CN115720972A - 一种强化美白功效的刺梨汁饮品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于健康食品制备技术领域,具体涉及一种强化美白功效的刺梨汁饮品;本发明采用刺梨汁与夏秋茶提取物、山药提取物进行复配,抑制酪氨酸酶和黑色素合成,从而达到更优的美白效果。另外从中医的角度分析,为了克服刺梨的凉寒特性,在刺梨中添加山药提取物,表现出滋身补肾、补脾健胃、延缓衰老、润肤养颜、健美苗条的效果。
Description
技术领域
本发明属于健康食品制备技术领域,具体涉及一种强化美白功效的刺梨汁饮品及其制备方法。
背景技术
刺梨是贵州特有的天然水果,果实扁圆,外多芒刺,味甘微涩,营养丰富,具有很高的营养价值和药用价值。研究表明,刺梨富含维C、维P、SOD、黄酮、三萜等多种营养成分和功效物质,每100克刺梨果肉中平均含维生素C2300多毫克,约是苹果的500倍,柠檬的100倍,猕猴桃的10倍。刺梨富含维C所以酸,富含单宁因此涩。人体衰老最明显的表现为皮肤干燥、松弛、皱纹增多等。在皮肤衰老小鼠模型试验中发现刺梨能显著增加皮肤水含量,有效改善皮肤干燥、松弛、粗糙的状态;同时增强皮肤中超氧化物歧化酶活力,减少脂质过氧化代谢产物—丙二醛的累积,增加羟脯氨酸、透明质酸含量水平和总抗氧化能力,有效延缓衰老。另发现,刺梨汁可调节体内红细胞膜上Na+、K+水平和保护三磷酸腺苷酶(ATP)的活性,抑制衰老小鼠脑单胺氧化酶(MAO)活性。刺梨抗氧化、抗衰老功效与活性氧ROS诱导的脂质过氧化作用直接相关,并通过调节体内相关酶活性参与调控氧化衰老过程,发挥抗氧化、抗衰老作用。
所以基于刺梨汁中的高维C,开发美白产品具有很好的物质基础,发明人同时发现在刺梨汁中添加茶多酚在美白方面可以到达协同增效的目的,而茶多酚是水溶性物质,用它洗脸能清除面部的油腻,收敛毛孔,具有消毒、灭菌、抗皮肤老化,减少日光中的紫外线辐射对皮肤的损伤等功效。茶多酚能够阻挡紫外线和清除紫外线诱导的自由基,从而保护黑色素细胞的正常功能,抑制黑色素的形成。同时对脂质氧化产生抑制,减轻色素沉着。
公开号为CN108200979A的专利文件公开了一种刺梨养颜茶饮,由以下重量份的原料组成:30-50份绿茶、10-15份刺梨提取液、8-11份枸杞、6-8份红糖、5-7份玫瑰花、4-6份桂花、3-6份红枣、2-4份桑叶、2-3份山药、1-2份薄荷、0.2-0.6份灵芝。
公开号为CN105342924A的专利文件公开了一种米浆、茶多酚等制作而成保湿美的平衡水,,其是由以下重量份的原料制成:脱壳谷物30~50份、液体茶多酚0.01~0.1份、鲜刺梨10~20份、薄荷草3~10份、风干西瓜结晶0.01~0.1份。
发明内容
本发明为解决上述问题,提供了一种强化美白功效的刺梨汁饮品及其制备方法。
具体是通过以下技术方案来实现的:
1、一种强化美白功效的刺梨汁饮品,按重量份计包括以下原料:刺梨原汁40-90份、夏秋茶提取物1-10份、山药提取物3-15份、刺梨果渣酶解液2-10份、稳定剂0.01-1份。
进一步,上述强化美白功效的刺梨汁饮品,按重量份计包括以下原料:刺梨原汁80-90份、夏秋茶提取物5-8份、山药提取物10-12份、刺梨果渣酶解液5-8份、稳定剂0.05-0.08份。
进一步,上述强化美白功效的刺梨汁饮品,按重量份计包括以下原料:刺梨原汁85份、夏秋茶提取物6份、山药提取物10份、刺梨果渣酶解液7份、稳定剂0.06份。
进一步,所述的稳定剂为黄原胶、羧甲基纤维素钠的其中一种。
进一步,所述的夏秋茶提取物,是将夏秋茶叶粉碎后,以二氯甲烷浸提3次,收集合并滤液,减压浓缩得到浸膏;将浸膏加水溶解后以石油醚萃取,取上层萃取物,洗脱除去叶绿素后减压浓缩回收溶剂;再以二氯甲烷-甲醇等度洗脱,洗脱500mL后开始收集样品,减压浓缩后得到夏秋茶提取物粗品;再用二氯甲烷-甲醇溶解,过滤后减压浓缩,即得到夏秋茶提取物。
进一步,所述的浸膏,其比重为1.0-1.2。
进一步,所述的夏秋茶提取物中,茶多酚含量≥90%。
进一步,所述的山药提取物,是取干燥山药片,以浓度为70-95%的乙醇水溶液回流提取2-5次,过滤后合并滤液,回收乙醇,加水分散、抽滤、水洗沉淀2-4次,再用食品级正己烷洗沉淀2-4次,将沉淀减压真空干燥即得到山药提取物。
2、上述强化美白的刺梨汁饮品的制备方法包括以下步骤:
A.夏秋茶提取物的制备:将夏秋茶叶粉碎,加入其重量3-5倍量的二氯甲烷,浸泡12h以上,过滤,收集滤液;滤渣重复浸提2次,滤过,收集滤液,合并3次浸提液,减压浓缩回收溶剂得浸膏;将所得的浸膏加入其重量3-5倍的蒸馏水完全溶解,再加入其重量1-3倍量的石油醚,摇匀,萃取,减压浓缩回收溶剂后,得到上层萃取物;将上层萃取物用适量甲醇溶解,以50-100倍量的MCI进行柱层析,纯甲醇洗脱去除叶绿素后,减压浓缩回收溶剂;以其重量50-100倍的硅胶进行柱层析,柱直径与长度比例为3:40,二氯甲烷-甲醇等度洗脱(体积比100:1),洗脱500mL后开始收集样品,减压浓缩回收溶剂即得夏秋茶提取物粗品;然后用体积比100:1的二氯甲烷-甲醇溶解,过滤,减压浓缩回收溶剂即得夏秋茶提取物;
B.山药提取物的制备:取干燥山药片,用10-15倍重量的70-95%乙醇水溶液回流提取2-5次,每次1-3小时,滤过,合并滤液,回收乙醇无醇味,加0.5-1倍体积水进行分散,抽滤,水洗沉淀2-4次,再用食品级正己烷洗沉淀2-4次,将沉淀减压真空干燥得到山药提取物;
C.刺梨果渣酶解液的制备:取干燥刺梨果渣,用10-15倍重量的水溶解,用碳酸氢钠调节pH值为中性,加热至温度为45-60℃,按其总重量的0.03~0.05%添加纤维素酶;酶解1-3小时,过滤即得到刺梨果渣酶解液;
D.将步骤A得到的夏秋茶提取物、步骤B得到的山药提取物、步骤C得到的刺梨果渣酶解液,按照重量份数添加到刺梨原汁中并进行高速搅拌,搅拌过程中加入稳定剂,调配好后均质灌装灭菌,得到强化美白功效的刺梨汁饮品。
进一步,步骤C中所述的纤维素酶的酶活为20000u/g。
3、上述方法制备的强化美白功效的刺梨汁饮品可用于制备强化美白功效的刺梨汁饮料,所述刺梨汁饮料中含有10-30%强化美白功效的刺梨汁饮品。
一、刺梨汁饮品的相关筛选研究实验
1.材料与设备
1.1材料与试剂
刺梨原汁、木糖醇(食用级)、多酚;SOD活性、DPPH自由基清除能力、T-AOC检测试剂盒,北京索莱宝科技有限公司。芦丁标准品。
1.2仪器与设备
UV1000型紫外可见光分光光度计,上海天美科技有限公司;手持折光仪,上海第二分析仪器厂;电磁炉,九阳股份有限公司;cR22cⅢ型离心机,日本日立集团;HH-6型数显恒温水浴锅,上海医疗器械五厂;PB203-N型电子天平,瑞典梅特勒,托利多集团;CLM—5/30系列灌装机,上海宏经制药机械有限公司;DHX-II多功能洗瓶机。
2.刺梨汁饮品的制备方案
2.1工艺
刺梨→清洗→打浆(抗氧化剂以保护Vc)→筛滤→调配(加Vc保护剂)→澄清→脱气→UHT杀菌防Vc降解)→无菌灌装→封盖→冰水快速冷却(到40℃)→室温冷却→检验→贴标签→成品
3.工艺优化
3.1刺梨原汁添加量的选择
以多酚1.5‰,木糖醇4%为基准,加入不同刺梨原汁含量为80%、85%、90%、95%、100%,经过调配、灌装、杀菌得到半成品,评价人员在进行感官评价后得到了结果,其评分标准见表1。
表1
刺梨汁饮品的感官评价随着刺梨原汁的添加量呈现出先增加后下降的趋势,当刺梨原汁添加量达到95%时候,其感官评价分最高。但是随着刺梨原汁的添加量的增加,感官评分开始下降,因此选择刺梨原汁添加量为90%、95%、100%进行正交实验(刺梨原汁添加量对刺梨汁饮品感官评价影响图如图1所示)。
3.2木糖醇添加量的选择
以多酚1.5‰,刺梨原汁90%为基准,加入不同含量的木糖醇为3%、3.5%、4%、4.5%、5%,经过调配、灌装、杀菌得到半成品,评价人员在进行感官评价后得到了结果,其评分标准见表2.
表2
当木糖醇添加量为4.5%时,对刺梨美白口服液的感官评价影响最大,口感柔和,甜度适中。当木糖醇的添加量大于4.5%时口感过甜,感官评价分数下降,总体趋势呈现出先上升后下降,因此选择4%、4.5%以及5%进行正交试验(木糖醇添加量对刺梨汁饮品感官评价影响图如图2所示)。
3.3多酚添加量的选择
以刺梨原汁90%、木糖醇4%为基准,添加不同含量的多酚主要是0.5‰、1‰、1.5‰、2‰、2.5‰,经过调配、灌装、杀菌得到半成品,评价人员在进行感官评价后得到了结果,其评分标准见表3.
表3
随着多酚添加量从0.5‰增加到1.5‰时,刺梨美白口服液的感官评价表现出上升趋势,说明一定的多酚添加量能多对刺梨美白口服液的感官评价起着积极作用,但是当添加量大于1.5‰时,其感官评价呈现下降,因此选择1‰、1.5‰、2‰的多酚添加量进行正交实验(多酚添加量对刺梨汁饮品感官评价影响图如图3所示)。
3.4刺梨美白口服液配方的正交实验
基于单因素实验的基础上,研究了刺梨原汁、木糖醇添加量以及多酚的含量,选取单因素实验结果作为各因素的3个最优水平,最后用3因素3水平正交试验确定刺梨美白口服液的最佳配比参数。正交实验因素水平表见表4,正交试验结果与分析见表5。
表4
表5刺梨美白口服液优化正交试验结果与分析
由表5可知,刺梨原汁添加、木糖醇、以及多酚的添加量都对刺梨美白口服液的感官评价有一定影响,通过极差值大小得出影响因素的顺序依次为A>B>C,说明刺梨美白口服液感官评价之中刺梨原汁添加量和木糖醇的添加量是主要影响因素,根据极差分析得出感官评价的最佳组合为A2B1C2。
4.产品质量标准与品质评价
4.1感官要求
指标 | 标准 |
色泽 | 呈金黄色,色泽均匀,有光泽 |
香气 | 浓郁的刺梨特有芳香,风味协调 |
组织形态 | 外观均匀,无沉淀杂质,无分层现象 |
口感 | 有刺梨和VC的滋味,清爽可口,酸甜适中 |
4.2产品理化指标
可溶性固形物开罐时(20℃折光计)刺梨汁饮品为11%~13%;其他指标根据相应国家标准进行测定。
4.3产品功能性成分检测
4.3.1多糖(苯酚-硫酸法)
①:标准曲线的制作
葡萄糖浓度为100ug/mL,取0ml,0.2mL,0.4mL,0.6mL,0.8mL,1.0mL的标准葡萄糖工作液置于20mL的具塞试管中,用蒸馏水补至1.0mL,再加1mL苯酚溶液,然后快速加入5.0mLH2SO4,静置10min,300C水浴20min,490nm测吸光度。所得的标准曲线方程:y=0.0616x-0.0332R2=0.999
②:样品制备
取样品2mL+8mL无水乙醇,放置40C的冰箱冷藏过夜,再用10000r/min,离心5min,弃去上清液,用开水溶解,(少量多糖容易浮起来,离心完后轻取)少量多次(1mL/次)轻转移至5mL/10mL量瓶中,定容,得5mL供试液,放置在平坦的盖子的容器里面。(多糖分布不均匀)取1mL供试液+1mL5%苯酚+5mL硫酸(三份以上平行,煮沸20min),在490nm测吸光度。
4.3.2总酚(福林酚法)
①标准曲线的制作
准确称量20.00mg没食子酸(精确至0.1mg),没食子酸标准品,用蒸馏水溶液并定容至100Ml,此时溶液中没食子酸含量为200mg/L,准确吸取没食子酸标准0.0,0.2,0.4,0.6,1.0,1.3,1.5,2.0mL于10mL容量瓶,并用蒸馏水定容,得到浓度为0.0,2.0,8.0,12,20,26,30,40mg/L的标准系列溶液。然后分别位移取标准溶液1mL于10mL试管中,分别加入5mL蒸馏水。再分别1mL福林酚显色剂,振荡摇匀再加入3mL,7.5%Na2Co3溶液,振荡摇匀,避光反应静置2h后,在765nm处测定其吸光度值,以浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。Y=0.0135x+0.0001R2=0.9985
②样品测定时,样品适当稀释后,测定根据标准曲线计算待测样品中总多酚的浓度。
4.3.3黄酮(芦丁测定法)
①标准品溶液的绘制:
准确称取10mg芦丁标准品,用80%乙醇溶解并定容至50m L,得到0.2mg/m L的芦丁标准溶液。
②标准曲线的绘制
精密吸取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00m L芦丁标液,分别置于10m L刻度试管中,加入80%乙醇至5.00m L,再加入5%亚硝酸钠溶液0.40mL,摇匀,放置6min后加入10%的硝酸铝溶液0.4m L,摇匀,再放置6min加入4%的氢氧化钠4.00mL,加入80%乙醇并定容至10m L,摇匀放置15min后,于510nm处测定吸光度,所得的标准曲线方程为:Y=12.332x-0.0093R2=0.9998
③样品中黄酮含量的测定:取1.00m L口服液于10m L刻度试管中,加入80%乙醇至5.00m L,再加入5%亚硝酸钠溶液0.40m L,摇匀,放置6min后加入10%的硝酸铝溶液0.4m L,摇匀,再放置6min加入4%的氢氧化钠4.00mL,加入80%乙醇并定容至10m L,摇匀放置15min后,于510nm处测定吸光度。
4.4抗氧化指标
4.4.1DPPH(DPPH自由基清除能力检测)
DPPH自由基清除率D%=[[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白]×100%
①溶液的配置:(试剂盒匹配提供)
试剂一:无水乙醇60mL×1瓶,室温保存。
试剂二:粉剂×1支(0.6mL EP管放于8mL试剂瓶中),临用前加入6.08mL试剂一振荡溶解,用不完的试剂可于-20℃保存一月,建议分装保存;临用前根据试验所需量按照试剂二:试剂一(V:V)=4:21的比例配制成工作液,现配现用,用不完的工作液可于4℃保存一周。
试剂三:粉剂×1支,10mg维生素C,4℃保存。临用前加入1mL提取液,充分振荡溶解;配成10mg/mL维生素C溶液,用于阳性对照。
②样品制备:将刺梨美白产品液体样本:吸取100μL样本溶液加入900μL提取液,旋涡振荡混匀,室温10000rpm离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
a.分光光度计预热30min以上,调节波长至515nm,无水乙醇调零。
b.操作表:在1.5mLEP管中分别加入下列试剂
混匀后室温避光静置30min,于515nm处的吸光度。空白管、阳性对照管、对照管和测定管的吸光值分别记为A空白、A阳性对照、A对照和A测定。空白管只需测1-2次。
4.4.2T-AOC(总抗氧化能力检测)
总抗氧化能力计算:(按液体体积计算)=总抗氧化能力(μmol/mL)=x×V反总÷V样=34×x
注:V反总:反应总体积,1.02mL;V样:反应中样本体积,0.03mL。
①溶液的配制:(试剂盒匹配提供)
a.提取液:使用前预冷;
b.标准品:10mg FeSO4·7H2O。临用前加入0.9mL蒸馏水,滴加20μL浓硫酸,制备40μmol/mL FeSO4标准溶液;
c.混合液:现配现用,将试剂一、试剂二、试剂三按7:1:1的比例混合,使用前预温至37℃。
操作步骤:
a.根据液体样品制备
b.液体样本直接用于测定
测定步骤
a.分光光度计预热30min以上,调节波长至593nm,蒸馏水调零。
b.标准曲线绘制:
将40μmol/mL FeSO4标准溶液用蒸馏水稀释至0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125μmol/mL,分别取500μL标准溶液(蒸馏水作空白)加入500μL试剂二,充分混匀,反应10min,测定593nnm下的吸光度,计算ΔA=A标准-A空白,此时Fe2+终浓度为0.05、0.0250、0125、0.00625、0.003125、0.00156μmol/mL。
以Fe2+终浓度为横坐标(x),以ΔA为纵坐标(y)绘制标准曲线,得到线性回归方程y=kx+b,将ΔA带入方程求得x(μmol/mL)。
c.操作表:
加样试剂 | 空白管 | 测定管 |
混合液(μL) | 900 | 900 |
样本(μL) | 30 | |
双蒸馏水(μL) | 120 | 90 |
充分混匀,反应10min,测定593nm下的吸光度,计算ΔAˊ=A测定-A空白。(注:空白管只需测定1-2次)
4.4.3SOD(超氧化物歧化酶活性检测)
a.SOD活性计算
抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定)÷ΔA空白×100%
尽量使样本的抑制百分率在30-70%范围内,越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%,则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高,则需适当稀释样本;如果测定出来的抑制百分率偏低,则需重新准备浓度比较高的待测样本。
b.SOD酶活性计算
SOD活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷V样×F=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F
注:V反总:反应总体积,0.2mL;V样:加入反应体系中的样本体积,0.018mL;F:样本稀释倍数。
溶液的配制:(试剂盒匹配提供)
试剂二:使用前先离心再吹打混匀。
试剂五:临用前将试剂四加入试剂五中,并震荡溶解。
操作步骤:
样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
测定步骤
a.分光光度计预热30min以上,调节波长至560nm,蒸馏水调零。
b.样本测定(在EP管中加入下列试剂μL)
试剂名称 | 测定管 | 对照管 | 空白1 | 空白2 |
样本 | 90 | 90 | ||
试剂一 | 240 | 240 | 240 | 240 |
试剂二 | 6 | - | 6 | |
试剂三 | 180 | 180 | 180 | 180 |
蒸馏水 | 480 | 486 | 570 | 576 |
试剂五 | 30 | 30 | 30 | 30 |
充分混匀,37℃水浴30min后,置于1mL玻璃比色皿测定560nm下的吸光度,分别记为A测定、A对照、A1空白、A2空白,计算ΔA测定=A测定-A对照,ΔA空白=A1空白-A2空白。如底部有沉淀,混匀后再行测定。(空白管1和空白管2各只需做1~2管,每个样本有一个对照管)
5.刺梨汁饮品检测结果
刺梨汁饮品的多糖、黄酮、总酚、T-AOC、DPPH和SOD检测结果如表6所示。
表6
6.产品酪氨酸酶活性检测
6.1实验方法与步骤
PBS缓冲液的配置:称取磷酸氢二钠13.3905g,加去离子水溶解,并定容至250mL容量瓶中,得A液;另取磷酸二氢钠6.9442g,用去离子水溶解并定容至250mL容量瓶中,得B液。分别移取A、B两溶液各50mL,去离子水定容至250mL,调PH6.8即得。
酪氨酸酶溶液的配制:将大于等于500unist/mg的酪氨酸酶10mg,定容至5mL,取1mL用PBS缓冲液溶解并定容至5mL容量瓶中,得1000u酶液。
样品溶液的配制:将样品各取0.05g放入10mLEP管中,加PBS缓冲液:DMSO(9:1)溶解并定容至10mL。
加样:利用微量移液器分别吸取a、b、c、d中底物、溶剂、药品置96孔板对应位置,每组平行6组,混合摇匀,在25℃恒温水浴中恒温10min,加入酪氨酸酶,放入37℃恒温水浴锅中恒温10min后立即移至酶标仪中,于475nm处测定吸光度,分别记为A、B、C、D,按【1-(D-C)/(B-A)】计算样品抑制酪氨酸酶的活性。
酪氨酸酶活性测定的反应液组成及用量如下表:
反应液组成 | a | b | c | d |
底物 | 10 | 10 | 10 | 10 |
溶剂 | 90 | 80 | 70 | 60 |
药品 | - | - | 20 | 20 |
酪氨酸酶 | - | 10 | - | 10 |
6.2实验结果
综上所述,本发明的有益效果在于:本发明采用刺梨汁与夏秋茶提取物、山药提取物进行复配,抑制酪氨酸酶和黑色素合成,从而达到更优的美白效果。另外从中医的角度分析,为了克服刺梨的凉寒特性,在刺梨中添加山药提取物,表现出滋身补肾、补脾健胃、延缓衰老、润肤养颜、健美苗条的效果。
与现有的刺梨汁相比,本发明制备的强化美白功效的刺梨汁饮品对酪氨酸酶抑制率和黑色素合成抑制率显著提高,在美白润肤,淡化黑色素,改善脸部暗沉等方面表现出良好的效果。且口感柔和,酸涩度明显下降,消费者接受度显著提升。
本发明在刺梨中添加茶多酚,茶多酚与刺梨中的维生素C在抗氧化,抗衰老方面达到协同增效的目的,表现为美白功效显著增强。在刺梨中添加山药,利用山药温补特性,中和刺梨寒凉属性,使产品具有滋身补肾、补脾健胃、延缓衰老、润肤养颜、健美苗条的效果。
此外,本发明采用夏秋茶提取茶多酚,显著提高了夏秋茶利用的附加值,为夏秋茶的综合开发利用提供了新途径。
附图说明
图1为刺梨原汁添加量对刺梨汁饮品感官评价影响折线图。
图2为木糖醇添加量对刺梨汁饮品感官评价影响折线图。
图3为多酚添加量对刺梨汁饮品感官评价影响折线图。
图4为强化美白功效的刺梨汁饮品对酪氨酸酶的抑制率对比柱形图。
图5为强化美白功效的刺梨汁饮品对黑色素合成抑制率对比柱形图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明,但本发明并不局限于这些实施方式,任何在本实施例基本精神上的改进或代替,仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
实施例1
1、一种强化美白功效的刺梨汁饮品,按重量份计包括以下原料:刺梨原汁85份、夏秋茶提取物6份、山药提取物10份、刺梨果渣酶解液7份、黄原胶0.06份。
2、上述的强化美白功效的刺梨汁饮品的制备方法,包括以下步骤:
A.夏秋茶提取物的制备:将夏秋茶叶粉碎,加入其重量3倍量的二氯甲烷,浸泡12h以上,过滤,收集滤液;滤渣重复浸提2次,滤过,收集滤液,合并3次浸提液,减压浓缩回收溶剂得浸膏;将所得的浸膏加入其重量5倍的蒸馏水完全溶解,再加入其重量3倍量的石油醚,摇匀,萃取,减压浓缩回收溶剂后,得到上层萃取物;将上层萃取物用适量甲醇溶解,以50倍量的MCI进行柱层析,纯甲醇洗脱去除叶绿素后,减压浓缩回收溶剂;以其重量100倍的硅胶进行柱层析,柱直径与长度比例为3:40,二氯甲烷-甲醇等度洗脱,洗脱500mL后开始收集样品,减压浓缩回收溶剂即得夏秋茶提取物粗品;然后用体积比100:1的二氯甲烷-甲醇溶解,过滤,减压浓缩回收溶剂即得夏秋茶提取物;
B.山药提取物的制备:取干燥山药片,用10倍重量的95%乙醇水溶液回流提取2次,每次3小时,滤过,合并滤液,回收乙醇无醇味,加0.5倍体积水进行分散,抽滤,水洗沉淀4次,再用食品级正己烷洗沉淀2次,将沉淀减压真空干燥得到山药提取物;
C.刺梨果渣酶解液的制备:取干燥刺梨果渣,用10倍重量的水溶解,用碳酸氢钠调节pH值为中性,加热至温度为60℃,按其总重量的0.03%添加纤维素酶;酶解1~3小时,过滤即得到刺梨果渣酶解液;
D.将步骤A得到的夏秋茶提取物、步骤B得到的山药提取物、步骤C得到的刺梨果渣酶解液,按照重量份数添加到刺梨原汁中并进行高速搅拌,搅拌过程中加入稳定剂,调配好后均质灌装灭菌,得到强化美白功效的刺梨汁饮品。
进一步,所述的步骤A中所述的浸膏的比重为1.0。
进一步,所述的步骤A得到的夏秋茶提取物中茶多酚含量90%以上。
进一步,所述的步骤C中所述的纤维素酶的酶活为20000u/g。
实施例2
1、一种强化美白功效的刺梨汁饮品,按重量份计包括以下原料:刺梨原汁90份、夏秋茶提取物10份、山药提取物3份、刺梨果渣酶解液10份、羧甲基纤维素钠0.01份。
2、上述的强化美白功效的刺梨汁饮品的制备方法,包括以下步骤:
A.夏秋茶提取物的制备:将夏秋茶叶粉碎,加入其重量5倍量的二氯甲烷,浸泡12h以上,过滤,收集滤液;滤渣重复浸提2次,滤过,收集滤液,合并3次浸提液,减压浓缩回收溶剂得浸膏;将所得的浸膏加入其重量3倍的蒸馏水完全溶解,再加入其重量3倍量的石油醚,摇匀,萃取,减压浓缩回收溶剂后,得到上层萃取物;将上层萃取物用适量甲醇溶解,以50倍量的MCI进行柱层析,纯甲醇洗脱去除叶绿素后,减压浓缩回收溶剂;以其重量100倍的硅胶进行柱层析,柱直径与长度比例为3:40,二氯甲烷-甲醇等度洗脱,洗脱500mL后开始收集样品,减压浓缩回收溶剂即得夏秋茶提取物粗品;然后用体积比100:1的二氯甲烷-甲醇溶解,过滤,减压浓缩回收溶剂即得夏秋茶提取物;
B.山药提取物的制备:取干燥山药片,用15倍重量的70%乙醇水溶液回流提取5次,每次1小时,滤过,合并滤液,回收乙醇无醇味,加1倍体积水进行分散,抽滤,水洗沉淀2次,再用食品级正己烷洗沉淀4次,将沉淀减压真空干燥得到山药提取物;
C.刺梨果渣酶解液的制备:取干燥刺梨果渣,用10倍重量的水溶解,用碳酸氢钠调节pH值为中性,加热至温度为60℃,按其总重量的0.03%添加纤维素酶;酶解1小时,过滤即得到刺梨果渣酶解液;
D.将步骤A得到的夏秋茶提取物、步骤B得到的山药提取物、步骤C得到的刺梨果渣酶解液,按照重量份数添加到刺梨原汁中并进行高速搅拌,搅拌过程中加入稳定剂,调配好后均质灌装灭菌,得到强化美白功效的刺梨汁饮品。
进一步,所述的步骤A中所述的浸膏的比重为1.2。
进一步,所述的步骤A得到的夏秋茶提取物中茶多酚含量90%以上。
进一步,所述的步骤C中所述的纤维素酶的酶活为20000u/g。
实施例3
1、一种强化美白功效的刺梨汁饮品,按重量份计包括以下原料:刺梨原汁40份、夏秋茶提取物1份、山药提取物15份、刺梨果渣酶解液2份、黄原胶1份。
2、上述的强化美白功效的刺梨汁饮品的制备方法,包括以下步骤:
A.夏秋茶提取物的制备:将夏秋茶叶粉碎,加入其重量4倍量的二氯甲烷,浸泡12h以上,过滤,收集滤液;滤渣重复浸提2次,滤过,收集滤液,合并3次浸提液,减压浓缩回收溶剂得浸膏;将所得的浸膏加入其重量4倍的蒸馏水完全溶解,再加入其重量1~3倍量的石油醚,摇匀,萃取,减压浓缩回收溶剂后,得到上层萃取物;将上层萃取物用适量甲醇溶解,以70倍量的MCI进行柱层析,纯甲醇洗脱去除叶绿素后,减压浓缩回收溶剂;以其重量80倍的硅胶进行柱层析,柱直径与长度比例为3:40,二氯甲烷-甲醇等度洗脱,洗脱500mL后开始收集样品,减压浓缩回收溶剂即得夏秋茶提取物粗品;然后用体积比100:1的二氯甲烷-甲醇溶解,过滤,减压浓缩回收溶剂即得夏秋茶提取物;
B.山药提取物的制备:取干燥山药片,用12倍重量的85%乙醇水溶液回流提取3次,每次2小时,滤过,合并滤液,回收乙醇无醇味,加0.8倍体积水进行分散,抽滤,水洗沉淀3次,再用食品级正己烷洗沉淀3次,将沉淀减压真空干燥得到山药提取物;
C.刺梨果渣酶解液的制备:取干燥刺梨果渣,用12倍重量的水溶解,用碳酸氢钠调节pH值为中性,加热至温度为50℃,按其总重量的0.04%添加纤维素酶;酶解2小时,过滤即得到刺梨果渣酶解液;
D.将步骤A得到的夏秋茶提取物、步骤B得到的山药提取物、步骤C得到的刺梨果渣酶解液,按照重量份数添加到刺梨原汁中并进行高速搅拌,搅拌过程中加入稳定剂,调配好后均质灌装灭菌,得到强化美白功效的刺梨汁饮品。
进一步,所述的步骤A中所述的浸膏的比重为1.2。
进一步,所述的步骤A得到的夏秋茶提取物中茶多酚含量90%以上。
进一步,所述的步骤C中所述的纤维素酶的酶活为20000u/g。
为了进一步的验证本发明制备的刺梨汁饮品与普通刺梨汁在美白方面的效果,
(1)采用试剂盒,利用分光光度计分别测试了实施例1,实施例2,实施例3,普通刺梨汁,夏秋茶提取物(按照添加量比例用蒸馏水替代刺梨汁)、山药提取物(按照添加量比例用蒸馏水替代刺梨汁)、刺梨果渣酶解液(按照添加量比例用蒸馏水替代刺梨汁),7个样品对酪氨酸酶的抑制率,结果见图4。
由图1可知,本发明制备的强化美白功效的刺梨汁饮品对酪氨酸酶的抑制率显著高于普通刺梨汁,其中实施例1配方的产品抑制率最高,为97.8%,另外夏秋茶提取物、山药提取物以及刺梨果渣酶解液均有抑制酪氨酸酶的活性,但是均没有添加在刺梨中的抑制率高,因此,说明通过添加在刺梨汁中使用,可以达到协同增效的目的,临床表现也证实了这一实验结果。
(2)分别测试了实施例1,实施例2,实施例3,普通刺梨汁,夏秋茶提取物(按照添加量比例用蒸馏水替代刺梨汁)、山药提取物(按照添加量比例用蒸馏水替代刺梨汁)、刺梨果渣酶解液(按照添加量比例用蒸馏水替代刺梨汁),7个样品对黑色素合成抑制率:将B16黑色素瘤细胞以1×105个/mL的密度接种于48孔板中,每孔100μL,二氧化碳培养箱中培养24小时后,每孔加入样品溶液。同时设立培养基和细胞的空白对照组。将培养板置于培养箱中培养72小时后,弃去上清液,PBS洗涤两遍,然后每孔加入0.5mL胰酶消化细胞2min,每孔加入1mL维持液终止消化。混匀后,每种浓度取出0.5mL做细胞计数。其余细胞悬液以3000r/min离心分离5min,弃去上清液,于沉淀中加入NaOH溶液,加热使黑色素溶解,选择495nm波长在酶联免疫检测仪下测定吸光度值。计算样品对黑色素合成抑制率,结果见图5。
由图2可知,本发明制备的强化美白功效的刺梨汁饮品对黑色素合成抑制率显著高于普通刺梨汁,其中实施例1配方的产品抑制率最高,为85.4%,另外夏秋茶提取物、山药提取物以及刺梨果渣酶解液均有抑制黑色素合成的活性,但是均没有添加在刺梨中的抑制率高,因此,说明通过添加在刺梨汁中使用,可以达到协同增效的目的,临床表现也证实了这一实验结果。
Claims (10)
1.一种强化美白功效的刺梨汁饮品,其特征在于,按重量份计包括以下原料:刺梨原汁40-90份、夏秋茶提取物1-10份、山药提取物3-15份、刺梨果渣酶解液2-10份、稳定剂0.01-1份。
2.如权利要求1所述的一种强化美白功效的刺梨汁饮品,其特征在于,按重量份计包括以下原料:刺梨原汁80-90份、夏秋茶提取物5-8份、山药提取物10-12份、刺梨果渣酶解液5-8份、稳定剂0.05-0.08份。
3.如权利要求1所述的一种强化美白功效的刺梨汁饮品,其特征在于,按重量份计包括以下原料:刺梨原汁85份、夏秋茶提取物6份、山药提取物10份、刺梨果渣酶解液7份、稳定剂0.06份。
4.如权利要求1所述的一种强化美白功效的刺梨汁饮品,其特征在于,所述的稳定剂为黄原胶、羧甲基纤维素钠的其中一种。
5.如权利要求1-3任一项所述的一种强化美白的刺梨汁饮品,其特征在于,所述的夏秋茶提取物,是将夏秋茶叶粉碎后,以二氯甲烷浸提3次,收集合并滤液,减压浓缩得到浸膏;将浸膏加水溶解后以石油醚萃取,取上层萃取物,洗脱除去叶绿素后减压浓缩回收溶剂;再以二氯甲烷-甲醇等度洗脱,洗脱500mL后开始收集样品,减压浓缩后得到夏秋茶提取物粗品;再用二氯甲烷-甲醇溶解,过滤后减压浓缩,即得到夏秋茶提取物。
6.如权利要求5所述的一种强化美白的刺梨汁饮品,其特征在于,所述的浸膏,其比重为1.0-1.2。
7.如权利要求5所述的一种强化美白的刺梨汁饮品,其特征在于,所述的夏秋茶提取物中,茶多酚含量≥90%。
8.如权利要求1-3任一项所述的一种强化美白的刺梨汁饮品,其特征在于,所述的山药提取物,是取干燥山药片,以浓度为70-95%的乙醇水溶液回流提取2-5次,过滤后合并滤液,回收乙醇,加水分散、抽滤、水洗沉淀2-4次,再用食品级正己烷洗沉淀2-4次,将沉淀减压真空干燥即得到山药提取物。
9.如权利要求1-3任一项所述的一种强化美白的刺梨汁饮品,其特征在于,所述刺梨汁饮品的制备方法包括以下步骤:
A.夏秋茶提取物的制备:将夏秋茶叶粉碎,加入其重量3-5倍量的二氯甲烷,浸泡12h以上,过滤,收集滤液;滤渣重复浸提2次,滤过,收集滤液,合并3次浸提液,减压浓缩回收溶剂得浸膏;将所得的浸膏加入其重量3-5倍的蒸馏水完全溶解,再加入其重量1-3倍量的石油醚,摇匀,萃取,减压浓缩回收溶剂后,得到上层萃取物;将上层萃取物用适量甲醇溶解,以50-100倍量的MCI进行柱层析,纯甲醇洗脱去除叶绿素后,减压浓缩回收溶剂;以其重量50-100倍的硅胶进行柱层析,柱直径与长度比例为3:40,二氯甲烷-甲醇等度洗脱(体积比100:1),洗脱500mL后开始收集样品,减压浓缩回收溶剂即得夏秋茶提取物粗品;然后用体积比100:1的二氯甲烷-甲醇溶解,过滤,减压浓缩回收溶剂即得夏秋茶提取物;
B.山药提取物的制备:取干燥山药片,用10-15倍重量的70-95%乙醇水溶液回流提取2-5次,每次1-3小时,滤过,合并滤液,回收乙醇无醇味,加0.5-1倍体积水进行分散,抽滤,水洗沉淀2-4次,再用食品级正己烷洗沉淀2-4次,将沉淀减压真空干燥得到山药提取物;
C.刺梨果渣酶解液的制备:取干燥刺梨果渣,用10-15倍重量的水溶解,用碳酸氢钠调节pH值为中性,加热至温度为45-60℃,按其总重量的0.03~0.05%添加纤维素酶;酶解1-3小时,过滤即得到刺梨果渣酶解液;
D.将步骤A得到的夏秋茶提取物、步骤B得到的山药提取物、步骤C得到的刺梨果渣酶解液,按照重量份数添加到刺梨原汁中并进行高速搅拌,搅拌过程中加入稳定剂,调配好后均质灌装灭菌,得到强化美白功效的刺梨汁饮品。
10.如权利要求9所述的一种强化美白的刺梨汁饮品,其特征在于,步骤C中所述的纤维素酶的酶活为20000u/g。
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