CN110699342A - 米曲霉lccc30141在生产中性蛋白酶和烟叶发酵中的应用 - Google Patents
米曲霉lccc30141在生产中性蛋白酶和烟叶发酵中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110699342A CN110699342A CN201910912449.8A CN201910912449A CN110699342A CN 110699342 A CN110699342 A CN 110699342A CN 201910912449 A CN201910912449 A CN 201910912449A CN 110699342 A CN110699342 A CN 110699342A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aspergillus oryzae
- fermentation
- lccc30141
- culture
- liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 73
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 73
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 title claims abstract description 71
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 title claims abstract description 71
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 title claims abstract description 40
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 title claims abstract description 40
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 title claims abstract description 32
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 title claims abstract description 32
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 title claims abstract description 32
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 24
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 15
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 12
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 8
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 8
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 7
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims description 3
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- POOYFSLWYLDQMD-UHFFFAOYSA-N heptacalcium;zinc Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Zn+2] POOYFSLWYLDQMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229950000112 serrapeptase Drugs 0.000 description 1
- 108010038132 serratiopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/58—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi
- C12N9/62—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi from Aspergillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A24—TOBACCO; CIGARS; CIGARETTES; SIMULATED SMOKING DEVICES; SMOKERS' REQUISITES
- A24B—MANUFACTURE OR PREPARATION OF TOBACCO FOR SMOKING OR CHEWING; TOBACCO; SNUFF
- A24B15/00—Chemical features or treatment of tobacco; Tobacco substitutes, e.g. in liquid form
- A24B15/18—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes
- A24B15/20—Biochemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Botany (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141在生产中性蛋白酶和烟叶发酵中的应用，米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141能够产生高酶活性的中性蛋白酶，利用米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141生产中性蛋白酶，为中性蛋白酶的生产来源提供了一个新的途径，可以实现中性蛋白酶的规模化生产；将具有产高酶活力的中性蛋白酶的米曲霉应用到烟叶发酵中，能够加速烟叶中蛋白质的分解，明显缩短烟叶的发酵周期，提升烟叶的品质。
Description
技术领域
本发明涉及米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141在生产中性蛋白酶烟叶发酵中的应用，属于微生物应用的技术领域。
背景技术
中性蛋白酶又名沙雷肽酶，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、PH值下，能将动植物中的大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。米曲霉属于曲霉属，黄曲霉群米曲霉种，是我国酿造业的主要菌种，它具有蛋白酶活力高，生长快，适应性强，安全无毒等优点，是生产中性蛋白酶的优良菌株。
目前，烟叶的发酵多数采用自然发酵与人工发酵。自然发酵主要是借助自然气候的变化进行发酵的，它的主要特点是在烟叶贮藏期间，利用一年一度的春季温度上升，促进烟叶内酶的活动，使烟叶经过缓慢的发酵过程，以达到改善烟叶品质的目的。人工发酵是利用人为的适合烟叶内在品质变化的条件(即适宜的温度和湿度)，促使烟叶加快变化的方法。但两种方法均存在发酵进展缓慢的缺陷。
现有技术CN105950481B公开了一种米曲霉Aspergillus oryzae HGD12菌株，该米曲霉HGD12菌株高产蛋白酶，其酸性蛋白酶活大于1000U/g，碱性蛋白酶活大于10000U/g，中性蛋白酶活大于9000U/g，但该菌株主要具有高酶活性的碱性蛋白酶。现有技术中未见利用已有的米曲霉菌株用来生产高活性中性蛋白酶及在烟叶发酵中的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141在生产中性蛋白酶和烟叶发酵中的应用，米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141能够高产中性蛋白酶，十分适用于生产中性蛋白酶和烟叶发酵。
一方面，本发明提供了米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141在生产中性蛋白酶中的应用，米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141能够产生高酶活性的中性蛋白酶，为中性蛋白酶的生产来源提供了一个新的来源。
另一方面，本发明还提供了利用米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141生产中性蛋白酶的方法，该方法包括将米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141进行发酵培养，得粗酶液的步骤。
优选的，所述发酵培养为液体发酵培养或固体发酵培养。
液体发酵培养的条件：接种量为105-107cfu/ml，发酵温度为20～40℃，时间为2～4d，所得发酵液为粗酶液；
优选的，接种量为106cfu/ml，发酵温度为30℃，时间为3d；
优选的，所述发酵培养为通风培养，通风量为1:0.4～0.6V/V·min；
优选的，通风量为1:0.5V/V·min；
优选的，液体发酵培养所用的液体发酵培养基含有：麸皮粉30g/L、酵母膏5g/L、玉米浆10g/L、硫酸铵1g/L、磷酸氢二钠2g/L，pH 6.5-7.0。
优选的，所述固体发酵培养采用三级发酵工艺，具体包括以下步骤：
(1)在斜面PDA培养基上培养米曲霉LCCC30141菌种，得到菌悬浮液；
(2)将菌悬浮液接种于液体菌种培养基上扩大培养，得到种子液；
(3)将种子液以105-107cfu/g接种于固体培养基，温度20～40℃培养2～4d，加入生理盐水浸提后，抽滤，所得滤液为粗酶液；
优选的，PDA培养基含有：土豆200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂15g/L；
和/或液体菌种培养基含有：麸皮粉30g/L、酵母膏5g/L、玉米浆10g/L、硫酸铵1g/L、磷酸氢二钠2g/L，pH 6.5-7.0；
和/或固体培养基含有：麸皮40％、豆粕10％、磷酸氢二钠0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸铵0.2％；
进一步的，该方法还包括在粗酶液中加入硫酸铵沉淀，沉淀溶解后经透析、离心、冷冻干燥后，得酶粉的步骤。
优选的，硫酸铵的饱和度为60～80％；
优选的，离心的温度为0～4℃，转速为5000～8000r/min，时间为10～30min。
另一方面，本发明还提供了米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141或所述的方法在烟叶发酵中的应用。
另一方面，本发明还提供了一种烟叶发酵方法，在烟叶中接种米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141进行发酵。
优选的，米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141的接种量为105～107cfu/g，发酵的温度为20～40℃，湿度为40～70％，时间为5～10d。
本发明的有益效果为：
本发明公开了米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141能够产生高酶活性的中性蛋白酶，为中性蛋白酶的生产来源提供了一个新的途径，可以实现中性蛋白酶的规模化生产；将具有产高酶活力的中性蛋白酶的黑曲霉应用到烟叶发酵中，能够加速烟叶中蛋白质的分解，明显缩短烟叶的发酵周期，提升烟叶的品质。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明，以下实施例仅为方便本领域技术人员理解本发明技术方案，实现或使用本发明所做的说明，并不以此限定本发明的保护范围。
本发明中，如未指定，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。本发明使用的米曲霉(Aspergillus oryzae)菌株购于辽宁省微生物菌种保藏中心，编号为：LCCC30141。
实施例中的方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
实施例1利用米曲霉LCCC30141发酵生产中性蛋白酶
米曲霉LCCC30141液体发酵工艺
综合单因素多水平、多因素多水平正交试验结果，确定米曲霉LCCC30141的液体发酵工艺：
菌种制备：将斜面菌种用无菌水制成孢子悬液，孢子悬液菌数为107cfu/mL。
液体培养基：培养基配方为麸皮粉30g/L、酵母膏5g/L、玉米浆10g/L、硫酸铵1g/L、磷酸氢二钠2g/L，pH 6.5-7.0，培养基装量为罐体容积的75％。
发酵罐培养基灭菌：121℃，2h。
接种：利用火焰圈无菌接种，接种量为10％。
液体培养：培养温度30℃，通风培养60-65h，搅拌速度180rpm，通风量为1:0.5(v/v·min)。
米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141固体发酵工艺
米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141固体发酵工艺采用三级发酵工艺：斜面菌种—液体菌种—固体培养。
(1)斜面菌种：采用PDA培养基，培养72h。
(2)液体菌种：培养基配方为：麸皮粉30g/L、酵母膏5g/L、玉米浆10g/L、硫酸铵1g/L、磷酸氢二钠2g/L，pH 6.5-7.0。
通风培养48-50h，通风量为1:0.5(V/V·min)。
(3)固体培养：培养基配方为：将麸皮与豆粕按4:1比例混匀后，按照1：1的质量加入蒸馏水，每1000g固体培养基中加入磷酸氢二钠1g、硫酸镁0.5g、硫酸铵2g，初始pH值自然。250ml的三角瓶中装入10g。
灭菌：0.1MPa、121℃，灭菌50min；
接种量：108cfu/100g固体培养基；
培养温度：30±2℃；
培养周期：72h。
测得发酵上清液的酶活为：2480U/g。
中性蛋白酶分离纯化
粗酶液的制备
准确称取固体发酵产品，按重量的5倍添加生理盐水，用高效组织捣碎机捣碎搅拌均匀，于40℃恒温振荡器以100r/min速度浸提30min。浸提液用真空过滤泵抽滤，所得滤液即为粗酶液。
中性蛋白酶粗酶制备
采用硫酸铵沉降法。
向2L粗酶液中加入硫酸铵至70％饱和度，4℃放置过夜。离心弃上清液，用预冷的蒸馏水溶解沉淀得溶解液100mL。此溶液4℃下对预冷蒸馏水透析24h，6000r/min、20min离心，得上清液。将此上清液冷冻干燥，得酶粉，酶活力单位大于50000U/g。
实施例2米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141在烟叶发酵中的应用
将米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141接种于烟叶，米曲霉(Aspergillusoryzae)LCCC30141的接种量为105～107cfu/g，发酵的温度为20～40℃，湿度为40～70％，时间为7～14d。
或将实施例1得到的米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141的发酵液或其酶粉添加到烟叶中，用于发酵，加入的发酵液在烟叶中的中性蛋白酶酶活力为10-20U/mg，发酵条件为：温度20～40℃，湿度为40～70％，时间为7～14d。
本发明以2018重庆B4F原烟作为对照组，以加入106cfu/g的米曲霉(Aspergillusoryzae)LCCC30141作为处理组1，或加入制得的15U/mg的中性蛋白酶的酶粉作为处理组2，来发酵烟叶，发酵的温度为30℃，湿度为55％，时间为10d，明显缩短了烟叶的发酵周期，烟叶中各化学成分的变化如表1所示。
由表1可知，加入米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141或中性蛋白酶酶粉后，烟叶中还原糖、硫、木质素有明显的减少，明显改善了烟叶的品质。
表1各处理中烟叶的化学成分
以上所述，仅为本申请的实施例而已，本申请的保护范围并不受这些具体实施例的限制，而是由本申请的权利要求书来确定。对于本领域技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的技术思想和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141在生产中性蛋白酶中的应用。
2.利用米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141生产中性蛋白酶的方法，其特征在于，该方法包括将米曲霉LCCC30141进行发酵培养，得粗酶液的步骤。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养为液体发酵培养或固体发酵培养。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，液体发酵培养的条件：接种量为105-107cfu/ml，发酵温度为20～40℃，时间为2～4d，所得发酵液为粗酶液；
优选的，接种量为106cfu/ml，发酵温度为30℃，时间为3d；
优选的，所述发酵培养为通风培养，通风量为1:0.4～0.6V/V·min；
优选的，通风量为1:0.5V/V·min；
优选的，液体发酵培养所用的液体发酵培养基含有：麸皮粉30g/L、酵母膏5g/L、玉米浆10g/L、硫酸铵1g/L、磷酸氢二钠2g/L，pH 6.5-7.0。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述固体发酵培养采用三级发酵工艺，具体包括以下步骤：
(1)在斜面PDA培养基上培养米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141菌种，得到菌悬浮液；
(2)将菌悬浮液接种于液体菌种培养基上扩大培养，得到种子液；
(3)将种子液以105-107cfu/g接种于固体培养基，温度20～40℃培养2～4d，加入生理盐水浸提后，抽滤，所得滤液为粗酶液；
优选的，PDA培养基含有：土豆200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂15g/L；
和/或液体菌种培养基含有：麸皮粉30g/L、酵母膏5g/L、玉米浆10g/L、硫酸铵1g/L、磷酸氢二钠2g/L，pH 6.5-7.0；
和/或固体培养基含有：麸皮40％、豆粕10％、磷酸氢二钠0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸铵0.2％。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，该方法还包括在粗酶液中加入硫酸铵沉淀，沉淀溶解后经透析、离心、冷冻干燥后，得酶粉的步骤。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，硫酸铵的饱和度为60～80％；
优选的，离心的温度为0～4℃，转速为5000～8000r/min，时间为10～30min。
8.米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141或权利要求2～7任一项所述的方法在烟叶发酵中的应用。
9.一种烟叶发酵方法，其特征在于，在烟叶中接种米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141进行发酵。
10.根据权利要求9所述的烟叶发酵方法，其特征在于，米曲霉(Aspergillus oryzae)LCCC30141的接种量为105～107cfu/g，发酵的温度为20～40℃，湿度为40～70％，时间为5～10d。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910912449.8A CN110699342A (zh) | 2019-09-25 | 2019-09-25 | 米曲霉lccc30141在生产中性蛋白酶和烟叶发酵中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910912449.8A CN110699342A (zh) | 2019-09-25 | 2019-09-25 | 米曲霉lccc30141在生产中性蛋白酶和烟叶发酵中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110699342A true CN110699342A (zh) | 2020-01-17 |
Family
ID=69196799
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910912449.8A Pending CN110699342A (zh) | 2019-09-25 | 2019-09-25 | 米曲霉lccc30141在生产中性蛋白酶和烟叶发酵中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110699342A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110616153A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-27 | 内蒙古昆明卷烟有限责任公司 | 康宁木霉lccc30119在生产纤维素酶和烟叶发酵中的应用 |
| CN110699338A (zh) * | 2019-09-25 | 2020-01-17 | 内蒙古昆明卷烟有限责任公司 | 黑曲霉lccc30112在生产葡萄糖淀粉酶和烟叶发酵中的应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103013844A (zh) * | 2012-12-20 | 2013-04-03 | 山东隆科特酶制剂有限公司 | 一株高产中性蛋白酶的米曲霉菌株及其液体发酵方法 |
| CN105950481A (zh) * | 2016-05-30 | 2016-09-21 | 湖北工业大学 | 一株米曲霉菌株及其产生的蛋白酶应用于酵母抽提物生产 |
| CN109090697A (zh) * | 2018-07-19 | 2018-12-28 | 贵州大学 | 一种混菌发酵烟草的方法 |
| CN109984371A (zh) * | 2019-05-10 | 2019-07-09 | 南宁雄晋生物科技有限公司 | 一种烟叶的生物醇化方法 |
-
2019
- 2019-09-25 CN CN201910912449.8A patent/CN110699342A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103013844A (zh) * | 2012-12-20 | 2013-04-03 | 山东隆科特酶制剂有限公司 | 一株高产中性蛋白酶的米曲霉菌株及其液体发酵方法 |
| CN105950481A (zh) * | 2016-05-30 | 2016-09-21 | 湖北工业大学 | 一株米曲霉菌株及其产生的蛋白酶应用于酵母抽提物生产 |
| CN109090697A (zh) * | 2018-07-19 | 2018-12-28 | 贵州大学 | 一种混菌发酵烟草的方法 |
| CN109984371A (zh) * | 2019-05-10 | 2019-07-09 | 南宁雄晋生物科技有限公司 | 一种烟叶的生物醇化方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 何沛等: "微生物在烟草中的研究、开发与利用进展", 《湖北农业科学》 * |
| 黄芳一等: "《发酵工程》", 31 May 2019, 武汉：华中师范大学出版社 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110616153A (zh) * | 2019-09-25 | 2019-12-27 | 内蒙古昆明卷烟有限责任公司 | 康宁木霉lccc30119在生产纤维素酶和烟叶发酵中的应用 |
| CN110699338A (zh) * | 2019-09-25 | 2020-01-17 | 内蒙古昆明卷烟有限责任公司 | 黑曲霉lccc30112在生产葡萄糖淀粉酶和烟叶发酵中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110699342A (zh) | 米曲霉lccc30141在生产中性蛋白酶和烟叶发酵中的应用 | |
| CN107557407B (zh) | 一种调控裂褶菌发酵产物裂褶多糖分子量的方法 | |
| CN110923281B (zh) | 一种食用菌多糖提取方法、食用菌多糖、食用菌饮料 | |
| CN110184200B (zh) | 一种高产绣球菌菌丝体发酵培养基及制备方法 | |
| CN111248026A (zh) | 一种栎松茸培养基及其应用 | |
| CN113293110B (zh) | 一种抗菌脂肽类化合物的制备方法 | |
| CN112522118A (zh) | 杂色曲霉在制备单宁酶和降解单宁中的应用 | |
| US3398055A (en) | Separation and purification of cellulase | |
| SU611596A3 (ru) | Способ получени фермента -1,6 глюкозидазы | |
| CN109258296B (zh) | 一种高产黑木耳多糖的半连续深层发酵工艺 | |
| Elisashvili et al. | Extracellular polysaccharide production by culinary-medicinal Shiitake mushroom Lentinus edodes (Berk.) Singer and Pleurotus (Fr.) P. Karst. species depending on carbon and nitrogen source | |
| CN108207492B (zh) | 一种木腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用 | |
| CN110616210A (zh) | 地衣芽孢杆菌LCCC10161在生产α-淀粉酶和烟叶发酵中的应用 | |
| US3594284A (en) | Lysostaphin fermentation with accelerated time cycle | |
| CN110616153A (zh) | 康宁木霉lccc30119在生产纤维素酶和烟叶发酵中的应用 | |
| CN111088292A (zh) | 一种可提高可可球二孢菌色素产量和生长速度的分段式培养方法 | |
| CN114591847A (zh) | 一种提高虫草素含量的蛹虫草菌培养基组合物、液体发酵方法及虫草素制备方法 | |
| CN104711208B (zh) | 一种具有高的淀粉分解能力的乳酸菌 | |
| CN110699338A (zh) | 黑曲霉lccc30112在生产葡萄糖淀粉酶和烟叶发酵中的应用 | |
| CN106348884A (zh) | 含有巨大芽孢杆菌和腐植酸的液体水溶肥的生产方法 | |
| CN113215040A (zh) | 一种5406放线菌固体发酵培养基及发酵方法 | |
| CN112515008A (zh) | 一种通过黑曲霉真菌提高红茶品质的方法 | |
| CN111642326A (zh) | 一种杏鲍菇液体菌种的母种培养方法 | |
| CN117467725B (zh) | 一种高核苷含量的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉发酵生产工艺 | |
| CN110628734A (zh) | 毛栓菌lccc50416在生产漆酶和烟叶发酵中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200117 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |