CN115581762A - 一种用于清除hpv病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶的制备方法，以重组Ⅲ型人源化胶原蛋白和酸酐化牛β‑乳球蛋白为主要的药效成分，卡波姆、甘油和羟苯甲酯为辅料，优选合理配比，提高凝胶在阴道内壁的附着效果，提高凝胶的生物利用度，有效避免由于阴道内分泌物过多导致凝胶使用效果差等问题。
Description
技术领域
本发明涉及抗HPV生物蛋白功能敷料领域，特别涉及抗HPV生物蛋白功能敷料的制备方法。
背景技术
HPV病毒是人类乳头瘤病毒的缩写，是一种乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒感染引起的一种性传播疾病。HPV病毒常见的感染区域为人类表皮和粘膜鳞状上皮。HPV感染途径主要有以下5种：性传播途径；密切接触；间接接触:通过接触感染者的衣物、生活用品、用具等；医源性感染:医务人员在治疗护理时防护不好，造成自身感染或通过医务人员传给患者；母婴传播:是由婴儿通过孕妇产道的密切接触。
目前HPV病毒的药物主要为a型干扰素和咪喹莫特霜，a型干扰素作为抗病毒剂，它可以促进细胞产生抗病毒蛋白，进而对HPV病毒的增殖进行抑制，但是a型干扰素的使用存在着发热恶心、骨髓抑制、白细胞降低等副作用，咪喹莫特霜是一种免疫调节剂，其见效时间缓慢，但是咪喹莫特霜具有一定的刺激性，长期使用容易导致皮肤出现浅糜烂面。上述药物对人体均会造成一定的不良反应，因此，需要一种无刺激、无不良反应的修复凝胶用于清除HPV病毒。
发明内容
鉴以此，本发明提出用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶及其制备方法，解决上述问题。
一种用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶，按重量百分计，包括0.5-2％卡波姆、0.1-1％酸酐化牛β-乳球蛋白、2-10％甘油、0.1-1％重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、0.1-0.5％羟苯甲酯和余量水。
进一步的，按重量百分计，包括0.8-1.2％卡波姆、0.4-0.6％酸酐化牛β-乳球蛋白、5.0-8.0％甘油、0.4-0.6％重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、0.12-0.18％羟苯甲酯和余量水。
进一步的，制备方法包括以下步骤：
(1)将卡波姆、甘油、羟苯甲酯和部分水混合，制得组分A。
(2)将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、酸酐化牛β-乳球蛋白加入余量水中，制得组分B；
(3)将组分A、组分B和混合，制得成品。
进一步的，步骤(1)中，所述部分水用量为总量的70-80％，将卡波姆、甘油和水混合，使用200-800r/min搅拌10-15min，搅拌温度为50-90℃，静置1-4h，制得组分A。
进一步的，步骤(2)中，使用100-300r/min搅拌20-30min，搅拌温度为25-42℃。
进一步的，步骤(3)中，所述将组分A和组分B混合，使用200-500r/min搅拌30-60min。
本发明的有益效果为：
本发明中以重组Ⅲ型人源化胶原蛋白和酸酐化牛β-乳球蛋白为主要的药效成分，酸酐化牛β-乳球蛋白与HPV衣壳蛋白的L1区的C端和L2区的N端的正电荷区域相结合，阻断病毒侵入宿主细胞内的过程，从而达到阻断HPV感染的目。通过试验验证，本发明中重组Ⅲ型人源化胶原蛋白和酸酐化牛β-乳球蛋白结合，能够抑制阴道内有害菌的繁殖生长，能够维稳阴道内的生态环境。本发明中以卡波姆、甘油和羟苯甲酯为辅料，优选合理配比，提高凝胶在阴道内壁的附着效果，提高凝胶的生物利用度，有效避免由于阴道内分泌物过多导致凝胶使用效果差等问题。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶的制备方法
1、按重量百分计，称取1％卡波姆、0.5％酸酐化牛β-乳球蛋白、5％甘油、0.5％重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、0.3％羟苯甲酯和余量水。
2、将卡波姆、甘油、羟苯甲酯和部分水混合，所述部分水用量为总量的75％，将卡波姆、甘油和水混合，使用500r/min搅拌15min，搅拌温度为70℃，静置1.5h，制得组分A；
3、将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、酸酐化牛β-乳球蛋白加入余量水中，使用200r/min搅拌25min，搅拌温度为25℃，制得组分B；
4、将组分A、组分B和混合，用350r/min搅拌55min，制得成品。
试验例1MTT法检测HeLa细胞增殖抑制率
将实施例1制得的成品检测细胞增值抑制率
试验方法：取对数生长期的HeLa细胞制成单细胞悬液，调整细胞浓度为1×104/mL，接种于96孔板中，每孔200μL；将实施例1稀释成浓度为0.1mg/mL的药液，实验组1-5设立4个复孔，同时设立不加药物的对照组；在37℃、浓度为5％CO2；条件下培养24、48、72h，加入20μLMTT溶液(5mg/mL)，孵育4h，加入150μLDMSO，振荡10min。用酶标仪测定570nm波长处的吸光度(A)，计算细胞抑制率。
细胞抑制率＝1-(A药物组/A对照组)
| 名称 | 细胞抑制率(％) |
| 实验组1 | 25.47 |
实验结果表明，本发明的成品对HeLa细胞有很好的效果。
对比例1用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶的制备方法
1、按重量百分计，称取1％卡波姆、0.5％酸酐化牛β-乳球蛋白、5％甘油、、0.3％羟苯甲酯和余量水。
2、将卡波姆、甘油、羟苯甲酯和部分水混合，所述部分水用量为总量的75％，将卡波姆、甘油和水混合，使用500r/min搅拌15min，搅拌温度为70℃，静置1.5h，制得组分A；
3、将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、酸酐化牛β-乳球蛋白加入余量水中，使用200r/min搅拌25min，搅拌温度为25℃，制得组分B；
4、将组分A、组分B和混合，用350r/min搅拌55min，制得成品。
试验例2抑菌效果试验
将实施例1和对比例1制得的成品进行试验，实验过程为：用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，浓度为106cfu/ml，振荡，过滤后分别制成黄金色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌菌悬液，向各个灭菌培养皿中注入菌悬浮液1mL，加入20ml熔化状琼脂培养基，混合均匀；采用牛津杯法，在每个牛津杯中分别注入100ul医用生物蛋白修复凝胶，以生理盐水作为对照，在37℃培养72h，观察并记录抑菌圈的直径。
| 名称 | 黄金色葡萄球菌(mm) | 大肠杆菌(mm) | 白色念珠菌mm) |
| 实施例1 | 30.5 | 28.4 | 35.7 |
| 对比例1 | 22.8 | 24.9 | 27.5 |
实验结果表明，本发明中使用酸酐化牛β-乳球蛋白和重组Ⅲ型人源化胶原蛋白结合制备清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶，不仅仅具有抑制宫颈癌细胞生长的效果，还具有抑制黄金色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等有害菌生长的作用，维持阴道菌群稳定，防止炎症产生。
实施例2用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶的制备方法
1、按重量百分计，称取0.5％卡波姆、0.1％酸酐化牛β-乳球蛋白、2％甘油、0.1％重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、0.1％羟苯甲酯和余量水。
2、将卡波姆、甘油、羟苯甲酯和部分水混合，所述部分水用量为总量的70％，将卡波姆、甘油和水混合，使用200r/min搅拌10min，搅拌温度为50℃，静置1h，制得组分A。
3、将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、酸酐化牛β-乳球蛋白加入余量水中，使用100r/min搅拌20min，搅拌温度为25℃，制得组分B；
4、将组分A、组分B和混合，用200r/min搅拌30min，制得成品。
实施例3用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶的制备方法
1、按重量百分计，称取2％卡波姆、1％酸酐化牛β-乳球蛋白、10％甘油、1％重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、0.5％羟苯甲酯和余量水。
2、将卡波姆、甘油、羟苯甲酯和部分水混合，所述部分水用量为总量的80％，将卡波姆、甘油和水混合，使用800r/min搅拌15min，搅拌温度为90℃，静置4h，制得组分A。
3、将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、酸酐化牛β-乳球蛋白加入余量水中，使用300r/min搅拌30min，搅拌温度为42℃，制得组分B；
4、将组分A、组分B和混合，用500r/min搅拌60min，制得成品。
对比例2
1、按重量百分计，称取1％卡波姆、0.5％酸酐化牛β-乳球蛋白、5％甘油、0.5％重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、0.3％羟苯甲酯和余量水。
2、将卡波姆、甘油、羟苯甲酯和部分水混合，所述部分水用量为总量的75％，将卡波姆、甘油和水混合，使用500r/min搅拌15min，搅拌温度为70℃，制得组分A；
3、将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、酸酐化牛β-乳球蛋白加入余量水中，使用200r/min搅拌25min，搅拌温度为25℃，制得组分B；
4、将组分A、组分B和混合，用350r/min搅拌55min，制得成品。
对比例3
1、按重量百分计，称取3％卡波姆、0.5％酸酐化牛β-乳球蛋白、15％甘油、0.5％重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、0.3％羟苯甲酯和余量水。
2、将卡波姆、甘油、羟苯甲酯和部分水混合，所述部分水用量为总量的75％，将卡波姆、甘油和水混合，使用500r/min搅拌15min，搅拌温度为70℃，静置1.5h，制得组分A；
3、将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、酸酐化牛β-乳球蛋白加入余量水中，使用200r/min搅拌25min，搅拌温度为25℃，制得组分B；
4、将组分A、组分B和混合，用350r/min搅拌55min，制得成品。
试验例3粘度试验
将实施例4-6和对比例4-5用实施例3制得的酸酐化牛β-乳球蛋白进行制备医用生物蛋白修复凝胶，制得的医用生物蛋白修复凝胶使用粘度剂检测粘度。
| 名称 | 粘度(Pa.s) |
| 实施例1 | 161.5 |
| 实施例2 | 160.1 |
| 实施例3 | 162.5 |
| 对比例2 | 135.1 |
| 对比例3 | 101.6 |
实验结果表明本发明的制备方法和组分用量能够提高凝胶粘度，提高医用生物蛋白修复凝胶在阴道的附着力，进一步提高凝胶的药效时间。对比例2改变制备方法，各组分混合效果变差，导致凝胶的粘度下降，对比例3改变凝胶组分，凝胶各组分结合效果下降，进一步导致粘度下降。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶，其特征在于，按重量百分计，包括0.5-2.0％卡波姆、0.1-1％酸酐化牛β-乳球蛋白、2-10％甘油、0.1-1％重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、0.1-0.5％羟苯甲酯和余量水。
2.如权利要求1所述的用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶，其特征在于，按重量百分计，包括0.8-1.2％卡波姆、0.4-0.6％酸酐化牛β-乳球蛋白、5.0-8.0％甘油、0.4-0.6％重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、0.12-0.18％羟苯甲酯和余量水。
3.如权利要求1所述的用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶，其特征在于，制备方法包括以下步骤：
(1)将卡波姆、甘油、羟苯甲酯和部分水混合，制得组分A。
(2)将重组Ⅲ型人源化胶原蛋白、酸酐化牛β-乳球蛋白加入余量水中，制得组分B；
(3)将组分A、组分B混合，制得成品。
4.如权利要求3所述的用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶，其特征在于，步骤(1)中，所述部分水用量为总量的70-80％，将卡波姆、甘油和水混合，使用200-800r/min搅拌10-15min，搅拌温度为50-90℃，静置1-4h，制得组分A。
5.如权利要求3所述的用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶，其特征在于，步骤(2)中，使用100-300r/min搅拌20-30min，搅拌温度为25-42℃。
6.如权利要3所述的用于清除HPV病毒感染的医用生物蛋白修复凝胶，其特征在于，步骤(3)中，所述将组分A和组分B混合，使用200-500r/min搅拌30-60min。
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