CN109402101B - 一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的是提供一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法和应用，采用晒黄烟烟杆和甜菜根固定化吸附微生物菌株，对晒黄烟粗粉进行温育水解发酵，再结合连续逆流超声提取，制备晒黄烟叶吸附发酵提取物，该提取物具有天然烟草浓郁本香，带有水果酯香、奶香、烘烤香气，香料品质提高，纯化分离步骤简单，工艺条件温和，提取率和生产效率提高；在传统卷烟、新型加热不燃烧卷烟中加料加香应用，具有天然烟草本香，卷烟香气浓郁醇厚、浓度增加、满足感提高，带有奶香、水果酸香、烘烤香气和喉部回甜感，刺激性降低，口感改善。
Description
技术领域
本发明涉及烟用添加剂领域，具体涉及一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法和应用。
背景技术
烟用添加剂为改善烟草理化性能的助剂，包括香料香精、保润剂、助燃剂、防霉剂和吸附剂。低焦油卷烟的生产更需要加香加料以弥补烟香的不足。烟制品加香加料的目的在于掩盖天然烟草的刺激性和杂气等，并提高或改善其香味。天然香料因其天然性、安全性和自然复合的香气，更迎合消费者对健康的需求，但仍然具有提取效率较低、溶剂残留多、杂质含量高、纯度较低、纯化步骤复杂成本高，有些因特征香气显著，会导致有外加香气掩盖烟香、引入烟草以外化学物质等缺陷。
生物产香技术是利用微生物工程、酶工程、细胞培养、基因改造等生物技术，通过微生物代谢出特定香气成分，从而提升产品质量的一门新技术。在生物产香技术制备天然香料的过程中，多采用悬浮微生物发酵，这种方式同样存在天然浸膏和提取物类香料产品得率低下、产品质量不稳定、纯化步骤复杂、成本高等缺陷，严重阻碍了生物产香天然香料的应用推广。
晒黄烟，在外形、化学成分、烟气和吃味均与烤烟相似。晒黄烟色泽鲜明，品质好的晒黄烟油分充足、弹性好。晒黄烟中含有5～18％的糖分，包括葡萄糖、果糖、半乳糖等，总氮含量在1.5～3.64％，烟碱含量在1.29～5.45％，蛋白质含量在7.83～16.84％之间。晒黄烟叶可用作烟用香料的原料，其提取物可以增加卷烟香气风味，是一种具有烟草本香物质的天然香料。常规、普通的烟草提取物制备方法，通常使提取香味物质的同时，带有对卷烟吸味不利的蛋白质、鞣质、淀粉、果胶、纤维素、木质素及其他大分子物质，增香的同时也具有增加刺激性、杂气和残留感的缺陷。
目前有专利“一种晒黄烟分子蒸馏物的制备方法”(申请号201810184517.9)，将晒黄烟乙醇溶剂提取后，陶瓷膜过滤浓缩后分子蒸馏纯化，在卷烟中应用；专利“一种用于新型烟草的晒黄烟提取物的制备方法”(专利号ZL201610988163.4)将晒黄烟水提液与复合氨基酸反应的美拉德反应液，进行精馏，应用于新型烟草；专利“一种晾晒烟提取物及精油的制备方法”(申请号201110366722.5)利用二氧化碳超临界流体萃取晾晒烟中的脂类与蜡质化合物等致香成分，在卷烟中加香应用；但是通过晒黄烟烟杆和甜菜根等生物吸附材料来固定活性菌株，温育水解发酵晒黄烟叶，结合连续逆流超声提取技术，得到晒黄烟吸附发酵提取物，并在传统和新型加热不燃烧卷烟中应用，尚未见相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法和应用，采用晒黄烟烟杆和甜菜根固定化吸附微生物菌株，对晒黄烟粗粉进行温育水解发酵，再结合连续逆流超声提取，制备晒黄烟叶吸附发酵提取物，该提取物具有天然烟草浓郁本香，带有水果酯香、奶香、烘烤香气，香料品质提高，纯化分离步骤简单，工艺条件温和，提取率和生产效率提高；在传统卷烟、新型加热不燃烧卷烟中加料加香应用，具有天然烟草本香，卷烟香气浓郁醇厚、浓度增加、满足感提高，带有奶香、水果酸香、烘烤香气和喉部回甜感，刺激性降低，口感改善。
本发明通过以下技术方案实现：
一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，包括如下步骤：
(1)原料前处理：晒黄烟烟叶经粉碎机粉碎至40目～120目粉末；
(2)微生物菌株的活化：将扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)和食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus(VJ4-1)的活性固体冻干菌粉，加入到5～10倍质量的灭菌处理的质量浓度为5～30％葡萄糖溶液中，置于35～55℃水浴锅活化30～60min，得到微生物菌株活化液，其中所述的食甲醇芽孢杆菌Bacilus methylotrophicus(VJ4-1)保藏号为CCTCC NO：2012004，分类命名为食甲醇芽孢杆菌Bacillusmethylotrophicus(VJ4-1)，于2012年1月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心；
(3)固定化载体制备：将晒黄烟的烟杆、甜菜根洗净烘干，处理成碎块，高压灭菌后烘干；
(4)微生物菌株的固定化处理：称取上述步骤(3)灭菌烘干后的固定化载体碎块装入容器，按照碎块与活化液质量比为1:1～10加入已培养活化好的微生物菌株活化液，放置于4±0.5℃冷藏柜固定12～36h，过滤得到固定化微生物菌株的碎块；
(5)晒黄烟的吸附固定化发酵：将步骤(1)所得晒黄烟烟叶粉末与5～15倍质量的水混合均匀，加入步骤(4)所述固定化微生物菌株的载体碎块，载体碎块与晒黄烟烟叶粉末质量比为1:0.5～2，在温度为35～55℃，匀速搅拌，添加乳酸调节pH值为4.0～6.0，发酵1～6d，筛网过滤去除载体碎块，微孔过滤晒黄烟粉残渣，保留晒黄烟发酵液A；
(6)连续逆流超声提取：将步骤(5)所得晒黄烟粉残渣，按速率0.1～1.0kg/10min投料至浸出舱，开启主机和超声波发生器，调节温度65～100℃，料液比为质量比1:2～6，从浸出舱低端运行0.2～1h后调节出液阀门均匀放液，控制溶剂加入流量，保持浸出仓液位平衡，连续逆流超声提取达30～60min时，投料加入一定比例的醋酸铜、复合氨基酸，当连续逆流超声提取共达90～150min时，停止生产工艺，排渣，得到浸出液B；
(7)将步骤(5)的发酵液A和步骤(6)的浸出液B合并，得到晒黄烟吸附发酵提取液。
进一步的，还包括步骤(8)：将所述晒黄烟吸附发酵提取液经真空冷冻干燥得到晒黄烟吸附发酵提取物。
进一步的，所述步骤(2)中的活性固体冻干菌粉为食品级，活性为10～30u/mg。
进一步的，所述步骤(3)中的碎块为用剪刀剪成约1cm长的小块，晒黄烟的烟杆和甜菜根的质量比为1:0.5～2。
进一步的，所述步骤(5)中乳酸为食品级，匀速搅拌的转速为20～80rpm。
进一步的，所述步骤(6)中使用的醋酸铜为分析纯，占晒黄烟粉质量0.1～1％，所述复合氨基酸为脯氨酸、缬氨酸、组氨酸的混合，均为食品级，占晒黄烟粉质量的0.5～1.5％，三者之间的质量比为1:0.5～2:0.5～2。
本发明还提供一种上述方法制备的晒黄烟吸附发酵提取液在传统卷烟配方烟丝加料中的应用，将与烟丝0.01～0.08％质量比的晒黄烟吸附发酵提取液和糖分、水混匀，喷洒到制丝加料罐中，按正常卷烟工艺加工成配方烟丝，具有协调卷烟香气，劲头和浓度增加，带有水果酸香、奶香和烘烤香气，喉部有回甜感。
本发明还提供一种上述方法制备的晒黄烟吸附发酵提取物在新型加热不燃烧卷烟烟丝中加香的应用，将该晒黄烟提取物溶解到70％乙醇溶液中，稀释1000倍，按与烟丝0.01～0.1％的质量比加香，卷烟香气浓郁醇厚、浓度增加，带有奶甜清香气、水果清香和烘烤香气，提高满足感。
本发明还提供一种上述方法制备的晒黄烟吸附发酵提取液在新型加热不燃烧卷烟再造烟叶中的应用，将该提取液按0.01～0.5％再造烟叶原料的质量比，添加到加热不燃烧卷烟再造烟叶涂布液中应用，增加新型卷烟的烟香和提高满足感，香气丰富，带有烟香、奶香、水果酸香和烘烤香气，喉部回甜感，刺激性降低，口感改善。
本发明提供的吸附发酵制备的晒黄烟提取物，采用晒黄烟的烟杆、甜菜根碎块作为微生物菌株吸附固定化生物载体，前者是烟草本源物质，后者富含纤维素和糖类物质，牢牢吸附微生物菌株，易与发酵物液过滤分离；晒黄烟叶粉末溶解在水中，与吸附在晒黄烟的烟杆、甜菜根碎块上的微生物菌株的酶体系进行酸性条件下的温育水解发酵，扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsisfibuligera)具有产淀粉酶、β-葡萄糖苷酶、酸性蛋白酶等特性，能够高效降解纤维素、淀粉、纤维二糖、蔗糖等细胞壁大分子物质转化为葡萄糖并进一步转化为酯香为主的香味物质、将非挥发性糖苷转化成挥发性的香气物质，产香产酯除杂味，破坏细胞壁更多地释放细胞中的活性化学物质，提高产率和增加香气自然复杂性；食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus(VJ4-1)具有产β-半乳糖苷酶活性转化非挥发性糖苷为挥发性香气物质、转化细胞壁和游离阿魏酸合成天然香兰素的能力，能分解利用葡萄糖、蔗糖、鼠李糖等糖类物质产醇、酯、酸等香气成分，使晒黄烟发酵提取液中带有香兰素及其香味前体物质等奶香气成分，并破坏细胞壁释放更多有效成分，提高提取率。两种活性菌株发酵构成的复杂酶活力体系，协调强效联合作用，更好地转化非挥发性糖苷为挥发性香气成分，更有效地分解细胞壁中的纤维素、纤维二糖、阿魏酸释放胞内活性成分，降解多糖类物质为小分子成分，释放到发酵液中，经简单过滤即可与带有微生物菌株的固定化载体碎块分离；再结合连续逆流超声溶剂提取晒黄烟发酵物料残渣，工艺条件温和、缩短生产时间、提高生产效率、降低成本，生产过程中添加醋酸酮进一步吸附提取液中残留的杂质如鞣质成分，添加复合氨基酸与晒黄烟发酵提取液中的还原糖，在逆流加热条件下充分进行美拉德增色增香反应。总的来说，使得杂质大分子成分包括蛋白质、多糖、淀粉等分解为香味物质，杂质杂味减少，刺激性降低，香气种类自然复杂性增加，香气品质提高，赋予晒黄烟吸附发酵提取液/物具有天然烟草浓郁本香的同时，还带有自然复合香气包括水果酯香、奶香和烘烤香气，生产工艺条件温和、步骤简单、易操作、成效高、成本低，杂质少，香料品质提升，粉末状易运输、贮存，液状可直接加料应用减少稀释、混匀步骤；在传统卷烟配方烟叶加料和新型加热不燃烧烟草中加香的应用，与烟气协调、风格一致，增强烟草本香、提高满足感，带有奶香、水果香、烘烤香气和喉部回甜感，工艺条件温和易实现，操作步骤简单。
具体实施方式
以下具体实施例对本发明进行详细地说明。
实施例1
一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，包括如下步骤：
(1)原料前处理：晒黄烟烟叶经粉碎机粉碎至40目粉末；
(2)微生物菌株的活化：将扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)和食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus(VJ4-1)的活性固体冻干菌粉(食品级，活性为10u/mg)，加入到5倍质量的灭菌处理的质量浓度为5％葡萄糖溶液中，置于35℃水浴锅活化30min，得到微生物菌株活化液，其中所述的食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus(VJ4-1)保藏号为CCTCC NO：2012004，于2012年1月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心；
(3)固定化载体制备：将晒黄烟的烟杆、甜菜根洗净烘干，用剪刀剪成约1cm长的小块，两者质量比为1:0.5，高压灭菌后烘干；
(4)微生物菌株的固定化处理：称取上述步骤(3)灭菌烘干后的固定化载体碎块装入容器，按照碎块与活化液质量比为1:1加入已培养活化好的微生物菌株活化液，放置于4±0.5℃冷藏柜固定12h，过滤得到固定化微生物菌株的碎块；
(5)晒黄烟的吸附固定化发酵：将步骤(1)所得晒黄烟烟叶粉末与5倍质量的水混合均匀，加入步骤(4)所述固定化微生物菌株的载体碎块，载体碎块与晒黄烟烟叶粉末质量比为1:0.5，在温度为35℃，20rpm匀速搅拌，添加乳酸(食品级)调节pH值为4.0，发酵1d，筛网过滤去除载体碎块，微孔过滤晒黄烟粉残渣，保留晒黄烟发酵液A；
(6)连续逆流超声提取：将步骤(5)所得晒黄烟粉残渣，按速率0.1kg/10min投料至浸出舱，开启主机和超声波发生器，调节温度65℃，料液比为质量比1:2，从浸出舱低端运行0.2h后调节出液阀门均匀放液，控制溶剂加入流量，保持浸出仓液位平衡，连续逆流超声提取达30min时，投料加入一定比例的醋酸铜、复合氨基酸，当连续逆流超声提取共达90min时，停止生产工艺，排渣，得到浸出液B；
(7)将步骤(5)的发酵液A和步骤(6)的浸出液B合并，得到晒黄烟吸附发酵提取液。
进一步的，还包括步骤(8)：将所述晒黄烟吸附发酵提取液经真空冷冻干燥得到晒黄烟吸附发酵提取物。
进一步的，所述步骤(6)中使用的醋酸铜为分析纯，占晒黄烟粉质量0.1％，所述复合氨基酸为脯氨酸、缬氨酸、组氨酸，食品级，占晒黄烟粉质量的0.5％，三者之间的质量比为1:0.5:2。
上述制备的晒黄烟吸附发酵提取液在传统卷烟配方烟丝中加料应用：按0.01％烟丝质量比的晒黄烟吸附发酵提取液和糖分、水混匀，喷洒到制丝加料罐中，按正常卷烟工艺加工成配方烟丝，具有协调卷烟香气，劲头和浓度增加，带有水果酸香、奶香和烘烤香气，喉部有回甜感。
实施例2
一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，包括如下步骤：
(1)原料前处理：晒黄烟烟叶经粉碎机粉碎至80目粉末；
(2)微生物菌株的活化：将扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)和食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus(VJ4-1)的活性固体冻干菌粉(食品级，活性为25u/mg)，加入到8倍质量的灭菌处理的质量浓度为15％葡萄糖溶液中，置于42℃水浴锅活化40min，得到微生物菌株活化液，其中所述的食甲醇芽孢杆菌Bacillusmethylotrophicus(VJ4-1)保藏号为CCTCC NO：2012004，于2012年1月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心；
(3)固定化载体制备：将晒黄烟的烟杆、甜菜根洗净烘干，用剪刀剪成约1cm长的小块，两者质量比为1:0.8，高压灭菌后烘干；
(4)微生物菌株的固定化处理：称取上述步骤(3)灭菌烘干后的固定化载体碎块装入容器，按照碎块与活化液质量比为1:5加入已培养活化好的微生物菌株活化液，放置于4±0.5℃冷藏柜固定24h，过滤得到固定化微生物菌株的碎块；
(5)晒黄烟的吸附固定化发酵：将步骤(1)所得晒黄烟烟叶粉末与8倍质量的水混合均匀，加入步骤(4)所述固定化微生物菌株的载体碎块，载体碎块与晒黄烟烟叶粉末质量比为1:1.3，在温度为42℃，50rpm匀速搅拌，添加乳酸(食品级)调节pH值为5.0，发酵3.5d，筛网过滤去除载体碎块，微孔过滤晒黄烟粉残渣，保留晒黄烟发酵液A；
(6)连续逆流超声提取：将步骤(5)所得晒黄烟粉残渣，按速率0.5kg/10min投料至浸出舱，开启主机和超声波发生器，调节温度85℃，料液比为质量比1:4.5，从浸出舱低端运行0.5h后调节出液阀门均匀放液，控制溶剂加入流量，保持浸出仓液位平衡，连续逆流超声提取达50min时，投料加入一定比例的醋酸铜、复合氨基酸，当连续逆流超声提取共达120min时，停止生产工艺，排渣，得到浸出液B；
(7)将步骤(5)的发酵液A和步骤(6)的浸出液B合并，得到晒黄烟吸附发酵提取液。
(8)将所述晒黄烟吸附发酵提取液经真空冷冻干燥得到晒黄烟吸附发酵提取物。
进一步的，所述步骤(6)中使用的醋酸铜为分析纯，占晒黄烟粉质量0.5％，所述复合氨基酸为脯氨酸、缬氨酸、组氨酸，食品级，占晒黄烟粉质量的0.9％，三者为等质量比。
上述方法制备的晒黄烟吸附发酵提取物在新型加热不燃烧卷烟烟丝中加香应用：将该晒黄烟提取物溶解到70％乙醇溶液中，稀释1000倍，按与烟丝0.02％的质量比加香，卷烟香气浓郁醇厚、浓度增加、满足感提高，带有奶甜清香气、水果清香和烘烤香气，模拟传统卷烟感官效果好。
实施例3
一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，包括如下步骤：
(1)原料前处理：晒黄烟烟叶经粉碎机粉碎至120目粉末；
(2)微生物菌株的活化：将扣囊复膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)和食甲醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus(VJ4-1)的活性固体冻干菌粉(食品级，活性为30u/mg)，加入到10倍质量的灭菌处理的质量浓度为30％葡萄糖溶液中，置于55℃水浴锅活化60min，得到微生物菌株活化液，其中所述的食甲醇芽孢杆菌Bacillusmethylotrophicus(VJ4-1)保藏号为CCTCC NO：2012004，于2012年1月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心；
(3)固定化载体制备：将晒黄烟的烟杆、甜菜根洗净烘干，用剪刀剪成约1cm长的小块，两者质量比为1:2，高压灭菌后烘干；
(4)微生物菌株的固定化处理：称取上述步骤(3)灭菌烘干后的固定化载体碎块装入容器，按照碎块与活化液质量比为1:10加入已培养活化好的微生物菌株活化液，放置于4±0.5℃冷藏柜固定36h，过滤得到固定化微生物菌株的碎块；
(5)晒黄烟的吸附固定化发酵：将步骤(1)所得晒黄烟烟叶粉末与15倍质量的水混合均匀，加入步骤(4)所述固定化微生物菌株的载体碎块，载体碎块与晒黄烟烟叶粉末质量比为1:2，在温度为55℃，80rpm匀速搅拌，添加乳酸(食品级)调节pH值为6.0，发酵6d，筛网过滤去除载体碎块，微孔过滤晒黄烟粉残渣，保留晒黄烟发酵液A；
(6)连续逆流超声提取：将步骤(5)所得晒黄烟粉残渣，按速率1.0kg/10min投料至浸出舱，开启主机和超声波发生器，调节温度100℃，料液比为质量比1:6，从浸出舱低端运行1h后调节出液阀门均匀放液，控制溶剂加入流量，保持浸出仓液位平衡，连续逆流超声提取达60min时，投料加入一定比例的醋酸铜、复合氨基酸，当连续逆流超声提取共达150min时，停止生产工艺，排渣，得到浸出液B；
(7)将步骤(5)的发酵液A和步骤(6)的浸出液B合并，得到晒黄烟吸附发酵提取液。
进一步的，还包括步骤(8)：将所述晒黄烟吸附发酵提取液经真空冷冻干燥得到晒黄烟吸附发酵提取物。
进一步的，所述步骤(6)中使用的醋酸铜为分析纯，占晒黄烟粉质量0.1～1％，所述复合氨基酸为脯氨酸、缬氨酸、组氨酸，食品级，占晒黄烟粉质量的1.5％，三者之间的质量比为1:2:0.8。
上述方法制备的晒黄烟吸附发酵提取液在新型加热不燃烧卷烟再造烟叶中的应用，将该提取液按0.015％再造烟叶原料的质量比，添加到加热不燃烧卷烟再造烟叶涂布液中应用，能增加新型卷烟的烟香和提高满足感，香气丰富，带有烟香、奶香、水果酸香和烘烤香气，喉部回甜感，刺激性降低，口感改善。
试验例1：应用的感官效果对比评价
将实施例1-3吸附发酵制备的晒黄烟提取物与空白对照，在传统烟丝和新型加热不燃烧卷烟中分别进行感官评价对比实验。
结果表明(如表1所示)：本发明吸附发酵制备的晒黄烟提取物在传统卷烟和新型加热不燃烧卷烟中的应用，与烟气协调、保持卷烟风格一致，增强烟草本香、提高满足感，烟香舒适，带有奶香、水果酸香、烘烤香气和回甜感，刺激性降低，口感改善。
表1.马里兰烟叶发酵提取物在卷烟中的感官评价
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。
Claims (8)
1.一种晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)原料前处理：晒黄烟烟叶经粉碎机粉碎至40目～120目粉末；
(2)微生物菌株的活化：将扣囊复膜孢酵母Saccharomycopsis fibuligera和食甲醇芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)VJ4-1的活性固体冻干菌粉，加入到5～10倍质量的灭菌处理的质量浓度为5～30％葡萄糖溶液中，置于35～55℃水浴锅活化30～60min，得到微生物菌株活化液，其中所述的食甲醇芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)VJ4-1保藏号为CCTCC NO：2012004，分类命名为食甲醇芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)VJ4-1，于2012年1月11日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心；
(3)固定化载体制备：将晒黄烟的烟杆、甜菜根洗净烘干，处理成碎块，高压灭菌后烘干；
(4)微生物菌株的固定化处理：称取上述步骤(3)灭菌烘干后的固定化载体碎块装入容器，按照碎块与活化液质量比为1:1～10加入已培养活化好的微生物菌株活化液，放置于4±0.5℃冷藏柜固定12～36h，过滤得到固定化微生物菌株的碎块；
(5)晒黄烟的吸附固定化发酵：将步骤(1)所得晒黄烟烟叶粉末与5～15倍质量的水混合均匀，加入步骤(4)所述固定化微生物菌株的载体碎块，载体碎块与晒黄烟烟叶粉末质量比为1:0.5～2，在温度为35～55℃，匀速搅拌，添加乳酸调节pH值为4.0～6.0，发酵1～6d，筛网过滤去除载体碎块，微孔过滤晒黄烟粉残渣，保留晒黄烟发酵液A；
(6)连续逆流超声提取：将步骤(5)所得晒黄烟粉残渣，按速率0.1～1.0kg/10min投料至浸出舱，开启主机和超声波发生器，调节温度65～100℃，料液比为质量比1:2～6，从浸出舱低端运行0.2～1h后调节出液阀门均匀放液，控制溶剂加入流量，保持浸出仓液位平衡，连续逆流超声提取达30～60min时，投料加入一定比例的醋酸铜、复合氨基酸，当连续逆流超声提取共达90～150min时，停止生产工艺，排渣，得到浸出液B；
(7)将步骤(5)的发酵液A和步骤(6)的浸出液B合并，得到晒黄烟吸附发酵提取液；
所述步骤(6)中使用的醋酸铜为分析纯，占晒黄烟粉质量0.1～1％，所述复合氨基酸为脯氨酸、缬氨酸、组氨酸的混合，均为食品级，占晒黄烟粉质量的0.5～1.5％，三者之间的质量比为1:0.5～2:0.5～2。
2.如权利要求1所述的晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，其特征在于：还包括步骤(8)：将所述晒黄烟吸附发酵提取液经真空冷冻干燥得到晒黄烟吸附发酵提取物。
3.如权利要求1所述的晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的活性固体冻干菌粉为食品级，活性为10～30u/mg。
4.如权利要求1所述的晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的碎块为用剪刀剪成1cm长的小块，晒黄烟的烟杆和甜菜根的质量比为1:0.5～2。
5.如权利要求1所述的晒黄烟提取物的吸附发酵制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中乳酸为食品级，匀速搅拌的转速为20～80rpm。
6.一种如权利要求1所述方法制备的晒黄烟吸附发酵提取液在卷烟配方烟丝加料中的应用，将晒黄烟吸附发酵提取液按与烟丝0.01％的质量比和糖分、水混匀，喷洒到制丝加料罐中。
7.一种如权利要求2所述方法制备的方法制备的晒黄烟吸附发酵提取物在加热不燃烧卷烟烟丝中加香的应用，将该晒黄烟提取物溶解到70％乙醇溶液中，稀释1000倍，按与烟丝0.02％的质量比加香。
8.一种如权利要求1所述方法制备的晒黄烟吸附发酵提取液在加热不燃烧卷烟再造烟叶中的应用，将该提取液按0.015％再造烟叶原料的质量比，添加到加热不燃烧卷烟再造烟叶涂布液中。
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