CN105713847B - 一种黄绿木霉菌株及用其制备三七花烟用香料的方法 - Google Patents

一种黄绿木霉菌株及用其制备三七花烟用香料的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105713847B
CN105713847B CN201610240772.1A CN201610240772A CN105713847B CN 105713847 B CN105713847 B CN 105713847B CN 201610240772 A CN201610240772 A CN 201610240772A CN 105713847 B CN105713847 B CN 105713847B
Authority
CN
China
Prior art keywords
sanchi flower
trichoderma aureoviride
bacterial strain
tobacco aromaticss
hlmm
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610240772.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN105713847A (zh
Inventor
张翼鹏
者为
段焰青
刘亚
李源栋
陈兴
刘秀明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Tobacco Yunnan Industrial Co Ltd
Original Assignee
China Tobacco Yunnan Industrial Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Tobacco Yunnan Industrial Co Ltd filed Critical China Tobacco Yunnan Industrial Co Ltd
Priority to CN201610240772.1A priority Critical patent/CN105713847B/zh
Publication of CN105713847A publication Critical patent/CN105713847A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN105713847B publication Critical patent/CN105713847B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/885—Trichoderma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B9/00—Essential oils; Perfumes

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种黄绿木霉菌株及用其制备三七花烟用香料的方法。所述菌株为黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM‑04 CGMCC No.10839，具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力。将菌株通过活化、发酵、过滤、透析制得纤维素酶粗酶液，用于发酵三七花，再经提取、过滤、减压浓缩制成烟用香料。HLMM‑04菌株的最适产酶条件为培养基初始pH为6.5，培养温度为28℃，培养时间为5d。卷烟加香结果表明，所制备的香料具有明显的三七花特征香气，杂气降低，口感更醇和，生津、提升喉部舒适性作用明显。

Description

一种黄绿木霉菌株及用其制备三七花烟用香料的方法
技术领域
本发明属于微生物发酵及其应用领域，具体涉及一株黄绿木霉新菌株HLMM-04，同时，本发明还涉及利用该菌株制备三七花烟用香料的方法。
背景技术
加香加料是卷烟工艺中的关键环节，是有效提升卷烟抽吸品质，形成卷烟特有风格的有效手段之一。目前我国烟草中添加的烟用香料大多是采用传统方法萃取再加以调配所得，虽然生产操作简单，但也存在香气单调、改善卷烟抽吸效果不明显等缺点。利用微生物对香原料进行发酵可以增加传统提取香料中多种香气物质的含量，提升香气丰富性，进而生产出香气丰富、高品质的卷烟，满足消费者对卷烟品质的要求。
三七为我国传统名贵中药材，三七花是三七全株中三七皂甙含量最高的部分，性味甘凉，呈半球形、球形或伞形。具有降血压，降血脂，减肥，生津止渴，提神补气、抗癌，提高心肌供氧能力，增强机体免疫力等功效。含有人参多种皂甙、平清热肝、降压功效、防治高血压和咽炎。清热解毒、去痘除疮、平肝凉血、降压降脂，三七花性凉味甘，有清热、平肝、降压的功效。三七花总皂甙对中枢神经系统呈抑制作用，表现为镇静、安神功效。用于高血压，头昏、目眩、耳鸣，急性咽喉炎的治疗。
木霉菌(Trichoderma spp.)广泛分布于自然界，在腐木、种籽、植物残体、有机肥、土壤和空气中尤多。木霉菌生长营养要求简单，生长速度快，对于工业化生产十分有利。黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)为木霉属的一种，作为一种重要的生防因子，对植物病原的拮抗作用具有广谱性、多制性，还能产生多种酶类分解土壤中的动植物残体，增加土壤肥力。已有对黄绿木霉的报道多集中在土壤改良、生物防治及生物肥料等方面。现有技术中尚未见将黄绿木霉用于三七花发酵制备烟用香料的报道。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一株黄绿木霉新菌株，该菌株具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力。
本发明的目的还在于提供一种利用该菌株发酵三七花制备烟用香料的方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现。
除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。
一种黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM-04菌株，CGMCC No.10839，其具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力。
利用所述菌株制备烟用香料的方法，包括以下步骤：
(1)将黄绿木霉HLMM-04CGMCC No.10839菌株活化两次后，接种于装有200mL PDA液体培养基的三角瓶中，在20～35℃，180rpm下发酵培养1～7d；所述的PDA液体培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，补蒸馏水至1L，pH5.5～8.5，115℃高压灭菌15min；
(2)发酵液过滤去除菌体，取上清液缓慢加入硫酸氨至80％饱和度，4℃下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于2mL缓冲液中，再用缓冲液进行透析，得到粗酶液；所述的缓冲液为：0.02mol/L Na2HPO4-NaH2PO4，pH 7.3；
(3)将三七花破碎后加入两倍重量的水，混合均匀，调pH至6.0；加入黄绿木霉HLMM-04粗酶液，发酵，粗酶液添加量为三七花质量的5％～20％，发酵温度为30℃，发酵时间2～5h；回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得所需烟用香料。
进一步的，为防止香料变质，按烟用香料重量的5％添加丙二醇。
步骤(1)中最适宜的产酶条件为初始pH 6.5，培养温度28℃，培养时间5d。
相对于现有技术，本发明具有以下优点：
(1)本发明首次将黄绿木霉应用于烟用香料制备领域。采用黄绿木霉HLMM-04菌株发酵液处理三七花，与未处理对照相比，在原有三七花提取物特征保持的同时，生津感增加，口腔残留减少，喉部舒适性提升。
(2)本发明成本低廉，操作简单，便于实现大规模工业化生产，应用前景良好。
保藏生物材料的说明
本发明的菌株，已于2015年5月22日，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCG)；该中心地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。该菌株分类命名为黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM-04，保藏号为CGMCC No.10839。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步的详细说明，但实施例并不是对本发明技术方案的限定。
实施例1
1、黄绿木霉HLMM-04菌株的适宜产酶条件
1.1培养基初始pH对HLMM-04菌株产酶的影响
将液体培养基的pH分别调到5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5，在28℃、120rpm下振荡培养3天后，测定纤维素酶活，表明最适宜的初始pH为6.5。
1.2培养温度对HLMM-04菌株产酶的影响
将接种后的液体发酵培养基分别置于20℃、25℃、28℃、32℃、35℃下，120r/min振荡培养3d后，测定纤维素酶活，表明最适宜的培养温度为28℃。
1.3培养时间对HLMM-04菌株产酶的影响
将接种好的液体培养基(pH 6.5)置于恒温恒湿箱中，28℃，120r/min振荡培养，每24h测定一次纤维素酶活，培养到第5天时纤维素酶活达到最大值。
2、黄绿木霉HLMM-04粗酶液制备方法
根据以上优化结果，将黄绿木霉HLMM-04菌株活化两次后，接种于装有200mL PDA液体培养基(pH 6.5)的三角瓶中，在28℃，180rpm下发酵培养5d。过滤去除菌体。取上清液缓慢加入硫酸氨至80％饱和度，4℃下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于2mL缓冲液(0.02mol/L Na2HPO4-NaH2PO4的缓冲液，pH 7.3)中，用同样的缓冲液进行透析，得到粗酶液。
3、黄绿木霉HLMM-04菌株发酵制备烟用香料的方法
将三七花适当破碎后加入两倍重量的水，混合均匀，调pH至6.0；加入黄绿木霉HLMM-04粗酶液，发酵；粗酶液添加量为三七花质量的15％，发酵温度为30℃，发酵时间3h。回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得三七花烟用香料。
为防止变质，按发酵香料重量的5％添加丙二醇。
4、产品特征及理化性质
所得发酵烟用香料为红褐色液体，不澄清。产品理化性质见表1。
表1黄绿木霉HLMM-04发酵三七花香料的理化指标
5、卷烟加香实验
取三七花发酵烟用香料0.01g，取无菌水稀释50倍后，均匀喷洒在50g未加香叶组中，装入干净的密封袋内，于室温下放置2h后，将烟丝于120℃烘箱中烘干，使水分含量达到11％-13％。将处理后的烟丝及对照放入恒温恒湿箱中，在温度22℃、湿度60％条件下平衡24h，手工卷制成卷烟，由评吸专家组成的评吸小组进行感官评吸。以未发酵三七花提取香料及枯草芽孢杆菌发酵三七花香料为对照。加香结果表明，三七花黄绿木霉HLMM-04发酵香料与对照区别明显，具有明显的三七花特征味道，生津感增加，口腔残留减少，喉部舒适性提升。
评价结果见表2。
表2三七花发酵香料评吸结果
实施例2
重复实施例1，有以下不同点：粗酶液添加量为三七花质量的5％，发酵时间2h。
实施例3
重复实施例1，有以下不同点：粗酶液添加量为三七花质量的20％，发酵时间5h。

Claims (2)

1.一种制备三七花烟用香料的方法，包括以下步骤：
(1)将保藏编号为CGMCC No.10839的黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM-04菌株活化两次后，接种于装有200mL PDA液体培养基的三角瓶中，在初始pH 6.5，培养温度28℃，180rpm下发酵培养5d；所述的PDA液体培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，补蒸馏水至1L，pH5.5～8.5，115℃高压灭菌15min；所述的黄绿木霉HLMM-04CGMCC No.10839菌株，具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力；
(2)发酵液过滤去除菌体，取上清液缓慢加入硫酸铵 至80％饱和度，4℃下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于2mL缓冲液中，再用缓冲液进行透析，得到粗酶液；所述的缓冲液为：0.02mol/L Na2HPO4-NaH2PO4，pH 7.3；
(3)将三七花破碎后加入两倍重量的水，混合均匀，调pH至6.0；加入黄绿木霉HLMM-04粗酶液，发酵，粗酶液添加量为三七花质量的5％～20％，发酵温度为30℃，发酵时间2～5h；回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得所需烟用香料。
2.根据权利要求1所述的制备三七花烟用香料的方法，其特征在于：按烟用香料重量的5％添加丙二醇。
CN201610240772.1A 2016-04-18 2016-04-18 一种黄绿木霉菌株及用其制备三七花烟用香料的方法 Active CN105713847B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610240772.1A CN105713847B (zh) 2016-04-18 2016-04-18 一种黄绿木霉菌株及用其制备三七花烟用香料的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610240772.1A CN105713847B (zh) 2016-04-18 2016-04-18 一种黄绿木霉菌株及用其制备三七花烟用香料的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN105713847A CN105713847A (zh) 2016-06-29
CN105713847B true CN105713847B (zh) 2019-04-05

Family

ID=56160256

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610240772.1A Active CN105713847B (zh) 2016-04-18 2016-04-18 一种黄绿木霉菌株及用其制备三七花烟用香料的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105713847B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107164258A (zh) * 2017-05-10 2017-09-15 云南中烟工业有限责任公司 一种洞穴动球菌及其应用
CN107629979B (zh) * 2017-09-15 2020-04-03 云南中烟工业有限责任公司 一种洞穴芽球菌及其应用
CN107760618B (zh) * 2017-09-15 2019-12-13 云南中烟工业有限责任公司 利用洞穴芽球菌提升烟叶品质的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102657375A (zh) * 2012-04-18 2012-09-12 广西中烟工业有限责任公司 一种以本草为原料制备提取物的制备方法及其作为烟用添加剂的应用
CN103992975A (zh) * 2014-05-28 2014-08-20 广州市澳键丰泽生物科技有限公司 一种复合产香微生物及其制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102657375A (zh) * 2012-04-18 2012-09-12 广西中烟工业有限责任公司 一种以本草为原料制备提取物的制备方法及其作为烟用添加剂的应用
CN103992975A (zh) * 2014-05-28 2014-08-20 广州市澳键丰泽生物科技有限公司 一种复合产香微生物及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Enzymatic properties and anticancer activity of L-lysine α-oxidase from Trichoderma cf. aureoviride Rifai BKMF-4268D.";Pokrovsky VS 等;《Anticancer Drugs》;20130901;第24卷(第8期);第846-851页 *
"黄绿木霉纤维素酶提纯及其性质研究";宋金柱 等;《哈尔滨工业大学学报》;20061130;第38卷(第11期);第1924页左栏第1.1节，第3段 *
宋金柱 等."黄绿木霉纤维素酶提纯及其性质研究".《哈尔滨工业大学学报》.2006,第38卷(第11期),第1924页左栏第1.1节，第3段. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105713847A (zh) 2016-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102406231B (zh) 一种发酵型烟用玫瑰花提取物及其制备方法
CN102187920A (zh) 一种接种真菌微生物制作金花普洱茶的方法
CN102952833A (zh) 一种茶树菇多糖及其应用
CN107034239A (zh) 一种利用微生物发酵虫屎茶制备的烟用香料及其应用
CN105713847B (zh) 一种黄绿木霉菌株及用其制备三七花烟用香料的方法
CN106551422A (zh) 烟用酸枣仁浸膏的制备方法和应用
CN106434828A (zh) 一种发酵型金雀花烟用香料的制备方法
CN103451108B (zh) 一种出芽短梗霉菌of-01菌株及用它制备烟草内源性衍生香料的方法
CN109090697B (zh) 一种混菌发酵烟草的方法
CN106434359A (zh) 一种黄绿木霉菌株及用其制备无花果烟用香料的方法
CN108220344A (zh) 一种利用微生物发酵八月瓜制备的烟用香料及其应用
CN105779307B (zh) 一种黄绿木霉菌株及用其制备普洱茶烟用香料的方法
CN105733962B (zh) 一种黄绿木霉hlmm-04菌株及制备烟用香料的方法
CN102618475B (zh) 一种食甲醇芽孢杆菌及其烟用升麻浸膏的制备方法和应用
CN106434399A (zh) 一种糯米酒的混合酒曲及混合酒曲的制备方法
CN105713845B (zh) 一种利用黄绿木霉发酵制备烟用滇橄榄香料的方法
CN107630045A (zh) 一种利用微生物发酵密蒙花制备的烟用香料及其应用
CN105713843B (zh) 一种黄绿木霉菌株及用其制备三七烟用香料的方法
CN105861319B (zh) 一种利用黄绿木霉发酵制备烟用酸角香料的方法
CN105733960B (zh) 一种黄绿木霉菌株及用其制备滇丁香烟用香料的方法
CN105733994B (zh) 一种黄绿木霉菌株及用其制备铁皮石斛烟用香料的方法
CN105713842B (zh) 一种利用黄绿木霉发酵制备烟用茉莉花香料的方法
CN105713844B (zh) 一种黄绿木霉菌株及用其制备酸木瓜烟用香料的方法
CN105733961B (zh) 一种黄绿木霉菌株及用其制备玄参烟用香料的方法
CN105754879B (zh) 一种黄绿木霉菌株及用其制备鸡蛋花烟用香料的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant