CN105950481A - 一株米曲霉菌株及其产生的蛋白酶应用于酵母抽提物生产 - Google Patents
一株米曲霉菌株及其产生的蛋白酶应用于酵母抽提物生产 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105950481A CN105950481A CN201610371279.3A CN201610371279A CN105950481A CN 105950481 A CN105950481 A CN 105950481A CN 201610371279 A CN201610371279 A CN 201610371279A CN 105950481 A CN105950481 A CN 105950481A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aspergillus oryzae
- hgd12
- protease
- yeast extract
- yeast
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 title claims abstract description 39
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 title claims abstract description 37
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 title claims abstract description 30
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims abstract description 26
- 239000004365 Protease Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 title claims abstract description 22
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 22
- 108091005508 Acid proteases Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 14
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 claims description 8
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 claims description 8
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 8
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 claims description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 7
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 claims 1
- XYIBRDXRRQCHLP-UHFFFAOYSA-N ethyl acetoacetate Chemical compound CCOC(=O)CC(C)=O XYIBRDXRRQCHLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 abstract description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 abstract description 4
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 abstract description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 3
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 abstract description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 abstract description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 abstract description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 abstract description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 4
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 3
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 2
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000019264 food flavour enhancer Nutrition 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000021474 generally recognized As safe (food) Nutrition 0.000 description 1
- 235000021473 generally recognized as safe (food ingredients) Nutrition 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002366 mineral element Substances 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 235000013555 soy sauce Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 235000021404 traditional food Nutrition 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/66—Aspergillus
- C12R2001/69—Aspergillus oryzae
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/58—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi
- C12N9/62—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi from Aspergillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Botany (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一株高产蛋白酶米曲霉菌株及其产生的蛋白酶在酵母抽提物生产中的应用，属于微生物技术领域。所述的米曲霉Aspergillus oryzae HGD12菌株已于2016年05月03日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2016243，该米曲霉HGD12菌株高产蛋白酶，其酸性蛋白酶活大于1000 U/g，碱性蛋白酶活大于10000 U/g，中性蛋白酶活大于9000 U/g。将米曲霉HGD12菌株产蛋白酶用于面包酵母生产酵母抽提物，可明显增加酵母抽提物产品中鲜味氨基酸含量，其中谷氨酸含量大于6.5%、天冬氨酸含量大于3.0%、丙氨酸含量大于5.0%、甘氨酸含量大于1.0%，可明显改善酵母抽提物的调味功能。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵领域，具体涉及一株高产蛋白酶的米曲霉菌株HGD12及其产生的蛋白酶在酵母抽提物生产中的应用。
背景技术
酵母抽提物（Yeast extract）又称酵母味素，是以蛋白质含量丰富的食用酵母细胞为原料，经过细胞自溶或酶解工艺，将酵母细胞内的蛋白质、核酸等进行降解，并进一步通过离心、浓缩、干燥等加工处理，制备成的营养性鲜味剂和风味增强剂。其主要成分包括多肽、游离氨基酸、核苷酸以及少量B族维生素和矿物元素等，其中的呈味氨基酸，如谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、甘氨酸等可赋予酵母抽提物的特殊鲜味。酵母抽提物的生产涉及酵母菌种选育、酶解工艺、浓缩与干燥等技术，其中蛋白酶酶解工艺是其生产中的关键一环，是决定酵母抽提物品质的主要工艺。
很多微生物都可以产生蛋白酶，但生产调味品用蛋白酶的微生物必须是安全的。因此，食品用蛋白酶生产菌株应限于传统食品加工用微生物和确认无害的微生物菌株。米曲霉（Aspergillus oryzae）属半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、从梗孢科，是曲霉属真菌中的一个常见种。它是一种好氧微生物，能够自身分泌多种酶，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶等，其中最主要的是蛋白酶。米曲霉在食品、饲料、酱油、酿酒等食品发酵行业广泛应用，已有1000多年的安全生产历史，已被美国FDA和WHO认定为安全生产菌株（GRAS）。
发明内容
本发明的目的之一是提供一株高产蛋白酶的米曲霉菌株HGD12（Aspergillus oryzae HGD12），保藏编号：CCTCC NO：M 2016243，保藏时期：2016年05月03日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武昌珞珈山武汉大学。
米曲霉菌株HGD12菌落呈圆形，质地疏松，菌落生长初期小、白色、圆形，随着菌落的逐渐长大，白色范围也逐渐扩大，菌丝层变厚，菌落的中心开始着生浅黄绿色的孢子，然后浅黄绿色逐步向四周扩散；菌落成熟后孢子呈黄绿色，孢子粗壮，菌丝层厚。
本发明的目的之二是提供米曲霉菌株HGD12产生的蛋白酶，该蛋白酶生产方法如下：
（1）将斜面上的米曲霉HGD12接种2-3环到麸皮培养基（培养基配方为：麸皮100份，水100份）中，30℃培养2 d，得到种曲孢子；
（2）将培养好的步骤（1）种曲孢子按照质量浓度0.25-1.0%的接种量接种到发酵培养基（发酵培养基配方为：麸皮80份，豆粕粉20份，水100份）中，混合均匀，培养温度30℃，培养时间2-3 d；
（3）按照1∶50（w/v）的料液比，将10-30 mmol/L 磷酸缓冲液（pH7.0-7.4）加入步骤（2）已发酵好的培养基内，30-40℃浸提1-2 h，搅拌，过滤，得上清液，上清液用质量体积浓度40-50%的(NH4)2SO4溶液盐析，弃上清，用与上述等量的10-30 mmol/L磷酸缓冲液溶解沉淀，制得米曲霉菌株HGD12的蛋白酶粗酶液。
本发明的目的之三是将米曲霉菌株HGD12产生的蛋白酶用于酵母抽提物的生产中，具体步骤如下：
（1）配制质量体积浓度12-18%%的面包酵母乳，添加体积浓度0.5-1%的促溶剂，促溶剂为乙酸乙酯或食盐，调pH到5.0左右，温度50-60℃，自溶6-8 h，得酵母自溶液；
（2）调节步骤（1）的酵母自溶液pH为5-8，加入体积浓度1-3%的米曲霉HGD12粗酶液，控制温度，酶解6-10 h，得酶解液；
（3）按照酵母抽提物常规生产方法，灭酶，高速离心，浓缩，干燥，得到酵母抽提物产品。
与现有技术相比，本发明具有以下的有益效果: 本发明提供了一株高效米曲霉HGD12菌株，具有较高的蛋白酶酶活，将米曲霉HGD12产蛋白酶用于酵母生产酵母抽提物，可明显增加酵母抽提物中鲜味氨基酸的含量，改善酵母抽提物的调味功能，并提高氨基氮含量和酵母抽提物得率。
附图说明
图1为米曲霉菌株HGD12的菌落形态图。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步描述，但本发明的内容不仅仅局限于实施例所述的范围，凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1：米曲霉HGD12菌落形态
米曲霉菌株HGD12从农家自酿豆酱中，经过大量的复壮、分离、纯化获得。
米曲霉菌株HGD12菌落呈圆形，质地疏松，菌落生长初期小、白色、圆形，随着菌落的逐渐长大，白色范围也逐渐扩大，菌丝层变厚，菌落的中心开始着生浅黄绿色的孢子，然后浅黄绿色逐步向四周扩散；菌落成熟后孢子呈黄绿色，孢子粗壮，菌丝层厚，如图1。
实施例2：米曲霉菌株HGD12产蛋白酶制备
（1）将活化好的斜面米曲霉HGD12接种3环到麸皮培养基（麸皮100份，水100份）中，30℃培养2 d，得到种曲孢子；
（2）将步骤（1）培养好的种曲孢子按照质量浓度0.5%的接种量接种到发酵培养基（麸皮80份，豆粕粉20份，水100份）中，混合均匀，培养温度30℃，培养时间48 h；
（3）按照发酵培养基与磷酸缓冲液的重量体积比1:50加入20 mmol/L 磷酸缓冲液（pH7.4）到已发酵好的步骤（2）的培养基内，40℃浸提1 h，搅拌，过滤，得上清液，上清液用质量体积浓度40%的(NH4)2SO4溶液盐析，弃上清，再用20 mmol/L磷酸缓冲液（pH7.4）溶解沉淀，得米曲霉菌株HGD12的蛋白酶粗酶液；
（4）采用福林-酚法测定蛋白酶活力，在pH为3.0的乳酸-乳酸钠缓冲溶液体系中测得米曲霉HGD12菌株酸性蛋白酶活大于1000 U/g（发酵基质）；在pH为10.0的硼砂-氢氧化钠缓冲溶液体系中测得米曲霉HGD12菌株碱性蛋白酶活大于10000 U/g（发酵基质）；在pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液体系中测得米曲霉HGD12菌株中性蛋白酶活大于9000 U/g（发酵基质）。
实施例3：米曲霉菌株HGD12产酸性蛋白酶在酵母抽提物生产中的应用
（1）配制质量体积浓度15%的面包酵母乳，添加体积浓度0.5%的促溶剂，促溶剂为乙酸乙酯，调pH到5.0，温度55℃，自溶8 h，得酵母自溶液；
（2）调节步骤（1）的酵母自溶液pH到5.5，加入体积浓度2.0 %米曲霉HGD12粗酶液，温度55℃，酶解10 h，得酶解液；
（3）按照酵母抽提物常规生产方法，灭酶，高速离心，浓缩，干燥，得到酵母抽提物产品。
（4）品质检测：酵母抽提物得率58%（w/w），产品中氨基氮含量5.18%（w/w），其中谷氨酸含量6.4%（w/w）、天冬氨酸含量2.1%（w/w）、丙氨酸含量5.2%（w/w）、甘氨酸含量0.9%（w/w）。
实施例4：米曲霉菌株HGD12产碱性蛋白酶在酵母抽提物生产中的应用
（1）配制质量体积浓度15%的面包酵母乳，添加体积浓度0.5%的促溶剂，促溶剂为乙酸乙酯，调pH到5.0，温度55℃，自溶8 h，得酵母自溶液；
（2）调节步骤（1）的酵母自溶液pH到8.0，加入体积浓度1.0 %米曲霉HGD12粗酶液，温度37℃，酶解8 h，得酶解液；
（3）按照酵母抽提物常规生产方法，灭酶，高速离心，浓缩，干燥，得到酵母抽提物产品；
（4）品质检测：酵母抽提物得率54%（w/w），产品中氨基氮含量5.21%（w/w），其中谷氨酸含量6.5%（w/w）、天冬氨酸含量3.1%（w/w）、丙氨酸含量5.2%（w/w）、甘氨酸含量1.0%（w/w）。
Claims (2)
1.一株米曲霉菌株，其特征在于：该菌株为米曲霉Aspergillus oryzae HGD12，已于2016年05月03日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2016243，所述的米曲霉Aspergillus oryzae HGD12高产蛋白酶，其酸性蛋白酶活大于1000U/g，碱性蛋白酶活大于10000U/g，中性蛋白酶活大于9000U/g。
2.一种如权利要求1所述的一株米曲霉HGD12菌株产生的蛋白酶在酵母抽提物生产中的应用，包括如下步骤：
(1)将斜面上的米曲霉HGD12接种到麸皮培养基中，30℃培养2d，得种曲孢子；
(2)将步骤(1)的种曲孢子按照质量浓度0.25-1.0％的接种量接种到发酵培养基中，混合均匀，培养温度30℃，培养时间2-3d；
(3)按照发酵培养基与磷酸缓冲液的重量体积比1:50将10-30mmol/L磷酸缓冲液加入步骤(2)的培养基内，30-40℃浸提1-2h，搅拌，过滤，得上清液，上清液用质量体积浓度40-50％的(NH4)2SO4溶液盐析，弃上清，再用10-30mmol/L磷酸缓冲液溶解沉淀，制得米曲霉菌株HGD12的蛋白酶粗酶液；
(4)配制质量体积浓度12-18％的酵母乳，添加体积浓度0.5-1％的促溶剂，促溶剂为乙酸乙酯或食盐，调pH到5.0左右，温度50-60℃，自溶6-8h，得酵母自溶液；
(5)调节步骤(4)的酵母自溶液pH为5-8，加入体积浓度1-3％的米曲霉HGD12粗酶液，控制温度，酶解6-10h，得酶解液；
(6)按照酵母抽提物常规生产方法，灭酶，高速离心，浓缩，干燥，得到酵母抽提物产品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610371279.3A CN105950481B (zh) | 2016-05-30 | 2016-05-30 | 一株米曲霉菌株及其产生的蛋白酶应用于酵母抽提物生产 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610371279.3A CN105950481B (zh) | 2016-05-30 | 2016-05-30 | 一株米曲霉菌株及其产生的蛋白酶应用于酵母抽提物生产 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105950481A true CN105950481A (zh) | 2016-09-21 |
| CN105950481B CN105950481B (zh) | 2019-05-03 |
Family
ID=56910068
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610371279.3A Active CN105950481B (zh) | 2016-05-30 | 2016-05-30 | 一株米曲霉菌株及其产生的蛋白酶应用于酵母抽提物生产 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105950481B (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107022493A (zh) * | 2017-03-24 | 2017-08-08 | 江苏天种牧业股份有限公司 | 一种高产饲用复合酶的米曲霉菌株及其应用 |
| CN107594451A (zh) * | 2017-08-30 | 2018-01-19 | 珠海天香苑生物科技发展股份有限公司 | 米曲霉制备酵母抽提物的方法 |
| CN108179118A (zh) * | 2018-03-22 | 2018-06-19 | 江南大学 | 一株降解醇溶蛋白的米曲霉及其应用 |
| CN110699342A (zh) * | 2019-09-25 | 2020-01-17 | 内蒙古昆明卷烟有限责任公司 | 米曲霉lccc30141在生产中性蛋白酶和烟叶发酵中的应用 |
| CN110885762A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-03-17 | 鹤山市东古调味食品有限公司 | 一种米曲霉发酵液的制备方法 |
| CN111607524A (zh) * | 2019-02-22 | 2020-09-01 | 科丝美诗株式会社 | 一种米曲霉菌株及包含其发酵产物的用于改善皮肤状态的组合物 |
| CN113293105A (zh) * | 2021-05-31 | 2021-08-24 | 广东海天创新技术有限公司 | 一株米曲霉za173及其应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101144060A (zh) * | 2007-04-25 | 2008-03-19 | 浙江省农业科学院 | 可高产中性蛋白酶的米曲霉菌株及其在固态基质上的发酵方法 |
| CN101942396A (zh) * | 2010-09-06 | 2011-01-12 | 华南理工大学 | 米曲霉hg76及其应用 |
| CN102115734A (zh) * | 2010-12-13 | 2011-07-06 | 南宁庞博生物工程有限公司 | 酵母水解专用复合酶及其制备方法 |
| CN103013844A (zh) * | 2012-12-20 | 2013-04-03 | 山东隆科特酶制剂有限公司 | 一株高产中性蛋白酶的米曲霉菌株及其液体发酵方法 |
-
2016
- 2016-05-30 CN CN201610371279.3A patent/CN105950481B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101144060A (zh) * | 2007-04-25 | 2008-03-19 | 浙江省农业科学院 | 可高产中性蛋白酶的米曲霉菌株及其在固态基质上的发酵方法 |
| CN101942396A (zh) * | 2010-09-06 | 2011-01-12 | 华南理工大学 | 米曲霉hg76及其应用 |
| CN102115734A (zh) * | 2010-12-13 | 2011-07-06 | 南宁庞博生物工程有限公司 | 酵母水解专用复合酶及其制备方法 |
| CN103013844A (zh) * | 2012-12-20 | 2013-04-03 | 山东隆科特酶制剂有限公司 | 一株高产中性蛋白酶的米曲霉菌株及其液体发酵方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李诗雯: "米曲梅蛋白酶系系统水解大豆蛋白的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库(电子期刊)工程科技辑》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107022493A (zh) * | 2017-03-24 | 2017-08-08 | 江苏天种牧业股份有限公司 | 一种高产饲用复合酶的米曲霉菌株及其应用 |
| CN107594451A (zh) * | 2017-08-30 | 2018-01-19 | 珠海天香苑生物科技发展股份有限公司 | 米曲霉制备酵母抽提物的方法 |
| CN108179118A (zh) * | 2018-03-22 | 2018-06-19 | 江南大学 | 一株降解醇溶蛋白的米曲霉及其应用 |
| CN111607524A (zh) * | 2019-02-22 | 2020-09-01 | 科丝美诗株式会社 | 一种米曲霉菌株及包含其发酵产物的用于改善皮肤状态的组合物 |
| CN111607524B (zh) * | 2019-02-22 | 2024-03-26 | 科丝美诗株式会社 | 一种米曲霉菌株及包含其发酵产物的用于改善皮肤状态的组合物 |
| CN110699342A (zh) * | 2019-09-25 | 2020-01-17 | 内蒙古昆明卷烟有限责任公司 | 米曲霉lccc30141在生产中性蛋白酶和烟叶发酵中的应用 |
| CN110885762A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-03-17 | 鹤山市东古调味食品有限公司 | 一种米曲霉发酵液的制备方法 |
| CN113293105A (zh) * | 2021-05-31 | 2021-08-24 | 广东海天创新技术有限公司 | 一株米曲霉za173及其应用 |
| CN113293105B (zh) * | 2021-05-31 | 2022-08-23 | 广东海天创新技术有限公司 | 一株米曲霉za173及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105950481B (zh) | 2019-05-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105950481B (zh) | 一株米曲霉菌株及其产生的蛋白酶应用于酵母抽提物生产 | |
| US8361778B2 (en) | Composition comprising enzymatically digested yeast cells and method of preparing same | |
| CN101748153B (zh) | 利用高产富硒功能杂交红米米糠自发酵液生产松茸多糖 | |
| KR101440363B1 (ko) | 단기숙성 양조간장액의 제조방법 | |
| CN107022493B (zh) | 一种高产饲用复合酶的米曲霉菌株及其应用 | |
| CN111248409A (zh) | 一种低盐豆瓣酱发酵方法 | |
| CN101948820A (zh) | 酸性蛋白酶及其制备方法 | |
| CN101831416B (zh) | 一种普鲁兰酶及其生产方法 | |
| CN104543940A (zh) | 一种淡色酱油的酿造方法 | |
| CN106376914A (zh) | 一种利用松茸深层发酵菌丝体制备松茸精粉的方法 | |
| CN116656565B (zh) | 一种地衣芽孢杆菌及其应用 | |
| CN110747188B (zh) | 一种生产角蛋白酶的方法 | |
| CN108342292A (zh) | 一种利用传统玫瑰醋米醅曲深层发酵生产米醋的方法 | |
| CN109938322B (zh) | 一株米曲霉za122及其应用 | |
| CN104082523A (zh) | 一种植物蛋白多肽粉的制作方法 | |
| CN111733086A (zh) | 一种米曲霉及其在酱油酿造中的应用 | |
| CN104250618B (zh) | 一种高产糖化酶、α‑淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其应用 | |
| CN110583932A (zh) | 一种发酵型玉米胚芽粕饮料的制备方法 | |
| CN106360614A (zh) | 一种利用美味牛肝菌深层发酵菌丝体制备美味牛肝菌精粉的方法 | |
| CN106035985A (zh) | 一种混菌液态发酵黄酒加工废弃物生产单细胞蛋白的方法 | |
| CN110747128B (zh) | 一株高产角蛋白酶的地衣芽孢杆菌菌株及其应用 | |
| CN104711208A (zh) | 一种具有高的淀粉分解能力的乳酸菌 | |
| CN116875505B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌mmb-02及其在发酵条斑紫菜制备抗氧化肽的应用 | |
| Dhingra et al. | Enzymes in Food Industry and Their Regulatory Oversight | |
| JP2010017116A (ja) | 麹を用いた有機酸製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |