CN109722341A - 一种金花葵烟用香料的制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种金花葵烟用香料的制备方法和应用，其通过包括以下步骤的方法制备：(1)烟草黄色土源菌X7X菌剂的制备；(2)利用烟草黄色土源菌X7X菌剂对金花葵粉末进行发酵，得到发酵金花葵粉末；(3)将发酵金花葵粉末利用乙醇浸泡，超声技术辅助提取，经过滤浓缩得到金花葵浓缩提取液；(4)将金花葵浓缩提取液利用乙醇回溶，搅拌均匀并冷冻沉降，取上清液浓缩既得金花葵烟用香料。所述金花葵烟用香料，应用于卷烟烟丝中，使得烟气中具有特殊花香及清香，能够降低卷烟烟气刺激性，增强卷烟赋香效果，提升卷烟抽吸品质。

Description

一种金花葵烟用香料的制备方法和应用

技术领域

本发明属于烟用香精香料技术领域，具体涉及一种金花葵烟用香料的制备方法和应用。

背景技术

卷烟香气是卷烟品质的核心内容，但伴随着低焦化卷烟的发展，卷烟抽吸口感降低，香气不足等成为了烟草发展的凸显问题。卷烟加香加料，已是一种常规的、必需的增补香气的技术手段，通过加香、加料的方式可以弥补卷烟叶组配方上的不足，消除杂气，使卷烟烟香更加丰厚、充足，从而在吸味、嗅香上具有独特风格，增强产品的特征。天然香料在卷烟调香中起到的作用极为重要，而其在烟草调香中的应用也较为普遍，但随着企业卷烟自主调香步伐的加快，现有天然香原料的种类、数量、品质、制备工艺等已不能满足调香技术人员的需求，所以持续开发利用更多的香料植物资源，通过改进制备方法等获取品质更为优秀的天然香精香料，一直是卷烟调香和卷烟产品研发面临的现实课题。

金花葵，又名菜芙蓉，也称野芙蓉，为一年生草本锦葵科秋葵属植物，有的地区别名叫黏干或山榆皮。金花葵花药食兼用，《本草纲目》已记载该植物的药用价值，能清热、凉血、解毒，其花无毒，具有清利湿热、消炎镇痛之功效，内服主治五淋、水肿，外用治疗汤水烫伤。现代医学研究表明，该花的总黄酮有镇痛、抗脑缺血和治疗口腔溃疡等作用。其所含全价蛋白质、高聚糖胶、膳食纤维、微量元素硒、锌、多种不皂化物等，具有显著调节人体内分泌、免疫力，增加人体抵抗力，改善心脑血管及微循环功能，增强机体抗氧化能力，抗心脑缺血、缺氧、抗炎、镇疼，抗疲劳、抗衰老、抗癌、防癌、降血脂功效。此外，其丰富的天然植物雌激素，对于延长女性青春期，减轻或避免中老年更年期综合症也有奇效。目前，基于金花葵的药用价值，有将金花葵用于面膜、保湿精华等化妆品制备的相关报道，但尚未见将金花葵制备成烟用香料应用于卷烟中。

利用微生物发酵及酶制剂处理可以增加传统提取香料中多种香气物质的含量，将其加入卷烟中，可生产出香气丰富、高品质的卷烟，满足消费者对卷烟品质的要求。利用微生物对自身具有气味的植物原料进行发酵，还能赋予植物以区别于原有气味的独特香味。目前，并没有利用微生物发酵技术用于发酵金花葵制备烟用香料的报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有烟用香精香料种类不够丰富及制备方法不足等问题，提供一种具有特殊花香和清香香韵的金花葵烟用香料的制备方法及在卷烟中的应用，其利用烟草黄色土源菌X7X发酵工艺对金花葵进行处理，再通过溶剂提取工艺得到一种金花葵烟用香料，应用于卷烟烟丝中，使得烟气中具有特殊花香及清香，且香韵饱满突出，能够降低卷烟烟气刺激性，增强卷烟赋香效果，提升卷烟抽吸品质，同时丰富了烟用香精香料来源和种类。

*除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

本发明第一方面涉及一种烟草黄色土源菌X7X，其分离于采自昆明市一个烟草生产基地的烟草根际土样，对其进行了形态学、生理生化性质和16S rRNA 测序分析，鉴定结果表明其属于黄色土源菌属，微生物学分类命名为烟草黄色土源菌Flavisolibactersp.X7X，已于2018年9月10日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称：CGMCC)保藏，保藏编号为CGMCC 16451，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所。

本发明分离得到的烟草黄色土源菌X7X菌株的主要形态特征和生理生化性质特征为：所述X7X菌株的细胞为革兰氏阴性、需氧型，非运动的杆状结构。细胞大小为宽0.6-0.7um，长1.2-2.0um。在R2A琼脂平板30℃培养7天后，菌落呈现黄色、表面光滑、中央凸起边缘整齐直径为1.0-3.0mm的形状。菌株能够在20-40℃，pH为6.0-8.0的范围内生长，最适生长温度为30℃，最适pH值为7.0。菌株的明胶液化，氧化酶、过氧化氢酶，吐温40水解反应结果呈阳性，酪蛋白、纤维素、淀粉和吐温20、80水解结果呈阴性。菌株的碱性磷酸酶、脂酶C4、脂酶C8、亮氨酸芳胺酶、缬氨酸芳胺酶、半胱氨酸芳胺酶，胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、酸性磷酸酶、α-半乳糖苷酶、β-糖醛酸酶、酸性磷酸酶检测结果呈阳性，精氨酸双水解酶、柠檬酸的利用、吲哚反应、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、色氨酸脱氨酶检测结果呈阴性。

所述X7X菌株能够利用乙醛酸、D-阿拉伯醇、蚁酸、果糖、N-乙酰-D-半乳糖胺、糖醛酸、D-乳酸甲酯、苹果酸和山梨醇作为碳源，但不能利用天冬氨酸、α-羟基丁酸、纤维二糖、果糖、半乳糖、蔗糖、鼠李糖和丝氨酸。所述X7X菌株细胞的极性主要包括磷脂酰乙醇胺、一个未鉴定的氨基磷脂、两个未鉴定的糖脂；主要的呼吸醌为MK-7；主要的脂肪酸为iso-C_15:0，iso-C_17:0 3OH和summed feature 3(C_16:1ω7c和/或C_16:1ω6c)。

本发明所分离得到的烟草黄色土源菌X7X，其基因组的G+C含量为49.7％的，其16SrRNA基因核苷酸序列如序列表所示，该序列已递交国际核苷酸序列数据库(GenBank)，序列检索号：MG209702。

本发明第二方面涉及一种金花葵烟用香料，其通过包括以下步骤的方法制备：

(1)烟草黄色土源菌X7X菌剂的制备；

(2)利用烟草黄色土源菌X7X菌剂对金花葵粉末进行发酵，得到发酵金花葵粉末；

(3)将发酵金花葵粉末利用乙醇浸泡，超声技术辅助提取，经过滤浓缩得到金花葵浓缩提取液；

(4)将金花葵浓缩提取液利用乙醇回溶，搅拌均匀并冷冻沉降，取上清液浓缩既得金花葵烟用香料。

上述金花葵烟用香料，步骤(1)具体包括：将烟草黄色土源菌X7X液体菌种按10％的接种量接种到发酵培养基中，30℃震荡培养7天，得到培养液；每 1000mL培养液离心分离，用无菌水洗涤沉淀，最后用20mL无菌水震荡均匀，稀释10倍即得菌剂。

上述金花葵烟用香料，步骤(2)具体包括：将金花葵阴干，粉碎成粒径60～120 目的粉末，平衡水分至10％～13％，每100g金花葵粉中喷施烟草黄色土源菌X7X 菌剂20mL，混匀，将处理好的金花葵粉末置于22℃，60％的恒温恒湿箱中发酵 24～72h，得到发酵金花葵粉末。

上述金花葵烟用香料，步骤(3)具体包括如下步骤：

1)乙醇浸泡：将所得发酵金花葵粉末置于121℃灭菌锅中灭菌20～30min后，加入发酵金花葵粉末质量10～25倍的60～80％浓度乙醇，浸泡提取12～24h；

2)超声提取：步骤1)中的浸泡液继续超声提取30～60min，超声功率500～800w；

3)过滤浓缩：将步骤2)超声后的浸泡液通过抽滤方式过滤，过滤目数 200～300目，所得滤液在45～65℃、60～90kPa条件下浓缩至体积不再变化，得到金葵花浓缩提取液。

上述金花葵烟用香料，步骤(4)具体包括如下步骤：

1)乙醇回溶：向金花葵浓缩提取液中加入其3～5倍质量的85～100％浓度乙醇，充分搅拌溶解；

2)冷冻沉降：将上述金花葵乙醇溶液置于-10℃冷冻条件下沉降8～12h，得到上清液和沉淀物；

3)浓缩：上述金花葵乙醇溶液经冷冻沉降所得上清液，在45～65℃、60～ 90kPa条件下浓缩至密度为1.0～1.5g/cm³的金花葵精提液，即为金花葵烟用香料。

本发明第三方面涉及一种包含本发明第二方面制备的金花葵烟用香料的卷烟。

上述包含金花葵烟用香料的卷烟，是将所制金花葵烟用香料，以相对于卷烟烟丝质量0.2～0.5％的量，用丙二醇或乙醇稀释3～5倍质量后，以喷雾的方式喷洒到卷烟烟丝上制得。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明首次将金花葵制备成烟用香料，应用于卷烟加工中，丰富了烟用香精香料来源和种类以及卷烟香韵香型，满足了消费者的个性化及多元化需求。

2、本发明首次利用新菌种烟草黄色土源菌X7X对金花葵进行处理，再通过系列溶剂提取工艺得到金花葵烟用香料，应用于卷烟烟丝中，在卷烟抽吸过程中能产生与卷烟香气相协调的特殊花香及清香，且香韵饱满突出，在降低卷烟烟气刺激性，增强卷烟赋香效果的同时，能够提升卷烟抽吸品质。

3、本发明所述金花葵烟用香料，其制备过程不涉及有毒有害试剂的引入，所得香精香料及加工工艺环保安全，且原料易得，成本低廉，便于实现工业化生产，有良好的应用价值。

附图说明

图1为本发明烟草黄色土源菌X7X在R2A培养基上的电镜照片；

图2为本发明烟草黄色土源菌X7X及部分相关菌株依据16S rRNA基因序列构建的系统发育树。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

实施例1

1.烟草黄色土源菌X7X的分离、培养与鉴定

1.1烟草黄色土源菌X7X的分离

从云南省昆明市的烟草生产基地的烟草根际取土壤样品，塑料袋密封带回， 4℃保存待用。准确称取10g土样，加入100mL无菌水，30℃、200rpm震荡培养30min；用无菌水将浓度稀释至10^-3、10^-4w/v倍，将2个浓度的菌液各取0.1mL 均匀涂布于R2A琼脂平板上，每个浓度的菌液设置3个平行试验，30℃恒温培养箱中培养2周，在培养平板上挑取不同形态单菌落，继续采用平板划线法分离纯化菌株，编号后接种于R2A斜面培养基，或配制成甘油悬液(20％，w/v)，置于-80℃条件下保藏。

将分离得到的微生物分别接种于R2A液体培养基中，30℃、160rpm振荡培养，培养至菌液浓度为OD＝1.5，制得各微生物菌株的种子液，观察种子液外观和香气特征变化，筛选出其中能产生特殊香气的微生物菌株，编号为X7X。

1.2烟草黄色土源菌X7X的鉴定

将上述筛选出的能产生特殊香气的微生物菌株X7X，继续接种于R2A琼脂平板培养基上，30℃恒温培养箱中培养7天。进行形态学、生理生化性质和16S rRNA测序分析，鉴定结果表明属于黄色土源菌属，其微生物学分类命名为烟草黄色土源菌(拉丁文学名：Flavisolibacter sp.X7X)。

烟草黄色土源菌X7X在R2A琼脂平板培养基上的电镜照片如附图1所示。

烟草黄色土源菌X7X菌株的细胞为革兰氏阴性、需氧型，非运动的杆状结构。细胞大小为宽0.6-0.7um，长1.2-2.0um。在R2A琼脂平板30℃培养7天后，菌落呈现黄色、表面光滑、中央凸起边缘整齐，直径为1.0-3.0mm的形状。菌株能够在20-40℃，pH为6.0-8.0的范围内生长，最适生长温度为30℃，最适pH 值为7.0。菌株的明胶液化，氧化酶、过氧化氢酶，吐温40水解反应结果呈阳性，酪蛋白、纤维素、淀粉和吐温20、80水解结果呈阴性。菌株的碱性磷酸酶、脂酶C4、脂酶C8、亮氨酸芳胺酶、缬氨酸芳胺酶、半胱氨酸芳胺酶，胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、酸性磷酸酶、α-半乳糖苷酶、β-糖醛酸酶、酸性磷酸酶检测结果呈阳性，精氨酸双水解酶、柠檬酸的利用、吲哚反应、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、色氨酸脱氨酶检测结果呈阴性。

所述X7X菌株能够利用乙醛酸、D-阿拉伯醇、蚁酸、果糖、N-乙酰-D-半乳糖胺、糖醛酸、D-乳酸甲酯、苹果酸和山梨醇作为碳源，但不能利用天冬氨酸、α-羟基丁酸、纤维二糖、果糖、半乳糖、蔗糖、鼠李糖和丝氨酸。所述X7X菌株细胞的极性主要包括磷脂酰乙醇胺、一个未鉴定的氨基磷脂、两个未鉴定的糖脂；主要的呼吸醌为MK-7；主要的脂肪酸为iso-C_15:0，iso-C_17:03OH和summed feature 3(C_16:1ω7c和/或C_16:1ω6c)。

烟草黄色土源菌X7X的生理生化特征如表1所示：

表1烟草黄色土源菌X7X的生理生化反应鉴定结果

注：“+”表示结果为阳性，“-”表示结果为阴性

烟草黄色土源菌X7X的碳源利用情况如表2所示：

表2烟草黄色土源菌X7X的碳氮源利用情况

注：“+”表示结果为阳性，“-”表示结果为阴性

烟草黄色土源菌X7X的16S rRNA基因核苷酸部分序列如附图说明所示，该序列与GenBank数据库中的已知序列进行BLAST比较分析，并从数据库获得相关种属的16S rRNA基因核苷酸序列，构建系统发育树，见附图2。经比较分析发现，本发明的烟草黄色土源菌X7X与菌株(Flavisolibacterswuensis.SR2-4-2) 亲缘关系最近，在系统进化树上形成独立的分枝，综合形态、生理生化、细胞化学和系统进化分析等特征，两者又有明显差距，表明本发明的烟草黄色土源菌 X7X是一个新物种，命名为Flavisolibacter sp.X7X。

烟草黄色土源菌X7X在GenBank数据库的16S rRNA基因核苷酸序列登录号为MG209702，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为 CGMCC 16451。烟草黄色土源菌X7X及相关种属的16S rRNA基因序列构建的系统发育树如附图2所示。

实施例2

1.烟草黄色土源菌X7X的培养

(1)试管斜面培养

采用斜面保藏培养基，培养基为R2A琼脂培养基，培养基的配方为：葡萄糖 0.5g，酵母膏0.5g，蛋白胨0.5g，酸水解酪蛋白0.5g，可溶性淀粉0.5g，丙酮酸钠0.3g，磷酸氢二钾0.3g，硫酸镁0.05g，琼脂15g，蒸馏水定容到1000mL，pH7.2。将培养基在121℃下灭菌25分钟，摆成斜面，接种烟草黄色土源菌X7X，30℃下培养2周，获得试管菌种；

(2)种子培养

采用种子培养基，种子培养基为R2A液体培养基，配方为：葡萄糖0.5g；酵母膏0.5g；蛋白胨0.5g；酸水解酪蛋白0.5g；可溶性淀粉0.5g；丙酮酸钠0.3g；磷酸氢二钾0.3g；硫酸镁0.05g；蒸馏水1000mL，pH7.2。将培养基在121℃下灭菌25分钟，从步骤(1)的试管斜面上挑取部分菌丝体接入种子液中，30℃震荡培养48h，获得液体菌种；

(3)烟草黄色土源菌X7X菌剂制备

将烟草黄色土源菌X7X液体菌种按10％的接种量接种到发酵培养基中，30℃震荡培养7天，得到培养液；每1000mL培养液以3500r/min离心10min，用无菌水洗涤沉淀，最后用20mL无菌水震荡均匀，稀释10倍即得烟草黄色土源菌X7X菌剂。

发酵培养基配方为：黄豆饼浸出汁10mL，葡萄糖10g，蛋白胨3g，氯化钠 2.5g，碳酸钙2g，蒸馏水1000mL，PH7.2。将培养基在121℃下灭菌30min，既得发酵培养基。

2.金花葵粉末发酵

将阴干的金花葵粉碎成粒径80目的粉末，称取金花葵粉末1000g，预先平衡水分至10％，喷施烟草黄色土源菌X7X菌剂200mL，混匀，将处理好的金花葵粉末放入22℃，60％的恒温恒湿箱发酵72h，得到发酵金花葵粉末。

3、金花葵浓缩提取液制备

将所得发酵金花葵粉末置于121℃灭菌锅中灭菌30min后，加入是发酵金花葵粉末质量10倍的75％浓度乙醇，浸泡提取12h；将含发酵金花葵粉末的浸泡液继续利用超声波萃取仪辅助提取40min，超声功率500w；将超声后的溶液进行抽滤，过滤目数200目，取滤液在45℃，80kPa条件下进行浓缩得到金花葵浓缩提取液。

4.金花葵烟用香料的精制

向金花葵浓缩提取液中加入其4倍质量的95％乙醇，充分搅拌溶解后，置于 -10℃冷冻条件下沉降12h，取上层清液在50℃、80kPa条件下浓缩至密度为1.2 g/cm³的金花葵浓缩精提液，即为金花葵烟用香料。

5.金花葵烟用香料的应用

取占卷烟烟丝质量0.4％的金花葵烟用香料，用为金花葵烟用香料4倍量的丙二醇溶解后，以喷雾的方式喷洒到卷烟烟丝上，放入恒温恒湿箱内，在湿度 60％±2，温度22℃±2条件下平衡48h，卷制成卷烟烟支，即为含金花葵烟用香料的试验卷烟。

6.金花葵烟用香料的评价

对照卷烟的制备：将金花葵粉碎成粒径为80目的粉末，称取1000g。将该金花葵粉代替发酵金花葵粉，按照实施例2中的步骤3～5，制得含金花葵提取物的对照卷烟。

含金花葵烟用香料的试验卷烟，与空白卷烟以及含金花葵提取物的对照卷烟交由专业的评吸员进行感官对比评吸，参照烟用香精功能性评价方法进行评价，结果如表3所示。含金花葵提取物的对照卷烟，带有一定的花香香韵，但香气沉闷，进行卷烟抽吸时，烟气中花香香韵体现不理想，协调不佳，刺激性改善不明显。含金花葵烟用香料的试验卷烟，较含金花葵提取物的对照卷烟，其带有一种特殊的花香和清香香韵，香气清新自然，进行卷烟抽吸时，烟气中花香和清香立体饱满，卷烟烟气协调，余味较为干净，能够显著提升卷烟抽吸品质。

表3金花葵烟用香料的感官评价

实施例3

1.烟草黄色土源菌X7X的培养方法同实施例2。

2.金花葵粉末发酵

将阴干的金花葵粉碎成粒径100目的粉末，称取金花葵粉末1000g，预先平衡水分至12％，喷施烟草黄色土源菌X7X菌剂200mL，混匀，将处理好的金花葵粉末放入22℃，60％的恒温恒湿箱发酵48h，得到发酵金花葵粉末。

3、金花葵浓缩提取液制备

将所得发酵金花葵粉末置于121℃灭菌锅中灭菌20min后，加入发酵金花葵粉末质量15倍的80％浓度乙醇，浸泡提取18h；将含发酵金花葵粉末的浸泡液继续超声波萃取仪辅助提取30min，超声功率800w；将超声后的溶液进行抽滤，过滤目数300目，取滤液在50℃，80kPa条件下进行浓缩得到金花葵浓缩提取液。

4.金花葵烟用香料的精制

向金花葵浓缩提取液中加入其3倍质量的无水乙醇，充分搅拌溶解后，置于 -10℃冷冻条件下沉降5h，取上层清液在45℃、60kPa条件下浓缩至密度为1.5 g/cm³的金花葵浓缩精提液，即为金花葵烟用香料。

5.金花葵烟用香料的应用

取占卷烟烟丝质量0.3％的金花葵烟用香料，用金花葵烟用香料4倍量的95％乙醇溶解后，以喷雾的方式喷洒到卷烟烟丝上，放入恒温恒湿箱内，在湿度60％±2，温度22℃±2条件下平衡48h，卷制成卷烟烟支，即为含金花葵烟用香料的试验卷烟。

6.金花葵烟用香料的评价

对照卷烟的制备：以烟草黄色土源菌X7X的亲缘菌种Flavisolibacterswuensis.SR2-4-2(购自日本微生物保藏中心(JCM))代替烟草黄色土源菌X7X发酵金花葵粉，其余操作步骤同实施例3中步骤1～5，所制得的卷烟即为对照卷烟。

由烟草黄色土源菌X7X发酵的金花葵烟用香料制备而得的试验卷烟，与空白卷烟，以及由菌种Flavisolibacterswuensis.SR2-4-2发酵的金花葵提取物制备而得的对照卷烟，皆交由专业的评吸员进行感官对比评吸，参照烟用香精功能性评价方法进行评价，结果如表4所示。对照卷烟，与空白卷烟相比，有一定花香香韵，进行卷烟抽吸时，烟气中杂气、刺激性增加，协调不佳。试验卷烟，相较对照卷烟，具有特殊花香，并且清香香韵明显，香气清新透发，进行卷烟抽吸时，烟气香韵丰富性增加，香气质有较显著提升，在降低卷烟烟气刺激性同时，能够显著提升卷烟抽吸品质。由此可见，虽是亲缘菌种，但菌种Flavisolibacterswuensis. SR2-4-2用于金花葵发酵，其并不能取得如烟草黄色土源菌X7X类似效果。

表4金花葵烟用香料的感官评价

本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

附序列表：

烟草黄色土源菌X7X的16S rRNA基因核苷酸部分序列如下：

序列表

<110> 云南中烟工业有限责任公司

者为 高莉 董立民 李文均 郭青 张健 赵升逵

<120> 一种金花葵烟用香料的制备方法和应用

<130> RIB180486

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1490

<212> DNA

<213> 烟草黄色土源菌(Flavisolibacter soli.X7X)

<400> 1

agagtttgat cctggctcag gatgaacgct agcggcaggc ttaatacatg caagtcgagg 60

ggcagcgcag tgtagcaata catgggcggc gaccggcaaa cgggtgcgga acacgtacgc 120

aacctaccca aaactggggg atagcccacc gaaaggtgga ttaatacctc gtaacctcgt 180

gaagcggcat cgctttatga gtatagctcc ggcggttttg gatgggcgtg cgcctgatta 240

ggtagttggc ggggtaacgg cccaccaagc ctgcgatcag taactggtgt gagagcacga 300

ccagtcacac gggcactgag acacaggccc gactcctacg ggaggcagca gtaaggaata 360

ttggtcaatg gacgcaagtc tgaaccagcc atgccgcgtg agggatgaag gtcctctgga 420

ttgtaaactt cttttatctg ggacgaaacc ctcgttttct aacgggattg acggtaccag 480

aggaataagc accggctaac tccgtgccag cagccgcggt aatacggagg gtgcaagcgt 540

tatccggatt cactgggttt aaagggtgcg taggagggca gggaagtcag tggtgaaatc 600

tccgggctta actcggaaac tgccgttgat actctctgtc ttgaatcccg tggaggtgag 660

cggaatatgt catgtagcgg tgaaatgctt agatatgaca tagaacacca attgcgaagg 720

cagctcgcta cacgaagatt gactctgagg cacgaaagcg tggggatcaa acaggattag 780

ataccctggt agtccacgcc ctaaacgatg gatactcgac atacgcgata cactgtgtgt 840

gtctgagcga aagcattaag tatcccacct gggaagtacg accgcarggt tgaaactcaa 900

aggaattggc gggggtccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga tgatacgcga 960

ggaaccttac ctgggctaga atgctggttg accgtgggtg aaagctcact ttgtagcaat 1020

acacaaccag taaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gccgtgaggt gttgggttaa 1080

gtcccgcaac gagcgcaacc cccatcagta gttgccatca ggtaacgctg ggaactctac 1140

tgaaactgcc gtcgtaagac gcgaggaagg aggggatgat gtcaagtcat catggccttt 1200

atgcccaggg ctacacacgt gctacaatgg ggcgtacaaa gggctgccac ttagcgataa 1260

ggagccaatc ccaaaaaacg cctctcagtt cagatcgcag tctgcaactc gactgcgtga 1320

agctggaatc gctagtaatc gtatatcagc aatgatacgg tgaatacgtt cccggacctt 1380

gcacacaccg cccgtcaagc catggaagct gggtgtacct aaagtcggta accgcaagga 1440

gccgcctagg gtaaaactag taactggggc taagtcgtaa caaggtaacc 1490

Claims (7)

1.一种金花葵烟用香料，其特征在于，其通过包括以下步骤的方法制备：

(1)烟草黄色土源菌X7X菌剂的制备；

(2)利用烟草黄色土源菌X7X菌剂对金花葵粉末进行发酵，得到发酵金花葵粉末；

(3)将发酵金花葵粉末利用乙醇浸泡，超声提取，经过滤浓缩得到金花葵浓缩提取液；

(4)将金花葵浓缩提取液利用乙醇回溶，搅拌均匀并冷冻沉降，取上清液浓缩既得金花葵烟用香料。

2.根据权利要求1所述的金花葵烟用香料，其特征在于，步骤(1)具体包括：将烟草黄色土源菌X7X液体菌种按10％的接种量接种到发酵培养基中，30℃震荡培养7天，得到培养液；培养液离心分离，用无菌水洗涤沉淀，最后用无菌水震荡均匀，稀释10倍即得菌剂。

3.根据权利要求1所述的金花葵烟用香料，其特征在于，步骤(2)具体包括：将金花葵阴干，粉碎成粒径60～120目的粉末，平衡水分至10％～13％，每100g金花葵粉中喷施烟草黄色土源菌X7X菌剂20mL，混匀，将处理好的金花葵粉置于22℃，60％的恒温恒湿箱中发酵24～72h，得到发酵金花葵粉末。

4.根据权利要求1所述的金花葵烟用香料，其特征在于，步骤(3)具体包括如下步骤：

1)乙醇浸泡：将所得发酵金花葵粉末置于121℃灭菌锅中灭菌20～30min后，加入为发酵金花葵粉末质量10～25倍的60～80％浓度乙醇，浸泡提取12～24h；

2)超声提取：将步骤1)中的浸泡液超声提取30～60min，超声功率500～800w；

3)过滤浓缩：将步骤2)超声后的浸泡液通过抽滤方式过滤，所得滤液在45～65℃、60～90kPa条件下浓缩至体积不再变化，得到金葵花浓缩提取液。

5.根据权利要求1所述的金花葵烟用香料，其特征在于，步骤(4)具体包括如下步骤：

1)乙醇回溶：向金花葵浓缩提取液中加入其3～5倍质量的85～100％浓度乙醇，充分搅拌溶解；

2)冷冻沉降：将上述金花葵乙醇溶液置于-10℃冷冻条件下沉降8～12h，得到上清液和沉淀物；

3)浓缩：上述金花葵乙醇溶液经冷冻沉降所得上清液，在45～65℃、60～90kPa条件下浓缩至密度为1.0～1.5g/cm³的金花葵精提液，即为金花葵烟用香料。

6.一种含金花葵烟用香料的卷烟，其特征在于，其包含权利要求1-5任意所述的金花葵烟用香料。

7.根据权利要求6所述的含金花葵烟用香料的卷烟，其特征在于，是将权利要求1-5中所述的金花葵烟用香料，以相对于卷烟烟丝质量0.2～0.5％的量，用丙二醇或乙醇稀释3～5倍质量后，以喷雾的方式喷洒到卷烟烟丝上制得。