CN116869895B - 一种促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物及其制备和应用 - Google Patents

一种促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物及其制备和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及化妆品领域，尤其涉及一种促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物及其制备方法和应用。所述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物包括以下重量份的组分：白及提取物1‑6份、麦冬提取物1‑4份、玉竹提取物1‑4份、卷柏提取物0.1‑2份。复配后协同增效，在提高水通道蛋白的浓度、保湿上具有显著的优势；对皮肤的深层保湿、皮肤屏障性能的提升有非常明显的帮助；再与雪菊提取物和夏枯草提取物复配，制备得到的组合物兼具显著的舒缓功效。本发明制备的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物具有用量低、安全有效、天然无刺激等优点，可以用于化妆品等领域。

Description

一种促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物及其制备和 应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域，尤其涉及一种促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物及其制备和应用。
背景技术
随着生活水平的提高，化妆品逐渐成为人们生活中不可或缺的一部分，人们使用化妆品越来越普遍，对化妆品的安全性也越来越重视。目前针对保湿和增强皮肤屏障产品，常规的思路是按普通日化产品的思路加入化学合成物质，如多元醇、聚合物、矿物油等合成或半合成的原料，但传统的化学添加剂，虽然具有一定的保湿及增强屏障效果，但是长期使用传统化学添加剂的化妆品后，会对皮肤常驻菌群造成破坏和抑杀，扰乱皮肤微生态平衡，皮肤屏障受损、免疫力下降，从而引起各种皮肤问题。
随着健康意识的提高，人们对化妆品的绿色安全性、功能性越发关注，天然、健康的植物提取物产品受到了越来越多消费者的欢迎和推崇，且市场正在扩大。因而，在如今众多类型的保湿、增强皮肤屏障产品中，来源植物提取物的产品因其绿色、安全的优势，受到了众多消费者的热捧。
人们对化妆品的要求越来越高，“零添加”、“纯有机”的概念越来越主流，因此，为了满足消费者日益增长的需求，开发不添加化学合成的化妆品已经成为热点。发掘不同植物提取物保湿及增强皮肤屏障的协同作用，成为解决问题最为可行的方向，但是往往有很多植物提取物，不具备此类功效，不能发挥协同作用，成为目前需要解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物及其制备方法和应用。本发明的组合物具有协同效果，复配后能够显著提高促进皮肤细胞水通道蛋白表达及增强皮肤屏障效果，兼具舒缓作用。本发明制备得到的组合物，具有用量低、安全有效、天然无刺激等优点，可以用于化妆品等领域。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
第一方面，本发明提供了一种促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物，包括以下重量份的组分：白及提取物1-6份、麦冬提取物1-4份、玉竹提取物1-4份、卷柏提取物0.1-2份。
白及(BLETILLA STRIATA)是兰科白及属的一种，主要作用部分为干燥块茎，其主要含有白及甘露聚糖、白及苷、白及胶质等活性成分，具有收敛止血、保湿、减少经皮失水、增强皮肤屏障等作用。
麦冬(OPHIOPOGON JAPONICA)是百合科植物麦冬的干燥块根，主要含β-谷甾醇、氨基酸、多量葡萄糖及葡萄糖苷等，具有滋润、修复皮肤表皮、抑制多种细菌等作用。
玉竹(POLYGONATUM ODORATUM)属百合科黄精属多年生草生植物，主要含有粘液质，经水解后产生果糖、葡萄糖及其他胶糖、槲皮醇苷、维生素等活性成分，具有滋阴润肺、润泽皮肤、疏散风热等作用。
卷柏(SELAGINELLA TAMARISCINA)是卷柏科植物卷柏的干燥全草，主要含有黄酮、苯丙素、生物碱等，具有活血消肿、修复皮肤屏障等作用。
在本发明的重量份范围内，制备的组合物具有协同增效作用，能够显著提高促进皮肤细胞水通道蛋白表达及增强皮肤屏障效果，主要能促进皮肤表皮层水通道蛋白的表达，水通道蛋白能运输表皮所需的小分子物质，增强皮肤屏障，减少皮肤经皮失水，通过相互作用，达到快速和长效保护皮肤的目的。
优选地，所述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5-4份、麦冬提取物3-4份、玉竹提取物2.5-3份、卷柏提取物0.5-2份。
在该重量份范围内，白及提取物、麦冬提取物、玉竹提取物和卷柏提取物搭配使用制备组合物时，水通道蛋白上调率均达到60％以上；保湿功效显著；对皮肤的深层保湿、皮肤屏障性能的提升有非常明显的帮助，特别是对皮肤的补水效果有着非常明显的促进作用。
优选地，上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物，还包括雪菊提取物和夏枯草提取物。
雪菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)是菊科金鸡菊属草本植物，主要含有氨基酸类、多糖类、多酚类、有机酸类、黄酮类等活性物质，具有抗菌、抗氧化、增强细胞活力等作用。
夏枯草(PRUNELLA VULGARIS)取自唇形科植物夏枯草的干燥果穗或全草，主要含有酚酸、三萜皂苷，具有抗炎、散结消肿、清热解毒等作用。
相比于单一地添加雪菊提取物或夏枯草提取物，同时添加雪菊提取物和夏枯草提取物，协同增效，可显著提高组合物的舒缓效果。
优选地，所述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物中，所述雪菊提取物为1-3重量份；所述夏枯草提取物为0.1-1重量份。
第二方面，本发明提供了上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)通过醇提得到白及提取物；
(2)将麦冬粉碎后进行水提物得到麦冬提取物；
(3)将玉竹粉碎后进行水提、酶解得到玉竹提取物；
(4)将雪菊粉碎后进行酶解、水提得到雪菊提取物；
(5)通过醇提得到卷柏提取物；
(6)通过醇提得到夏枯草提取物；
(7)按重量份称取步骤(1)-(6)所得的提取物，混合均匀，即得到促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物。
优选地，上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)、(4)中，酶解采用的酶为纤维素酶、ɑ淀粉酶、果胶酶的至少一种。
优选地，所述白及提取物的具体提取方法为：每克白及粉碎物加入20～30mL30％乙醇，回流提取过滤，收集滤液，减压浓缩回收乙醇得到粗提取物，进一步层析纯化，得到提取液A；收集第1次提取后的药渣，加入40～60mL水，回流提取过滤，收集滤液，浓缩得到提取液B；合并提取液A和B，即得白及提取物。
优选地，所述麦冬提取物的具体提取方法为：每克麦冬粉碎物加入30～50mL水，回流提取离心后过滤，收集滤液，过膜至澄清，即得麦冬提取物。
优选地，所述玉竹提取物的具体提取方法为：每克玉竹粉碎物加入40～50mL水，加入复合酶A进行酶解，灭酶，回流提取离心后过滤，收集滤液，将滤液浓缩即得玉竹提取物。
优选地，玉竹粉碎物与复合酶A的质量比为100：(0.5-2)；复合酶A为纤维素酶和ɑ淀粉酶，质量比为2：1；酶解温度为50-60℃；酶解时间为2-3h。
优选地，所述雪菊提取物的具体提取方法为：每克雪菊粉碎物加入20～30mL水，加入酶B进行酶解，灭酶，回流提取离心后过滤，收集滤液，将滤液浓缩即得雪菊提取物。
优选地，雪菊粉碎物与酶B的质量比为100：(0.5-2)；酶B为果胶酶；酶解温度为40-55℃；酶解时间为2-4h。
优选地，所述卷柏提取物的具体提取方法为：每克卷柏粉碎物加入15～25mL80％乙醇，回流提取过滤，收集滤液，滤渣再重复提取，将滤液合并后减压浓缩回收乙醇，得到粗提取物，进一步层析纯化，洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收乙醇即得卷柏提取物。
优选地，所述洗脱方法为：先用纯水洗脱，再分别用40％、60％乙醇洗脱。
优选地，所述麦冬提取物的具体提取方法为：每克夏枯草粉碎物加入15～25mL70％乙醇，超声、浸提，离心后浓缩，洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收乙醇即得夏枯草提取物。优选地，所述超声为以330w功率超声30min；所述浸提70℃下浸提0.5-1.5小时；所述洗脱方法为：先用纯水洗脱，再用60％乙醇洗脱。
优选地，上述制备方法中，所述回流为在80-90℃下提取2～3.5h；所述层析纯化为使用树脂柱纯化；所述灭酶温度为90℃。
第三方面，本发明提供了一种促进水通道蛋白表达、增强屏障的面膜精华液，包括上述增强皮肤屏障的组合物、保湿剂、螯合剂、增稠剂、防腐剂、增溶剂、芳香剂、皮肤调理剂和水；所述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物在面膜精华液中的重量百分比为1～3％。
优选地，上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的面膜精华液，以面膜精华液的重量计，所述保湿剂包括1～3％甘油、2～5％1,3-丙二醇、0.5～1％芦芭胶、0.02～0.05％尿囊、0.05～0.1％透明质酸钠、0.05～0.1％泛醇和0.2～0.5％1,2-己二醇；所述螯合剂为0.02～0.05％EDTA二钠；所述增稠剂包括0.05～0.1％卡波姆和0.05～0.2％纤维素；所述防腐剂为0.2～0.4％对羟基苯乙酮；所述增溶剂为0.01～0.012％PEG-40氢化蓖麻油；所述芳香剂为0.001～0.003％香精；所述皮肤调理剂为1～3％L-精氨酸；水余量。
第四方面，本发明提供了上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的面膜精华液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将1～3％甘油、2～5％1,3-丙二醇、0.5～1％芦芭胶、0.02～0.05％尿囊、0.05～0.1％透明质酸钠、0.05～0.1％泛醇、0.2～0.5％1,2-己二醇、0.02～0.05％EDTA二钠、0.05～0.1％卡波姆、0.2～0.4％对羟基苯乙酮、0.05～0.2％纤维素于80～85℃温度下混合，搅拌至完全溶解，保温灭菌后得到A相混合物，保温；
(2)将0.01～0.012％PEG-40氢化蓖麻油和0.001～0.003％香精搅拌加热80～85℃溶解完全得到B相混合物，保温；
(3)将步骤(1)中所得的A相混合物在均质搅拌下加入B相混合物，均质，搅拌保温后开始降温；
(4)当温度降到40～45℃时，加入1～3％L-精氨酸、组合物搅拌均匀后即制得促进水通道蛋白表达、增强屏障的化妆品。
第五方面，本发明提供了一种促进水通道蛋白表达、增强屏障的面膜，包括上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的面膜精华液。
本发明组合物可用于化妆品中，具有用量低、安全有效、天然无刺激等优点。
本发明的有益效果在于：
本发明将富含植物多糖的四种植物提取物：白及提取物、麦冬提取物、玉竹提取物和卷柏提取物搭配使用制备组合物时，通过充分发挥各植物提取物之间的协同增效作用，能够显著提高促进皮肤细胞水通道蛋白表达及增强皮肤屏障效果，主要能促进皮肤表皮层水通道蛋白的表达，水通道蛋白能运输表皮所需的小分子物质，增强皮肤屏障，减少皮肤经皮失水，通过相互作用，达到快速和长效保护皮肤的目的。任一植物提取物缺失或用量减少，均会导致效果变差。与抗炎舒缓的两种植物提取物：雪菊提取物和夏枯草提取物复配，与单一的舒缓植物提取物相比，使得制备得到的植物提取物兼具更显著的舒缓功效。该植物萃取多效组合物可用于化妆品中，具有用量低、安全有效、天然无刺激等优点。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1：
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物3份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份、夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)通过醇提得到白及提取物，具体为：每克白及粉碎物加入20～30mL的30％乙醇，回流条件下提取2～3h，过滤，收集滤液，将滤液减压浓缩回收乙醇，得到粗提取物，然后使用HPD-600大孔树脂进行层析纯化，得提取液A；收集1次提取后的药渣，每克加入40～60mL纯水，在80度条件下回流提取2～3h，过滤，收集滤液，浓缩至原体积的1/10-20得到提取液B；合并提取液A和B，即得白及提取物；
(2)将麦冬粉碎后进行水提得到麦冬提取物，具体为：每克麦冬粉碎物加入30～50mL纯水，在85度条件下回流条件下提取2～3.5h，高速离心后过滤，收集滤液，将滤液再进行板框过膜至澄清，即得麦冬提取物；
(3)将玉竹粉碎后进行酶解、水提、酶解得到玉竹提取物，具体为：每克玉竹粉碎物加入40～50mL水，加入质量比为2：1的纤维素酶和ɑ淀粉酶进行酶解；玉竹与酶的质量比为100：(0.5-2)；酶解温度为50-60℃，酶解时间为2-3h，灭酶温度为90℃，在该温度条件下回流条件下提取2～3h，高速离心后过滤，收集滤液，将滤液浓缩即得玉竹提取物；
(4)将雪菊粉碎后进行酶解、水提得到雪菊提取物，具体为：每克雪菊粉碎物加入20～30mL水，加入果胶酶进行酶解；雪菊与酶的质量比为100：(0.5-2)，酶解温度为40-55℃，酶解时间为2-4h，灭酶温度为90℃，在该温度条件下回流条件下提取2～3h，高速离心后过滤，收集滤液，将滤液浓缩即得雪菊提取物；
(5)通过醇提得到卷柏提取物，具体为：每克卷柏粉碎物加入15～25mL 80％乙醇，回流条件下提取2～3h，过滤，收集滤液，滤渣再重复提取1次，将滤液合并后减压浓缩回收乙醇，得到粗提取物，使用AB-8大孔树脂进行层析纯化，先用纯水进行洗脱，再分别用40％、60％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩回收乙醇即得卷柏提取物；
(6)通过醇提得到夏枯草提取物；具体为：每克夏枯草粉碎物加入15～25mL70％乙醇，以330w功率下超声30min，然后加热至70℃浸提0.5-1.5小时；离心后将提取液浓缩至原体积的1/5，然后加入D-101树脂柱中，先用纯水进行洗脱，再用60％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩回收乙醇即得夏枯草提取物。
(7)按重量份称取步骤(1)-(6)所得的提取物，混合均匀，即得到促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物。
实施例2
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物3份、麦冬提取物3份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份、夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法同实施例1。
实施例3
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物3份、玉竹提取物2份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份、夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法同实施例1。
实施例4
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物2份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份、夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法同实施例1。
实施例5
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物3份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物0.5份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份、夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法同实施例1。
实施例6
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物3份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物1份、夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法同实施例1。
实施例7
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物3份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份、夏枯草提取物0.1份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法同实施例1。
实施例8
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物4份、麦冬提取物4份、玉竹提取物3份、卷柏提取物2份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物3份、夏枯草提取物1份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法同实施例1。
实施例9：
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物1份、麦冬提取物1份、玉竹提取物1份、卷柏提取物0.1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物1份、夏枯草提取物0.1份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法同实施例1。
实施例10：
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物6份、麦冬提取物4份、玉竹提取物4份、卷柏提取物2份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物3份、夏枯草提取物1份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法同实施例1。
实施例11：
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物3份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法与实施例1的区别为：不加入雪菊提取物。
实施例12：
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物3份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法与实施例1的区别为：不加入夏枯草提取物。
实施例13：
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种实施例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物3份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物1份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法与实施例1的区别为：不加入雪菊提取物以及夏枯草提取物。
对比例1
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种对比例，包括以下重量份的组分：麦冬提取物3份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份、夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法与实施例1的区别在于：不加入白及提取物。
对比例2
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种对比例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、玉竹提取物2.5份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份、夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法与实施例1的区别在于：不加入麦冬提取物。
对比例3
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种对比例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物3份、卷柏提取物1份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份、夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法与实施例1的区别在于：不加入玉竹提取物。
对比例4
本发明的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的一种对比例，包括以下重量份的组分：白及提取物3.5份、麦冬提取物3份、玉竹提取物2.5份。
上述促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物还包括雪菊提取物2份、夏枯草提取物0.5份。
上述的促进水通道蛋白表达、增强屏障的组合物的制备方法与实施例1的区别在于：不加入卷柏提取物。
试验例一：总糖含量测定
在实施例1～13、对比例1～4制得的组合物中取样，并对样品中总糖的含量进行测定，具体方法如下：
(1)参比溶液的配制：精密称取105℃干燥恒重的葡萄糖标准品0.2g，用蒸馏水溶解并定容于100.00mL容量瓶中，吸取5.00mL此溶液再定容于100.00mL容量瓶中，得到浓度为0.1g/L的标准葡萄糖溶液。准确吸取标准溶液0(空白)、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70mL分别置于具塞试管中，加超纯水使体积为1.0mL，再加入体积分数6％的苯酚溶液1.0mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，振摇5min，置沸水浴中加热15min，再置冷水中冷却至室温。
(2)在样品的待测试管中取供试品溶液1.0mL，加入体积分数6％的苯酚溶液1.0mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，振摇5min，置沸水浴中加热15min，再置冷水中冷却至室温。
(3)分光光度计于490nm处测定吸光度A，依据标准曲线换算出样品中总糖的含量，检测结果如表1所示。
表1各样品中总糖的含量检测结果
由上表1可知：实施例1～13与对比例1-4相比，总糖含量存在较明显的差距，具体原因为：白及提取物、麦冬提取物、玉竹提取物、卷柏提取物中主要存在的活性物为多糖类物质，缺失其中的任一种植物提取物均会导致制备的组合物的总糖含量的减少。
试验例二：促进水通道蛋白功效测定
在实施例1～13、对比例1～4制得的组合物中取样，并对样品促进水通道蛋白功效进行测定，具体方法如下：
(1)细胞接种：用细胞培养基稀释细胞至接种密度(接种后24h融合度达到45％～60％)，接种至96孔板中，每孔液量为200μL，放置于CO2培养箱中培养24±2h。
(2)给药：弃掉96孔板中的培养基，开展给药操作。受试物孔中加入含有受试物(1％)的培养基，阳性对照孔中加入含有阳性对照的培养基，空白/溶剂对照孔中加入正常的细胞培养基，每孔200μL。给药完毕后将96孔板放置在CO2培养箱中培养24h±2h。
(3)测试：待样品培养一段时间后，收集所有细胞，后采用细胞裂解或超声波裂解细胞后，采用酶免试剂盒进行测试，检测结果如下表2所示。
表2各样品中促进水通道蛋白浓度检测结果
由上表2可知：与实施例1～13相比，对比例1～4的促进水通道蛋白浓度功效下降明显。具体原因如下：白及提取物、麦冬提取物、玉竹提取物、卷柏提取物中主要存在的活性物为多糖类物质，缺失其中任一种植物会均导致其总糖含量的减少；而植物多糖可促进角质细胞水通道蛋白的表达，因此缺少白及提取物、麦冬提取物、玉竹提取物、卷柏提取物中的任一种均会导致组合物促进水通道蛋白浓度提升的功效下降。实施例1～13的总糖含量高，因此，相比于对比例1～4，其制备的组合物显著促进水通道蛋白上调，故选取实施例1～13做下一步人体功效测试。
试验例三：人体功效测试-角质层促进皮肤细胞水通道蛋白表达功效测定
在实施例1～13制得的组合物中取样，并对样品进行人体功效测试，即对角质层促进皮肤细胞水通道蛋白表达功效进行测定，具体方法如下：
(1)年龄在16～65岁之间(妊娠或哺乳期妇女除外)的受试者30人。要求前臂测试区域电容法皮肤水分测定仪的基础值在15～40之间，无严重系统疾病、无免疫缺陷或自身免疫性疾病者，无活动性过敏性疾病，既往对护肤类化妆品无严重过敏史者，近一月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者，未参加其它临床试验者。
(2)受试部位前2～3天不能使用任何产品(化妆品或外用药品)。试验前，受试者需要同意清洁双手前臂内测，用干的面巾纸擦拭干净。清洁后在受试者双手前臂内测做好测量区域标记。正式测试前应该在符合标准的房间内(测试环境温度：22±1℃，湿度：50±5％，并且进行实时动态监测)静坐至少30min，不能喝水，前臂暴露，呈测试状态放置，保持放松。
(3)实验中左右手臂内侧标记3×3cm2试验区域，同一手臂可同时标记多个区域，区域间隔1cm。测试产品(测试样品为实施例1～13的组合物，配制成2％含量的水溶液和空白对照均随机分布在左右手臂上。测试受试区域的MMV值，并记录。每个区域依照平行测定5次。先测量各测试区域的空白值，然后按2.0±0.1mg样品/cm2的用量，使用乳胶指套将试验均匀涂布于试验区内。涂抹后测量3小时后受试区域和空白对照区域的皮肤含水量(验证时按此时间测定)。同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成，检测结果如下表3所示。
表3各样品中角质层含水量检测结果
由上表3可知：实施例1、6～8、10～13制备的组合物相比实施例2-5保湿功效良好。故选取实施例1、6～8、10～13做下一步研究。本发明的实施例2～5的保湿性能相对实施例1、6～8、10～13较差，其原因在于白及提取物、麦冬提取物、玉竹提取物、卷柏提取物中的任一种植物提取物的重量份的减少，导致组合物的多糖含量降低，植物提取物间的协同作用减弱而导致人体保湿效果降低。
试验例四：舒缓功效测定
在实施例1、6～8、10～13制得的组合物中取样，并对样品的舒缓功效进行测定，具体方法如下：
(1)使用96孔细胞培养板为实验载体，每孔加入斑马鱼24hpf健康、无畸形、正常发育的鱼胚5枚，设置3个复孔。
(2)用移液枪吸干养殖水后，除去96孔板中的缓冲水，然后向空白组中每孔加入200uL标准稀释水，模型组中每孔加入100uL标准稀释，阳性组中每孔加入100uL的阳性对照试剂溶液，
(3)样品组每孔分别中加入100uL相应浓度的受试物溶液(稀释为1％)，盖上培养板面板，在(28.0±0.5)℃生化培养箱中孵育1h。
(4)1h后，除空白对照组外，模型组、阳性组、样品组每孔分别加入100uL造模剂，盖上培养板面板，在(28.0±0.5)℃生化培养箱中孵育15min后，录制30s视频,统计结果分析数据。
(5)统计每组胚胎自旋运动次数，使用以下公式分析其相对刺激强度。使用GraphPad Prism8.0不同组间利用One-way ANOVA进行显著性分析，判定P<0.05为有显著性差异。
表4各样品中斑马鱼舒缓行为学检测结果
造模后刺激强度 样品舒缓后相对刺激强度
实施例1 9.375 2.8125
实施例6 10.648 7.989
实施例7 9.541 6.894
实施例8 10.242 3.753
实施例10 9.254 3.216
实施例11 9.625 8.5625
实施例12 9.964 9.0625
实施例13 8.975 9.642
空白样 11.875 10.625
检测结果如下表4所示。与实施例11-13相比，实施例1、6～8、10得到的组合物的舒缓功效良好。实施例11-13的舒缓性能相对较差，与空白样没有太大差距，其原因在于单一的舒缓植物提取物效果弱于两种舒缓植物提取物搭配，组合物添加了雪菊提取物与夏枯草提取物组成的舒缓组合物后，协同增效，舒缓性能明显得到提升。本发明的实施例6～7的舒缓性能相对实施例1、8、10较差，其原因在于雪菊提取物、夏枯草提取物中的任一种植物提取物的重量份的减少，导致组合物的舒缓活性物含量降低，植物提取物间的协同作用减弱而导致舒缓性能效果降低。
本发明的实施例8、实施例10植物提取物的重量份数虽然比实施例1大，但保湿和舒缓功效与实施例1没有显著性差异，故经济的角度上，选取实施例1为最优方案。
综上所述，本发明将富含植物多糖的四种植物提取物：白及提取物、麦冬提取物、玉竹提取物和卷柏提取物搭配使用制备组合物时，在提高水通道蛋白的浓度、保湿上具有显著的优势；对皮肤的深层保湿、皮肤屏障性能的提升有非常明显的帮助，特别是对皮肤的补水效果有着非常明显的促进作用。任一植物提取物缺失或用量减少，均会导致效果变差。再与抗炎舒缓的两种植物提取物：雪菊提取物和夏枯草提取物复配，与单一的舒缓植物提取物相比，使得制备得到的组合物兼具更显著的舒缓功效。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (3)

1.一种促进皮肤细胞水通道蛋白表达、增强皮肤屏障的组合物，其特征在于，由以下重量份的组分组成：白及提取物1-6份、麦冬提取物1-4份、玉竹提取物1-4份、卷柏提取物0.1-2份、雪菊提取物为1-3份和夏枯草提取物0.1-1份；所述白及提取物的提取方法为：每克白及粉碎物加入20～30mL 30％乙醇，回流提取过滤，收集滤液，减压浓缩回收乙醇得到粗提取物，进一步层析纯化，得到提取液A；收集第1次提取后的药渣，加入40～60mL水，回流提取过滤，收集滤液，浓缩得到提取液B；合并提取液A和B，即得白及提取物；所述麦冬提取物的提取方法为：每克麦冬粉碎物加入30～50mL水，回流提取离心后过滤，收集滤液，过膜至澄清，即得麦冬提取物；所述玉竹提取物的提取方法为：每克玉竹粉碎物加入40～50mL水，加入复合酶A进行酶解，灭酶，回流提取离心后过滤，收集滤液，将滤液浓缩即得玉竹提取物；所述玉竹粉碎物与复合酶A的质量比为100：(0.5-2)；复合酶A为纤维素酶和ɑ淀粉酶，质量比为2：1；酶解温度为50-60℃；酶解时间为2-3h；所述雪菊提取物的提取方法为：每克雪菊粉碎物加入20～30mL水，加入酶B进行酶解，灭酶，回流提取离心后过滤，收集滤液，将滤液浓缩即得雪菊提取物；所述雪菊粉碎物与酶B的质量比为100：(0.5-2)；酶B为果胶酶；酶解温度为40-55℃；酶解时间为2-4h；所述卷柏提取物的提取方法为：每克卷柏粉碎物加入15～25mL80％乙醇，回流提取过滤，收集滤液，滤渣再重复提取，将滤液合并后减压浓缩回收乙醇，得到粗提取物，进一步层析纯化，洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收乙醇即得卷柏提取物；所述夏枯草提取物的提取方法为：每克夏枯草粉碎物加入15～25mL 70％乙醇，超声、浸提，离心后浓缩，洗脱，收集洗脱液，减压浓缩回收乙醇即得夏枯草提取物。
2.如权利要求1所述的促进皮肤细胞水通道蛋白表达、增强皮肤屏障的组合物，其特征在于，由以下重量份的组分组成：白及提取物3.5-4份、麦冬提取物3-4份、玉竹提取物2.5-3份、卷柏提取物0.5-2份、雪菊提取物为1-3份、夏枯草提取物0.1-1份。
3.一种如权利要求1-2任一项所述的促进皮肤细胞水通道蛋白表达、增强皮肤屏障的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
按重量份称取所述白及提取物、麦冬提取物、玉竹提取物、卷柏提取物、雪菊提取物和夏枯草提取物，混合均匀，即得到促进皮肤细胞水通道蛋白表达、增强皮肤屏障的组合物。
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