隐色香料彩色接装纸的制备及应用
在接装纸印刷工艺中，采用柔版印刷将上述四种可隐色香料油墨印制在接装纸上，得到含可隐色香料彩色接装纸，再将该接装纸进一步卷制卷烟。
(3)评价结果
在嗅香方面结果基本同实施例2。在颜色变化方面，四种卷烟的情况也基本同实施例2。
实施例4：可隐色香料在卷烟嘴棒颗粒中的应用，具体包括如下步骤：
向实施例1、对比例1、对比例2、和对比例3所制可隐色香料、植物提取物中，分别滴加碳酸氢钠溶液至pH＝7.5，在冻结温度为-60℃，冷肼温度为-15℃，真空度为20Pa，冻干最终温度为25℃的条件下进行冷冻干燥，分别得到四种可隐色香料冻干粉末；按照喷雾造粒工艺，将四种可隐色香料冻干粉末与可溶性淀粉按质量比1：3进行混匀后，置于流化床中，造粒过程中喷洒可隐色香料冻干粉末质量8wt％的粘合剂溶液，即得四种可隐色香料颗粒。
在卷烟复合嘴棒成型过程中，将上述四种可隐色香料颗粒按每毫米滤棒2mg的量施加到嘴棒丝束中，或是集中添加于复合嘴棒透明空腔部位，既得四种含可隐色香料颗粒的卷烟嘴棒，再将该四种卷烟嘴棒进一步卷制成卷烟，并进行抽吸。
在嗅香方面结果基本同实施例2。在颜色变化方面，四种卷烟的情况也基本同实施例2。
实施例5：可隐色香料在卷烟丝束中的应用，具体包括如下步骤：
向实施例1、对比例1、对比例2、和对比例3所制可隐色香料、植物提取物中，分别滴加碳酸氢钠溶液至pH＝7.5，在冻结温度为-60℃，冷肼温度为-10℃，真空度为20Pa，冻干最终温度为25℃的条件下进行冷冻干燥，得到四种可隐色香料冻干粉末。
(1)将醋酸纤维母料醋酸二醋片制成浆液后，分别加入2wt％的上述四种可隐色香料冻干粉末混匀，经丝束生产工艺形成四种含可隐色香料的偏黄色的丝束，经嘴棒成型设备形成含可隐色香料嘴棒，再进一步卷制成四种卷烟。当点燃卷烟进行抽吸时，烟气经过嘴棒，嘴棒丝束嘴棒丝束颜色变化。
在嗅香方面结果基本同实施例2。在颜色变化方面，四种卷烟的情况也基本同实施例2。
(2)分别将上述四种可隐色香料冻干粉末添加少量乙醇稀释溶解后，按3wt％的比例分别添加于增塑剂三乙酸甘油酯中，得到四种含可隐色香料的偏黄色的三乙酸甘油酯，经嘴棒成型设备喷加于普通丝束中，形成四种含可隐色香料的嘴棒，再进一步卷制成卷烟，当点燃卷烟进行抽吸时，烟气经过嘴棒，嘴棒丝束颜色变化。
在嗅香方面结果基本同实施例2。在颜色变化方面，四种卷烟的情况也基本同实施例2。
实施例6：一种可隐色香料的制备及其在卷烟材料中的应用
(一)一种可隐色香料制备方法，包括如下步骤：
(1)烟草黄色土源菌X7X菌剂的制备
1)烟草黄色土源菌X7X的扩大培养：将R2A液体培养基在121℃下灭菌25分钟，挑取烟草黄色土源菌X7X保藏培养基上部分菌丝体接入R2A液体培养基中，30℃震荡培养48h，获得液体菌种；
2)制备烟草黄色土源菌X7X菌剂：将烟草黄色土源菌X7X液体菌种按10％接种量转接到发酵培养基中，30℃摇瓶培养7天，所得培养液每1000mL以3500r/min离心10min，用无菌水洗涤沉淀，沉淀用20mL无菌水震荡均匀，稀释10倍即为烟草黄色土源菌X7X菌剂；
(2)植物发酵：将新鲜甘草根研磨粉碎得到植物浆液，置于121℃灭菌锅中灭菌30min，每100g植物浆液接种20mL烟草黄色土源菌X7X菌剂，于22℃，60％的恒温恒湿箱发酵48h后，得到植物发酵浆液；
(3)回流提取：向植物发酵浆液中加入15倍的蒸馏水进行70℃回流提取4h；提取液趁热抽滤，所得滤液进行减压浓缩至体积不再变化，得到植物粗提液；
(4)乙醇回溶：向植物粗提液中加入8倍90wt％的酸性乙醇(pH＝5)，充分搅拌置于冰箱冷冻沉降12h，取上层清液进行减压浓缩至体积不再变化，得到回溶提取液。
(5)离子交换柱色谱精制：将110型弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂利用HCl溶液活化处理后装柱，用去离子水洗涤至中性。将步骤(4)所制回溶提取液加入到离子交换柱中，吸附1.5h后，先用去离子水洗涤去除杂质，再用50wt％酸性乙醇洗脱(pH＝4)；收集50wt％酸性乙醇洗脱液，减压浓缩获得固形物含量80wt％的澄清液体。该香料带有药草香、特殊发酵花香和清甜香味。
(二)可隐色香料在卷烟纸、接装纸、卷烟嘴棒颗粒和卷烟丝束中的应用：具体应用方法与实施例2、3、4、5中试验卷烟的制备方法相同。所得含可隐色香料烟用材料的评价结果如下：
(1)含可隐色香料卷烟纸的评价结果：
在外观方面，试验卷烟的卷烟纸呈现明黄色的花纹图案。
在嗅香方面，步骤(一)所制可隐色香料嗅闻时具有药草香、特殊发酵花香和清甜香，使得含可隐色香料卷烟纸的试验卷烟嗅香也具有有药草香、发酵花香和清甜香。
在卷烟评吸方面，含可隐色香料的试验卷烟烟气中药草香和清甜香明显，还具淡雅花香，烟香丰富性和烟气丰满度显著增加，烟香醇和，烟气协调且余味干净。
在颜色变化方面，试验卷烟的可隐色香料开始颜色是明黄色，着色力强，色调鲜亮；随着抽吸过程的进行，颜色逐渐褪去，颜色变化差异明显，视觉效果突出。
(2)含可隐色香料接装纸的评价结果：
含可隐色香料接装纸试验卷烟在嗅香方面结果基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。在颜色变化方面的情况也基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。
(3)含可隐色香料卷烟嘴棒颗粒的评价结果：
含可隐色香料卷烟嘴棒颗粒试验卷烟在嗅香方面结果基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。在颜色变化方面的情况也基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。
(4)含可隐色香料卷烟丝束的评价结果：
含可隐色香料卷烟丝束试验卷烟在嗅香方面结果基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。在颜色变化方面的情况也基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。
本实施例中，在其他相同条件情况下，使用的植物材料新鲜甘草根，如果无发酵步骤、或者不使用烟草黄色土源菌X7X进行发酵而使用其他菌种发酵，都没有上述效果或效果较差。
实施例7：一种可隐色香料的制备及其在卷烟材料中的应用
(一)一种可隐色香料制备方法，包括如下步骤：
(1)烟草黄色土源菌X7X菌剂的制备
1)烟草黄色土源菌X7X的扩大培养：将R2A液体培养基在121℃下灭菌25分钟，挑取烟草黄色土源菌X7X保藏培养基上部分菌丝体接入R2A液体培养基中，30℃震荡培养48h，获得液体菌种；
2)制备烟草黄色土源菌X7X菌剂：将烟草黄色土源菌X7X液体菌种按10％接种量转接到发酵培养基中，30℃摇瓶培养7天，所得培养液每1000mL以3500r/min离心10min，用无菌水洗涤沉淀，沉淀用20mL无菌水震荡均匀，稀释10倍即为烟草黄色土源菌X7X菌剂；
(2)植物发酵：将新鲜红色康乃馨、豇豆花、桃子皮按质量比1：1：1混匀，研磨粉碎得到植物浆液，置于121℃灭菌锅中灭菌30min，每100g植物浆液接种10mL烟草黄色土源菌X7X菌剂，于22℃，60％的恒温恒湿箱发酵36h后，得到植物发酵浆液；
(3)回流提取：向植物发酵浆液中加入10倍的蒸馏水进行75℃回流提取3h；提取液趁热抽滤，所得滤液进行减压浓缩至体积不再变化，得到植物粗提液；
(4)乙醇回溶：向植物粗提液中加入6倍95wt％的酸性乙醇(pH＝5)，充分搅拌置于冰箱冷冻沉降24h，取上层清液进行减压浓缩至体积不再变化，得到回溶提取液。
(5)离子交换柱色谱精制：将110型弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂利用HCl溶液活化处理后装柱，用去离子水洗涤至中性。将步骤(4)所制回溶提取液加入到离子交换柱中，吸附2h后，先用去离子水洗涤去除杂质，再用70wt％酸性乙醇洗脱(pH＝3)；收集70wt％酸性乙醇洗脱液，减压浓缩获得固形物含量60wt％的澄清液体。该香料带有果香、特殊发酵花香和清甜香味。
(二)可隐色香料在卷烟纸、接装纸、卷烟嘴棒颗粒和卷烟丝束中的应用：具体应用方法与实施例2、3、4、5中试验卷烟的制备方法相同。所得含可隐色香料烟用材料的评价结果如下：
(1)含可隐色香料卷烟纸的评价结果：
在外观方面，试验卷烟的卷烟纸呈现明黄色的花纹图案。
在嗅香方面，步骤(一)所制可隐色香料嗅闻时具有果香、特殊发酵花香和清甜香，使得含可隐色香料卷烟纸的试验卷烟嗅香也具有果香、花香和清甜香。
在卷烟评吸方面，含可隐色香料的试验卷烟烟气中果香、花香和清甜香明显，烟香丰富性和烟气丰满度显著增加，烟香醇和，烟气协调且余味干净。
在颜色变化方面，试验卷烟的可隐色香料开始颜色是明黄色，着色力强，色调鲜亮；随着抽吸过程的进行，颜色逐渐褪去，颜色变化差异明显，视觉效果突出。
(2)含可隐色香料接装纸的评价结果：
含可隐色香料接装纸试验卷烟在嗅香方面结果基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。在颜色变化方面的情况也基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。
(3)含可隐色香料卷烟嘴棒颗粒的评价结果：
含可隐色香料卷烟嘴棒颗粒试验卷烟在嗅香方面结果基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。在颜色变化方面的情况也基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。
(4)含可隐色香料卷烟丝束的评价结果：
含可隐色香料卷烟丝束试验卷烟在嗅香方面结果基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。在颜色变化方面的情况也基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。
本实施例中，在其他条件相同情况下，使用的植物材料新鲜红色康乃馨、豇豆花、桃子皮等，如果无发酵步骤、或者不使用烟草黄色土源菌X7X进行发酵而使用其他菌种发酵，都没有上述效果或效果较差。
实施例8：一种可隐色香料的制备及其在卷烟材料中的应用
(一)一种可隐色香料制备方法，包括如下步骤：
(1)烟草黄色土源菌X7X菌剂的制备
1)烟草黄色土源菌X7X的扩大培养：将R2A液体培养基在121℃下灭菌25分钟，挑取烟草黄色土源菌X7X保藏培养基上部分菌丝体接入R2A液体培养基中，30℃震荡培养48h，获得液体菌种；
2)制备烟草黄色土源菌X7X菌剂：将烟草黄色土源菌X7X液体菌种按10％接种量转接到发酵培养基中，30℃摇瓶培养7天，所得培养液每1000mL以3500r/min离心10min，用无菌水洗涤沉淀，沉淀用20mL无菌水震荡均匀，稀释10倍即为烟草黄色土源菌X7X菌剂；
(2)植物发酵：将新鲜豇豆花、甘草根按质量比1：1混匀，研磨粉碎得到植物浆液，置于121℃灭菌锅中灭菌30min，每100g植物浆液接种20mL烟草黄色土源菌X7X菌剂，于22℃，60％的恒温恒湿箱发酵24h后，得到植物发酵浆液；
(3)回流提取：向植物发酵浆液中加入12倍的蒸馏水进行60℃回流提取4h；提取液趁热抽滤，所得滤液进行减压浓缩至体积不再变化，得到植物粗提液；
(4)乙醇回溶：向植物粗提液中加入8倍80wt％的酸性乙醇(pH＝4)，充分搅拌置于冰箱冷冻沉降8h，取上层清液进行减压浓缩至体积不再变化，得到回溶提取液。
(5)离子交换柱色谱精制：将110型弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂利用HCl溶液活化处理后装柱，用去离子水洗涤至中性。将步骤(4)所制回溶提取液加入到离子交换柱中，吸附1h后，先用去离子水洗涤去除杂质，再用60wt％酸性乙醇洗脱(pH＝5)；收集60wt％酸性乙醇洗脱液，减压浓缩获得固形物含量80wt％的澄清液体。该香料带有药草香、特殊发酵花香和清甜香味。
(二)可隐色香料在卷烟纸、接装纸、卷烟嘴棒颗粒和卷烟丝束中的应用：具体应用方法与实施例2、3、4、5中试验卷烟的制备方法相同。所得含可隐色香料烟用材料的评价结果如下：
(1)含可隐色香料卷烟纸的评价结果：
在外观方面，试验卷烟的卷烟纸呈现明黄色的花纹图案。
在嗅香方面，步骤(一)所制可隐色香料嗅闻时具有药草香、特殊发酵花香和清甜香，使得含可隐色香料卷烟纸的试验卷烟嗅香也具有药草香、花香和清甜香。
在卷烟评吸方面，含可隐色香料的试验卷烟烟气中药草香、花香和清甜香明显，烟香丰富性和烟气丰满度显著增加，烟香醇和，烟气协调且余味干净。
在颜色变化方面，试验卷烟的可隐色香料开始颜色是明黄色，着色力强，色调鲜亮；随着抽吸过程的进行，颜色逐渐褪去，颜色变化差异明显，视觉效果突出。
(2)含可隐色香料接装纸的评价结果：
含可隐色香料接装纸试验卷烟在嗅香方面结果基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。在颜色变化方面的情况也基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。
(3)含可隐色香料卷烟嘴棒颗粒的评价结果：
含可隐色香料卷烟嘴棒颗粒试验卷烟在嗅香方面结果基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。在颜色变化方面的情况也基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。
(4)含可隐色香料卷烟丝束的评价结果：
含可隐色香料卷烟丝束试验卷烟在嗅香方面结果基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。在颜色变化方面的情况也基本同含可隐色香料卷烟纸试验卷烟。
本实施例中，在其他条件相同情况下，使用的植物材料新鲜豇豆花、甘草等，如果无发酵步骤、或者不使用烟草黄色土源菌X7X进行发酵而使用其他菌种发酵，都没有上述效果或效果较差。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种可隐色香料用于卷烟材料中黄色隐色的用途；所述卷烟材料包括卷烟纸、接装纸、嘴棒颗粒、丝束；所述可隐色香料为固形物含量为60wt% ~ 80wt%的澄清液体；其特征在于，所述可隐色香料制备方法包括以下步骤：
（1）将新鲜植物材料粉碎灭菌后得到植物浆液，然后使用烟草黄色土源菌X7X菌剂进行发酵一段时间，得到植物发酵浆液；所述植物材料由红色非洲菊和紫色杜鹃花按照质量比1∶1组成；
（2）将步骤（1）得到的植物发酵浆液用10~20倍的水进行60~80℃回流提取，提取液进行分离，将得到的滤液进行减压浓缩至体积不再变化，得到粗提液；
（3）向步骤（2）得到的粗提液中加入4~8倍80wt%~95wt%的酸性乙醇溶液，充分搅拌并进行冷冻沉降后，取上层清液进行减压浓缩至体积不再变化，得到回溶提取液；所述酸性乙醇溶液的pH为3~5；
（4）将阳离子交换树脂利用HCl溶液活化处理后装柱，并用去离子水洗涤至中性；将步骤（3）所制回溶提取液进行上样吸附0.5~2h，用去离子水洗涤去除杂质后，再用50wt%~70wt%酸性乙醇溶液洗脱；收集50wt%~70wt%酸性乙醇溶液洗脱液；所述酸性乙醇溶液的pH为3~5；
（5）减压浓缩步骤（4）所得洗脱液，得到所述可隐色香料。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤（1）烟草黄色土源菌X7X菌剂的制备方法为：每1000mL经扩大发酵培养的烟草黄色土源菌X7X发酵培养液以3500 rpm离心10 min，用无菌水洗涤沉淀，沉淀用20 mL无菌水振荡均匀，使用时稀释10倍即为烟草黄色土源菌X7X菌剂。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤（1）烟草黄色土源菌X7X菌剂进行发酵步骤为：每100g植物浆液接种10~20mL烟草黄色土源菌X7X菌剂，发酵24~72h后得到植物发酵浆液。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤（4）中阳离子交换树脂为110型弱酸性丙烯酸系阳离子交换树脂。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，应用方法步骤如下：
（1）在卷烟纸中：将可隐色香料用蒸馏水稀释2~5倍；取真菌多糖5~15份、丙二醇55~65份和乙醇25~35份振荡1~5h混匀得到涂布液基质；将稀释后的可隐色香料与涂布液基质按1∶1质量比混匀得到可隐色香料涂布液；采用喷涂、辊轴凸印或定点喷印方式将所述可隐色香料涂布液涂布在卷烟纸上，得到含有可隐色香料的彩色卷烟纸；
（2）在接装纸中：将可隐色香料用蒸馏水稀释2~5倍；取真菌多糖5~15份、丙二醇55~65份和乙醇25~35份振荡1~5h混匀后加入混合液质量0.1~1wt%的油墨助剂，得到油墨基质；将稀释后的可隐色香料与油墨基质按1：1质量比混匀，即得到可隐色香料彩色油墨；采用凹版印刷、柔版印刷、辊轴凸印或喷墨打印的印刷方式印制在接装纸上，得到含可隐色香料的彩色接装纸；
（3）在卷烟嘴棒颗粒中：将可隐色香料经冷冻干燥得到可隐色香料冻干粉末；将得到的香料冻干粉末与颗粒赋形剂按质量比1：1~1：10进行混匀后，置于流化床中进行喷雾造粒，造粒过程中喷洒浓度为4wt%~10wt%的粘合剂溶液，即得可隐色香料颗粒；将得到的可隐色香料颗粒添加于多元复合嘴棒的透明空腔中、或嘴棒丝束间隙中；
（4）在卷烟丝束中：将可隐色香料经冷冻干燥得到可隐色香料冻干粉末；将所述香料冻干粉末按丝束纤维母料质量0.1wt%~3wt%的比例与纤维母料混匀后，经丝束生产工艺和嘴棒成型工艺形成含可隐色香料的彩色丝束；或者，将可隐色香料冻干粉末经乙醇稀释后，按1wt%~5wt%的比例添加于增塑剂三乙酸甘油酯中，经嘴棒成型设备喷加于丝束中，形成含可隐色香料的彩色嘴棒。
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