CN115698035A - 诺如病毒及冠状病毒复制的抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供式I的化合物，以及抑制病毒在生物样本或患者中的复制、降低生物样本或患者中的病毒量及治疗患者的病毒感染的方法，所述方法包括向该生物样本或患者给与有效量的由式I表示的化合物、表A或B的化合物或其药学上可接受的盐。

Description

诺如病毒及冠状病毒复制的抑制剂
技术领域
本公开大体上涉及诺如病毒(norovirus)及冠状病毒(coronavirus)复制的抑制剂，及通过向需要治疗的患者给与此类抑制剂来治疗或预防诺如病毒及冠状病毒感染的方法。
现有技术
诺如病毒为涉及全世界非细菌性胃肠炎爆发的重要肠道病原体。诺如病毒主要经由粪-口途径在人与人之间出现，且还经由被污染的食物或水出现。由于病毒在环境中的持久性，间接污染也是可能的。人类诺如病毒属于杯状病毒科诺如病毒属，且为具有正义单链RNA基因组的无包膜病毒。诺如病毒株分类为七组。属于GI、GII及GIV组的病毒感染人类，而GII、GIII、GIV、GV、GVI及GVII NoV组出现在动物中。
冠状病毒为在人类中引起感冒至严重急性呼吸道症候群(severe acuterespiratory syndrome；SARS)的一系列疾病的常见病毒科。冠状病毒还可在动物中引起多种疾病。冠状病毒为包膜的正链RNA病毒，其名称来源于其在电子显微照片中的特征性冠状外观。冠状病毒分类为网巢病毒目中的一科，网巢病毒目病毒使用一组嵌套的mRNA进行复制。冠状病毒亚科进一步分类为四个属：α、β、γ及δ冠状病毒。人类冠状病毒(HCoV)属于这些属中的两者：α冠状病毒(包含HCoV-229E及HCoV-NL63)及β冠状病毒(包含HCoV-HKU1、HCoV-OC43、中东呼吸道症候群冠状病毒(Middle E ast r espiratory s yndromecoronavirus；MERS-CoV)、严重急性呼吸道症候群冠状病毒(severe acute respiratorysyndrome coronavirus；SARS-CoV)及SARS-CoV-2)。
2012年，沙特阿拉伯(Saudi Arabia)出现了一种新型冠状病毒，且被称为中东呼吸道症候群冠状病毒(MERS-CoV)。所报导的MERS-CoV感染病例中有约一半导致死亡，且所报导病例中的大部分出现在中老年男性中。所报导病例中仅少数涉及患有轻度呼吸道疾病的个体。已发现MERS-CoV的人类与人类传播是可能的，但非常有限。此病毒被称为SARS-CoV-2、2019-nCoV，且其引起2019年底及2020年的世界范围大流行。
鉴于这些病毒的广泛传播及潜在的健康影响，需要用于治疗诺如病毒及冠状病毒感染的药物。
发明内容
本公开大体上涉及治疗诺如病毒及冠状病毒感染的方法、涉及抑制诺如病毒及冠状病毒的复制的方法、涉及降低诺如病毒及冠状病毒的量的方法且涉及可用于此类方法的化合物及组合物。
本公开提供式(I)的化合物及其药学上可接受的盐：
Figure GDA0003977862690000021
其中
Z为O、NR1或键；各RN独立地为H或C1-6烷基；R1为任选经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-8碳环基或5至8元N-杂环，其中环氮任选经COO-C1-6烷基取代；R2为C1-6烷基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-10元杂环基、C1-6亚烷基-C6-10芳基或C0-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基，其中C1-6亚烷基任选经1-3个R7取代，且该碳环基、杂环基、芳基及杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6亚烷基-C6-10芳基、O-C1-6亚烷基-C6-10芳基及CO2C1-6烷基；R3为C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、C0-6亚烷基-任选经1-2个卤基取代的C6-10芳基、或氨基酸侧链；各R4独立地为卤基、OH、CN、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷基-OH、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-6烷基氧基烷基、氧代(＝O)、NRASO2RB、SO2NRARB、COORA、C0-4亚烷基-C6-10芳基、C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-12元杂芳基)或C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环)；且该芳基、杂芳基及杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基，或两个R4与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合3-12元碳环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C1-6亚烷基-O-C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基、SO2-C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基；R5为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、-[C(O)]1-2-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)、-[C(O)]1-2-NRNRN、C(O)-Y-H或-[C(O)]1-2-NRN-Y-X-A，其中A为H、C3-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环、C6-10芳基或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，且该碳环基、杂环基、芳基或杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基；Y为键、C1-6亚烷基、C1-6亚烷基-O-C1-6亚烷基或C1-6亚烯基，其中C1-6亚烷基及C1-6亚烯基任选经1-3个独立地选自以下的取代基取代：卤基、OH、NRNRN及C1-6烷氧基；X为键、NRNRN、C(O)、SO2或OC(O)；各R6独立地为H、C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO或C(O)-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)；各R7独立地为卤基、C1-6卤烷基、C2-6烯基、C3-5碳环基或C0-6亚烷基-C6-10芳基，且C6-10芳基任选经1-2个卤基取代，或两个R7与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合C3-6碳环基环；RA及RB各自独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C0-6亚烷基-C6-10芳基、C0-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基；n为0-3；m为0-5；且o为0-5。在一些实施例中，Z为O或NR1；各RN独立地为H或C1-6烷基；R1为任选经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-8碳环基、或5至8元N-杂环，其中环氮任选经COO-C1-6烷基取代；R2为C1-6烷基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、C1-6亚烷基-C6-10芳基、或C1-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基，其中C1-6亚烷基任选经1-2个独立地选自C1-6卤烷基及C2-6烯基的取代基取代，且碳环基、芳基及杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6卤烷基及CO2C1-6烷基；R3为C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、C0-6亚烷基-C6-10芳基或氨基酸侧链；各R4独立地为卤基、OH、CN、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷基-OH、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-6烷基氧基烷基、氧代(＝O)、NRASO2RB、SO2NRARB、COORA、C0-4亚烷基-C6-10芳基、C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-12元杂芳基)或C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环)；且该芳基、杂芳基及杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基，或两个R4与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合5-12元碳环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基；R5为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO、C(O)-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)、CONRNRN或C(O)-C(O)NRN-Y-X-A，其中A为C5-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环、C6-10芳基或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，且该碳环基、杂环基、芳基或杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基；Y为任选经1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-6亚烷基：卤基、OH、NRNRN及C1-6烷氧基；X为空、NRNRN、C(O)、SO2或OC(O)；各R6独立地为H、C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO或C(O)-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)；RA及RB各自独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C0-6亚烷基-C6-10芳基、C0-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基；n为0-3；m为0-5；且o为0-5。
进一步提供向生物样本或患者给与安全且有效量的如本文所公开的，例如如由式I表示的化合物或表A、B或C的化合物的方法。
本文还提供通过向生物样本或患者给与有效量的如本文所公开的，例如如由式I表示的化合物或表A、B或C的化合物来降低该生物样本或患者中的病毒量的方法。
进一步提供治疗或预防患者的病毒感染的方法，其包括向该患者给与有效量的如本文所公开的，例如如由式I表示的化合物或表A、B或C的化合物。
还提供了药物组合物，其包括如本文所公开的，例如如由式I表示的化合物或表A、B或C的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的赋形剂、载剂、佐剂或媒剂。
还提供本文所述的化合物用于抑制或减少病毒在生物样本或患者中的复制、用于降低生物样本或患者中的病毒量或用于治疗患者的病毒感染的用途。
本文进一步提供本文所述的化合物用于制造药物的用途，所述药物用于治疗患者的病毒感染、用于降低生物样本或患者中的病毒量或用于抑制病毒在生物样本或患者中的复制。
发明详述
本文提供化合物及其在治疗或预防病毒感染(例如诺如病毒或冠状病毒感染)中的用途。还提供本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或包括此类化合物或其药学上可接受的盐的药学上可接受的组合物的用途，用于抑制病毒在生物样本或患者中的复制、用于降低生物样本或患者中的病毒量(降低病毒滴度)及用于治疗患者的病毒感染。
除非另有指示，否则本文中所描绘的结构还意在包含所述结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构、顺反异构、构形异构及旋转异构)形式。举例而言，除非特定指示仅异构体中的一者，否则本公开中包含每一不对称中心的R与S构形、(Z)及(E)双键异构体及(Z)与(E)构形异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构、顺/反异构、构形异构及旋转异构混合物属于本公开的范围内。在一些情况下，本文所公开的化合物为立体异构体。“立体异构体”是指一或多个立体异构中心的手性不同的化合物。立体异构体包含对映异构体及非对映异构体。本文所公开的化合物可能以单一立体异构体或立体异构体的混合物形式存在。除非另外论述，否则本文中所示的化合物的立体化学指示相对立体化学，而非绝对立体化学。如本文中所指示，单一立体异构体、非对映异构体或对映异构体是指为至少超过50％所指示立体异构体、非对映异构体或对映异构体且在一些情况下至少90％或95％所指示立体异构体、非对映异构体或对映异构体的化合物。
除非另有指示，否则本公开的化合物的所有互变异构形式在本公开的范围内。
另外，除非另有指示，否则本文所描绘的结构还意在包含仅在存在一或多个经同位素富集的原子的方面不同的化合物。举例而言，具有本发明结构但氢经氘或氚置换或碳经13C或14C富集的碳置换的化合物均在本公开范围内。此类化合物适合例如生物分析中用作分析工具或探针。此类化合物(尤其氘类似物)还可以在治疗上有用。
本公开的化合物在本文中藉由其化学结构和/或化学名称定义。在藉由化学结构与化学名称提及化合物且化学结构与化学名称矛盾时，由化学结构决定化合物的身份。
化合物
本文提供式(I)的化合物及其药学上可接受的盐：
Figure GDA0003977862690000071
其中
Z为O、NR1或键；
各RN独立地为H或C1-6烷基；
R1为任选经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-8碳环基、或5至8元N-杂环，其中环氮任选经COO-C1-6烷基取代；
R2为C1-6烷基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-10元杂环基、C1-6亚烷基-C6-10芳基、或C0-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基，且C1-6亚烷基任选经1-3个R7取代，且该碳环基、杂环基、芳基及杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6亚烷基-C6-10芳基、O-C1-6亚烷基-C6-10芳基及CO2C1-6烷基；
R3为C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、C0-6亚烷基-任选经1-2个卤基取代的C6-10芳基、或氨基酸侧链；
各R4独立地为卤基、OH、CN、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷基-OH、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-6烷基氧基烷基、氧代(＝O)、NRASO2RB、SO2NRARB、COORA、C0-4亚烷基-C6-10芳基、C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-12元杂芳基)或C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环)；且该芳基、杂芳基及杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基，或
两个R4与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合3-12元碳环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C1-6亚烷基-O-C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基、SO2-C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基；
R5为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、-[C(O)]1-2-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)、-[C(O)]1-2-NRNRN、C(O)-Y-H或-[C(O)]1-2-NRN-Y-X-A，其中A为H、C3-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环、C6-10芳基或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，且该碳环基、杂环基、芳基或杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基；
Y为键、C1-6亚烷基、C1-6亚烷基-O-C1-6亚烷基或C1-6亚烯基，其中C1-6亚烷基及C1-6亚烯基任选经1-3个独立地选自以下的取代基取代：卤基、OH、NRNRN及C1-6烷氧基；
X为键、NRNRN、C(O)、SO2或OC(O)；
各R6独立地为H、C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO或C(O)-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)；
各R7独立地为卤基、C1-6卤烷基、C2-6烯基、C3-5碳环基或C0-6亚烷基-C6-10芳基，且C6-10芳基任选经1-2个卤基取代，或
两个R7与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合C3-6碳环基环；
RA及RB各自独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C0-6亚烷基-C6-10芳基、C0-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基；
n为0-3；m为0-5；且o为0-5。
在一些实施例中，Z为O或NR1；
各RN独立地为H或C1-6烷基；
R1为任选经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-8碳环基或5至8元N-杂环，其中环氮任选经COO-C1-6烷基取代；
R2为C1-6烷基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、C1-6亚烷基-C6-10芳基或C1-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基，其中C1-6亚烷基任选经1-2个独立地选自C1-6卤烷基及C2-6烯基的取代基取代，且该碳环基、芳基及杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6卤烷基及CO2C1-6烷基；
R3为C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、C0-6亚烷基-C6-10芳基或氨基酸侧链；
各R4独立地为卤基、OH、CN、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷基-OH、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-6烷基氧基烷基、氧代(＝O)、NRASO2RB、SO2NRARB、COORA、C0-4亚烷基-C6-10芳基、C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基)或C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)；且该芳基、杂芳基及杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基，或
两个R4与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合5-12元碳环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基；
R5为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO、C(O)-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)、CONRNRN或C(O)-C(O)NRN-Y-X-A，其中A为C5-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环、C6-10芳基或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，且该碳环基、杂环基、芳基或杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基；
Y为任选经1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-6亚烷基：卤基、OH、NRNRN及C1-6烷氧基；
X为空、NRNRN、C(O)、SO2或OC(O)；
各R6独立地为H、C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO或C(O)-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)；
RA及RB各自独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C0-6亚烷基-C6-10芳基、C0-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基；
n为0-3；m为0-5；且o为0-5。
如本文所用，术语“烷基”或“亚烷基”意谓饱和的直链或支链烃。术语Cn意谓烷基具有“n”个碳原子。举例而言，C4烷基是指具有4个碳原子的烷基。C1-6烷基是指具有涵盖整个范围(即1至6个碳原子)以及所有子组(例如1-6、2-6、1-5、2-6、1-4、2-5、1、2、3、4、5及6个碳原子)的碳原子数的烷基。特定实例包含但不限于甲基、乙基、异丙基、正丙基、仲丁基及叔丁基。
如本文所用，术语“卤素”及“卤基”意谓F、Cl、Br或I。
术语“碳环”(或“碳环基”)是指非芳族单环、稠合、桥联或螺环系统，其环原子为碳，且其可为饱和的或具有一或多个不饱和单元。碳环可具有五至八个环碳原子。在一些实施例中，碳原子数为5至6。在一些实施例中，碳原子数为6。“稠合”双环系统包括共享两个邻接环原子的两个环。桥联双环基团包括共享三个或四个相邻环原子的两个环。螺双环系统共享一个环原子。环烷基可包含环烯基。特定实例包含但不限于环己基、环戊基、环丙基及环丁基。碳环未经取代或如本文所述经取代。
如本文所用，术语“杂环”是指非芳族单环、稠合、螺或桥联环系统，其可为饱和的或含有一或多个不饱和单元，具有五至八个环原子，其中一或多个(例如一至三个或一个、两个或三个)环原子为选自N、S及O的杂原子。“N-杂环”指示环杂原子中的至少一者为氮原子。在一些实施例中，杂环包括5-6个环成员。在一些实施例中，杂环包括5个环成员。在一些实施例中，杂环包括6个环成员。在一些实施例中，杂环为哌啶基。杂环的实例包含但不限于奎宁环基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、三氮杂环庚烷基、氮杂环辛烷基、二氮杂环辛烷基、三氮杂环辛烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、氧氮杂环辛烷基、氧氮杂环庚烷基、硫氮杂环庚烷基、硫氮杂环辛烷基、苯并咪唑酮基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吗啉基(包含例如3-吗啉基、4-吗啉基)、2-硫代吗啉基、3-硫代吗啉基、4-硫代吗啉基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、吡咯烷-2-酮、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑烷基、3-噻唑烷基、4-噻唑烷基、1-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、吲哚啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、苯并二硫杂环戊烷基、苯并二噻烷基、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮基及1,3-二氢-咪唑-2-酮基。杂环未经取代或如本文所述经取代。
术语“芳基”是指芳环基团仅具有碳环原子(通常六至十个)，且包含单环芳环如苯基，及其中两个或更多个碳环芳环彼此稠合的稠合多环芳环系统。在一些实施例中，芳基为苯基。芳基环未经取代或如本文所述经取代。
术语“杂芳基”是指杂环，其为芳族的，具有五至八个成员(例如5至6个成员)，包含单环杂芳环及其中单环芳环与一或多个其他芳环稠合的多环芳环。杂芳基具有一或多个选自N、O及S的环(例如1至4、1至3、1、2、3或4个)杂原子。如本文所用的术语“杂芳基”的范围内还包含芳环与一或多个非芳环(碳环或杂环)“稠合”的基团，其中基团或连接点位于芳环上。杂芳基的实例包含吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、咪唑基、吡咯基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基或噻二唑基，包含例如2-呋喃基、3-呋喃基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁二唑基、5-噁二唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、3-哒嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-三唑基、5-三唑基、四唑基、2-噻吩基、3-噻吩基、异噻唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,3-三唑基、1,2,3-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、吡嗪基及1,3,5-三嗪基。杂芳基环未经取代或如本文所述经取代。
如本文所用，术语“氨基酸侧链”是指氨基酸的侧链，例如丙氨酸的甲基、缬氨酸的异丙基、亮氨酸的异丁基、异亮氨酸的仲丁基。侧链所考虑的氨基酸包含丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷酰氨酸、谷氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、离氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸及缬氨酸。
如本文所述，本公开的化合物可任选经诸如一般说明或藉由本公开的具体类别、亚类及物种所例示的一或多个取代基取代。应了解，词组“任选经取代”可与词组“经取代或未经取代”互换使用。一般而言，术语“经取代”无论是否放在术语“任选”之后皆是指既定结构中的一或多个氢基团经指定取代基的基团置换。除非另有指示，否则任选经取代的基团可在该基团的每一可取代位置处具有一取代基。当既定结构中超过一个位置可经超过一个选自指定群组的取代基取代时，在各位置处该取代基可为相同的或不同的。
在一些情况下，至少一个RN为H。在一些情况下，至少一个RN为C1-6烷基。在一些情况下，各RN为H。在一些情况下，至少一个RN为C1-6烷基，例如甲基。在一些情况下，各RN为C1-6烷基，例如甲基。
在一些情况下，Z为O或NR1。在一些情况下，Z为O或键。在一些情况下，Z为O。在一些情况下，Z为键。在各种情况下，Z为NR1。在一些情况下，R1为任选经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-8碳环基。在一些情况下，R1为未经取代的C5-8碳环基。在一些情况下，R1为未经取代的C5-6碳环基。在一些情况下，R1为环戊基。在一些情况下，R1为环己基。在一些情况下，R1为经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-8碳环基。在一些情况下，R1为经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-6碳环基。在一些情况下，R1为经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5碳环基。在一些情况下，R1为经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C6碳环基。在一些情况下，R1为经C1亚烷基-C6-10芳基取代的C5碳环基。在一些情况下，R1为经C1亚烷基-C6-10芳基取代的C6碳环基。在一些情况下，R1为经苯甲基取代的C5-6碳环基。在一些情况下，R1为经苯甲基取代的C5碳环基。在一些情况下，R1为经苯甲基取代的C6碳环基。
在一些情况下，R1为5至8元N-杂环，其中环氮经COO-C1-6烷基取代。在一些情况下，R1为5至6元N-杂环，其中环氮经COO-C1-6烷基取代。在一些情况下，R1为6元N-杂环，其中环氮经COO-C1-6烷基取代。在一些情况下，R1为6元N-杂环，其中N-杂环环氮经COO-叔丁基取代。
在一些情况下，R2为C1-6烷基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-10元杂环基、C1-6亚烷基-C6-10芳基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基或C1-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基，其中C1-6亚烷基经1-3个R7取代。在一些情况下，R2为C1-6烷基。在一些情况下，R2为甲基。在一些情况下，R2为C1-6亚烷基-C6-10芳基。在一些情况下，R2为C1-6亚烷基-C6芳基。在一些情况下，R2为苯甲基。在一些情况下，R2为C1-6亚烷基-C5-8碳环基。在一些情况下，R2为具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-10元杂环基。在一些情况下，R2为C1-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基。在一些情况下，R2的C1-6亚烷基经1-3个R7取代。在一些情况下，R2的C1-6亚烷基经1个R7取代。在一些情况下，R2的C1-6亚烷基经2个R7取代。在一些情况下，R2的C1-6亚烷基经3个R7取代。在一些情况下，R2的C1-6亚烷基未经取代。在一些情况下，R2的碳环基、杂环基、芳基或杂芳基经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6亚烷基-C6-10芳基、O-C1-6亚烷基-C6-10芳基及CO2C1-6烷基。在一些情况下，R2的碳环基、杂环基、芳基或杂芳基经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6卤烷基及CO2C1-6烷基。在一些情况下，R2的碳环基、杂环基、芳基或杂芳基未经取代。
在一些情况下，R3为C1-6烷基。在一些情况下，R3为C4烷基。在一些情况下，R2为
Figure GDA0003977862690000141
在一些情况下，R3为C1-6亚烷基-C5-8碳环基。在一些情况下，R3为C1-6亚烷基-C6碳环基。在一些情况下，R3为
Figure GDA0003977862690000142
在一些情况下，R3为C2-6烯基或C2-6炔基。在一些情况下，R3为C0-6亚烷基-C6-10芳基。在一些情况下，R3为氨基酸侧链。在各种情况下，氨基酸侧链为甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、CH2CH2SCH3、CH2-吲哚基、苯甲基、CH2OH、CH(OH)CH3、CH2SH、CH2-(4-OH-苯基)、CH2C(O)NH2、CH2CH2C(O)NH2、CH2COOH、CH2CH2COOH、CH2CH2CH2CH2NH2、CH2CH2CH2NHC(NH)NH2或咪唑基。
在本文所公开的化合物中，m为0-5。在各种情况下，m为0。在一些情况下，m为1。在一些情况下，m为2。在一些情况下，m为3-5。
在一些情况下，n为0。在一些情况下，n为1、2或3，或为1或2。在一些情况下，各R4独立地为C1-6烷基、氧代(＝O)、C0-4亚烷基-C6-10芳基、C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-12元杂芳基)或C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环)；且芳基、杂芳基及杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基。在一些情况下，至少一个R4为卤基、OH、CN、C1-6卤烷基、C1-6烷基-OH、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-6烷基氧基烷基、NRASO2RB、SO2NRARB或COORA。在一些情况下，两个R4组合形成螺或稠合5-8元碳环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C1-6亚烷基-O-C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基、SO2-C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基。在一些情况下，两个R4组合形成螺或稠合5-8元碳环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基。在一些实施例中，n为1，且R4为C1-6烷基、氧代(＝O)、C0-4亚烷基-C6-10芳基、C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-12元杂芳基)或C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环)；且芳基、杂芳基及杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基。在一些情况下，n为2，且各R4独立地为C1-6烷基、氧代(＝O)、C0-4亚烷基-C6-10芳基、C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基)或C0-4亚烷基-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)；且芳基、杂芳基及杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基。在一些情况下，n为2，且两个R4与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合5-12元碳环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基。在一些情况下，两个R4与其所附接的碳一起形成螺5-12元碳环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基。在一些情况下，两个R4与其所附接的碳一起形成稠合5-12元碳环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基。
在本文所公开的化合物中，o为0-5。在一些情况下，o为0。在一些情况下，o为1或2。在各种实施例中，各R6为H。在一些情况下，至少一个R6为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO或C(O)-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)。
在一些情况下，R5为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、-[C(O)]1-2-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)、-[C(O)]1-2-NRNRN、C(O)-Y-H或C(O)-C(O)NRN-Y-X-A，其中A为H、C3-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环、C6-10芳基或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，且碳环基、杂环基、芳基或杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基。在一些情况下，R5为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO、C(O)-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)或CONRNRN。在一些情况下，R5为C1-6亚烷基-OH。在一些情况下，R5为经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH。在一些情况下，R5为经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH。在一些情况下，R5为经SO3H取代的C1亚烷基-OH。在一些情况下，R5为C(O)-Y-H。在一些情况下，R5为CHO。在一些情况下，R5为C(O)-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)。在一些情况下，R5为C(O)-C(O)(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)。在一些情况下，R5为CONRNRN。在一些情况下，R5为C(O)-C(O)NRNRN。
在一些情况下，R5为C(O)-C(O)NRN-Y-X-A，其中A为H、C3-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环、C6-10芳基或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，且碳环基、杂环基、芳基或杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基；Y为任选经1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-6亚烷基：卤基、OH、NRNRN及C1-6烷氧基；且X为空、NRNRN、C(O)、SO2或OC(O)。在一些情况下，A为C5-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环、C6-10芳基或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，且碳环基、杂环基、芳基或杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基；Y为任选经1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-6亚烷基：卤基、OH、NRNRN及C1-6烷氧基；且X为空、NRNRN、C(O)、SO2或OC(O)。在各种情况下，RN为H。在各种情况下，Y为C1-6亚烷基。在一些情况下，Y为键、C1-6亚烷基或C1-6亚烯基，其中C1-6亚烷基及C1-6亚烯基任选经1-3个独立地选自以下的取代基取代：卤基、OH、NRNRN及C1-6烷氧基。在一些情况下，Y为经1-3个(或1个)独立地选自以下的取代基取代的C1-6亚烷基：卤基、OH、NRNRN及C1-6烷氧基。在一些情况下，X为键。在一些情况下，X为NRNRN、C(O)、SO2或OC(O)。在各种情况下，A为C5-8碳环基或C6-10芳基，且任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基。在一些情况下，A为具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基。在一些情况下，A包括吡啶基(例如2-吡啶基)。
在一些情况下，各R7独立地为卤基、C1-6卤烷基、C2-6烯基、C3-5碳环基或C0-6亚烷基-C6-10芳基，且C6-10芳基任选经1-2个卤基取代。在一些情况下，至少一个R7为卤基。在一些情况下，至少一个R7为C1-6卤烷基。在一些情况下，至少一个R7为C2-6烯基。在一些情况下，至少一个R7为C3-5碳环基。在一些情况下，至少一个R7为C0-6亚烷基-C6-10芳基，且C6-10芳基任选经1-2个卤基取代。在一些情况下，至少一个R7为C0-6亚烷基-C6-10芳基，且C6-10芳基经1-2个卤基取代。在一些情况下，至少一个R7为C0-6亚烷基-C6-10芳基，且C6-10芳基未经取代。在一些情况下，至少一个R7为任选经1-2个卤基取代的苯基。在一些情况下，至少一个R7为任选经1个卤基取代的苯基。在一些情况下，至少一个R7为氯苯基。在一些情况下，至少一个R7为苯基。在一些情况下，两个R7与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合C3-6碳环基环。在一些情况下，两个R7与其所附接的碳一起组合形成螺C3-6碳环基环。在一些情况下，两个R7与其所附接的碳一起组合形成稠合C3-6碳环基环。
在一些情况下，RA及RB各自独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C0-6亚烷基-C6-10芳基、C0-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基。在一些情况下，RA及RB中的至少一者为H。在一些情况下，RA及RB都为H。在一些情况下，RA及RB中的至少一者为C1-6烷基。在一些情况下，RA为C1-6烷基。在一些情况下，RA为甲基。在一些情况下，RB为C1-6烷基。在一些情况下，RB为甲基。
所涵盖的特定化合物包含下表中的化合物。示出具体立体异构中心的化合物指示至少一种相对立体异构性。未指示具体立体异构性的具有手性中心的化合物指示所述手性中心处的立体异构中心的混合物。
化合物可为表A中所列的化合物或其药学上可接受的盐。
表A
Figure GDA0003977862690000191
Figure GDA0003977862690000201
Figure GDA0003977862690000211
化合物可为表B中所列的化合物或其药学上可接受的盐。
表B
Figure GDA0003977862690000212
化合物可为表C中所列的化合物或其药学上可接受的盐。
表C
Figure GDA0003977862690000221
Figure GDA0003977862690000231
Figure GDA0003977862690000241
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本文所公开的化合物可用作生物样本或患者中的诺如病毒或冠状病毒复制的抑制剂。这些化合物还可以适用于降低生物样本或患者中的诺如病毒或冠状病毒的量(病毒滴度)。其还可以适用于生物样本或患者的由诺如病毒或冠状病毒引起的感染的治疗性及预防性治疗。
药学上可接受的盐
本文所述的化合物可以游离形式或在适当时以盐形式存在。药学上可接受的那些盐备受关注，因为其可用于出于医疗目的给与下文所述的化合物。药学上不可接受的盐可用于制造制程，用于分离及纯化目的，且在一些情况下用于分离本公开的化合物或其中间物的立体异构形式。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指合理医疗判断范围内适用于接触人类及低等动物的组织而无不当副作用(诸如毒性、刺激、过敏反应及其类似副作用)且满足合理利益/风险比的化合物的盐。
药学上可接受的盐在本领域中已熟知。举例而言，S.M.Berge等人在《医药科学杂志(J.Pharmaceutical Sciences)》,1977,66,1-19中详细描述药学上可接受的盐，该文献以引用方式并入本文中。本文所述的化合物的药学上可接受的盐包含衍生自适合的无机酸及碱以及有机酸及碱的那些盐。可在化合物的最终分离及纯化期间就地制备这些盐。
在本文所述的化合物含有碱基或足够碱性的生物电子等排物体的情况下，酸加成盐可藉由1)使呈其游离碱形式的纯化化合物与适合的有机或无机酸反应及2)分离因此形成的盐来制备。在实践中，酸加成盐可为供使用的更适宜形式，且所述盐的使用相当于游离碱形式的使用。
药学上可接受的无毒酸加成盐的实例为胺基与无机酸(诸如氢氯酸、氢溴酸、磷酸、硫酸及过氯酸)或与有机酸(诸如乙酸、草酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸)形成的盐，或藉由使用此项技术中所用的其他方法(诸如离子交换)形成的盐。其他药学上可接受的盐包含己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐(borate)、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、葡糖酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐(picrate)、特戊酸盐、丙酸盐、柳酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐及类似物。
在本文所述的化合物含有羧基或足够酸性的生物电子等排物体的情况下，碱加成盐可藉由以下来制备：1)使呈其酸形式的经纯化化合物与适合有机或无机碱反应及2)分离因此形成的盐。在实践中，碱加成盐的使用可为更适宜形式，且该盐形式本身的使用相当于游离酸形式的使用。衍生自适当碱的盐包含碱金属(例如钠、锂及钾)盐、碱土金属(例如镁及钙)盐、铵盐及N+(C1-4烷基)4盐。本公开还设想本文所公开的化合物的任何碱性含氮基团的四级铵化。藉由该四级铵化可获得水溶性或油溶性或可分散性产物。
碱加成盐包含药学上可接受的金属盐及胺盐。适合的金属盐包含钠、钾、钙、钡、锌、镁及铝。钠盐及钾盐通常为优选的。在适当时，其他药学上可接受的盐包含使用诸如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低碳数烷基磺酸盐及芳基磺酸盐的相对离子形成的无毒铵、四级铵及胺阳离子。适合的无机碱加成盐由金属碱制备，该金属碱包含氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化锌及其类似金属碱。适合的胺碱加成盐由因其低毒性及医学用途的可接受性而时常用于药物化学的胺制备。氨、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、离氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N,N'-二苯甲基乙二胺、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、二乙醇胺、普鲁卡因(procaine)、N-苯甲基苯乙基胺、二乙胺、哌
Figure GDA0003977862690000751
、三(羟基甲基)-胺基甲烷、四甲基氢氧化铵、三乙胺、二苯甲基胺、安非胺(ephenamine)、去氢枞胺(dehydroabietylamine)、N-乙基哌啶、苯甲胺、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、碱性氨基酸、二环己胺及类似物。
其他酸及碱在其本身并非药学上可接受时可用于制备在获得本文所述的化合物及其药学上可接受的酸或碱加成盐时适用作中间物的盐。
应理解，本文所公开的化合物可能以不同药学上可接受的盐的混合物/组合的形式存在。还涵盖游离形式的化合物及药学上可接受的盐的混合物/组合。
药物组合物
本文所述的化合物可配制成进一步包括药学上可接受的载剂、稀释剂、佐剂或媒剂的药物组合物。在实施例中，本发明涉及一种药物组合物，包括上文所述的化合物或其盐，及药学上可接受的载剂、稀释剂、佐剂或媒剂。在实施例中，药物组合物包括安全且有效量的如本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载剂、稀释剂、佐剂或媒剂。药学上可接受的载剂包含例如关于预期给与形式适当选择且符合常规药学实践的药用稀释剂、赋形剂或载剂。
“有效量”包含“治疗有效量”及“预防有效量”。术语“治疗有效量”是指在治疗和/或改善患者的诺如病毒或冠状病毒感染方面有效的量。术语“预防有效量”是指在预防和/或实质上减轻诺如病毒或冠状病毒感染爆发的机会或规模方面有效的量。
药学上可接受的载剂可含有并不过度抑制化合物的生物活性的惰性成分。药学上可接受的载剂应为生物相容的，例如无毒、非炎性、非免疫原性或在向个体给与后无其他非所要反应或副作用。可采用标准药物配制技术。
如本文所使用的药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂包含适用于所期望具体剂型的任何溶剂、稀释剂或其他液体媒剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体黏合剂、润滑剂及类似物。《雷明顿氏药物科学(Remington's PharmaceuticalSciences)》,第十六版,E.W.Martin(Mack Publishing公司,Easton,Pa.,1980)公开了用于配制药学上可接受的组合物的各种载剂及其已知制备技术。除非任何常规载剂介质诸如藉由产生任何不合需要的生物效应或另外以有害方式与药学上可接受的组合物的任何其他组分相互作用而与本文所述的化合物不相容，否则预期其使用属于本公开范围内。如本文所用，词组“副作用”涵盖疗法(例如，预防剂或治疗剂)的不希望及不良的作用。副作用始终是不希望的，但不希望的作用不一定是不利的。疗法(例如，预防剂或治疗剂)的不良作用可为有害或不适合或有风险的。副作用包含但不限于发热、发冷、嗜睡、胃肠道毒性(包含胃肠溃疡及糜烂)、恶心、呕吐、神经毒性、肾毒性、肾脏毒性(包含如乳头状坏死及慢性间质性肾炎的此类病况)、肝毒性(包含血清肝脏酶水平升高)、骨髓毒性(包含白细胞减少症、骨髓抑制、血小板减少症及贫血)、口腔干燥、金属味、妊娠延长、无力、嗜眠、疼痛(包含肌肉痛、骨痛及头痛)、脱发、乏力、眩晕、椎体外症状、静坐不能、心血管紊乱及性功能障碍。
可充当药学上可接受的载剂的物质的一些实例包含但不限于：离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白(诸如人血清白蛋白)；缓冲物质(诸如twin 80、磷酸盐、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾)；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠或锌盐)；胶态二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚环氧丙烷嵌段聚合物；甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素；羊毛脂；糖，诸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉及马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及乙酸纤维素；黄蓍粉末；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可脂及栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；二醇，诸如丙二醇或聚乙二醇；酯，诸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁及氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗生理盐水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；及磷酸盐缓冲溶液；且诸如月桂基硫酸钠及硬脂酸镁的其他无毒相容润滑剂，以及根据配制者的判断，着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂及芳香剂、防腐剂及抗氧化剂也可存在于组合物中。
用于经肺递送的制剂
在一些实施例中，本文所公开的药物组合物适用于藉由吸入经由气道直接给与至下呼吸道(例如，肺)。藉由吸入给与的组合物可呈可吸入粉末组合物或液体或粉末喷雾剂形式，且可能以标准形式使用粉末吸入装置或气溶胶分配装置来给与。此类装置为众所周知的。对于藉由吸入给与，粉末状制剂通常包括活性化合物以及惰性固体粉末状稀释剂(诸如乳糖或淀粉)。可吸入干粉组合物可存在于明胶或类似物质的胶囊及药筒或者用于吸入器或吹入器的层压铝箔的泡壳中。各胶囊或药筒可通常含有例如约10mg至约100g各活性化合物。可替代地，组合物可呈现为不含赋形剂。
可吸入组合物可经封装用于单位剂量或多剂量递送。举例而言，组合物可按类似于以下中所述方式封装以用于多剂量递送：GB 2242134、美国专利第6,632,666号、第5,860,419号、第5,873,360号及第5,590,645号(都例示了“Diskus”装置)；或GB2i78965、GB2129691、GB2169265、美国专利第4,778,054号、第4,811,731号及第5,035,237号(其例示了“Diskhaler”装置)；或者EP 69715(“Turbuhaler”装置)或GB 2064336及美国专利第4,353,656号(“Rotahaler”装置)。
用于藉由吸入表面递送至肺的喷雾组合物可配制为水溶液或悬浮液或自加压包装递送的气溶胶，诸如定剂量吸入器(MDI)，其中使用适合的液化推进剂，包含氢氟烷烃，诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷及尤其1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷及其混合物。适用于吸入的气溶胶组合物可以悬浮液或溶液形式呈现。
藉由吸入给与的药物通常具有受控制粒度。用于吸入至支气管系统中的最优选粒度通常为约1μm至约10μm，且在一些实施例中，为约2μm至约5μm。具有大于约20μm辅粒度的颗粒一般过大而在吸入时不能达至较小呼吸道。为达成这种粒度，活性成分颗粒可经历诸如微粉化的粒度减小处理过程。可藉由风选或筛分分离出所期望粒度部分。更优选地，所述颗粒将为结晶。
鼻内喷雾剂可使用水性或非水性媒剂添加诸如增稠剂、调节pH的缓冲盐或酸或碱、等渗调节剂或抗氧化剂等试剂来配制。
用于藉由雾化吸入的溶液可使用水性媒剂并添加诸如酸或碱、缓冲盐、等渗调节剂或抗菌剂等试剂来配制。其可藉由过滤或在高压釜中加热来灭菌，或呈现为非灭菌产品。雾化器以自制剂水溶液产生的薄雾形式供应气溶胶。
在一些实施例中，本文中所公开的药物组合物可与补充活性成分一起配制。
在一些实施例中，本文所公开的药物组合物通过自干粉吸入器给与。在其他实施例中，本文所公开的药物组合物藉由气溶胶分配装置任选结合诸如
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吸入室的吸入室来给与。
载剂可为含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇、液体聚乙二醇及类似物)、其合适混合物和/或植物油的溶剂或分散介质。可例如藉由使用诸如卵磷脂的包衣、在分散液情况下藉由维持所要粒度、及藉由使用表面活性剂来维持适当流动性。藉由添加抗细菌和/或抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞及类似物)来达成预防本文中所公开的组合物中的微生物作用。在许多情况下，优选包含等渗剂，例如糖或氯化钠。可藉由在组合物中使用推迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝及明胶)来延长可注射组合物的吸收。
在一些实施例中，药物组合物可处于控制组合物释放的基质内。在一些实施例中，所述基质可包括：脂质、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚己内酯、聚(乙醇酸)、聚(乳酸)、聚己内酯、聚乳酸、聚酸酐、聚丙交酯-共-乙交酯、聚氨基酸、聚氧化乙烯、丙烯酸封端的聚氧化乙烯、聚酰胺、聚乙烯、聚丙烯腈、聚磷氮烯、聚(原酸酯)、蔗糖乙酸异丁酸酯(SAIB)及其组合，以及例如美国专利第6,667,371号、第6,613,355号、第6,596,296号、第6,413,536号、第5,968,543号、第4,079,038号、第4,093,709号、第4,131,648号、第4,138,344号、第4,180,646号、第4,304,767号、第4,946,931号中所公开的其他聚合物，所述文献中各自明确地以全文引用方式并入本文中。在这些实施例中，基质持续释放药物。
药学上可接受的载剂和/或稀释剂还可以包含任何溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和/或抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂以及类似物。此类介质及药剂用于药物活性物质的用途在本领域中已熟知。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则考虑将其用于药物组合物中。
药物组合物可根据常规技术经配制以供给与。参见例如Remington《药学科学与实践(The Science and Practice of Pharmacy)》(第20版，2000)。举例而言，本公开的鼻内药物组合物可配制为气溶胶(此术语包含液体与干粉气溶胶)。如本领域技术人员已知的，液体颗粒的气溶胶可藉由任何适合的手段产生，诸如使用压力驱动的气溶胶雾化器或超声波雾化器。参见例如美国专利第4,501,729号。固体颗粒的气溶胶(例如冻干、冷冻干燥等)可同样使用任何固体微粒药剂气溶胶产生器藉由药学领域中已知的技术来产生。作为另一实例，药物组合物可经配制为按需可溶形式，其提供药物组合物的冻干部分及药物组合物的溶解溶液部分。
在一些实施例中，药物组合物呈水性悬浮液形式，其可由溶液或悬浮液制备。对于溶液或悬浮液，剂型可由亲脂性物质、脂质体(磷脂小泡/膜)和/或脂肪酸(例如，棕榈酸)的胶束微胞组成。在特定实施例中，药物组合物为能够溶解于由经给与、施用和/或递送药物组合物的组织上皮细胞黏膜所分泌的流体中的溶液或悬浮液，其可有利地增强吸收。
药物组合物可为水溶液、非水溶液或水溶液及非水溶液的组合。适合的水溶液包含但不限于：水凝胶、水性悬浮液、水性微球体悬浮液、水性微球体分散液、水性脂质体分散液、脂质体的水性胶束、水性微乳液、及前述的任何组合，或可溶解于鼻腔黏膜分泌的流体中的任何其他水溶液。例示性非水溶液包含但不限于：非水凝胶、非水性悬浮液、非水性微球体悬浮液、非水性微球体分散液、非水性脂质体分散液、非水性乳液、非水性微乳液、及前述的任何组合，或可溶解或混合于黏膜分泌的流体中的任何其他非水溶液。
粉末制剂的实例包含但不限于：纯粉末混合物、微米化粉末、冷冻干燥粉末、冻干粉末、粉末微球、包衣粉末微球、脂质体分散液、及前述的任何组合。粉末微球可由各种多醣及纤维素形成，包含但不限于淀粉、甲基纤维素、黄原胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆(carbomer)、聚乙烯醇海藻酸盐、阿拉伯胶、壳聚糖及其任何组合。
在特定实施例中，组合物为至少部分或甚至大量(例如至少80％、90％、95％或更多)可溶于黏膜分泌的流体中以便有助于吸收的组合物。或者或另外，组合物可配制有促进药剂溶解于分泌物内的载剂和/或其他物质，包含但不限于脂肪酸(例如，棕榈酸)、神经节苷脂(例如，GM-1)、磷脂(例如，磷脂酰丝氨酸)及乳化剂(例如，聚山梨醇酯80)。
本领域技术人员将了解，对于鼻内给与或递送，由于给与的药物组合物的量通常较小，故鼻分泌物可能改变所给与剂量的pH，因为鼻腔中的pH范围可宽达5至8。此类改变可影响可供吸收的未离子化药物的浓度。因此，在代表性实施例中，药物组合物进一步包括缓冲剂以就地维持或调节pH。典型的缓冲剂包含但不限于抗坏血酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、谷醇溶蛋白、碳酸盐及磷酸盐缓冲剂。
在实施例中，选择药物组合物的pH以使得黏膜组织内部环境在给与后处于酸性至中性，这(1)可提供未游离化形式的活性化合物以供吸收，(2)阻止更可能出现于碱性环境中的病原菌的生长，及(3)降低黏膜刺激的可能性。
对于液体及粉末喷雾剂或气溶胶，药物组合物可经配制以具有任何适合且所期望的粒度或液滴大小。在说明性实施例中，颗粒或液滴的大部分和/或平均粒度的范围等于或大于约1、2.5、5、10、15或20微米和/或等于或小于约25、30、40、45、50、60、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400或425微米(包含前述的所有组合)。大部分和/或平均粒度或液滴大小的合适范围的代表性实例包含但不限于约5至100微米、约10至60微米、约175至325微米及约220至300微米，其有助于安全且有效量的活性化合物例如在鼻腔中(例如，在鼻腔上部三分之一、上鼻道、嗅区和/或通向嗅觉神经通路的鼻窦区中)的沉积。一般而言，小于约5微米的颗粒或液滴将沉积于气管或甚至肺中，而为约50微米或更大的颗粒或液滴一般不能达至鼻腔且沉积于鼻前部。
国际专利公开WO 2005/023335(Kurve Technology公司)描述了具有适合于实践本文中所公开的药物组合物的代表性实施例的直径大小的颗粒及液滴。在特定实施例中，颗粒或液滴具有约5至30微米、约10至20微米、约10至17微米、约10至15微米、约12至17微米、约10至15微米或约10至12微米的平均直径。颗粒可“实质上”具有如本文中所述的平均直径或大小，即至少约50％、60％、70％、80％、90％或95％或大于95％的颗粒具有所指示直径或大小范围。
药物组合物能够以具有如上文所述的液滴大小的喷雾化或雾化液体形式递送。
根据包括鼻内递送方法的本公开的特定实施例，可能期望延长药物组合物在鼻腔中(例如，在鼻腔上部三分之一、上鼻道、嗅区和/或鼻窦区中)的滞留时间，例如以增强吸收。因此，药物组合物可任选与以下一起配制：生物黏附聚合物、胶(例如黄原胶)、壳聚糖(例如高度纯化的阳离子多醣)、果胶(或当施用至鼻黏膜时如同凝胶一样稠化或乳化的任何碳水化合物)、微球体(例如淀粉、白蛋白、葡聚糖、环糊精)、明胶、脂质体、卡波姆、聚乙烯醇、海藻酸盐、阿拉伯胶、壳聚糖和/或纤维素(例如甲基或丙基纤维素；羟基或羧基纤维素；羧甲基或羟丙基纤维素)，其为增加在鼻腔中的滞留时间的试剂。作为另一方法，增大制剂黏度也可提供延长药剂与鼻上皮接触的手段。药物组合物可配制为鼻用乳液、软膏或凝胶，其由于其黏度而提供局部施用的优势。
潮湿及高度血管化的膜可有助于快速吸收；因此，药物组合物可任选包括保湿剂，尤其在基于凝胶的组合物的情况下，以确保足够的鼻内水分含量。适合的保湿剂的实例包含但不限于丙三醇(glycerin/glycerol)、矿物油、植物油、膜调节剂、舒缓剂和/或糖醇(例如木糖醇、山梨糖醇；和/或甘露糖醇)。保湿剂在药物组合物中的浓度将视所选试剂及制剂而变化。
药物组合物还可任选包含吸收增进剂，诸如抑制酶活性、降低黏液的黏度或弹性、降低黏膜纤毛清除效应、打开紧密结合和/或溶解活性化合物的试剂。化学增强剂为本领域中已知且包含螯合剂(例如，EDTA)、脂肪酸、胆酸盐、表面活性剂和/或防腐剂。当配制展现较差膜渗透率、缺乏亲脂性和/或由氨基肽酶降解的化合物时，渗透增强剂可尤其适用。吸收增强剂在药物组合物中的浓度将视所选试剂及制剂而变化。
为了延长储存寿命，可任选将防腐剂添加至药物组合物。适合的防腐剂包含但不限于苯甲醇、对羟基苯甲酸酯、硫柳汞、氯丁醇及羟基氯苯胺、以及前述的组合。防腐剂的浓度将视使用的防腐剂、所配制的化合物、制剂及其类似物而变化。在代表性实施例中，防腐剂以约2重量％或更小的量存在。
本文所述的药物组合物可任选含有气味剂，例如如EP 0 504 263B1中所描述，以提供对气味的感觉，以便有助于吸入组合物，从而促进向嗅区递送和/或藉由嗅觉神经元触发运输。
作为另一选项，组合物可包括调味剂，例如以增强味道和/或个体对组合物的可接受性。
经肺给与的多孔颗粒
在一些实施例中，颗粒为多孔的，使得其具有适当密度以避免在经由吸入器给与时沉积于咽喉后部。相对较大粒度及相对较低密度的组合避免肺中的吞噬作用，提供适当的靶向递送，避免组分的全身递送且在肺内提供高浓度组分。
用于制备此类颗粒及用于递送此类颗粒的代表性方法描述于以下中：例如标题为“用于经肺递送的颗粒组合物(Particulate compositions for pulmonary delivery)”的美国专利第7,384,649号；标题为“用于经肺递送的颗粒组合物(Particulatecompositions for pulmonary delivery)”的美国专利第7,182,961号；标题为“吸入装置及方法(Inhalation device and method)”的美国专利第7,146,978号；标题为“用于吸入的具有持续释放特性的颗粒(Particles fo r i nhalation h aving s ustained release properties)”的美国专利第7,048,908号；标题为“稳定喷雾干燥蛋白制剂(Stablespray-dried protein formulations)”的美国专利第6,956,021号；标题为“吸入装置(Inhalation d evice)”的美国专利第6,766,799号；及标题为“吸入装置及方法(Inhalation device and method)”的美国专利第6,732,732号。
公开了此类颗粒的额外专利包含：标题为“喷雾干燥多孔大颗粒的配制(Formulation for spray-drying large porous particles)”的美国专利第7,279,182号；标题为“使用简单氨基酸形成多孔颗粒(Use of simple amino acids to form porousparticles)”的美国专利第7,252,840号；标题为“吸入装置及方法(Inhalation device and m ethod)”的美国专利第7,032,593号；标题为“用于产生干燥颗粒的方法及设备(Method a nd apparatus for producing dry particles)”的美国专利第7,008,644号；标题为“产生多孔大颗粒的工艺湿度的控制(Control of process humidity to producelarge,porous particles)”的美国专利第6,848,197号；及标题为“喷雾干燥多孔大颗粒的配制(Formulation for spray-drying large porous particles)”的美国专利第6,749,835号。
标题为“用于吸入的具有持续释放特性的颗粒”的美国专利第7,678,364号公开了用于将颗粒递送至肺部系统的方法，其包括：向需要治疗、预防或诊断的患者的呼吸道给与安全且有效量的干燥粉末，该干燥粉末包括：a)与治疗剂、预防剂或诊断剂复合的多价金属阳离子，b)药学上可接受的载剂，及c)含多价金属阳离子的组分，其中该干燥粉末经喷雾干燥且具有为药剂总重量的约10％w/w或更多的多价金属阳离子总量、约0.4g/cm3或更小的敲紧密度、约5微米至约30微米的中值几何直径及约1至约5微米的空气动力直径。
颗粒中存在的本文所述的化合物或其盐的量可在约0.1重量％至约95重量％的范围内，尽管在一些情况下，可甚至高达100％。例如，约1至约50％，诸如约5至约30％。化合物分布于在整个颗粒中的颗粒可为优选的。
在一些实施例中，颗粒包含除上文所述的磷脂外的表面活性剂。如本文所使用，术语“表面活性剂”是指优先吸收至两种不可混溶相之间的界面(诸如水与有机聚合物溶液之间的界面、水/空气界面或有机溶剂/空气界面)的任何试剂。表面活性剂一般具有亲水性部分及亲脂性部分，使得其在吸收至颗粒时倾向将不吸引类似包覆颗粒的部分呈现给外部环境，因此减少颗粒集结。表面活性剂还可促进治疗剂或诊断剂的吸收且提高药剂的生物利用度。
可用于制造本文中所公开的颗粒的适合表面活性剂包含但不限于：十六烷醇；脂肪醇，诸如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂醚；表面活性脂肪酸，诸如棕榈酸或油酸；甘胆酸盐；表面活性肽(surfactin)；泊洛沙姆(poloxamer)；脱水山梨糖醇脂肪酸酯，诸如脱水山梨糖醇三油酸酯(Span 85)；
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80；及泰洛沙泊(tyloxapol)。
表面活性剂可以约0至约5重量％范围内的量存在于颗粒中。优选地，其可以约0.1至约1.0重量％范围内的量存在于颗粒中。
具有小于约0.4g/cm3的敲紧密度、至少约5μm的中值直径及约1μm至约5μm或约1μm至约3μm的空气动力直径的颗粒更能够避免口咽区中的惯性及重力沉积，且靶向呼吸道或肺深部。使用更大的、更多孔的颗粒是有利的，因为其能够比较小的、更致密辅气溶胶颗粒(诸如当前用于吸入疗法的那些颗粒)更有效地气溶胶化。
脂质体递送
本文所述的组合物有利地经递送至肺，以在实际或潜在的诺如病毒或冠状病毒感染位点处提供化合物。这可藉由经肺递送经由定剂量吸入器或其他经肺递送装置实现，且也可以藉由将颗粒放置在肺中的肺泡周围的毛细血管床中实现。
包含较小单层囊泡的纳米载剂(诸如脂质体)展示优于用于将药物递送至肺的其他常规方法的若干优势，包含延长的药物释放及细胞特异性靶向药物递送。纳米级药物载剂还可有利于递送水溶性较差的药物，且本文所述的化合物中的某些水溶性较差。额外优势包含其提供受控释放、保护以免代谢及降解、降低的药物毒性及靶向能力的能力。
脂质体(优选为单层囊泡)如藉由动态光散射量测具有小于200nm的大小，且优选特征在于由化学上纯的合成磷脂组成，最优选具有长度为至少16个碳的脂族侧链，且含有本文所述的化合物中的一或多者或其药学上可接受的盐，其足以将一定量的所述化合物优先递送(即靶向)至肺泡周围的毛细血管床。可例如藉由动态光散射使用氦-氖100mW NEC气体激光及Malvern K7027相关器量测囊泡直径，理想地每次产生至少两个或三个量测值以用于各大小判定。
表述“化学上纯的磷脂”旨在定义基本上不含有害洗涤剂部分及引起其形成较小单层囊泡(SUV)聚集的杂质且纯度超过97％的磷脂。优选地，脂质体的直径绝大多数为约50至约160nm，电荷基本上为中性，且并入侧链长度为16至18个碳原子的磷脂。更优选地，脂质体由二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)制备且包含作为囊泡稳定剂的胆固醇(最优选占全部脂质的10％至50％的量)。
脂质体具有高于体温(即大于37℃)的熔点是有利的。出于此原因，使用纯磷脂，优选为饱和且具有至少16个碳、优选16个碳与18个碳之间的碳链长度的磷脂是有利的。二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)为优选的磷脂。
胆固醇有助于稳定脂质体且优选以足以提供脂质体稳定性的量添加。最优选地，脂质体进一步包括聚乙二醇化磷脂，诸如DSPEPEG。该方法涉及向患者的血流中引入一定量脂质体，此类脂质体大小小于200nm(优选为单层囊泡)且特征优选在于包括化学上纯的合成磷脂，最优选具有长度为至少16个碳的脂族侧链，且含有本文所述的化合物或其药学上可接受的盐或前药，其足以将一定量的化合物优先递送(即靶向)至肺中肺泡周围的毛细血管床。
本文所述的化合物可与其他抗诺如病毒剂或抗冠状病毒剂组合。此类额外药剂也可存在于所述脂质体中，可存在于不同脂质体中，或可经由不同途径共同给与。
脂质体包含本文所述的化合物中的一或多者或其药学上可接受的盐，且可任选包含其他抗诺如病毒剂或抗冠状病毒剂。脂质体可藉由将磷脂及胆固醇溶解于诸如氯仿的适当有机溶剂中并蒸发溶剂以形成脂质膜来制备。若采用离子载体来将本文所述的化合物载入脂质体中，则可在蒸发前将离子载体添加至脂质溶液。接着将干燥脂质膜于适当水相中再水合，该水相为诸如磷酸盐缓冲盐水或其他生理学上适当的溶液。水溶性药物或治疗剂可含于水合溶液中，但若期望远距离装载，则可将诸如上文所述的螯合剂的装载剂添加至水合溶液以包封于脂质体的内部水空间内。
在添加水合溶液时，不同大小的脂质体自发地形成且包封一部分水相。其后，使脂质体及悬浮水溶液经受诸如挤压的剪切力、声波处理或根据美国专利第4,753,788号中所述的方法经由均质器进行的处理；以产生特定大小范围内的囊泡。
随后可处理脂质体以自悬浮溶液去除非所期望化合物，例如未包封药物，其可经由诸如凝胶色谱或超滤的过程实现。
脂质体于干粉气溶胶中用于靶向肺递送的用途描述于例如Willis等人，《肺(Lung)》,2012年6月,190(3):251-262中。一个优势为用于制备脂质体的磷脂与内源性肺表面活性剂类似。
给与途径及剂量
视所治疗感染的严重程度而定，上文所述描述的化合物及药学上可接受的组合物可经口、经直肠、非经肠、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(作为散剂、软膏或滴剂)、经颊、作为经口或经鼻喷雾、至经肺系统(诸如藉由使用吸入器，诸如定剂量吸入器(MDI))或其类似途径向人类及其他动物给与。在一些实施例中，本文所公开的化合物或组合物经口服、经由吸入或静脉内给与。
用于经口给与的液体剂型包含但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆及酏剂。除活性化合物以外，液体剂型可含有本领域通常使用的惰性稀释剂(诸如水或其他溶剂)、增溶剂及乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其为棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油及芝麻油)、丙三醇、四氢呋喃甲醇、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯、及其混合物。除惰性稀释剂之外，经口组合物还可包含佐剂，诸如湿润剂、乳化剂及悬浮剂、甜味剂、调味剂及芳香剂。
可注射制剂(例如，无菌可注射水性或油性悬浮液)可根据已知技术使用适合的分散剂、湿润剂和/或悬浮剂配制。无菌可注射制剂还可为于无毒性非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如呈于1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒剂及溶剂中，可使用的有水、林格氏溶液、U.S.P.及等渗氯化钠溶液。此外，无菌的非挥发性油常规地用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用包含合成单甘油酯或二甘油酯的任何温和的不挥发性油。另外，脂肪酸(诸如油酸)用于制备可注射剂。
可例如藉由经由细菌截留过滤器过滤或藉由并入在使用之前可溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质中的呈无菌固体组合物形式的灭菌剂来将可注射制剂灭菌。
为延长本文所述的化合物的作用，通常期望减缓来自皮下或肌肉内注射的化合物的吸收。这可藉由使用水溶性差的结晶或非晶形材料的液体悬浮液来实现。化合物的吸收率则视其溶解率而定，溶解率又可能视晶体大小及结晶形式而定。或者，藉由将化合物溶解或悬浮于油媒剂中来达成非经肠给与的化合物的延迟吸收。藉由在诸如聚丙交酯-聚乙交酯的生物可降解聚合物中形成化合物的微胶囊基质来制备可注射储库形式。视化合物与聚合物的比率及所使用的特定聚合物的性质而定，可控制化合物释放速率。其他生物可降解聚合物的实例包含聚(原酸酯)及聚(酸酐)。可注射储库制剂还可藉由将化合物包覆于与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。
用于经直肠或经阴道给与的组合物特定地为栓剂，其可藉由将本文所述的化合物与适合的非刺激性赋形剂或载剂，诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，所述赋形剂或载剂在环境温度下为固体，但在体温下为液体且因此在直肠或阴道腔中熔融并释放活性化合物。
用于经口给与的固体剂型包含胶囊、片剂、丸剂、散剂及粒剂。在此类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载剂(诸如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下混合：a)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及硅酸；b)黏合剂，诸如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖及阿拉伯胶；c)保湿剂，诸如甘油；d)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠；e)溶液阻滞剂，诸如石蜡；f)吸收加速剂，诸如季铵化合物；g)润湿剂，诸如鲸蜡醇及丙三醇单硬脂酸酯；h)吸附剂，诸如高岭土及膨润土；及i)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、片剂及丸剂的情况下，剂型还可包括缓冲剂。
还可使用相似类型的固体组合物作为软填充及硬填充的明胶胶囊中的填充物，此类胶囊使用赋形剂，诸如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及其类似物。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂及粒剂的固体剂型可制备有包衣及外壳，诸如肠溶包衣及药物配制技术中熟知的其他包衣。其可任选含有遮光剂，且还可以具有仅在或优先在肠道的某一部分中释放或任选以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物质及蜡。还可使用相似类型的固体组合物作为软填充及硬填充的明胶胶囊中的填充物，此类胶囊使用赋形剂，诸如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇及其类似物。
活性化合物还可以为具有一或多种如上文所提及的赋形剂的微胶囊化形式。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂及粒剂的固体剂型可制备有包衣及外壳，诸如肠溶衣、释放控制包衣及药物配制技术中熟知的其他包衣。在此等固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性稀释剂(诸如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。如在一般实践中，此类剂型还可以包括除惰性稀释剂以外的其他物质，例如制锭润滑剂及其他制锭助剂，诸如硬脂酸镁及微晶纤维素。在胶囊、片剂及丸剂的情况下，剂型还可以包括缓冲剂。其可任选含有遮光剂，且还可以具有仅在或优先在肠道的某一部分中释放或任选以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物质及蜡。
用于局部或经皮给与本文所述的化合物的剂型包含软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载剂及可需要的任何所需防腐剂或缓冲剂掺合。还考虑了经眼制剂、滴耳剂及滴眼剂属于本公开的范围内。另外，本公开涵盖使用经皮贴片，其具有向身体提供控制递送化合物的附加优点。此类剂型可藉由将化合物溶解或分配于适当介质中来制备。还可使用吸收增强剂来增加化合物通过皮肤的通量。速率可藉由提供速率控制膜或藉由将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。
本文所述的组合物的无菌可注射形式可为水性或油性悬浮液。这些悬浮液可根据本领域中已知的技术使用适合的分散剂或润湿剂及悬浮剂来配制。无菌可注射制剂还可以为无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如呈1,3-丁二醇中的溶液的形式。在可接受的媒剂及溶剂中，可采用的有水、林格氏溶液及等渗氯化钠溶液。此外，无菌的非挥发性油常规地用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用任何温和非挥发性油，包含合成单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸(诸如油酸及其甘油酯衍生物)适用于制备可注射剂，药学上可接受的天然油(诸如橄榄油或蓖麻油，尤其其聚氧乙烯化形式)也是适合的。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如羧甲基纤维素或通常用于配制药学上可接受的剂型(包含乳液及悬浮液)的类似分散剂。其他常用表面活性剂(诸如Tween、Span及其他乳化剂)或常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型的生物利用度增强剂也可以用于配制目的。
本文所述的药物组合物可用任何经口可接受的剂型经口给与，所述剂型包含但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于经口用途的片剂的情况下，常用载剂包含但不限于乳糖及玉米淀粉。通常还添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口给与，适用的稀释剂包含乳糖及干燥玉米淀粉。当需要水性悬浮液用于经口使用时，使活性成分与乳化剂及悬浮剂组合。若需要，还可添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
替代地，本文所述的药物组合物可以用于经直肠给与的栓剂形式给与。这些栓剂可藉由将试剂与适合的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体且因此将在直肠中熔融以释放药物。此类材料包含但不限于可可脂、蜂腊及聚乙二醇。
本文所述的药物组合物还可以局部给与，当治疗目标包含局部施用可容易地接近的区域或器官时尤其如此，该治疗目标包含眼、皮肤或低位肠道的疾病。可容易地制备用于这些区域或器官中的每一者的适合的局部制剂。
用于低位肠道的局部施用可以经直肠栓剂制剂(参见上文)形式或以适合的灌肠制剂形式实现。局部施用还包含使用经皮贴片。
对于局部施用，药物组合物可以含有悬浮或溶解于一或多种载剂中的活性组分的适合的软膏形式配制。用于本公开的化合物的局部给与的载剂包含但不限于矿物油、液体石蜡脂、白石蜡脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡及水。或者，药物组合物可以含有悬浮或溶解于一或多种药学上可接受的载剂中的活性组分的适合洗剂或乳膏形式配制。适合的载剂包含但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇及水。
对于经眼使用，药物组合物可配制为具有或不具有防腐剂(诸如苯扎氯铵)的在等渗的、pH经调整的无菌生理盐水中的微米化悬浮液，或特定而言配制为在等渗的、pH经调整的无菌生理盐水中的溶液。替代地，对于经眼使用，药物组合物可配制在诸如凡士林的软膏中。
药物组合物还可以藉由经鼻气溶胶或吸入给与。此类组合物根据药物配制领域中熟知的技术制备，且可采用苯甲醇或其他适合的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、氟碳化物和/或其他常规溶解剂或分散剂制备为在生理盐水中的溶液。
用于本公开的方法中的化合物可按单位剂型配制。术语“单位剂型”是指适合以单位剂量形式用于经受治疗的个体的物理离散单元，其中各单元含有经计算以产生所期望治疗效应的预定量的活性材料，其任选与适合的药物载剂结合。单位剂型可用于单一日剂量或多个日剂量(例如每天约1至4次或更多次)中的一者。当使用多种日剂量时，用于各剂量的单位剂型可相同或不同。
治疗方法
本文提供本文所述的化合物作为治疗剂的用途。本文所述的化合物或其药学上可接受的盐可用以降低生物样本(例如经感染的细胞培养物)的病毒滴度或人类的病毒滴度(例如患者的肺病毒滴度)。本文所述的化合物或其药学上可接受的盐可在治疗病毒感染的方法中使用。可用本文所述的化合物或其药学上可接受的盐治疗的病毒感染的非限制性实例包含冠状病毒感染、杯状病毒(calicivirus)感染及小核糖核酸病毒(picornavirus)感染。
杯状病毒感染的非限制性实例包含诺如病毒介导的病况及诺如病毒感染。如本文所用，术语“诺如病毒介导的病况”、“诺如病毒感染”或“诺如病毒”可互换使用，以表示由诺如病毒感染引起的疾病。
诺如病毒为引起哺乳动物的胃肠炎的感染性病毒。诺如病毒为杯状病毒科的RNA病毒，该杯状病毒科包括七个基因组：GI、GII、GIII、GIV、GV、GVI及GVII。基因组II为最普遍的人类基因组，当前含有19个基因型。基因组I、II及IV感染人类，而基因组III感染牛物种，且最近已在小鼠中分离出基因组V。与人类的胃肠炎最相关联的两个组为：基因组I(GI)，其包含诺沃克病毒(Norwalk virus)、沙漠风暴病毒(Desert Shield virus)及南安普顿病毒(Southampton virus)；及基因组II(GII)，其包含布里斯托尔病毒(Bristol virus)、洛兹达雷病毒(Lordsdale virus)、多伦多病毒(Toronto virus)、墨西哥病毒(Mexico virus)、夏威夷病毒(Hawaii virus)及雪山病毒(Snow Mountain virus)。
在一些实施例中，本文所用的化合物用于治疗与胃肠炎相关联的诺如病毒。在一些实施例中，诺如病毒与诺沃克病毒相关联。在一些实施例中，诺如病毒与HuNV GGII.4相关联。
在一些实施例中，本文所公开的化合物可用于治疗诺如病毒，其中化合物结合至游离病毒，或抑制诺如病毒蛋白酶。在一些情况下，化合物可靶向两者(游离病毒及蛋白酶)。
在人类中，诺如病毒的常见症状为恶心、呕吐、水样便、腹痛，且在一些情况下为味觉丧失。诺如病毒可在免疫功能不全的人群中建立长期感染。在严重情况下，持久性感染会引起诺如病毒相关联肠病、肠道绒毛萎缩及吸收不良。诺如病毒相关联胃肠炎也称为“冬季呕吐症(winter vomiting bug)”。
人通常在暴露于诺如病毒后12至48小时出现胃肠炎症状。可能出现一般嗜睡、无力、肌肉痛、头痛及低烧。
如本文所用，术语“冠状病毒介导的病况”及“冠状病毒感染”可互换使用，用于表示由冠状病毒感染引起的疾病。冠状病毒的非限制性实例包含严重急性呼吸道症候群相关冠状病毒(SARS)、中东呼吸道症候群相关冠状病毒(MERS)及SARS-CoV-2病毒(也称为2019-nCoV)。冠状病毒介导的病况或冠状病毒感染的非限制性实例包含SARS、MERS及COVID-19。
冠状病毒为在哺乳动物及鸟类中引起疾病的病毒科。冠状病毒属于冠状病毒科中的正冠状病毒亚科，属于网巢病毒目。存在四种主要的冠状病毒属，称为α、β、γ及δ。影响人类的冠状病毒包含人类冠状病毒229E(HCoV-229E)、人类冠状病毒OC43(HCoV-OC43)、严重急性呼吸道症候群相关冠状病毒(SARS-CoV)、人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63，纽黑文冠状病毒(New Haven coronavirus))、人类冠状病毒HKU1、中东呼吸道症候群相关冠状病毒(MERS-CoV，先前称为新型冠状病毒2012及HCoV-EMC)及SARS-CoV-2(也称为2019-nCoV)。
在人类中，冠状病毒引起呼吸道感染，包含感冒，其通常为轻度呼吸道感染，但较罕见形式，诸如SARS、MERS及SARS-CoV-2(2019-20COVID-19爆发的原因)可能为致命的。症状在其他物种中有所不同：在鸡中，其引起上呼吸道疾病，而在奶牛及猪中，冠状病毒引起腹泻。无疫苗或抗病毒药物预防或治疗人类冠状病毒感染。冠状病毒HCoV-229E、-NL63、-OC43及-HKU1在人类群体中不断循环，且在全世界在成人及儿童中引起呼吸道感染。
在一些实施例中，本文所用的化合物用于治疗α冠状病毒或β冠状病毒。在一些情况下，本文所用的化合物用于治疗α冠状病毒。α冠状病毒的非限制性实例包含HCoV-229E及HCoV-NL63。在一些实施例中，本文所用的化合物用于治疗β冠状病毒。β冠状病毒的非限制性实例为HCoV-HKU1、HCoV-OC43、中东呼吸道症候群冠状病毒(MERS-CoV)、严重急性呼吸道症候群冠状病毒(SARS-CoV)及SARS-CoV-2。在一些实施例中，本文所用的化合物用于治疗与SARS、MERS及COVID-19相关联的冠状病毒。在一些实施例中，冠状病毒与SARS相关联。在一些实施例中，冠状病毒与MERS相关联。在一些实施例中，冠状病毒与COVID-19相关联。
在一些实施例中，本文所公开的化合物可用于治疗冠状病毒，其中化合物结合至游离病毒，或抑制冠状病毒蛋白酶。在一些情况下，化合物可靶向两者(游离病毒及蛋白酶)。
在人类中，冠状病毒的常见症状为发烧、咳嗽、呼吸短促及肌痛。
小核糖核酸病毒感染的非限制性实例包含鼻病毒介导的病况及鼻病毒感染。如本文所用，术语“鼻病毒介导的病况”及“鼻病毒感染”可互换使用，以表示由鼻病毒感染引起的疾病。
小核糖核酸病毒感染人类及动物两者，会引起严重麻痹(麻痹性脊髓灰白质炎)、无菌性脑膜炎、肝炎、肋肌痛、心肌炎、皮肤出疹及感冒；但无症状感染很常见。若干种医学上重要的属为此科的成员，诸如肠病毒(包含脊髓灰白质炎病毒(poliovirus；PV)、鼻病毒及人类肠病毒(例如柯萨奇病毒(coxsackie v irus))；肝病毒，其包含甲型肝炎病毒(HAV)；及口蹄疫病毒(aphthovirus)，其包含口蹄疫病毒(foot-and mouth diseasevirus；FMDV))。公认为鼻病毒是人类感冒的主要病因，且包括三种不同物种：A、B及C。主要藉由气溶胶途径及病毒在鼻中复制进行传播。
在一些实施例中，本文所公开的化合物可用于治疗小核糖核酸病毒感染。在一些实施例中，本文所公开的化合物可用于治疗鼻病毒感染。在一些实施例中，本文所公开的化合物可用于治疗鼻病毒感染，其中化合物结合至游离病毒，或抑制鼻病毒蛋白酶。在一些情况下，化合物可靶向两者(游离病毒及蛋白酶)。
术语“疾病”、“病症”及“病况”在本文可互换使用以指代诺如病毒或冠状病毒介导的医学或病理学病况。
如本文所用，术语“个体”及“患者”可互换使用。术语“个体”及“患者”是指动物(例如，诸如鸡、鹌鹑或火鸡的鸟类，或哺乳动物)，具体而言包含非灵长类动物(例如，牛、猪、马、羊、家兔、天竺鼠、大鼠、猫、狗及小鼠)及灵长类动物(例如，猴、黑猩猩及人类)的“哺乳动物”，且更具体而言人类。在一个实施例中，个体为非人类动物，诸如农畜(例如，马、牛、猪或羊)，或宠物(例如，狗、猫、天竺鼠或家兔)。在一优选实施例中，个体为“人类”。
如本文所用，术语“生物样本”包含但不限于细胞培养物或其提取物；获自哺乳动物的活检材料或其提取物；血液、唾液、尿液、粪便、精液、泪液或其他体液或其提取物。
如本文所用，“感染倍率”或“MOI”为感染剂(例如，噬菌体或病毒)与感染目标(例如，细胞)的比率。举例而言，当提及用感染性病毒颗粒接种的细胞的群组时，感染倍率或MOI为由沉积于孔中的感染性病毒颗粒的数目除以存在于孔中的目标细胞的数目来定义的比率。
如本文所用，术语“抑制诺如病毒的复制”及“抑制冠状病毒的复制”包含降低病毒复制的量(例如，降低至少10％)及完全遏制病毒复制(即100％降低病毒复制的量)两者。在一些实施例中，将诺如病毒或冠状病毒的复制抑制至少50％、至少65％、至少75％、至少85％、至少90％或至少95％。
诺如病毒或冠状病毒复制可藉由本领域中已知的任何适合的方法量测。举例而言，可量测生物样本(例如经感染的细胞培养物)的诺如病毒或冠状病毒的病毒滴度或人类的诺如病毒或冠状病毒的病毒滴度(例如患者的肺病毒滴度)。更具体而言，对于基于细胞的分析，在细胞经活体外培养的各情况下，在存在或不存在测试剂的情况下将病毒添加至培养物，且在适合的时间长度后评估病毒依赖性端点。此类分析为本领域中已知的。可用于本公开的第一类细胞分析视经感染目标细胞的死亡，即称为细胞病变效应(CPE)的过程而定，其中病毒感染引起细胞来源的耗竭及细胞的最终裂解。在第一类细胞分析中，微量滴定盘的孔中的较小部分细胞经感染(通常1/10至1/1000)，使病毒在48至72小时内经历若干轮复制，随后使用细胞ATP含量相较于未感染对照物的减小来量测细胞死亡的量。可用于本公开的第二类细胞分析视经感染细胞中的病毒特异性RNA分子的倍增而定，其中使用支链DNA杂交方法(bDNA)直接量测RNA含量。在第二类细胞分析中，较低数目的细胞最初于微量滴定盘的孔中进行感染，使病毒在感染的细胞中复制且扩散至额外轮次的细胞，接着将细胞裂解且对病毒RNA含量进行量测。通常在18至36小时后提早停止此分析，此时所有目标细胞仍有活力。病毒RNA藉由杂交至固定于分析盘的孔的特异性寡核苷酸探针、接着藉由与连接至报导酶的额外探针杂交而扩增信号来定量。
如本文所用，“病毒滴度(或滴度)”为病毒浓度的量度。滴度测试可采用连续稀释以自本质上仅评估为阳性或阴性的分析型程序获得大致定量信息。滴度对应于仍产生正读数的最高稀释因子；举例而言，前8次连续两倍稀释中的正读数转换为1:256的滴度。为确定滴度，将制备若干稀释液，诸如10-1、10-2、10-3、10-8。
如本文所使用，术语“治疗(treat/treatment/treating)”是指治疗性与预防性治疗。举例而言，治疗性治疗包含因给与一或多种疗法(例如一或多种治疗剂，诸如本公开的化合物或组合物)而降低或减轻诺如病毒或冠状病毒介导的病况的进展、严重程度和/或持续时间，或改善诺如病毒或冠状病毒介导的病况的一或多种症状(具体而言，一或多种可辨别的症状)。在具体实施例中，治疗性治疗包含改善诺如病毒或冠状病毒介导的病况的至少一个可量测物理参数。在其他实施例中，治疗性治疗包含在物理上藉由例如使可辨别的症状稳定、在生理上藉由例如使物理参数稳定或两者来抑制诺如病毒或冠状病毒介导的病况的进展。在其他实施例中，治疗性治疗包含使诺如病毒或冠状病毒介导的感染减少或稳定。抗病毒药物可用于社区环境以治疗已患有诺如病毒或冠状病毒的人群以减轻症状的严重程度且减少其患病天数。
术语“化学疗法”是指使用例如小分子药物(而非“疫苗”)的药品用于治疗病症或疾病。
如本文所用，术语“预防”或“预防性用途”及“预防性治疗”是指目的在于预防而非治疗或治愈疾病的任何医学或公共卫生程序。如本文所用，术语“预防(prevent/prevention/preventing)”是指降低患上或出现给定病况的风险，或降低或抑制尚未患病但已成为或可能接近成为带病人员的个体的复发或所述病况。术语“化学预防”是指使用例如小分子药物(而非“疫苗”)的药品用于预防病症或疾病。
如本文所用，预防性用途包含在已侦测到爆发的情形下的使用，以预防感染在处于严重诺如病毒或冠状病毒并发症的高风险下的大量人群彼此紧密接触的场所(例如，医院病房、日托中心、监狱、护理之家等)的接触传染或扩散。其还包含在需要保护以免患诺如病毒或冠状病毒但在疫苗接种后并未获得保护(例如，归因于免疫系统弱)的群体之中的使用，或在疫苗对其不可用时或在其由于副作用无法获得疫苗时的使用。其还包含在疫苗接种后两周期间的使用，因为在该时间期间疫苗仍为无效的。预防性用途还可以包含治疗尚未患有诺如病毒或冠状病毒或不认为处于并发症高风险下的人以降低感染诺如病毒或冠状病毒且将其传染给与其紧密接触的高风险的人(例如医疗保健工作者、护理之家工作者等)的机会。
在一些实施例中，本公开的方法为针对易患由诺如病毒或冠状病毒的感染引起的并发症的患者(具体而言人类)的“预防性(preventative/prophylactic)”措施。预防性用途包含在已确认“指示病例”或“爆发”的情况中的用途，以防止感染在社区或群体的其余部分中扩散。
在实施例中，本公开的方法用作对社区或群体的成员(具体而言人类)的“预防性”措施，以防止感染扩散。
如本文所用，“有效量”是指足以引起所期望生物反应的量。在本公开中，所期望生物反应为抑制诺如病毒或冠状病毒的复制，降低诺如病毒或冠状病毒的量或降低或改善诺如病毒或冠状病毒感染的严重程度、持续时间、进展或发作，预防诺如病毒或冠状病毒感染的加快，预防与诺如病毒或冠状病毒感染相关联的症状的复发、发展、发作或进展，或增强或改进针对诺如病毒或冠状病毒感染使用的另一种疗法的预防性或治疗效应。向个体给与的化合物的精确量将视给与模式、感染的类型及严重程度以及个体的特征(诸如一般健康状况、年龄、性别、体重及对药物的耐受性)而定。本领域技术人员将能够依据这些及其他因素判定适当的剂量。当与其他抗病毒剂共同给与时，例如当与抗诺如病毒或冠状病毒药品共同给与时，第二药剂的“有效量”将视所使用的药物类型而定。批准药剂的适合的剂量为已知的，且可由本领域技术人员根据个体的病况、所治疗病况的类型及所使用的本文所述的化合物的量进行调整。在未明确地标注量的情况下，应假设安全且有效的量。举例而言，本文所述的化合物可能以大约0.01至100毫克/公斤体重/天之间的剂量范围向个体给与以用于治疗性或预防性治疗。
一般而言，给药方案可根据各种因素进行选择，此类因素包含：所治疗的病症及病症的严重程度；采用的特定化合物的活性；采用的特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别及膳食；采用的特定化合物的给与时间、给与途径及排泄率；个体的肾及肝功能；及采用的特定化合物或其盐、治疗的持续时间；与采用的特定化合物组合或同时使用的药物；以及医学领域中熟知的类似因素。本领域技术人员可容易地判定及处方用于治疗、预防、抑制(完全或部分)或遏制疾病进展所需的本文所述的化合物的有效量。
用于本文所述的用途的化合物的剂量的范围可介于约0.01至约100毫克/公斤体重/天、约0.01至约50毫克/公斤体重/天、约0.1至约50毫克/公斤体重/天或约1至约25毫克/公斤体重/天之间。应理解，每天的总量可以单次剂量给与，或可以多次给药给与，诸如一天两次(例如每12小时)、一天三次(例如每8小时)或一天四次(例如每6小时)。
对于治疗性治疗，可在症状(例如鼻塞、咽喉痛、咳嗽、疼痛、乏力、头痛及发冷/盗汗)发作的例如48小时内(或40小时内、或小于2天、或小于1.5天或24小时内)向患者给与本文所述的化合物。治疗性治疗可持续任何适合的持续时间，例如，5天、7天、10天、14天等。对于社区爆发期间的预防性治疗，可例如在指示病例的症状发作的例如2天内向患者给与本文所述的化合物，且可持续任何合适的持续时间，例如7天、10天、14天、20天、28天、35天、42天等。
组合疗法
本文所述的化合物可以组合疗法，即与其他抗诺如病毒或抗冠状病毒化合物结合或与疫苗结合使用。在患者可能暴露于超过一种形式的诺如病毒或冠状病毒的情况下，组合疗法可能尤其有利。
在本公开的方法或药物组合物中单独或与额外的适合治疗剂(例如抗病毒剂或疫苗)组合采用式I、表A、表B或表C的化合物或其药学上可接受的盐，可达成安全且有效量。当采用“组合疗法”时，可使用第一量的式I、表A、表B或表C的化合物或其药学上可接受的盐及第二量的额外的适合治疗剂(例如抗病毒剂或疫苗)达成安全且有效量。
在实施例中，式I、表A、表B或表C的化合物或药学上可接受的盐及额外治疗剂各自以安全且有效量(即，若单独给与，则各自以治疗上有效的量)给与。在其他实施例中，式I、表A、表B或表C的化合物或其药学上可接受的盐及额外治疗剂各自以不单独提供治疗效应的量(次治疗剂量)给与。在又其他实施例中，式I、表A、表B或表C的化合物或其药学上可接受的盐可以安全且有效量给与，而额外治疗剂以次治疗剂量给与。在再其他实施例中，式I、表A、表B或表C的化合物、其药学上可接受的盐可以次治疗剂量给与，而额外治疗剂，例如适合抗病毒治疗剂以安全且有效量给与。
如本文所用，术语“组合”或“共同给与”可互换使用以指使超过一种疗法(例如一或多种预防剂和/或治疗剂)。此类术语的使用不限制向个体给与的疗法(例如预防剂和/或治疗剂)的次序。
共同给与涵盖以基本上同时的方式，诸如以单一药物组合物形式，例如具有固定比率的第一量与第二量的胶囊或片剂，或以多个各自分开的胶囊或片剂形式给与第一量及第二量的共同给与的化合物。另外，该共同给与还涵盖以任一次序以依序方式使用各化合物。
在实施例中，本公开涉及组合疗法用于抑制病毒在生物样本或患者中的复制或用于使用本文所述的化合物或药物组合物，例如式I、表A、表B或表C的化合物或其药学上可接受的盐治疗或预防患者的诺如病毒或冠状病毒感染的方法。因此，药物组合物还包含包括与呈现抗诺如病毒或冠状病毒活性的抗病毒化合物组合的如本文中所公开的化合物(例如，病毒复制的抑制剂)的那些药物组合物。
本文所公开的化合物及组合物的使用方法还包含化学疗法与式I、表A、表B或表C的化合物或组合物或其药学上可接受的盐的组合或与本公开的化合物或组合物与另一种抗病毒剂的组合一起。
当共同给与涉及单独给与第一量的式I、表A、表B或表C或其药学上可接受的盐及第二量的另一种治疗剂时，化合物在足够接近的时间内给与以具有所期望治疗效应。举例而言，可产生所期望治疗效应的各给与之间的时间段的范围可在数分钟至数小时的范围内，且可考虑到各化合物的特性(诸如效能、溶解度、生物利用度、血浆半衰期及动力学概况)来判定。举例而言，式I、表A、表B或表C的化合物或其药学上可接受的盐以及第二治疗剂可按任何次序彼此间隔约24小时、彼此间隔约16小时、彼此间隔约8小时、彼此间隔约4小时、彼此间隔约1小时或彼此间隔约30分钟地给与。
更具体而言，第一疗法(例如，诸如本公开的化合物的预防剂或治疗剂)可在向个体给与第二疗法(例如，诸如抗病毒剂的预防剂或治疗剂)之前(例如，之前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、同时或之后(例如，之后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)进行给与。
应理解，共同给与第一量的式I、表A、表B或表C的化合物或其药学上可接受的盐以及第二量的另一种治疗剂的方法可产生增强或协同治疗效应，其中组合的效应大于将由单独给与第一量的式I、表A、表B或表C的化合物或其药学上可接受的盐以及第二量额外治疗剂产生的累加效应。
如本文所用，术语“协同”是指与疗法的假定累加效应相比更有效的本文所公开的化合物与另一种疗法(例如，预防剂或治疗剂)的组合。疗法组合(例如预防剂或治疗剂的组合)的协同效应可允许使用较低剂量的疗法中的一或多者和/或较不频繁地向个体给与此类疗法。能够利用较低剂量的疗法(例如预防剂或治疗剂)和/或较不频繁地给与该疗法可降低与向个体给与该疗法相关联的毒性而不降低该疗法在预防、处理或治疗病症方面的功效。另外，协同作用可使得药剂在预防、处理或治疗病症方面的功效改良。最后，疗法的组合(例如预防剂或治疗剂的组合)的协同作用可避免或降低与任一单独疗法的使用相关联的不利或不合需要的副作用。
当使用如本文所公开的化合物的组合疗法与病毒疫苗组合时，两种治疗剂均可给与以使得每次给与之间的时间段可以更长(例如数天、数周或数天)。
协同作用的存在可使用用于评估药物相互作用的适合的方法来判定。适合的方法包含例如Sigmoid-Emax方程式(Holford,N.H.G.及Scheiner,L.B.，《临床药代动力学(Clin.P harmacokinet.)》6:429-453(1981))、Loewe可加性方程(Loewe,S及Muischnek,H.,《实验病理学与药理学档案(Arch.Exp.Pathol Pharmacol.)》114:313-326(1926))及中值效应方程(Chou，TC及Talalay，P.，《酶调控研究进展(Adv.Enzyme Regul.)》22:27-55(1984))。上文提及的各方程式可结合实验数据应用以产生有助于评估药物组合的作用的对应图表。与上文提及的方程式相关的对应图表分别为浓度-效应曲线、等效线图曲线及组合指数曲线。
手性分离
本文所述的化合物可具有不对称中心且以外消旋体、外消旋混合物、单独的非对映异构体或对映异构体形式存在，其中所有异构体形式均包含在本公开中。具有手性中心的本公开的化合物可呈光学活性及外消旋形式存在且经分离。一些化合物可呈现多晶型现象。本公开涵盖具有本文所述的有用特性的本公开的化合物的外消旋、光学活性、多晶型或立体异构形式或其混合物。光学活性形式可藉由例如用再结晶技术拆分外消旋形式、藉由自光学活性起始材料合成、藉由手性合成、或藉由使用手性固定相的色谱分离或藉由酶促拆分来制备。技术人员可纯化各化合物，随后将该化合物衍生化以形成本文所述的化合物，或可以纯化所述化合物本身。
光学活性形式的化合物可藉由使用本领域中已知的任何方法制备，该方法包含但不限于藉由再结晶技术拆分外消旋形式、藉由自光学活性起始材料合成、藉由手性合成、或藉由使用手性固定相的色谱分离。
获得光活性材料的方法的实例包含以下至少一种。
i)晶体的物理分离：手动分离各对映异构体的肉眼可见晶体的技术。若存在单独对映异构体的晶体，即材料聚结，且晶体在视觉上不同，则可使用此技术；
ii)同时结晶：可能仅当外消旋体以固体状态聚结时，个别对映异构体才自外消旋体的溶液中分别结晶的技术；
iii)酶促拆分：藉助于对映异构体与酶的不同反应速率部分或完全分离外消旋体的技术；
iv)酶促不对称合成：合成的至少一个步骤使用酶促反应以获得所期望对映异构体的对映异构性纯或富集的合成前体的合成技术；
v)化学不对称合成：可使用手性催化剂或手性助剂达成的在产物中产生不对称性(即手性)的条件下，所期望对映异构体由非手性前体合成的合成技术；
vi)非对映异构体分离：使外消旋化合物与将个别对映异构体转化为非对映异构体的对映异构性纯的试剂(手性助剂)反应的技术。所得非对映异构体随后藉助于其现在更明显的结构差异藉由色谱或结晶分离及之后去除手性助剂以获得所期望对映异构体；
vii)一阶及二阶不对称转换：来自外消旋体的非对映异构体平衡以在溶液中产生由所期望的对映异构体形成的非对映异构体的优势，或其中由所期望对映异构体形成的非对映异构体的优先结晶干扰平衡以使得最终原则上所有材料转化为由所期望对映异构体形成的非对映异构体的技术。随后自非对映异构体释放所期望的对映异构体；
viii)动力学拆分：此技术是指藉助于对映异构体与手性、非外消旋试剂或催化剂在动力学条件下的不相等反应速率达成外消旋体的部分或完全拆分(或部分溶解的化合物的进一步拆分)；
x)自非外消旋前体对映异构特异性合成：所期望对映异构体获自非手性起始材料，且其中立体化学完整性在合成过程中不受损或仅最低限度地受损的合成技术；
x)手性液相色谱：外消旋体的对映异构体藉助于其与固定相的不同相互作用(包含但不限于经由手性HPLC)在液体移动相中分离的技术。固定相可由手性材料构成，或移动相可含有额外的手性材料以引起不同相互作用；
xi)手性气相色谱：外消旋体挥发，且对映异构体藉助于其在气态移动相中与含有固定的非外消旋手性吸附相的管柱的不同相互作用分离的技术；
xii)用手性溶剂提取：对映异构体藉助于将一种对映异构体优先溶解至特定手性溶剂中而分离的技术；
xiii)跨手性膜运输：使外消旋体与薄膜障壁接触的技术。障壁通常分离两种可混溶流体，一种含有外消旋体，且驱动力(诸如浓度或压力差)引起跨膜障壁的优先运输。藉由膜的非外消旋手性性质而进行分离，所述性质使得外消旋体中仅一种对映异构体可通过。
一个实施例中使用手性色谱，包含但不限于模拟移动床色谱。多种手性固定相为市售的。
将参考以下非限制性实例更好地理解本公开。
化合物合成
实例1：化合物C12、C20及C1的合成
Figure GDA0003977862690001081
4-((S)-4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(3)
将(S)-4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酸(1)(1g，3.389mmol)、2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(2)(888mg，3.389mmol)及吡啶(2mL，1体积)于EtOAc(40mL)中的混合物在0℃下用T3P(4.31mL，50重量％于EtOAc中，16.129mmol)处理。将所得混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用1N HCl(20mL)淬灭且添加水(50mL)，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-((S)-4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚，Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 540.40(M+H)+
4-((S)-4-胺基-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(4)
在室温下向4-((S)-4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(3)(1g，1.855mmol)于MeOH(40mL)中的搅拌溶液中添加10％P d/C(500mg，湿重50％)，且在H2氛围(气球压力)下将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物经由硅藻土过滤，用MeOH(2×10mL)洗涤，且在减压下蒸发，得到4-((S)-4-胺基-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(4)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 406.35(M+H)+
4-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(5)
在0℃下，向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(1g，2.949mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(845mg，4.424mmol)、HOBT(597mg，4.424mmol)、DIPEA(1.5mL，8.849mmol)及4-((S)-4-胺基-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(4)(1.38g，3.539mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到4-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 727.67(M+H)+
4-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-羟基戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(6)
在0℃下向4-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(5)(900mg，1.241mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.24mL，2.48mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。用盐水溶液(30mL)洗涤有机层，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗4-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-羟基戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(6)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf0.3LCMS(ESI)：m/z 699.2(M+H)+
4-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(C20)
在0℃下向4-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-羟基戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(6)(150mg，0.2148mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(273mg，0.6446mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(Hypo溶液)(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物4-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(C20)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 697.27(M+H)+
4-((4S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(二乙氧基磷酰基)-5-羟基戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(C1)
向4-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-氧代戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(C20)(200mg粗产物，0.2873mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.16mL，0.8620mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.12mL，0.8620mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其用制备型HPLC纯化，得到4-((4S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(二乙氧基磷酰基)-5-羟基戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(C1)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z835.58(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-5-氧代-5-(3-苯基哌嗪-1-基)戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C12)
在0℃下向4-((4S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(二乙氧基磷酰基)-5-羟基戊酰基)-2-苯基哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(C1)(220mg，0.2637mmol)于1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4N HCl的二噁烷(2mL)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗残余物。将其用制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-5-氧代-5-(3-苯基哌嗪-1-基)戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C12)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z735.53(M+H)+
实例2：化合物C22及C2的合成
Figure GDA0003977862690001121
N2-(叔丁氧基羰基)-N5,N5-二甲基-L-谷氨酸甲酯(C)
在0℃下向(S)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酸(A)(3g，11.4942mmol)于DCM(30mL)中的搅拌溶液中添加TEA(3.2mL，22.988mmol)，且添加BOP试剂(7.62g，17.241mmol)及含2M二甲胺的THF(7.4mL，14.942mmol)(B)，且随后将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用DCM(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在40％甲醇/DCM下洗脱，得到N2-(叔丁氧基羰基)-N5,N5-二甲基-L-谷氨酸甲酯(C)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z289.30[M+H]+
N5,N5-二甲基-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(胺片段)
在0℃下向N2-(叔丁氧基羰基)-N5-(3-氯苯基乙基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(C)(1.5g，5.208mmol)于1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4N HCl的二噁烷(15mL)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，用二乙醚研磨所得粗产物，得到N5,N5-二甲基-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(胺片段)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z189.17[M+H]+
2-胺基-4,4-二甲基戊酸甲酯盐酸盐(2)
在0℃下向2-胺基-4,4-二甲基戊酸(1)(4g，27.586mmol)于MeOH(40mL)中的室温下搅拌溶液中逐滴添加SOCl2(12mL，3体积)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得呈固体状的粗残余物。将其用石油醚研磨，且将固体过滤，随后在真空下干燥，得到2-胺基-4,4-二甲基戊酸甲酯盐酸盐(2)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.3
2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4,4-二甲基戊酸甲酯(4)
在室温下向(3-氯苯基)甲醇(3)(2g，14.084mmol)于CAN(20mL)中的搅拌溶液中添加碳酸N,N'-二丁二酰胺酯(5.4g，21.126mmol)，随后添加三乙胺(6mL，42.25mmol)，且搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将2-胺基-4,4-二甲基戊酸甲酯盐酸盐(2)(3.27g，16.901mmol)放入ACN(20mL)中，且用三乙胺(6mL，42.252mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5分钟，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。16小时后，将反应混合物用冰水(15mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×15mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。藉由正相色谱纯化粗残余物，得到2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4,4-二甲基戊酸甲酯(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z:328.41[M+H]-
2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4,4-二甲基戊酸(5)
在室温下向2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4,4-二甲基戊酸甲酯(4)(1.5g，4.587mmol)于THF(20mL)及水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(330mg，13.761mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用2N HCL溶液酸化直至pH为约4，且用乙酸乙酯(2×10mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗化合物2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4,4-二甲基戊酸(5)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 620.1(M+H)+
N2-(2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4,4-二甲基戊酰基)-N5,N5-二甲基-L-谷氨酸甲酯(6)
在0℃下向2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4,4-二甲基戊酸(5)(1.6g，5.1118mmol)、DMF(20mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.46g，7.667mmol)、HOBT(1.03g，7.667mmol)、DIPEA(1.96mL，10.6508mmol)及N5-(3-氯苯基乙基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯氯化氢(胺片段)(2.7mL，15.335mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在80％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到N2-(2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4,4-二甲基戊酰基)-N5,N5-二甲基-L-谷氨酸甲酯(6)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z484.90[M+H]+
(1-(((S)-5-(二甲胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)
在0℃下向N2-(2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4,4-二甲基戊酰基)-N5,N5-二甲基-L-谷氨酸甲酯(6)(600mg，1.2422mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2ML iBH4的THF(1.3mL，2.484mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用水(30mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层用盐水溶液洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗残余物。将其藉由硅胶管柱色谱纯化，得到(1-(((S)-5-(二甲胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 456.47(M+H)+
(1-(((S)-5-(二甲胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C22)
在0℃下向(1-(((S)-5-(二甲胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)(150mg，0.329mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加PIDA(127mg，0.395mmol)，且随后在0℃下添加TEMPO(10mg，0.065mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(10mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到(1-(((S)-5-(二甲胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C22)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 454.25(M+H)+
(1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(二甲胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C2)
向(1-(((S)-5-(二甲胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C22)(200mg，0.4415mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，1.324mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.2mL，1.324mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其用制备型HPLC纯化，得到(1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(二甲胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-4,4-二甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C2)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 592.51(M+H)+
实例3：化合物C16及C6的合成
Figure GDA0003977862690001161
(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向(S)-2-胺基-3-环己基丙酸酯盐酸盐(2)(3g，13.531mmol)于THF(20mL)及DIPEA(7mL，40.59mmol)中的搅拌溶液中添加氯甲酸戊酯(1)(2.34mL，16.2mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.55LCMS(ESI)：m/z 330.2(M+NH)+
(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸(4)
在室温下向(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)(2.5g，8.3mmol)于THF(20mL)及水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(600mg，25mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约4，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸(4)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2
(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸(4)(1g，3.5mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1g，5.2mmol)、HOBT(700mg，5.23mmol)、DIPEA(1.7mL，10.46mmol)及(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)(1.38g，4.2mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 560.63(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)(900mg，1.6mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.2mL，1.53mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(6)。TLC系统：5％MeOH/DCMRf 0.3LCMS(ESI)：m/z 532.5(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(C16)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(6)(200mg，0.376mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(479mg，1.13mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(C16)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.4LCMS(ESI)：m/z 530.56(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(C6)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(C16)(248mg，0.47mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.24mL，1.41mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.19mL，1.41mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化为((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(C6)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z 668.68(M+H)+
实例4：化合物C26及C7的合成
Figure GDA0003977862690001191
(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向(S)-2-胺基-3-环己基丙酸酯盐酸盐(2)(4.8g，2.1mmol)于THF(20mL)及DIPEA(9.7mL，5.4mmol)中的搅拌溶液中添加氯甲酸己酯(1)(3g，1.8mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.55LCMS(ESI)：m/z 314.42(M+H)+
(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸(4)
在室温下向(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)(2g，6.36mmol)于THF(20mL)及水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(450mg，19mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约4，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸(4)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.2LCMS(ESI)：m/z 300.2(M+H)+
1-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-1,2,3,5-四氢-4H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-4-甲酸叔丁基酯(5)
在0℃下，向(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸(1.2g，4mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.14g，6mmol)、HOBT(834mg，6mmol)、DIPEA(2mL，12mmol)及(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)(1.57g，4.8mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(500mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到1-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-1,2,3,5-四氢-4H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-4-甲酸叔丁基酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 574.53(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)(960mg，1.67mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.25mL，1.5mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(6)。TLC系统：5％MeOH/DCMRf 0.3LCMS(ESI)：m/z 546.51(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(C26)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(6)(250mg，0.45mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(583mg，1.37mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(C26)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 544.55(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(C7)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(248mg，0.45mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.23mL，1.37mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.18mL，1.37mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其用制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(C7)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z682.6(M+H)+
实例5：化合物C15及C9的合成
Figure GDA0003977862690001221
(5-氯-2-羟基苯甲基)(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁基酯(3)
在室温下向5-氯-2-羟基苯甲醛(1)(5g，32.05mmol)于甲醇(50mL)中的搅拌溶液中添加2-胺基乙-1-醇(2)(1.95mL，32.05mmol)，且搅拌6小时，随后在0℃下添加NaBH4(605mg，16.02mmol)，且搅拌6小时。将反应混合物冷却至0℃，且添加三乙胺(2.8mL，19.93mmol)、(Boc)2O(3.98g，18.27mmol)，且使其至室温维持16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发，且用2N HCl酸化直至pH为约4，将固体过滤，且用水(100mL)洗涤，在真空下干燥，得到(5-氯-2-羟基苯甲基)(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 300.35[M-H]
7-氯-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓(4)
在-10℃下向DIAD(3.25g，16.12mmol)、三苯基膦(4.22g，13.12mmol)于THF(50mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含(5-氯-2-羟基苯甲基)(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁基酯(3)(5g，16.61mmol)的THF(20mL)，且使其至室温维持16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发且溶解于二氯甲烷(50mL)中，且在0℃下添加TFA(17mL)，且在室温下搅拌5小时。反应的进展藉由TLC监测，将反应混合物用10％NaOH碱化为pH为约12，且用DCM(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到7-氯-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓(4)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.25LCMS(ESI)：m/z＝184.33[M+H]+
(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)
在0℃下向甲基(S)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酸(5)(1.5g，57.47mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.64g，86.20mmol)、HOBT(1.16g，86.20mmol)、DIPEA(3.17mL，172.3mmol)及7-氯-2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓(4)(2.1g，68.96mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在50％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(6)。TLC系统：70％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 427.36[M+H]+
(S)-2-胺基-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(7)
在0℃下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(6)(2g，4.69mmol)于1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4N HCl的二噁烷(20mL)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到(S)-2-胺基-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(7)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 327.25[M+H]+
(S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-氧代戊酸甲酯(7)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(0.7g，2.064mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.59g，3.097mmol)、HOBT(0.418g，3.097mmol)、DIPEA(0.5mL，6.19mmol)及(S)-2-胺基-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(7)(0.896g，2.477mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(25mL)稀释，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在45％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-氧代戊酸甲酯(8)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 647.22[M+H]+
((S)-1-(((S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(8)
在0℃下向(S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-氧代戊酸甲酯(8)(0.3g，0.463mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.7mL，0.46mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(10mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物，得到((S)-1-(((S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 620.26(M+H)+
((S)-1-(((S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C15)
向((S)-1-(((S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)(200mg，0.33mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(426mg，1.005mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由combi-flash色谱纯化，藉由3％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到((S)-1-(((S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C15)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 618.33(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C9)
向((S)-1-(((S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C15)(250mg粗产物，0.405mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，1.215mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.12mL，1.215mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用饱和氯化铵(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化进行纯化，得到((2S)-1-(((2S)-5-(7-氯-2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C9)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 756.10[M+H]+
实例6：化合物C29及C11的合成
Figure GDA0003977862690001261
(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-5-氧代戊酸甲酯(2)
在-78℃下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(1)(2.0g，5.08mmol)于THF(30mL)中的搅拌溶液中添加1MLHMDS(10.7mL，10.01mmol)，且搅拌1小时，随后添加含碘甲烷(1.2mL，20.32mmol)的THF，且在-78℃下搅拌2小时。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由NP纯化，化合物在30％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-5-氧代戊酸甲酯(2)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 407.41[M+H]+
(2S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(3)
在0℃下向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-5-氧代戊酸甲酯(4)(2.2g，7.18mmol)于1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4N HCl的二噁烷(20mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到(2S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(3)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 307.36[M+H]+
(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-5-氧代戊酸甲酯(4)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(1.0g，2.98mmol)、DMF(15mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.84g，4.47mmol)、HOBt(0.59g，4.47mmol)、DIPEA(1.6mL，8.94mmol)及(2S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(3)(1g，3.27mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(40mL)稀释，用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由格雷斯NP(grace NP)纯化，化合物在2％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-5-氧代戊酸甲酯(4)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 628.59[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-4-甲基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)
在0℃下向(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-5-氧代戊酸甲酯(4)(1.2g，1.91mmol)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.4mL，2.86mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-4-甲基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 600.56[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C29)
向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-4-甲基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)(150mg，0.25mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(318mg，0.751mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(10mL)、随后用饱和海波溶液(3×15mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C29)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 598.28(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-4-甲基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C11)
向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-4-甲基-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C29)(250mg粗产物，0.41mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.22mL，1.23mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.17mL，1.23mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其用制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-4-甲基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C11)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 736.54(M+H)+
实例7：化合物C23及C13的合成
Figure GDA0003977862690001291
(S)-4-(((3-环己基-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3)
在室温下向4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1)(300mg，1.49mmol)于ACN(5mL)中的搅拌溶液中添加碳酸N,N’-二丁二酰胺酯(572mg，2.23mmol)，随后添加三乙胺(0.62mL，4.47mmol)，且搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(2)(250mg，1.12mmol)放入ACN(5mL)中，且用三乙胺(0.3mL，2.25mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5分钟，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。16小时后，将反应混合物用冰水(15mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×15mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(S)-4-(((3-环己基-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 435.2[M+Na]-
(S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(4)
在室温下向(S)-4-(((3-环己基-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3)(0.35g，0.84mmol)于THF(10mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(106mg，2.54mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z＝421.39[M+Na]+
4-((((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-甲氧基-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5)
在0℃下向(S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(4)(1.5g，3.64mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.04g，5.46mmol)、HOBT(0.73g，5.46mmol)、DIPEA(1.9mL，10.92mmol)及(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)(1.27g，4.36mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，将所获得的固体过滤，且用过量水洗涤，随后在真空下干燥，得到4-((((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-甲氧基-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 673.46[M+H]+
4-((((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(6)
在0℃下向4-((((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-甲氧基-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5)(1.5g，2.23mmol)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.2mL，4.46mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(30mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将其用二乙醚研磨，得到4-((((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(6)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 645.67[M+H]+
4-((((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(C23)
向4-((((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(6)(200mg，0.31mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(395mg，0.93mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，将此残余物藉由正相色谱纯化，藉由3％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到4-((((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(C23)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 643.68(M+H)+
4-((((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(C13)
向4-((((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(C23)(200mg粗产物，0.31mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.16mL，0.93mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.13mL，0.93mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用饱和氯化铵(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到4-((((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(C13)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 781.71[M+H]+
实例8：化合物C24及C14的合成
Figure GDA0003977862690001331
(S)-3-环己基-2-(((庚氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向(S)-2-胺基-3-环己基丙酸酯盐酸盐(2)(2.97g，13.48mmol)于THF(20mL)及DIPEA(5.8mL，33.70mmol)中的搅拌溶液中添加氯甲酸庚酯(1)(2g，11.235mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-3-环己基-2-(((庚氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：20％EtOAc/石油醚Rf：0.55LCMS(ESI)：m/z 328.49(M+H)+
(S)-3-环己基-2-(((庚氧基)羰基)胺基)丙酸(4)
在室温下向(S)-3-环己基-2-(((庚氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)(1.2g，3.66mmol)于THF(12mL)及水(6mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(264mg，11.009mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约4，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-环己基-2-(((庚氧基)羰基)胺基)丙酸(4)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 314.2(M+H)+
(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((庚氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)
在0℃下，向(S)-3-环己基-2-(((庚氧基)羰基)胺基)丙酸(1g，3.18mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(0.91g，4.7mmol)、HOBT(660mg，4.7mmol)、DIPEA(1.2mL，9.5mmol)及(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)(1.26g，3.8mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(500mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((庚氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 588.68(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸庚酯(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((庚氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)(600mg，1.01mmol)于DCM(12mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.76mL，1.5 2mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯庚酯(6)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.3LCMS(ESI)：m/z 560.3(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸庚酯(化合物C24)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸庚酯(6)(180mg，0.32mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(410mg，0.96mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸庚酯(化合物C24)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.5LCMS(ESI)：m/z 558.52(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸庚酯(化合物C14)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯庚酯(249mg，0.446mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.177mL，1.33mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.18mL，1.33mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其用制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸庚酯(化合物C14)。TLC系统：5％MeOH/DCMRf：0.5LCMS(ESI)：m/z 696.70(M+H)+
实例9：化合物C17及C5的合成
Figure GDA0003977862690001361
1-苯甲基环丙-1-胺(2)
向2-苯乙腈(1)(2g，17.094mmol)于Et2O:THF(1:1)(20mL)中的搅拌溶液中添加异丙醇钛(5.14g，18.119mmol)，且随后在0℃下在10分钟内缓慢逐滴添加含2M氯化乙基镁的THF(17mL，34.188mmol)。随后将反应混合物在室温下搅拌1小时，且随后在0℃下在15分钟内缓慢添加BF3-Et2O(4.8mL，34.188mmol)(发生放热)，且在室温下搅拌1小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。1小时后，将反应混合物倾入10％NaOH溶液(100mL)中，形成白色沉淀物。将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(50mL)洗涤，且将过滤物用盐水溶液(100ml)洗涤，且将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在70％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到1-苯甲基环丙-1-胺(2)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 148.11[M+H]+
(1-苯甲基环丙基)氨基甲酸叔丁基酯(3)
向1-苯甲基环丙-1-胺(2)(4.2g，28.5714mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中添加TEA(4.1mL，57.142mmol)，且随后在0℃下在10分钟内缓慢逐滴添加Boc酸酐(6.8mL，31.428mmol)。随后将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用DCM(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在5％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(1-苯甲基环丙基)氨基甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.8LCMS(ESI)：m/z 148.11[M-Boc]+
(1-苯甲基环丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(4)
在0℃下在10分钟内缓慢逐滴添加碘甲烷(2.6mL，40.485mmol)之后，在0℃下在密封容器中向(1-苯甲基环丙基)氨基甲酸叔丁基酯(3)(2×2.5g，10.121mmol)于DMF(25mL)中的搅拌溶液中添加60％NaH(607mg，15.182mmol)，且搅拌15分钟。随后将反应混合物加热至40℃维持16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到(1-苯甲基环丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 162.11[M-Boc]+
1-苯甲基-N-甲基环丙-1-胺盐酸盐(5)
在0℃下向(1-苯甲基环丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(4)(1.3g，4.9808mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4N HCl的二噁烷(20mL)，且将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到1-苯甲基-N-甲基环丙-1-胺盐酸盐(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 162.32[M+H]+
N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-(叔丁氧基羰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(7)
在0℃下向(S)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酸(6)(1g，3.831mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.1g，5.747mmol)、HOBT(775mg，5.747mmol)、DIPEA(2.11mL，11.494mmol)及1-苯甲基-N-甲基环丙-1-胺盐酸盐(5)(678mg，4.214mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在40％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-(叔丁氧基羰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(7)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 305.19[M-Boc]+
N5-(1-苯甲基环丙基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(8)
在0℃下向N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-(叔丁氧基羰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(7)(1.0g，2.475mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4N HCl的二噁烷(20mL)，且将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到N5-(1-苯甲基环丙基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(8)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 305.26[M+H]+
N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(9)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(1.0g，2.949mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(845mg，4.424mmol)、HOBT(597mg，5.899mmol)、DIPEA(1.63mL，8.849mmol)及N5-(1-苯甲基环丙基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(8)(986mg，3.244mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在60％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(9)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 626.58[M+H]+
((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)
在0℃下向N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(9)(1g，1.6mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.6mL，3.2mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用水(10mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将其藉由combi-flash纯化，化合物在80％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 598.98(M+H)+
((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C17)
向((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)(150mg，0.2508mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(320mg，0.752mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×10mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将其藉由combi-flash纯化，化合物在20％MeOH/DCM下洗脱，得到((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C17)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 596.44(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C5)
向((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C17)(200mg，0.033mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，1.032mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.14mL，1.032mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-(((2S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C5)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 734.51(M+H)+
实例10：化合物C18及C19的合成
Figure GDA0003977862690001411
(S)-3-环己基-2-((丙氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向(S)-2-胺基-3-环己基丙酸酯盐酸盐(2)(4g，22.13mmol)于THF(20mL)及DIPEA(8.7mL，49.18mmol)中的搅拌溶液中添加氯甲酸丙酯(1)(3g，24.59mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用20％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-3-环己基-2-((丙氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.55LCMS(ESI)：m/z 272.2(M+H)+
(S)-3-环己基-2-((丙氧基羰基)胺基)丙酸(4)
在室温下向(S)-3-环己基-2-((丙氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(3)(3g，11.07mmol)于THF(20mL)及水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.06g，44.28mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约4，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-环己基-2-((丙氧基羰基)胺基)丙酸(4)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.2LCMS(ESI)：m/z 256.26(M-H)+
(S)-2-((S)-3-环己基-2-((丙氧基羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-((丙氧基羰基)胺基)丙酸(4)(0.6g，2.33mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.66g，3.501mmol)、HOBT(0.47g，3.5mmol)、DIPEA(1.2mL，6.99mmol)及(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)(0.8g，2.33mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-2-((S)-3-环己基-2-((丙氧基羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸乙酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 532.61(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸丙酯(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-3-环己基-2-((丙氧基羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸乙酯(5)(400mg，0.753mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.7mL，1.506mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸丙酯(6)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf0.3LCMS(ESI)：m/z 504.64.5(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸丙酯(化合物C18)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸丙酯(6)(230mg，0.45mmol)于EA(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(581mg，1.37mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸丙酯(化合物C18)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 502.46(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸丙酯(化合物C19)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸丙酯(化合物C18)(粗产物)(200mg，0.199mmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，0.59mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.2mL，0.59mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸丙酯(化合物C19)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z 640.59(M+H)+
实例11：化合物C21的合成
Figure GDA0003977862690001441
(S)-3-环己基-2-(吲哚啉-1-甲酰胺基)丙酸甲酯(3)
在室温下向吲哚啉(1)(3g，25.21mmol)于ACN(30mL)中的搅拌溶液中添加碳酸N,N’-二丁二酰胺酯(12.9g，50.42mmol)，随后添加三乙胺(4.7mL，0.327mmol)，且搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(2)(4g，21.73mmol)放入ACN(20mL)中，且用三乙胺(9.1mL，65.21mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5分钟，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。16小时后，将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(S)-3-环己基-2-(吲哚啉-1-甲酰胺基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：50％EtOAc/石油醚Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z331.34[M+H]+
(S)-3-环己基-2-(吲哚啉-1-甲酰胺基)丙酸(4)
在室温下向(S)-3-环己基-2-(吲哚啉-1-甲酰胺基)丙酸甲酯(3)(2g，6.06mmol)于THF(20mL)及水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(436mg，18.18mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约4，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗(S)-3-环己基-2-(吲哚啉-1-甲酰胺基)丙酸(4)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 317.49[M+H]+
(S)-2-((S)-3-环己基-2-(吲哚啉-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)
在0℃下，向(S)-3-环己基-2-(吲哚啉-1-甲酰胺基)丙酸(4)(600mg，1.89mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(543mg，2.84mmol)、HOBT(384mg，2.84mmol)、DIPEA(1.1mL，5.67mmol)，且将反应物质搅拌15分钟。15分钟后，添加N5-甲基-N5-苯基乙基-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(胺片段)(622mg，1.89mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取。将经合并的有机层用盐水溶液(80mL)洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗产物。将粗残余物藉由正相色谱纯化，且用60％EtOAc/石油醚洗脱，得到(S)-2-((S)-3-环己基-2-(吲哚啉-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 591.17[M+H]+
N-((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)吲哚啉-1-甲酰胺(6)
在0℃下，向N-((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)吲哚啉-1-甲酰胺(5)(100mg，0.16mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.14mL，0.34mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，且将有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物藉由正相色谱纯化，得到N-((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)吲哚啉-1-甲酰胺(6)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z563.48(M+H)+
N-((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)吲哚啉-1-甲酰胺(7)
在0℃下向N-((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)吲哚啉-1-甲酰胺(6)(150mg，0.266mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(334mg，0.8mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到N-((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)吲哚啉-1-甲酰胺(7)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 561.45(M+H)+
((2S)-2-((S)-3-环己基-2-(吲哚啉-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊基)膦酸二乙酯(化合物C21)
向所得到的N-((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)吲哚啉-1-甲酰胺(7)(150mg，0.26mmol)溶解于DCM(2mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加DIPEA(0.14mL，0.8mmol)及亚磷酸二乙酯(0.11mL，0.8mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，用DCM(3×20mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到粗化合物。粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到纯((2S)-2-((S)-3-环己基-2-(吲哚啉-1-甲酰胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊基)膦酸二乙酯(化合物C21)。TLC系统：80％EtOAc/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 699.58(M+H)+
实例13：化合物C27及C8的合成
Figure GDA0003977862690001481
1-苯基乙基吡咯烷-2-酮(3)
向吡咯烷-2-酮(1)(10g，117.64mmol)于甲苯(150mL)中的搅拌溶液中添加60％NaH(7.0g，176.47mmol)、TBAI(8.68g，23.52mmol)，随后添加(2-溴乙基)苯(2)(21.64mL，152.94mmol)，且回流6小时。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×150mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用70％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-苯基乙基吡咯烷-2-酮(3)。TLC系统：80％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 190.29[M+H]+
2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-甲醛(4)
在-78℃下向1-苯基乙基吡咯烷-2-酮(3)(4.0g，21.141mmol)于THF(60mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含2M LDA的THF(16mL，31.71mmol)。将反应混合物在-78℃下搅拌1小时，随后添加含DMF(2.3mL,31.712mmol)的THF(10mL)，且在相同温度下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-甲醛(4)，其不经任何纯化即用于下一步骤。TLC系统：80％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z218.20[M+H]+
(E)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙烯酸甲酯(6)
在0℃下向2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-甲醛(4)(4.5g，粗产物)于THF(60mL)中的搅拌溶液中添加2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(8.2g，24.86mmol)。随后添加DBU(4.72g，31.07mmol)，且搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用25％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(E)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙烯酸甲酯(6)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 218.20[M+H]+
2-胺基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
向(E)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙烯酸甲酯(6)(2.2g，5.213mmol)于甲醇(15mL)、乙酸乙酯(15mL)中的搅拌溶液中添加10％Pd/C(500mg)，且在H2气球压力(15Psi)下搅拌6小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。6小时后，将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(30mL)洗涤，在减压下浓缩过滤物，得到2-胺基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 291.28[M+H]+
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(1.0g，2.948mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.84g，4.42mmol)、HOBT(0.59g，4.42mmol)、DIPEA(1.14mL，8.84mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(0.5g，1.74mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 612.47(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)
在0℃下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(400mg，0.65mmol)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.65mL，1.30mmol)，且将反应混合物在相同温度下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 584.45(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C27)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)(130mg，0.22mmol)于二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(188mg，0.44mmol)，且在室温下搅拌5小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷(15mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C27)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 582.29(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((1-(二乙氧基膦酰基)-1-羟基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C8)
在0℃下向粗((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C27)(220mg，0.378mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，1.13mmol)及亚磷酸二乙酯(0.2mL，1.13mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(15mL)淬灭，用DCM(3×15mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C8)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 720.58(M+H)+
实例14：化合物C30及C28的合成
Figure GDA0003977862690001521
(2-羟基苯甲基)(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁基酯(C)
在室温下向2-羟基苯甲醛(A)(25g，204.91mmol)于甲醇(50mL)中的搅拌溶液中添加2-胺基乙-1-醇(12.49mL，204.91mmol)，且搅拌6小时，随后在0℃下添加NaBH4(3.89g，102.45mmol)，且搅拌6小时。将反应混合物冷却至0℃，且添加三乙胺(33.2mL，245.89mmol)、(Boc)2O(49.13g，225.40mmol)，且使其至室温维持24小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发，且用2N HCl酸化直至pH为约4，将固体过滤，且用水(200mL)洗涤，在真空下干燥，得到(2-羟基苯甲基)(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁基酯(C)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝290.27[M+Na]+
2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓(C)
在-10℃下向DIAD(36.72mL，187.26mmol)、三苯基膦(49.1g，187.26mmol)于THF(250mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含(2-羟基苯甲基)(2-羟乙基)氨基甲酸叔丁基酯(C)(25g，93.63mmol)的THF(100mL)，且使其至室温维持16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发且溶解于二氯甲烷(200mL)中，且在0℃下添加TFA(175mL)，且在室温下搅拌5小时。反应的进展藉由TLC监测，将反应混合物在减压下蒸发，得到粗产物，将此粗产物用水稀释，且用二乙醚(2×100mL)洗涤，随后将水层用10％NaOH碱化为pH为约12，且用DCM(2×150mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓(D)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z＝150.12[M+H]+
(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(F)
在0℃下向(S)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酸(E)(10.0g，38.31mmol)于DMF(100mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(10.9g，57.47mmol)、HOBT(7.7g，57.47mmol)、DIPEA(20.0mL，114.93mmol)及2,3,4,5-四氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓(D)(6.2g，42.14mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(200mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物，此粗产物藉由正相色谱纯化，且用40％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(F)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝393.38[M+H]+
(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)
在0℃下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(F)(5.0g，12.75mmol)于1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4N HCl的二噁烷(20mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到纯(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z＝293.1[M+H]+
(S)-3-环己基-2-(((哌啶-4-基氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯氯化氢(2)
在0℃下向(S)-4-(((3-环己基-1-甲氧基-1-氧代丙-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1)(4g，9.70mmol)于1,4-二噁烷(40mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4NHCl的二噁烷(40mL)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到(S)-3-环己基-2-(((哌啶-4-基氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯盐酸盐(2)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 313.33[M+H]+
(S)-3-环己基-2-((((1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-(((哌啶-4-基氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(2)(3.3g，10.57mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(4.5mL)，随后添加甲烷磺酰氯(1mL，12.69mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用水(2×30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-环己基-2-((((1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：70％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝391.2[M+H]+
(S)-3-环己基-2-((((1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)丙酸(4)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-((((1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)(2.0g，5.12mmol)于THF(15mL)、水(15mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(644mg，15.38mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-环己基-2-((((1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)丙酸(4)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 377.52[M+H]+
(S)-2-((S)-3-环己基-2-((((1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-((((1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)丙酸(4)(1.0g，2.65mmol)、DMF(15mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(764mg，3.98mmol)、HOBT(538mg，3.98mmol)、DIPEA(1.4mL，7.97mmol)及(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)(0.93g，3.19mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，将所获得的固体过滤，且用过量水洗涤，随后在真空下干燥，得到(S)-2-((S)-3-环己基-2-((((1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z651.25[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(甲磺酰基)哌啶-4-基酯(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-3-环己基-2-((((1-(甲磺酰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)(0.5g，0.76mmol)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.76mL，1.53mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(30mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将其用二乙醚研磨，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(甲磺酰基)哌啶-4-基酯(6)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 623.40(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(甲磺酰基)哌啶-4-基酯(化合物C30)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(甲磺酰基)哌啶-4-基酯(6)(220mg，0.35mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(449mg，1.06mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，将此残余物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(甲磺酰基)哌啶-4-基酯(化合物C30)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 621.44[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(甲磺酰基)哌啶-4-基酯(化合物C28)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(甲磺酰基)哌啶-4-基酯(化合物C30)(220mg粗产物，0.35mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.19mL，1.06mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.15mL，1.06mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用饱和氯化铵(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(甲磺酰基)哌啶-4-基酯(化合物C28)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 759.50[M+H]+
实例23：化合物C10的合成
Figure GDA0003977862690001571
1-(3-氯苯基)环丙-1-醇(2)
向2-苯乙腈(1)(5g，29.41mmol)于THF(60mL)中的搅拌溶液中添加异丙醇钛(11.69g，41.17mmol)，且随后在0℃下在30分钟内缓慢逐滴添加含2M氯化乙基镁的THF(37mL，73.52mmol)。随后将反应混合物在室温下搅拌36小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(3×40mL)萃取，用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在15％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到1-(3-氯苯基)环丙-1-醇(2)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 151.18[M-OH]+
(S)-2-(((1-(3-氯苯基)环丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)
在室温下向1-(3-氯苯基)环丙-1-醇(2)(1.4g，8.33mmol)于ACN(20mL)中的搅拌溶液中添加碳酸N,N’-二丁二酰胺酯(3.19g，12.49mmol)，随后添加三乙胺(2.8mL，24.99mmol)，且搅拌6小时。反应的进展藉由TLC监测。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(3)(2.70g，12.82mmol)放入ACN(20mL)中，且用三乙胺(3.5mL，24.27mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5分钟，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。16小时后，将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(S)-2-(((1-(3-氯苯基)环丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z＝380.44[M+H]+
(S)-2-(((1-(3-氯苯基)环丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)
在室温下向丙酸甲酯(S)-2-(((1-(3-氯苯基)环丙氧基)羰基)胺基)-3-环己酯(4)(1.3g，3.43mmol)于THF(20mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(246mg，10.29mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗(S)-2-(((1-(3-氯苯基)环丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 366.43[M+H]+
N2-((S)-2-(((1-(3-氯苯基)环丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-N5-甲基-N5-苯基乙基-L-谷氨酸甲酯(7)
在0℃下向(S)-2-(((1-(3-氯苯基)环丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)(1.0g，2.73mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.78g，4.10mmol)、HOBT(0.55g，4.10mmol)、DIPEA(1.5mL，8.21mmol)及N5-甲基-N5-苯基乙基-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(6)(1.03g,3.28mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在60％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到N2-((S)-2-(((1-(3-氯苯基)环丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-N5-甲基-N5-苯基乙基-L-谷氨酸甲酯(7)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 627.47[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-5-(甲基(苯基乙基)胺基)-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)环丙酯(8)
在0℃下向N2-((S)-2-(((1-(3-氯苯基)环丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-N5-甲基-N5-苯基乙基-L-谷氨酸甲酯(7)(1g，1.60mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.4mL，4.80mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用水(10mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将其用二乙醚研磨，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-5-(甲基(苯基乙基)胺基)-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)环丙酯(8)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 598.60(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(甲基(苯基乙基)胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)环丙酯(化合物C10)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-5-(甲基(苯基乙基)胺基)-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)环丙酯(8)(150mg，0.25mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(319mg，0.75mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×10mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，将此残余物藉由正相色谱纯化，藉由3％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-5-甲基(苯基乙基)胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)环丙酯(化合物C10)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 596.43(M+H)+
实例27：化合物C4的合成
Figure GDA0003977862690001601
(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-乙酯(1)
在0℃下向(S)-5-氧代吡咯烷-2-甲酸乙酯(1)(20.0g，127.38mmol)于DCM(200mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(22.02mL，152.86mmol)、Boc酸酐(30.54mL，140.12mmol)及DMAP(1.5g，12.73mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测，将反应混合物用冰水(500mL)淬灭，且用二氯甲烷(3×400mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩。将粗残余物藉由格雷斯NP纯化，化合物用30％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到呈灰白色固体状的(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-乙酯(2)(29.0g，112.71mmol，产率88％)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 258.23(M+H)+
(2S)-4-甲基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-乙酯(2)
在-78℃下向(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-乙酯(2)(6.0g，23.34mmol)于干燥THF(600mL)中的搅拌溶液中添加1MLiHMDS(28mL，28.01mmol)，且搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测将反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×200mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩。将粗残余物藉由格雷斯NP纯化，化合物用20％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到呈透明胶质液体状的(2S)-4-甲基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-乙酯(3)(1.4g，5.16mmol，产率22％)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 272.28(M+H)+
(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊酸乙酯(5)
向(2S)-4-甲基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-乙酯(3)(1.4g，5.16mmol)于甲苯(50mL)中的搅拌溶液中添加2-苯基乙基胺(4)(625mg，5.16mmol)，且在密封试管中在90℃下加热6小时。反应的进展藉由TLC监测，将反应混合物浓缩。将粗残余物藉由格雷斯NP纯化，化合物用50％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到呈透明胶质液体状的(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊酸乙酯(5)(1.0g，2.549mmol，产率49％)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 393.4(M+H)+
(2S)-2-胺基-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊酸乙酯(6)
在0℃下向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊酸乙酯(5)(1.0g，2.98mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4M HCl的二噁烷(10mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到呈灰白色固体状的(2S)-2-胺基-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊酸乙酯(6)(0.720g，2.462mmol，产率96％)。TLC系统：70％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.9LCMS(ESI)：m/z 293.28(M+H)+
(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊酸乙酯(7)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(0.830g，2.448mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(0.71g，3.672mmol)、HOBt(0.49g，3.67mmol)、DIPEA(1.35mL，7.345mmol)及(2S)-2-胺基-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊酸乙酯(6)(0.714g，2.448mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由格雷斯NP纯化，化合物在50％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到呈灰白色固体状的(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊酸乙酯(7)(1.3g，2.116mmo l，产率86％)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z614.47(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-羟基-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(8)
在0℃下向(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊酸乙酯(7)(0.250g，0.407mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.407mL，0.814mmol)，将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物，得到呈灰白色固体状的((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-羟基-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(8)(0.200g，0.349mmol，产率86％)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 572.49(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((3S)-2-羟基-5-甲基-6-氧代-1-(苯基乙基哌啶-3-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C4)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-羟基-4-甲基-5-氧代-5-(苯基乙基胺基)戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(8)(200mg，0.349mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(296.6mg，0.699mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(15mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗残余物藉由制备型HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的((2S)-3-环己基-1-(((3S)-2-羟基-5-甲基-6-氧代-1-(苯基乙基哌啶-3-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C4)(40mg，0.0877mmol，产率25％)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 552.89(M-OH)+
实例28：化合物C17及C5的合成
Figure GDA0003977862690001631
1-苯甲基环丙-1-胺(2)
向2-苯乙腈(1)(2g，17.094mmol)于Et2O:THF(1:1)(20mL)中的搅拌溶液中添加异丙醇钛(5.14g，18.119mmol)，且随后在0℃下在10分钟内缓慢逐滴添加含2M氯化乙基镁的THF(17mL，34.188mmol)。随后将反应混合物在室温下搅拌1小时，且随后在0℃下在15分钟内缓慢添加BF3-Et2O(4.8mL，34.188mmol)(发生放热)，且在室温下搅拌1小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。1小时后，将反应混合物倾入10％NaOH溶液(100mL)中，形成白色沉淀物。将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(50mL)洗涤，且将过滤物用盐水溶液(100ml)洗涤，且将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在70％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到1-苯甲基环丙-1-胺(2)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 148.11[M+H]+
(1-苯甲基环丙基)氨基甲酸叔丁基酯(3)
向1-苯甲基环丙-1-胺(2)(4.2g，28.5714mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中添加TEA(4.1mL，57.142mmol)，且随后在0℃下在10分钟内缓慢逐滴添加Boc酸酐(6.8mL，31.428mmol)。随后将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用DCM(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在5％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(1-苯甲基环丙基)氨基甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.8LCMS(ESI)：m/z 148.11[M-Boc]+
(1-苯甲基环丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(4)
在0℃下在10分钟内缓慢逐滴添加碘甲烷(2.6mL，40.485mmol)之后，在0℃下在密封容器中向(1-苯甲基环丙基)氨基甲酸叔丁基酯(3)(2×2.5g，10.121mmol)于DMF(25mL)中的搅拌溶液中添加60％NaH(607mg，15.182mmol)，且搅拌15分钟。随后将反应混合物加热至40℃维持16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到(1-苯甲基环丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 162.11[M-Boc]+
1-苯甲基-N-甲基环丙-1-胺盐酸盐(5)
在0℃下向(1-苯甲基环丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁基酯(4)(1.3g，4.9808mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4N HCl的二噁烷(20mL)，且将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到1-苯甲基-N-甲基环丙-1-胺盐酸盐(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 162.32[M+H]+
N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-(叔丁氧基羰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(7)
在0℃下向(S)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酸(6)(1g，3.831mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.1g，5.747mmol)、HOBT(775mg，5.747mmol)、DIPEA(2.11mL，11.494mmol)及1-苯甲基-N-甲基环丙-1-胺盐酸盐(5)(678mg，4.214mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在40％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-(叔丁氧基羰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(7)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 305.19[M-Boc]+
N5-(1-苯甲基环丙基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(8)
在0℃下向N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-(叔丁氧基羰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(7)(1.0g，2.475mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4N HCl的二噁烷(20mL)，且将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到N5-(1-苯甲基环丙基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(8)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 305.26[M+H]+
N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(9)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(1.0g，2.949mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(845mg，4.424mmol)、HOBT(597mg，5.899mmol)、DIPEA(1.63mL，8.849mmol)及N5-(1-苯甲基环丙基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(8)(986mg，3.244mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在60％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(9)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 626.58[M+H]+
((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)
在0℃下向N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-N5-甲基-L-谷氨酸甲酯(9)(1g，1.6mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.6mL，3.2mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用水(10mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将其藉由combi-flash纯化，化合物在80％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 598.98(M+H)+
((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C17)
向((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)(150mg，0.2508mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(320mg，0.752mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×10mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将其藉由combi-flash纯化，化合物在20％MeOH/DCM下洗脱，得到((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C17)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 598.98(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C5)
向((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C17)(200mg，0.033mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，1.032mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.14mL，1.032mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-(((2S)-5-((1-苯甲基环丙基)(甲基)胺基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C5)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 734.51(M+H)+
实例29：化合物C16及C6的合成
Figure GDA0003977862690001681
(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向(S)-2-胺基-3-环己基丙酸酯盐酸盐(2)(3g，13.531mmol)于THF(20mL)及DIPEA(7mL，40.59mmol)中的搅拌溶液中添加氯甲酸戊酯(1)(2.34mL，16.2mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.55LCMS(ESI)：m/z 330.2(M+NH)+
(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸(4)
在室温下向(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)(2.5g，8.3mmol)于THF(20mL)及水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(600mg，25mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约4，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸(4)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2
(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酸(4)(1g，3.5mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1g，5.2mmol)、HOBT(700mg，5.23mmol)、DIPEA(1.7mL，10.46mmol)及(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)(1.38g，4.2mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 560.63(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)(900mg，1.6mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.2mL，1.53mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(6)。TLC系统：5％MeOH/DCMRf 0.3LCMS(ESI)：m/z 532.5(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(化合物C16)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(6)(250mg，0.45mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(583mg，1.37mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(化合物C16)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 530.56(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(化合物C6)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(化合物C16)(248mg，0.47mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.24mL，1.41mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.19mL，1.41mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化为((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸戊酯(化合物C6)。TLC系统：5％MeOH/DCMRf：0.45LCMS(ESI)：m/z 668.68(M+H)+
实例30：化合物C26及C7的合成
Figure GDA0003977862690001711
(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向(S)-2-胺基-3-环己基丙酸酯盐酸盐(2)(4.8g，2.1mmol)于THF(20mL)及DIPEA(9.7mL，5.4mmol)中的搅拌溶液中添加氯甲酸己酯(1)(3g，1.8mmol)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.55LCMS(ESI)：m/z 314.42(M+H)+
(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸(4)
在室温下向(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(3)(2g，6.36mmol)于THF(20mL)及水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(450mg，19mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约4，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸(4)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.2LCMS(ESI)：m/z 300.2(M+H)+
1-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-1,2,3,5-四氢-4H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-4-甲酸叔丁基酯(5)
在0℃下，向(S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酸(1.2g，4mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.14g，6mmol)、HOBT(834mg，6mmol)、DIPEA(2mL，12mmol)及(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)(1.57g，4.8mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(500mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用40％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到1-((S)-4-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酰基)-1,2,3,5-四氢-4H-苯并[e][1,4]二氮杂卓-4-甲酸叔丁基酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 574.53(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-3-环己基-2-(((己氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)(960mg，1.67mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.25mL，1.5mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(6)。TLC系统：5％MeOH/DCMRf 0.3LCMS(ESI)：m/z 546.51(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(化合物C26)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(6)(250mg，0.45mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(583mg，1.37mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(化合物C26)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 544.55(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(化合物C7)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(248mg，0.45mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.23mL，1.37mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.18mL，1.37mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(15mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其用制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸己酯(化合物C7)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 682.6(M+H)+
实例31：化合物C27及C8的合成
Figure GDA0003977862690001741
1-苯基乙基吡咯烷-2-酮(3)
向吡咯烷-2-酮(1)(10g，117.64mmol)于甲苯(150mL)中的搅拌溶液中添加60％NaH(7.0g，176.47mmol)、TBAI(8.68g，23.52mmol)，随后添加(2-溴乙基)苯(2)(21.64mL，152.94mmol)，且回流6小时。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×150mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用70％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-苯基乙基吡咯烷-2-酮(3)。TLC系统：80％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 190.29[M+H]+
2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-甲醛(4)
在-78℃下向1-苯基乙基吡咯烷-2-酮(3)(4.0g，21.141mmol)于THF(60mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含2M LDA的THF(16mL，31.71mmol)。将反应混合物在-78℃下搅拌1小时，随后添加含DMF(2.3mL，31.712mmol)的THF(10mL)，且在相同温度下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-甲醛(4)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：80％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 218.20[M+H]+
(E)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙烯酸甲酯(6)
在0℃下向2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-甲醛(4)(4.5g，粗产物)于THF(60mL)中的搅拌溶液中添加2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(8.2g，24.86mmol)，随后添加DBU(4.72g，31.07mmol)，且搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用25％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(E)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙烯酸甲酯(6)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 218.20[M+H]+
2-胺基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
向(E)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙烯酸甲酯(6)(2.2g，5.213mmol)于甲醇(15mL)、乙酸乙酯(15mL)中的搅拌溶液中添加10％Pd/C(500mg)，且在H2气球压力(15Psi)下搅拌6小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。6小时后，将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(30mL)洗涤，在减压下浓缩过滤物，得到2-胺基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 291.28[M+H]+
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(1.0g，2.948mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.84g，4.42mmol)、HOBT(0.59g，4.42mmol)、DIPEA(1.14mL，8.84mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(0.5g，1.74mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 612.47(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)
在0℃下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(400mg，0.65mmol)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.65mL，1.30mmol)，且将反应混合物在相同温度下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 584.45(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C27)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)(200mg，0.34mmol)于二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(436mg，1.02mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷(15mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×10mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C27)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 582.52(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((1-(二乙氧基膦酰基)-1-羟基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C8)
在0℃下向粗((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C27)(220mg，0.378mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，1.13mmol)及亚磷酸二乙酯(0.2mL，1.13mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(15mL)淬灭，用DCM(3×15mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-3-(2-氧代-1-苯基乙基吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C8)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 720.58(M+H)+
实例32：化合物C35及C31的合成
Figure GDA0003977862690001781
(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酸甲酯(3)
在室温下向(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯盐酸盐(2)(500mg，2.26mmol)于1,4二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中添加双光气(0.4mL，3.39mmol)，且加热至回流维持16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发，得到粗残余物，此残余物直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将1-(3-氯苯基)-N-甲基甲胺(1)(350mg，2.26mmol)放入ACN(10mL)中，且用三乙胺(0.95mL，6.78mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5分钟，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌，且加热至80℃维持3小时，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酸甲酯(3)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 367.32[M+H]+
(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酸(4)
在室温下向(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酸酯(3)(600mg，1.63mmol)于THF(4mL)、水(2mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(117mg，4.89mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×15mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酸(4)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 353.47[M+H]+
(S)-2-((S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)
在0℃下向(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酸(500mg，1.42mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(406mg，2.13mmol)、HOBt(287mg，2.13mmol)、DIPEA(0.7mL，4.26mmol)及(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段)(559mg，1.70mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在2％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(S)-2-((S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 627.89[M+H]+
(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基-N-((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)丙酰胺(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯(5)(480mg，0.95mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.95mL，1.91mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基-N-((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)丙酰胺(6)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 599.53[M+H]+
(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基-N-((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)丙酰胺(化合物C35)
向(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基-N-((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)丙酰胺(6)(200mg，0.33mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(425mg，1.00mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(15mL)、随后用饱和海波溶液(3×15mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基-N-((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)丙酰胺(化合物C35)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 597.44(M+H)+
((2S)-2-((S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊基)膦酸二乙酯(化合物C31)
向(S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基-N-((S)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1,5-二氧代戊-2-基)丙酰胺(化合物C35)(110mg粗产物，0.18mmol)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.1mL，0.55mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(76mg，0.55mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用氯化铵(10mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其用制备型HPLC纯化，得到((2S)-2-((S)-2-(3-(3-氯苯甲基)-3-甲基脲基)-3-环己基丙酰胺基)-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-1-羟基-5-氧代戊基)膦酸二乙酯(化合物C31)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 735.44(M+H)+
实例33：化合物C32的合成
Figure GDA0003977862690001811
Figure GDA0003977862690001821
4-硝基哌啶-1-甲酸叔丁基酯(B)
在室温下向4-碘哌啶-1-甲酸叔丁基酯(A)(20g，64.308mmol)于DMSO(100mL)中的搅拌溶液中添加间苯三酚(12.9g，102.89mmol)，随后添加亚硝酸钠(8.8g，128.6mmol)，且在45℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用水(250mL)淬灭，且用二乙醚(3×100mL)萃取，将经合并的有机层用水(2×50mL)、盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到4-硝基哌啶-1-甲酸叔丁基酯(B)。TLC系统：50％EtOAc/石油醚Rf：0.45
4-硝基哌啶盐酸盐(C)
在0℃下向4-硝基哌啶-1-甲酸叔丁基酯(B)(3g，13.043mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中添加4N HCl(5mL)，且在室温下搅拌4小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用二乙醚(2×10mL)研磨，得到4-硝基哌啶盐酸盐(C)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 131.10[M+H]+
1-(4-硝基哌啶-1-基)乙-1-酮(Int-4)
向4-硝基哌啶盐酸盐(C)(2.2g，13.25mmol)溶解于DCM(20mL)的搅拌溶液中，同时在0℃下添加乙酸酐(1.25mL，13.25mmol)及三乙胺(2.7mL，19.87mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用DCM(2×20mL)萃取，将有机层用水(2×10mL)、盐水溶液(10mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到标题化合物。TLC系统：30％E tOAc/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 173.33[M+H]+
(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲酯(2)
在0℃下向(S)-5-氧代吡咯烷-2-甲酸乙酯(1)(20.0g，127.38mmol)于DCM(200mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(22.02mL，152.86mmol)、Boc酸酐(30.54mL，140.12mmol)及DMAP(1.5g，12.73mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测，将反应混合物用冰水(500mL)淬灭，且用二氯甲烷(3×400mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩。将粗残余物藉由格雷斯NP纯化，化合物用30％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-乙酯(2)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 258.23(M+H)+
(S,Z)-4-((二甲胺基)亚甲基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲酯(3)
在0℃下向(S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲酯(2)(10g，41.15mmol)于二甲氧甲烷(100mL)中的搅拌溶液中添加Bredereck试剂(13mL，61.72mmol)，且在80℃下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用二乙醚(2×20mL)研磨，得到(S,Z)-4-((二甲胺基)亚甲基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲酯(3)。TLC系统：60％EtOAc/石油醚Rf：0.2
(S)-4-亚甲基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲酯(4)
在室温下向(S,Z)-4-((二甲胺基)亚甲基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲酯(3)(500mg，1.666mmol)于THF(4mL)中的搅拌溶液中添加1N HCl(1.75mL)，且搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。分离各层，且有机层直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，在0℃下向上述有机层中添加33％甲醛(3V)及碳酸钾(344mg，2.49mmol)，且在室温下搅拌4小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。分离各层，将水层用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层用饱和碳酸氢钠(100mL)、盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(S)-4-亚甲基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲酯。TLC系统：30％EtOAc/石油醚Rf：0.2
(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸二甲酯(5)
在-40℃下向(S)-4-亚甲基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-(叔丁基)2-甲酯(4)(400mg，1.56mmol)于干燥THF(10mL)中的搅拌溶液中添加甲醇锂(1M于甲醇中)(1.88mL，1.88mmol)，且在相同温度下搅拌20分钟。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵(5mL)淬灭，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸二甲酯(5)。TLC系统：30％EtOAc/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z310.3(M+Na+H)+
2-((1-乙酰基-4-硝基哌啶-4-基)甲基)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)戊二酸二甲酯(6)
在0℃下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸二甲酯(5)(500mg，1.74mmol)于ACN(5mL)中的搅拌溶液中添加1-(4-硝基哌啶-1-基)乙-1-酮(Int-4)(300mg，1.74mmol)及DBU(0.55mL，3.48mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-((1-乙酰基-4-硝基哌啶-4-基)甲基)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)戊二酸二甲酯(6)。TLC系统：5％MeOH/DCMRf：0.35LCMS(ESI)：m/z 482.4(M+H)+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(7)
在-10℃下向2-((1-乙酰基-4-硝基哌啶-4-基)甲基)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)戊二酸二甲酯(6)(100mg，0.217mmol)于甲醇(4mL)中的搅拌溶液中添加氯化镍(31mg，0.23mmol)，随后添加硼氢化钠(42mg，1.08mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用水(5mL)淬灭，且用乙酸乙酯(3×10mL)萃取，将经合并的有机层用水(2×10ml)、盐水溶液(10mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 420.35(M+Na+H)+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(8)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(7)(80mg，0.2mmol)于二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中添加含4M HCl的二噁烷(2mL)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物用正戊烷研磨，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(8)。TLC系统：15％MeOH/DCM Rf：0.1
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)丙酸甲酯(9)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(54mg，0.16mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(42mg，0.22mmol)、HOBT(30mg，0.22mmol)、DIPEA(0.1mL，0.44mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(8)(50mg，0.14mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)丙酸甲酯(9)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 619.57(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)丙酸甲酯(9)(90mg，0.14mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.2mL，0.24mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf0.3LCMS(ESI)：m/z 591.43(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C32)
在0℃下向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)(80mg，0.13mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(230mg，0.54mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C32)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 589.46(M+H)+
实例34：化合物C51及C34的合成
Figure GDA0003977862690001871
(S)-4-(((1-甲氧基-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3)
在0℃下向4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1)(10g，49.67mmol)于ACN(80mL)中的搅拌溶液中添加碳酸N,N’-二丁二酰胺酯(19.7g，74.51mmol)，随后添加三乙胺(20.9mL，149.1mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将L-亮氨酸甲酯盐酸盐(2)(13.5g，74.58mmol)放入ACN(50mL)中，且用三乙胺(20.9mL，149.1mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5分钟，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。16小时后，将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×150mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(S)-4-(((1-甲氧基-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 395.29[M+Na]-
(((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)
在室温下向(S)-4-(((1-甲氧基-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3)(3.5g，9.40mmol)于THF(20mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.18g，28.2mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z＝381.53[M+Na]+
4-((((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5)
在0℃下向(((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)(2.0g，5.58mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.6g，8.37mmol)、HOBT(1.13g，8.37mmol)、DIPEA(2.8mL，16.75mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.2g，6.70mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，藉由5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到4-((((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 527.74[M+H]+
4-((((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(6)
在0℃下向4-((((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5)(620mg，1.17mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.2mL，2.35mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(30mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将其藉由SFC制备型纯化来纯化，得到纯4-((((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(6)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z499.70[M+H]+
4-((((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(化合物C34)
向4-((((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(6)(100mg，0.20mmol)溶解于二氯甲烷(3mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(255mg，0.60mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×15mL)、饱和NaHCO3溶液(3×15mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，将此残余物藉由制备型HPLC色谱纯化，得到4-((((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(化合物C34)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 497.44(M+H)+
(2S)-2-((S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C51)
在室温下向4-((((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)胺甲酰基)氧基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(化合物C34)(90mg，0.18mmol)于乙醇(2mL)、EtOAc(1mL)、水(1mL)中的搅拌溶液中添加NaHSO3(38mg，0.36mmol)，且加热至50℃维持16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物冷却至室温，且经由硅藻土垫过滤，随后用乙醇(5mL)洗涤。将过滤物在减压下蒸发，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚(2×5mL)、EtOAc(2×5mL)研磨，倾析溶剂，充分干燥固体，得到(2S)-2-((S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C51)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 577.2[M-H]-M＝游离碱
实例35：化合物C37及C40的合成
Figure GDA0003977862690001911
4-(苯甲基胺基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3)
在0℃下向4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1)(3g，15.0753mmol)及苯基甲胺(2)(2.2mL，18.0904mmol)于甲醇(30mL)中的搅拌溶液中添加8M硼烷吡啶复合物(2.8mL，3.39mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发，得到粗残余物，用冰水(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到4-(苯甲基胺基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 291.52[M+H]+
(S)-4-(1-苯甲基-3-(1-甲氧基-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(2)
在室温下向L-亮氨酸甲酯盐酸盐(4)(3g，13.574mmol)于1,4-二噁烷(30mL)中的搅拌溶液中添加双光气(2.4mL，20.361mmol)，且加热至回流维持5小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发，得到粗残余物，此残余物直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将4-(苯甲基胺基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3)(3g，10.344mmol)放入ACN(30mL)中，且用三乙胺(4.47mL，31.034mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5分钟，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌，且加热至80℃维持16小时，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(S)-4-(1-苯甲基-3-(1-甲氧基-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 484.50[M+Na]+
(苯甲基(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)胺甲酰基)-L-亮氨酸(6)
在室温下向(S)-4-(1-苯甲基-3-(1-甲氧基-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5)(3.4g，7.375mmol)于THF(30mL)、水(15mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(531mg，22.125mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×15mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(苯甲基(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)胺甲酰基)-L-亮氨酸(6)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 448.39[M+H]+
4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(7)
在0℃下向(苯甲基(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)胺甲酰基)-L-亮氨酸(6)(2.3g，5.145mmol)、DMF(30mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.47g，7.718mmol)、HOBt(1.04g，7.718mmol)、DIPEA(2.8mL，15.436mmol)及(S)-2-胺基-5-(2,3-二氢苯并[f][1,4]氧氮杂卓-4(5H)-基)-5-氧代戊酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.14g，6.171mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在2％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 616.88[M+H]+
4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(8)
在0℃下向4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(7)(1.3g，2.524mmol)于THF(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.5mL，5.048mmol)，且在0℃下将反应混合物搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将其藉由SFC制备型纯化来纯化，得到纯4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z588.65[M+H]+
4-(1-苯甲基-3-((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(化合物C37)
向4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(8)(100mg，0.17mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(216mg，0.511mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(15mL)、随后用饱和海波溶液(3×15mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到4-(1-苯甲基-3-((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(化合物C37)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 597.44(M+H)+
(2S)-2-((S)-2-(3-苯甲基-3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)脲基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C41)
在室温下向4-(1-苯甲基-3-((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(化合物C37)(50mg，1.103mmol)于THF/H2O(2/1)(3mL)中的搅拌溶液中添加NaHSO3(16mg，0.154mmol)，且将RM在40℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用EtOH(20mL)洗涤硅藻土垫，得到粗化合物。将粗产物用乙醚及正戊烷研磨，得到(2S)-2-((S)-2-(3-苯甲基-3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)脲基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C41)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z＝586.60[M-磺酸钠]+
实例36：化合物C36的合成
Figure GDA0003977862690001951
(((3-氯苯甲基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸甲酯(3)
在0℃下向(3-氯苯基)甲醇(1)(4.0g，2.8mmol)于DCM(200mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(13.2mL，16.8mmol)、三光气(4.14g，2.3mmol)，随后添加L-苯丙氨酸甲酯(2)(6.02g，3.36mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，将有机层浓缩，用1N HCl溶液再次洗涤，随后用DCM(2×150mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(((3-氯苯甲基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸1-甲酯(3)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.8LCMS(ESI)：m/z 348.29[M+H]+
(((3-氯苯甲基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(4)
向(((3-氯苯甲基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸1-甲酯(3)(5.6g，16.13mmol)于THF(60mL)、甲醇(20mL)及DM水(40mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(1.35g，32.26mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl酸化，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(((3-氯苯甲基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(4)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 334.28[M+H]+
(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-苯基丙酰胺基)-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(((3-氯苯甲基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(4)(1.0g，3.003mmol)(4)于DMF(100mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.670g，3.603mmol)、HOBT(0.859g，4.50mmol)、DIPEA(1.65mL，9.00mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(0.670g，3.60mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-苯基丙酰胺基)-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 502.43[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)
在0℃下向(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-苯基丙酰胺基)-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(0.75g，1.494mmol)于二氯甲烷(50mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.49mL，2.98mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，在减压下浓缩过滤物，得到((2S)-1-(((2S)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 474.4[M+H]+
((2S)-1-氧代-1-(((2S)-1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)
向((2S)-1-(((2S)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯甲酯(6)(0.350g，0.738mmol)溶解于二氯甲烷(25mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(0.626g，1.476mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，得到((2S)-1-氧代-1-(((2S)-1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 472.54(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C36)
在0℃下向粗((2S)-1-氧代-1-(((2S)-1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)(330mg，0.7003mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，2.101mmol)及亚磷酸二乙酯(0.3mL，2.101mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(15mL)淬灭，用DCM(3×15mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且充分干燥，得到粗化合物。粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-(((2S)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C36)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 610.36(M+H)+
实例37：化合物C38及C53的合成
Figure GDA0003977862690001981
1,2-二苯基乙-1-醇(2)
将苯甲基氯化镁(5.0g，46.7289mmol)于THF(50mL)中的搅拌溶液冷却至-30℃，随后在-30℃至室温下缓慢添加溶解于THF(50mL)中的苯甲醛(1)(70mL，140.1869mmol)，且搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(150mL)淬灭，且随后用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1,2-二苯基乙-1-醇(2)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 183.46[M-OH]+
(((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)
向1,2-二苯基乙-1-醇(2)(5.0g，25.25mmol)于乙腈(250mL)中的搅拌溶液中添加DSC(12.92g，50.4mmol)、三乙胺(10.9mL，75.6mmol)，随后将反应混合物在室温下搅拌16小时。随后添加L-亮氨酸甲酯盐酸盐(3)(4.306g，29.6mmol)、三乙胺(10.6mL，72.0mmol)，将反应混合物在室温下搅拌16小时，反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.8LCMS(ESI)：m/z 369.19[M+Na]+
((1,2-二苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)
向(((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)(5.8g，15.69mmol)于THF(60mL)及水(40mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(1.976g，47.0mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl酸化，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((1,2-二苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 355.17[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
向((1,2-二苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(3.0g，8.440mmol)于DMF(30mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(2.292g，12.00mmol)、HOBT(1.62g，12.00mmol)、DIPEA(4.64mL，25.2mmol)，在0℃下搅拌10分钟，且随后在0℃下同时添加(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(2.248g，10.12mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用100％乙酸乙酯洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 524.55[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(7)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(0.530g，1.013mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.013mL，2.026mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭，且用DCM(2×50mL)萃取，在减压下浓缩过滤物，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(7)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 496.59(M+H)+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(化合物C38)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(7)(0.300mg，0.605mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(0.513g，1.216mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且将有机层用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，且藉由PHPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(化合物C38)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 494.44(M+H)+
(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C53)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(化合物C38)(0.100mg，0.2027mmol)溶解于乙酸乙酯(2.0mL)、乙醇(1.0mL)、水(0.4mL)的搅拌溶液中，在40℃下添加NaHSO3(0.0632mg，0.6081mmol)，且搅拌4小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且将过滤物经硫酸钠干燥，浓缩，且将粗化合物用二乙醚洗涤，得到(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C53)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 574.2(M+H)+
实例38：化合物C39及C50的合成
Figure GDA0003977862690002011
(((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)
在0℃下向1-苯基丙-2-醇(1)(7.0g，51.39mmol)于DCM(35mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(6.0mL，77.09mmol)、三光气(7.62g，25.6mmol)，随后添加L-亮氨酸甲酯盐酸盐(2)(8.942g，61.6mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，将有机层浓缩，用1N HCl溶液再次洗涤，随后用DCM(2×150mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.8LCMS(ESI)：m/z 308.52[M+H]+
(((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)
向(((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)(6.7g，21.81mmol)于THF(60mL)及DM水(40mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(2.74g，65.43mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCL酸化，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 294.55[M+H]+
(2S)-2-((2S)-4-甲基-2-((((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
向(((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)(2.5g，8.532mmol)于DMF(25mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.518g，10.20mmol)、HOBT(1.073g，7.95mmol)、DIPEA(4.715mL，25.5mmol)，在0℃下搅拌10分钟，且随后在0℃下同时添加(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(2.273g，10.2mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用100％乙酸乙酯洗脱，得到(2S)-2-((2S)-4-甲基-2-((((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 462.65[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(6)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-4-甲基-2-((((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(2.4g，5.199mmol)于二氯甲烷(50mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(5.2mL，10.39mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(20mL)溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，在减压下浓缩过滤物，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(6)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 434.5[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(化合物C39)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(6)(0.300g，0.461mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(0.390g mg，0.923mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(化合物C39)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.8LCMS(ESI)：m/z 432.58(M+H)+
(2S)-1-羟基-2-((2S)-4-甲基-2-((((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C50)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(化合物C39)(0.100g，0.231mmol)溶解于乙酸乙酯(2.0mL)、乙醇(1.0mL)、水(0.4mL)的搅拌溶液中，在40℃下添加NaHSO3(0.0361mg，0.347mmol)，且搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且将过滤物经硫酸钠干燥，浓缩，且将粗化合物用二乙醚洗涤，得到(2S)-1-羟基-2-((2S)-4-甲基-2-((((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C50)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z512.12(M+H)+
实例39：化合物C52及C41的合成
Figure GDA0003977862690002041
Figure GDA0003977862690002051
(叔丁氧基羰基)苯丙氨酸(2)
向苯丙氨酸(1)(10g，60.606mmol)于1,4-二噁烷(100mL)中的搅拌溶液中添加2NNaOH溶液(36mL，72.72mmol)，且随后在0℃下添加Boc酸酐(14.5mL，66.66mmol)，随后使反应混合物至室温维持24小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发，得到粗产物，将此粗产物用水稀释，且用2N HCl酸化至pH为约2，且用DCM(2×100mL)萃取，经Na2SO4干燥且浓缩，得到(叔丁氧基羰基)苯丙氨酸(2)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z＝288.20[M+Na]+
(1-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷-5-基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)
向(叔丁氧基羰基)苯丙氨酸(2)(15g，56.60mmol)于DCM(150mL)中的搅拌溶液中添加DMAP(10.35g，84.905mmol)，且随后在0℃下逐份添加米氏酸(Meldrum's acid)(12.2g，84.905mmol)，在搅拌15分钟之后在0℃下缓慢添加含DCC的DCM(11.6g，56.6037mmol)，且随后使反应混合物至室温维持24小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测，将反应混合物用冰水(200mL)淬灭，且用DCM(2×100mL)萃取，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物，将此残余物藉由正相色谱纯化，且用80％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(1-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷-5-基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝390.64[M-H]+
(1-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁
Figure GDA0003977862690002061
烷-5-基)-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(4)
向(1-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁
Figure GDA0003977862690002062
烷-5-基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)(10.0g，25.575mmol)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中添加AcOH(9.2mL，153.452mmol)，且随后在0℃下在30分钟内缓慢逐份添加NaBH4(3.9g，102.3017mmol)，随后将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(200mL)淬灭，且用DCM(2×100mL)萃取，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物，将此粗产物藉由正相色谱纯化，且用40％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(1-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷-5-基)-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(4)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝376.39[M-H]+
2-苯甲基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(5)
向(1-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷-5-基)-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(4)(12g，31.8302mmol)于甲苯(240mL)中的搅拌溶液中，随后将反应混合物加热至回流维持6小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将此粗产物藉由正相色谱纯化，且用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-苯甲基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(5)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z＝298.26[M+Na]+
4-((5-苯甲基-1-(叔丁氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-3-基)(羟基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁基酯(6)
在-78℃下向2-苯甲基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(5)(4g，14.545mmol)于THF(40mL)中的搅拌溶液中添加含1M L iHMDS的THF(29mL，29.0909mmol)，且在相同温度下搅拌30分钟，随后添加Int-C(5g，21.818mmol)，且在相同温度下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用NH4Cl溶液(100mL)淬灭，且用EtOAc(3×300mL)萃取，经Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗4-((5-苯甲基-1-(叔丁氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-3-基)(羟基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁基酯(6)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：30％EtOAc/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 427.41(M+Na)+
(E)-4-((5-苯甲基-1-(叔丁氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-3-亚基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁基酯(7)
在0℃下向(4R)-4-((1S)-(1-(叔丁氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-3-基)(羟基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁基酯(6)(6g粗产物，11.9047mmol)于DCM(60mL)中的搅拌溶液中缓慢添加NEt3(5.1mL)及MsCl(4.1g，35.714mmol)，在相同温度下将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用NH4Cl溶液(100mL)淬灭，且用DCM(3×300mL)萃取，经Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到4-((5-苯甲基-1-(叔丁氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-3-基)((甲磺酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁基酯(6.5g，粗产物)。将此粗化合物溶解于DCM(60mL)中，随后在0℃下添加DBU(5mL，33.505mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，用DCM(2×100mL)萃取，经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，且用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(E)-4-((5-苯甲基-1-(叔丁氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-3-亚基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁基酯(7)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z＝509.64[M+Na]+
4-((5-苯甲基-1-(叔丁氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁基酯(8)
在室温下向(E)-4-((5-苯甲基-1-(叔丁氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-3-亚基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁基酯(7)(1.5g，3.0864mmol)于MeOH(20mL)中的搅拌溶液中添加10％Pd/C(800mg，湿重10％)，且在H2气体气球压力下将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物经由硅藻土过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，且用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到4-((5-苯甲基-1-(叔丁氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁基酯(8)。TLC系统：10％E tOAc/石油醚Rf：0.4
3-(2-胺基-3-羟基丙基)-5-苯甲基吡咯烷-2-酮(9)
在0℃下向4-((5-苯甲基-1-(叔丁氧基羰基)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁基酯(8)(1.1g，2.254mmol)于二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中添加含4M HCl的二噁烷(10mL)。使混合物至室温，且搅拌16小时。起始材料耗尽后，蒸发溶剂，得到粗残余物。将其用二乙醚研磨，得到3-(2-胺基-3-羟基丙基)-5-苯甲基吡咯烷-2-酮(9)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 249.43(M+H)+
((2S)-1-((1-(5-苯甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)
向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(胺片段)(200mg，0.589mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中添加EDC.HCl(170mg，0.884mmol)、HOBT(120mg，0.884mmol)、DIPEA(0.3mL，1.769mmol)，且在0℃下同时添加3-(2-胺基-3-羟基丙基)-5-苯甲基吡咯烷-2-酮(9)(175mg，0.707mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用DCM(2×50mL)萃取，经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，且用20％甲醇/DCM洗脱，得到((2S)-1-((1-(5-苯甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z570.70[M+H]+
((2S)-1-((1-(5-苯甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C52)
向((2S)-1-((1-(5-苯甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)(150mg，0.263mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(335mg，0.7908mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(5-苯甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C52)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 568.53[M+H]+
((2S)-1-((3-(5-苯甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C41)
向((2S)-1-((1-(5-苯甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C52)(150mg粗产物，0.264mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.15mL，0.793mmol)，随后添加亚磷酸二乙酯(0.12mL，0.793mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用饱和氯化铵(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层经无水Na2SO4干燥，且蒸发，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((3-(5-苯甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C41)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 706.74[M+H]+
实例40：化合物C42及C49的合成
Figure GDA0003977862690002101
1-(3-甲氧基苯甲基)环丙-1-醇(2)
将2-(3-甲氧基苯基)乙酸甲酯(10.0g，55.49mmol)于THF(100mL)中的溶液冷却至0℃，随后缓慢添加Ti(OiPr)4(22.06mL，77.69mmol)及氯化乙基镁(138.0mL，138.73mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(150mL)淬灭，且经由硅藻土垫过滤，且随后用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-(3-甲氧基苯甲基)环丙-1-醇(2)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS ESI)：m/z 179.35[M+H]
((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)
在0℃下向1-(3-甲氧基苯甲基)环丙-1-醇(2)(5.6g，37.00mmol)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(6.0mL，77.09mmol)、三光气(5.47g，18.5mmol)，随后添加L-亮氨酸甲酯盐酸盐(3)(6.49g，44.00mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，随后添加DCM(300mL)，且用1N HCl溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.8LCMS(ESI)：m/z 350.47[M+H]+
((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)
向((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)(3.0g，8.5mmol)于THF(60mL)及水(30mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(1.08g，25.78mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将过量THF在减压下蒸发。随后将混合物用1N HCl酸化，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，且将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI):m/z 336.40[M+Na]+
(S)-2-((S)-2-(((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
向((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(2.2g，6.5mmol)于DMF(40mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.86g，9.7mmol)、HOBT(1.34g，9.7mmol)、DIPEA(3.39mL，19.5mmol)，在0℃下搅拌10分钟，且随后在0℃下同时添加(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.46g，7.8mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-2-((S)-2-(((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：70％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 504.60[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(7)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(0.530g，1.013mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M L iBH4的THF(1.013mL，2.026mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭，且用DCM(2×50mL)萃取，在减压下浓缩过滤物，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(7)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 476.67(M+H)+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(化合物C42)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(7)(0.300mg，0.605mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(0.513g，1.216mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且将有机层用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，且藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(化合物C42)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 474.62(M+H)+
(2S)-1-羟基-2-((S)-2-(((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C49)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(化合物C42)(0.100mg，0.2027mmol)溶解于乙酸乙酯(2.0mL)、乙醇(1.0mL)、水(0.4mL)的搅拌溶液中，添加NaHSO3(0.0632mg，0.6081mmol)，且在40℃下搅拌4小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且将过滤物经硫酸钠干燥，浓缩，且将粗化合物用二乙醚洗涤，得到((2S)-1-羟基-2-((S)-2-(((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C49)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 554.1(M+H)+
实例41：化合物C43的合成
Figure GDA0003977862690002131
1-苯甲基-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(2)
在室温下向K2CO3(17.6g，128.205mmol)于丙酮(100mL)中的搅拌溶液中添加2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(1)(10g，64.102mmol)，随后在室温下添加苯甲基溴(7.6mL，64.102mmol)，且使反应混合物在70℃下回流16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且用饱和NaHCO3(150mL)淬灭，随后用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，随后用乙酸乙酯洗涤，层用饱和NaHCO3(3×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用3％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-苯甲基-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝247.26[M+H]+
2-苯甲基环戊-1-酮(3)
在室温下向1-苯甲基-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(2)(15g，60.975mmol)于冰醋酸(150mL)中的搅拌溶液中添加6N HCl水溶液(75mL)，且使反应混合物在70℃下回流6小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且倾入冰冷的水(100mL)中，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-苯甲基环戊-1-酮(3)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝175.21[M+H]+
2-苯甲基环戊-1-醇(4)
在0℃下向2-苯甲基环戊-1-酮(3)(5g，28.735mmol)于MeOH(50mL)中的搅拌溶液中添加NaBH4(1.06g，57.471mmol)。使反应混合物在室温下搅拌30分钟。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物蒸馏，且用1N HCl淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物2-苯甲基环戊-1-醇(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝171.43[M+H]+
(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)
在0℃下向2-苯甲基环戊-1-醇(4)(5vg，28.409mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(2.5mL，28.409mmol)、三光气(2.1g，14.204mmol)，随后添加L-亮氨酸甲酯盐酸盐(5)(4.9g，34.091mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，将有机层浓缩，用1N HCl水溶液再次洗涤，随后用DCM(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用4％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝348.33[M+H]+
(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)
向(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)(4.5g，12.968mmol)于THF(40mL)、DM水(20mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(933mg，38.904mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1NHCl水溶液酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)。此粗产物不经任何纯化即用于下一步骤.TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝334.45[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃下向(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)(2g，6.006mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.72g，9.009mmol)、HOBT(1.21g，9.009mmol)、DIPEA(3.13mL，18.018mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.34g，7.207mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝502.68[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(9)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(1g，1.990mmol)于二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2mL，3.981mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，将过滤物在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(9)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝474.84[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C43)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(9)(0.2g，0.422mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(0.537g，1.268mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C43)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝472.62(M+H)+
实例42：化合物C44及C48的合成
Figure GDA0003977862690002171
1-苯甲基环丙-1-醇(2)
在0℃下向2-苯基乙酸甲酯(1)(5g，33.29mmol)于THF(50mL)中的搅拌溶液中缓慢添加三异丙醇钛(13.2mL，46.61mmol)，随后在0℃下添加乙基溴化镁(66mL，66.58mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(150mL)淬灭，且经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用7％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-苯甲基环丙-1-醇(2)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝149.28[M+H]+s
((1-苯甲基环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)
在0℃下向1-苯甲基环丙-1-醇(2)(3.0g，20.25mmol)于DCM(30mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(3mL，39.97mmol)、三光气(3g，10.12mmol)，随后添加L-亮氨酸甲酯盐酸盐(3)(3.5g，24.30mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1N HCl水溶液(50mL)淬灭，随后用DCM(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到((1-苯甲基环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝320.52[M+H]+
((1-苯甲基环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)
在0℃下向((1-苯甲基环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)(3.0，9.40mmol)于THF(15mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(677mg，28.21mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl酸化，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((1-苯甲基环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝306.50[M+H]+
(S)-2-((S)-2-(((1-苯甲基环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向((1-苯甲基环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(2.5g，8.19mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(2.3g，12.29mmol)、HOBT(1.65g，12.29mmol)、DIPEA(4.2mL，24.58mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.83g，9.83mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(S)-2-((S)-2-(((1-苯甲基环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝508.63[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丙酯(7)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((1-苯甲基环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(2.8g，5.91mmol)于二氯甲烷(30mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(5.9mL，11.83mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭，且用DCM(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丙酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝446.61[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丙酯(化合物C44)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丙酯(7)(0.15g，0.33mmol)溶解于二氯甲烷(4mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(226mg，1.01mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将粗产物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丙酯(化合物C44)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝444.42(M+H)+
(2S)-2-((S)-2-(((1-苯甲基环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C48)
在室温下向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丙酯(50mg，0.11mmol)于EtOAc(2mL)中的搅拌溶液中添加EtOH/H2O(2/1)(3mL)及NaHSO3(35mg，0.33mmol)，且将RM在50℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物冷却至室温，且经由硅藻土垫过滤，且将硅藻土垫用EtOH(10mL)洗涤，得到粗化合物。将粗产物用乙酸乙酯及二乙醚研磨，得到(2S)-2-((S)-2-(((1-苯甲基环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C48)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z＝526.2(M+H)+M＝游离碱
实例43：化合物C55及C45的合成
Figure GDA0003977862690002201
1-(3-氯苯甲基)环丙-1-醇(2)
在0℃下向2-(3-氯苯基)乙酸甲酯(1)(7g，38.043mmol)于THF(50mL)中的搅拌溶液中缓慢添加三异丙醇钛(15mL，53.260mmol)，随后在0℃下添加乙基溴化镁(95mL，95.108mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(150mL)淬灭，且经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到呈灰白色固体状的1-(3-氯苯甲基)环丙-1-醇(2)(4.2g，23.076mmol，产率60％)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝183.33[M+H]+
((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)
在0℃下向1-(3-氯苯甲基)环丙-1-醇(2)(3.7g，20.329mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(1.5mL，16.8mmol)、三光气(3g，10.164mmol)，随后添加L-亮氨酸甲酯盐酸盐(3)(3.4g，24.395mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，将有机层浓缩，用1N HCl水溶液再次洗涤，随后用DCM(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到呈黄色油性液体状的((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)(3.2g，9.065mmol，产率44％)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝354.26[M+H]+
((1-3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)
向((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)(3.2g，9.065mmol)于THF(40mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(652mg，27.195mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1NHCl酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到呈黄色胶质液体状的((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(2.8g粗产物，8.259mmol，产率91％)。此粗产物不经任何纯化即用于下一步骤。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝340.23[M+H]+
(S)-2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(2.8g，8.2595mmol)(5)于DMF(50mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(2.36g，12.389mmol)、HOBT(1.67g，12.389mmol)、DIPEA(4.45mL，24.778mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.68g，9.085mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到呈黄色胶质液体状的(S)-2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(2.3g，4.536mmol，产率54％)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝508.63[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(7)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(2.2g，4.339mmol)于二氯甲烷(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(4.3mL，8.678mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭，且用DCM(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到呈灰白色固体状的((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(7)(1.3g，2.713mmol，产率62％)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝480.00[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(化合物C45)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(7)(0.18g，0.375mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(0.477g，1.127mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将粗产物藉由制备型HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(化合物C45)(33mg，0.069mmol，产率18％)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝478.41(M+H)+
((2S)-2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C55)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(化合物C45)(0.100mg，0.2027mmol)溶解于乙酸乙酯(2.0mL)、乙醇(1.0mL)、水(0.4mL)的搅拌溶液中，添加NaHSO3(0.0632mg，0.6081mmol)，且在40℃下搅拌4小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且将过滤物经硫酸钠干燥，浓缩，且将粗化合物用二乙醚洗涤，得到呈灰白色固体状的(2S)-2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C55)(25mg，0.047mmol，产率26％)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 558.1(M+H)+
实例44：化合物C46及C57的合成
Figure GDA0003977862690002241
(((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)
在室温下向2-甲基-1-苯基丙-2-醇(1)(2g，13.31mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌溶液中添加(S)-2-异氰酸基-4-甲基戊酸甲酯(2.7g，15.98mmol)，且在密封试管下加热至100℃维持16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 344.41[M+Na]+
(((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)
在室温下向(((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)(3.2g，9.96mmol)于THF(30mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(717mg，29.90mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 330.50[M+Na]+
(S)-2-((S)-4-甲基-2-((((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(2g，6.51mmol)、DMF(15mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.86g，9.77mmol)、HOBt(1.31g，9.77mmol)、DIPEA(3.6mL，19.54mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.4g，7.81mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在3％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(S)-2-((S)-4-甲基-2-((((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 476.37[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-4-甲基-2-((((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(2g，4.21mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(4.2mL，8.42mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 448.49[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(化合物C46)
在0℃下向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(6)(200mg，0.89mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，添加戴斯-马丁高碘烷(599mg，2.67mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(15mL)、随后用饱和海波溶液(3×15mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(化合物C46)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 446.45(M+H)+
(2S)-1-羟基-2-((S)-4-甲基-2-((((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C57)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(化合物C46)(0.100g，0.231mmol)溶解于乙酸乙酯(2.0mL)、乙醇(1.0mL)、水(0.4mL)的搅拌溶液中，添加NaHSO3(0.0361mg，0.347mmol)，且在40℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且将过滤物经硫酸钠干燥，浓缩，且将粗化合物用二乙醚洗涤，得到(2S)-1-羟基-2-((S)-4-甲基-2-((((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C57)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 526.12(M+H)+
实例45：化合物C47的合成
Figure GDA0003977862690002271
(((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)-D-亮氨酸甲酯(3)
在0℃下向(4,4-二氟环己基)甲醇(1)(9.5g，63.33mmol)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(10mL，63.33mmol)、三光气(9.32g，31.66mmol)，随后添加L-亮氨酸甲酯盐酸盐(2)(11.46g，63.33mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，将有机层浓缩，用1N HCL溶液再次洗涤，随后用DCM(2×150mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)-D-亮氨酸甲酯(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.8LCMS(ESI)：m/z 322.1[M+H]+
(((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)
向(((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)-D-亮氨酸甲酯(3)(13g，40.49mmol)于THF(130mL)及水(75mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(5g，121.49mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N H Cl酸化，用乙酸乙酯(4×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 308.1[M+H]+
(S)-2-((S)-2-((((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
向(((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)(5g，16.28mmol)于DMF(100mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(4.58g，24.42mmol)、HOBT(3.33g，24.42mmol)、DIPEA(8.36mL，48.85mmol)，在0℃下搅拌10分钟，且随后在0℃下同时添加(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(3.65g，19.54mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-2-((S)-2-((((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：70％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 476.54[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-((((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(2.8g，5.894mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(5.89mL，11.789mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭，且用DCM(3×50mL)萃取，在减压下浓缩过滤物，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(4,4-二氟环己基)甲酯(6)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 448.63(M+H)+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C47)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(7)(250mg，0.526mmol)溶解于乙酸乙酯(20mL)的搅拌溶液中，在10分钟内在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(669mg，1.57mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且将有机层用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，且藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C47)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 446.55(M+H)+
实例46：化合物C33的合成
Figure GDA0003977862690002291
1-苯甲基环丙-1-胺(2)
向2-苯乙腈(1)(2g，17.094mmol)于Et2O:THF(1:1)(20mL)中的搅拌溶液中添加异丙醇钛(5.14g，18.119mmol)，且随后在10分钟内在0℃下缓慢逐滴添加含2M氯化乙基镁的THF(17mL，34.188mmol)。随后将反应混合物在室温下搅拌1小时，且随后在15分钟内在0℃下缓慢添加BF3-Et2O(4.8mL，34.188mmol)(发生放热)，且在室温下搅拌1小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。1小时后，将反应混合物倾入10％NaOH溶液(100mL)中，形成白色沉淀物。将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤，且将过滤物用盐水溶液(100ml)洗涤，且将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在70％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到1-苯甲基环丙-1-胺(2)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 148.11[M+H]+
N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-(叔丁氧基羰基)-L-谷氨酸甲酯(4)
在0℃下向(S)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-甲氧基-5-氧代戊酸(3)(1g，1.915mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(731mg，3.831mmol)、HOBT(517mg，3.831mmol)、DIPEA(1mL，5.747mmol)及1-苯甲基环丙-1-胺(2)(337mg，2.298mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在40％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-(叔丁氧基羰基)-L-谷氨酸甲酯(4)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝413[M+Na]+
N5-(1-苯甲基环丙基)-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(5)
在0℃下向N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-(叔丁氧基羰基)-L-谷氨酸甲酯(4)(1.0g，2.564mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中逐滴添加含4N HCl的二噁烷(20mL)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到N5-(1-苯甲基环丙基)-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(5)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 291.28[M+H]+
N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-L-谷氨酸甲酯(6)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(1.0g，2.949mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.12g，5.899mmol)、HOBT(796mg，5.899mmol)、DIPEA(1.6mL，8.849mmol)及N5-(1-苯甲基环丙基)-L-谷氨酸甲酯盐酸盐(5)(855mg，3.539mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在60％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-L-谷氨酸甲酯(6)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 612.88[M+H]+
((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)
在0℃下向N5-(1-苯甲基环丙基)-N2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰基)-L-谷氨酸甲酯(6)(700mg，1.143mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.14mL，2.287mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用水(10mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将其藉由combi-flash纯化，化合物在80％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 584.53(M+H)+
((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C33)
向((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)胺基)-1-羟基-5-氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)(200mg，0.343mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(290mg，0.686mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×10mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-5-((1-苯甲基环丙基)胺基)-1,5-二氧代戊-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C33)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4
实例47：化合物C43及C61的合成
Figure GDA0003977862690002321
1-苯甲基-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(2)
在室温下向K2CO3(17.6g，128.205mmol)于丙酮(100mL)中的搅拌溶液中添加2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(1)(10g，64.102mmol)，随后在室温下添加苯甲基溴(7.6mL，64.102mmol)，且使反应混合物在70℃下回流16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且用饱和NaHCO3(150mL)淬灭，随后用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，随后用乙酸乙酯洗涤，层用饱和NaHCO3(3×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用3％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-苯甲基-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝247.26[M+H]+
2-苯甲基环戊-1-酮(3)
在室温下向1-苯甲基-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(2)(15g，60.975mmol)于冰醋酸(150mL)中的搅拌溶液中添加6N HCl水溶液(75mL)，且使反应混合物在70℃下回流6小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且倾入冰冷的水(100mL)中，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-苯甲基环戊-1-酮(3)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝175.21[M+H]+
2-苯甲基环戊-1-醇(4)
在0℃下向2-苯甲基环戊-1-酮(3)(5g，28.735mmol)于MeOH(50mL)中的搅拌溶液中添加含NaBH4(1.06g，57.471mmol)。使反应混合物在室温下搅拌30分钟。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物蒸馏，且用1N HCl淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物2-苯甲基环戊-1-醇(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝171.43[M+H]+
(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)
在0℃下向2-苯甲基环戊-1-醇(4)(5vg，28.409mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(2.5mL，28.409mmol)、三光气(2.1g，14.204mmol)，随后添加L-亮氨酸甲酯盐酸盐(5)(4.9g，34.091mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，将有机层浓缩，用1N HCl水溶液再次洗涤，随后用DCM(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用4％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝348.33[M+H]+
(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)
向(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)(4.5g，12.968mmol)于THF(40mL)、DM水(20mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(933mg，38.904mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1NHCl水溶液酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝334.45[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃下向(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)(2g，6.006mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.72g，9.009mmol)、HOBT(1.21g，9.009mmol)、DIPEA(3.13mL，18.018mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.34g，7.207mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝502.68[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(9)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(1g，1.990mmol)于二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2mL，3.981mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，将过滤物在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(9)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝474.84[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C43)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(9)(0.2g，0.422mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(0.537g，1.268mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C43)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝472.62(M+H)+
(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C61)
在室温下向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C43)(80mg，0.169mmol)于乙醇(2mL)、EtOAc(5mL)、水(1mL)中的搅拌溶液中添加NaHSO3(22mg，0.219mmol)，且加热至50℃维持16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物冷却至室温，且经由硅藻土垫过滤，随后用乙醇(5mL)洗涤。将过滤物在减压下蒸发，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚(2×5mL)、EtOAc(2×5mL)研磨，倾析溶剂，充分干燥固体，得到(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C61)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 552.2[M-H]-
实例48：化合物C54及C69的合成
Figure GDA0003977862690002361
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(((3-氯苯甲基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段)(270mg，0.903mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(259mg，1.35mmol)、HOBT(183mg，1.35mmol)、DIPEA(0.5mL，2.7mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸乙酯盐酸盐(Int-7)(345mg，0.99mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.6LCMS(ESI)：m/z 593.59(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)(280mg，0.47mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.4mL，0.94mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf0.3LCMS(ESI)：m/z 551.38(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C54)
在0℃下向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)(120mg，0.26mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(479mg，1.13mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C54)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.35LCMS(ESI)：m/z 549.50(M+H)+
((2R)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C69)
在0℃下向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C54)(200mg，0.36mmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，1.09mmol)、亚磷酸二乙酯(0.1mL，0.72mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥。粗产物藉由制备型HPLC纯化，得到((2R)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C69)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z587.2(M+H)+
实例49：化合物C56及C63的合成
Figure GDA0003977862690002381
1-苯甲基环丁-1-醇(2)
在0℃下向环丁酮(1)(5g，71.428mmol)于THF(50mL)中的搅拌溶液中添加苯基溴化镁(71mL，142.85mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(150mL)淬灭，且经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用3％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-苯甲基环丁-1-醇(2)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝163.10[M+H]+
((1-苯甲基环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)
向1-苯甲基环丁-1-醇(2)(3g，18.518mmol)于甲苯(30mL)中的搅拌溶液中添加(S)-2-异氰酸基-4-甲基戊酸甲酯(3)(3.79g，22.222mmol)，且在90℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到((1-苯甲基环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z＝334.38[M+H]
((1-苯甲基环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)
向((1-苯甲基环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)(3.5g，10.510mmol)于THF(40mL)、DM水(20mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(756mg，31.531mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1NHCl酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((1-苯甲基环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝320.36[M+H]+
(S)-2-((S)-2-(((1-苯甲基环丁氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向((1-苯甲基环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(3g，9.803mmol)于DMF(30mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(2.8g，14.705mmol)、HOBT(1.9g，14.705mmol)、DIPEA(5.4mL，29.411mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(2.1g，11.764mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(S)-2-((S)-2-(((1-苯甲基环丁氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝448.18[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(7)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((1-苯甲基环丁氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(400mg，0.871mmol)于二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.1mL，2.614mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，将过滤物在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝458.52[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C56)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(7)(0.2g，0.435mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(0.554g，1.307mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C56)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝458.2(M+H)+
(2S)-2-((S)-2-(((1-苯甲基环丁氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C63)
在室温下向粗((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C56)(180mg，0.393mmol)于EtOAc(5mL)中的搅拌溶液中添加EtOH/H2O(2mL，1mL)及NaHSO3(61mg，0.590mmol)，且将RM在40℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且将硅藻土垫用EtOH(20mL)洗涤，得到(2S)-2-((S)-2-(((1-苯甲基环丁氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C63)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝538.2(M+H)+
实例50：化合物C58及C59的合成
Figure GDA0003977862690002411
2,3-二氢喹啉-4(1H)-酮(2)
将3-(苯基胺基)丙酸(1)(20g，121.21mmol)于PPA(200g)中的搅拌溶液加热至100℃维持16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用冰冷的水稀释，且用EtOAc(3×100mL)萃取。使有机层合并，且用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗2,3-二氢喹啉-4(1H)-酮(2)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 148.07[M+H]+
4-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(3)
在室温下向2,3-二氢喹啉-4(1H)-酮(2)(5.4g，36.73mmol)于二氯甲烷(80mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(7.5mL，43.78mmol)、(Boc)2O(9.5mL，43.78mmol)、DMAP(445mg，3.64mmol)，且加热至50℃维持16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用DCM稀释，且用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到4-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：40％乙酸乙酯/己烷Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z 248.12[M+H]+
4-羟基-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(4)
在0℃下向4-氧代-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(3)(4g，16.12mmol)于甲醇(40mL)中的搅拌溶液中添加NaBH4(900mg，24.19mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且在减压下蒸发，得到粗产物，将此粗产物用水稀释，且用EtOAc(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到4-羟基-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(4)。TLC系统：40％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 272.30[M+Na]+
4-((((S)-1-甲氧基-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(6)
在室温下向4-羟基-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(4)(2g，8.03mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌溶液中添加(S)-2-异氰酸基-4-甲基戊酸甲酯(5)(2.06g，12.04mmol)，且在密封试管下加热至100℃维持16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到4-((((S)-1-甲氧基-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(6)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 443.44[M+Na]+
(((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)
在室温下向4-((((S)-1-甲氧基-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(6)(2.4g，5.71mmol)于THF(15mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(411mg，17.14mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 429.21[M+Na]+
4-((((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(8)
在0℃下向(((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)(2g，4.92mmol)、DMF(20mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.4g，7.38mmol)、HOBt(0.9g，7.38mmol)、DIPEA(2.5mL，14.76mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.1g，5.91mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在3％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到4-((((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 575.54[M+H]+
4-((((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(9)
在0℃下向4-((((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(8)(500mg，0.87mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.8mL，1.74mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到4-((((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 569.60[M+Na]+
4-((((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(化合物C59)
在0℃下向4-((((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(9)(150mg，0.27mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，添加戴斯-马丁高碘烷(349mg，0.82mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到4-((((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(化合物C59)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z545.45(M+H)+
(2S)-2-((2S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C58)
向4-((((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(化合物C59)(0.15g，0.27mmol)溶解于乙酸乙酯(3.0mL)、乙醇(2.0mL)、水(0.5mL)的搅拌溶液中，添加NaHSO3(46mg，0.55mmol)，且在40℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且将过滤物经硫酸钠干燥，浓缩，且将粗化合物用EtOAc和二乙醚洗涤，得到(2S)-2-((2S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C58)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 625.2[M]-
实例51：化合物C71及C62的合成
Figure GDA0003977862690002451
1-(吡啶-3-基甲基)环丙-1-醇(2)
向2-(吡啶-3-基)乙酸甲酯(1)(10g，66.225mmol)于THF(100mL)中的搅拌溶液中添加异丙醇钛(27.4g，96.549mmol)，且随后在-78℃下在30分钟内缓慢逐滴添加含2M氯化乙基镁的THF(115mL，231.78mmol)。随后将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(3×40mL)萃取，用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在94％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到1-(吡啶-3-基甲基)环丙-1-醇(2)。TLC系统：80％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝150.06[M+H]+
((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)
向1-(吡啶-3-基甲基)环丙-1-醇(2)(3.7g，24.832mmol)于甲苯(20mL)中的搅拌溶液中添加Et3N(10mL，74.496mmol)，随后添加(S)-2-异氰酸基-4-甲基戊酸甲酯(3)(6.3g，37.248mmol)，且在110℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用40％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)。TLC系统：70％乙酸乙酯/己烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z＝321.34[M+H]
((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)
向((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)(4.8g，15.00mmol)于THF(40mL)、DM水(20mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(1.8g，45.00mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1NHCl酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝307.22[M+H]+
(S)-2-((S)-4-甲基-2-(((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(1.5g，4.901mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.4g，7.352mmol)、HOBT(0.99g，7.352mmol)、DIPEA(2.7mL，14.705mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1g，5.882mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(S)-2-((S)-4-甲基-2-(((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝475.14[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(吡啶-3-基甲基)环丙酯(化合物C71)
在-78℃下向(S)-2-((S)-4-甲基-2-(((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(300mg，0.632mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含2.4M LAH的THF(0.3mL，0.632mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，在减压下浓缩过滤物，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(吡啶-3-基甲基)环丙酯(化合物C71)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝445.12[M+H]+
(2S)-1-羟基-2-((S)-4-甲基-2-(((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C62)
在室温下向粗((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(吡啶-3-基甲基)环丙酯(化合物C71)(200mg，0.450mmol)于EtOAc(5mL)中的搅拌溶液中添加EtOH/H2O(2mL，1mL)及NaHSO3(70mg，0.675mmol)，且将RM在40℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用EtOH(20mL)洗涤硅藻土垫，得到(2S)-1-羟基-2-((S)-4-甲基-2-(((1-(吡啶-3-基甲基)环丙氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸酯(化合物C62)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝525.2(M+H)+
实例52：化合物C64的合成
Figure GDA0003977862690002481
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-2)(1.2g，3.9mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.1g，5.86mmol)、HOBT(0.79g，5.86mmol)、DIPEA(2.1mL，11.72mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7)(1.49g，4.29mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((4,4二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z 601.71(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(2)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((4,4二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)(500mg，0.85mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.85mL，1.7mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(2)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.3LCMS(ESI)：m/z 559.68(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C64)
在0℃下向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(2)(400mg，0.71mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.2g，2.87mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C64)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 557.3(M+H)+
实例53：化合物C96及C72的合成
Figure GDA0003977862690002501
2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酸甲酯(2)
在0℃下向2-(3-氯苯基)乙酸甲酯(1)(10g，54.17mmol)于THF(100mL)中的搅拌溶液中添加60％NaH(6.5g，162.51mmol)，且搅拌15分钟，随后在相同温度下添加MeI(13.5mL，216.68mmol)，且使其至室温维持16小时。反应的进展藉由TLC监测，将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用EtOAc(2×100mL)萃取，将有机层合并，且用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到粗产物，残余物藉由combi-flash纯化，化合物在5％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酸甲酯(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 213.31[M+H]+
2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(3)
在-50℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酸甲酯(6g，28.30mmol)于THF(80mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含2.4M LAH的THF(11.7mL，28.30mmol)，且搅拌1小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用EtOAc(2×50mL)萃取，将有机层合并，且用盐水溶液(60mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到粗产物，残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(3)。TLC系统：30％乙酸乙酯Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝167.4[M-OH]+
((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(3)(2.8g，15.16mmol)、L-亮氨酸甲酯(2.64g，18.19mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(3mL，1体积)，随后添加三光气(2.24g，7.58mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用DCM(2×30mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在8％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 356.31[M+H]+
((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)
在室温下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)(2.3g，6.47mmol)于THF(10mL)及水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(800mg，19.43mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，且用二乙醚(20mL)稀释及洗涤，将水层用1N HCl水溶液酸化直至pH为约4，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 342.34[M+H]+
(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)(10g，29.32mmol)、DMF(100mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(8.401g，43.98mmol)、HOBt(5.76g，43.98mmol)、DIPEA(15.2mL，87.9mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(6.545g，35.19mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 510.55[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(8)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(3g，5.893mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(8.8mL，17.681mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到cpd-8(2.8g，5.81mmol，产率98％)的混合物。将混合物藉由SFC纯化，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(8)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 482.50[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C96)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(8)(1g，2.079mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(2.644g，6.237mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用DCM(15mL)、随后用饱和海波溶液(3×15mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由正相硅胶纯化来纯化，10％M eOH/DCM产物经洗脱为((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C96)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 480.2(M+H)+
(2S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C72)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C96)(750mg，1.565mmol)溶解于乙酸乙酯(2.0mL)、乙醇(2.0mL)、水(2.0mL)的搅拌溶液中，添加NaHSO3(325mg，3.131mmol)，且在50-60℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，用甲醇(10mL)洗涤，且将过滤物经硫酸钠干燥，浓缩，且将粗化合物用DCM/二乙醚/戊烷的组合洗涤，得到(2S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C72)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷，随后100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 560.1(M-Na)-
实例54：化合物C54及C69的合成
Figure GDA0003977862690002541
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(((3-氯苯甲基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段)(270mg，0.903mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(259mg，1.35mmol)、HOBT(183mg，1.35mmol)、DIPEA(0.5mL，2.7mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸乙酯盐酸盐(Int-7)(345mg，0.99mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.6LCMS(ESI)：m/z 593.59(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)(280mg，0.47mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.4mL，0.94mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.3LCMS(ESI)：m/z 551.38(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C54)
在0℃下向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)(120mg，0.26mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(479mg，1.13mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C54)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf:0.35LCMS(ESI)：m/z 549.50(M+H)+
((2R)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C69)
在0℃下向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C54)(200mg，0.36mmol)于DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，1.09mmol)、亚磷酸二乙酯(0.1mL，0.72mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥。将粗产物藉由制备型HPLC纯化，得到((2R)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C69)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 587.2(M+H)+
实例55：化合物C60及C76的合成
Figure GDA0003977862690002561
2-(3-(苯甲氧基)苯基)乙酸甲酯(2)
在室温下向2-(3-羟基苯基)乙酸甲酯(1)(5g，3.012mmol)于DMF(50mL)中的搅拌溶液中缓慢添加K2CO3(12.46mL，9.03mmol)，随后添加苯甲基溴(7.7mL，4.51mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用冰冷的水(150mL)淬灭，且搅拌1小时，用二乙醚(3×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用7％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-(3-(苯甲氧基)苯基)乙酸甲酯(2)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝257.36[M+H]+
1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙-1-醇(3)
在0℃下向2-(3-(苯甲氧基)苯基)乙酸甲酯(2)(6g，23.43mmol)于THF(60mL)中的搅拌溶液中缓慢添加三异丙醇钛(9.3mL，46.61mmol)，随后在0℃下添加乙基溴化镁(58.5mL，58.5mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，且经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-苯甲基环丙-1-醇(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝255.1[M+H]+
((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)
向1-苯甲基环丙-1-醇(3)(2.5g，9.82mmol)于DCM(30mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(3mL)、L-亮氨酸甲酯盐酸盐(4)(1.7g，11.79mmol)，随后在0℃下缓慢添加三光气(1.45g，4.91mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1NHCl水溶液(50mL)淬灭，随后用DCM(2×50mL)萃取，用2×50mL NaHCO3溶液洗涤，有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用15％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝426.47[M+H]+
((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)
在0℃下向((1-苯甲基环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)(1.2g，2.8mmol)于THF(10mL)、水(2.5mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(350mg，8.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N H Cl酸化，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：70％乙酸乙酯及石油醚Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝412.44[M+H]+
(S)-2-((S)-2-(((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)(23.2g，7.78mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(2.2g，11.67mmol)、HOBT(1.576g，11.67mmol)、DIPEA(4.3mL，23.34mmol)及(R)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.73g，9.34mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到(S)-2-((S)-2-(((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝580.78[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙酯(6)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(1.3g，2.24mmol)于二氯甲烷(13mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(3.36mL，6.6mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(50mL)淬灭，且用DCM(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙酯(8)。TLC系统：70％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝552.46[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙酯(化合物C60)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丙酯(7)(200mg，0.362mmol)溶解于乙酸乙酯(4mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(446mg，1.088mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，用硅藻土垫过滤，将过滤物用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将粗产物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙酯(化合物C60)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝444.42(M+H)+
(2S)-2-((S)-2-(((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C76)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙酯(化合物C60)(150mg，0.273mmol)溶解于乙酸乙酯(1.0mL)、乙醇(1.0mL)、水(1.0mL)的搅拌溶液中，添加NaHSO3(31mg，0.3mmol)，且在50-60℃下搅拌24小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，用甲醇(10mL)洗涤，且将过滤物经硫酸钠干燥，浓缩，且将粗化合物用DCM/二乙醚/戊烷的组合洗涤，得到(2S)-2-((S)-2-(((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C76)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷，随后100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 630.2(M-Na)
实例56：化合物C64及C95的合成
Figure GDA0003977862690002601
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-2)(1.2g，3.9mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.1g，5.86mmol)、HOBT(0.79g，5.86mmol)、DIPEA(2.1mL，11.72mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7)(1.49g，4.29mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((4,4二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z 601.71(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(2)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((4,4二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(1)(500mg，0.85mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.85mL，1.7mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(2)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.3LCMS(ESI)：m/z 559.68(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C64)
在0℃下向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(2)(400mg，0.71mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.2g，2.87mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C64)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 557.3(M+H)+
((2S)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C95)
向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C64)(100mg，0.179mmol)溶解于DCM(2mL)中的搅拌溶液，在0℃下添加DIPEA(0.1mL，0.53mmol)及亚磷酸二乙酯(0.08mL，0.53mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，用DCM(3×20mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C9)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 695.3.3(M+H)+
实例57：化合物C66及C85的合成
Figure GDA0003977862690002621
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((1-硝基环己基)甲基)戊二酸1-乙酯5-甲酯
在0℃下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸1-乙酯5-甲酯(2)(1.86g，6.17mmol)于ACN(8mL)中的搅拌溶液中添加硝基环己烷(1)(800mg，6.17mmol)及DBU(1.8mL，12.4mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((1-硝基环己基)甲基)戊二酸1-乙酯5-甲酯(3)。TLC系统：60％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 453.48(M+Na+H)+
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯(4)
在-10℃下向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((1-硝基环己基)甲基)戊二酸1-乙酯5-甲酯(3)(500mg，1.16mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加氯化镍(151mg，1.16mmol)，随后添加硼氢化钠(221mg，5.81mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用水(5mL)淬灭，且用10％MeOH/DCM(3×25mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(10mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯(4)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 369.55(M+H)+
2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯盐酸盐(5)
在0℃下向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯(4)(2g，5.43mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加1,4-二噁烷.HCl(20mL)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物用正戊烷研磨，得到2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯盐酸盐(5)。TLC系统：15％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 269.03(M+H)+
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯(6)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(1.2g，4.01mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.1g，6.01mmol)、HOBT(800mg，6.01mmol)、DIPEA(2mL，12mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯盐酸盐(1.4g，4.8mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯(6)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.6LCMS(ESI)：m/z 550.61(M+H)+
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯(7)
在0℃下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯(6)(800mg，1.45mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.45mL，2.91mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸乙酯(7)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 508.20(M+H)+
((2S)-4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C66)
在0℃下向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)(100mg，0.19mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(334mg，0.78mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C66)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 506.2(M+H)+
((2R)-1-((1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C85)
在0℃下向((2S)-4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C66)(200mg，0.39mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.2mL，1.1mmol)、亚磷酸二乙酯(0.14mL，1.1mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥。将粗产物藉由制备型HPLC纯化，得到((2R)-1-((1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C85)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 644.2(M+H)+
实例58：化合物C67及C82的合成
Figure GDA0003977862690002661
(S)-2-胺基-3-(3-氟苯基)丙酸甲酯(2)
在0℃下向(S)-2-胺基-3-(3-氟苯基)丙酸(1)(500mg，2.73mmol)于甲醇(10mL)中的搅拌溶液中同时添加乙酰氯(1mL，10体积)及催化剂DMF，且将反应混合物在80℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应物质蒸发至干，且用正戊烷研磨，得到(S)-2-胺基-3-(3-氟苯基)丙酸甲酯(2)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 198.24(M+H)+
(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-(3-氟苯基)丙酸甲酯(4)
在0℃下向(S)-2-胺基-3-(3-氟苯基)丙酸甲酯(3)(108mg，0.76mmol)、(S)-2-胺基-3-(3-氟苯基)丙酸甲酯(2)(100mg，0.507mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(0.1mL，1体积)，随后添加三光气(225mg，0.76mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用DCM(2×30mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在8％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-(3-氟苯基)丙酸甲酯(4)。TLC系统：40％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 366.30[M+H]+
(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-(3-氟苯基)丙酸(5)
在室温下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-(3-氟苯基)丙酸甲酯(4)甲基(1.2g，3.28mmol)于THF(8mL)、水(2mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(404mg，9.86mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-(3-氟苯基)丙酸(5)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 351.92(M+H)+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-(3-氟苯基)丙酰胺基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向(R)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-(3-氟苯基)丙酸(5)(970mg，2.76mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(790mg，790mmol)、HOBT(595mg，4.41mmol)、DIPEA(1.4mL，8.28mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7)(1.15g，3.31mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-(3-氟苯基)丙酰胺基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z 631.31(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-(3-氟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-(3-氟苯基)丙酰胺基)丙酸甲酯(6)(600mg，0.95mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.95mL，1.9mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-(3-氟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.2LCMS(ESI)：m/z 603.7(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-(3-氟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C67)
在0℃下向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-(3-氟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)(500mg，0.79mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1g，2.38mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-(3-氟苯基)-1-氧代丙-2yl)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C67)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z601.2(M+H)+
((2S)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-3-(3-氟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C67)
向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-(3-氟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C82)(100mg，0.18mmol)溶解于DCM(2mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加DIPEA(0.1mL，0.54mmol)及亚磷酸二乙酯(0.07mL，0.54mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，用DCM(3×20mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且藉由制备型HPLC纯化，得到纯((2S)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-3-(3-氟苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C67)。TLC系统：100％EtOAc/石油醚Rf：0.25LCMS(ESI)：m/z 739.2(M+H)+
实例59：化合物C68的合成
Figure GDA0003977862690002691
(3S)-3-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(2)
在0℃下向((S)-1-(((S)-1-氰基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-1-(四氢-1λ4-噻吩-1-亚基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(1)(750mg，1.2mmol)于THF/H2O(5mL/2.5mL)中的搅拌溶液中添加过硫酸氢钾(745mg，2.4mmol)，且将混合物在室温下搅拌2小时。随后添加2-吡啶甲基胺(0.06mL，0.4189mmol)于THF/DMF(0.5mL/0.25mL)中的溶液。随后向混合物中添加1N HCl，且将pH调整至酸性，且用乙酸乙酯萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到(3S)-3-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(2)。TLC系统：15％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 538.44[M+H]+
((S)-1-(((S)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-((吡啶-2-基甲基)胺基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(化合物C68)
在-40℃下向(3S)-3-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(2)(150mg，0.2793mmol)于THF(3mL)中的搅拌溶液中逐滴添加氯甲酸异丁酯(0.045mL，0.33516mmol)及NMM(0.045mL，0.4189mmol)。将混合物在-40℃下搅拌30分钟。随后添加2-吡啶甲基胺(0.06mL，0.4189mmol)于THF/DMF(0.5mL/0.25mL)中的溶液。将混合物在-40℃下搅拌2小时。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(10mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-((吡啶-2-基甲基)胺基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(化合物C68)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z 628.3[M+H]+
实例60：化合物C70及C84的合成
Figure GDA0003977862690002701
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-1)(1g，2.9mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1g，5.2mmol)、HOBT(0.7g，5.2mmol)、DIPEA(1.5mL，8.7mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7)(1.2g，3.5mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.65LCMS(ESI)：m/z 521.27(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(2)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(1)(350mg，0.56mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.56mL，1.1mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(2)。TLC系统：5％MeOH/DCMRf：0.25LCMS(ESI)：m/z 593.26(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C70)
在0℃下向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(2)(240mg，0.4mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(515mg，1.21mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C70)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.3LCMS(ESI)：m/z 591.3(M+H)+
((2S)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C84)
向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C70)(270mg，0.28mmol)溶解于DCM(2mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加DIPEA(0.24mL，0.86mmol)及亚磷酸二乙酯(0.25mL，0.21mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，用DCM(3×20mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C84)。TLC系统：80％EtOAc/石油醚Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 729.2(M+H)+
实例61：化合物C73的合成
Figure GDA0003977862690002731
((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(3)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C56)(700mg，1.552mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加Et3N(0.27mL，1.862mmol)，随后在0℃下添加丙酮氰醇(2)(263mg，3.104mmol)，且使反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用水(50mL)稀释，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(3)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 485.75[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-胺基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(4)
在0℃下向((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(3)(500mg，1.033mmol)、DMSO(10mL)的搅拌溶液中添加K2CO3(213mg，1.549mmol)及H2O2(30％)(0.6mL，5.681mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((2S)-1-(((2S)-4-胺基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 503.23[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C73)
在0℃下向((2S)-1-(((2S)-4-胺基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(4)(450mg，0.896mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.3g，3.286mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C73)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 501.2[M+H]+
实例62：化合物C74及C94的合成
Figure GDA0003977862690002741
(1H-吲哚-2-羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)
在0℃下向1H-吲哚-2-甲酸(2)(1g，6.21mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.7g，9.31mmol)、HOBT(1.2g，5.47mmol)、三乙胺(2.6mL，4.5mmol)及L-亮氨酸甲酯(2)(1.2g，1.5mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(1H-吲哚-2-羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z 289.28(M+H)+
(1H-吲哚-2-羰基)-L-亮氨酸(4)
在室温下向(1H-吲哚-2-羰基)-L-亮氨酸甲酯甲基(3)(0.8g，2.77mmol)于THF(4mL)、水(1mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(349mg，8.33mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(1H-吲哚-2-羰基)-L-亮氨酸(4)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf:0.2LCMS(ESI)：m/z 275.1(M+H)+
2-((S)-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(1H-吲哚-2-羰基)-D-亮氨酸(4)(1g，3.649mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.03g，5.47mmol)、HOBT(0.32g，5.47mmol)、DIPEA(1.9mL，10mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7)(1.39g，4mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到2-((S)-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z554.76(M+H)+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)
在0℃下向2-((S)-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(5)(900mg，1.62mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.6mL，3.25mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.2LCMS(ESI)：m/z 526.75(M+H)+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C74)
在0℃下向N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)(200mg，0.38mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(0.48g，0.38mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C74)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 524.2(M+H)+
(2-((S)-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-羟基丙基)膦酸二乙酯(化合物C94)
在0℃下向N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C74)(30mg，0.05mmol)溶解于DCM(2mL)中的搅拌溶液，添加DIPEA(0.03mL，0.15mmol)及亚磷酸二乙酯(0.03mL，0.15mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，用DCM(3×20mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且藉由制备型HPLC纯化，得到纯(3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-1-羟基丙基)膦酸二乙酯(化合物C94)。TLC系统：100％E tOAc/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 662.2(M+H)+
实例63：化合物C75及C81的合成
Figure GDA0003977862690002771
(S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向1H-吲哚-2-甲酸(1)(2g，12.42mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(3.5g，18.6mmol)、HOBT(1.5g，12.4mmol)、三乙胺(5.2mL，37.2mmol)及(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(2)(3.4g，18.6mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z 329.33(M+H)+
(S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(4)
在室温下向(S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(3)(7g，24.3mmol)于THF(12mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(3g，72.9mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1NHCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(4)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 315.1(M+H)+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(R)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(酸片段-5)(1g，3.18mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.88g，4.6mmol)、HOBT(0.62g，4.6mmol)、DIPEA(1.6mL，9.3mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7)(1.3g，3.8mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.65LCMS(ESI)：m/z 594.28(M+H)+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)(600mg，1.08mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1mL，2.1mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.2LCMS(ESI)：m/z 566.3(M+H)+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C75)
在0℃下向N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)(500mg，0.88mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.12g，2.87mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C75)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 564.2(M+H)+
(3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-1-羟基丙基)膦酸二乙酯(化合物C81)
向N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C75)(30mg，0.05mmol)溶解于DCM(2mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加DIPEA(0.03mL，0.15mmol)及亚磷酸二乙酯(0.03mL，0.15mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，用DCM(3×20mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且藉由制备型HPLC纯化，得到(3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-1-羟基丙基)膦酸二乙酯(化合物C81)。TLC系统：80％EtOAc/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 702.3(M+H)+
实例64：化合物C78及C99的合成
Figure GDA0003977862690002801
(2S)-2-((2S)-4-甲基-2-((((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-4-甲基-2-((((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(1.5g，3.253mmol)于THF(10mL)、水(8mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(234mg，9.7613mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-4-甲基-2-((((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 448.66[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-4-甲基-2-((((1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(1.1g，2.46mmol)、DCM(15mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(1.4g，3.691mmol)、DIPEA(1.36mL，7.382mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(608mg，2.953mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z557.89[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(化合物C99)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(4)(150mg，0.269mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(31mg，0.179mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(化合物C99)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 475.2[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(化合物C78)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(4)(200mg，0.359mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(154mg，0.899mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙胺(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯基丙-2-基酯(化合物C78)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 515.2[M+H]+
实例65：化合物C79的合成
Figure GDA0003977862690002821
1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)
向四氢噻吩(1A)(10g，113.63mmol)的搅拌溶液中添加溴乙腈(2A)(13.5g，113.63mmol)，且在室温下搅拌24小时。将所得固体用二乙醚洗涤且干燥，得到1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)。LCMS(ESI)：m/z 205.0[M-H]+
(S)-2-((S)-4-甲基-2-((((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(S)-2-((S)-4-甲基-2-((((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(800mg，1.68mmol)于THF(6mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(80mg，3.36mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((S)-4-甲基-2-((((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 484.15[M+Na]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(4)
在0℃下向(S)-2-((S)-4-甲基-2-((((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(3)(700mg，1.51mmol)、DCM(15mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(1.14g，3.02mmol)、DIPEA(0.8mL，4.53mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(376mg，1.82mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 571.78[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(化合物C79)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(4)(150mg，0.26mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(90mg，0.52mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(化合物C79)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 448.49[M+H]+
实例66：化合物C80及C98的合成
Figure GDA0003977862690002841
(S)-2-((S)-2-(3-苯甲基-3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)脲基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(1)(2g，3.252mmol)于THF(15mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(234mg，3.36mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((S)-2-(3-苯甲基-3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)脲基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 601.4[M+H]+
4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(4)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(3-苯甲基-3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)脲基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(1.5g，2.495mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(1.42g，3.743mmol)、DIPEA(1.37mL，7.487mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(616mg，2.995mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 711.53[M+H]+
4-(3-((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-1-苯甲基脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(化合物C80)
在0℃下向4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(4)(150mg，0.211mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(72mg，0.422mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到4-(3-((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-1-苯甲基脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(化合物C80)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 629.3[M+H]+
4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(化合物C98)
在0℃下向4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(4)(200mg，0.281mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(121mg，0.704mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙胺(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到4-(1-苯甲基-3-((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)脲基)哌啶-1-甲酸叔丁基酯(化合物C98)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z669.3[M+H]+
实例67：化合物C86的合成
Figure GDA0003977862690002871
(2S)-2-((2S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向4-((((S)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(1)(400mg，0.69mmol)于THF(4mL)、水(2mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(50mg，2.08mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×15mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 559.65[M-H]+
4-((((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(350mg，0.62mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(474mg，1.24mmol)、DIPEA(0.3mL，1.87mmol)及甲基1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(155mg，0.74mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用二氯甲烷(2×15mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash N P纯化，化合物在3％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到4-((((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 670.48[M+H]+
(3S)-3-((2S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(5)
在室温下向4-((((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(4)(300mg，0.44mmol)于THF(5mL)、水(2mL)中的搅拌溶液中添加过硫酸氢钾(826mg，1.34mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(3S)-3-((2S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 587.37[M-H]+
4-((((S)-1-(((S)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-((吡啶-2-基甲基)胺基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(化合物C86)
向(3S)-3-((2S)-2-((((1-(叔丁氧基羰基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(5)(130mg，0.22mmol)溶解于THF(6mL)的搅拌溶液中，在-40℃下添加NMM(29mg，0.28mmol)、氯甲酸异丁酯(36mg，0.26mmol)，且随后添加吡啶-2-基甲胺(6)(30mg，0.26mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用盐水溶液(2×15mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到4-((((S)-1-(((S)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-((吡啶-2-基甲基)胺基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)胺甲酰基)氧基)-3,4-二氢喹啉-1(2H)-甲酸叔丁基酯(化合物C86)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 679.3(M+H)+
实例68：化合物C90及C87的合成
Figure GDA0003977862690002891
(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(2g，3.9292mmol)于THF(20mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(282mg，11.7878mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 496.69[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(4)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(1.1g，2.2222mmol)、DCM(15mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(380mg，3.3333mmol)、DIPEA(1.22mL，6.666mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(915mg，4.444mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 605.71[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C90)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(4)(350mg，0.579mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(200mg，1.158mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1.5mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C90)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 523.2[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C87)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(4)(150mg，0.248mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(85mg，0.496mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙胺(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C87)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 563.2[M+H]+
实例69：化合物C88的合成
Figure GDA0003977862690002911
(S)-2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(S)-2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(2.6g，5.12mmol)于THF(30mL)、水(15mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(629mg，15.36mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 494.68[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(1.5g，3.04mmol)、DCM(20mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(1.7g，4.56mmol)、DIPEA(1.3mL，9.12mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(940mg，4.56mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flashNP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z603.74[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(化合物C88)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(4)(200mg，0.33mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(114mg，0.66mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(化合物C88)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 521.2[M+H]+
实例70：化合物C89的合成
Figure GDA0003977862690002931
((2S)-1-(((2R)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(2)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C43)(300mg，0.636mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(0.2mL，2.547mmol)、异氰基环丙烷(1)(51mg，0.764mmol)，搅拌10分钟，在0℃下添加TFA(0.09mL，1.273mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，用EtOAc(2×55mL)萃取，将经合并的有机层用1N HCl(3×20mL)、盐水溶液(3×20mL)洗涤，将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发。粗残余物((2S)-1-(((2R)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 557.3[M+H]
((S)-1-(((R)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C89)
在0℃下向((2S)-1-(((2R)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(2)(250mg，0.449mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(571mg，1.34mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((R)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C89)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 555.3(M+H)+
实例71：化合物C93的合成
Figure GDA0003977862690002941
(S)-2-((S)-2-(((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(S)-2-((S)-2-(((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(1.8g，3.57mmol)于THF(30mL)、水(15mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(440mg，10.73mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((S)-2-(((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％M eOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 490.69[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(4)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((1-(3-甲氧基苯甲基)环丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(1.5g，3.06mmol)、DCM(20mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(1.7g，4.60mmol)、DIPEA(1.3mL，9.20mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(947mg，4.60mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 599.26[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(化合物C93)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(4)(300mg，0.50mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(172mg，1.00mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-甲氧基苯甲基)环丙酯(化合物C93)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 517.2[M+H]+
实例72：化合物C96的合成
Figure GDA0003977862690002961
2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酸甲酯(2)
在0℃下向2-(3-氯苯基)乙酸甲酯(1)(10g，54.17mmol)于THF(100mL)中的搅拌溶液中添加60％NaH(6.5g，162.51mmol)，且搅拌15分钟，随后在相同温度下添加MeI(13.5mL，216.68mmol)，且使其至室温维持16小时。反应的进展藉由TLC监测，将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用EtOAc(2×100mL)萃取，将有机层合并，且用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到粗产物，残余物藉由combi-flash纯化，化合物在5％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酸甲酯(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 213.31[M+H]+
2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(3)
在-50℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酸甲酯(6g，28.30mmol)于THF(80mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含2.4M LAH的THF(11.7mL，28.30mmol)，且搅拌1小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用EtOAc(2×50mL)萃取，将有机层合并，且用盐水溶液(60mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到粗产物，残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(3)。TLC系统：30％乙酸乙酯Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝167.4[M-OH]+
((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(3)(2.8g，15.16mmol)、L-亮氨酸甲酯(4)(2.64g，18.19mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(3mL，1体积)，随后添加三光气(2.24g，7.58mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用DCM(2×30mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在8％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 356.31[M+H]+
((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)
在室温下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)(2.3g，6.47mmol)于THF(10mL)及水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(800mg，19.43mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，且用二乙醚(20mL)稀释及洗涤，将水层用1N HCl水溶液酸化直至pH为约4，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 342.34[M+H]+
(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)(10g，29.32mmol)于DMF(100mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(8.401g，43.98mmol)、HOBt(5.76g，43.98mmol)、DIPEA(15.2mL，87.9mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(6.545g，35.19mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 510.55[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(8)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(3g，5.893mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(8.8mL，17.681mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到cpd-8(2.8g，5.81mmol，产率98％)的混合物。将混合物藉由SFC纯化，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(8)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 482.50[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C96)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(8)(1g，2.079mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(2.644g，6.237mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用DCM(15mL)、随后用饱和海波溶液(3×15mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由正相硅胶纯化来纯化，10％M eOH/DCM产物经洗脱为((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C96)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 480.2(M+H)+
实例73：化合物C97的合成
Figure GDA0003977862690002991
(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(2g，3.824mmol)于THF(20mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(275mg，11.472mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：15％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 510.67[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(1.5g，2.946mmol)、DCM(15mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(1.6g，4.420mmol)、DIPEA(1.6mL，8.840mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(728mg，3.536mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z619.51[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(化合物C97)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(4)(400mg，0.647mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(278mg，0.618mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙胺(2mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(化合物C97)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 577.2[M+H]+
实例74：化合物C100的合成
Figure GDA0003977862690003011
(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(2g，3.824mmol)于THF(20mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(275mg，11.472mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：15％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 510.67[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(1.5g，2.946mmol)、DCM(15mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(1.6g，4.420mmol)、DIPEA(1.6mL，8.840mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(728mg，3.536mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z619.51[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(化合物C100)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(4)(400mg，0.647mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(278mg，1.618mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1.5mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯(化合物C100)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 537.2[M+H]+
实例75：化合物C65的合成
Figure GDA0003977862690003021
((戊氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)
在0℃下向氯甲酸戊酯(1)(3.7g，24.56mmol)、L-亮氨酸甲酯盐酸盐(3g，20.68mmol)于THF(30mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(10.4mL，62.06mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释，且用水(2×30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((戊氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 201.39[M+H]+
((戊氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)
在室温下向((戊氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)(2.5g，mmol)于THF(30mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(717mg，29.90mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(((2-甲基-1-苯基丙-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 330.50[M+Na]+
2-甲基-2-((S)-4-甲基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向((戊氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)(400mg，1.632mmol)、DMF(5mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(467mg，2.44mmol)、HOBt(330mg，2.44mmol)、DIPEA(0.87mL，4.89mmol)及2-胺基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2A)(391mg，1.95mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-甲基-2-((S)-4-甲基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 524.7[M+H]+
((2S)-1-((1-羟基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸戊酯(6)
在0℃下向2-甲基-2-((S)-4-甲基-2-(((戊氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(400mg，0.93mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加含2MLiBH4的THF(0.9mL，1.86mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-羟基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸戊酯(6)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 400.20[M+H]+
((2S)-4-甲基-1-((2-甲基-1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸戊酯(化合物C65)
向((2S)-1-((1-羟基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸戊酯(6)(200mg，0.50mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(630mg，1.48mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-4-甲基-1-((2-甲基-1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸戊酯(化合物C65)。TLC系统：10％M eOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 398.2(M+H)+
实例76：化合物C77及C91的合成
Figure GDA0003977862690003041
Figure GDA0003977862690003051
4-丙基环己-1-醇(2)
在0℃下向4-丙基环己-1-酮(1)(500mg，3.57mmol)于甲醇(10mL)中的搅拌溶液中添加硼氢化钠(337mg，8.92mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到4-丙基环己-1-醇(2)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf 0.2LCMS(ESI)：m/z 124.87[M-OH]+
(((4-丙基环己基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)
在0℃下向4-丙基环己-1-醇(2)(200mg，1.418mmol)、L-亮氨酸甲酯(3)(308mg，2.1mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(0.2mL，1体积)，随后添加三光气(209mg，0.7mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用DCM(2×20mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在8％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(((4-丙基环己基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 314.51[M+H]+
(((4-丙基环己基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)
在室温下向(((4-丙基环己基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)(500mg，1.597mmol)于THF(3mL)、水(1mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(115mg，4.8mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1NHCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(((4-丙基环己基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 300.4(M+H)+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-4-甲基-2-((((4-丙基环己基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向(((4-丙基环己基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(700mg，2.34mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(670mg，3.51mmol)、HOBT(473mg，3.51mmol)、DIPEA(1.2mL，7.02mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7)(974mg，1.2mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用60％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-4-甲基-2-((((4-丙基环己基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z 575.91(M+H)+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-4-甲基-2-((((4-丙基环己基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-4-甲基-2-((((4-丙基环己基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)丙酸甲酯(6)(350mg，0.63mmol)于DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.63mL，1.27mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-4-甲基-2-((((4-丙基环己基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf0.2LCMS(ESI)：m/z 551.4(M+H)+
((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸4-丙基环己酯(化合物C77)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-4-甲基-2-((((4-丙基环己基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)丙酸甲酯(7)(290mg，0.52mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(670mg，1.58mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸4-丙基环己酯(化合物C77)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 549.3(M+H)+
((2R)-1-((3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-1-(二乙氧基磷酰基)-1-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸4-丙基环己酯(化合物C91)
向((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸4-丙基环己酯(化合物C77)(450mg，0.821mmol)溶解于DCM(2mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加DIPEA(0.34mL，2.46mmol)及亚磷酸二乙酯(0.42mL，2.46mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，用DCM(3×20mL)萃取。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且藉由制备型HPLC纯化，得到纯(3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-1-羟基丙基)膦酸二乙酯(化合物C91)。TLC系统：100％EtOAc/石油醚Rf：0.25LCMS(ESI)：m/z 687.3(M+H)+
实例77：化合物C83的合成
Figure GDA0003977862690003081
(E)-2-(亚苯甲基胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向丙氨酸甲酯盐酸盐(1)(15g，108.30mmol)、苯甲醛(11.4g，108.30mmol)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(18.2mL，129.96mmol)，随后添加硫酸镁(9.1g，75.81mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测，将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用DCM(50mL)洗涤。将过滤物用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到粗(E)-2-(亚苯甲基胺基)丙酸甲酯(3)，将其用于下一步骤中。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 192.38[M+H]+
2-胺基-2-甲基戊二酸二甲酯(5)
在0℃下向粗(E)-2-(亚苯甲基胺基)丙酸甲酯(3)(15g，78.53mmol)于乙腈(100mL)中的搅拌溶液中同时添加碳酸钾(32.5g，235.60mmol)、苯甲基三乙基氯化铵(3.5g，15.70mmol)，随后添加丙烯酸甲酯(10g，117.80mmol)，且搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用EtOAc(2×50mL)萃取，将有机层合并，且用盐水溶液(2×60mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到粗产物，残余物藉由combi-flash纯化，化合物在80％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到2-胺基-2-甲基戊二酸二甲酯(5)。TLC系统：80％乙酸乙酯Rf：0.2
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-2-甲基戊二酸二甲酯(5)
在0℃下向2-胺基-2-甲基戊二酸二甲酯(5)(7.5g，39.68mmol)于甲醇(75mL)、THF(75mL)中的搅拌溶液中添加NaHCO3(6.6g，78.57mmol)，随后添加boc酸酐(12.9mL，59.52mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在5％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-2-甲基戊二酸二甲酯(6)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 312.27[M+Na]+
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-(氰基甲基)-2-甲基戊二酸二甲酯(6)
在-78℃下向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-2-甲基戊二酸二甲酯(5)(7.5g，25.95mmol)于THF(70mL)中的搅拌溶液中添加含1M LiHMDS的THF(57mL，29.95mmol)，且搅拌1小时，随后逐滴添加溴乙腈(2.16g，31.14mmol)，且在相同温度下再继续搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用甲醇(10mL)及乙酸(5mL)淬灭，且在室温下搅拌1小时，随后用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-(氰基甲基)-2-甲基戊二酸二甲酯(8)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.5
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
将COC12·6H2O(10.3g，45.73mmol)及2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-(氰基甲基)-2-甲基戊二酸二甲酯(8)(7.3g，22.25mmol)于MeOH(70mL)中的溶液剧烈搅拌，且冷却至0℃，随后在30分钟内逐份添加NaBH4(3.3g，86.84mmol)。将反应物在室温下搅拌24小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物浓缩以去除甲醇，且用1N HCl(50mL)淬灭，随后将所形成的固体经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(100mL)洗涤。将两个层分离，且经硫酸钠干燥，过滤，且浓缩，得到粗产物，将此残余物藉由管柱色谱纯化，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf:0.5LCMS(ESI):m/z 301.10[M+H]+
2-胺基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2A)
在0℃下将4M HCl于二
Figure GDA0003977862690003101
烷(5mL)中的溶液添加至2-((叔丁氧基羰基)胺基)-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)(0.5g，1.66mmol)于1,4二
Figure GDA0003977862690003102
烷(5mL)中的溶液中。将混合物搅拌2小时，且随后浓缩，得到粗2-胺基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯.HCl盐(胺片段-2A)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 201.39[M+H]+
2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(11)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(10)(600mg，1.910mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(547mg，2.82mmol)、HOBt(386mg，2.85mmol)、DIPEA(1mL，5.73mmol)及2-胺基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2A)(458mg，2.29mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(11)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 524.7[M+H]+
((2S)-1-((1-羟基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(12)
在0℃下向2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(11)(550mg，1.049mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1mL，2.09mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-羟基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(12)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 496.7[M+H]+
((2S)-4-甲基-1-((2-甲基-1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C83(
向((2S)-1-((1-羟基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(12)(160mg，0.32mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(411mg，0.96mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-4-甲基-1-((2-甲基-1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C83)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 49 4.2(M+H)+
实例78：化合物C101及C92的合成
Figure GDA0003977862690003121
2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酸甲酯(2)
在0℃下向2-(3-氯苯基)乙酸甲酯(1)(10g，54.17mmol)于THF(100mL)中的搅拌溶液中添加60％NaH(6.5g，162.51mmol)，且搅拌15分钟，随后在相同温度下添加MeI(13.5mL，216.68mmol)，且使其至室温维持16小时。反应的进展藉由TLC监测，将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用EtOAc(2×100mL)萃取，将有机层合并，且用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到粗产物，残余物藉由combi-flash纯化，化合物在5％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酸甲酯(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 213.31[M+H]+
2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(3)
在-50℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酸甲酯(6g，28.30mmol)于THF(80mL)中的搅拌溶液中缓慢添加含2.4M LAH的THF(11.7mL，28.30mmol)，且搅拌1小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用EtOAc(2×50mL)萃取，将有机层合并，且用盐水溶液(60mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到粗产物，残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(3)。TLC系统：30％乙酸乙酯LCMS(ESI)：m/z＝167.4[M-OH]+
((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(3)(2.8g，15.16mmol)、L-亮氨酸甲酯(4)(2.64g，18.19mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(3mL，1体积)，随后添加三光气(2.24g，7.58mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用DCM(2×30mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在8％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 356.31[M+H]+
((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)
在室温下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)(2.3g，6.47mmol)于THF(10mL)及水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(800mg，19.43mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，且用二乙醚(20mL)稀释及洗涤，将水层用1N HCl水溶液酸化直至pH为约4，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 342.34[M+H]+
(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)(10g，29.32mmol)于DMF(100mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(8.401g，43.98mmol)、HOBt(5.76g，43.98mmol)、DIPEA(15.2mL，87.9mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(6.545g，35.19mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 510.55[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C101)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(2×7g，13.75mmol)于DCM(70mL)中的搅拌溶液中添加含2M L iBH4的THF(20mL，41.25mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到cpd-8(10g，20.75mmol，产率75.58％)的混合物。将混合物藉由SFC纯化，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C101)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C96)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙-2-基酯(8)(1g，2.079mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(2.644g，6.237mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用DCM(15mL)、随后用饱和海波溶液(3×15mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由正相硅胶纯化来纯化，10％M eOH/DCM产物经洗脱为((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C96)。TLC系统：10％M eOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 480.2(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-1-(二乙氧基膦酰基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C92)
在0℃下向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C96)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中同时添加磷酸二乙酯(138mg，1.002mmol)、DIPEA(0.18mL，1.002mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用10％甲醇/DCM(3×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-(((2S)-1-(二乙氧基膦酰基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C92)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 618.2[M+H]+
实例79：化合物C102的合成
Figure GDA0003977862690003161
3-硝基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(2)
在室温下向3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(1)(20g，70.671mmol)于DMSO(100mL)中的搅拌溶液中添加间苯三酚(10.225g，148.409mmol)，随后添加亚硝酸钠(9.79g，77.738mmol)，且在45℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用水(250mL)淬灭，且用二乙醚(3×100mL)萃取，将经合并的有机层用水(2×50ml)、盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到3-硝基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(2)。TLC系统：50％EtOAc/石油醚Rf：0.45
3-硝基氮杂环丁烷盐酸盐(3)
在0℃下向3-硝基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁基酯(2)(3.5g，17.326mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中添加含4M HC l的1,4-二噁烷(5mL)，且在室温下搅拌4小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。4小时后，将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用二乙醚(2×10mL)研磨，得到3-硝基氮杂环丁烷盐酸盐(3)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 102.80[M+H]+
1-(3-硝基氮杂环丁烷-1-基)乙-1-酮(4)
向3-硝基氮杂环丁烷盐酸盐(3)(3.3g，23.913mmol)溶解于DCM(20mL)的搅拌溶液中，在0℃下同时添加乙酸酐(2.2mL，23.913mmol)及三乙胺(2.7mL，35.869mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用DCM(2×20mL)萃取，将有机层用水(2×10ml)、盐水溶液(10mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到1-(3-硝基氮杂环丁烷-1-基)乙-1-酮。TLC系统：30％EtOAc/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 144.78[M+H]+
2-((1-乙酰基-3-硝基氮杂环丁烷-3-基)甲基)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)戊二酸二甲酯(5)
在0℃下向1-(3-硝基氮杂环丁烷-1-基)乙-1-酮(4)(1.5g，10.416mmol)于ACN(15mL)中的搅拌溶液中添加(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸二甲酯Int-5、2-((1-乙酰基-3-硝基氮杂环丁烷-3-基)甲基)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)戊二酸二甲酯(5)(3.3g，11.458mmol)及DBU(1.9mL，12.499mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-((1-乙酰基-4-硝基哌啶-4-基)甲基)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)戊二酸二甲酯(5)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.35LCMS(ESI)：m/z 454.36(M+Na+H)+
3-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(6)
在-10℃下向2-((1-乙酰基-3-硝基氮杂环丁烷-3-基)甲基)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)戊二酸二甲酯(5)(5.2g，12.06mmol)于甲醇(100mL)中的搅拌溶液中添加氯化镍(1.7g，13.27mmol)，随后添加硼氢化钠(2.29g，60.3mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用水(50mL)淬灭，且用DCM(3×150mL)萃取，将经合并的有机层用水(2×50ml)、盐水溶液(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到3-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％M eOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 370.2(M+H)+
3-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-2-胺基丙酸甲酯(7)
在0℃下向3-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(6)(2g，5.42mmol)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中添加1,4-二噁烷.HCl(12mL)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物用正戊烷研磨，得到3-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-2-胺基丙酸甲酯(7)。TLC系统：15％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 270.21(M+H)+
3-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(8)
在0℃下向(((3-氯苯甲基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(1g，3.34mmol)于DMF(12mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.7g，3.67mmol)、HOBT(0.49g，3.67mmol)、DIPEA(1.8mL，10.02mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(8)(1g，3.64mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(60mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到3-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 551.41(M+H)+
((2S)-1-((1-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)
在0℃下向3-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)丙酸甲酯(9)(600mg，0.94mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.9mL，1.89mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf0.3LCMS(ESI)：m/z 523.57(M+H)+
((2S)-1-((1-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C102)
在0℃下向((2S)-1-((1-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(9)(100mg，0.19mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(478mg，0.76mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(2-乙酰基-6-氧代-2,5-二氮杂螺[3.4]辛-7-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C102)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 521.2(M+H)+
实例80：化合物C103及C111的合成
Figure GDA0003977862690003201
(S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酸甲酯(2)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(Int-3)(3.0g，16mmol)、(S)-2-胺基-3,3-二甲基丁酸甲酯(2.8g，19.0mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(9mL，3体积)，随后添加三光气(2.36g，8.0mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用2N HCl(30mL)淬灭，用DCM(2×30mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酸甲酯(2)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 356.43[M+H]+
(S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酸(3)
在室温下向(S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酸甲酯(2)(4.1g，11.54mmol)于THF(20mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(2.7g，115.54mmol)，且在室温下搅拌24小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酸(3)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 342.41[M+H]+
(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(4)
在0℃下向(S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酸(3)(2g，5.86mmol)、DMF(15mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.6g，8.79mmol)、HOBt(1.1g，8.79mmol)、DIPEA(2.5mL，17.52mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.3g，7.03mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 510.57[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(5)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(4)(500mg，0.98mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1mL，1.96mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 482.58[M+H]+
((S)-3,3-二甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丁-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C103)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(5)(200mg，0.41mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(528mg，1.24mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(15mL)、随后用饱和海波溶液(3×15mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3,3-二甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丁-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C103)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z 4 80.20(M+H)+
(2S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C111)
在室温下向((S)-3,3-二甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丁-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C103)(100mg，0.20mmol)于乙醇(2mL)、EtOAc(1mL)、水(1mL)中的搅拌溶液中添加NaHSO3(43mg，0.41mmol)，且加热至50℃维持16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物冷却至室温，且经由硅藻土垫过滤，随后用乙醇(5mL)洗涤。将过滤物在减压下蒸发，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚、EtOAc研磨3次，得到(2S)-2-((S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3,3-二甲基丁酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C111)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 560.1[M-Na]-
实例81：化合物C104及C114的合成
Figure GDA0003977862690003231
2-(3-氯苯基)乙醛(2)
在0℃下向2-(3-氯苯基)乙-1-醇(1)(20g，128.20mmol)于DCM(200mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(16.3g，384.61mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用DCM(80mL)洗涤。将过滤物用饱和海波溶液(3×150mL)、饱和NaHCO3溶液(3×150mL)、随后用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到粗产物；将粗产物藉由正相色谱纯化，得到2-(3-氯苯基)乙醛(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 156.18[M+1]+
2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-醇(4)
在-30℃下向苯基溴化镁(3)(155mL，155.84mmol)于四氢呋喃(120mL)中的搅拌溶液中添加2-(3-氯苯基)乙醛(12g，77.92mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并，且用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-醇(4)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z 215.18[M-OH]+
((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-醇(4)(4g，17.23mmol)、L-亮氨酸甲酯盐酸盐(5)(3.7g，25.85mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(12mL，3体积)，随后添加三光气(2.5g，8.61mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用1N HCl(50mL)洗涤，有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 426.43[M+Na]+
((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)
在室温下向((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)(2.2g，5.45mmol)于THF(30mL)、水(15mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(671mg，16.37mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 412.41[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)(1.7g，4.36mmol)、DMF(20mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.2g，6.55mmol)、HOBt(0.88g，6.55mmol)、DIPEA(1.8mL，13.10mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(0.97g，5.24mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 558.57[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(9)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(800mg，1.43mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.4mL，2.87mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z530.60[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C104)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(9)(250mg，0.47mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(600mg，1.41mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C104)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 528.2(M+H)+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C114)
在室温下向((S)-3,3-二甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丁-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C104)(100mg，0.18mmol)于乙醇(0.5mL)、EtOAc(1mL)、水(0.5mL)中的搅拌溶液中添加NaHSO3(39mg，0.37mmol)，且加热至50℃维持16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物冷却至室温，且经由硅藻土垫过滤，随后用乙醇(5mL)洗涤。将过滤物在减压下蒸发，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚、EtOAc研磨3次，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C114)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 608.2[M-Na]-
实例82：化合物C107的合成
Figure GDA0003977862690003261
2-((S)-2-((((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)
在0℃下向(((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(1)(600mg，1.95mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(559mg，2.92mmol)、HOBt(395mg，2.92mmol)、DIPEA(1mL，5.86mmol)及2-胺基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2A)(469mg，2.29mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((S)-2-((((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 490.40[M+H]+
((2S)-1-((1-羟基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(3)
在0℃下向2-((S)-2-((((4,4-二氟环己基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)(750mg，1.53mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.5mL，3.06mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-羟基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(3)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 462.49[M+H]+
((2S)-4-甲基-1-((2-甲基-1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C107)
向((2S)-1-((1-羟基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(3)(500mg，1.08mmol)溶解于二氯甲烷(15mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(1.3g，3.25mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-4-甲基-1-((2-甲基-1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4,4-二氟环己基)甲酯(化合物C107)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 460.2(M+H)+
实例83：化合物C108的合成
Figure GDA0003977862690003281
2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(2)
在-78℃下向DMSO(7.6mL，108.69mmol)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中添加乙二酰氯(7mL，81.52mmol)，且搅拌30分钟，随后在-78℃下添加含2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(10g，54.34mmol)的DCM，且继续2小时，在此之后在相同温度下添加TEA(45.6mL，326.08mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM(100mL)稀释，且用冰冷的水(3×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(2)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 148.07[M+H]+
2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙-1-醇(4)
在-30℃下向苯基溴化镁(3)(85mL，82.87mmol)于四氢呋喃(100mL)中的搅拌溶液中添加2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(10g，55.24mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙-1-醇(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 243.01[M-OH]+
((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙-1-醇(4)(3.6g，13.84mmol)、(S)-2-胺基-3,3-二甲基丁酸甲酯HCl(2.4g，16.61mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(10.8mL，3体积)，随后添加三光气(2.0g，6.75mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用2N H Cl(50mL)淬灭，用DCM(2×40mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 454.48[M+Na]+
((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)(3.0g，6.60mmol)于THF(20mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.81g，19.82mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 440.47[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(7)(2.2g，5.27mmol)、DMF(15mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.5g，7.85mmol)、HOBt(1.0g，7.40mmol)、DIPEA(2.8mL，16.18mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.2g，6.33mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在3％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 586.62[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(1.5g，2.56mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.5mL，5.12mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 580.96[M+Na]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C108)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)(250mg，0.44mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(570mg，1.34mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C108)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 545.45(M+H)+
实例84：化合物C109及C115的合成
Figure GDA0003977862690003311
2-(3-氯苯基)乙醛(2)
在0℃下向2-(3-氯苯基)乙-1-醇(1)(20g，128.20mmol)于DCM(200mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(16.3g，38.46mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用DCM(80mL)、随后用饱和海波溶液(3×160mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×120mL)洗涤，且将有机层用盐水(100mL)洗涤，有机层经硫酸钠干燥，浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由正相色谱纯化，得到2-(3-氯苯基)乙醛(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 155.15[M+H]+
2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-醇(4)
在-30℃下向苯基溴化镁(3)(155mL，155.84mmol)于四氢呋喃(120mL)中的搅拌溶液中添加2-(3-氯苯基)乙醛(12g，77.92mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并，且用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-醇(4)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z 215.18[M-OH]-
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(6)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-醇(4)(3.5g，15.08mmol)、(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(5)(3.6g，19.60mmol)于DCM(35mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(10.5mL，3体积)，随后添加三光气(2.2g，7.54mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1N HCl(50mL)淬灭，用DCM(2×60mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 466.49[M+Na]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(7)
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(6)(3.3g，7.44mmol)于THF(40mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(915mg，22.33mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(7)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 452.44[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(7)(3g，6.99mmol)、DMF(30mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(2g，10.48mmol)、HOBt(1.4g，10.48mmol)、DIPEA(3mL，20.97mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.5g，8.38mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)稀释，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在3％甲醇/二氯甲烷下洗脱为(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 598.30[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(9)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(1g，1.67mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.6mL，3.34mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z570.66[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C109)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(9)(700mg，1.22mmol)溶解于二氯甲烷(12mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(1.5mg，3.68mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(600mL)、随后用饱和海波溶液(3×30mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)稀释。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C109)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 568.2(M+H)+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C115)
在室温下向((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C109)(100mg，0.17mmol)于乙醇(0.5mL)、EtOAc(1mL)、水(0.5mL)中的搅拌溶液中添加NaHSO3(36mg，0.35mmol)，且加热至50℃维持16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物冷却至室温，且经由硅藻土垫过滤，随后用乙醇(5mL)洗涤。将过滤物在减压下蒸发，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚、EtOAc研磨3次，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-1-磺酸钠(化合物C115)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 648.2[M-Na]-
实例85：化合物C110及C113的合成
Figure GDA0003977862690003351
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(3)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙-1-醇(1)(3.0g，11.53mmol)、(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯盐酸盐(2.5g，13.84mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(9mL，3体积)，随后添加三光气(1.7g，5.76mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用2N HCl(50mL)淬灭，用DCM(2×40mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在8％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 494.15[M+Na]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(4)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(3)(3.0g，6.36mmol)于THF(20mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.78g，19.10mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(4)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z456.17[M-H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(4)(2.8g，6.12mmol)、DMF(20mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.75g，9.19mmol)、HOBt(1.24g，9.19mmol)、DIPEA(3.2mL，18.38mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.36g，7.35mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 626.64[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(6)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(2.0g，3.20mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(6.4mL，6.4mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 598.67[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C110)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(6)(1g，1.67mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(2.12g，5.01mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(30mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×30mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C110)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 596.3(M+H)+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(7)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(500mg，0.80mmol)于THF(6mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(100mg，2.4mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1NHCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(7)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 610.37[M-H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(7)(600mg，0.98mmol)、DCM(15mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(746mg，1.96mmol)、DIPEA(5.4mL，2.94mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(8)(242mg，1.17mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用二氯甲烷(2×15mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 721.69[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C113)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)(350mg，0.47mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(162mg，0.94mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C113)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z521.2[M+H]+
实例86：化合物C105的合成
Figure GDA0003977862690003391
2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)
在-30℃下向(3-氟苯基)溴化镁(1)(32mL，65.934mmol)的搅拌溶液中添加含2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(Int-4)(4g，21.978mmol)的二乙醚(50mL)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并，且用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z 261.27[M-OH]-
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)
向2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)(4.0g，14.388mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(4.0mL，1体积)及(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(3)(3.2g，17.266)，随后在0℃下在15分钟内逐份添加三光气(2.12g，7.194mmol)，且在室温下搅拌5小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用1N H Cl(50mL)洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 512.19[M+Na]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)(3.5g，7.157mmol)于THF(25mL)、水(15mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(515mg，21.472mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 498.3[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)(2g，4.2105mmol)、DMF(20mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.2g，6.315mmol)、HOBt(852mg，6.315mmol)、DIPEA(2.3mL，12.631mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(940mg，5.052mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在30％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 645.11[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(7)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(1.8g，2.7993mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(3.5mL，6.998mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 616,73[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C105)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(7)(200mg，0.324mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(275mg，0.649mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C105)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z614.3(M+H)+
实例87：化合物C106的合成
Figure GDA0003977862690003421
1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)
在-30℃下向(3-氯苯基)溴化镁于四氢呋喃(1)(41mL，27.472mmol)中的搅拌溶液中添加含2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(5g，27.472mmol)的二乙醚(50mL)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并，且用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z 277.16[M-OH]-
(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)
向1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)(4.2g，14.285mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(4.2mL，1体积)及(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(3)(3.17g，17.1428)，随后在0℃下在15分钟内逐份添加三光气(2.11g，7.1428mmol)，且在室温下搅拌5小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用1N HCl(50mL)洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 528.24[M+Na]+
(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)
在室温下向(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)(3.2g，6.336mmol)于THF(20mL)、水(15mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(456mg，19.009mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z514.22[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)(1.5g，3.054mmol)、DMF(15mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(875mg，4.582mmol)、HOBt(618mg，4.582mmol)、DIPEA(1.7mL，9.164mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(681mg，3.665mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在30％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 683.78[M+Na]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(7)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(1g，1.517mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M L iBH4的THF(1.5mL，3.034mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 632.64[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C106)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(7)(200mg，0.316mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(268mg，0.633mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C106)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 630.2(M+H)+
实例88：化合物C112的合成
Figure GDA0003977862690003451
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(2)
在室温下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(1)(900mg，1.51mmol)于THF(7mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(109mg，4.55mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(2)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 580.19[M+H]+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(5)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(2)(570mg，0.984mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(514mg，1.476mmol)、DIPEA(0.51mL，2.215mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-鎓(3)(304mg，1.476mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用EtOAc(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 689.61[M+H]+
N-((2R)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C112)
在0℃下向N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(4)(200mg，0.290mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(124mg，0.726mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2R)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C112)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 607.3[M+H]+
实例89：化合物C116的合成
Figure GDA0003977862690003471
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(1g，1.67mmol)于THF(15mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(206mg，5.02mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(2)。TLC系统：100％E tOAcRf：0.1LCMS(ESI)：m/z 584.37[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(500mg，0.85mmol)、DCM(5mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(488mg，1.28mmol)、DIPEA(0.4mL，9.12mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(265mg，1.28mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 693.3(M+H)+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C116)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)(180mg，0.26mmol)于甲醇(2mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(89mg，0.52mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C116)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 611.3[M+H]+
实例90：化合物C118的合成
Figure GDA0003977862690003491
2-(2,3-二甲基丁-2-基)丙二酸二乙酯(3)
将2-(丙-2-亚基)丙二酸二乙酯(1)(5g，25.00mmol)于THF(100mL)中的溶液冷却至0℃，随后为碘化铜(I)(7.1g，37.00mmol)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。随后在0℃下将含异丙基溴化镁1.5M的THF(50mL，75.00mmol)逐滴添加至以上混合物中。将混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将混合物用1N HCl淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，且用水(2×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-(2,3-二甲基丁-2-基)丙二酸二乙酯(3)。TLC系统：5％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 245.39[M+H]+
2-(乙氧基羰基)-3,3,4-三甲基戊酸(4)
(3)(6g，24.59mmol)于乙醇(150mL)及THF(75mL)的混合物中的搅拌溶液用NaOH(25mL，24.59mmol)的1N溶液处理，且将反应混合物在室温下搅拌24小时，在此之后，将混合物蒸发成浆状物，且溶解于水(200mL)中，且用乙醚(2×100mL)萃取。将水层用1N HCl酸化至pH 2.0，且用EtOAc(2×100mL)萃取。将经合并的有机层用盐水溶液(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到2-(乙氧基羰基)-3,3,4-三甲基戊酸(4)。TLC系统：50％EtOAc/石油醚Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 217.08[M+H]+
2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3,4三甲基戊酸乙酯(5)
向(4)(2g，9.259mmol)于干燥苯中的搅拌溶液中添加三乙胺(2.62mL，18.518mmol)及二苯基磷酰基迭氮化物(2.98mL，13.888mmol)。将反应混合物在回流下加热2小时。在冷却至室温之后，添加苯甲醇(1.5mL，13.88mmol)，且将反应物在回流下再次加热16小时。蒸发溶剂之后，将粗材料用5％柠檬酸溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL萃取)。将经合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，将粗产物藉由急骤色谱纯化，得到2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3,4三甲基戊酸乙酯(5)。TLC系统：50％EtOAc/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 322.44[M+H]+
2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3,4-三甲基戊酸(6)
在室温下向2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3,4三甲基戊酸甲酯乙酯(5)(2g，6.230mmol)于MeOH/THF(15mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(785mg，18.691mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3,4-三甲基戊酸(6)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z294.37[M+H]+
(2S)-2-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3,4三甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3,4-三甲基戊酸(6)(1.5g，5.119mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.46g，7.679mmol)、HOBt(1.03g，7.67mmol)及DIPEA(2.67mL，15.358mmol)，随后在0℃下添加2-胺基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2A)(1.25g，5.6313mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗产物藉由纯化急骤色谱，得到(2S)-2-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3,4三甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z462.53[M+H]+
(1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3,3,4-三甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸苯甲酯(8)
在0℃下向(2S)-2-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3,3,4三甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(500mg，1.084mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.08mL，2.16mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到(1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3,3,4-三甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸苯甲酯(8)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 434.20[M+H]+
(3,3,4-三甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸苯甲酯(化合物C118)
在0℃下向(1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3,3,4-三甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸酯(8)(200mg，0.461mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(293mg，0.692mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。藉由完成消耗起始材料后，反应物质经由硅藻土垫过滤，且将硅藻土垫用乙酸乙酯(30mL)洗涤。随后将有机层用10％硫代硫酸钠溶液(2×50mL)洗涤，随后用饱和碳酸氢钠溶液(2×50mL)、水(1×50mL)、盐水(1×50mL)洗涤。随后将有机层经硫酸钠干燥，且在真空下蒸发。随后将粗化合物藉由制备型HPLC纯化来纯化，得到(3,3,4-三甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸苯甲酯(化合物C118)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z 432.2(M+H)+
实例91：化合物C119的合成
Figure GDA0003977862690003521
2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(酸片段-5)(1g，2.564mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(842mg，4.424mmol)、HOBT(590g，4.424mmol)、DIPEA(1.9mL，10mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(Int-7A)(940mg，3.244mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％MeOH/DCM洗脱，得到2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z551.61(M+H)+
2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)
在室温下向2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)(1.3g，2.36mmol)于THF(7mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(170mg，7.09mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 537.64[M+H]+
((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)
在0℃下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)(870mg，1.623mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(923mg，2.434mmol)、DIPEA(0.84mL，4.869mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-鎓(3)(525mg，2.434mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用EtOAc(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flashN P纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z646.35[M+H]+
N-((2S)-1-((4-胺基-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C119)
在0℃下向N-((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(4)(150mg，0.232mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(100mg，0.580mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用MeOH/DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-1-((4-胺基-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C119)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 564.2[M+H]+
实例92：化合物C120的合成
Figure GDA0003977862690003541
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(1.1g，1.71mmol)于THF(10mL)、水(4mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(214mg，5.13mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％MeOH/DCMRf：0.1LCMS(ESI)：m/z 630.59[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(900mg，1.43mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(1g，2.86mmol)、DIPEA(8mL，4.29mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(219mg，1.71mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 739.67[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C120)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(4)(180mg，0.243mmol)于甲醇(2mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(83mg，0.487mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C120)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 657.1[M+H]+
实例93：化合物C128及C122的合成
Figure GDA0003977862690003561
Figure GDA0003977862690003571
2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙-1-醇(2)
在室温下向镁屑(2.3g，96.61mmol)及碘(2个球)于四氢呋喃(40mL)中的搅拌溶液中缓慢添加2-溴萘(3)(8g，38.647mmol)及1,2二溴乙烷，且在40℃下搅拌5分钟，反应物变成无色，并且将反应物质搅拌3小时。将另一RBF(2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛)(Int-4)(4g，21.97mmol)/THF(40mL)冷却至-78℃，在-78℃下缓慢添加上述制备的格氏溶液(Grignardsolution)，搅拌1小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并，且用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙-1-醇(2)。TLC系统：15％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)
在0℃下向色谱2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙-1-醇(2)(3.5g，11.290mmol)、(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲基、酯盐酸盐(3)(2.5g，13.548mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(3.5mL，1体积)，随后添加三光气(1.67g，5.64mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用1N HCl(50mL)洗涤，且用(2×50mL)饱和NaHCO3溶液洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在15％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 544.52[M+Na]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)(2.8g，5.374mmol)于THF(38mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(661mg，16.37mmol)，且在室温下搅拌5小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 530.33[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)(1.9g，3.74mmol)、DMF(20mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.07g，5.621mmol)、HOBt(758mg，5.621mmol)、DIPEA(2mL，11.242mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(0.836g，4.497mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：80％乙酸乙酯/己烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 676.33[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(7)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(400mg，0.592mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.6mL，1.18mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙基((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸酯(7)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 648.73[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(化合物C128)
向2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙基((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸酯(7)(300mg，0.46mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(589mg，1.39mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(20mL)洗涤，将过滤物用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(化合物C128)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 646.2(M+H)+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(2g，2.962mmol)于THF(15mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.364g，8.88mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×10mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 684.49[M+Na]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(10)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)(2×300mg，0.453mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(258mg，0.680mmol)、DIPEA(0.4mL，2.178mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(9)(140mg，0.680mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(25mL)稀释，用5％甲醇/二氯甲烷(2×15mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash N P纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(10)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 771.71[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(化合物C122)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(10)(500mg，0.649mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(279mg，1.623mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(2.5mL)，且在室温下搅拌6小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(化合物C122)。TLC系统：10％甲醇/DCM及100％乙酸乙酯Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 689.2[M+H]+
实例94：化合物C123的合成
Figure GDA0003977862690003611
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-(2-甲基-2-硝基丙基)戊二酸二甲酯(2)
向2-硝基丙烷(1)(2g，22.47mmol)于ACN(60mL)、(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸二甲酯(Int-5)(7.4g，24.71mmol)中的搅拌溶液中添加DBU(6mL，44.94mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，得到粗产物：将此粗产物用水稀释，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在30％乙酸乙酯/己烷下洗脱，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-(2-甲基-2-硝基丙基)戊二酸二甲酯(2)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 377.14[M+H]+
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(3)
向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-(2-甲基-2-硝基丙基)戊二酸二甲酯(2)(3g，7.97mmol)于MeOH(30mL)中的搅拌溶液中添加NiCl2(1g，7.97mmol)，且在-10℃下搅拌10分钟，随后在2小时内在相同温度下添加NaBH4(1.5g，39.89mmol)。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(100mL)淬灭，经由硅藻土垫过滤，且将过滤物用DCM(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z337.12[M+Na]+
2-胺基-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(4)
在0℃下向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(3)(2.3g，7.32mmol)于1,4二噁
Figure GDA0003977862690003621
烷(20mL)中的搅拌溶液中添加逐滴含4N HCl的二噁烷(10ml)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到2-胺基-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(4)。TLC系统：20％甲醇/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 228.18[M+H]+
2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(酸片段-5)(1.5g，4.77mmol)、DMF(15mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.3g，7.150mmol)、HOBt(965mg，7.150mmol)、DIPEA(2mL，14.31mmol)及2-胺基-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(4)(1.4g，5.721mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)稀释，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在3％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 511.64[M+H]+
2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(6)
在室温下向2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(1g，1.96mmol)于THF(15mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(241mg，5.88mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(6)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 497.75[M+H]+
N-((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(8)
在0℃下向2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(6)(500mg，1.00mmol)、DCM(5mL的搅拌溶液中)同时添加HATU(574mg，1.511mmol)、DIPEA(0.6mL，4.53mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(7)(311mg，1.511mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到N-((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 606.69[M+H]+
N-((2S)-1-((4-胺基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C123)
在0℃下向N-((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(8)(200mg，0.33mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(113mg，0.66mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-1-((4-胺基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C123)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 524.2(M+H)+
实例95：化合物C124及C136的合成
Figure GDA0003977862690003641
Figure GDA0003977862690003651
2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙-1-醇(2)
在-30℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(Int-4)(7g，38.461mmol)于THF(60mL)中的搅拌溶液中添加3-甲基苯基溴化镁(115mL，115.384mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，且经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙-1-醇(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝258.81[M-OH]
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙-1-醇(2)(6g，mmol)于DCM(60mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(6mL)、L-亮氨酸甲酯盐酸盐(3)(3.8g，26.277mmol)，随后添加三光气(3.24g，10.948mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1N HCl水溶液(100mL)淬灭，随后用DCM(2×50mL)萃取，用(2×50mL)NaHCO3溶液洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用15％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝508.53[M+Na]+
((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)(4.8g，9.896mmol)于THF(20mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(712mg，29.690mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝470.18[M-H]
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(2g，4.246mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.2g，6.309mmol)、HOBt(0.859g，6.369mmol)、DIPEA(2.3mL，12.738mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(0.947g，5.095mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝640.35[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(7)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(550mg，0.86mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(61mg，2.582mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(7)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 626.31[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(9)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(7)(300mg，0.480mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(273mg，0.720mmol)、DIPEA(0.26mL，1.44mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(8)(92mg，0.720mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 735.41[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(化合物C124)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(9)(200mg，0.272mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(93mg，0.544mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(2mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(化合物C124)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 653.2[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(10)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(1g，1.564mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.9mL，3.912mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(10)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 612.7(M+H)+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(化合物C136)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(5A)(300mg，0.490mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(416mg，0.981mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由用3％甲醇/二氯甲烷洗脱的combi-flash色谱纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(化合物C136)。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.4LCMS(ESI)：m/z 610.2(M+H)+
实例96：化合物C141及C126的合成
Figure GDA0003977862690003691
Figure GDA0003977862690003701
(S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酸甲酯(3)
在0℃下向5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(1)(3g，15.3mmol)、DMF(30mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(4.3g，22.95mmol)、HOBt(3.0g，22.95mmol)、DIPEA(8.0mL，45.9mmol)及(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(2)(2.8g，15.3mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)稀释，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在20％乙酸乙酯/己烷下洗脱为(S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酸甲酯(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 363.08[M+H]+
(S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酸(4)
在室温下向(S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酸甲酯(3)(3.5g，9.6mmol)于THF(40mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.2g，28.9mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酸(4)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 349.22[M+H]+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酰胺基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酸(4)(1.2g，3.4mmol)、DMF(120mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.98g，5.16mmol)、HOBt(0.69g，5.16mmol)、DIPEA(1.9mL，10.32mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7)(1.02g，3.4mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱为3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酰胺基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 628.6[M+H]+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酰胺基)丙酸(6)
在室温下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酰胺基)丙酸甲酯(5)(1.2g，1.9mmol)于THF(40mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.24g，5.7mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酰胺基)丙酸(6)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 614.34[M+H]+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺(8)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酰胺基)丙酸(6)(0.5g，0.81mmol)、DCM(20mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(0.464g，1.22mmol)、DIPEA(0.45mL，2.44mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(7)(0.26g，1.22mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 723.5[M+H]+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C126)
在0℃下向N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺(8)(200mg，0.27mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(71.3mg，0.41mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(2.0mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C126)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z641.1[M+H]+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺(6-A)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-2-(5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-3-环己基丙酰胺基)丙酸甲酯(5)(0.500g，0.79mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.15mL，1.59mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺(6-A)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 600.51[M+H]+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C141)
向N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺(6-A)(170mg，0.28mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(240mg，0.566mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C141)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5
LCMS(ESI)：m/z 598.1(M+H)+
实例97：化合物C130的合成
Figure GDA0003977862690003731
Figure GDA0003977862690003741
(喹喔啉-2-羰基)-L-苯丙氨酸甲酯(3)
在0℃下向喹喔啉-2-甲酸(1)(5.0g，28.72mmol)、DMF(30mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(8.22g，43.0mmol)、HOBt(5.81g，43.00mmol)、DIPEA(15.8mL，86.16mmol)及L-苯丙氨酸甲酯(2)(5.1g，28.72mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)稀释，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在3％甲醇/二氯甲烷下洗脱为(喹喔啉-2-羰基)-L-苯丙氨酸甲酯(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 336.58[M+H]+
(喹喔啉-2-羰基)-L-苯丙氨酸(4)
在室温下向(喹喔啉-2-羰基)-L-苯丙氨酸甲酯(3)(5.0g，14.9mmol)于THF(40mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.8g，44.7mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((喹喔啉-2-羰基)-L-苯丙氨酸(4)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z322.2[M+H]+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-苯基-2-(喹喔啉-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向((喹喔啉-2-羰基)-L-苯丙氨酸(4)(1.0g，3.1mmol)、DMF(100mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.92g，4.66mmol)、HOBt(0.63g，4.66mmol)、DIPEA(1.7mL，9.33mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(int-7)(0.92g，3.1mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱为3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-苯基-2-(喹喔啉-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 601.39[M+H]+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-苯基-2-(喹喔啉-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(6)
在室温下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-苯基-2-(喹喔啉-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)(0.350g，0.58mmol)于THF(20mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.073g，1.74mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×10mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-苯基-2-(喹喔啉-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(6)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 587.62[M+H]+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1λ4-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)喹喔啉-2-甲酰胺(8)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-苯基-2-(喹喔啉-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(6)(0.2g，0.34mmol)、DCM(20mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(0.194g，0.51mmol)、DIPEA(0.2mL，1.02mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(7)(0.110g，1.22mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×10mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1λ4-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)喹喔啉-2-甲酰胺(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 696.6[M+H]+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)喹喔啉-2-甲酰胺(化合物C130)
在0℃下向N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1λ4-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)喹喔啉-2-甲酰胺(8)(0.170g，0.24mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(0.084mg，0.48mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(2.0mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)喹喔啉-2-甲酰胺(化合物C130)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 641.1[M+H]+
实例98：化合物C135及C137的合成
Figure GDA0003977862690003771
2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)
在-30℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(Int-4)(5g，27.472mmol)于THF(50mL)中的搅拌溶液中添加3-甲基溴化镁(82mL，82.417mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，且经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝261.21[M-OH]
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)(6.5g，23.381mmol)于DCM(65mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(6.5mL)、L-亮氨酸甲酯盐酸盐(3)(5.1g，28.057mmol)，随后添加三光气(3.46g，11.690mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1N HCl水溶液(100mL)淬灭，随后用DCM(2×50mL)萃取，用2×50mL NaHCO3溶液洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用15％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝512.18[M+Na]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)(5.5g，11.247mmol)于THF(40mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(809mg，33.742mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝498.45[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向((1-(3-(苯甲氧基)苯甲基)环丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(1g，2.105mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(426mg，3.157mmol)、HOBT(603mg，3.157mmol)、DIPEA(1.16mL，6.315mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(0.587g，3.157mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用80％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝644.51[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(7)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(800mg，1.244mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(89mg，3.732mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(7)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 630.28[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(9)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(7)(750mg，1.192mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(679mg，1.78mmol)、DIPEA(0.6mL，3.577mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(8)(228mg，1.788mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 739.31[M+Na]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C135)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(9)(200mg，0.271mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(93mg，0.542mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(2mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C135)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 657.2[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(1.5g，2.439mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.4mL，4.878mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(10)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 616.69(M+H)+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C137)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯(10)(300mg，0.487mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(620mg，1.463mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由用3％甲醇/二氯甲烷洗脱的combi-flash色谱纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C137)。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.5LCMS(ESI)：m/z 614.2(M+H)+
实例99：化合物C117及C133的合成
Figure GDA0003977862690003821
(S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸(1)(3g 157mmol)于DMF(30mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(4.4g，23mmol)、HOBT(3.10g，23mmol)、DIPEA(8.3g，47mmol)及(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯盐酸盐(2)(4.16g,18mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：40％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 359.5[M+H]+
(S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(4)
在室温下向(S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸甲酯(3)(5g，13.9mmol)于THF(30mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.75g，41.8mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(4)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 345.3[M+H]+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(4)(1g，2.9mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(832mg，4.3mmol)、HOBT(588mg，4.3mmol)、DIPEA(1.54mL，8.7mmol)及3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7)(1.06g，3.1mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z 624.71(M+H)+
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(6)
在室温下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)(600mg,0.93mmol)于THF(4mL)、水(2mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(121mg，0.96mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z610.6[M+H]+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(8)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(6)(400mg，6.5mmol)于DCM(4mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(374mg，9.8mmol)、DIPEA(0.35mL，1.97mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(7)(202mg，9.8mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(15mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱为N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 719.7[M+H]+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C117)
在0℃下向N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(8)(190mg，0.26mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(113mg，0.66mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C117)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 637.3[M+H]+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)(250mg，0.4mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.6mL，1.2mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.3LCMS(ESI)：m/z 596.73(M+H)+
N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C133)
在0℃下向N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)(6)(200mg，0.35mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(445mg，1.05mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-1-((1-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C133)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 594.2(M+H)+
实例100：化合物C121的合成
Figure GDA0003977862690003861
(S)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7-峰-1)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(峰-1)(1.1g，2.77mmol)于DCM(4mL)中的搅拌溶液添加二噁烷HCl(4mL)，且在室温下搅拌2小时。在2小时后藉由TLC及LCMS监测反应的进展，在减压下蒸发反应混合物。将粗残余物藉由纯化，用正戊烷研磨，得到(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7峰-1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 298.08[M+H]+
(S)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(2)
在0℃下向(R)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(胺片段-6)(700mg，3.92mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(630mg，3.3mmol)、HOBT(440mg，3.3mmol)、DIPEA(1.1ml，4.5mmol)及(S)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7峰-1)(840mg，1.2mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×15mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(S)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 594.6[M+H]+
(S)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(3)
在室温下向(S)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(2)(550mg，0.927mmol)于THF(5mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(66mg，2.782mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1NHCl水溶液酸化直至pH为约2，且用10％MeOH/DCM(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(2)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 580.45[M+H]+
N-((S)-1-(((S)-1-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(5)
在0℃下向(S)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(3)(300mg，0.518mmol)于THF(5mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(269mg，0.777mmol)、DIPEA(0.26mL，1.165mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-鎓(4)(160mg，0.777mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(25mL)稀释，用EtoAc(2×15mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到N-((S)-1-(((S)-1-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 689.61[M+H]+
N-((S)-1-(((S)-1-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C121)
在0℃下向N-((S)-1-(((S)-1-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(5)(200mg，0.290mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(124mg，0.726mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((S)-1-(((S)-1-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C121)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z607.2[M+H]+
实例101：化合物C125的合成
Figure GDA0003977862690003891
(R)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(2)(峰-1)及(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(2)(峰-2)
3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(1)(4g，10.55mmol)藉由SFC分离进行分离，得到(R)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(2)(峰-1)及(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(2)(峰-2)。
(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7峰-2)
在0℃下向3-(8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(2峰-2)(2g，5.037mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加二噁烷HCl(5mL)，且在室温下搅拌2小时。2小时后藉由TLC及LCMS监测反应的进展，在减压下蒸发反应混合物。将粗残余物藉由纯化，用正戊烷研磨，得到(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7峰-2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 298.4[M+H]+
(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(3)
在0℃下向(R)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(胺片段-6)(480mg，1.52mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(430mg，2.2mmol)、HOBT(309mg，2.2mmol)、DIPEA(0.814ml，4.5mmol)及(S)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7峰-2)(509mg，1.52mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×15mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 594.3[M+H]+
(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(4)
在室温下向(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(3)(700mg，1.1mmol)于THF(4.5mL)、水(2.5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(148mg，3.5mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1NHCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×15mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 580.3[M+H]+
N-((S)-1-(((S)-1-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)
在0℃下向(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸(4)(560mg，0.96mmol)、THF(5mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(550mg，1.44mmol)、DIPEA(0.54mL，2.8mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(5)(298mg，1.44mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(15mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱为N-((S)-1-(((S)-1-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 689.6[M+H]+
N-((S)-1-(((S)-1-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C125)
在0℃下向N-((S)-1-(((S)-1-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氰基-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)(200mg，0.29mmol)于甲醇(2mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(124mg，0.72mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(15mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((S)-1-(((S)-1-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-胺基-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(9)(化合物C125)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 607.3[M+H]+
实例102：化合物C142的合成
Figure GDA0003977862690003921
(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
将(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(1g，3.496mmol)于甲醇(10mL)中的溶液冷却至0℃，随后添加NaOH(500mg于5mL水中)溶液。将所得溶液在0℃下搅拌1小时，随后在真空中去除过量甲醇。将残余物酸化至pH 3，且用二氯甲烷(2×50ml)萃取，且将经合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2
((S)-4-重氮基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)
将(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(3g，11.029mmol)于THF(30mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至-23℃。将所得无色澄清溶液依次用三乙胺(3mL，22.059mmol)、随后用氯甲酸异丁酯(1.8mL，13.235mmol)处理。将反应混合物用重氮甲烷(约50mL，约25mmol)于二乙醚中的溶液缓慢处理。将所得黄色澄清溶液逐渐温热至室温，且搅拌1小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。此后将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(100mL)萃取，用水(50mL)洗涤一次，用盐水(50mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤，且浓缩。藉由正相管柱色谱纯化此材料，得到((S)-4-重氮基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：10％MeOH/DCMRf：0.5LCMS(ESI)：m/z 319.19[M+Na]+
(S)-3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(4)
将((1S)-3-重氮基-2-氧代-1-{[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]甲基}丙基)氨基甲酸叔丁基酯(3)(1.5g，5.06mmol)于1,4-二噁烷(15mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至0℃。将此澄清浅黄色溶液用4M盐酸于1,4-二噁烷(15mL)中的溶液逐滴处理。完成添加后，在1小时内将反应物温热至室温，形成白色沉淀物。在真空下蒸发过量1,4-二噁烷，且用二乙醚研磨固体，得到(S)-3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(4)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 205.13[M+H]+
N-((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(5)
将(S)-3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(4)(500mg，2.083mmol)及4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酸(660mg，2.083mmol)于DMF(10mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至0℃。将此浅黄色溶液依次用HATU(1.18g，3.124mmol)及N-甲基吗啉(0.45mL，4.166mmol)处理。1小时后，将反应物用1:1冰/饱和NaHCO3(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将经合并的有机物用盐水(100mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤，且浓缩，得到黄色浆状物。藉由正相色谱纯化此材料，得到N-((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(5)。TLC系统：10％M eOH/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 491.52[M+H]+
N-((S)-1-(((S)-4-羟基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C142)
将N-((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(5)(200mg，0.428mmol)及苯甲酰基甲酸(80mg，0.53mmol)于DMF(4mL)中的溶液置于N2氛围下。将此澄清浅黄色溶液用氟化铯(155mg，1.02mmol)处理，随后加热至65℃。4小时后，将现在为黄色的悬浮液冷却至室温，用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(30mL)洗涤三次，用盐水(30mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤，且浓缩，得到呈粗黄色泡沫状的粗氧代(苯基)乙酸(3S)-3-({N-[(4-甲氧基-1H-吲哚-2-基)羰基]-L-白胺酰基}胺基)-2-氧代-4-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丁酯。C32H36N4O8的MS(ESI+)m/z 605.2(M+H)+。将此粗产物放入甲醇(20mL)中，置于N2氛围下，且在搅拌下用碳酸钾(7mg，0.04mmol)处理。1小时后，在真空中去除挥发物(浴温<30℃)，得到粗产物。藉由正相色谱纯化此材料，得到N-((S)-1-(((S)-4-羟基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C142)。TLC系统：10％M eOH/DCM Rf：0.55LCMS(ESI)：m/z 473.2[M+H]+
实例103：化合物C128的合成
Figure GDA0003977862690003941
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(1g，2.949mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(842mg，4.41mmol)、HOBT(595mg，4.41mmol)、DIPEA(1.52mL，8.823mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(Int-7A)(890mg，3.529mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％乙基甲醇/DCM洗脱，得到2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z 577.63(M+H)+
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)
在室温下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲基甲酯(1)(600mg，1.043mmol)于THF(7mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(100mg，4.173mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 562.63[M+H]+
((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)
在0℃下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)(450mg，0.802mmol)于DCM(8mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(259mg，1.203mmol)、DIPEA(0.41mL，2.406mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-鎓(3)(259mg，1.203mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用EtoAc(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 671.32[M+H]+
((2S)-1-((4-胺基-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C128)
在0℃下向((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)(200mg，0.298mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(128mg，0.745mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((4-胺基-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C128)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 589.2[M+H]+
实例104：化合物C129的合成
Figure GDA0003977862690003971
(E)-2-(2-甲基丙亚基)肼-1-甲酸苯甲酯(3)
向苯甲肼甲酸酯(1)(5g，30.12mmol)于甲苯(50mL)中的搅拌溶液中添加异丁醛(2.7mL，30.12mmol)，在60℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。在减压下直接浓缩反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到(E)-2-(2-甲基丙亚基)肼-1-甲酸苯甲酯(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z 221.29[M+H]+
2-异丁基肼-1-甲酸苯甲酯(4)
在0℃下向(E)-2-(2-甲基丙亚基)肼-1-甲酸苯甲酯(3)(3g，13.574mmol)于甲醇(20mL)中的搅拌溶液中添加乙酸(0.5mL)，随后添加氰基硼氢化钠(1.7g，27.149mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰冷的水淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash色谱纯化，且化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到2-异丁基肼-1-甲酸苯甲酯(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 223.26[M+H]+
2-异丁基-2-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺甲酰基)肼-1-甲酸苯甲酯(5)
在0℃下向2-异丁基肼-1-甲酸苯甲酯(4)(1g，4.504mmol)、氯仿(15mL)的搅拌溶液中添加吡啶(1mL，1体积)，且向(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1g，5.405mmol)中同时添加三光气(666mg，2.252mmol)，且在60℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash色谱纯化，且化合物在8％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-异丁基-2-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺甲酰基)肼-1-甲酸苯甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 435.39[M+H]+
2-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺甲酰基)-2-异丁基肼-1-甲酸苯甲酯(6)
在0℃下向2-异丁基-2-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺甲酰基)肼-1-甲酸苯甲酯(5)(1g，2.304mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.3mL，4.608mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到2-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺甲酰基)-2-异丁基肼-1-甲酸苯甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 407.69[M+H]+
(5S)-6-羟基-2-异丁基-3-氧代-5-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-1,2,4-三嗪烷-1-甲酸苯甲酯(化合物C129)
向2-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺甲酰基)-2-异丁基肼-1-甲酸苯甲酯(6)(150mg，0.369mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(469mg，1.107mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到(5S)-6-羟基-2-异丁基-3-氧代-5-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-1,2,4-三嗪
Figure GDA0003977862690003991
烷-1-甲酸苯甲酯(化合物C129)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 405.1(M+H)+
实例105：化合物C132及C131的合成
Figure GDA0003977862690004001
Figure GDA0003977862690004011
2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙-1-醇(2)
在0℃下向5-溴-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(10g，47.846mmol)于三氟乙酸(50mL)中的搅拌溶液中缓慢添加三乙基硅烷(76mL，478.6mmol)，随后将所得反应混合物在50℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物倾入冰水中，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。经合并的有机层用碳酸氢钠水溶液(2×200mL)中和，且用水(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物，藉由正相色谱纯化粗残余物，得到5-溴-2,3-二氢-1H-茚(2)。TLC系统：石油醚Rf：0.8GCMS(ESI)：m/z 196.7[M+H]+
2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙-1-醇(3)
将5-溴-2,3-二氢-1H-茚(2)(2.5g，12.820mmol)于THF(25mL)中的溶液冷却至-78℃，随后将含正丁基锂2.0M的THF(7.69mL，15.384mmol)逐滴添加至以上混合物中。将混合物在-78℃下搅拌1小时。此后，添加2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(Int-4)(3.5g，19.23mmol)于THF(5mL)中的溶液，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将混合物用NH4Cl水溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，且用水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，且藉由正相色谱纯化，得到2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙-1-醇(3)。TLC系统：5％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 284.76[M-OH]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(5)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙-1-醇(3)(4g，13.33mmol)、(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯盐酸盐(4)(3.53g，15.99mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(4mL，1体积)，随后添加三光气(1.97g，6.66mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用NaHCO3水溶液(100mL)淬灭，用DCM(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z534.37[M+Na]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(6)
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)(3.5g，6.849mmol)于MeOH/THF(20mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.86g，20.549mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 520.29[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(6)(2.5g，5.03mmol)于DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.44g，7.545mmol)、HOBt(1.01g，7.545mmol)及DIPEA(2.72mL，15.09mmol)，随后在0℃下添加2-胺基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.34g，6.036mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗产物藉由急骤色谱纯化，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 666.47[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(850mg，1.278mmol)于THF(4mL)、水(2mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(165mg，3.83mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用二氯甲烷(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)。10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 652.53[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙酯(10)
在0℃下同时向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)(350mg，0.453mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中添加HATU(306mg，0.806mmol)、DIPEA(0.29mL，1.6128mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(9)(167mg，0.806mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(25mL)稀释，用5％甲醇/二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙酯(10)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 761.63[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙酯(化合物C131)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙酯(10)(150mg，0.197mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(65％)(105mg，0.3947mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且随后添加氨水(1.5mL)，且在室温下搅拌6小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙酯(化合物C131)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 679.1[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙酯(11)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(500mg，0.7518mmol)于DCM(6mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.75mL，1.503mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙酯(11)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 638.74[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙酯(化合物C132)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙酯(11)(200mg，0.3139mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(399mg，0.9419mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。藉由TLC及LCMS完成消耗起始材料后，反应物质经由硅藻土垫过滤，且将硅藻土垫用乙酸乙酯(30mL)充分洗涤。随后将有机层用10％硫代硫酸钠溶液(2×50mL)、随后用饱和碳酸氢钠溶液(2×50mL)、水(1×50mL)、盐水(1×50mL)洗涤。随后将有机层经硫酸钠干燥，且在真空下蒸发。随后将粗化合物藉由制备型HPLC纯化来纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(2,3-二氢-1H-茚-5-基)-2-甲基丙酯(化合物C132)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z 636.00(M+H)+
实例106：化合物C145及C134的合成
Figure GDA0003977862690004061
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(2.5g，3.793mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(466mg，11.380mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 646.49[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(500mg，0.775mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(441mg，1.16mmol)、DIPEA(0.4mL，2.32mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(239mg，1.162mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 755.47[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C134)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(4)(200mg，0.265mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(91mg，0.530mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(2mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C134)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 673.1[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C145)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙基((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(4)(0.2g，0.265mmol)于甲醇(4mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(91mg，0.530mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙基胺(2.0mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C145)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 713.2[M+H]+
实例107：化合物C138的合成
Figure GDA0003977862690004091
(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(R)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(酸片段-5)(1g，3.1mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(912mg，4.7mmol)、HOBT(644mg，4.7mmol)、DIPEA(1.69mL，9.5mmol)及(S)-3-((R)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-胺基丙酸甲酯盐酸盐(Int-7)(1.16g，3.5mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×25mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到呈浅绿色固体状的(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(1)(1.6g，2.6mmol，产率89％)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 594.3[M+H]+
2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)
在室温下向(S)-3-((S)-8-乙酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)丙酸甲酯(1)(500mg，0.84mmol)于甲醇(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化钾(280mg，5.05mmol)，且在室温下搅拌24小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，得到呈黄色固体状的2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)(450mg，0.83mmol，产率99.7％)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 538.6[M+H]+
2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(8-异丁酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(4)
在室温下向0℃的2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)(450mg，0.83c mmol)于二
Figure GDA0003977862690004101
烷(4.5mL)及水(2.2mL)中的搅拌溶液中添加异丁酸酐(3)(0.65mL，4.18mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，且藉由1N HCl酸化，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash R P纯化，化合物在20％乙腈/水下洗脱，得到呈白色固体状的2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(8-异丁酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(4)(150mg，0.24mmol，产率29.4％)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z608.7[M+H]+
N-((2S)-1-((4-氰基-1-(8-异丁酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)
在0℃下向2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(8-异丁酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(4)(150mg，0.26mmol)、THF(3mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(140mg，0.37mmol)、DIPEA(0.13mL，0.74mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(5)(101mg，0.49mmo l)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(15mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到呈黄色固体状的N-((2S)-1-((4-氰基-1-(8-异丁酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)(150mg，0.21mmol，产率88％)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 717.8[M+H]+
N-((2S)-1-((4-胺基-1-(8-异丁酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C138)
在0℃下向N-((2S)-1-((4-氰基-1-(8-异丁酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(6)(150mg，0.32mmol)于甲醇(2mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(90mg，0.52mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1.1mL)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(15mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到呈灰白色固体状的N-((2S)-1-((4-胺基-1-(8-异丁酰基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C138)(7mg，0019mmol，产率5％)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 635.2[M+H]+
实例108：化合物C139的合成
Figure GDA0003977862690004121
4-硝基四氢-2H-吡喃(2)
向4-碘四氢-2H-吡喃(1)(10.0g，47.1mmol)、DMF(250mL)的搅拌溶液中添加NaNO2(6.4g，94.3mmol)、间苯三酚(9.5g，75.4mmol)，添加DMSO(100mL)，且在45℃下加热16小时。将反应混合物用冰水(80mL)稀释，用二乙醚(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash N P纯化，藉由在20％于乙酸乙酯及己烷中洗脱，得到4-硝基四氢-2H-吡喃(2)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 131.92[M+H]+
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((4-硝基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)戊二酸二甲酯(3)
向4-硝基四氢-2H-吡喃(2)(2.1g，16.0mmol)于ACN(20mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸二甲酯(5.06g，17.6mmol)及DBU(7.3mL，48.0mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，粗化合物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，藉由在30％乙酸乙酯及己烷下洗脱，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((4-硝基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)戊二酸二甲酯(3)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 441.25[M+Na]+
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺\[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(4)
向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((4-硝基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)戊二酸酯(3)(5.5g，13.15mmol)于MeOH(250mL)中的搅拌溶液中添加NiCl2(1.69g，13.15mmol)，且在-10℃下搅拌10分钟。向此中添加NaBH4(2.5g，65.7mmol)且搅拌2小时。藉由TLC完成反应之后，浓缩反应混合物，用饱和NH4Cl淬灭，经由方解石垫过滤，且将过滤物用10％甲醇/DCM(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(4)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 379.1[M+Na]+
2-胺基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(5)
在0℃下向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(4)(3.8g，10.67mmol)于1,4二噁烷(30mL)中的搅拌溶液中添加4N HCl/二噁烷(30mL)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用二乙醚洗涤，得到2-胺基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(5)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 257.24[M+H]+
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(7)
随后在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(6)(1.5g，4.7mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.35g，7.1mmol)、HOBt(0.95g，7.1mmol)、DIPEA(2.6mL，14.1mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(5)(1.44g，4.7mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，藉由在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱为2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 578.59[M+H]+
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(8)
在室温下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(7)(0.700g，1.2mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.152g，3.6mmol)，且继续搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×10mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(8)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 564.6[M+H]+
((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)
随后在0℃下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(8)(0.550g，0.97mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加HATU(0.555g，1.4mmol)、DIPEA(0.5mL，2.92mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(9)(0.315g，1.46mmol，且在室温下继续搅拌2小时。将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用二氯甲烷(2×10mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 673.4[M+H]+
((2S)-1-((4-胺基-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C139)
在0℃下向((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(10)(0.270g，0.40mmol)于甲醇(10mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(206.93mg，1.2mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(2.0mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((4-胺基-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C139)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 591.1[M+H]+
实例109：化合物C140的合成
Figure GDA0003977862690004161
2-(2-环己基丙-2-基)丙二酸二乙酯(3)
将2-(丙-2-亚基)丙二酸二乙酯(1)(5g，25.00mmol)于THF(100mL)中的溶液冷却至0℃，随后碘化铜(I)(7.1g，37.00mmol)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。随后在0℃下将环己基溴化镁1.0M/THF(75mL，75.00mmol)逐滴添加至以上混合物中。将混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将混合物用1N HCl淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，且用水(2×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-(2-环己基丙-2-基)丙二酸二乙酯(3)。TLC系统：5％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 471.27[M+Na]+
3-环己基-2-(乙氧基羰基)-3-甲基丁酸(4)
将2-(2-环己基丙-2-基)丙二酸二乙酯(3)(4.5g，15.84mmol)于乙醇(100mL)及THF(50mL)的混合物中的搅拌溶液用NaOH(25mL，15.84mmol)的1N溶液处理，且将反应混合物在室温下搅拌24小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。24小时之后，将混合物蒸发成浆状物，且溶解于水(200mL)中，且用乙醚(2×100mL)萃取。将水层用1N HCl酸化至pH 2.0，且用EtOAc(2×100mL)萃取。将经合并的有机层用盐水溶液(200mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到3-环己基-2-(乙氧基羰基)-3-甲基丁酸(4)。TLC系统：50％EtOAc/石油醚Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 279.29[M+Na]+
2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基-3-甲基丁酸乙酯(5)
向3-环己基-2-(乙氧基羰基)-3-甲基丁酸(4)(3g，11.718mmol)于干燥苯(30mL)中的搅拌溶液中添加三乙胺(3.31mL，23.436mmol)及二苯基磷酰基迭氮化物(3.77mL，17.578mmol)。将反应混合物在回流下加热2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物冷却至室温，添加苯甲醇(1.8mL，17.57mmol)，且将反应物在回流下再次加热16小时。蒸发溶剂之后，将粗材料用5％柠檬酸溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，且将粗产物藉由纯化急骤色谱，得到2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基-3-甲基丁酸乙酯(5)。TLC系统：5％EtOAc/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 362.36[M+H]+
2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基-3-甲基丁酸(6)
在室温下向2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基-3-甲基丁酸乙酯(5)(3.2g，8.31mmol)于MeOH/THF(15mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.1g，26.59mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基-3-甲基丁酸(6)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 334.37[M+H]+
(2S)-2-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基-3-甲基丁酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基-3-甲基丁酸(6)(2.4g，7.207mmol)于DMF(25mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(2.06g，10.81mmol)、HOBt(1.46g，10.81mmol)及DIPEA(3.87mL，21.6216mmol)，随后在0℃下添加2-胺基-2-甲基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2A)(1.9g，8.64mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗产物藉由纯化急骤色谱，得到(2S)-2-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基-3-甲基丁酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 502.60[M+H]+
(3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸苯甲酯(8)
在0℃下向(2S)-2-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基-3-甲基丁酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(500mg，0.998mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.99mL，1.996mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到(3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸苯甲酯(8)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 474.46[M+H]+
(3-环己基-3-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丁-2-基)氨基甲酸苯甲酯(化合物C140)
在0℃下向(3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸苯甲酯(8)(200mg，0.422mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(268mg，0.634mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。藉由TLC及LCMS完成消耗起始材料后，反应物质经由硅藻土垫过滤，且将硅藻土垫用乙酸乙酯(30mL)充分洗涤。随后将有机层用10％硫代硫酸钠溶液(2×50mL)、随后用饱和碳酸氢钠溶液(2×50mL)、水(1×50mL)、盐水(1×50mL)洗涤。随后将有机层经硫酸钠干燥，且在真空下蒸发。随后将粗化合物藉由制备型HPLC纯化来纯化，得到(3-环己基-3-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丁-2-基)氨基甲酸苯甲酯(化合物C140)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z47 2.2(M+H)+
实例110：化合物C143的合成
Figure GDA0003977862690004191
2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)
在-30℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(Int-4)(5g，27.472mmol)于THF(50mL)中的搅拌溶液中添加(4-氯苯基)溴化镁(54mL，54.945mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝277.19[M-OH]
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)(3g，10.20mmol)于DCM(30mL)中的搅拌溶液中逐份添加吡啶(3mL)、(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯盐酸盐(3)(2.4g，13.265mmol)，随后添加三光气(1.5g，5.102mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1N HCl水溶液(50mL)淬灭，随后用DCM(2×50mL)萃取，用饱和NaHCO3溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用15％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝528.52[M+Na]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)(4.2g，8.313mmol)于THF(15mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(1g，24.940mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝514.45[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)(4g，8.143mmol)于DMF(35mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(2.3g，12.219mmol)、HOBt(1.6g，12.219mmol)、DIPEA(3.5mL，24.429mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.8g，9.775mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用80％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝660.47[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(700mg，1.062mmol)于DCM(7mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1mL，4.878mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(7)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 6 32.65(M+H)+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C143)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(7)(200mg，0.316mmol)溶解于DCM(6mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(403mg，0.95mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由制备型HPLC纯化，得到2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙基((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸酯(化合物C143)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 630.1(M+H)+
实例111：化合物C144的合成
Figure GDA0003977862690004221
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C144)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(1)(150mg，0.203mmol)于甲醇(2mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(69mg，0.406mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙胺(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C144)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 697.2[M+H]+
实例112：化合物C146的合成
Figure GDA0003977862690004231
1-(3-氯苯甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(3)
在室温下向K2CO3(17.6g，128.205mmol)于丙酮(100mL)中的搅拌溶液中添加2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(1)(10g，64.102mmol)，随后添加1-(溴甲基)-3-氯苯(9.6mL，76.923mmol)，且使反应混合物在70℃下回流36小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且用饱和NaHCO3溶液(150mL)淬灭，随后用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层用饱和NaHCO3(3×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用3％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-(3-氯苯甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(3)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝281.23[M+H]+
2-(3-氯苯甲基)环戊-1-酮(4)
在室温下向1-(3-氯苯甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(3)(15g，35.714mmol)于冰醋酸(150mL)中的搅拌溶液中添加6N HCl水溶液(75mL)，且将反应混合物在120℃下回流6小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且倾入冰冷的水(100mL)中，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-(3-氯苯甲基)环戊-1-酮(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝209.09[M+H]+
2-(3-氯苯甲基)环戊-1-醇(5)
在0℃下向2-(3-氯苯甲基)环戊-1-酮(4)(5g，24.038mmol)于MeOH(50mL)中的搅拌溶液中添加NaBH4(1.82g，48.076mmol)。使反应混合物达到室温，且搅拌30分钟。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1N HCl淬灭，且蒸发以去除溶剂，随后用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗化合物2-(3-氯苯甲基)环戊-1-醇(5)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝193.14[M-OH]
(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸甲酯(7)
在0℃下向2-(3-氯苯甲基)环戊-1-醇(5)(3g，14.28mmol)、L-苯丙氨酸甲酯HCl(6)(3g，16.75mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(9mL，3体积)，随后添加三光气(2.1g，7.09mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用2N HCl(30mL)淬灭，用二氯甲烷(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸甲酯(7)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝416.4[M+H]+
(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(3)
向(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸甲酯(7)(2.1g，5.06mmol)于THF(20mL)、DM水(10mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(622mg，15.12mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl水溶液酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(8)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝424.3[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)
在0℃下向(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(8)(1.8g，4.48mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.2g，6.73mmol)、HOBT(0.9g，6.73mmol)、DIPEA(2.4mL，13.46mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.34g，5.422mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝570.4[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(10)
向(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲基甲酯(9)(1.1g，1.495mmol)于THF(20mL)、DM水(10mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(622mg，15.12mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl水溶液酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝556.4[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(12)
在0℃下向2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(10)(500mg，8.99mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(680mg，1.33mmol)、DIPEA(0.4mL，4.41mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(11)(455mg，2.20mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸酯(12)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝665.4[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C146)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸酯(12)(120mg，0.18mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(62mg，0.36mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙基胺(0.01mL，0.21mmol)，且在室温下搅拌4小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C146)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 623.1(M+H)+
实例113：化合物C147的合成
Figure GDA0003977862690004271
((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-醇(1)(4g，17.23mmol)及L-亮氨酸甲酯盐酸盐(2)(3.7g，25.85mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(12mL，3体积)，随后添加三光气(2.5g，8.61mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用1N HCl(50mL)洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 426.43[M+Na]+
((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)
在室温下向((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)(2.2g，5.45mmol)于THF(30mL)、水(15mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(671mg，16.37mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 412.41[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)(1.7g，4.36mmol)、DMF(20mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.2g，6.55mmol)、HOBt(0.88g，6.55mmol)、DIPEA(1.8mL，13.10mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(0.97g，5.24mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 558.57[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(6)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(1g，1.79mmol)于THF(15mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(220mg，5.37mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(9)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 544.52[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(8)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(6)(800mg，1.473mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(839mg，2.209mmol)、DIPEA(0.6mL，4.41mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(7)(455mg，2.209mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 653.52[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C147)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(8)(200mg，0.30mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(105mg，0.61mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙基胺(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C147)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 611.2(M+H)+
实例114：化合物C148的合成
Figure GDA0003977862690004301
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C104)(250mg，0.409mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中依序添加吡啶(0.75mL，3体积)、异氰基环丙烷(1)(41mg，0.614mmol)，且搅拌10分钟。在0℃下向此中添加TFA(0.06mL，819mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×15mL)、盐水溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下干燥，得到粗((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 681.6[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C148)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)(200mg，0.293mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(373mg，0.881mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C148)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 679.2(M+H)+
实例115：化合物C149的合成
Figure GDA0003977862690004311
(S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段)(1g，2.57mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(736mg，3.85mmol)、HOBT(519mg，3.85mmol)、DIPEA(1.34mL，7.71mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(Int-7A)(820mg，2.82mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/DCM洗脱，得到(S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.65LCMS(ESI)：m/z 576.66(M+H)+
(S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(3)
在室温下向(S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)(1g，1.73mmol)于THF(7mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(249mg，5.20mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(3)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 562.47[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(3)(800mg，1.42mmol)于THF(8mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(798mg，2.135mmol)、DIPEA(0.74mL，4.270mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-鎓(4)(461mg，2.135mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用EtoAc(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 671.53[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C149)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)(300mg，0.447mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(192mg，1.117mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙胺(6)(1.5mL，5体积)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C149)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 629.2[M+H]+
实例116：化合物C150的合成
Figure GDA0003977862690004331
((S)-3-环己基-1-(((S)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(吡咯烷-1-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(化合物C150)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(1)(400mg，0.519mmol)于甲醇(2.5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(223mg，1.29mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加吡咯烷(0.738mL，5.1mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用10％甲醇/DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(吡咯烷-1-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(化合物C150)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 743.2[M+H]+
实例117：化合物C151的合成
Figure GDA0003977862690004351
1-(3-氯苯甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(3)
在室温下向K2CO3(17.6g，128.205mmol)于丙酮(100mL)中的搅拌溶液中添加2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(1)(10g，64.102mmol)，随后在室温下添加1-(溴甲基)-3-氯苯(9.6mL，76.923mmol)，且使反应混合物在70℃下回流16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且用饱和NaHCO3(150mL)淬灭，随后用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，随后用乙酸乙酯洗涤，层用饱和NaHCO3(3×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用3％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-(3-氯苯甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(3)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝281.23[M+H]+
2-(3-氯苯甲基)环戊-1-酮(4)
在室温下向1-(3-氯苯甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(3)(15g，35.714mmol)于冰醋酸(150mL)中的搅拌溶液中添加6N HCl水溶液(75mL)，且将反应混合物在120℃下回流6小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且倾入冰冷的水(100mL)中，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-(3-氯苯甲基)环戊-1-酮(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝209.09[M+H]+
2-(3-氯苯甲基)环戊-1-醇(5)
在0℃下向2-(3-氯苯甲基)环戊-1-酮(4)(5g，24.038mmol)于MeOH(50mL)中的搅拌溶液中添加NaBH4(1.82g，48.076mmol)。使反应混合物在室温下搅拌30分钟。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物蒸馏，且用1N HCl淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物2-(3-氯苯甲基)环戊-1-醇(5)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝193.14[M-OH]
(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(7)
在0℃下向2-(3-氯苯甲基)环戊-1-醇(5)((5g，23.809mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(15mL)、三光气(3.5g，11.904mmol)，随后添加(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(6)(5.3g，28.571mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，将有机层浓缩，用1N HCl水溶液再次洗涤，随后用DCM(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用4％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(7)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝422.26[M+H]+
(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(8)
向(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(7)(3g，7.125mmol)于THF(30mL)、DM水(10mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(513mg，21.377mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl水溶液酸化，用乙酸乙酯(2×25mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(8)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝430.38[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)
在0℃下向(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(8)(2.2g，5.405mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.5g，8.108mmol)、HOBT(1.09g，8.108mmol)、DIPEA(2.9mL，16.216mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.2g，6.486mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝576.61[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(10)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)(1g，1.739mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(125mg，5.217mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1NHCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(10)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 562.47[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(12)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(10)(0.7g，1.247mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(0.71g，1.871mmol)、DIPEA(0.66mL，3.743mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(11)(239mg，1.871mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(12)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 671.31[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C151)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(12)(250mg，0.373mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加mCPBA(160mg，0.932mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙胺(13)(25mg，0.447mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C151)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 629.2[M+H]+
实例118：化合物C152的合成
Figure GDA0003977862690004391
1-(3-氯苯甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(3)
在室温下向K2CO3(17.6g，128.205mmol)于丙酮(100mL)中的搅拌溶液中添加2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(1)(10g，64.102mmol)，随后添加1-(溴甲基)-3-氯苯(9.6mL，76.923mmol)，且使反应混合物在70℃下回流36小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且用饱和NaHCO3溶液(150mL)淬灭，随后用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层用饱和NaHCO3(3×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用3％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-(3-氯苯甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(3)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝281.23[M+H]+
2-(3-氯苯甲基)环戊-1-酮(4)
在室温下向1-(3-氯苯甲基)-2-氧代环戊烷-1-甲酸乙酯(3)(15g，35.714mmol)于冰醋酸(150mL)中的搅拌溶液中添加6N HCl水溶液(75mL)，且将反应混合物在120℃下回流6小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物冷却至室温，且倾入冰冷的水(100mL)中，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-(3-氯苯甲基)环戊-1-酮(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝209.09[M+H]+
2-(3-氯苯甲基)环戊-1-醇(5)
在0℃下向2-(3-氯苯甲基)环戊-1-酮(4)(5g，24.038mmol)于MeOH(50mL)中的搅拌溶液中添加NaBH4(1.82g，48.076mmol)。使反应混合物达到室温，且搅拌30分钟。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1N HCl淬灭，且蒸发以去除溶剂，随后用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗化合物2-(3-氯苯甲基)环戊-1-醇(5)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝193.14[M-OH]
(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(6)
在0℃下向2-(3-氯苯甲基)环戊-1-醇(5)(1.7g，8.095mmol)、L-亮氨酸甲酯盐酸盐(5)(1.4g，9.714mmol)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中逐份添加吡啶(5.1mL，24.285mmol)，随后添加三光气(1.19g，4.047mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1N HCl水溶液(50mL)淬灭，且用DCM(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用4％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(7)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝382.38[M+H]+
(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(8)
向(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(7)(1.6g，4.199mmol)于THF(20mL)、DM水(10mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(302mg，12.598mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl水溶液酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(8)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝368.22[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)
在0℃下向(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(8)(1.4g，3.814mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.09g，5.722mmol)、HOBT(0.772g，5.722mmol)、DIPEA(2.1mL，18.018mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.34g，15.422mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝536.59[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(10)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)(0.8g，1.495mmol)于二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.4mL，2.990mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，将过滤物在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(10)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝508.38[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C152)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(10)(0.1g，0.197mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(0.167g，0.394mmol，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C152)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝506.1[M+H]+
实例119：化合物C153的合成
Figure GDA0003977862690004421
2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(1)(酸片段-37)(1.0g，2.33mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(0.667g，3.49mmol)、HOBt(0.47g，3.49mmol)、DIPEA(1.3mL，6.99mmol)及甲基-2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸酯盐酸盐(胺片段-18)(0.68g，2.33mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(250mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在10％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 666.50[M+H]+
2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)
在室温下向2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)(0.9g，1.35mmol)于THF(6mL)、水(6mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(170mg，4.06mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。在减压下蒸馏过量THF，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约2，且用DCM(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 652.49[M+H]+
((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)
在0℃下向2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)(800mg，1.27mmol)于DCM(12mL)中的搅拌溶液中添加HATU(700mg，1.83mmol)、DIPEA(0.7mL，3.66mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-鎓(3)(305mg，2147mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用DCM(2×50mL)萃取。将经合并的有机层用水(1×50mL)、盐水溶液(1×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在真空下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1λ4-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 761.43[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(C153)
在0℃下向((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1λ4-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)(200mg，0.263mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(68mg，0.394mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且随后添加环丙基胺(0.03mL，0.526mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用水(1×20mL)及盐水溶液(1×30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(C153)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 719.2[M+H]+
实例120：化合物C154的合成
Figure GDA0003977862690004451
(S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(1)(5.0g，14.7mmol)于DMF(50mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(4.2g，22.11mmol)、HOBt(2.98g，22.11mmol)、DIPEA(8.15mL，44.22mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(3.92g，17.69mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(250mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在10％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 508.47[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(3)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)(4.0g，7.88mmol)于DCM(200mL)中的搅拌溶液添加含2M LiBH4的THF(7.8mL，1.57mmol)，随后将反应混合物在室温下搅拌1小时。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(200mL)淬灭，且用DCM(2×200mL)萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物，得到纯((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(3)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 480.37[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(3)(2.0g，4.16mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(5.29g，12.49mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用DCM(50mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在10％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 478.1[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)
向((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)(600mg，1.25mmol)及异氰基环丙烷(126.41mg，1.88mmol)溶解于DCM(60mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加吡啶(3mL)，且搅拌10分钟。在0℃下向此溶液中添加TFA(0.3mL，2.51mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1NHCl(3×15mL)、盐水溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 563.2[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C154)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)(450mg，0.799mmol)的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(677.79mg，1.59mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用DCM(50mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，残余物藉由combi-flash N P纯化，化合物在10％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C154)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 561.1[M+H]+
实例121：化合物C155及化合物C180的合成
Figure GDA0003977862690004481
2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-37)(1g，2.33mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(667mg，3.49mmol)、HOBt(471mg，3.49mmol)、DIPEA(1mL，6.99mmol)及2-胺基-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-21)(699mg，2.79mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 626.48[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(2)
在0℃下向2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(920mg，1.47mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.4mL，2.94mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 598.40[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(C180)
将((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(2)(150mg，0.25mmol)的搅拌溶液中溶解于二氯甲烷(5mL)中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(213mg，0.50mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(C180)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 596.52(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(C180)(300mg，0.50mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加乙酸(1mL)，添加异氰基环丙烷(3)(50mg，0.75mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，直接浓缩反应混合物，得到粗产物：将此残余物溶解于甲醇(5mL)、水(2mL)中，且在室温下添加碳酸钾(104mg，0.75mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚(30mL)研磨，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 681.56[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(C155)
向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)(280mg，0.41mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(349mg，0.82mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由combi-flash NP纯化，化合物在6％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(C155)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 679.2(M+H)+
实例122：化合物C156及化合物C167的合成
Figure GDA0003977862690004511
2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(Int-5)(1.5g，3.68mmol)于DMF中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(718mg，3.68mmol)、HOBT(490mg，3.62mmol)、DIPEA(4.5mL，3体积)及2-胺基-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段5)(737mg，11.05mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 604.5(M+H)+
2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在0℃下向2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(1g，1.65mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.48mL，4.96mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.3LCMS(ESI)：m/z 576.5(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C156)
在0℃下向2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(200mg，0.33mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(422mg，0.99mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C156)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 574.2(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)
向((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C156)(350mg，0.60mmol)溶解于DCM(20mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(1mL，3体积)、异氰基环丙烷(3)(61mg，0.91mmol)，且搅拌10分钟。在0℃下向此中添加TFA(0.13mL，1.21mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×15mL)、盐水溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 659.5[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C167)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)(200mg，0.30mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(386mg，0.91mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×10mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C167)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 657.2(M+H)+
实例123：化合物C174及C157的合成
Figure GDA0003977862690004541
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(600mg，1.02mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1mL，1.53mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z558.52[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C157)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)(100mg，0.15mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(519mg，1.02mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(30mL)洗涤。将过滤物用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C157)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 558.52[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(4)
在0℃下向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C157)(250mg，0.45mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(3)(45mg，0.67mmol)、吡啶(71mg，0.90mmol)，随后添加TFA(102mg，0.90mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl溶液(15mL)，随后盐水(15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚(30mL)研磨，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 641.55[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C174)
向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(4)(210mg，0.32mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(417mg，0.98mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将过滤物用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗残余物藉由combi-flashNP纯化，化合物在8％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C174)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z639.2[M+H]+
实例124：化合物C158的合成
Figure GDA0003977862690004561
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(0.7g，1.17mmol)于THF(5mL)、甲醇(5mL)及水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(144mg，3.51mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1NHCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(2)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 584.60[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(420mg，0.72mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(410mg，1.08mmol)、DIPEA(0.3mL，2.16mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(222mg，1.08mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)环丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 693.53(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)碳酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(C158)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)(200mg，0.28mmol)于甲醇(4mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(99mg，0.57mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加环丙胺(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用饱和NaHCO3溶液(2×40mL)洗涤，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(C158)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 651.2[M+H]+
实例125：化合物C165及C159的合成
Figure GDA0003977862690004581
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((1-硝基环戊基)甲基)戊二酸二甲酯(2)
在0℃下向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸二甲酯(6.8g，14.34mmol)于ACN中的搅拌溶液中添加硝基环戊烷(1)(1.5g，13.04mmol)及DBU(3.6mL，13.44mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((1-硝基环戊基)甲基)戊二酸二甲酯(2)。TLC系统：10％石油醚/EtOAc Rf：0.25LCMS(ESI)：m/z 403.2(M+H)+
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙酸甲酯(3)
在-10℃下向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((1-硝基环戊基)甲基)戊二酸二甲基二甲酯(2)(4.3g，10.64mmol)于甲醇(50mL)中的搅拌溶液中添加氯化镍(1.3g，10.64mmol)，随后添加硼氢化钠(2g，53.21mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，将经合并的有机层用水(2×50ml)、盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 341.3(M+H)+
2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(4)
在0℃下向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙酸甲酯(3)(2.5g，3.75mmol)于二
Figure GDA0003977862690004591
烷(25mL)中的搅拌溶液中添加含4M HCl的二
Figure GDA0003977862690004592
烷(25mL)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物用正戊烷研磨，得到2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(4)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2
2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)(2g，4.91mmol于DMF中)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.4g，7.17mmol)、HOBT(900mg，6.66mmol)、DIPEA(2.7mL，3体积)及2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(4)(1.6g，5.89mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 630.8(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(7)
在0℃下向2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙酸甲酯(6)(700mg，1.11mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.2mL，0.24mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(7)。TLC系统：5％MeOH/DCMRf0.3LCMS(ESI)：m/z 602.4(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C165)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯2-(3-氯苯甲基)环戊酯(7)(200mg，0.33mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(422mg，0.99mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C165)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 600.2(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(9)
向((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C165)(400mg，0.06mmol)溶解于DCM(20mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(1.2mL，3体积)、异氰基环丙烷(8)(66mg，1.29mmol)，且搅拌10分钟。在0℃下向此中添加TFA(0.05mL，0.66mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×15mL)、盐水溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(9)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 685.2[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C159)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(9)(200mg，0.29mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(371mg，0.87mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×10mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.4]壬-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C159)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 683.2(M+H)+
实例126：化合物C186及C160的合成
Figure GDA0003977862690004621
1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)
在-30℃下向(2-氯苯基)溴化镁于THF(1)(65mL，65.934mmol)中的搅拌溶液中添加含2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(4g，21.978mmol)的THF(50mL)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物，将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.7
(2S)-2-(((1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)
在0℃下在15分钟内向1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)(3.5g，11.904mmol)及(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(3)(2.64g，14.285mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中逐份添加吡啶(3.8mL，1体积)，随后添加三光气(1.76g，5.9523mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用1N HCl(50mL)、盐水(50mL)洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发，得到粗产物；将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-(((1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)。TLC系统：5％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 528.36[M+Na]+
(2S)-2-(((1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)
在室温下向(2S)-2-(((1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(4)(3.8g,7.524mmol)于THF(30mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(541mg，22.57mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)。TLC系统：80％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 514.36[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向(2S)-2-(((1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(5)(2g，4.073mmol)、DMF(15mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.16g，6.10mmol)、HOBt(824mg，6.10mmol)、DIPEA(2.2mL，12.21mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(910mg，4.88mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash N P纯化，化合物在60％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 660.43[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(7)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(1.5g，2.276mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.2mL，4.552mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 632.38[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸11-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(C160)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(7)(100mg，0.15mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(201mg，0.47mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将过滤物用饱和海波溶液(3×30mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由combi flash NP纯化；化合物在5％甲醇二氯甲烷下洗脱，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(C160)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5
LCMS(ESI)：m/z 630.2(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(9)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(C160)(250mg，0.39mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(8)(39mg，0.59mmol)、吡啶(0.5mL，2体积)，随后添加TFA(0.1mL，0.79mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl溶液(30mL)、随后用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚(30mL)研磨，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 715.57[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(C186)
向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(9)(170mg，0.23mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(201mg，0.47mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将过滤物用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在6％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯(C186)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 713.2[M+H]+
实例127：化合物C161的合成
Figure GDA0003977862690004661
((S)-3-((S)-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁基)磷酸二-叔丁基酯(1)
在室温下向N-((S)-1-(((S)-4-羟基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(C142)(200mg，0.423mmol)于THF(4mL)中的溶液中添加1H-四唑(300mg，4.23mmol)及二乙基胺基亚磷酸二-叔丁基酯(2mL，6.35mmol)。将反应物在室温下搅拌4小时，随后在0℃下添加30％过氧化氢水溶液(0.5mL)。将混合物在25℃下搅拌1小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。然后，将反应混合物用10％偏二亚硫酸钠溶液(Na2S2O5)(10mL)淬灭。随后将各层分离，且用饱和NaHCO3溶液(2×20mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，且在真空下蒸发。藉由正相管柱色谱纯化粗材料，得到((S)-3-((S)-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁基)磷酸二-叔丁基酯(1)。TLC系统：10％M eOH/DCM Rf：0.55LCMS(ESI)：m/z 665.87[M+H]+
二氢磷酸(S)-3-((S)-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酯(C161)
将((S)-3-((S)-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁基)磷酸二-叔丁基酯(1)(100mg，0.15mmol)于DCM(2mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至0℃。随后添加三氟乙酸(0.2ml)，且将反应物在室温下在氮气下搅拌6小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将混合物在真空中浓缩，且随后自二氯甲烷(2×5mL)及二乙醚(2×5mL)浓缩以去除残余酸。将粗化合物藉由反相制备型HPLC纯化，藉由含0.1％TFA的水及乙腈的梯度，得到二氢磷酸(S)-3-((S)-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酯(C161)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 553.1[M+H]+
实例128：化合物C162及C172的合成
Figure GDA0003977862690004671
2-(3-氯苯基)乙醛(2)
在-78℃下向DMSO(2.7mL，38.46mmol)于DCM(30mL)中的搅拌溶液中添加乙二酰氯(2.5mL，28.84mmol)，且随后搅拌30分钟，在-78℃下添加含2-(3-氯苯基)乙-1-醇(1)(3g，19.23mmol)的DCM，且继续2小时，此后在相同温度下添加TEA(8.3mL，57.69mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用DCM(100mL)稀释，且用冰冷的水(3×60mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗2-(3-氯苯基)乙醛(2)。将此产物用于下一步骤中。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4
1,2-双(3-氯苯基)乙-1-醇
在-30℃下向(3-氯苯基)溴化镁(3)(58mL，58.44mmol)、THF(50mL)的搅拌溶液中添加2-(3-氯苯基)乙醛(2)(3g，19.48mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash N P纯化，化合物在5％乙酸乙酯/己烷下洗脱，得到1,2-双(3-氯苯基)乙-1-醇(4)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 249.11[M-OH]+
(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(6)
在0℃下向1,2-双(3-氯苯基)乙-1-醇(4)(2.3g，8.64mmol)及(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯盐酸盐(5)(1.9g，10.37mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(2.3mL，1体积)，随后添加三光气(1.27g，4.32mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用1N HCl(50mL)洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在7％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 500.28[M+Na]+
(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-53)
在室温下向(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(6)(2.1g，4.40mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(316mg，13.20mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-53)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 486.25[M+Na]+
2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-53)(1g，2.07mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(595mg，3.11mmol)、HOBt(420mg，3.11mmol)、DIPEA(0.8mL，6.23mmol)及2-胺基-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-21)(623mg，2.49mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 660.2[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(8)
在0℃下向2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(950mg，1.44mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.4mL，2.88mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 632.50[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(C162)
向((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(8)(400mg，0.63mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(537mg，1.26mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×30mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(C162)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z630.1(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(10)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(C162)(350mg，0.55mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(1mL)，添加异氰基环丙烷(9)(55mg，0.83mmol)，添加TFA(0.3mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层合并，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚(30mL)研磨3次，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(10)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 669.59[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(C172)
向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(10)(280mg，0.39mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(332mg，0.78mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(30mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×30mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(C172)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 713.2(M+H)+
实例129：化合物C163的合成
Figure GDA0003977862690004711
2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-38)(1.6g，3.83mmol)、DMF(16mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1g，5.75mmol)、HOBt(0.77g，5.75mmol)、DIPEA(1.6mL，11.50mmol)及2-胺基-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-20)(1.15g，4.60mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 614.48[M+H]+
((2S)-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)
在0℃下向2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(350mg，0.57mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.6mL，1.14mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 586.56[M+H]+
((2S)-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(3)
向((2S)-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)(300mg，0.51mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(519mg，1.02mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(3)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 584.55(M+H)+
((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(5)
在0℃下向((2S)-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(3)(250mg，0.42mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加乙酸(0.5mL)，添加异氰基环丙烷(4)(56mg，0.83mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物浓缩，得到粗产物；将粗残余物溶解于甲醇(10ml)、水(5mL)中，在室温下添加碳酸钾(80mg，0.58mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，粗化合物用1N HCl水溶液洗涤，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚(30mL)研磨3次，得到((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 669.59[M+H]+
((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C163)
向((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(5)(200mg，0.29mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(310mg，0.59mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×30mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C163)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 667.2(M+H)+
实例130：化合物C164的合成
Figure GDA0003977862690004741
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酸甲酯(3)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙-1-醇(1)(2.5g，9.61mmol)及(S)-2-胺基己酸甲酯盐酸盐(2)(2.0g，11.53mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(7.5mL，3体积)，随后添加三光气(1.4g，4.82mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用1N H Cl(50mL)洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在8％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 432.32[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)氢氧化锂(4)
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酸甲酯(3)(3.0g，6.96mmol)于THF(30mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(500mg，20.88mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)氢氧化锂(4)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 416.31[M-H]-
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)氢氧化锂(4)(2.5g，5.99mmol)、DMF(20mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.7g，8.98mmol)、HOBt(1.2g，8.98mmol)、DIPEA(3.0mL，17.97mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.3g，7.19mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 586.52[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(6)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(500mg，0.85mmol)于THF(10mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(61mg，2.56mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(6)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 572.50[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(8)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(6)(350mg，0.612mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(465mg，1.22mmol)、DIPEA(0.3mL，1.91mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(7)(350mg，1.68mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 681.56[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C164)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(8)(200mg，0.29mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(151mg，0.88mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(2mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C164)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 599.2(M+H)+
实例131：化合物C166的合成
Figure GDA0003977862690004771
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C108)(250mg，0.449mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(0.75mL，3体积)、异氰基环丙烷(1)(45mg，0.671mmol)，且搅拌10分钟。在0℃下向此中添加TFA(0.06mL，899mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×15mL)、盐水溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z641.5[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(C166)
在0℃下向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(2)(200mg，0.312mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(396mg，0.936mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C166)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 639.2(M+H)+
实例132：化合物C168的合成
Figure GDA0003977862690004791
(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
将N-(叔丁氧基羰基)-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]-L-丙氨酸甲酯(1)(1g，3.496mmol)于甲醇(10mL)中的溶液冷却至0℃，随后添加NaOH(500mg于5mL水中)溶液。将所得溶液在0℃下搅拌1小时，随后在真空中去除过量甲醇。将残余物酸化至pH 3，且用二氯甲烷(2×50ml)萃取，且将经合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2
((S)-4-重氮基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)
将N-(叔丁氧基羰基)-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]-L-丙氨酸(3)(3g，11.029mmol)于THF(30mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至-23℃。将所澄清无色溶液依次用三乙胺(3mL，22.059mmol)、随后用氯甲酸异丁酯(1.8mL，13.235mmol)处理。反应混合物用重氮甲烷(约50mL，约25mmol)于二乙醚中的溶液缓慢处理。将所得黄色澄清溶液逐渐温热至室温，且搅拌1小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。此后将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(100mL)萃取，用水(50mL)洗涤一次，用盐水(50mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤且浓缩。藉由正相管柱色谱纯化此材料，得到((S)-4-重氮基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 319.19[M+Na]+
(S)-3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(4)
将((1S)-3-重氮基-2-氧代-1-{[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]甲基}丙基)氨基甲酸叔丁基酯(1.5g，5.06mmol)于1,4-二噁烷(15mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至0℃。此澄清浅黄色溶液用4M氢氯酸于1,4-二噁烷(15mL)中的溶液逐滴处理。完成添加后，在1小时内将反应物温热至室温，形成白色沉淀物。在真空下蒸发过量1,4-二噁烷，且用二乙醚研磨固体，得到呈淡黄色固体状的(S)-3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(4)(1g，4.16mmol，产率83％)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 205.13[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-氯-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)
将(S)-3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(4)胺片段-19(547mg，1.769mmol)及(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸酸片段-2(500mg，1.474mmol)于DMF(50mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至0℃。此淡黄色溶液依次用HATU(841mg，2.212mmol)及N-甲基吗啉(0.32mL，2.949mmol)处理。1小时后，将反应物用1:1冰/饱和NaHCO3(50mL)淬灭且用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将经合并的有机物用盐水(100mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤，且浓缩，得到黄色浆状物。藉由正相色谱纯化此材料，得到((2S)-1-(((2S)-4-氯-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 594.47[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-羟基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C168)
将((2S)-1-(((2S)-4-氯-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(5)(300mg，0.42mmol)及苯甲酰基甲酸(95mg，0.63mmol)于DMF(20mL)中的溶液置于N2氛围下。此澄清浅黄色溶液用氟化铯(151mg，0.84mmol)处理，随后加热至65℃。4小时后，将现在为黄色的悬浮液冷却至室温，用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(30mL)洗涤三次，用盐水(30mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤，且浓缩，得到呈粗黄色泡沫状的粗2-氧代-2-苯基乙酸((3S)-3-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-2-氧代-4-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁酯。C38H4ClN3O8的MS(ESI+)m/z 707.3(M+H)+。将此粗产物放入甲醇(40mL)中，置于N2氛围下，且在剧烈搅拌下用碳酸钾(30mg，0.04mmol)处理。1小时后，在真空中去除挥发物(浴温<30℃)，得到粗产物。藉由正相色谱纯化此材料，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-羟基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C168)。TLC系统：10％M eOH/DCM Rf：0.55LCMS(ESI)：m/z 576.2[M+H]+
实例133：化合物C169的合成
Figure GDA0003977862690004821
1-(3-氯苯甲基)环丁-1-醇(3)
在室温下向1-(溴甲基)-3-氯苯(1)(3g，14.705mmol)于二乙醚(60mL)中的搅拌溶液中添加催化剂1,2-二溴乙烷(0.2mL，1.47mmol)、催化剂碘(94mg，0.73mmol)及镁屑(1g，44.11mmol)。观测到自发剧烈回流。在室温下维持1小时。随后在-78℃下将所产生的格氏试剂缓慢逐滴添加至含有环丁酮(2)(1g，14.28mmol)/二乙醚(20mL)的另一RBF中。维持室温16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-(3-氯苯甲基)环丁-1-醇(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝197.28[M+H]
((1-(3-氯苯甲基)环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)
在0℃下向1-(3-氯苯甲基)环丁-1-醇(3)(1.1g，5.61mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(1.3mL，16.83mmol)及L-亮氨酸甲酯(4)(1.2g，8.41mmol)，随后逐份添加三光气(0.83g，2.806mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1N HCl水溶液(20mL)淬灭，随后用DCM(2×50mL)萃取，用饱和NaHCO3溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用15％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到((1-(3-氯苯甲基)环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝368.35[M+H]+
((1-(3-氯苯甲基)环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)
在0℃下向((1-(3-氯苯甲基)环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)(1.6g，4.35mmol)于THF(6.5mL)、水(1.6mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(0.42g，17.43mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。起始材料耗尽后，将反应混合物浓缩，且用1N HCl酸化，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((1-(3-氯苯甲基)环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝354.34[M+H]+
2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丁氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向((1-(3-氯苯甲基)环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)(1g，2.83mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.65g，4.24mmol)、HOBt(0.57g，4.22mmol)、DIPEA(1.2mL，8.49mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(胺片段-22)(1g，3.39mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用80％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丁氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝592.53[M+H]+
((2S)-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(8)
在0℃下向2-((S)-2-(((1-(3-氯苯甲基)环丁氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(7)(800mg，1.35mmol)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.3mL，2.7mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物，得到((2S)-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(8)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 564.52(M+H)+
((2S)-4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(9)
向((2S)-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(8)(700mg，1.24mmol)溶解于DCM(6mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(1.05mg，2.48mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((2S)-4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(9)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 562.32(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(11)
在0℃下向所得((2S)-4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(9)(110mg，0.19mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(10)(25mg，0.29mmol)、吡啶(0.7mL，0.78mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，添加TFA(45mg，0.39mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1N HCl溶液(5mL)酸化，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物得到((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(11)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 647.36[M+H]+
((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(C169)
向((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(11)(100mg，0.155mmol)溶解于DCM(6mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(262mg，0.62mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯甲基)-环丁酯(C169)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 645.2(M+H)+
实例134：化合物C170及C178的合成
Figure GDA0003977862690004861
1-(甲磺酰基)-4-硝基哌啶(2)
向4-硝基哌啶盐酸盐(1)(3g，18mmol)溶解于DCM(30mL)的搅拌溶液中，在0℃下同时添加甲磺酰氯(158mL，19.87mmol)及三乙胺(3.79mL，27mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(40mL)淬灭，用DCM(2×30mL)萃取，将有机层用水(2×20ml)、盐水溶液(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到1-(甲磺酰基)-4-硝基哌啶(2)。TLC系统：30％EtOAc/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 209.14[M+H]+
2-((1-乙酰基-4-硝基哌啶-4-基)甲基)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)戊二酸二甲酯(3)
在0℃下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸二甲酯(Int-5)(E0574-200)(3.03g，10.09mmol)于ACN(20mL)中的搅拌溶液中添加1-(甲磺酰基)-4-硝基哌啶(2)(1.5g，7.211mmol)及DBU(2.19mL，14.42mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-((1-乙酰基-4-硝基哌啶-4-基)甲基)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)戊二酸二甲酯(3)。TLC系统：70％EtOAc/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 496.8(M+H)+
(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(4)
在-10℃下向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((1-(甲磺酰基)-4-硝基哌啶-4-基)甲基)戊二酸二甲基二甲酯(3)(2.8g，5.65mmol)于甲醇(30mL)中的搅拌溶液中添加氯化镍(801mg，6.21mmol)，随后添加硼氢化钠(1.07g，28.28mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵(50mL)淬灭，且用10％MeOH INDCM(3×25mL)萃取，将经合并的有机层用水(2×20ml)、盐水溶液(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(4)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 378.36(M+Na)+
(2S)-2-胺基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-25)
在0℃下向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(4)(2g，4.61mmol)于1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中添加含4M HCl的1,4-二噁烷(10mL)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物用正戊烷研磨，得到(2S)-2-胺基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-25)。TLC系统：15％MeOH/DCMRf：0.1LCMS(ESI)：m/z 334.29(M+H)+
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(5)
随后在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-2)(1.3g，3.83mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.09g，5.75mmol)、HOBt(0.776g，5.751mmol)、DIPEA(2.0mL，11.502mmol)及(2S)-2-胺基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-25)(1.55g，4.218mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，藉由5％甲醇/二氯甲烷下洗脱为2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 655.41[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-羟基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)
在0℃下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(5)(1.6g，2.4mmol)于THF(20mL)中的搅拌溶液中添加2M LiBH4(2.4mL，4.8mmol)，且继续搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(10mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×10mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-羟基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 627.40[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C178)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-羟基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)(270mg，0.431mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(457g，1.07mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，且经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。藉由制备型HPLC纯化粗产物，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C178)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 625.1[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(8)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C178)(300mg，0.48mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(6)(64.32mg，0.96mmol)、吡啶(0.15ml 1.92mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，且添加TFA(109.4mg)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1NHCl溶液(5mL)酸化，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z710.33[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C170)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸33-氯苯甲酯(8)(330mg，0.466mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(494mg，1.16mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，且经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。藉由制备型HPLC纯化粗产物，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C170)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 708.2[M+H]+
实例135：化合物C171的合成
Figure GDA0003977862690004901
2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(1)(酸片段-34)(1.5g，4.77mmol)于DMF(30mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.36g，7.165mmol)、HOBt(0.96g，7.165mmol)、DIPEA(2.54mL，14.31mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-19)(1.68g，5.724mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(250mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在10％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z 551.50[M+H]+
2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(3)
在室温下向2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)(1.5g，2.722mmol)于THF(15mL)、水(15mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(343mg，8.166mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。在减压下蒸馏过量THF，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用DCM(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(3)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 537.44[M+H]+
N-((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1λ4-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(5)
在0℃下向2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(3)(1.3g，2.42mmol)于DCM(25mL)中的搅拌溶液中添加HATU(1.3g，3.358mmol)、DIPEA(1.2mL，6.716mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-鎓(4)(556mg，2.686mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用DCM(2×50mL)萃取。将经合并的有机层用水(1×50mL)、盐水溶液(1×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在真空下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到N-((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1λ4-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z 646.51[M+H]+
N-((2S)-3-环己基-1-((3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(吡咯烷-1-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(C171)
在0℃下向N-((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1λ4-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(5)(200mg，0.310mmol)于甲醇(3mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(159mg，0.930mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且随后添加吡咯烷(0.06mL，0.93mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×15mL)萃取。将有机层用水(1×20mL)及盐水溶液(1×30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-3-环己基-1-((3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(吡咯烷-1-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(C171)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 616.4[M+H]+
实例136：化合物C175的合成
Figure GDA0003977862690004921
2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯
在0℃下向(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-53)(1g，2.07mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(596mg，3.11mmol)、HOBt(421mg，3.11mmol)、DIPEA(0.8mL，6.23mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(Int-7A)(603mg，2.07mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 700.31[M+H]
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯
在0℃下向2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)(900mg，1.28mmol)于DCM(9mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.28mL，2.57mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z672.50[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(C175)
向((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(2)(800mg，1.190mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(1g，2.38mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×30mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(C175)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 670.2(M+H)+
实例137：化合物C176及C200的合成
Figure GDA0003977862690004941
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-2)(1.0g，2.94mmol)于DMF(200mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(842mg，4.41mmol)、HOBt(595mg，4.41mmol)、DIPEA(1.5mL，8.82mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-22)(992mg，3.24mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 578.28[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)
在0℃下向(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)(1.6g，2.76mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.7mL,5.53mmol)，随后将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用EtoAc(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物，得到纯((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 550.31[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-(((2S)-1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C200)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯3-氯苯甲酯(2)(300mg，0.545mmol)于EtOAc(6mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(578mg，1.36mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用EtoAc(20mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×10mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在10％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-3-环己基-1-氧代-1-(((2S)-1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C200)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 548.1[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)
向((2S)-3-环己基-1-氧代-1-(((2S)-1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C200)(300mg，0.547mmol)及异氰基环丙烷(3)(73.3mg，1.09mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加吡啶(0.17mL)，且搅拌10分钟。在0℃下向此溶液中添加TFA(124mg，1.09mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×5mL)、盐水溶液(3×5mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 633.34[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C176)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(4)(340mg，0.537mmol)的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(569mg，1.34mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用EtoAc(10mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在10％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(C176)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 631.2[M+H]+
实例138：化合物C177及C189的合成
Figure GDA0003977862690004971
2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-55)(1g，2.44mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.69g，3.66mmol)、HOBt(0.49g，3.66mmol)、DIPEA(1.2mL，7.32mmol)及2-胺基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-25)(1g，3.39mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用80％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝723.69[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)
在0℃下向2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)(1.6g，2.21mmol)于DCM(15mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.2mL，4.43mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 695.40(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C189)
将((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)(150mg，0.22mmol)的搅拌溶液中溶解于DCM(4mL)中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(235mg，0.55mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C189)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 693.2(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)
在0℃下向所得((2S)-3-环己基-1-((1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C189)(380mg，0.54mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(3)(74mg，1.09mmol)、吡啶(0.7mL，2.1mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，且添加TFA(0.12ml，1.09mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1N HCl溶液(5mL)酸化，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 778.81[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C177)
向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)(330mg，1.06mmol)溶解于DCM(6mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(449mg，0.62mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷稀释(10mL)，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(C177)。TLC系统：5％甲醇/DCMRf：0.3LCMS(ESI)：m/z 776.2(M+H)+
实例139：化合物C179的合成
Figure GDA0003977862690005001
2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(1)(1.0g，2.9mmol)于DMF中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.83g，4.35mmol)、HOBT(0.587g，4.35mmol)、DIPEA(1.6mL，3体积)及2-胺基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-22)(1.0g，3.4mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)。TLC系统：10％甲醇/DCMRf：0.7LCMS(ESI)：m/z 583.64(M+H)+
N-((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(3)
在0℃下向2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)(1.5g，2.57mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.5mL，5.14mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到N-((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(3)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf0.5LCMS(ESI)：m/z 555.46(M+H)+
N-((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(C179)
在0℃下向N-((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(3)(150mg，0.27mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(229.60mg，0.54mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(C179)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 553.2(M+H)+
实例140：化合物C201及C181的合成
Figure GDA0003977862690005021
(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲醇(3)
在-30℃下向(4-氯苯基)溴化镁(2)(35mL，35.55mmol)、THF(70mL)的搅拌溶液中添加1-(3-氯苯基)环丙烷-1-甲醛(1)(3.2g，17.77mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在7％乙酸乙酯/己烷下洗脱，得到(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲醇(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 275.18[M-OH]+
(((4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)
在0℃下向(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲醇(3)(4g，13.69mmol)于ACN(40mL)中的搅拌溶液中添加碳酸N,N’-二丁二酰胺酯(8.7g，33.98mmol)，随后添加三乙胺(6.6mL，47.94mmol)，且在室温下搅拌4小时。反应的进展藉由TLC监测。反应物质直接用于后续反应中。
在另一烧瓶中，将L-亮氨酸甲酯盐酸盐(2)(6.1g，34.24mmol)放入ACN(50mL)中，且用三乙胺(6.6mL，47.94mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5分钟，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗(((4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)，将其直接用于下一步骤中。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z486.13[M+Na]+
(((4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)
在0℃下向(((4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)(5.6g，12.09mmol)于THF(40mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(870mg，36.28mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(((4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 472.19[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-((((4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向(((4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)(4.5g，10.02mmol)、DMF(30mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(9.5g，25.05mmol)、DIPEA(4.7mL，30.05mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(2.23g，12.02mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash N P纯化，化合物在洗脱7％甲醇/二氯甲烷下，得到(2S)-2-((2S)-2-((((4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 618.25[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(8)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(1.0g，1.62mmol)于二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.2mL，2.43mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 590.34[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(化合物C181)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(8)(100mg，0.197mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(167mg，0.394mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)及盐水(1×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由combi flash NP纯化，3％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C181)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z588.1[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(10)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(化合物C181)(450mg，0.731mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加吡啶(0.25mL，3体积)、异氰基环丙烷(9)(97mg，1.462mmol)、随后TFA(0.11mL，1.462mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl(2×15mL)，随后盐水(20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(10)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 673.58(M+H)+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(化合物C201)
在0℃下向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(10)(200mg，0.297mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(378mg，0.892mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(化合物C201)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 671.1[M+H]+
实例141：化合物C195的合成
Figure GDA0003977862690005061
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)
向((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C175)(190mg，0.283mmol)溶解于DCM(10mL)中的搅拌溶液，在0℃下依序添加吡啶(0.1mL，0.851mmol)、异氰基环丙烷(1)(0.03mL，0.425mmol)，随后在0℃下添加TFA(0.06mL，0.867mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl(2×15mL)、盐水溶液(20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 754.33[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C195)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(2)(175mg，0.231mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(196mg，0.4635mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C195)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 752.3(M+H)+
实例142：化合物C185及C184的合成
Figure GDA0003977862690005071
Figure GDA0003977862690005081
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(7)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(0.77g，1.19mmol)于THF(7mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.19mL，2.30mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(2)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.2L CMS(ESI)：m/z 616[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(3)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(2)(630mg，1.01mmol)溶解于乙酸乙酯(6.5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(1.31g，3.0mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(3)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 614.30[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(5)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(3)(510mg，0.831mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(4)(111mg，1.66mmol)、吡啶(0.262mL，3.3mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，且添加TFA(0.12mL，1.66mmol)且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1N HCl溶液(5mL)酸化，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(5)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 699.3[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C185)
向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(5)(500mg，0.71mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(750mg，1.70mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C185)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 697.2[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(2)
在0℃下向(S)-2-((S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(0.700g，1.08mmol)于DCM(7mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1mL，2.177mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(2)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.2LC MS(ESI)：m/z 616.61[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(3)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(2)(620mg，1.01mmol)溶解于乙酸乙酯(6.5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(1.282g，3.0mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(3)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 614.30[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(10)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(3)(600mg，0.978mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(4)(131.1mg，1.957mmol)、吡啶(0.3mL，3.915mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，且添加TFA(0.15mL，1.95mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1N HCl溶液(5mL)酸化，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 699.2[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C184)
向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(5)(400mg，0.71mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(727mg，1.716mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C184)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 697.2[M+H]+
实例143：化合物C187及C203的合成
Figure GDA0003977862690005121
(1-(3-氯苯基)环丙基)甲醇(2)
在0℃下向1-(3-氯苯基)环丙烷-1-甲酸(1)(10g，51.02mmol)于THF(200mL)中的搅拌溶液中逐滴添加LiAlH4，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并，且用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在15％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到化合物(1-(3-氯苯基)环丙基)甲醇(2)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷Rf：0.6
1-(3-氯苯基)环丙烷-1-甲醛(3)
向(1-(3-氯苯基)环丙基)甲醇(2)(8g，4.39mmol)溶解于乙酸乙酯(80mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(2.79g，6.59mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×50mL)、饱和NaHCO3溶液(3×50mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到1-(3-氯苯基)环丙烷-1-甲醛(3)。vTLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z 181.1[M+H]-
(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲醇(5)
在-30℃下向1-(3-氯苯基)环丙烷-1-甲醛(3)(6.5g，36.11mmol)于THF(200mL)中的搅拌溶液中逐滴添加(3-氯苯基)溴化镁(4)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在08％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲醇(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z 315.13[M+Na+H]+
(((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(7)
在0℃下向(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲醇(5)(5.0g，17.06mmol)于乙腈(50mL)中的搅拌溶液中添加TEA(8.30mL，59.7mmol)、DSC(10.9g，42.01mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。随后，添加(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(6)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，且用水(50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(7)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 464.16[M+H]+
(((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(8)
在0℃下向(((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸甲基甲酯(7)(4.9g，10.50mmol)于THF(30mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.33g，31.66mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(8)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 450.1[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)
在0℃下向(((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-L-亮氨酸(8)(1.2g，2.60mmol)、DMF(12mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(765mg，4.01mmol)、HOBt(541mg，4.01mmol)、DIPEA(1.42mL，8.01mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.08g，5.847mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在50％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)-胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)(1.2g，1.96mmol，产率75％)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 618.5[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(10)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)(0.750g，1.20mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.55mL，2.45mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩为((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(10)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.2LC MS(ESI)：m/z 590.5(M+H)+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(化合物C203)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸酯(10)(320mg，0.54mmol)解于乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液溶中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(689mg，1.62mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在5％二氯甲烷/甲醇下洗脱，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(化合物C203)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 588.0(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(12)
在0℃下向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸酯(化合物C203)(290mg，0.49mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(11)(66mg，0.98mmol)、吡啶(0.15mL，1.97mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，且添加TFA(0.075mL，0.91mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1N HCl溶液(5mL)酸化，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(12)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 673.2[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(化合物C187)
向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸酯(12)(290mg，0.43mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(457mg，1.02mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(化合物C187)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 671.1(M+H)+
实例144：化合物C188及C212的合成
Figure GDA0003977862690005171
2,2-二甲基-1-(4-硝基哌啶-1-基)丙-1-酮(2)
向4-硝基哌啶盐酸盐(1)(2.9g，22.307mmol)溶解于DCM(30mL)的搅拌溶液中，在-20℃下同时添加三甲基乙酸酐(6.5mL，33.461mmol)及Et3N(9.4mL，66.921mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(40mL)淬灭，用DCM(2×30mL)萃取，将有机层用水(2×20ml)、盐水溶液(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到呈无色液体状的2,2-二甲基-1-(4-硝基哌啶-1-基)丙-1-酮(2)(2.5g，11.68mmol，产率52％)。TLC系统：30％EtOAc/石油醚Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z215.18[M+H]+
(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((4-硝基-1-三甲基乙酰基哌啶-4-基)甲基)戊二酸二甲酯(3)
在0℃下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸二甲酯(中间物-5)(3.84g，13.395mmol)于ACN(30mL)中的搅拌溶液中添加2,2-二甲基-1-(4-硝基哌啶-1-基)丙-1-酮(2)(2.4g，11.162mmol)及DBU(2.19mL，14.42mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((4-硝基-1-三甲基乙酰基哌啶-4-基)甲基)戊二酸二甲酯(3)。TLC系统：30％EtOAc/石油醚Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 502.47(M+H)+
(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(4)
在-10℃下向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((4-硝基-1-三甲基乙酰基哌啶-4-基)甲基)戊二酸二甲酯(3)(4.9g，9.760mmol)于甲醇(10mL)中的搅拌溶液中添加氯化镍(1.38g，10.737mmol)，随后添加硼氢化钠(1.85g，48.80mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵(50mL)淬灭，且用10％MeOH/DCM(3×25mL)萃取，将经合并的有机层用水(2×20ml)、盐水溶液(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(4)。TLC系统：10％MeOH/DCMRf：0.2LCMS(ESI)：m/z 440.45(M+H)+
(2S)-2-胺基-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-30)
在0℃下向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(4)(3.2g，7.954mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加1,4-二噁烷.HCl(20mL)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物用正戊烷研磨，得到(2S)-2-胺基-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段30)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 340.35(M+H)+
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(5)
随后在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-2)(1.0g，2.941mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.0g，4.411mmol)、HOBt(0.842g，4.411mmol)、DIPEA(1.52mL，8.823mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-30)(1.55g，4.218mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，藉由在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 661.61[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)
在0℃下向(2S)-2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(5)(1.0g，1.371mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.3mL，2.743mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 633.4(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C212)
向((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)(200mg，0.31mmol)溶解于EtOAc(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(534mg，1.26mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C212)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 631.3(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(8)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C212)(300mg，0.47mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(7)(48mg，0.71mol)、吡啶(0.15mL，1.716mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，且添加TFA(0.1mL，0.858mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1NHCl溶液(5mL)酸化，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(8)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 716.6[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C188)
向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(8)(260mg，0.36mmol)溶解于EtoAc(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(462mg，1.019mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷稀释(10mL)，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C188)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 714.2(M+H)+
实例145：化合物C193及C190的合成
Figure GDA0003977862690005211
2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(酸片段-49)(1g，2.90mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(833mg，4.36mmol)、HOBt(590mg，4.36mmol)、DIPEA(1.6mL，8.7mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-19)(843mg，2.90mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 580.3[M+H]
N-((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(2)
在0℃下向2-((S)-3-环己基-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)(900mg，1.55mmol)于DCM(9mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.5mL，3.10mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到N-((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 553.58[M+H]+
N-((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C193)
将N-((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(2)(150mg，2.715mmol)的搅拌溶液中溶解于DCM(10mL)中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(230mg，5.43mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×30mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到N-((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C193)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z551.2(M+H)+
N-((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(4)
向N-((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C193)(370mg，0.672mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(0.1mL，2.01mmol)、异氰基环丙烷(3)(0.07mL，1.008mmol)，随后在0℃下添加TFA(0.15mL，1.34mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl(2×15mL)、盐水溶液(20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗N-((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 635.3[M+H]+
N-((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C190)
在0℃下向N-((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(4)(200mg，0.314mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(267mg，0.629mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C190)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 634.2(M+H)+
实例146：化合物C191的合成
Figure GDA0003977862690005241
N-((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(2)
向N-((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(500mg，0.904mmol)溶解于DCM(60mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(1.5mL，3体积)、异氰基环丙烷(1)(121mg，1.80mmol)，且搅拌10分钟。在0℃下向此中添加TFA(0.2mL，2.5mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×30mL)、盐水溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗N-((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.7LCMS(ESI)：m/z638.36[M+H]+
N-((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C191)
在0℃下向N-((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(2)(400mg，0.62mmol)于DCM(50mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(798mg，1.59mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C191)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.8LCMS(ESI)：m/z636.3(M+H)+
实例147：化合物C192及C223的合成
Figure GDA0003977862690005251
2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-52)(1.3g，3.2mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(915mg，4.7mmol)、HOBT(646mg，4.7mmol)、DIPEA(1.7mL，3体积)及2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-19)(926mg，3.2mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/DCM洗脱，得到2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 644.8(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)
在0℃下向2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)(1g，1.55mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.55mL，3.10mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)。TLC系统：5％MeOH/DCMRf0.3LCMS(ESI)：m/z 616.5(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C223)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)(850mg，1.37mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.17g，4.13mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C223)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 614.2(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)
向((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C223)(600mg，1.25mmol)溶解于DCM(60mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(1.8mL，3体积)、异氰基环丙烷(3)(126.41mg，1.88mmol)，且搅拌10分钟。在0℃下向此中添加TFA(0.2mL，2.5mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×30mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×30mL)、盐水溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 700.50[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C192)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)(450mg，0.79mmol)于EtOAc(50mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(677mg，1.59mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C192)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 697.2(M+H)+
实例148：化合物C194及C215的合成
Figure GDA0003977862690005281
((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C194)
在0℃下向((1-苯甲基环丁氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸-片段-25)(300mg，0.940mmol)于DMF(4mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(394mg，1.410mmol)、NMM(0.2mL，1.880mmol)及(S)-3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(胺片段-23)(270mg，128mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用80％乙酸乙酯及石油醚洗脱，随后制备型HPLC，得到((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C194)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝506.1[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-羟基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C215)
向((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C194)(280mg，0.554mmol)于DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加苯基乙醛酸(124mg，0.831mmol)及CsF(167mg，1.108mmol)，且加热至65℃维持2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(40mL)稀释，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将有机层合并，且用冷水(2×30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗产物，将此粗产物溶解于甲醇(5ml)中，在0℃下添加K2CO3(7mg)，且搅拌1小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。浓缩反应混合物，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-羟基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-苯甲基环丁酯(化合物C215)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 488.3(M+H)+
实例149：化合物C195的合成
Figure GDA0003977862690005301
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)
向((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C175)(190mg，0.283mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(0.1mL,0.851mmol)、异氰基环丙烷(1)(0.03mL，0.425mmol)，随后在0℃下添加TFA(0.06mL，0.867mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl(2×15mL)、盐水溶液(20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 754.33[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C195)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(2)(175mg，0.231mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(196mg，0.4635mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C195)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 752.3(M+H)+
实例150：化合物C196的合成
Figure GDA0003977862690005311
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C152)(350mg，0.693mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(0.75mL，3体积)、异氰基环丙烷(1)(55mg，0.831mmol)，随后在0℃下添加TFA(0.07mL，1.386mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl(2×15mL)、盐水溶液(20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 591.2[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C196)
在0℃下向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)(200mg，0.338mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(431mg，1.016mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C196)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 589.1(M+H)+
实例151：化合物C197的合成
Figure GDA0003977862690005321
((2S)-1-(((2S)-4-氯-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C197)
将(S)-3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(胺片段-28)(150mg，0.442mmol)及(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-2)(164mg，0.53mmol)于DMF(20mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至0℃。此浅黄色溶液依次用HATU(252mg，0.66mmol)及N-甲基
Figure GDA0003977862690005332
啉(0.12mL，0.88mmol)处理。1小时后，将反应物用1:1冰/饱和NaHCO3(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将经合并的有机物用盐水(100mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤，且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-(((2S)-4-氯-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C197)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 594.47[M+H]+
实例152：化合物C198的合成
Figure GDA0003977862690005331
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-2)(1g，2.94mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(844mg，4.42mmol)、HOBt(596mg，4.42mmol)、DIPEA(1.2mL，8.84mmol)，随后添加2-胺基-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(885mg，3.53mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸乙酯(2)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 536.51[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(3)
在0℃下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)(900mg，1.63mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.6mL，3.27mmol)，随后将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用饱和氯化铵溶液淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(3)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 508.55[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C198)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(3)(200mg，0.39mmol)于乙酸乙酯(6mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(334mg，0.78mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(20mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×15mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C198)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 506.1[M+H]+
实例153：化合物C199及C208的合成
Figure GDA0003977862690005351
((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C199)
将(S)-3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(胺片段-23)(540mg，2.252mmol)及(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-23)(500mg，1.501mmol)于DMF(10mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至0℃。此淡黄色溶液依次用HATU(856mg，2.252mmol)及N-甲基
Figure GDA0003977862690005352
啉(0.3mL，3.003mmol)处理。1小时后，将反应物用1:1冰/饱和NaHCO3(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。经合并的有机物用盐水(100mL)洗涤一次，经Na2SO4干燥，过滤，且浓缩，得到黄色浆状物。藉由正相色谱纯化此材料，得到((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C199)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 520.1[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-羟基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C208)
将((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(200mg，0.385mmol)及苯甲酰基甲酸(87mg，0.577mmol)于DMF(4mL)中的溶液置于N2氛围下。此澄清浅黄色溶液CsF(116mg，0.770mmol)用处理，随后加热至65℃。4小时后，将黄色悬浮液冷却至室温，用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(30mL)洗涤三次，用盐水(30mL)洗涤一次，经Na2SO4干燥，过滤，且浓缩，得到呈粗黄色泡沫状的粗2-氧代-2-苯基乙酸(3S)-3-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酯。C35H43N3O8的MS(ESI+)m/z 633.3(M+H)+。将此粗产物放入甲醇(20mL)中，置于N2氛围下，且在剧烈搅拌下用碳酸钾(10mg，0.04mmol)处理。1小时后，在真空中去除挥发物(浴温<30℃)，得到粗产物。藉由正相色谱纯化此材料，得到((S)-1-(((S)-4-羟基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C208)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.55LCMS(ESI)：m/z 501.28[M+H]+
实例154：化合物C202及C210的合成
Figure GDA0003977862690005371
2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-55)(1g，2.45mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.701g，3.671mmol)、HOBt(0.49g，3.671mmol)、DIPEA(1.2mL，7.35mmol)及2-胺基-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-25)(1g，2.94mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用80％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝729.71[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)
在0℃下向2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)(1.0g，1.371mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.3mL，2.743mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 701.24(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C202)
向((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)(700mg，1.0mmol)溶解于EtOAc(20mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(1.27g，3.0mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C202)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 699.3(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)
在0℃下向所得((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C202)(300mg，0.42mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(3)(57mg，0.858mmol)、吡啶(0.13mL，1.716mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，且添加TFA(0.1mL，0.858mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1N HCl溶液(5mL)酸化，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 784.3[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C210)
向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)(200mg，0.255mmol)溶解于EtoAc(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(324mg，0.765mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-三甲基乙酰基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C210)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 782.4(M+H)+
实例155：化合物C222及C205的合成
Figure GDA0003977862690005401
2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)
在0℃下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(1)(1.7g，3.57mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1g，5.36mmol)、HOBt(0.7g，5.36mmol)、DIPEA(1.8mL，10.73mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-21)(0.98g，3.93mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在30％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，且在SFC纯化之后，得到2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)。TLC系统：70％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 672.60[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(3)
在0℃下向2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)(1.1g，1.63mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加LiBH2(1.6ml，3.27mmol)，且继续搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(10ml)淬灭，且用乙酸乙酯(2×10mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(3)。TLC系统：70％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z644.49[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C222)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-羟基-3-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(3)(230mg，0.357mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(379mg，0.89mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，且经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。藉由制备型HPLC纯化粗产物，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C222)。TLC系统：05％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 642.35(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(6)
向((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C222)(250mg，0.436mmol)及异氰基环丙烷(4)(58mg，0.87mmol)溶解于DCM(6mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加吡啶(0.2mL)，且搅拌10分钟。在0℃下向此中溶液添加TFA(99mg，0.87mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(10mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×5mL)、盐水溶液(3×5mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 727.47[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C205)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(5)(250mg，0.343mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(364mg，0.858mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。3小时后，将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，且经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。藉由制备型HPLC纯化粗产物，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-1-(8-(甲磺酰基)-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C205)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 725.01[M+H]+
实例156：化合物C225及C206的合成
Figure GDA0003977862690005431
2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-55)(1.2g，2.91mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(844mg，4.4mmol)、HOBT(597mg，4.4mmol)、DIPEA(1.56mL，8.8mmol)及(2S)-2-胺基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-22)(1.03g，3.5mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用70％乙酸乙酯/石油醚洗脱为2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 646.4(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)
在0℃下向2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)(800mg，1.20mmol)于THF(8mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.23mL，2.40mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.3LCMS(ESI)：m/z 618.6(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C225)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)(400mg，0.64mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(823mg，1.90mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C225)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 616.3(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)
向((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C225)(380mg，0.64mmol)溶解于DCM(20mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(0.24mL，2.5mmol)、异氰基环丙烷(3)(86mg，1.29mmol)，且搅拌10分钟。在0℃下向此中添加TFA(0.10mL，1.29mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×15mL)、盐水溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 701.3[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C206)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(4)(420mg，0.61mmol)于EtOAc(15mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(763mg，1.81mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(35mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×15mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C206)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 699.3(M+H)+
实例157：化合物C207的合成
Figure GDA0003977862690005461
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(1.3g，2.22mmol)于THF(10mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(273mg，6.65mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z572.5[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(900mg，1.57mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(1.19g，2.89mmol)、DIPEA(0.3mL，3体积)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(486mg，2.36mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 681.7[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C207)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸酯(4)(200mg，0.44mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(189mg，1.09mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。向此中添加氨水(2mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C207)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 599.1(M+H)+
实例158：化合物C250及C208的合成
Figure GDA0003977862690005471
Figure GDA0003977862690005481
(2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(3)
在0℃下向(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲桥(1)(2.5g，8.51mmol)于乙腈(25mL)中的搅拌溶液中添加Et3N(4.16mL，29.10mmol)、DSC(5.47g，21.01mmol)，且在室温下搅拌4小时。反应的进展藉由TLC监测。随后添加(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯(2)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发，且用水(25mL)稀释，且用乙酸乙酯(25mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝.504.5[M+H]+
(2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(4)
在0℃下向(2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸甲酯(3)(2.5g，4.90mmol)于THF(15mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(416mg，9.92mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩为(2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(4)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 490.2[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(4)(1g，2.0mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(585mg，3.01mmol)、HOBt(414mg，3.01mmol)、DIPEA(1.09mL，6.1mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(542mg，2.10mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在60％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 618.5[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(6)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(900mg，1.30mmol)于THF(9mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.3mL，2.70mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(6)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 630.3(M+H)+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯)(化合物C250)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(6)(200mg，0.31mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(403mg，0.95mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯)(化合物C250)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 628.2(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(8)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯)(化合物C250)(180mg，0.28mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(7)(38mg，0.57mmol)、吡啶(0.09.mL，1.14mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，且添加TFA(0.046mL，0.57mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1N HCl溶液(5mL)酸化，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(8)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 713.6[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(化合物C208)
向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(8)(200mg，0.28mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(297mg，0.70mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(化合物C208)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 711.3(M+H)+
实例159：化合物C209的合成
Figure GDA0003977862690005511
((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C209)
将3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(胺片段-23)(69.3mg，0.28mmol)及((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-38)(100mg，0.23mmol)于DMF(20mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至0℃。此浅黄色溶液依次用HATU(136.62mg，0.35mmol)及N-甲基
Figure GDA0003977862690005512
啉(0.1mL，0.47mmol)处理。1小时后，将反应物用1:1冰/饱和NaHCO3(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将经合并的有机物用盐水(100mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤，且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C209)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 604.2[M+H]+
实例160：化合物C214的合成
Figure GDA0003977862690005521
2-((S)-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(4-甲氧基-1H-吲哚-2-羰基)-D-亮氨酸(酸片段-60)(1.5g，5mmol)于DMF(15mL)中的搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.42g，7.4mmol)、HOBT(1g，7.4mmol)及DIPEA(2.1mL，12.3mmol)，随后添加2-胺基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-19)(1.7g，5.9mmol)，且将所得反应混合物在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到2-((S)-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 541.47[M+H]+
N-((2S)-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(2)
在0℃下向2-((S)-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(2)(0.8g，1.48mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.5mL，2.96mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，且用DCM(2×50mL)萃取。将经合并的有机层用水(50mL)、盐水溶液(50mL)洗涤，且经Na2SO4干燥且浓缩，得到N-((2S)-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(2)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf0.3LCMS(ESI)：m/z 513.30[M+H]+
4-甲氧基-N-((2S)-4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C214)
在0℃下向N-((2S)-1-((1-羟基-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(2)(100mg,0.195mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(124mg，0.292mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。反应物质经由硅藻土垫过滤，且将硅藻土垫用乙酸乙酯(30mL)充分洗涤。随后将有机层用10％硫代硫酸钠溶液(2×20mL)、随后用饱和碳酸氢钠溶液(2×20mL)、水(1×20mL)、盐水(1×20mL)洗涤。随后将有机层经硫酸钠干燥，且在真空下蒸发，得到4-甲氧基-N-((2S)-4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C214)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 511.3[M+H]+
实例161：化合物C209及C236的合成
Figure GDA0003977862690005541
((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C209)
将3-((S)-2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(胺片段-23)(69.3mg，0.28mmol)及((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-38)(100mg，0.23mmol)于DMF(20mL)中的溶液置于N2氛围下，且冷却至0℃。此浅黄色溶液依次用HATU(136.62mg，0.35mmol)及N-甲基
Figure GDA0003977862690005542
啉(0.1mL，0.47mmol)处理。1小时后，将反应物用1:1冰/饱和NaHCO3(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。将经合并的有机物用盐水(100mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤，且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C209)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 604.2[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-羟基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C236)
将((S)-1-(((S)-4-氯-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C209)(550mg，0.9097mmol)、苯基乙醛酸(204.86mg，1.364mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液置于N2氛围下。此澄清浅黄色溶液用氟化铯(343.41mg，2.27mmol)处理，随后加热至65℃。4小时后，将现在为黄色的悬浮液冷却至室温，用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(30mL)洗涤三次，用盐水(30mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤，且浓缩，得到呈粗黄色泡沫状的粗2-氧代-2-苯基乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酯。MS(ESI+)for C39H44ClN3O8 m/z 718.75(M+H)+.将此粗产物放入甲醇(40mL)中，置于N2氛围下，且在剧烈搅拌下用碳酸铯(144.64mg，0.446mmol)处理。1小时后，在真空中去除挥发物(浴温<30℃)，得到粗产物。将粗化合物提交至制备型HPLC，得到((S)-1-(((S)-4-羟基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C236)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 586.2[M+H]+
实例162：化合物C211的合成
Figure GDA0003977862690005551
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(乙胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C211)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(1)(200mg，0.27mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(142mg，0.831mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。向此中添加乙胺.HCl(600mg，7.358mmol)、DIPEA(0.8mL，4.49mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(乙胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C211)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 667.3[M+H]+
实例163：化合物C216的合成
Figure GDA0003977862690005571
2-甲基-1-苯基丙-1-醇(3)
在-30℃下向苯基溴化镁(2)(139mL，138.8mmol)、THF(100mL)的搅拌溶液中添加1-(3-氯苯基)异丁醛(1)(5g，69.44mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flashNP纯化，化合物在7％乙酸乙酯/己烷下洗脱，得到2-甲基-1-苯基丙-1-醇(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 133.26[M-OH]+
(2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向2-甲基-1-苯基丙-1-醇(3)(2.0g，13.3mmol)及(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯盐酸盐(4)(2.95g，15.96mmol)于DCM(30mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(6mL，3体积)，随后添加三光气(1.97g，6.65mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用1N HCl(50mL)、随后盐水(50mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 384.21[M+Na]+
(2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸(6)
在室温下向(2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(5)(3.0g，8.31mmol)于THF(20mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(598mg，24.93mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸(6)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 370.19[M+H]+
(2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向(2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸(6)(2.5g，7.21mmol)、DMF(20mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(6.84g，18.01mmol)、DIPEA(3.4mL，21.6mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.6g，8.64mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash N P纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z516.47[M+H]+
(2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)
在室温下向(2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(500mg，0.97mmol)于THF(4mL)及水(2mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(70mg，2.91mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 502.31[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙酯(10)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)(400mg，0.798mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(606mg，1.59mmol)、DIPEA(0.37mL，2.39mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(9)(400mg，1.99mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙酯(10)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 611.41[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C216)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙酯(10)(350mg，0.57mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(296mg，1.72mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(2mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C216)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 529.3(M+H)+
实例164：化合物C217的合成
Figure GDA0003977862690005601
2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(910mg，1.45mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(178mg，4.35mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z612.67[M+H]+
((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)
在0℃下向2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(820mg，1.339mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(562mg，2.00mmol)、DIPEA(0.74mL，4.017mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(414mg，2.009mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(40mL)稀释，用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 721.49[M+H]+
((2S)-1-((4-胺基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C217)
在0℃下向((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)(300mg，0.446mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(215mg，1.249mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。向此中添加氨水(2mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((4-胺基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C217)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 639.3[M+H]+
实例165：化合物C218的合成
Figure GDA0003977862690005621
2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-38)(1.6g，3.83mmol)、DMF(16mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1g，5.75mmol)、HOBt(0.77g，5.75mmol)、DIPEA(1.6mL，11.50mmol)及2-胺基-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-21)(1.15g，4.60mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 614.48[M+H]+
2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(490mg，0.797mmol)于THF(5mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(98mg，2.393mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1NHCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 586.56[M+H]+
((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(3)
在0℃下向2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(310mg，0.516mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(217mg，0.774mmol)、DIPEA(0.28mL，1.54mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(159mg，0.774mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 709.52(M+H)+
((2S)-1-((4-胺基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C218)
在0℃下向((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(3)(240mg，0.33mmol)于甲醇(4mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(116mg，0.676mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。向此中添加氨水(2mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用饱和NaHCO3溶液(2×20mL)洗涤。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((4-胺基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物C218)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 627.3[M+H]+
实例166：化合物C235及C219的合成
Figure GDA0003977862690005641
(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(化合物C235)
在室温下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(Int-9)(600mg，0.779mmol)于THF(2.5mL)、水(2.5mL)中的搅拌溶液中添加过硫酸氢钾(717mg，2.33mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用10％甲醇/DCM(3×15mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗化合，藉由制备型HPLC纯化，得到(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(化合物C235)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 688.59[M+H]+
(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-2-羟基-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(2)
在0℃下向(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(化合物C235)(1.0g，1.45mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加NaCNBH3(89mg，1.45mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰冷的水(10mL)淬灭，且用10％甲醇/二氯甲烷(3×20mL)萃取，且用1N HCl溶液(2×15mL)洗涤，随后盐水(20mL)。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗产物，将其藉由正相combi-flash纯化，藉由10％甲醇/DCM洗脱，得到(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-2-羟基-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(2)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1(相同Rf)LCMS(ESI)：m/z 692.36[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(二乙胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(4)
在0℃下向(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-2-羟基-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(2)(600mg，.868mmol)于DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加HATU(494mg，1.302mmol)、DIPEA(0.5mL，2.604mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌10分钟。向此中添加二乙胺(3)(6mL)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(二乙胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 747.5(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(二乙胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(化合物C219)
向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(二乙胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(4)(350mg，0.469mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(995mg，2.348mmol)，且在室温下搅拌5小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)及盐水(1×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化来纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(二乙胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代pyrr o lidin-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯(化合物C219)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 745.3(M+H)+
实例167：化合物C220的合成
Figure GDA0003977862690005671
2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(500mg，0.74mmol)于THF(5mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(60.9mg，1.48mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 658.45[M+H]+
((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(350mg，0.531mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(302mg，0.796mmol)、DIPEA(0.27mL，1.59mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(172mg，0.796mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在4％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((2S)-1-((4-氰基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z767.55[M+H]+
((2S)-1-((4-胺基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C220)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-1-氧代己-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(4)(200mg，0.26mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(112mg，0.65mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时，且添加氨水(1mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-1-((4-胺基-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C220)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z685.2(M+H)+
实例168：化合物C221的合成
Figure GDA0003977862690005691
(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(3g，10.48mmol)于THF(15mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(800mg，20.97mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 273.20[M+H]+
((S)-1-(环丙烷磺酰胺基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)
在室温下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(1g，3.67mmol)于DCM中的搅拌溶液中添加CDI(1.1g，7.35mmol)，且在40℃下搅拌2小时。此后添加环丙烷磺酰胺(889mg，7.35mmol)、DBU(1.1mL，7.35mmol)，且搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。在减压下直接反应混合物。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在15％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(环丙烷磺酰胺基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(4)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 376.46(M+H)+
(S)-2-胺基-N-(环丙磺酰基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺盐酸盐(胺片段-29)
在0℃下向((S)-1-(环丙烷磺酰胺基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(4)(1.2g，3.2mmol)于1,4二
Figure GDA0003977862690005701
烷(10mL)中的搅拌溶液中添加逐滴含4N HCl的二噁烷(15mL)，且将混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到(S)-2-胺基-N-(环丙磺酰基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺盐酸盐(胺片段-29)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 276.21(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-(环丙烷磺酰胺基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C221)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-2)(150mg，0.442mmol)、DMF(6mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(126mg，0.663mmol)、HOBt(89mg，0.663mmol)、DIPEA(0.2mL，1.327mmol)及(S)-2-胺基-N-(环丙基磺酰基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺盐酸盐(胺片段-29)(165mg，0.530mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-(环丙烷磺酰胺基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C221)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 597.2[M+H]+
实例169：化合物C290及C229的合成
Figure GDA0003977862690005711
硝基环丁烷(2)
在室温下向溴环丁烷(1)(10g，74.07mmol)于DMSO(100mL)中的搅拌溶液中添加间苯三酚(9.3g，74.07mmol)，随后添加脲(8.88g，148.14mmol)、亚硝酸钠(25.5g，370.37mmol)，且将所得反应混合物在50℃下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用冰冷的水(150mL)淬灭，且用二乙醚(3×100mL)萃取，将经合并的有机层用水(150ml)、盐水溶液(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在最小减压下蒸发，得到2，将其直接用于下一步骤中。
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((1-硝基-环丁基)甲基)戊二酸二甲酯(3)
在室温下向以上粗液体于ACN(60mL)中的搅拌溶液中添加2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-亚甲基戊二酸二甲酯(Int-5)(5.5g，19.8mmol)及DBU(9mL，59.4mmol)，且继续搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。在减压下蒸发过量ACN。粗残余物将放入乙酸乙酯(200mL)中，且用水(150mL)及盐水溶液(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，蒸发，且将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((1-硝基-环丁基)甲基)戊二酸二甲酯(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 411.31[M+Na]+
2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙酸甲酯(4)
在-10℃下向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-4-((1-硝基-环丁基)甲基)戊二酸二甲酯(3)(5g，12.8mmol)于甲醇(50mL)中的搅拌溶液中添加氯化镍(1.67g，12.8mmol)，随后添加硼氢化钠(2.4g，64.4mmol)，且使其缓慢达到室温，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，且用DCM(3×100mL)萃取，将经合并的有机层用水(250mL)、随后盐水溶液(200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物，且将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙酸甲酯(4)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z349.25[M+Na]+
2-胺基-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-26)
在0℃下向2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙酸甲酯(4)(3g，9.2mmol)于1,4-二噁烷(30mL)中的搅拌溶液中添加4N二噁烷.HCl(30mL)，且将所得反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物在减压下蒸发。将粗残余物用正戊烷研磨，得到2-胺基-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-26)。TLC系统：10％M eOH/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 227.26[M+H]+
2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向(S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-2)(1.2g，3.53mmol)于DMF(12mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1g，5.309mmol)、HOBt(0.716g，5.309mmol)、DIPEA(1.88mL，10.617mmol)及2-胺基-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-26)(0.927g，3.539mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由正相色谱纯化，得到2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝548.40[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)
在0℃下向2-((S)-2-((((3-氯苯甲基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙酸甲酯(5)(1.2g，2.193mmol)于二氯甲烷(25mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.2mL，4.387mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 520.63[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C229)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(6)(150mg，0.289mmol)于乙酸乙酯(3mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(183mg，0.433mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由正相色谱纯化，得到((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C229)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 518.2[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)
向((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C229)(200mg，0.386mmol)溶解于DCM(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加吡啶(0.124mL，1.512mmol)、异氰基环丙烷(51mg，0.7736mmol)，随后添加TFA(0.06mL，0.7736mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl(2×30mL)、随后用水(20mL)及盐水(20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 603.39[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C290)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(7)(170mg，0.282mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(239mg，0.564mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C290)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.45LCMS(ESI)：m/z 601.53[M+H]+
实例170：化合物C224的合成
Figure GDA0003977862690005751
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(12g，20.869mmol)于二氯甲烷(120mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(20.8mL，41.739mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×100mL)萃取，经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝548.57[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2-PK-1、2-PK-2、2-PK-3、2-PK-4)的手性HPLC纯化
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(10g)的SFC纯化所用的制备型SFC条件，管柱/尺寸：CHIRALPAK-IA-3(4.6×250mm)，3μ％CO2：60％％共溶剂：40％(乙腈:IPA 1:1)，总流速：3.0g/min背压：1500Psi，温度：3℃UV：MAX PLOT溶解度：甲醇2-PK-1、2-PK-22-PK-32-PK-4.TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝548.57[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(1S,2S)-2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C224)
向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸(1S,2S)-2-(3-氯苯甲基)环戊酯(2-PK-1)(0.1g，0.182mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(0.155g，0.365mol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸(1S,2S)-2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C224)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z＝546.2[M+H]+
实例171：化合物C225的合成
Figure GDA0003977862690005771
((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C225)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((1-羟基-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲2-(3-氯苯甲基)环戊酯(1)(400mg，0.64mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(823mg，1.90mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-8-氧杂-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C225)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 616.3(M+H)+
实例172：化合物C226及C246的合成
Figure GDA0003977862690005781
((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(1)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙-1-醇(1)(2.5g，8.51mmol)于乙腈(25mL)中的搅拌溶液中添加Et3N(4.16mL，29.10mmol)、DSC(5.47g，21.01mmol)，且在室温下搅拌4小时。反应的进展藉由TLC监测。随后添加L-亮氨酸甲酯(2)(3.08g，21.01mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下蒸发，且用水(25mL)稀释，且用乙酸乙酯(25mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(1)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝488.23[M+Na+H]+
((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-57)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(1)(1.8g，3.80mmol)于THF(11mL)、水(7mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(325mg，7.74mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩为((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 474.2[M+Na+H]+
(2S)-2-((2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)(1g，2.0mmol)、DMF(10mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(633mg，3.31mmol)、HOBt(448mg，3.31mmol)、DIPEA(1.1mL，6.63mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(586mg，2.6mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在60％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 620.6[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸(2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(6)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(300mg，4.8mmol)于THF(5mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.48mL，0.96mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×15mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×15mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(6)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.2LC MS(ESI)：m/z 592.5(M+H)+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(5-氯环己-1,5-二烯-1-基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C246)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(6)(100mg，0.130mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(172mg，0.401mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×15mL)、饱和NaHCO3溶液(3×15mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(5-氯环己-1,5-二烯-1-基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C246)。TLC系统：乙酸乙酯Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 590.2(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(8)
在0℃下向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(5-氯环己-1,5-二烯-1-基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C246)(200mg，0.33mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(7)(45mg，0.67mmol)、吡啶(0.10mL，1.35mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，且添加TFA(0.055mL，0.67mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用1N HCl溶液(5mL)酸化，且用DCM(2×10mL)萃取。将有机层用盐水溶液(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。粗化合物得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(8)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 675.2[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C226)
向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(8)(200mg，0.29mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(314mg，0.74mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(15mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗产物藉由正相纯化来纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯(化合物C226)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 673.3(M+H)+
实例173：化合物C227及C233的合成
Figure GDA0003977862690005821
N-((2S)-1-((4-氯-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C227)
在0℃下向(4-甲氧基-1H-吲哚-2-羰基)-D-亮氨酸(酸片段-5)(600mg，1.973mmol)及3-(2-胺基-4-氯-3-氧代丁基)-1-氮杂螺[4.5]癸-2-酮盐酸盐(胺片段-19)(731.8mg，2.368mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(1.12g，2.959mmol)及DIPEA(1.1mL，5.921mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％甲醇及二氯甲烷洗脱，得到N-((2S)-1-((4-氯-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C227)。TLC系统：10％M eOH/DCM Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z 559.2[M+H]+
N-((2S)-1-((4-羟基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C233)
将N-((2S)-1-((4-氯-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C227)(540mg，0.9667mmol)、苯基乙醛酸(217.93mg，1.45mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液置于N2氛围下。此澄清浅黄色溶液用氟化铯(292.24mg，1.93mmol)处理，随后加热至65℃。4小时后，将现在为黄色的悬浮液冷却至室温，用乙酸乙酯(60mL)稀释，用水(30mL)洗涤三次，用盐水(30mL)洗涤一次，经MgSO4干燥，过滤，且浓缩，得到呈粗黄色泡沫状的粗2-氧代-2-苯基乙酸3-((S)-2-(4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)-4-甲基戊酰胺基)-2-氧代-4-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁酯。C37H44N4O8的MS(ESI+)m/z 673.7(M+H)+.将此粗产物放入甲醇(40mL)中，置于N2氛围下，且在剧烈搅拌下用碳酸铯(144.64mg，0.446mmol)处理。1小时后，在真空中去除挥发物(浴温<30℃)，得到粗产物。将粗化合物提交至制备型HPLC，得到N-((2S)-1-((4-羟基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C233)。TLC系统：10％MeOH/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 541.3[M+H]+
实例174：化合物C228的合成
Figure GDA0003977862690005841
2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸酯(1)
在0℃下向(S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酸(酸片段-34)(1g，3.183mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.91g，4.774mmol)、HOBt(0.645g，4.774mmol)、DIPEA(2mL，9.549mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-19)(1.2g，3.819mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝537.48[M+H]+
2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸
在室温下向2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸甲酯(1)(1.5mg，2.723mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(350mg，8.171mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 315.23[M+H]+
N-((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(4)
在0℃下向2-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙酸(2)(1.3g，2.425mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(1.4g，3.638mmol)、DIPEA(1.3mL，7.276mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(602mg，2.910mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到N-((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 646.47(M+H)+
3-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-2-氧代-4-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁酸(化合物C228)
在0℃下向N-((2S)-1-((4-氰基-3-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(4)(500mg，0.77mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加过硫酸氢钾(476mg，1.54mmol)，且在室温下搅拌6小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到3-((S)-3-环己基-2-(1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙酰胺基)-2-氧代-4-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁酸(化合物C228)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 565.2[M+H]+
实例175：化合物C230的合成
Figure GDA0003977862690005861
3-甲基-1-苯基丁-2-醇(3)
在-30℃下向2-苯基乙醛(166.6mL,333.3mmol)于THF(400mL)中的搅拌溶液中添加异丙基溴化镁(1)(8g，111.1mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(500mL)淬灭，且经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(2×200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到3-甲基-1-苯基丁-2-醇(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝147.1[M-OH]
(((3-甲基-1-苯基丁-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)
在0℃下向3-甲基-1-苯基丁-2-醇(3)(6.5g，39.5mmol)于DCM(300mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(19.5mL)、L-亮氨酸甲酯盐酸盐(4)(6.8g，47.4mmol)，随后添加三光气(5.84g，19.75mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1NHCl水溶液(100mL)淬灭，随后用DCM(2×50mL)萃取，用(2×50mL)NaHCO3溶液洗涤，有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到(((3-甲基-1-苯基丁-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝358.29[M+Na]+
(((3-甲基-1-苯基丁-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)
在室温下向(((3-甲基-1-苯基丁-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)(5.0g，14.9mmol)于THF(10mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.83,44.7mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(((3-甲基-1-苯基丁-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 344.39[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-4-甲基-2-((((3-甲基-1-苯基丁-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向(((3-甲基-1-苯基丁-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)(1g，3.11mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.89g，4.66mmol)、HOBt(0.629g，4.66mmol)、DIPEA(1.71mL，9.33mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(0.901g，3.7mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％甲醇及二氯甲烷洗脱，得到(2S)-2-((2S)-4-甲基-2-((((3-甲基-1-苯基丁-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z＝490.85[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-甲基-1-苯基丁-2-基酯(8)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-4-甲基-2-((((3-甲基-1-苯基丁-2-基)氧基)羰基)胺基)戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(0.8g，1.63mmol)于二氯甲烷(30mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(3.2mL，3.27mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-甲基-1-苯基丁-2-基酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 462.46[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸3-甲基-1-苯基丁-2-基酯(化合物C230)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸3-甲基-1-苯基丁-2-基酯(8)(300mg，0.644mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(551.1mg，1.229mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)及盐水(1×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物提交至制备型HPLC，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸3-甲基-1-苯基丁-2-基酯(化合物C230)。Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 460.2[M+H]+
实例176：化合物C231的合成
Figure GDA0003977862690005891
2,2-二甲基-1-苯基丙-1-醇(3)
在-30℃下向苯基溴化镁(2)(116mL，116.27mmol)于THF(100mL)中的搅拌溶液中添加三甲基乙醛(1)(5g，58.13mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combiflash NP纯化，化合物在8％乙酸乙酯/己烷下洗脱，得到2,2-二甲基-1-苯基丙-1-醇(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 147.06[M-OH]+
(2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(5)
在0℃下向2,2-二甲基-1-苯基丙-1-醇(3)(3g，18.29mmol)、(S)-2-胺基-3-环己基丙酸甲酯盐酸盐(4)(4.0g，21.94mmol)于二氯甲烷(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(9mL，3体积)，随后添加三光气(2.7g，9.14mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用DCM稀释，且用1N H Cl(50mL)洗涤，将有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，且经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到(2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z432.32[M+H]+
(2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸(6)
在室温下向(2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸甲酯(5)(6.0g，16.00mmol)于THF(15mL)、水(15mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.15g，48.00mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N H Cl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸(6)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 362.40[M+H]+
(2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向(2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酸(6)(2g，5.54mmol)、DMF(20mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(5.2g，13.85mmol)、DIPEA(2.6mL，16.62mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.23g，6.6mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash N P纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到(2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲基(甲酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z530.70[M+H]+
((2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)
在室温下向(2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(甲酯(7)(700mg，1.32mmol)于THF(10mL)、水(3mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(95mg，3.96mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 516.60[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2,2-二甲基-1-苯基丙酯(10)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-3-环己基-2-(((2,2-二甲基-1-苯基丙氧基)羰基)胺基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(8)(500mg，0.97mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(737mg，1.94mmol)、DIPEA(0.45mL，2.91mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(9)(500mg，2.42mmo l)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在3％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2,2-二甲基-1-苯基丙酯(10)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 625.91[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2,2-二甲基-1-苯基丙酯(化合物C231)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2,2-二甲基-1-苯基丙酯(10)(200mg，0.32mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(165mg，0.96mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。向此中添加氨水(2mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-3-环己基-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸2,2-二甲基-1-苯基丙酯(化合物C231)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4
实例177：化合物C232的合成
Figure GDA0003977862690005921
((S)-1-(甲氧基(甲基)胺基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(2)
在0℃下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(1)(5g，18.38mmol)于DMF(40mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(5.2g，27.53mmol)、HOBt(3.72g，27.53mmol)、NMM(5.56mL，55.14mmol)及N,O-二甲基羟基胺(2.13g，22.058mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((S)-1-(甲氧基(甲基)胺基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(2)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 316.30[M+H]+
((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)
在-78℃下向((S)-1-(甲氧基(甲基)胺基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(2)(1g，3.17mmol)于THF中的搅拌溶液中添加1M LAH(1.32mL，3.17mmol)，且搅拌30分钟。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.3
(S,E)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯(5)
在室温下向((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(3)(250mg，0.97mmol)、2-(三苯基-l5-膦酰亚胺)乙酸乙酯(348mg，0.976mmol)于THF(10mL)中的搅拌溶液中添加DBU(148mg，0.976mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到(S,E)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯(5)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 327.21(M+H)+
(S,E)-4-胺基-5-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯盐酸盐(胺片段-31)
在0℃下向(S,E)-4-((叔丁氧基羰基)胺基)-5-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯(5)(350mg，1.073mmol)于1,4二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中添加逐滴含4N HCl的二噁烷(5mL)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC监测。在减压下蒸发反应混合物，获得粗化合物，将所得粗产物用二乙醚研磨，得到(S,E)-4-胺基-5-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯盐酸盐(胺片段-31)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 227.30(M+H)+
(4S,E)-4-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-5-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯(化合物C232)
在0℃下向((1,2-二苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-22)(200mg，0.563mmol)于DMF(6mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(161mg，0.84mmol)、HOBt(114mg，0.84mmol)、DIPEA(0.2mL，1.68mmo l)及(S,E)-4-胺基-5-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯盐酸盐(胺片段-31))(152mg，0.675mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(20mL)稀释，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到(4S,E)-4-((2S)-2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-5-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯(化合物C232)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 564.3[M+H]+
实例178：化合物C234的合成
Figure GDA0003977862690005951
N-((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(1)
向甲基4-甲氧基-N-((2S)-4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C214)(350mg，0.686mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(69mg，1.02mmol)、吡啶(216mg，2.74mmol)，随后搅拌15分钟，随后在0℃下添加TFA(80mg，0.75mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl溶液(15mL)、随后盐水(15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗残余物。将此残余物用二乙醚(30mL)研磨，得到N-((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 596.63[M+H]+
N-((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C234)
向N-((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(1)(140mg，0.23mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(149mg，0.35mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物经由硅藻土床过滤，且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将过滤物用饱和海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗残余物藉由制备型HPLC纯化，得到N-((2S)-1-((4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1-氮杂螺[4.5]癸-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)-4-甲氧基-1H-吲哚-2-甲酰胺(化合物C234)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 594.3[M+H]+
实例179：化合物C237的合成
Figure GDA0003977862690005961
在-70℃下向环己烷甲醛(1)(10g，0.0998mmol)于THF(100mL)中的搅拌溶液中添加苯甲基溴化镁(2)(250mL，0.2496mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(500mL)淬灭，且经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(2×200mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到1-环己基-2-苯基乙-1-醇(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝187.2[M-OH]
((1-环己基-2-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)
在0℃下向1-环己基-2-苯基乙-1-醇(3)(6g，29.3mmol)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(18mL)、L-亮氨酸甲酯盐酸盐(4)(5.1g，35.1mmol)，随后添加三光气(4.4g，14.6mmol)添加，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1N HCl水溶液(100mL)淬灭，随后用DCM(2×50mL)萃取，用(2×50mL)NaHCO3溶液洗涤，有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到((1-环己基-2-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z＝398.35[M+Na]+
((1-环己基-2-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)
在室温下向((1-环己基-2-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(5)(2.5g，6.663mmol)于THF(10mL)、水(10mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(600mg，13.32mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(((3-甲基-1-苯基丁-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)。TLC系统：100％EtOAc Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 384.47[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((1-环己基-2-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃下向((1-环己基-2-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(6)(1g，2.7683mmol)于DMF(20mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.79g，4.1524mmol)、HOBt(0.561g，4.1524mmol)、DIPEA(1.6mL，8.3049mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(0.620g，3.3219mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％甲醇及二氯甲烷洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((1-环己基-2-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.6LCMS(ESI)：m/z＝530.7[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-环己基-2-苯基乙酯(8)
向(2S)-2-((2S)-2-(((1-环己基-2-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲基甲酯(7)(0.5g，0.944mmol)于二氯甲烷(30mL)中的搅拌溶液中在0℃下添加含2M LiBH4的THF(2mL，1.889mmol)，且搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-环己基-2-苯基乙酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 502.48[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-环己基-2-苯基乙酯(化合物C237)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1-环己基-2-苯基乙酯(8)(270mg，0.5385mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(685.1mg，1.6157mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)及盐水(1×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物提交至制备型HPLC，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1-环己基-2-苯基乙酯(化合物C237)。LCMS(ESI)：m/z 500.3[M+H]+
实例180：化合物C238的合成
Figure GDA0003977862690005991
2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)
在-30℃下向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(Int-3)(10g，54.945mmol)于THF(100mL)中的搅拌溶液中添加(4-氟苯基)溴化镁(54mL，109.89mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用饱和NH4Cl(100mL)淬灭，且经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(100mL)洗涤。将各层分离，且经硫酸钠干燥，随后在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝261.28[M-OH]
((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)
在0℃下向2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙-1-醇(2)(5g，17.985mmol)于DCM(30mL)中的搅拌溶液中缓慢添加吡啶(6mL)、L-亮氨酸甲酯(3)(4.3g，23.381mmol)，随后添加三光气(2.6g，8.992mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC监测。将反应混合物用1N HCl水溶液(100mL)淬灭，随后用DCM(2×50mL)萃取，用饱和NaHCO3溶液(2×50mL)洗涤，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用15％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲基甲酯(4)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝472.27[M+Na]+
((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(4)(3.6g，8.017mmol)于THF(20mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加LiOH.H2O(1g，24.051mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z＝458.23[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃下向((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(5)(1.4g，3.21mmol)于DMF(14mL)中的搅拌同时溶液中添加EDC.HCl(922mg，4.827mmol)、HOBt(651mg，4.827mmol)、DIPEA(1.4mL，9.654mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(718mg，3.862mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用80％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝604.65[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(7)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(300mg，0.497mmol)于DCM(5mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.5mL，0.995mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。随后将反应混合物用NH4Cl水溶液(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(2×20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(7)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 576.64(M+H)+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C238)
向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(7)(270mg，0.469mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加戴斯-马丁高碘烷(398mg，0.939mmol)，且在室温下搅拌3小时。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将过滤物用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物，此粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯(化合物C238)。TLC系统：10％甲醇/DCM Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 574.2(M+H)+
实例181：化合物C239的合成
Figure GDA0003977862690006021
((S)-1-(((S)-1-(环丙烷磺酰胺基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C239)
在0℃下向(((2-(3-氯苯甲基)环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-52)(250mg，0.681mmol)、DMF(6mL)的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(195mg，1.021mmol)、HOBt(137mg，1.021mmol)、DIPEA(0.3mL，2.043mmol)及(S)-2-胺基-N-(环丙磺酰基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺盐酸盐(胺片段-29)(254mg，0.817mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(30mL)稀释，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-1-(环丙烷磺酰胺基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯甲基)环戊酯(化合物C239)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 625.3[M+H]+
实例182：化合物C240的合成
Figure GDA0003977862690006031
(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)
在0℃下向(((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(酸片段-23)(1g，3.003mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(1.7g，4.504mmol)、DIPEA(2mL，9.009mmol)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(0.656g，3.603mmol)，且在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到粗化合物。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯及石油醚洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z＝502.94[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(700mg，1.39mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(190mg，4.1866mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷Rf：0.2LCMS(ESI)：m/z 488.38.31[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-((((2-苯甲基环戊基)氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(500mg，1.025mmol)、DCM(10mL)的搅拌溶液中同时添加HATU(584mg，1.538mmol)、DIPEA(1mL，3.076mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(255mg，1.23mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flashNP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 597.73(M+H)+
((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C240)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(4)(430mg，0.72mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(190mg，1.08mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。向此中添加氨水(5mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-胺基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-苯甲基环戊酯(化合物C240)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 515.2(M+H)+
实例183：化合物C272及C241的合成
Figure GDA0003977862690006051
(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-53)
在0℃下向(2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酸(酸片段-53)(2g，4.31mmol)于DMF(10mL)中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.2g，6.28mmol)、HOBT(872mg，6.45mmol)、DIPEA(6mL，3体积)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段2)(962mg，5.17mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 631.2(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(2)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(1.5g，2.37mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.37mL，4.75mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(2)。TLC系统：5％MeOH/DCM Rf 0.2LCMS(ESI)：m/z 604.2(M+H)+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C272)
在0℃下向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸酯(2)(500mg，0.82mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1g，2.48mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗产物。将其藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C272)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 602.2(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(4)
向((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C272)(350mg，0.69mmol)溶解于DCM(20mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(1mL，3体积)、异氰基环丙烷(3)(46mg，0.91mmol)，且搅拌10分钟。向此中在0℃下添加TFA(0.15mL，1.31mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×15mL)、盐水溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(4)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 687.4[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C241)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(4)(250mg，0.36mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(308mg，0.72mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×10mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C241)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 685.2(M+H)+
实例184：化合物C282及C242的合成
Figure GDA0003977862690006081
((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(2)
在0℃下向1,2-双(3-氯苯基)乙-1-醇(Int-3)(2.7g，10.11mmol)、L-亮氨酸甲酯(S)-甲酯HCl(2.2g，12.13mmol)于DCM(40mL)中的搅拌溶液中添加吡啶(8.5mL，3体积)，随后添加三光气(1.4g，4.72mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用2N HCl(50mL)淬灭，用DCM(2×40mL)萃取。将经合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash纯化，化合物在10％乙酸乙酯/石油醚下洗脱，得到((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(2)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 477.1[M+Na]+
((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(3)
在0℃下向((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(2)(2.5g，5.24mmol)于THF(20mL)、水(20mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.64g，15.72mmol)，且在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约3，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(3)。TLC系统：100％EtOAcRf：0.1LCMS(ESI)：m/z 423.1[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(4)
在0℃下向((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(3)(2g，4.728mmol)于DMF中的搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.35g，7.092mmol)、HOBT(957mg，7.092mmol)、DIPEA(4mL，3体积)及(S)-2-胺基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段2)(1.055g，5.673mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。16小时后，将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，将经合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由硅胶管柱纯化，藉由用50％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(4)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z591.9(M+Na)+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(5)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((1,2-双(3-氯苯基)乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(4)(1.5g，2.538mmol)于DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.53mL，5.076mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。2小时后，将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，且将经合并的有机层经Na2SO4干燥且浓缩将粗残余物藉由硅胶关注纯化，藉由用90％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯1,2-双(3-氯苯基)乙酯(5)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf 0.2LCMS(ESI)：m/z564.2(M+H)+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C282)
在0℃下向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯1,2-双(3-氯苯基)乙酯(5)(500mg，0.888mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.1g，2.66mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)、随后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，藉由制备型HPLC纯化粗产物，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C282)。TLC系统：5％甲醇/DCM Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 562.1(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(7)
向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)胺基)戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C282)(350mg，0.623mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下依序添加吡啶(1mL，3体积)、异氰基环丙烷(6)(61mg，0.91mmol)，且搅拌10分钟。在0℃下向此中添加TFA(0.14mL，2.49mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭，且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×15mL)、盐水溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(7)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 647.5[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C242)
在0℃下向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基胺基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(7)(200mg，0.309mmol)于EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(393mg，0.928mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×10mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基胺基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯(化合物C242)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 645.2(M+H)+
实例185：化合物C243的合成
Figure GDA0003977862690006111
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(1.2g，2.154mmol)于THF(10mL)、水(5mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(271mg，6.460mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物在减压下完全蒸馏，将粗化合物用1N HCl水溶液酸化直至pH为约2，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：100％乙酸乙酯Rf：0.1LCMS(ESI)：m/z 544.46[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)
在0℃下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)胺基)-4-甲基戊酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(800mg，1.472mmol)于DCM(10mL)中的搅拌溶液中同时添加HATU(618mg，2.209mmol)、DIPEA(0.81mL，4.418mmol)及1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(455mg，2.209mmol)，且在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(30mL)稀释，用二氯甲烷(2×25mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将粗残余物藉由combi-flash NP纯化，化合物在5％甲醇/二氯甲烷下洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 653.67[M+H]+
((S)-1-(((S)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(哌啶-1-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C243)
在0℃下向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1H-噻吩-1-亚基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(4)(350mg，0.535mmol)于甲醇(5mL)中的搅拌溶液中添加m-CPBA(185mg，1.071mmol)，且将反应混合物在0℃下搅拌2小时。向此中添加哌啶(4mL)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到粗化合物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(哌啶-1-基)丁-2-基)胺基)-4-甲基-1-氧代戊-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯(化合物C243)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.3LCMS(ESI)：m/z 639.2[M+H]+
实例186：化合物C244的合成
Figure GDA0003977862690006131
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)
向((2S)-3-环己基-1-((1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-氧代丙-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C198)(230mg，0.455mmol)溶解于DCM(10mL)的搅拌溶液中，在0℃下添加吡啶(1mL，4体积)、异氰基环丙烷(2)(45mg，0.682mmol)，随后添加TFA(0.13mL，1.09mmol)，且在室温下搅拌16小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl(2×15mL)、随后盐水(20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.5LCMS(ESI)：m/z 591.35[M+H]+
((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C244)
在0℃下向((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3-羟基-4-氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(2)(100mg，0.169mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(143mg，0.338mmol)，且在室温下搅拌3小时。反应的进展藉由TLC及LCMS监测。将反应混合物经由硅藻土垫过滤，且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将过滤物用海波溶液(3×20mL)、随后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到粗残余物。将粗化合物藉由制备型HPLC纯化，得到((2S)-3-环己基-1-((4-(环丙基胺基)-1-(5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-3,4-二氧代丁-2-基)胺基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸3-氯苯甲酯(化合物C244)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷Rf：0.4LCMS(ESI)：m/z 589.3[M+H]+
测试化合物活性
活体外抗病毒分析
诺如病毒抗病毒分析：
基于细胞的抗病毒剂分析：在携带诺沃克病毒复制子的细胞(HG23细胞)中检查抑制剂的抗病毒剂效应。简言之，将融合细胞和半融合细胞与含有DMSO(<0.1％)或每种化合物(至多100μM)的介质一起培育48小时。培育后，提取总RNA，且用实时定量RT-PCR(qRT-PCR)定量病毒基因组。EC50值由GraphPadPrism软件测定。除诺沃克病毒复制子外，还使用猫冠状病毒(feline coronavirus；FCoV)、MERS-CoV(中东呼吸道症候群相关冠状病毒)、SARS-CoV(严重急性呼吸道症候群相关冠状病毒)、人类冠状病毒229E、鼠类诺如病毒及人类鼻病毒来测定抑制剂的细胞病变效应(cytopathic effect；CPE)抗病毒活性。
病毒蛋白酶分析：藉由荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance EnergyTransfer；FRET)分析测定抑制剂的抗病毒剂活性。经纯化的病毒蛋白酶与蛋白酶基质肽(Edans-DFHLQ/GP-Dabcyl)及抑制剂一起培育，且IC50值随后藉由荧光信号测定。
诺如-诺沃克FRET蛋白酶分析在50mM HEPES-Na pH 8、50mM NaCl、0.4mM EDTA、4％丙三醇及6mM DTT中进行。自淬灭肽基质[5-FAM]-EPDFHLQGPEDLAKK-[TAMRA]藉由Anaspec定制合成。将化合物以3倍连续稀释稀释至200μM至10.2nM的最终浓度。视酶活性程度而定，添加诺如蛋白酶直至最终浓度为1-7μM，且添加肽基质直至最终浓度为10μM。将该分析在37℃下培育90分钟，且在Perkin Elmer Envision中读取，在473nm下进行激发，且在519nm下进行发射量测。
SARS2 FR ET蛋白酶分析在20m M H EPES-Na pH 7、120mM NaCl、0.4mM EDTA、0.01％Triton、5％丙三醇及4mM DTT中进行。自淬灭肽基质5-FAM-TSA VLQ S GF RK K(5TAMRA)-NH2藉由Anaspec定制合成。将化合物以3倍连续稀释稀释至20μM至1.0nM的最终浓度。视酶活性程度而定，添加SARS2蛋白酶直至最终浓度为25nM，且添加肽基质直至最终浓度为1.3μM。将该分析在30℃下培育30分钟，且在Perkin Elmer Envision中读取，在473nm下进行激发，且在519nm下进行发射量测。
诺如病毒蛋白酶抑制分析的结果呈现在下表D中。
表D
Figure GDA0003977862690006161
Figure GDA0003977862690006171
Figure GDA0003977862690006181
Figure GDA0003977862690006191
SARS-CoV-2蛋白酶抑制分析的结果呈现在下表E中。
表E
Figure GDA0003977862690006192
Figure GDA0003977862690006201
Figure GDA0003977862690006211
Figure GDA0003977862690006221
本文提供的所有参考文献以全文引用的方式并入本文中。如本文所用，所有缩写、符号及定则与当代科学文献中所用的缩写、符号及定则一致。参见例如Janet S.Dodd编，《ACS风格指南：作者及编辑手册(The ACS Style Guide:A Manual for Authors andEditors)》，第2版，华盛顿特区：美国化学学会(Washington,D.C.:American C hemicalSociety)，1997。
应理解，虽然本公开已结合其实施方式进行描述，但前述描述意欲说明且不限制本公开的范围，本公开的范围由权利要求的范围限定。其他方面、优势及修改都处在权利要求的范围内。

Claims (78)

1.一种具有式(I)的结构的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003880129570000011
其中
Z为O、NR1或键；
各RN独立地为H或C1-6烷基；
R1为任选经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-8碳环基、或5至8元N-杂环，其中环氮任选经COO-C1-6烷基取代；
R2为C1-6烷基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-10元杂环基、C1-6亚烷基-C6-10芳基、或C0-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基，其中C1-6亚烷基任选经1-3个R7取代，且该碳环基、杂环基、芳基及杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6卤基烷基、C1-6亚烷基-C6-10芳基、O-C1-6亚烷基-C6-10芳基及CO2C1-6烷基；
R3为C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、C0-6亚烷基-任选经1-2个卤基取代的C6-10芳基、或氨基酸侧链；
各R4独立地为卤基、OH、CN、C1-6烷基、C1-6卤基烷基、C1-6烷基-OH、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-6烷基氧基烷基、氧代(＝O)、NRASO2RB、SO2NRARB、COORA、C0-4亚烷基-C6-10芳基、C0-4亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-12元杂芳基、或C0-4亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环；且该芳基、杂芳基及杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基，或
两个R4与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合3-12元的碳环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C1-6亚烷基-O-C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基、SO2-C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基；
R5为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、-[C(O)]1-2-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环、-[C(O)]1-2-NRNRN、C(O)-Y-H或-[C(O)]1-2-NRN-Y-X-A，其中A为H、C3-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环、C6-10芳基、或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，且该碳环基、杂环基、芳基或杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基；
Y为键、C1-6亚烷基、C1-6亚烷基-O-C1-6亚烷基或C1-6亚烯基，其中C1-6亚烷基及C1-6亚烯基任选经1-3个独立地选自以下的取代基取代：卤基、OH、NRNRN及C1-6烷氧基；
X为键、NRNRN、C(O)、SO2或OC(O)；
各R6独立地为H、C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO、或C(O)-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环；
各R7独立地为卤基、C1-6卤基烷基、C2-6烯基、C3-5碳环基或C0-6亚烷基-C6-10芳基，且C6-10芳基任选经1-2个卤基取代，或
两个R7与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合C3-6碳环基环；
RA及RB各自独立地为H、C1-6烷基、C1-6卤基烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C0-6亚烷基-C6-10芳基、C0-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基；
n为0-3；
m为0-5；且
o为0-5。
2.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中各RN为H。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或盐，其中Z为NR1。
4.根据权利要求3所述的化合物或盐，其中R1为任选经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-8碳环基。
5.根据权利要求4所述的化合物或盐，其中R1为未经取代的C5-8碳环基。
6.根据权利要求5所述的化合物或盐，其中R1为未经取代的C5-6碳环基。
7.根据权利要求3所述的化合物或盐，其中R1为经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-8碳环基。
8.根据权利要求7所述的化合物或盐，其中R1为经C1-6亚烷基-C6-10芳基取代的C5-6碳环基。
9.根据权利要求7或8所述的化合物或盐，其中R1为经苯甲基取代的C5-6碳环基。
10.根据权利要求3所述的化合物或盐，其中R1为5至8元N-杂环，其中环氮经COO-C1-6烷基取代。
11.根据权利要求10所述的化合物或盐，其中R1为6元N-杂环，其中该环氮经COO-C1-6烷基取代。
12.根据权利要求10或11所述的化合物或盐，其中杂环氮经COO-叔丁基取代。
13.根据权利要求1或2所述的化合物或盐，其中Z为O。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或盐，其中R2为C1-6烷基。
15.根据权利要求12所述的化合物或盐，其中R2为甲基。
16.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或盐，其中R2为C1-6亚烷基-C6-10芳基。
17.根据权利要求16所述的化合物或盐，其中R2为苯甲基。
18.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或盐，其中R2为C1-6亚烷基-C5-8碳环基。
19.根据权利要求1至13中任一项所述的化合物或盐，其中R2为C1-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基。
20.根据权利要求16至19中任一项所述的化合物或盐，其中R2经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷氧基、C1-6烷基、C1-6卤烷基及CO2C1-6烷基。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物或盐，其中R3为C1-6烷基。
22.根据权利要求21所述的化合物或盐，其中R3为
Figure FDA0003880129570000041
23.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物或盐，其中R3为C1-6亚烷基-C5-8碳环基。
24.根据权利要求23所述的化合物或盐，其中R3为
Figure FDA0003880129570000051
25.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物或盐，其中R3为C2-6烯基或C2-6炔基。
26.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物或盐，其中R3为C0-6亚烷基-C6-10芳基。
27.根据权利要求1至20中任一项所述的化合物或盐，其中R3为氨基酸侧链。
28.根据权利要求27所述的化合物或盐，其中R3为甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、CH2CH2SCH3、CH2-吲哚基、苯甲基、CH2OH、CH(OH)CH3、CH2SH、CH2-(4-OH-苯基)、CH2C(O)NH2、CH2CH2C(O)NH2、CH2COOH、CH2CH2COOH、CH2CH2CH2CH2NH2、CH2CH2CH2NHC(NH)NH2或咪唑基。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的化合物或盐，其中n为0。
30.根据权利要求1至28中任一项所述的化合物或盐，其中n为1、2或3。
31.根据权利要求30所述的化合物或盐，其中n为1或2。
32.根据权利要求30或31所述的化合物或盐，其中各R4独立地为C1-6烷基、氧代(＝O)、C0-4亚烷基-C6-10芳基、C0-4亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-12元杂芳基或C0-4亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环；且该芳基、杂芳基及杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基。
33.根据权利要求30或31所述的化合物或盐，其中至少一个R4为卤基、OH、CN、C1-6卤烷基、C1-6烷基-OH、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基、C3-6烷基氧基烷基、NRASO2RB、SO2NRARB或COORA。
34.根据权利要求31所述的化合物或盐，其中n为2，且两个R4与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合5-12元的碳环或螺或稠合5-12元的具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基。
35.根据权利要求34所述的化合物或盐，其中两个R4与其所附接的碳一起组合形成螺5-12元的碳环或螺5-12元的具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基。
36.根据权利要求34所述的化合物或盐，其中两个R4与其所附接的碳一起组合形成稠合5-12元的碳环或稠合5-12元的具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的杂环，该碳环或杂环任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基、C(O)-C1-6烷基及COO-C1-6烷基。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的化合物或盐，其中R5为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、C(O)-(具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环)、CONRNRN、C(O)-C(O)N(RN)2、CHO或C(O)-C(O)NRN-Y-X-A，其中A为C3-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环、C6-10芳基或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，且该碳环基、杂环基、芳基或杂芳基任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的化合物或盐，其中Y为任选经1-3个独立地选自以下的取代基取代的C1-6亚烷基：卤基、OH、NRNRN及C1-6烷氧基。
39.根据权利要求1至38中任一项所述的化合物或盐，其中R2为C1-6烷基、C1-6亚烷基-C5-8碳环基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-10元杂环基、C1-6亚烷基-C6-10芳基、具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基、或C1-6亚烷基-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-10元杂芳基，其中C1-6亚烷基经1-3个R7取代。
40.根据权利要求39所述的化合物或盐，其中C1-6亚烷基经1个R7取代。
41.根据权利要求39所述的化合物或盐，其中C1-6亚烷基经2个R7取代。
42.根据权利要求39所述的化合物或盐，其中C1-6亚烷基经3个R7取代。
43.根据权利要求39至42中任一项所述的化合物或盐，其中至少一个R7为C0-6亚烷基-任选经1-2个卤基取代的C6-10芳基。
44.根据权利要求43所述的化合物或盐，其中至少一个R7为任选经1-2个卤基取代的苯基。
45.根据权利要求43或44所述的化合物或盐，其中至少一个R7为任选经1个卤基取代的苯基。
46.根据权利要求1至39、41及42中任一项所述的化合物或盐，其中两个R7与其所附接的一个或多个碳一起组合形成螺或稠合C3-6碳环基环。
47.根据权利要求46所述的化合物或盐，其中两个R7与其所附接的碳一起组合形成螺C3-6碳环基环。
48.根据权利要求46所述的化合物或盐，其中两个R7与其所附接的碳一起组合形成稠合C3-6碳环基环。
49.根据权利要求1至48中任一项所述的化合物或盐，其中o为0。
50.根据权利要求1至48中任一项所述的化合物或盐，其中o为1-5。
51.根据权利要求50所述的化合物或盐，其中o为1或2。
52.根据权利要求50或51所述的化合物或盐，其中各R6为H。
53.根据权利要求50或51所述的化合物或盐，其中至少一个R6为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO、或C(O)-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环。
54.根据权利要求1至53中任一项所述的化合物或盐，其中m为0。
55.根据权利要求1至53中任一项所述的化合物或盐，其中m为1。
56.根据权利要求1至53中任一项所述的化合物或盐，其中m为2。
57.根据权利要求1至56中任一项所述的化合物或盐，其中R5为C1-6亚烷基-OH、经PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、经SO3H取代的C1-6亚烷基-OH、CHO、C(O)-具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-8元杂环或CONRNRN。
58.根据权利要求1至56中任一项所述的化合物或盐，其中R5为C(O)-C(O)NRN-Y-X-A。
59.根据权利要求58所述的化合物或盐，其中Y为C1-6亚烷基。
60.根据权利要求58或59所述的化合物或盐，其中X为键。
61.根据权利要求58或59所述的化合物或盐，其中X为NRNRN、C(O)、SO2或OC(O)。
62.根据权利要求58至61中任一项所述的化合物或盐，其中A为C5-8碳环基或C6-10芳基，且任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基。
63.根据权利要求58至61中任一项所述的化合物或盐，其中A为具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的4-12元杂环或具有1-3个选自N、O及S的环杂原子的5-8元杂芳基，任选经1-2个独立地选自以下的取代基取代：卤基、C1-6烷基及COO-C1-6烷基。
64.根据权利要求63所述的化合物或盐，其中A包括吡啶基。
65.一种如表A中所示的化合物或其药学上可接受的盐。
66.一种如表B中所示的化合物或其药学上可接受的盐。
67.一种药物制剂，其包括根据权利要求1至66中任一项所述的化合物或盐以及药学上可接受的赋形剂。
68.一种用于治疗或预防宿主的病毒感染的方法，其包括向该宿主给与治疗量的根据权利要求1至66中任一项所述的化合物或盐。
69.根据权利要求68所述的方法，其中该病毒感染为冠状病毒感染、杯状病毒感染或小核糖核酸病毒感染。
70.根据权利要求69所述的方法，其中该病毒感染为杯状病毒感染。
71.根据权利要求70所述的方法，其中该杯状病毒感染为诺如病毒(norovirus)感染。
72.根据权利要求69所述的方法，其中该病毒感染为冠状病毒感染。
73.根据权利要求72所述的方法，其中该冠状病毒感染为严重急性呼吸道症候群、中东呼吸道症候群或冠状病毒疾病2019。
74.根据权利要求69所述的方法，其中该病毒感染为小核糖核酸病毒感染。
75.根据权利要求74所述的方法，其中该小核糖核酸病毒感染为鼻病毒感染。
76.根据权利要求75所述的方法，其中该鼻病毒感染为鼻病毒A、鼻病毒B或鼻病毒C感染。
77.根据权利要求72所述的方法，其中该冠状病毒为α冠状病毒。
78.根据权利要求72所述的方法，其中该冠状病毒为β冠状病毒。
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