CN112998304B - 一种假秦艽焙制发酵香料的制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种假秦艽焙制发酵香料的制备方法和应用，其通过包括以下步骤的方法制备：(1)根际奇顿杆菌yh7‑1菌剂的制备；(2)利用根际奇顿杆菌yh7‑1菌剂对假秦艽粉末进行焙制处理，得到焙制假秦艽；(3)将焙制假秦艽进行发酵处理，得到焙制发酵假秦艽；(4)将焙制发酵假秦艽进行乙醇回流提取，经过滤浓缩得到假秦艽焙制发酵香料。将假秦艽焙制发酵香料应用于卷烟烟丝中，能使卷烟烟气具有特殊甜香和药草香的同时，稍带独特焦香，能显著丰富卷烟烟香，增加烟气津润感，协调烟气，提升卷烟抽吸品质。

Description

一种假秦艽焙制发酵香料的制备方法和应用

技术领域

本发明属于烟用香精香料技术领域，具体涉及一种假秦艽焙制发酵烟用香料的制备方法和应用。

背景技术

卷烟加香加料是一种常规的、必需的增补香气的技术手段，通过加香、加料可以弥补卷烟叶组配方的不足，使卷烟烟香更加丰厚、充足，从而在吸味、嗅香上具有独特风格，增强产品的特征。天然香料在卷烟调香中起到的作用极为重要，持续开发利用香料植物资源，通过改进制备方法获取品质优秀的天然香精香料，一直是卷烟调香和卷烟产品研发努力的方向。

假秦艽，又名粗弓、甘草、土甘草、白洋参、白元参、白玄参，为唇形科(Lamiaceae)糙苏属草本植物，根茎肥厚，疙瘩状串联；产于滇西、西藏东部，四川西部北海拔2700～3000米的林间草地、林下或草坡上，是滇西北特产的甜味植物。假秦艽为云南藏族民间常用的传统藏药，以根块入药，具有清咽利喉、镇咳祛痰、健胃开脾等功效。假秦艽中含高甜味成分百元参甙，其甜味是蔗糖的500倍，而且甜味持久，能在口腔残留1h左右；其提取物和甜味成分百元参甙能明显增加卷烟抽吸的甜润感，有较好的生津功效。

目前，现有技术中将假秦艽添加到卷烟中，主要采用直接向卷烟烟丝中添加假秦艽提取物，该方法制备得到的卷烟，甜香明显，但增加了卷烟杂气，刺激性稍大，协调性差。

为了解决以上问题，提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于针对现有烟用香精香料种类不够丰富及制备方法不足等问题，提供一种具有清香香韵的假秦艽焙制发酵香料的制备方法及在卷烟中的应用，其是以假秦艽为原料，利用根际奇顿杆菌yh7-1焙制及发酵工艺对其进行处理，再通过溶剂提取工艺得到一种安全性良好的假秦艽焙制发酵香料，将其应用于卷烟烟丝中，能使卷烟烟气具有特殊甜香和药草香的同时，稍带独特焦香，能显著丰富卷烟烟香，增加烟气津润感，协调烟气，提升卷烟抽吸品质。提供一种能明显改善卷烟吸味品质的香料制备方法。

* 除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

本发明第一方面涉及一种假秦艽焙制发酵香料，其通过包括以下步骤的方法制备：

（1）根际奇顿杆菌yh7-1菌剂的制备；

（2）将假秦艽粉末进行焙制，得到焙制假秦艽；

（3）利用根际奇顿杆菌yh7-1菌剂对发酵假秦艽进行发酵处理，得到焙制发酵假秦艽；

（4）将焙制发酵假秦艽进行乙醇回流提取，经过滤浓缩得到假秦艽焙制发酵香料。

优选地，步骤（1）具体包括：将根际奇顿杆菌yh7-1液体菌种按5~30%的接种量接种到发酵培养基中，10~50 ℃震荡培养3~10天，得到培养液；培养液离心分离，用无菌水洗涤沉淀，最后用无菌水震荡均匀，稀释3~15倍即得菌剂。例如，每1000 mL培养液离心分离，用无菌水洗涤沉淀，最后用20mL无菌水震荡均匀，稀释10倍即得菌剂。

上述根际奇顿杆菌yh7-1，其分离于云南哀牢山柑橘园采集柑橘根际土壤样，对其进行了形态学、生理生化性质和16S rRNA测序分析，鉴定结果表明其属于根际奇顿杆菌，微生物学分类命名为根际奇顿杆菌Chthonobacter rhizosphaeraeyh7-1，已于2020年5月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称：CGMCC）保藏，保藏编号为CGMCC 1.17236，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所。

本发明分离得到的根际奇顿杆菌yh7-1菌株的主要形态特征和生理生化性质特征为：在大多数培养基上生长良好，在R2A琼脂培养基上，菌落边缘不规则，中间凸起，呈黄色。纤维素酶、氧化酶、过氧化氢酶呈阳性；吐温20，40，60和80、淀粉水解、酪蛋白水解呈阴性。能利用乙酸、D-阿拉伯醇、D-纤维二糖、D-果糖、L-果糖、D-半乳糖、α-D-葡萄糖、D-葡萄糖-6-磷酸、D-甘露醇、果胶、 L-丙氨酸、L-精氨酸、D-天冬氨酸、L-天冬氨酸。细胞膜的极性脂成分主要包括磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺，细胞的呼吸醌为泛醌-10（Q-10）。

本发明所分离得到的根际奇顿杆菌yh7-1的16S rDNA基因核苷酸序列如序列表所示，该序列已递交国际核苷酸序列数据库（GenBank），序列检索号：MG209703。

优选地，步骤（2）具体包括：将干燥的假秦艽植株粉碎成粒径30~100目的粉末，放入炭化炉中，对其进行封闭式加热焙制处理，得到焙制假秦艽；封闭式加热焙制处理过程为：将炭化炉温度逐渐升至80℃，待假秦艽干燥后迅速，将炭化炉为温度升至120～250℃，并保持0.5～2h。

优选地，步骤（3）具体包括：将焙制假秦艽平衡水分至10%～13%，每100g假秦艽粉末中喷施根际奇顿杆菌yh7-1菌剂10~40 mL，混匀，将处理好的焙制假秦艽置于22℃，60%的恒温恒湿箱中发酵24～72h，得到焙制发酵假秦艽。

优选地，步骤（4）具体包括如下步骤：

41）提取：按焙制发酵假秦艽质量的4～10倍加入80%～95%浓度乙醇，50～80℃条件下热回流提取1～3h；

42）过滤：步骤41）所得热回流提取液通过抽滤方式过滤，过滤目数不低于200目；

43）浓缩：收集步骤42）抽滤所得清液，在45～60℃、60～100kPa条件下浓缩至密度为1.0~1.5 g/cm³的焙制发酵假秦艽提取液，即为假秦艽焙制发酵香料。

本发明第二方面涉及一种包含本发明第一方面制备的假秦艽焙制发酵香料的卷烟。

优选地，上述包含假秦艽焙制发酵香料的卷烟，是将所制假秦艽焙制发酵香料，以相对于卷烟烟丝质量0.2~0.5%的量，用丙二醇或乙醇稀释3~5倍质量后，以喷雾的方式喷洒到卷烟烟丝上制得。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明首次将假秦艽制备成烟用香料，应用于卷烟加工中，丰富了烟用香精香料来源和种类，满足了消费者的个性化及多元化需求。

2、本发明首次利用微生物发酵和焙制联用的方式制备假秦艽焙制发酵香料。利用微生物发酵可以增加传统提取香料中多种香气物质的含量，提升香气丰富性，将其加入卷烟中，可生产出香气丰富、高品质的卷烟，满足消费者对卷烟品质的要求。另外，利用微生物对自身具有气味的植物原料进行发酵，还能赋予植物以区别于原有气味的独特香味。焙制植物颗粒或粉末，在保留植物原材料部分香味特性的同时，又可赋予植物原材料以特殊的焦香味。

3、本发明首次利用新菌种根际奇顿杆菌yh7-1对假秦艽进行焙制处理，联用发酵产香后、再进行乙醇回流提取制得了一种假秦艽焙制发酵香料，该种制备工艺丰富了烟用香精的提取方式。而通过本发明制备工艺得到的假秦艽焙制发酵香料，应用于卷烟烟丝中，在卷烟抽吸过程中能产生与卷烟香气相协调的特殊甜香香和药草香，且稍带独特焦香，能显著丰富卷烟烟香，增加烟气津润感，提升卷烟抽吸品质。

4、利用本发明方法制备的假秦艽焙制发酵香料，其整个提取过程无不良有机溶剂引入，所得香精香料及加工工艺环保安全，且原料易得，成本低廉，便于实现工业化生产，有良好的应用价值。

附图说明

图1为本发明根际奇顿杆菌yh7-1在R2A培养基上的电镜照片；

图2为本发明根际奇顿杆菌yh7-1及部分相关菌株依据16S rRNA基因序列构建的系统发育树。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

实施例中“假秦艽烟用香料”即指代“假秦艽焙制发酵香料”。

实施例1

1.根际奇顿杆菌yh7-1的分离、培养与鉴定

1.1根际奇顿杆菌yh7-1的分离

从云南哀牢山柑橘园采集柑橘根际土壤样品，塑料袋密封带回，4℃保存待用。准确称取20 g土样，加入100mL无菌水，30℃、240rpm摇床震荡40min；用无菌水将浓度稀释至10^-1、10^-2、10^-3、10^-4倍，将4个浓度的菌液分别取0.2mL涂布于R2A平板培养基上，每个浓度的菌液设置3个平行试验，28℃下培养72h，从每份土样的平板上挑取不同单菌落，在R2A平板培养基上纯化后按菌液体积20%加入甘油、置于-80℃冰箱保存备用。

将分离得到的微生物分别接种于R2A液体培养基中，30℃、180rpm摇床振荡培养，培养至菌液浓度为OD=2.0，作为种子液备用。将每一个待测菌株的种子液按1%接种在筛选培养基（R2A液体培养基）中，于30℃、180rpm摇床振荡培养3-5天，每天观察发酵液外观和香气变化情况，筛选得到能够产生香气的微生物，编号yh7-1。

1.2根际奇顿杆菌yh7-1的鉴定

对分离纯化的菌株yh7-1进行形态学、生理生化性质和16S rDNA分析，鉴定结果表明属于根际奇顿杆菌，其微生物学分类命名为根际奇顿杆菌（拉丁文学名：Chthonobacter rhizosphaeraeyh7-1）。

根际奇顿杆菌yh7-1在R2A培养基上的电镜照片如附图1所示。

根际奇顿杆菌yh7-1在大多数培养基上生长良好，在R2A琼脂培养基上，菌落边缘不规则，中间凸起，呈黄色。纤维素酶、氧化酶、过氧化氢酶呈阳性；吐温20，40，60和80、淀粉水解、酪蛋白水解呈阴性。能利用乙酸、D-阿拉伯醇、D-纤维二糖、D-果糖、L-果糖、D-半乳糖、α-D-葡萄糖、D-葡萄糖-6-磷酸、D-甘露醇、果胶、 L-丙氨酸、L-精氨酸、D-天冬氨酸、L-天冬氨酸。细胞膜的极性脂成分主要包括磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺，细胞的呼吸醌为泛醌-10（Q-10）。

根际奇顿杆菌yh7-1的生理生化特征如表1所示：

根际奇顿杆菌yh7-1的碳氮利用情况如表2所示：

根际奇顿杆菌yh7-1的16S rDNA部分序列如附图说明所示，该序列与GenBank数据库中的已知序列进行BLAST比较分析，并从数据库获得相关种属的16S rDNA基因序列，构建系统发育树，见附图2。经比较分析发现，本发明的根际奇顿杆菌yh7-1与菌株（Chthonobacter albigriseus KCTC 42450^T）亲缘关系最近，在系统进化树上形成独立的分枝，综合形态、生理生化、细胞化学和系统进化分析等特征，两者又有明显差距，表明本发明的根际奇顿杆菌yh7-1是一个新物种，命名为Chthonobacter rhizosphaerae。

根际奇顿杆菌yh7-1在GenBank数据库的16S rDNA基因核苷酸序列登录号为MG209703，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC 1.17236。根际奇顿杆菌yh7-1及相关种属的16S rDNA基因序列构建的系统发育树如附图2所示。

实施例2

1．根际奇顿杆菌yh7-1的培养

（1）试管斜面培养

采用斜面保藏培养基，培养基为R2A琼脂培养基，培养基的配方为：葡萄糖0.5g，酵母膏0.5g，蛋白胨0.5g，酸水解酪蛋白0.5g，可溶性淀粉0.5g，丙酮酸钠0.3g，磷酸氢二钾0.3g，硫酸镁0.05g，琼脂15g，蒸馏水定容到500mL，pH7.0。将培养基在130℃下灭菌30min，摆成斜面，接种根际奇顿杆菌yh7-1菌株，28 ℃下培养1周，获得试管菌种。

（2）种子培养

采用种子培养基，种子培养基的配方为：糊精120g，大豆粉40 g，酵母膏2g，色氨酸0.5g，β-丙氨酸5g，硫酸镁0.5g，磷酸铵0.2g，蒸馏水定容到500mL，pH7.0。将培养基在130℃下灭菌30min，从步骤（1）的试管斜面上挑取部分菌丝体接入种子液中，28℃摇瓶培养36h，获得液体菌种。

（3）根际奇顿杆菌yh7-1菌剂制备

将根际奇顿杆菌yh7-1液体菌种按10%的接种量接种到发酵培养基中，28 ℃震荡培养6天，得到发酵液，即得根际奇顿杆菌yh7-1菌剂。

培养基配方为：大豆粉10g；葡萄糖10g；蛋白胨3g；氯化钠2.5g；碳酸钙2g；蒸馏水500mL，pH7.0，既得发酵培养基。

2.假秦艽的焙制

将1kg干燥的假秦艽植株粉碎成粒径50目的粉末假秦艽放入炭化炉中，将炉温逐渐升温至约80℃，保持30min，待发酵假秦艽干燥后，迅速升温至130℃，并保持0.5h，检视焙制程度合格后，关闭热源，取出焙制假秦艽样品备用。

3. 焙制假秦艽发酵

将焙制假秦艽平衡水分至10%，每100g假秦艽粉末中喷施根际奇顿杆菌yh7-1菌剂20 mL，混匀，将处理好的假秦艽粉置于22℃，60%的恒温恒湿箱中发酵24h，得到焙制发酵假秦艽。

4.假秦艽烟用香料的制备

取上述焙制发酵假秦艽，加入4 kg的95%浓度乙醇，60℃下热回流提取2h；所得热回流提取液趁热抽滤，过滤目数为200目；继续将抽滤所得清液，在45℃、80kPa条件下浓缩至密度为1.2 g/cm³的焙制发酵假秦艽提取液，即为假秦艽烟用香料。

5. 假秦艽烟用香料的应用

取占卷烟烟丝质量0.4%的假秦艽烟用香料，将其用假秦艽烟用香料4倍量的丙二醇溶解后，以喷雾的方式喷洒到卷烟烟丝上，放入恒温恒湿箱内，在湿度60%±2，温度22℃±2条件下平衡48h，卷制成卷烟烟支，即为含假秦艽烟用香料的试验卷烟（焙制发酵后回流提取）。

6. 假秦艽烟用香料的评价

对照卷烟的制备：将1kg干燥的假秦艽植株粉碎成粒径50目的粉末，将该假秦艽粉末代替焙制发酵假秦艽，按照实施例2中步骤4、5，制得含假秦艽提取物的对照卷烟1（直接回流提取）。

将试验卷烟、空白卷烟及对照卷烟1交由专业的评吸员，参照YC/T497—2014《卷烟中式卷烟风格感官评价方法》对卷烟香气风格进行评价，在香气风格、舒适感特征及烟气特征方面进行了评价对比，结果如表3所示。对照卷烟1较空白卷烟甜香明显，但增加了卷烟杂气，刺激性稍大。试验卷烟较对照卷烟1，甜香和药草明显；进行卷烟抽吸时，带有明显辨识性的甜香和药草香，香韵自然圆润，烟气丰富性增加，烟气协调，能增加口腔津润感，显著提升卷烟抽吸品质。

实施例3

1. 根际奇顿杆菌yh7-1的培养方法同实施例2中步骤1。

2. 假秦艽的焙制同实施例2中步骤2。将焙制后的假秦艽同实施例2中步骤4制备得到不经过发酵的焙制提取假秦艽香料。将得到的香料同实施例2中步骤5应用于卷烟烟丝上，制备得到对照卷烟2（焙制后回流提取）。

3.香料评价

将试验卷烟、空白卷烟及对照卷烟2交由专业的评吸员，参照YC/T497—2014《卷烟中式卷烟风格感官评价方法》对卷烟香气风格进行评价，在香气风格、舒适感特征及烟气特征方面进行了评价对比，结果如表3所示。

由根际奇顿杆菌yh7-1发酵的假秦艽烟用香料制备而得的试验卷烟，与空白卷烟，以及不发酵直接焙制制备而得的对照卷烟2，皆交由专业的评吸员进行感官对比评吸，结果如表3所示。对照卷烟2与空白卷烟相比，有一定甜香和焦香香韵，进行卷烟抽吸时，协调较差。与试验卷烟对照，试验卷烟具有特殊药草香，并且甜香香韵明显，香气清新透发，进行卷烟抽吸时，烟气带有明显辨识性的甜香、焦香以及药草香，香韵丰富性增加，香气质有较显著提升，同时降低卷烟烟气刺激性。由此可见，经根际奇顿杆菌yh7-1发酵的假秦艽烟用香料，比不发酵直接焙制的假秦艽香料提升卷烟品质效果更佳。

本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

附序列表：

根际奇顿杆菌yh7-1的16S rDNA部分序列如下：

AGAGTTTGATCCTGGCTCAGAACGAACGCTGGCGGCAGGCTTAACACATGCAAGTCGAGCGCCCCGCAAGGGGAGCGGCAGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAACCTACCTATTGCTGCGGAATAACTCAGGGAAACTTGAGCTAATACCGCATGTGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGGCAATAGATGGGCCCGCGTCGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGGCGACGATCCGTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGGTGAAGATAATGACGGTAACCGGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGATTGTTAAGTCGAGGGTGAAATCCCAGGGCTCAACCCTGGAACTGCCTTCGATACTGGCATTCTTGAGTCCGAGAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGCTCGGAACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGGGTGCTAGCCGTTGGCCAGCTTGCTGGTCAGTGGCGCCGCTAACGCTTTAAGCACCCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAATGCGCAGAACCTTACCAGCCTTTGACATCCTGTGCGACATGGAGAGATCCATGGTTCCCTTCGGGGACGCAGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCCTAGTTGCCATCATTCAGTTGGGCACTCCAGGGGGACTGCCGGTGATAAGCCGCGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCGGTGACAATGGGCAGCGACCTCGCGAGGGGTAGCCAATCCCAAAAAGCCGTCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGGGTGCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGTAACAGCATGACGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGGTTTACCCGAAGGCAGTGCGCCAACCGCAAGGGGGCAGCTGACCACGGTAGGCTCAGCGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGATCACCTCCT

SEQUENCE LISTING

<110> 云南中烟工业有限责任公司

<120> 一种假秦艽焙制发酵香料的制备方法和应用

<130> 2020.05.25

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1472

<212> DNA

<213> 根际奇顿杆菌yh7-1（Chthonobacter rhizosphaerae yh7-1）

<400> 1

agagtttgat cctggctcag aacgaacgct ggcggcaggc ttaacacatg caagtcgagc 60

gccccgcaag gggagcggca gacgggtgag taacgcgtgg gaacctacct attgctgcgg 120

aataactcag ggaaacttga gctaataccg catgtgccct tcgggggaaa gatttatcgg 180

caatagatgg gcccgcgtcg gattagctag ttggtggggt aatggcctac caaggcgacg 240

atccgtagct ggtctgagag gatgatcagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc 300

ctacgggagg cagcagtggg gaatattgga caatgggcgc aagcctgatc cagccatgcc 360

gcgtgagtga tgaaggcctt agggttgtaa agctctttca ccggtgaaga taatgacggt 420

aaccggagaa gaagccccgg ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggct 480

agcgttgttc ggaattactg ggcgtaaagc gcacgtaggc ggattgttaa gtcgagggtg 540

aaatcccagg gctcaaccct ggaactgcct tcgatactgg cattcttgag tccgagagag 600

gtgagtggaa ttccgagtgt agaggtgaaa ttcgtagata ttcggaagaa caccagtggc 660

gaaggcggct cactggctcg gaactgacgc tgaggtgcga aagcgtgggg agcaaacagg 720

attagatacc ctggtagtcc acgccgtaaa cgatgggtgc tagccgttgg ccagcttgct 780

ggtcagtggc gccgctaacg ctttaagcac cccgcctggg gagtacggtc gcaagattaa 840

aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc 900

aatgcgcaga accttaccag cctttgacat cctgtgcgac atggagagat ccatggttcc 960

cttcggggac gcagagacag gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg 1020

ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccctcg cccctagttg ccatcattca gttgggcact 1080

ccagggggac tgccggtgat aagccgcgag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcctcatgg 1140

cccttacggg ctgggctaca cacgtgctac aatggcggtg acaatgggca gcgacctcgc 1200

gaggggtagc caatcccaaa aagccgtctc agttcggatt gcactctgca actcgggtgc 1260

atgaagtcgg aatcgctagt aatcgcgtaa cagcatgacg cggtgaatac gttcccgggc 1320

cttgtacaca ccgcccgtca caccatggga gttgggttta cccgaaggca gtgcgccaac 1380

cgcaaggggg cagctgacca cggtaggctc agcgactggg gtgaagtcgt aacaaggtag 1440

ccgtagggga acctgcggct ggatcacctc ct 1472

Claims (8)

1.一种假秦艽焙制发酵香料的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：

（1）根际奇顿杆菌yh7-1菌剂的制备；

（2）将假秦艽粉末进行焙制，得到焙制假秦艽；

（3）利用根际奇顿杆菌yh7-1菌剂对焙制假秦艽进行发酵处理，得到焙制发酵假秦艽；

（4）将焙制发酵假秦艽进行乙醇回流提取，经过滤浓缩得到假秦艽焙制发酵香料。

2.根据权利要求1所述的假秦艽焙制发酵香料的制备方法，其特征在于，步骤（1）具体包括：将根际奇顿杆菌yh7-1液体菌种按5~30%的接种量接种到发酵培养基中，10~50 ℃震荡培养3~10天，得到培养液；培养液离心分离，用无菌水洗涤沉淀，最后用无菌水震荡均匀，稀释3~15倍即得菌剂。

3.根据权利要求1所述的假秦艽焙制发酵香料的制备方法，其特征在于，步骤（1）中根际奇顿杆菌yh7-1，其微生物学分类命名为根际奇顿杆菌yh7-1，拉丁文学名：Chthonobacter rhizosphaerae yh7-1，已于2020年5月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC 1.17236。

4.根据权利要求1所述的假秦艽焙制发酵香料的制备方法，其特征在于，步骤（2）具体包括：将干燥的假秦艽植株粉碎成粒径30~100目的粉末，放入炭化炉中，对其进行封闭式加热焙制处理，得到焙制假秦艽；封闭式加热焙制处理过程为：将炭化炉温度升至80℃，待假秦艽干燥后，将炭化炉为温度升至120～250℃，并保持0.5～2h。

5.根据权利要求1所述的假秦艽焙制发酵香料的制备方法，其特征在于，步骤（3）具体包括：将焙制假秦艽平衡水分至10%～13%，每100g假秦艽粉末中喷施根际奇顿杆菌yh7-1菌剂10~40 mL，混匀，将处理好的假秦艽粉置于22℃，60%的恒温恒湿箱中发酵24～72h，得到焙制发酵假秦艽。

6.根据权利要求1所述的假秦艽焙制发酵香料的制备方法，其特征在于，步骤（4）具体包括如下步骤：

41）提取：按焙制发酵假秦艽质量的4～10倍加入80%～95%浓度乙醇，50～80℃条件下热回流提取1～3h；

42）过滤：步骤41）所得热回流提取液通过抽滤方式过滤，过滤网孔径不低于200目；

43）浓缩：收集步骤42）抽滤所得清液，在45～60℃、60～100kPa条件下浓缩至密度为1.0~1.5 g/cm³的焙制发酵假秦艽提取液，即为假秦艽焙制发酵香料。

7.一种含假秦艽焙制发酵香料的卷烟，其特征在于，其包含权利要求1-6任意一项所述制备方法制备得到的所述假秦艽焙制发酵香料。

8.根据权利要求7所述的含假秦艽焙制发酵香料的卷烟，其特征在于，将权利要求1-6中任一所述制备方法制备得到的所述假秦艽焙制发酵香料，以相对于卷烟烟丝质量0.2~0.5%的量，用丙二醇或乙醇稀释3~5倍质量后，以喷雾的方式喷洒到卷烟烟丝上，得到含假秦艽焙制发酵香料的卷烟。

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