CN107129541A - 一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用 - Google Patents

一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107129541A
CN107129541A CN201710440566.XA CN201710440566A CN107129541A CN 107129541 A CN107129541 A CN 107129541A CN 201710440566 A CN201710440566 A CN 201710440566A CN 107129541 A CN107129541 A CN 107129541A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gained
burdock
pyrogen
burdock polysaccharide
polysaccharide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710440566.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN107129541B (zh
Inventor
张硕
陈锵
陈希瑞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bode Biological Technology (dezhou) Co Ltd
Original Assignee
Bode Biological Technology (dezhou) Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bode Biological Technology (dezhou) Co Ltd filed Critical Bode Biological Technology (dezhou) Co Ltd
Priority to CN201710440566.XA priority Critical patent/CN107129541B/zh
Publication of CN107129541A publication Critical patent/CN107129541A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107129541B publication Critical patent/CN107129541B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C08ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08BPOLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02PCLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/582Recycling of unreacted starting or intermediate materials

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明公开了一种牛蒡多糖热解物的制备方法及应用,制备方法包括以下步骤:将牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为100~260℃下热解1~8小时,得到混合液;将混合液离心1~5分钟,取上清液浓缩,用透析袋透析,得到保留液,将保留液干燥得到牛蒡多糖热解物。本发明的制备方法,解决了现有的牛蒡多糖结构不均一,纯度低,活性低并且活性不稳定的问题;该制备过程步骤少,易操作,易于大规模实现工业化生产;采用本发明的制备方法得到的牛蒡多糖热解物能显著的抑制α‑葡萄糖苷酶活性,明显降低哺乳动物血清中血糖的含量,不会产生肝毒性、肾毒性及血糖波动频繁等不良反应,疗效好,无毒性,可用于降血糖药物英语临床治疗糖尿病的需要。

Description

一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及多糖技术领域,具体说是一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用。
背景技术
随着人们生活水平的提高,人们对产品的营养价值、保健及药用价值的追求也越来越高,牛蒡多糖既可以为医药保健品原料,也可用于抗疲劳、抗衰老及健脑的药品,但是目前我国牛蒡产品还仅仅停留在盐渍、切丝等简单的初加工水平上,产品的附加值不高,不能充分发挥牛蒡多糖的药用功效。
此外,2型糖尿病已成为严重威胁人类健康的慢性疾病。目前临床使用的化学类降糖药物虽有效果好、 见效快等优点, 但长期使用会产生抗药性和继发性失效, 并伴随肝毒性、 肾毒性及血糖波动频繁等不良反应。 从植物中寻找疗效更好、 毒性更低的降血糖天然产物已成为药物研发的一个重要方向,其中牛蒡子水提取物就能显著的抑制ɑ-葡萄糖苷酶抑制活性,由于水提取多糖结构不唯一,因此大多数时间提取的多糖分量虽然相当,但却没有活性。本发明是在高温下热解牛蒡中的水提取物多糖,得到的解热物结构及成分稳定,克服了常见的活性低、多糖结构不均一、纯度低、活性不稳定等问题,并且研究表明植物牛蒡中多糖热解物具有降低哺乳动物血清中血糖作用,有望开发为降血糖药物应用于临床治疗糖尿病。
发明内容
为解决上述解决了现有的牛蒡多糖结构不均一,纯度低,活性低并且活性不稳定的问题,本发明的目的是提供一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用。
本发明为实现上述目的,通过以下技术方案实现:
一种牛蒡多糖热解物的制备方法,包括以下步骤:
①将质量比1:1~100的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为100~260℃下热解1~8小时,得到混合液;
②将步骤①所得混合液在转速为1000~10000r/min下离心1~5分钟,取上清液在50~100℃下将体积浓缩至原来的0.5~0.1倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为500~3000的透析袋透析1~3天,得到保留液,将保留液干燥得到牛蒡多糖热解物。
优选的,牛蒡多糖按照以下步骤制备得到:
⑴新鲜牛蒡根洗净晾干后去皮,切片,加入重量为2~5倍的水,在75~85℃下水提两遍,第一遍3小时,第二遍2小时,合并提取液,减压蒸馏至体积为原来的0.2~0.5,得到提取浓缩液;
⑵将步骤⑴所得的提取浓缩液加入95%乙醇中,在0~5℃下醇沉10~15小时,然后在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到沉淀,将所得沉淀加水搅拌溶解,再次在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到滤液,备用;其中步骤⑴所得的提取浓缩液、95%乙醇和水的体积比为1:3:1~2;
⑶将步骤⑵所得滤液以sevage试剂脱蛋白,直至交界面无变形蛋白为止,离心得到混合液,将混合液减压蒸馏除去氯仿和正丁醇,得到糖溶液,将所得糖溶液使用大孔树脂脱色,得到脱色糖溶液;其中sevage试剂由体积比为4:1的氯仿和正丁醇组成;步骤⑵所得滤液和sevage试剂的体积比为5:1;糖溶液和大孔树脂的质量比为1:5~10;
⑷将步骤⑶所得脱色糖溶液用0.22μm的微滤膜过滤,在2~5℃下用截留分子量1000的透析袋流水透析40~50小时,然后将透析后的溶液冷冻干燥,得到牛蒡多糖。
优选的,牛蒡多糖和水的质量比为1:5~10。
优选的,热解温度为150~200℃。
优选的,步骤③中透析袋的截留分子量为1000~2000。
优选的,干燥方法为旋蒸干燥法或冷冻干燥法。
优选的,大孔树脂为D101型大孔树脂。
进一步优选的牛蒡多糖热解物的制备方法,包括以下步骤:
①将质量比1:8的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为180℃下热解2小时,得到混合液;
所述牛蒡多糖按照以下步骤制备得到:
⑴新鲜牛蒡根洗净晾干后去皮,切片,加入水中在80℃下水提两遍,第一遍3小时,第二遍2小时,合并提取液,减压蒸馏至体积为原来的0.4,得到提取浓缩液;
⑵将步骤⑴所得的提取浓缩液加入95%乙醇中,在4℃下醇沉12小时,然后在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到沉淀,将所得沉淀加水搅拌溶解,再次在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到滤液,备用;其中步骤⑴所得的提取浓缩液、95%乙醇和水的体积比为1:3:1;
⑶将步骤⑵所得滤液以sevage试剂脱蛋白,直至交界面无变形蛋白为止,离心得到混合液,将混合液减压蒸馏除去氯仿和正丁醇,得到糖溶液,将所得糖溶液使用大孔树脂脱色,得到脱色糖溶液;其中sevage试剂由体积比为4:1的氯仿和正丁醇组成;步骤⑵所得滤液和sevage试剂的体积比为5:1;糖溶液和大孔树脂的质量比为1:8;
⑷将步骤⑶所得脱色糖溶液用0.22μm的微滤膜过滤,在4℃下用截留分子量1000的透析袋流水透析48小时,然后将透析后的溶液冷冻干燥,得到牛蒡多糖;
②将步骤①所得混合液在转速为10000r/min下离心1分钟,取上清液在80℃下将体积浓缩至原来的0.8倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为2000的透析袋透析2天,得到保留液,将保留液干燥得到牛蒡多糖热解物。
本发明还包括牛蒡多糖热解物的应用,作为糖尿病药物,用于降低哺乳动物血清中血糖的含量。
本发明相比现有技术具有以下优点:
本发明提供了一种牛蒡多糖热解物的制备方法,解决了现有的牛蒡多糖结构不均一,纯度低,活性低并且活性不稳定的问题;该制备过程步骤少,易操作,易于大规模实现工业化生产;
采用本发明牛蒡多糖热解物的制备方法得到的牛蒡多糖热解物能显著的抑制α-葡萄糖苷酶活性,明显降低哺乳动物血清中血糖的含量,该结构及成分稳定,活性高,长期使用不会产生抗药性和继发性失效,由于是纯植物提取,安全性高,不会产生肝毒性、肾毒性及血糖波动频繁等不良反应,疗效好,无毒性,可用于降血糖药物英语临床治疗糖尿病的需要。
附图说明
图1为牛蒡多糖热解物的透射电镜图;图中牛蒡多糖热解物是成纳米颗粒状分布,粒径为10nm 左右。
具体实施方式
本发明的目的是提供一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用,通过以下技术方案实现:
一种牛蒡多糖热解物的制备方法,包括以下步骤:
①将质量比1:1~100的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为100~260℃下热解1~8小时,得到混合液;
②将步骤①所得混合液在转速为1000~10000r/min下离心1~5分钟,取上清液在50~100℃下将体积浓缩至原来的0.5~0.1倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为500~3000的透析袋透析1~3天,得到保留液,将保留液干燥得到牛蒡多糖热解物。
优选的,牛蒡多糖按照以下步骤制备得到:
⑴新鲜牛蒡根洗净晾干后去皮,切片,加入重量为2~5倍的水,在75~85℃下水提两遍,第一遍3小时,第二遍2小时,合并提取液,减压蒸馏至体积为原来的0.2~0.5,得到提取浓缩液;
⑵将步骤⑴所得的提取浓缩液加入95%乙醇中,在0~5℃下醇沉10~15小时,然后在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到沉淀,将所得沉淀加水搅拌溶解,再次在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到滤液,备用;其中步骤⑴所得的提取浓缩液、95%乙醇和水的体积比为1:3:1~2;
⑶将步骤⑵所得滤液以sevage试剂脱蛋白,直至交界面无变形蛋白为止,离心得到混合液,将混合液减压蒸馏除去氯仿和正丁醇,得到糖溶液,将所得糖溶液使用大孔树脂脱色,得到脱色糖溶液;其中sevage试剂由体积比为4:1的氯仿和正丁醇组成;步骤⑵所得滤液和sevage试剂的体积比为5:1;糖溶液和大孔树脂的质量比为1:5~10;
⑷将步骤⑶所得脱色糖溶液用0.22μm的微滤膜过滤,在2~5℃下用截留分子量1000的透析袋流水透析40~50小时,然后将透析后的溶液冷冻干燥,得到牛蒡多糖。
牛蒡多糖通过特定条件进行热解,由于需要多糖量较大,对于多糖提取要求步骤简化且保证得率。牛蒡根表皮中含糖量相对较少且杂质较多,故做去皮处理;水提过程中直接以鲜根切薄片为材料,减少烘干打粉等操作;鲜根提取时间加长目的让多糖充分溶出,第二遍材料含糖量已较少,故缩短时间。
由于牛蒡提取液中存在较多植物纤维及杂质,抽滤极为困难,也无法离心去除,故直接在浓缩后醇沉,以水复溶后所有不溶物可以直接高速离心可去除,得到的糖溶液澄清透明;醇沉采用3倍95%乙醇沉淀,足以得到大部分多糖,继续增加乙醇浓度,效果不明显且沉淀中小分子糖及蛋白质等杂质含量大大增加。
采用sevage试剂脱蛋白效果明显,且试剂可反复使用。目前牛蒡多糖分子量参考文献皆为1000以上,故采用截留分子量为1000透析袋透析去除粗多糖中的小分子物质。
优选的,牛蒡多糖和水的质量比为1:5~10。
优选的,热解温度为200~260℃。
优选的,步骤③中透析袋的截留分子量为1500~2500。
优选的,干燥方法为旋蒸干燥法或冷冻干燥法。
优选的,大孔树脂为D101型大孔树脂;D101吸附大孔树脂对牛蒡多糖溶液中色素吸附较好,且价格便宜,利于大量使用。
进一步优选的牛蒡多糖热解物的制备方法,包括以下步骤:
①将质量比1:8的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为180℃下热解2小时,得到混合液;
所述牛蒡多糖按照以下步骤制备得到:
⑴新鲜牛蒡根洗净晾干后去皮,切片,加入水中在80℃下水提两遍,第一遍3小时,第二遍2小时,合并提取液,减压蒸馏至体积为原来的0.4,得到提取浓缩液;
⑵将步骤⑴所得的提取浓缩液加入95%乙醇中,在4℃下醇沉12小时,然后在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到沉淀,将所得沉淀加水搅拌溶解,再次在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到滤液,备用;其中步骤⑴所得的提取浓缩液、95%乙醇和水的体积比为1:3:1;
⑶将步骤⑵所得滤液以sevage试剂脱蛋白,直至交界面无变形蛋白为止,离心得到混合液,将混合液减压蒸馏除去氯仿和正丁醇,得到糖溶液,将所得糖溶液使用大孔树脂脱色,得到脱色糖溶液;其中sevage试剂由体积比为4:1的氯仿和正丁醇组成;步骤⑵所得滤液和sevage试剂的体积比为5:1;糖溶液和大孔树脂的质量比为1:8;
⑷将步骤⑶所得脱色糖溶液用0.22μm的微滤膜过滤,在4℃下用截留分子量1000的透析袋流水透析48小时,然后将透析后的溶液冷冻干燥,得到牛蒡多糖;
②将步骤①所得混合液在转速为10000r/min下离心1分钟,取上清液在80℃下将体积浓缩至原来的0.8倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为1000的透析袋透析2天,得到保留液,将保留液干燥得到牛蒡多糖热解物。
本发明还包括牛蒡多糖热解物的应用,作为糖尿病药物,用于降低哺乳动物血清中血糖的含量。
以下结合具体实施例来对本发明作进一步的描述。
本发明的牛蒡多糖原料可采用本申请的方法制备,或采用现有的制备方法制备或直接从市场上购买,实施例的牛蒡多糖为西安岩昊生物科技有限公司提供。
实施例1
一种牛蒡多糖热解物的制备方法,包括以下步骤:
①将质量比1:1的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为100℃下热解8小时,得到混合液;
②将步骤①所得混合液在转速为1000r/min下离心5分钟,取上清液在50℃下将体积浓缩至原来的0.5倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为500的透析袋透析1天,得到保留液,将保留液旋转蒸发干燥后得到牛蒡多糖热解物。
实施例2
一种牛蒡多糖热解物的制备方法,包括以下步骤:
①将质量比1:100的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为260℃下热解1小时,得到混合液;
②将步骤①所得混合液在转速为10000r/min下离心1分钟,取上清液在100℃下将体积浓缩至原来的0.1倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为3000的透析袋透析3天,得到保留液,将保留液旋转蒸发干燥后得到牛蒡多糖热解物。
实施例3
一种牛蒡多糖热解物的制备方法,包括以下步骤:
①将质量比1:50的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为180℃下热解2小时,得到混合液;
②将步骤①所得混合液在转速为2000r/min下离心3分钟,取上清液在60℃下将体积浓缩至原来的0.4倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为1000的透析袋透析2天,得到保留液,将保留液在-40℃下冷冻干燥得到牛蒡多糖热解物。
实施例4
一种牛蒡多糖热解物的制备方法,包括以下步骤:
①将质量比1:6的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为220℃下热解2小时,得到混合液;
所述牛蒡多糖按照以下步骤制备得到:
⑴新鲜牛蒡根洗净晾干后去皮,切片,加入重量为2倍的水,在75℃下水提两遍,第一遍3小时,第二遍2小时,合并提取液,减压蒸馏至体积为原来的0.2,得到提取浓缩液;
⑵将步骤⑴所得的提取浓缩液加入95%乙醇中,在0℃下醇沉10小时,然后在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到沉淀,将所得沉淀加水搅拌溶解,再次在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到滤液,备用;其中步骤⑴所得的提取浓缩液、95%乙醇和水的体积比为1:3:1;
⑶将步骤⑵所得滤液以sevage试剂脱蛋白,直至交界面无变形蛋白为止,离心得到混合液,将混合液减压蒸馏除去氯仿和正丁醇,得到糖溶液,将所得糖溶液使用大孔树脂脱色,得到脱色糖溶液;其中sevage试剂由体积比为4:1的氯仿和正丁醇组成;步骤⑵所得滤液和sevage试剂的体积比为5:1;糖溶液和大孔树脂的质量比为1:5~10;
⑷将步骤⑶所得脱色糖溶液用0.22μm的微滤膜过滤,在2℃下用截留分子量1000的透析袋流水透析40小时,然后将透析后的溶液冷冻干燥,得到牛蒡多糖;
②将步骤①所得混合液在转速为5000r/min下离心2分钟,取上清液在80℃下将体积浓缩至原来的0.2倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为2000的透析袋透析1天,得到保留液,将保留液在-40℃下冷冻干燥得到牛蒡多糖热解物。
实施例5
一种牛蒡多糖热解物的制备方法,包括以下步骤:
①将质量比1:10的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为150℃下热解4小时,得到混合液;
所述牛蒡多糖按照以下步骤制备得到:
⑴新鲜牛蒡根洗净晾干后去皮,切片,加入重量为5倍的水,在85℃下水提两遍,第一遍3小时,第二遍2小时,合并提取液,减压蒸馏至体积为原来的0.5,得到提取浓缩液;
⑵将步骤⑴所得的提取浓缩液加入95%乙醇中,在5℃下醇沉15小时,然后在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到沉淀,将所得沉淀加水搅拌溶解,再次在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到滤液,备用;其中步骤⑴所得的提取浓缩液、95%乙醇和水的体积比为1:3:2;
⑶将步骤⑵所得滤液以sevage试剂脱蛋白,直至交界面无变形蛋白为止,离心得到混合液,将混合液减压蒸馏除去氯仿和正丁醇,得到糖溶液,将所得糖溶液使用大孔树脂脱色,得到脱色糖溶液;其中sevage试剂由体积比为4:1的氯仿和正丁醇组成;步骤⑵所得滤液和sevage试剂的体积比为5:1;糖溶液和大孔树脂的质量比为1:5~10;
⑷将步骤⑶所得脱色糖溶液用0.22μm的微滤膜过滤,在3℃下用截留分子量1000的透析袋流水透析45小时,然后将透析后的溶液冷冻干燥,得到牛蒡多糖;
②将步骤①所得混合液在转速为5000r/min下离心2分钟,取上清液在60℃下将体积浓缩至原来的0.5倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为2000的透析袋透析2天,得到保留液,将保留液干燥得到牛蒡多糖热解物。
牛蒡多糖热解物是一种纳米颗粒,其元素分析结果如下:N-0.88%,C-42.2%,H-5.914%,S-0.723%,O-50.283%。
本发明实施例的牛蒡多糖热解物在体外抑制α-葡萄糖苷酶的活性的试验
所用试剂和药品:ɑ-葡萄糖苷酶,4-硝基-ɑ-D-吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenyl ɑ-D-glucopyranoside, PNPG),ɑ-葡萄糖苷酶,阿卡波糖(Sigma),链脲霉素( streptozoctoin,STZ) (Sigma),高脂饲料,
实验仪器:荧光酶标仪,血糖仪及标配试纸(罗氏)
方法如下:
以4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷( PNPG) 为底物,测定α-葡萄糖苷酶的活性。取酶标板,分空白组、实验组、本底组三个组分,每个组分做五个样品。先用移液器向各组中加入20µLα-葡萄糖苷酶(1U/ml),再分别加入热解物抑制剂(溶解于PH6.8 PBS中)和阿卡波糖60 µL 混匀,37℃水浴10 min,再加入底物PNPG(5 mmol/L)20 µL,混匀,37℃反应30 min后,加入等体积的0.2mol/L Na2CO3终止反应。反应产物在全波长酶标仪中于405 nm处测定吸光度。
样品对α-葡萄糖苷酶的抑制率(%)={1-(AS-AC)/A0}×100;
式中:AS 为阿卡波糖溶液、牛蒡多糖或实施例1所得牛蒡多糖热解物的吸收度,AC为等量PBS代替PNPG的吸光度(本底组);A0 为以等量 PBS 代替样品溶液的吸收度(空白组)。结果表1所示,表中n = 5, P < 0. 01 vs blank。
表1 牛蒡多糖、牛蒡多糖热解物和阿卡波糖对α-glucosidase抑制活性表
由表1的结果可以看出,随着碳量子点浓度的增加,本发明的植物牛蒡中多糖热解物对α-glucosidase的抑制活性逐渐超过阿卡波糖,可见本发明的植物牛蒡中多糖热解物具有很好的降血糖效应,但是市场上购买的牛蒡多糖原料由于结构不唯一,大多数时间提取的多糖分量虽然相当,活性很小,很难发挥其降血糖的作用。
实施例1~4所得牛蒡多糖热解物的降血糖效应实验如下:取50只210~220g的SD大鼠,单笼饲养,室温为20~25℃,相对湿度为40~70%,照明时间为12h,定时定量添加饲料,饮纯净水,每日更换垫料。
SD大鼠喂养普通饲料7天,随机分成两组,空白组10只,模型组40只。空白组大鼠喂普通饲料,模型组大鼠喂高脂饲料,养20天。模型组禁食过夜后,腹腔注射 STZ(45 mg /kg,STZ 溶于 0. 005 mol /L 柠檬酸缓冲液)。2天后,测空腹血糖,血糖浓度大于7 mmol /L的模型组大鼠为糖尿病模型建造成功。统计造模成功的有30只,随机等分成3组,每组10只。分别为模型组对照组、阳性药组(Acarbose,50 mg /kg)、植物牛蒡中多糖热解物剂量组(50mg /kg)灌胃给药,每天1次,连续8周,给药治疗开始后每周剪尾采血,监测血糖,连续测8周。测量结果如表2,
表2 植物牛蒡中多糖热解物降大鼠血糖水平活性(n =10)
#P < 0. 01 vs 空白组; * P < 0. 05,* * P < 0. 01 vs 模型组。
由表2的结果可以看出,植物牛蒡中多糖热解物剂量组与模型对照组对比血糖成下降趋势,第56天,血糖为14.11 mmol /L,低于模型组17.41 mmol /L,略高于阳性药组13.20 mmol /L,表明其具有较好的降体内血糖活性。

Claims (9)

1.一种牛蒡多糖热解物的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
①将质量比1:1~100的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为100~260℃下热解1~8小时,得到混合液;
②将步骤①所得混合液在转速为1000~10000r/min下离心1~5分钟,取上清液在50~100℃下将体积浓缩至原来的0.5~0.1倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为500~3000的透析袋透析1~3天,得到保留液,将保留液干燥得到牛蒡多糖热解物。
2.根据权利要求1所述的牛蒡多糖热解物的制备方法,其特征在于:所述牛蒡多糖按照以下步骤制备得到:
⑴新鲜牛蒡根洗净晾干后去皮,切片,加入重量为2~5倍的水,在75~85℃下水提两遍,第一遍3小时,第二遍2小时,合并提取液,减压蒸馏至体积为原来的0.2~0.5,得到提取浓缩液;
⑵将步骤⑴所得的提取浓缩液加入95%乙醇中,在0~5℃下醇沉10~15小时,然后在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到沉淀,将所得沉淀加水搅拌溶解,再次在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到滤液,备用;其中步骤⑴所得的提取浓缩液、95%乙醇和水的体积比为1:3:1~2;
⑶将步骤⑵所得滤液以sevage试剂脱蛋白,直至交界面无变形蛋白为止,离心得到混合液,将混合液减压蒸馏除去氯仿和正丁醇,得到糖溶液,将所得糖溶液使用大孔树脂脱色,得到脱色糖溶液;其中sevage试剂由体积比为4:1的氯仿和正丁醇组成;步骤⑵所得滤液和sevage试剂的体积比为5:1;糖溶液和大孔树脂的质量比为1:5~10;
⑷将步骤⑶所得脱色糖溶液用0.22μm的微滤膜过滤,在2~5℃下用截留分子量1000的透析袋流水透析40~50小时,然后将透析后的溶液冷冻干燥,得到牛蒡多糖。
3.根据权利要求1所述的牛蒡多糖热解物的制备方法,其特征在于:牛蒡多糖和水的质量比为1:5~10。
4.根据权利要求1所述的牛蒡多糖热解物的制备方法,其特征在于:热解温度为150~200℃。
5.根据权利要求1所述的牛蒡多糖热解物的制备方法,其特征在于:步骤③中透析袋的截留分子量为1000~2000。
6.根据权利要求1所述的牛蒡多糖热解物的制备方法,其特征在于:干燥方法为旋蒸干燥法或冷冻干燥法。
7.根据权利要求2所述的牛蒡多糖热解物的制备方法,其特征在于:大孔树脂为D101型大孔树脂。
8.根据权利要求2所述的牛蒡多糖热解物的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
①将质量比1:8的牛蒡多糖和水加入反应容器中,在热解温度为180℃下热解2小时,得到混合液;
所述牛蒡多糖按照以下步骤制备得到:
⑴新鲜牛蒡根洗净晾干后去皮,切片,加入水中在80℃下水提两遍,第一遍3小时,第二遍2小时,合并提取液,减压蒸馏至体积为原来的0.4,得到提取浓缩液;
⑵将步骤⑴所得的提取浓缩液加入95%乙醇中,在4℃下醇沉12小时,然后在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到沉淀,将所得沉淀加水搅拌溶解,再次在5000转/分的转速下离心5分钟,过滤得到滤液,备用;其中步骤⑴所得的提取浓缩液、95%乙醇和水的体积比为1:3:1;
⑶将步骤⑵所得滤液以sevage试剂脱蛋白,直至交界面无变形蛋白为止,离心得到混合液,将混合液减压蒸馏除去氯仿和正丁醇,得到糖溶液,将所得糖溶液使用大孔树脂脱色,得到脱色糖溶液;其中sevage试剂由体积比为4:1的氯仿和正丁醇组成;步骤⑵所得滤液和sevage试剂的体积比为5:1;糖溶液和大孔树脂的质量比为1:8;
⑷将步骤⑶所得脱色糖溶液用0.22μm的微滤膜过滤,在4℃下用截留分子量1000的透析袋流水透析48小时,然后将透析后的溶液冷冻干燥,得到牛蒡多糖;
②将步骤①所得混合液在转速为10000r/min下离心1分钟,取上清液在80℃下将体积浓缩至原来的0.8倍,得到浓缩液;
③将步骤②所得浓缩液用截留分子量为1000的透析袋透析2天,得到保留液,将保留液干燥得到牛蒡多糖热解物。
9.权利要求1所述的牛蒡多糖热解物的应用,其特征在于:作为糖尿病药物,用于降低哺乳动物血清中血糖的含量。
CN201710440566.XA 2017-06-13 2017-06-13 一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用 Active CN107129541B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710440566.XA CN107129541B (zh) 2017-06-13 2017-06-13 一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710440566.XA CN107129541B (zh) 2017-06-13 2017-06-13 一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107129541A true CN107129541A (zh) 2017-09-05
CN107129541B CN107129541B (zh) 2020-06-09

Family

ID=59733856

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710440566.XA Active CN107129541B (zh) 2017-06-13 2017-06-13 一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107129541B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113397032A (zh) * 2021-05-24 2021-09-17 江苏省农业科学院 基于牛蒡糖蛋白的营养素递送体系及其制备方法和应用
CN115010820A (zh) * 2021-09-24 2022-09-06 江苏省农业科学院 牛蒡多糖的提取及其优化方法
CN115227670A (zh) * 2022-06-24 2022-10-25 山东博德医药研究院有限公司 一种优化牛蒡多糖纳米颗粒的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101129433A (zh) * 2007-09-12 2008-02-27 青岛宝德生物科技开发有限公司 一种提取牛蒡活性成分的方法
CN103110154A (zh) * 2013-02-02 2013-05-22 青岛昊田食品有限公司 一种牛蒡降糖饮料的制备方法
CN103859578A (zh) * 2014-03-04 2014-06-18 江苏中烟工业有限责任公司 一种牛蒡粗多糖的提取方法及其在烟草中的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101129433A (zh) * 2007-09-12 2008-02-27 青岛宝德生物科技开发有限公司 一种提取牛蒡活性成分的方法
CN103110154A (zh) * 2013-02-02 2013-05-22 青岛昊田食品有限公司 一种牛蒡降糖饮料的制备方法
CN103859578A (zh) * 2014-03-04 2014-06-18 江苏中烟工业有限责任公司 一种牛蒡粗多糖的提取方法及其在烟草中的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
于广利 等: "《糖药物学》", 30 September 2012, 中国海洋大学出版社 *
王佳佳 等: "牛蒡多糖的降血糖活性", 《中国药科大学学报》 *
王振宇 等: "《生物活性成分分离技术》", 31 May 2015, 哈尔滨工业大学出版社 *
骆秀珍 等: "毛头牛蒡子抗氧化和降血糖的有效部位筛选研究", 《中国现代中药》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113397032A (zh) * 2021-05-24 2021-09-17 江苏省农业科学院 基于牛蒡糖蛋白的营养素递送体系及其制备方法和应用
CN115010820A (zh) * 2021-09-24 2022-09-06 江苏省农业科学院 牛蒡多糖的提取及其优化方法
CN115227670A (zh) * 2022-06-24 2022-10-25 山东博德医药研究院有限公司 一种优化牛蒡多糖纳米颗粒的方法
CN115227670B (zh) * 2022-06-24 2023-10-20 山东博德医药研究院有限公司 一种优化牛蒡多糖纳米颗粒的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107129541B (zh) 2020-06-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101919530B (zh) 一种茶及其制备方法
CN1267456C (zh) 一种降糖的沙蒿多糖制备方法及其应用
CN107129541A (zh) 一种牛蒡多糖热解物的制备方法及其应用
CN1723981A (zh) 罗汉果提取物用于制备药物辅料的新用途
CN112961262A (zh) 一种西番莲果皮酸性多糖、制备方法及其应用
CN105341893A (zh) 一种辅助降血糖的组合物及应用
CN101744844B (zh) 具有降血糖作用的黄腐酸或黄腐酸钠物质
CN104910291B (zh) 一种木菠萝叶多糖及其制备方法和应用
CN109232757B (zh) 核桃叶多糖提取物及应用
RU2430735C1 (ru) Композиция, обладающая антидиабетическим действием
CN114984098B (zh) 一种山楂鸡内金咀嚼片及其制备方法
CN101167781A (zh) 口服降血糖红薯叶单方中药及其制备方法
CN113663043B (zh) 一种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的组合物及其制备方法和应用
CN108077512A (zh) 辣木叶降糖茶及其制备方法
CN101884723B (zh) 一种用于治疗糖尿病的知母黄连组合物制剂及其制备方法
CN112979839A (zh) 一种西番莲叶酸性多糖的制备方法
CN102670698B (zh) 千斤拔提取物在制备防治糖尿病药物中的应用
CN105963330A (zh) 神秘果制剂及其应用
CN113398185A (zh) 一种防潮型五味消毒饮颗粒剂及其制备方法
CN107334775A (zh) 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用
CN114533817A (zh) 一种改善血糖和/或血脂的组合物及其应用
CN110483657A (zh) 一种半边莲均一多糖及其制备方法和应用
CN105963567B (zh) 治疗糖尿病的药物及制备方法
CN100566598C (zh) 一种含有竹胎粉的改善贫血的保健品及其制备方法
CN108185245A (zh) 一种人参菜用大豆饮品的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant