CN115010820A - 牛蒡多糖的提取及其优化方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种牛蒡多糖的提取及其优化方法，该提取方法为热水浸提法，具体为牛蒡切片、烘干打粉后经脱脂处理，而后通过对料液比、提取温度、提取时间的优化，使牛蒡多糖的得率有所提高。优化方法中回归模型实际值与理论值较为接近，表明该回归模型能够很好地反映料液比、提取温度、提取时间对牛蒡多糖得率的影响，证明了该方法提取牛蒡多糖的可行性。本发明运用热水浸提法提取牛蒡多糖，提高其多糖的提取率，且操作简单，适合大规模生产。得到的牛蒡多糖提取物有一定的抗氧化能力。

Description

牛蒡多糖的提取及其优化方法

技术领域

本发明涉及一种牛蒡多糖的提取及其优化方法，属于食品加工技术领域。

背景技术

牛蒡(Arctium lappa L.)为菊科牛蒡属二年生草本植物，俗称“东洋参”，有“蔬菜之王”的美誉。牛蒡的根茎富含蛋白质、菊糖、钙、镁等人体所需的多种矿物质及维生素，牛蒡中胡萝卜素的含量比胡萝卜中高150倍，蛋白质和钙的含量为根茎类之首，营养价值极高。牛蒡根作为一种传统的药食同源植物，在《本草纲目》、《名医别录》、《中国药膳大宝典》等著作中均有详细记载，《名医别录》中记载牛蒡“可疗汗出、中风、面肿、消渴、逐水”；《珍惜名优蔬菜》、《蔬菜栽培学》等著作中介绍：经常食用牛蒡根有促进血液循环、清除肠胃垃圾、防止人体过早衰老、润泽肌肤等功效。牛蒡在我国主要种植在山东的兰陵县、江苏的丰县和沛县等地，是优质的出口创汇型蔬菜，被联合国粮农组织(FAO)誉为“21世纪人类最佳保健食品之一”，具有极高的营养价值、经济价值和开发应用前景。

牛蒡中具有多糖类、多酚类、黄酮类及挥发油等生物活性物质，多糖是其中的重要一种。牛蒡多糖为多聚果糖，有低热量、预防臼齿、防治糖尿病，调节血压、减肥、预防心血管疾病、提高免疫力、预防结肠癌、防止便秘、腹泻等保健功能，被广泛应用于食品、医药等领域，在国内外市场需求巨大。

牛蒡多糖的提取方法主要有：热水浸提法、超声辅助提取法、微波辅助提取法、酶解法、碱液提取法等。其中，(1)热水浸提法是多糖提取的经典方法，利用“相似相溶”的原理，将极性大分子化合物多糖溶于水等极性溶剂来进行提取，具有设备要求低，操作简单等特点。(2)超声辅助提取是利用超声波产生高速、强烈的空化效应和搅拌作用，使中药植物细胞壁容易破碎，有助于多糖的溶出，提高提取效率。与水提醇沉法相比，其大大缩短了提取时间，并且不改变多糖的结构，已被广泛用于中药多糖的提取，不过超声提取时间不宜过长，因其可能导致多糖结构发生变化、糖链断裂，反而影响多糖得率。(3)微波辅助提取是根据吸收微波能力的差异，使某些组分被选择性加热而被提取。微波穿透力强、加热迅速且均匀，能使细胞内温度迅速上升，液态水快速汽化，产生的强大压力可冲破细胞膜和细胞壁，促进多糖溶出。与其他中药提取技术相比，微波辅助提取技术具有所需温度低、工作时间短、耗能低、提取效率高和环境污染小等特点。微波辅助提取法也具有一些局限，如微波辐射不均匀，容易造成局部温度过高，导致有效成分的变性、损失。(4)酶法提取是近年用来提取天然植物中有效成分的一种新的技术。其原理是利用酶选择性地破坏细胞壁，使细胞内成分更易溶解和扩散，而应用于中药有效成分的提取。与传统水提法相比，该技术具有条件温和、浸出率高、减少热敏成分降解等优势。(5)碱液提取法是在稀碱的作用下，植物的细胞、细胞壁吸水膨胀破裂，使其中游离的多糖进一步溶解而被提取出来。但此法对材料有选择性，且易破坏多糖结构，需严格控制酸碱浓度。

上述5种牛蒡多糖的提取方法，微波辅助提取、超声提取和酶法提取都是新的提取技术，微波辅助提取技术和超声提取技术适用于沸点高、挥发性低的物质，比如生物碱、苷类、黄酮类等，应尽量避免蛋白质、多肽、酶等热敏性物质，这些物质在微波加热过程中易变性失活；酶提取技术在提取黄酮、苷类、多糖等有效成分上都有很好的表现，但是酶法提取对实验要求较高，需要寻求最适的温度、pH、作用时间，还要考虑底物与酶的浓度比、激动剂和抑制剂对酶的影响等。超声辅助提取法节能省时、加速多相扩散、对多糖结构和分子性质的损伤较小，但是超声设备规模小、功率强度受制约噪音大、设备稳定性不高、有效作用范围局限，因此不能满足大规模生产。理想的多糖提取技术应具有提取效率高、有效成分损失小、工艺简便且操作安全、提取时间短、经济和环保等特点。热水浸提法是多糖提取的经典方法，设备简单，操作要求低，适合大规模生产。现需要通过热水浸提法优化从而得出适合牛蒡多糖提取的方法。

发明内容

发明目的：针对上述现有存在的问题和不足，本发明的目的是提供一种牛蒡多糖的提取及其优化方法，运用热水浸提法提取牛蒡多糖，提高其多糖的提取率，得到的牛蒡多糖提取物有一定的抗氧化能力。

技术方案：为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：一种牛蒡多糖的提取方法，包括如下步骤：

步骤1：牛蒡筛选：选取新鲜且品质合格的二年生开花前的牛蒡根作为样品，将牛蒡根清洗晾干，切片，厚度为5～10mm，然后放入鼓风干燥箱中，于60℃±5℃条件下将牛蒡片烘干至恒重，冷却至室温后用粉碎机进行粉碎，粉碎后过60目筛，制得牛蒡根粉；

步骤2：牛蒡根粉脱脂：取步骤1中所得的牛蒡根粉加入乙醇进行脱脂，然后离心处理得滤渣，烘干后得到脱脂牛蒡根粉以备用；

步骤3：热水浸提：将步骤2中得到的脱脂牛蒡根粉加入热水搅拌进行浸提，提取结束后，进行离心处理，收集上清液，再重复提取一次，然后将两次的上清液合并，得到混合上清液；

步骤4：脱蛋白：将步骤3中得到的混合上清液通过减压浓缩使上清液体积浓缩至1/5～1/10后，除去蛋白得到去蛋白液；

步骤5：醇沉：向步骤4中得到的去蛋白液中加入4倍体积的无水乙醇，于3～5℃条件下进行醇沉，收集并对沉积物经干燥处理；

步骤6：再将步骤2～5重复进行3次，即得牛蒡多糖。

进一步的，所述步骤1中的牛蒡根样品个体均匀相似、茎肉饱满无空心、无虫蛀及虫斑、无霉烂变质为新鲜且品质合格。

进一步的，所述步骤2中的脱脂具体步骤为：按照料液比1∶4～1∶5向牛蒡根粉中加入95％乙醇，在40～60℃下进行脱脂处理，溶液于6000r/min离心10～15min，收集沉淀物，重复一次，而后将收集的沉淀物在温度60℃±5℃下干燥得到脱脂牛蒡根粉；

进一步的，所述步骤3中的热水浸提法的提取条件为：料液比为1∶10～1∶30，提取温度为60～100℃，提取时间为1～3h。

牛蒡多糖的提取方法的优化方法，包括如下步骤：

步骤S1：单因素试验：采用单因素轮换法，称取一定量步骤2所得的脱脂牛蒡根粉进行料液比、提取温度、提取时间三个单因素梯度实验；

步骤S2：计算最佳提取方法优化组合：根据单因素试验的结果，选择料液比A、提取温度B和提取时间C为自变量，以牛蒡多糖提取率Y为响应值，使用Box-Behnken Design中心组合试验原理，代入响应面分析试验软件，根据方差分析表及响应面等高线图及三维模型，确定最优提取条件；

步骤S3：最佳组合提取：按照步骤S2得到的最优提取条件进行提取，提取结束后，进行离心处理，收集上清液，再重复提取一次；将两次的上清液合并；

步骤S4：同权利要求2中步骤4的脱蛋白与步骤5中的醇沉步骤，得到优化牛蒡多糖；

步骤S5：由步骤S4中得到的优化牛蒡多糖的数据代入如下牛蒡多糖得率公式中进行计算，得到牛蒡多糖得率：

其中C是提取物中多糖的含量，W代表干燥的样品重量。

进一步的，所述步骤S1的单因素梯度实验中料液比为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25和1∶30；提取温度为60℃、70℃、80℃、90℃和100℃；提取时间为1h、1.5h、2h、2.5h和3h。

进一步的，所述步骤S2中得到的最优提取条件为料液比1∶16.2、提取温度71.1℃、提取时间2.51h。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下优点：这是一种新式的牛蒡多糖的提取及其优化方法，运用热水浸提法提取牛蒡多糖，提高其多糖的提取率，且操作简单，适合大规模生产。得到的牛蒡多糖提取物有一定的抗氧化能力。

附图说明

图1是本发明的实施例中料液比对牛蒡多糖提取率的影响示意图；

图2是本发明的实施例中提取温度对牛蒡多糖提取率的影响示意图；

图3是本发明的实施例中提取时间对牛蒡多糖提取率的影响示意图；

图4是本发明的实施例中料液比和提取温度交互作用响应平面图及3D图；

图5是本发明的实施例中料液比和提取时间交互作用响应平面图及3D图；

图6是本发明的实施例中提取温度和提取时间交互作用响应平面图及3D图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。

一种牛蒡多糖的提取方法，该提取方法为热水浸提法，具体为牛蒡切片烘干打粉后，进行脱脂、离心处理，而后采用热水浸提法提取其多糖，其中，所述热水浸提法的提取条件为：料液比1∶20、提取温度80℃、提取时间2，提取结束后，进行离心处理，收集上清液，再重复提取一次；将上清液通过减压浓缩使上清液体积浓缩至1/5后，除去蛋白，再均匀分散于乙醇溶液中，于4℃条件下进行醇沉，收集并对沉积物经处理后，即得牛蒡多糖。

实施例1

步骤1，牛蒡的筛选：样品选取新鲜、二年生开花前的牛蒡根，保证个体均匀相似、茎肉饱满无空心、无虫蛀及虫斑、无霉烂变质；挑选新鲜且品质良好的牛蒡根，将牛蒡清洗晾干，切片，厚度为5～10m，然后放入鼓风干燥箱中，于60℃条件下将牛蒡片烘干至恒重，冷却至室温后用粉碎机进行粉碎，粉碎后过60目筛，制得牛蒡根粉；

步骤2，牛蒡根粉脱脂：取牛蒡根粉按照料液比1∶4向牛蒡根粉中加入95％乙醇，在50℃下进行脱脂处理，溶液于6000/min离心15min，收集沉淀物，重复一次，而后将收集的沉淀物在温度60℃下干燥得到脱脂牛蒡根粉后备用；

步骤3，热水浸提：将脱脂后的牛蒡根粉加水进行热水浸提，所述热水浸提法的提取条件为：料液比1∶20、提取温度80℃、提取时间2h，提取结束后，进行离心处理，收集上清液，再重复提取一次；将两次的上清液合并；

步骤4，脱蛋白：将上述上清液通过减压浓缩使上清液体积浓缩至1/5后，加Sevage试剂(三氯甲烷：正丁醇＝4∶1)混合，搅拌20min，6000r/min离心10min，将有机溶剂层和变性蛋白与水层分离，保留水层，继续用Sevage法除蛋白，至无中间蛋白层除去蛋白；

步骤5，醇沉：向上述得到的溶液中加入4倍体积的无水乙醇，于4℃条件下进行醇沉，收集并对沉积物经干燥处理后，即得牛蒡多糖。

本发明还保护上述一种牛蒡多糖提取方法的优化方法，具体步骤如下：

步骤1，样品采集：样品选取新鲜、二年生开花前的牛蒡根，保证个体均匀相似、茎肉饱满无空心、无虫蛀及虫斑、无霉烂变质；挑选新鲜且品质良好的牛蒡根，将牛蒡清洗晾干，切片，厚度为5～10mm，然后放入鼓风干燥箱中，于60℃条件下将牛蒡片烘干至恒重，冷却至室温后用粉碎机进行粉碎，粉碎后过60目筛，制得牛蒡根粉；

步骤2，单因素试验：采用单因素轮换法，称取一定量样品进行料液比1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30；提取温度60℃、70℃、80℃、90℃、100℃、提取时间1h、1.5h、2h、2.5h、3h三个单因素梯度实验；

1.料液比对牛蒡多糖提取率的影响

设定提取温度80℃，提取时间2h，多糖提取率随着料液比的增大而升高，当料液比升至1∶15时，其多糖提取率达到最高。如图1所示，随着料液比的继续升高，其多糖提取率开始缓慢下降，说明当料液比较小时，溶质中的多糖不能够完全被溶剂所溶解，而随着溶剂量的增加，溶质中的多糖分子都能够游离在溶剂中，多糖提取率便随之升高，当料液比为1∶15时，多糖提取率达到最高，而之后随着料液比增大，粉末中的其他杂质会与多糖竞争扩散溶解，导致多糖收率降低。也可能是随着含水量的增加，多糖的后续分离和浓缩变得更加困难，导致多糖的损失增加。因此，确定最佳的料液比为1∶15。

2、提取温度对牛蒡多糖提取率的影响

在确定最佳料液比为1∶15之后，其他条件不变，进行提取温度梯度实验。随着提取温度从60℃提高到100℃，多糖得率在70℃达到峰值。随着提取温度的升高，多糖的扩散系数增大，从而多糖在水溶液中的含量增加。然而，过高的温度会导致多糖的水解或降解，导致多糖得率下降。这种增加可能是由于更高的温度加速了细胞中物质的移动和转移。但温度过高时，多糖开始分解，导致多糖得率下降。因此，如图2所示，确定最佳提取温度为70℃。

3、提取时间对牛蒡多糖提取率的影响

确定料液比1∶15和提取温度70℃后，进行提取时间梯度实验，如图3所示，随着提取时间的增加，多糖得率增加，在2.5h时达到9.5％的峰值(p<0.05)，但在2.5h后下降，这可能是由于提取时间的增加使多糖溶解在溶剂中，但提取时间过长，导致多糖结构破坏，其他杂质竞争性溶解，导致总得率下降。

步骤3，最佳组合提取方法优化：根据单因素试验的结果，选择料液比A、提取温度B和提取时间C为自变量，以牛蒡多糖提取率Y为响应值，运用Box-Behnken Design中心组合试验原理，应用Design-Expert 8.0软件设计3因素3水平的响应面分析试验，具体设计详见表1，根据考察因子的分析结果及响应面等高线图及三维模型，确定最优提取条件，得到粗多糖；

表1 Box-Behnken试验因素水平及编码水平表

1、响应面回归方程的拟合

Box-Behnken设计结合响应面法结果见表2。

表2响应面实验结果与分析

根据表2中的实验结果，软件进行分析拟合出多项式回归方程，所得牛蒡多糖的拟合回归方程为：

Y＝13.2394+0.3506A－0.0693B－0.3598C－0.1568AB－0.8775AC－0.2520BC－1.9581A²－2.1331B²－1.5683C²

对该拟合方程进行方差分析，分析结果见表3。由从表3可知，该模型达到显著水平(p<0.05)。失拟项的p＝0.7937>0.05，失拟项差异不显著，表明实验过程中误差小，该回归方程对试验拟合程度较好。模型的决定系数R²＝0.9754，

对回归方程的显著性进行检验分析表明，热水浸提法提取牛蒡多糖工艺条件中提取温度B对牛蒡多糖得率影响显著(p<0.05)；料液比A对牛蒡多糖得率影响极显著(p<0.01)。结果表明，模型回归系数R²＝0.9754，因此该模型对热水提取牛蒡多糖得率的分析和预测较可靠。

表3回归方程方差分析及结果

2、响应面优化提取条件

响应面图是运用图形技术将函数关系显示出来，便于直接观察各个变量试验值与响应值之间的关系以及两两变量间的交互作用。如图4～6所示，可以看出，液料比、提取温度、提取时间交互作用对牛蒡多糖得率的影响。响应面值Y随着各因素的增加先达到最高点再逐渐减小，若曲线越陡峭，表明响应值对于操作条件的改变越敏感，此因素的交互作用对牛蒡多糖得率的影响越大；反之曲面坡度越平缓，操作条件的改变对响应值的影响就越小。提取时间和料液比对牛蒡多糖得率的影响最大，达到显著水平，表3回归分析结果也与此相吻合。由回归方程中得到牛蒡多糖的最佳工艺条件为：料液比1∶16.2、提取温度71.1℃、提取时间2.51h，提取次数2次，能达到的提取率为9.73％。

步骤4，最佳组合提取方法确认及验证：料液比1∶16.2、提取温度71.1℃、提取时间2.51h，进行3次重复试验。实际得率值为9.50～10.11％,与理论值较为接近，表明该回归模型能够很好地反映料液比、提取温度、提取时间对牛蒡多糖得率的影响，证明了该方法提取牛蒡多糖的可行性。

步骤5.利用ORAC(Oxygen RadicalAbsorbance Capacity，氧化自由基吸收能力)法对上述得到的牛蒡多糖进行体外抗氧化能力测定。将样品用75mmol/L磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)(pH 7.4)进行二倍稀释，配制成100、50、25、12.5μg/mL的溶液。取100μL不同质量浓度样品待测液加入至96微孔板上，同时另放不同浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)Trolox标准品液(PBS配制)作对照。加入200nmol/L的荧光素钠50μL，混合后于37℃反应15min，再于每孔中加入80mmol/L2,2’-偶氮二异丁基脒二盐酸盐50μL，并迅速放入微孔板多功能分析仪中测定荧光值。设置参数为：激发波长485nm、发射波长535nm、温度37℃、循环数100、循环周期60s、荧光强度7000。使用GraphPadPrism 6软件计算荧光衰退曲线下面积(areaunder curve，AUC)，样品组的AUC(AUC样品)与无样品存在时(对照组)的AUC(AUC空白)之差为netAUC。ORAC由样品浓度－netAUC直线方程与Trolox标准品浓度－net AUC直线方程的斜率比得出，以每克干样中所含的Trolox当量表示，单位为μmolTrolox/g干重。

牛蒡多糖的抗氧化能力ORAC值能达到2932.54±145.29μmol Trolox/gDW。

实施例2

步骤1：牛蒡的筛选：样品选取新鲜、二年生开花前的牛蒡根，保证个体均匀相似、茎肉饱满无空心、无虫蛀及虫斑、无霉烂变质；挑选新鲜且品质良好的牛蒡根，将牛蒡清洗晾干，切片，厚度为5～10mm，然后放入鼓风干燥箱中，于60℃条件下将牛蒡片烘干至恒重，冷却至室温后用粉碎机进行粉碎，粉碎后过60目筛，制得牛蒡根粉；

步骤2：牛蒡根粉脱脂：取牛蒡根粉按照料液比1∶4向牛蒡根粉中加入95％乙醇，在50℃下进行脱脂处理，溶液于6000r/min离心15min，收集沉淀物，重复一次，而后将收集的沉淀物在温度60℃下干燥得到脱脂牛蒡根粉后备用；

步骤3：热水浸提：将脱脂后的牛蒡根粉加水进行热水浸提，所述热水浸提法的提取条件为：料液比1∶17、提取温度72℃、提取时间2.6h，提取结束后，进行离心处理，收集上清液，再重复提取一次；将两次的上清液合并；

步骤4：脱蛋白：将上述上清液通过减压浓缩使上清液体积浓缩至1/5后，加Sevage试剂(三氯甲烷：正丁醇＝4∶1)混合，搅拌20min，6000r/min离心15min，将有机溶剂层和变性蛋白与水层分离，保留水层，继续用Sevage法除蛋白，至无中间蛋白层除去蛋白；

步骤5：醇沉：向上述得到的溶液中加入4倍体积的无水乙醇，于4℃条件下进行醇沉，收集并对沉积物经干燥处理后，即得牛蒡多糖。多糖得率为9.81～10.06％。抗氧化值达到2810.83±105.02μmol Trolox/g DW，说明本发明得到的牛蒡多糖有良好的抗氧化效果。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，尽管已经示出和描述了本发明的实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和替换，这些改进和替换也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种牛蒡多糖的提取方法，其特征在于： 包括如下步骤：

步骤1：牛蒡筛选：选取新鲜且品质合格的二年生开花前的牛蒡根作为样品，将牛蒡根清洗晾干，切片，厚度为5~10 mm，然后放入鼓风干燥箱中，于60°C ± 5°C条件下将牛蒡片烘干至恒重，冷却至室温后用粉碎机进行粉碎，粉碎后过60目筛，制得牛蒡根粉；

步骤2：牛蒡根粉脱脂：取步骤1中所得的牛蒡根粉加入乙醇进行脱脂，然后离心处理得滤渣，烘干后得到脱脂牛蒡根粉以备用；

步骤3：热水浸提：将步骤2中得到的脱脂牛蒡根粉加入热水搅拌进行浸提，提取结束后，进行离心处理，收集上清液，再重复提取一次，然后将两次的上清液合并，得到混合上清液；

步骤4：脱蛋白：将步骤3中得到的混合上清液通过减压浓缩使上清液体积浓缩至1/5～1/10后，除去蛋白得到去蛋白液；

步骤5：醇沉：向步骤4中得到的去蛋白液中加入4倍体积的无水乙醇，于3～5°C条件下进行醇沉，收集并对沉积物经干燥处理；

步骤6：再将步骤2~5重复进行3次，即得牛蒡多糖。

2.根据权利要求1所述的牛蒡多糖的提取方法，其特征在于：所述步骤1中的牛蒡根样品个体均匀相似、茎肉饱满无空心、无虫蛀及虫斑、无霉烂变质为新鲜且品质合格。

3.根据权利要求1所述的牛蒡多糖的提取方法，其特征在于：所述步骤2中的脱脂具体步骤为：按照料液比1∶4～1∶5向牛蒡根粉中加入95%乙醇，在40～60°C下进行脱脂处理，溶液于6000 r/min离心10～15 min，收集沉淀物，重复一次，而后将收集的沉淀物在温度60°C± 5°C下干燥得到脱脂牛蒡根粉。

4.根据权利要求1所述的牛蒡多糖的提取方法，其特征在于：所述步骤3中的热水浸提法的提取条件为：料液比为1∶10～1∶30，提取温度为60～100°C，提取时间为1～3 h。

5.根据权利要求1-4所述的牛蒡多糖的提取方法的优化方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤S1：单因素试验：采用单因素轮换法，称取一定量步骤2所得的脱脂牛蒡根粉进行料液比、提取温度、提取时间三个单因素梯度实验；

步骤S2：计算最佳提取方法优化组合：根据单因素试验的结果，选择料液比A、提取温度B和提取时间C为自变量，以牛蒡多糖提取率Y为响应值，使用Box-Behnken Design中心组合试验原理，代入响应面分析试验软件，根据方差分析表及响应面等高线图及三维模型，确定最优提取条件；

步骤S3：最佳组合提取：按照步骤S2得到的最优提取条件进行提取，提取结束后，进行离心处理，收集上清液，再重复提取一次；将两次的上清液合并；

步骤S4：同权利要求2中步骤4的脱蛋白与步骤5中的醇沉步骤，得到优化牛蒡多糖；

步骤S5：由步骤S4中得到的优化牛蒡多糖的数据代入如下牛蒡多糖得率公式中进行计算，得到牛蒡多糖得率：

其中C是提取物中多糖的含量，W代表干燥的样品重量。

6.根据权利要求5所述的牛蒡多糖的优化方法，其特征在于：所述步骤S1的单因素梯度实验中料液比为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25和1∶30；提取温度为60°C、70°C、80°C、90°C和100°C；提取时间为1 h、1.5 h、2 h、2.5 h和3 h。

7.根据权利要求5所述的牛蒡多糖的优化方法，其特征在于：所述步骤S2中得到的最优提取条件为料液比1∶16.2、提取温度71.1°C、提取时间2.51 h。

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