CN115572318A

CN115572318A - 一种知母寡糖的制备方法和在化妆品中的应用

Info

Publication number: CN115572318A
Application number: CN202211298390.6A
Authority: CN
Inventors: 陈艳莉; 高羽
Original assignee: Aishengze Shanghai Biotechnology Co ltd
Current assignee: Aishengze Shanghai Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-10-23
Filing date: 2022-10-23
Publication date: 2023-01-06
Anticipated expiration: 2042-10-23
Also published as: CN115572318B

Abstract

本发明公开一种知母寡糖的制备方法和在化妆品中的应用，步骤1、知母药材乙醇回流2次，提取2小时，弃滤液药渣晾干，药渣加10倍量水水煎煮2次，提取各2小时，合并滤液。步骤2、减压浓缩水提液至生药浓度1g/mL，加95％乙醇至含醇量80％，静置6h，离心10min，减压回收上清液中乙醇，同法醇沉，重复1次。步骤3、合并沉淀70～75℃烘干，粉碎，加30～50倍50～65％醋酸超声至全部溶解，115～130℃回流3～7h，冷却后离心10～15min，收集上清液。步骤4、加95％乙醇至含醇量达80％，静置5～8h，离心10～15min；收集沉淀，90～95％乙醇洗至中性，置70～75℃烘干，粉碎过筛。

Description

一种知母寡糖的制备方法和在化妆品中的应用

技术领域

本发明属于化妆品领域，具体涉及一种知母寡糖的制备方法和在化妆品中的应用。

背景技术

皮肤衰老主要是皮肤自然老化与光老化的结果，造成皮肤胶原蛋白迅速降解、导致皮肤弹性下降或消失，从而皮肤出现皱纹、色素沉着、毛细血管扩张等。现代医学认为皮肤衰老是应激和劳损、损伤和感染、免疫反应衰退、营养失调、代谢障碍以及疏忽和滥用药物积累的结果，由此得出自由基理论、线粒体理论、遗传理论以及器官水平理论等，其中自由基伤害是皮肤衰老的主要因素之一己被普遍接受。自由基理论认为皮肤衰老是因为体内产生过氧化的自由基，使机体内自由基处于不平衡状态，过量自由基引起机体损伤，当损伤不能被机体所修复时，会导致细胞分化状态的改变、丧失、引起老化。导致体内自由基过多的因素主要有两个方面，自身因素和外界因素。自身因素是指人体在自然衰老过程中，自由基清除能力下降、机体内分泌失调、免疫功能下降等产生过量的自由基；外界因素是指由紫外线、辐射、压力过大、精神紧张、烟酒刺激及环境恶劣等外界刺激，导致机体内自由基代谢失衡，体内自由基过多。

从美容角度来讲，人们美化皮肤、延缓皮肤衰老以及对抗皮肤衰老，一直是大众普遍的需求，也越来越受重视。近年来，消费者更注重护肤品成分的安全性、功效性及更多个性化的需求，而以作用温和、安全低刺激又具有一定功效的中草药提取物作为天然物添加剂应用于化妆品中已经成为新产品开发的热点。

知母(Centella asiatica(L.)Urb.)为伞形科植物知母的干燥全草，应用历史悠久，资源丰富。现代医学研究表明知母有抗抑郁、促进伤口愈合、治疗瘢痕、抗肿瘤、抗胃溃疡、抗菌、抗氧化等生理功效。以往对知母的药效研究主要集中在皂苷类和黄酮类等成分上，然而知母中含有最多的成分为多糖组分，多糖是知母的重要物质组成。近年来国内外学者也开始对知母多糖进行了深入研究，结果发现知母多糖具有明显的降血糖作用、抗炎作用和抗氧化的功能。但是由于多糖类物质具有粘度大、分子量大、结构复杂、溶解性差、不利于人体吸收利用等缺点，所以其应用范围很狭窄。研究表明，通过化学法、物理法或酶法破坏多糖糖苷键制备得到寡糖，与多糖相比，寡糖不仅溶解性好，而且有着更好的生物活性，易于被机体吸收利用等优势，可以说具有更广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种知母寡糖在化妆品中的应用，其具有良好的抗氧化活性，可以应用在相关化妆品中。

本发明的另一个目的是提供一种上述知母寡糖的制备方法。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种知母寡糖的制备方法，包括如下步骤：

步骤(1)、取知母药材，用乙醇回流2次，每次加8倍量80％乙醇，提取时间各2小时，弃去滤液，药渣晾干，晾干后的药渣加水煎煮2次，每次加10倍量水，提取时间各2小时，过滤，合并滤液。

步骤(2)、减压浓缩水提液至生药浓度1g/mL，边搅拌边缓缓加入95％乙醇至含醇量达80％，静置6h后，离心10min(转速为4000r/min)，减压回收上清液中的乙醇，沉淀用水溶解，同法醇沉，重复1次。

步骤(3)、合并2次醇沉后的沉淀置70～75℃烘干，粉碎，粉末加30～50倍量50～65％醋酸超声至全部溶解，115～130℃回流3～7h，冷却后离心10～15min(4000～4500r/min)，收集上清液。

步骤(4)、边搅拌上清液，边缓缓加入95％乙醇至含醇量达80％，静置5～8h后，离心10～15min(4000～4500r/min)；收集沉淀，沉淀用90～95％乙醇洗至中性，置70～75℃烘干，粉碎过筛，即得知母寡糖。

其中。所述过筛的目数为55—65目。

通过上述方法制备得到的知母寡糖，活性测试结果表明具有良好的抗氧化作用，可以作为抗氧化剂用于化妆品的制备中。

本发明进一步提供一种知母寡糖在化妆品中的应用，所述化妆品包括采用上述方法提取得到的知母寡糖提取物及辅料。

其中，所述的化妆品中知母寡糖浓度为2mg/ml～4mg/ml。

其中，所述的知母寡糖用于作为化妆品中的抗氧化剂。

本发明一种知母寡糖的制备方法和在化妆品中的应用，优点在于：(1)本发明的知母寡糖制备方法具有工艺简单、加工成本低、易于实现工业化等特点。(2)知母多糖由于分子量大、结构复杂、溶解性差的缺点，不利于人体吸收利用进而影响活性的发挥。本发明采用常规的水提取知母多糖完全，经过高温酸水解大分子多糖，某些糖苷断裂后，再经纯化得到活性更强的小分子知母寡糖。(3)本发明的知母寡糖具有显著的抗氧化活性，对DPPH自由基的清除达92.35％，对ABTS自由基清除率高达94.06％，可作为天然抗氧化剂应用于抗氧化效果的化妆品中。

附图说明

图1不同质量浓度知母寡糖对DPPH自由基的清除能力

图2不同质量浓度知母寡糖对ABTS自由基的清除能力

图3不同质量浓度知母寡糖的总抗氧化能力

具体实施方式

下面通过具体的实施例详细介绍本发明实质性内容，但不能以此限定本发明的保护范围。

实施例1：知母寡糖的制备

取知母药材，用80％乙醇回流2次，每次加8倍量80％乙醇，提取时间各2小时，弃去滤液，药渣晾干，晾干后的药渣加水煎煮2次，每次加10倍量水，提取时间各2小时，滤过，合并滤液。减压浓缩水提液至生药浓度1g/mL，边搅拌边缓缓加入95％乙醇至含醇量达80％，静置6h后，离心10min(转速为4000r/min)，减压回收上清液中的乙醇，沉淀物用水溶解，同法醇沉，重复1次。合并2次醇沉后的沉淀置75℃烘箱烘干，粉碎，粉末加40倍量60％醋酸超声至全部溶解，120℃回流5h，冷却后离心15min(4500r/min)，收集上清液。边搅拌上清液，边缓缓加入95％乙醇至含醇量达80％，静置6h后，离心15min(4500r/min)；收集沉淀，沉淀物用95％乙醇洗至中性，置75℃烘箱烘干，粉碎过筛，即得知母寡糖。

实施例2：知母多糖的制备

取知母药材，用80％乙醇回流2次，每次加8倍量80％乙醇，提取时间各2小时，弃去滤液，药渣晾干，晾干后的药渣加水煎煮2次，每次加10倍量水，提取时间各2小时，滤过，合并滤液。减压浓缩水提液至生药浓度1g/mL，边搅拌边缓缓加入95％乙醇至含醇量达80％，静置6h后，离心10min(转速为4000r/min)，沉淀物用水溶解，同法醇沉，重复1次。收集沉淀物，置75℃烘箱烘干，粉碎过筛，即得知母多糖。

本实施例为知母多糖常规制备工艺。用于以下与本发明方法所制备的知母寡糖进行活性对比。

实施例3：知母寡糖的抗氧化活性测定(DPPH清除实验)

采用DPPH法测定实施例1制得的知母寡糖和实施例2制得的知母多糖清除自由基活性。测定步骤为：将实施例1制得的知母寡糖样品用去离子水配制成0.5、1和2mg/ml的溶液，另将实施例2制得的知母多糖样品用去离子水配制成0.5和2mg/ml的溶液。精密吸取各浓度样品溶液100μL和0.1mmol/L的DPPH溶液100μL为实验组，对照组用100μL无水乙醇代替DPPH溶液，以加入100μL DPPH溶液和100μL无水乙醇为标准组，避光反应30min，之后用酶标仪在517nm下测定吸光度。由下式计算清除率：DPPH清除率＝[1-(A实验组-A对照组)/A标准组]×100％(1)，结果见表1和图1。

表1DPPH法自由基清除活性的测定结果

实施例3：知母寡糖的抗氧化活性测定(ABTS法)

采用ABTS法测定实施例1制得的知母寡糖和实施例2制得的知母多糖抗氧化活性。测定步骤为：ABTS+·储备液配制方法如下：配制2.45mmol/L过硫酸钾溶液，用过硫酸钾溶液溶解ABTS粉末，配成7mmol/L ABTS+·储备液，避光、于4℃冰箱中保存备用。ABTS+·测定液配制方法如下：将ABTS+·储备液以10mmol/L磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)稀释至吸光度为0.7±0.02(734nm)。将实施例1制得的知母寡糖样品用去离子水配制成1、2和4mg/ml的溶液，另将实施例2制得的知母多糖样品用去离子水配制成2mg/ml的溶液。取0.2mL样品加入2.8mL ABTS+·测定液，混合，放置10min后，在734nm处测定吸光度(A_i)。每份样品平行操作3次。以蒸馏水代替ABTS+·测定液测吸光度A_j，以蒸馏水代替样品溶液测得吸光度A₀。将数据代入下式进行计算，得到各样品的ABTS自由基清除率：ABTS自由基清除率(％)＝[1-(A_i-A_j)/A₀]×100，结果见表2和图2。

表2ABTS法抗氧化活性测定结果

实施例5：知母寡糖的抗氧化活性测定(FRAP法测定总抗氧化值)

采用FRAP法测定实施例1制得的知母寡糖和实施例2制得的知母多糖总抗氧化值。测定步骤为：三吡啶基三嗪TPTZ工作液的配制方法如下300mmol/L(pH＝3.6)的醋酸缓冲液：10mmol/L的TPTZ溶液：20mmol/L的FeCl₃＝10:1:1，现用现配。将实施例1制得的知母寡糖样品用去离子水配制成1、2和4mg/ml的溶液，另将实施例2制得的知母多糖样品用去离子水配制成2mg/ml的溶液。各样品溶液，移液器取100μL，加入FRAP工作液3mL，混匀37℃孵育30min后，于593nm处读取吸光度。以FeSO₄为标准物质绘制标准曲线，配制1mmol/L的FeSO₄的溶液，稀释成浓度为0.2、0.4、0.6、0.8mmol/L的梯度溶液，求得回归方程，样品的抗氧化能力以FRAP值表示：1FRAP单位＝1mmol/FeSO₄，即样品的抗氧化能力相当于FeSO₄的mmol/L数，结果见表3和图3。

表3FRAP法测定总抗氧化值的实验结果

综合上述实施例可知，与知母多糖相比，知母寡糖的各项抗氧化活性测试指标显著升高，表明经进一步制备成知母寡糖后，其抗氧化作用得到了显著提高；当知母寡糖浓度为2mg/ml时，对DPPH自由基的清除率为92.35％；在浓度为4mg/ml下，对ABTS自由基的清除率为94.06％，总抗氧化能力为0.45，表明其具有良好的抗氧化能力，因此可作为天然抗氧化剂应用于抗氧化效果的化妆品中。

以上所述为本发明的较佳实施例而已，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。

Claims

1.一种知母寡糖的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

步骤(1)、取知母药材，用乙醇回流2次，每次加8倍量80％乙醇，提取时间各2小时，弃去滤液，药渣晾干，晾干后的药渣加水煎煮2次，每次加10倍量水，提取时间各2小时，过滤，合并滤液；

步骤(2)、减压浓缩水提液至生药浓度1g/mL，边搅拌边缓缓加入95％乙醇至含醇量达80％，静置6h后，离心10min，减压回收上清液中的乙醇，沉淀用水溶解，同法醇沉，重复1次；

步骤(3)、合并2次醇沉后的沉淀置70～75℃烘干，粉碎，粉末加30～50倍量50～65％醋酸超声至全部溶解，115～130℃回流3～7h，冷却后离心10～15min，收集上清液；

步骤(4)、边搅拌上清液，边缓缓加入95％乙醇至含醇量达80％，静置5～8h后，离心10～15min；收集沉淀，沉淀用90～95％乙醇洗至中性，置70～75℃烘干，粉碎过筛，即得知母寡糖。

2.根据权利要求1所述的一种知母寡糖的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中离心的速度为4000r/min。

3.根据权利要求1所述的一种知母寡糖的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)及步骤(4)中离心的速度为4000～4500r/min。

4.根据权利要求1所述的一种知母寡糖的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中过筛的目数为55—65目。

5.一种知母寡糖在化妆品中的应用，其特征在于：所述化妆品包括采用如权利要求1-4中任意一项所述方法提取得到的知母寡糖提取物及辅料。

6.根据权利要求5所述的一种知母寡糖在化妆品中的应用，其特征在于：所述的化妆品中知母寡糖浓度为2mg/ml～4mg/ml。

7.根据权利要求5所述的一种知母寡糖在化妆品中的应用，其特征在于：所述的知母寡糖用于作为化妆品中的抗氧化剂。