CN109090697B - 一种混菌发酵烟草的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种混菌发酵烟草的方法，包括以下步骤：将毕赤氏酵母FBKL2.0008和东方伊萨酵母FBKL2.0002菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养24h‑48h，待菌长满试管；将斜面培养的菌种分别在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24h‑48h；种子液制备：将培养得到的毕赤氏酵母的酵母种子液和东方伊萨酵母种子液混合得到混合菌液，毕赤氏酵母种子液占混合菌液的60%‑80%；向烟草中按0.4ml/g加入混合菌液，每隔3d补加无菌水0.2ml/g烟草，置于28℃‑30℃环境培养15‑20d。低温40‑60℃干燥15‑30min，即得。本发明具有玫瑰花香、粉香、蜂蜜样香气且兼具酒香，工艺简单，且不易污染，产品用途广。

Description

一种混菌发酵烟草的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种东方伊萨酵母和毕赤氏酵母发酵烟草的方法。
背景技术
烟叶收采后，需根据其特性及处理传统，进行不同方式的炮制，初步糖化、熟成，进一步处理。烟叶通过发酵处理使烟草的化学成分产生变化，风味变得更柔和，并降低其尼古丁的含量。烟草的新型加工工艺在已经从种植工艺改良转向到烟草风味的研究，目前报道利用分离于烟叶的放线根瘤菌制备的培养液进行烟草灌根和叶面喷洒处理,结果证明,在晾制后期NNN含量明显降低,从而降低TSNA含量；从烟叶叶面和植烟土壤中分离到降解烟碱的微生物菌株,经初筛和复筛后得活性较高的菌株,采用其粗酶液对上部烟叶进行处理,结果表明,经酶液处理可明显减轻杂气和刺激性,抽吸品质得到显著提高；用烟草上分离到的芽抱杆菌四个菌株(其中三株枯草芽抱杆菌),采用单菌或混合菌接种于储藏期烟叶,烟叶香气明显提高；添加米曲霉发酵制备口用型烟草制品烟丝；添加淀粉糖浆和促发酵肽等可以改良烟丝的品质，雪茄茄衣人工发酵是通过添加菊花，绿茶，米酒提高风味及品质等。
具有不同白酒风格特征的卷烟深受欢迎，一般采用直接添加白酒来增香的方法。直接采用白酒产香产酒酵母发酵烟草制备具有白酒风格特征的烟草方法未有报道。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种具有玫瑰花香、粉香、蜂蜜样香气且兼具酒香，工艺简单，且不易污染，产品用途广的发酵烟草的方法。
本发明的一种混菌发酵烟草的方法，包括以下步骤：
(1)斜面培养：将毕赤氏酵母FBKL2.0008(Pichia kudriavzevii FBKL2.0008)和东方伊萨酵母FBKL2.0002(Issatchenkia orientalis)菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养24h-48h，待菌长满试管；
(2)菌种活化：将斜面培养的菌种分别在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24h-48h；
(3)种子液制备：配制液体培养基，115-121℃灭菌20min，然后在超净工作台分别接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养24h-48h；
(4)混合菌液制备：将培养得到的毕赤氏酵母的酵母种子液和东方伊萨酵母种子液混合得到混合菌液，毕赤氏酵母种子液占混合菌液的60％-80％；
(5)烟草发酵：向烟草中按0.4ml/g加入混合菌液，每隔3d补加无菌水0.2ml/g烟草，置于28℃-30℃环境培养15-20d。低温40-60℃干燥15-30min，即得。
上述一种混菌发酵烟草的方法，其中：步骤(5)的烟草发酵步骤可以在烟草进行发酵前切丝得成品，也可以在烟草切丝后再发酵得成品。
上述的一种混菌发酵烟草的方法，其中：斜面培养基为麦芽汁琼脂培养基，成份为麦芽膏粉130g/L，氯霉素0.1g/L，琼脂15g/L，PH5.8-6.2。
上述一种混菌发酵烟草的方法，其中：毕赤氏酵母FBKL2.0008(Pichiakudriavzevii FBKL2.0008)已于2015年6月17日保藏到中国典型培养物保藏中心(地址：中国武汉武汉大学)，保藏号：CCTCC NO：M2015380。
上述一种混菌发酵烟草的方法，其中：东方伊萨酵母FBKL2.0002(Issatchenkiaorientalis FBKL2.0002)已于2018年05月07日保藏到中国典型培养物保藏中心(地址：中国武汉武汉大学)，保藏号：CCTCC NO：M2018251。
本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本发明白酒发酵中毕赤式酵母拥有较强的产乙酸苯乙酯能力，乙酸苯乙酯带玫瑰花香、粉香、蜂蜜样香气，类似苹果样的果香，并带有可可和威士忌样的香韵，高度稀释、淡弱的乙酸苯乙酯香气有“安神”、“镇定”、催眠的作用，东方伊萨酵母具有较强的产酒能力，乙醇含量最高可达挥发性物的60％以上，这些特征可以有明显的增香，有改善吃味和掩盖杂气的作用，给人带来愉悦的感觉。白酒发酵中东方伊萨酵母具有较强的产乙醇的能力，同时也产异戊醇，a-花柏烯等香味物质。烟草采用毕赤氏酵母FBKL2.0008和东方伊萨酵母FBKL2.0002混菌固态发酵所制成的发酵烟草经过GC-MS对成分分析具有安全性，且在发酵过程中高产芳香醇，香味突出，无明显刺激感。利用白酒酿造过程中高产乙酸苯乙酯和高产乙醇的菌株发酵烟叶，得到的产品在香烟的燃烧过程中释放令人愉悦的气味，且产物来自天然发酵，具有无污染，无毒等特点。本发明制备的烟草具有玫瑰花香、粉香、蜂蜜样香气且兼具酒香本发明工艺简单，且不易污染，对生产环境要求不高，生产出的烟草除能加工成卷烟外，还可作为口用型烟草制品，鼻烟等。
具体实施方式
实施例1：
一种混菌发酵烟草的方法，包括以下步骤：
(1)斜面培养：将毕赤氏酵母FBKL2.0008(Pichia kudriavzevii FBKL2.0008)和东方伊萨酵母FBKL2.0002(Issatchenkia orientalis FBKL2.0002)菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养48h，待菌长满试管；
(2)菌种活化：将斜面培养的菌种分别在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24h；
(3)种子液制备：配制液体培养基(麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2)，三角瓶盛装，121℃灭菌20min，然后在超净工作台分别接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养48h；
(4)混合菌液制备：将培养得到的毕赤氏酵母的酵母种子液和东方伊萨酵母种子液混合得到混合菌液，毕赤氏酵母种子液占混合菌液的80％；。
(5)烟草发酵：向烟草中按0.4ml/g加入混合菌液，每隔3d补加无菌水0.2ml/g烟草，置于30℃环境培养15d。低温40℃干燥30min，将发酵后的烟草切烟丝即得。
实施例2：
一种混菌发酵烟草的方法，包括以下步骤：
(1)斜面培养：将毕赤氏酵母FBKL2.0008和东方伊萨酵母FBKL2.0002菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养35h，待菌长满试管；
(2)菌种活化：将斜面培养的菌种分别在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养30h；
(3)种子液制备：配制液体培养基(麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2)，三角瓶盛装，121℃灭菌20min，然后在超净工作台分别接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养38h；
(4)混合菌液制备：将培养得到的毕赤氏酵母的酵母种子液和东方伊萨酵母种子液混合得到混合菌液，毕赤氏酵母种子液占混合菌液的70％；
(5)烟草发酵：向烟丝中按0.4ml/g加入混合菌液，每隔3d补加无菌水0.2ml/g烟草，置于30℃环境培养20d，低温60℃干燥15min即得。
实施例3
一种混菌发酵烟草的方法，包括以下步骤：
(1)斜面培养：将毕赤氏酵母FBKL2.0008(Pichia kudriavzevii)和东方伊萨酵母FBKL2.0002(Issatchenkia orientalis)菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养24h，待菌长满试管；
(2)菌种活化：将斜面培养的菌种分别在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24h；
(3)种子液制备：配制液体培养基(麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,PH5.8-6.2)，三角瓶盛装，121℃灭菌20min，然后在超净工作台分别接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养24h；
(4)混合菌液制备：将培养得到的毕赤氏酵母的酵母种子液和东方伊萨酵母种子液混合得到混合菌液，毕赤氏酵母种子液占混合菌液的60％；。
(5)烟草发酵：向烟丝中按0.4ml/g加入混合菌液，每隔3d补加无菌水0.2ml/g烟草，置于18℃环境培养15d，低温50℃干燥20min。将发酵得到的烟丝通过后续加工与包装得到成品。
所得产品的尼古丁含量及发酵前后挥发成分
Figure BDA0001736649510000041
单料烟感官质量各单项指标计分及定量描述参考表
Figure BDA0001736649510000051
灰色：7.0-9.0为白色，6.0-6.9为白灰，4.0-5.9为灰白，3.0-3.9为灰黑，0-2.9为黑。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (5)

1.一种混菌发酵烟草的方法，包括以下步骤：
（1）斜面培养：将毕赤氏酵母FBKL2.0008(Pichia kudriavzevii FBKL2.0008 )和东方伊萨酵母FBKL2.0002（Issatchenkia orientalis）菌种接种于斜面培养基上，在28℃下培养24h-48h，待菌长满试管；
（2）菌种活化：将斜面培养的菌种分别在麦芽汁琼脂培养基上划线活化，在28℃下培养24h-48h；
（3）种子液制备：配制液体培养基，115-121℃灭菌20min，然后在超净工作台分别接入活化的菌种到液体培养基中，在28℃摇床上培养24h-48h；
（4）混合菌液制备：将培养得到的毕赤氏酵母的酵母种子液和东方伊萨酵母种子液混合得到混合菌液，毕赤氏酵母种子液占混合菌液的60%-80%；
（5）烟草发酵：向烟草中按0.4ml/g加入混合菌液，每隔3d补加无菌水0.2ml/g烟草，置于28℃-30℃环境培养15-20d，
低温40-60℃干燥15-30min，即得。
2.如权利要求1所述的一种混菌发酵烟草的方法，其中：步骤（5）的烟草发酵步骤可以在烟草进行发酵前切丝得成品，也可以在烟草切丝后再发酵得成品。
3.如权利要求1或2所述的一种混菌发酵烟草的方法，其中：斜面培养基为麦芽汁琼脂培养基，成份为麦芽膏粉130g/L，氯霉素0.1g/L，琼脂15g/L，PH5.8-6.2。
4.如权利要求3所述的一种混菌发酵烟草的方法，其中：毕赤氏酵母FBKL2.0008，保藏号：CCTCC NO：M2015380。
5.如权利要求3所述的一种混菌发酵烟草的方法，其中：东方伊萨酵母FBKL2.0002，保藏号：CCTCC NO：M2018251。
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