CN115436520B - 一种丝瓜络uplc特征图谱的构建和检测方法 - Google Patents
一种丝瓜络uplc特征图谱的构建和检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115436520B CN115436520B CN202211108737.6A CN202211108737A CN115436520B CN 115436520 B CN115436520 B CN 115436520B CN 202211108737 A CN202211108737 A CN 202211108737A CN 115436520 B CN115436520 B CN 115436520B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- luffa
- uplc
- extraction
- peaks
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 235000003956 Luffa Nutrition 0.000 title claims abstract description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 title claims description 24
- 244000050983 Luffa operculata Species 0.000 title 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 43
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 19
- 241000219138 Luffa Species 0.000 claims abstract description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 18
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N trans-caffeic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N 0.000 claims description 14
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N (E)-3,4,5-trihydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 claims description 7
- 235000004883 caffeic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- 229940074360 caffeic acid Drugs 0.000 claims description 7
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N cis-caffeic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 5
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 5
- WKOLLVMJNQIZCI-UHFFFAOYSA-N vanillic acid Chemical compound COC1=CC(C(O)=O)=CC=C1O WKOLLVMJNQIZCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- TUUBOHWZSQXCSW-UHFFFAOYSA-N vanillic acid Natural products COC1=CC(O)=CC(C(O)=O)=C1 TUUBOHWZSQXCSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 7
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 abstract description 7
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 abstract description 2
- 244000302544 Luffa aegyptiaca Species 0.000 description 21
- 235000009814 Luffa aegyptiaca Nutrition 0.000 description 20
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 description 17
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 12
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 2
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- -1 galactans Polymers 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- LUEWUZLMQUOBSB-GFVSVBBRSA-N mannan Chemical class O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@H](O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]3O)CO)[C@@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-GFVSVBBRSA-N 0.000 description 1
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 1
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/36—Control of physical parameters of the fluid carrier in high pressure liquid systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明公开了一种丝瓜络UPLC特征图谱的构建和检测方法，包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：取丝瓜络，加入提取溶剂进行提取，得到供试品溶液；（2）特征图谱的建立：吸取上述的供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，得到UPLC特征图谱；（3）色谱峰的归属：与对照品比对，对其共有峰进行归属。本发明通过采用超高效液相色谱法，并对色谱条件进行合理控制，共确定了7个特征峰，其中4个峰经指认为有机酸类成分，专属性较好，能够比较全面地反应丝瓜络的特征，可以为丝瓜络的内在质量控制提供新的分析手段，检测全面、快速、简便，分析效率高，溶剂消耗量少，对环境污染小。
Description
技术领域
本发明涉及一种特征图谱的构建和检测方法，尤其涉及一种丝瓜络UPLC特征图谱的构建和检测方法。
背景技术
目前研究发现丝瓜络中主要含有木聚糖及纤维素，还含有甘露聚糖、半乳聚糖及木质素等。不同品种和产地的丝瓜络均有较高含量的多糖。丝瓜络中含有多种丝瓜皂苷、黄酮和酚类、蛋白质和氨基酸类、油脂和无机元素及有机酸类等。
丝瓜络为较常用中药，但关于丝瓜络的研究资料较少，缺乏整体质量控制手段。中药指纹图谱或特征图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，可用于评价中药材、中药制剂以及半成品质量，是对中药整体质量控制的手段，能够系统、整体、专属地来表征中药的内在特征。
在现有技术中关于丝瓜络的特征图谱或指纹图谱的研究较少，仅有的1篇关于药材方面的专利为刘丽娟等(CN201510732396.3)的一种关于丝瓜络的高效液相色谱指纹图谱建立及其标准指纹图谱和用途，该方法色谱分析时间长达80分钟，基线波动较大，色谱峰的分离度不佳，且峰对应的化学成分不明确。在供试品制备过程中，采用聚酰胺色谱柱，经过水洗、30％乙醇洗脱，制备过程较为复杂，不利于快速、大量的检测。
发明内容
发明目的：本发明旨在提供一种检测全面、快速、简便的丝瓜络UPLC特征图谱的构建和检测方法。
技术方案：本发明所述的丝瓜络UPLC特征图谱的构建方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取丝瓜络，加入提取溶剂进行提取，得到供试品溶液；
(2)特征图谱的建立：吸取上述的供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，得到UPLC特征图谱；
(3)色谱峰的归属：与对照品比对，对其共有峰进行归属，其中4个峰经指认为有机酸类成分，分别为原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸和咖啡酸。
进一步地，步骤(1)中所述提取溶剂为甲醇，水，体积浓度为30-70％甲醇水溶液或30-70％乙醇水溶液中的任意一种。
进一步地，步骤(1)中所述提取方式为超声处理、振摇提取或加热回流，提取时间为15-60min。
进一步地，步骤(2)中所述超高效液相相色谱的条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液或水为流动相B，按以下梯度进行洗脱：0min-3min-9min-15min-21min-28min-30min，流动相A：2％-3％-6％-8％-9％-10％-10％。
进一步地，所述色谱柱柱温为30-40℃；检测波长为235nm～260nm；流动相流速为0.25-0.35ml/min。
进一步地，所述UPLC特征图谱包括7个特征峰，以峰4为参比峰，峰1～7的相对保留时间分别为0.43±10％，0.69±10％，0.90±10％，1.00±10％，1.08±10％，1.58±10％，1.82±10％。
进一步地，步骤(3)中所述4个峰分别对应于7个特征峰中的峰1，峰2，峰4和峰5。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：(1)检测全面、快速、简便；本发明通过采用超高效液相色谱法，并对色谱条件进行合理控制，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液或水为流动相B进行梯度洗脱，在30分钟内即可完成整个分析过程。样品处理中采用了乙酸乙酯进行萃取浓缩，比采用聚酰胺色谱柱洗脱更为快捷、方便，同时也减少了杂质对色谱峰的干扰，提升了色谱峰的响应值。共确定了7个特征峰，其中4个峰经指认为有机酸类成分，专属性较好，能够比较全面地反应丝瓜络的特征，可以为丝瓜络的内在质量控制提供新的分析手段，并达到鉴别不同产地、不同来源丝瓜络的目的；(2)本发明方法简单，重现性好，准确可靠，便于操作，相比于HPLC来说，分析效率高，溶剂消耗量少，对环境污染小。
附图说明
图1为全波长扫描下丝瓜络药材的3D UPLC色谱图；
图2为230nm～270nm波长条件下丝瓜络的UPLC色谱图；
图3为不同提取溶剂条件下丝瓜络药材的UPLC色谱图；
图4为不同提取方式下丝瓜络药材的UPLC色谱图；
图5为不同提取时间下丝瓜络药材的UPLC色谱图；
图6为不同萃取次数下丝瓜络药材的UPLC色谱图；
图7为对照品指认结果图；
图8为丝瓜络药材UPLC叠加图；
图9为丝瓜络药材UPLC药材对照图谱；
图10为不同色谱柱条件下丝瓜络药材的UPLC色谱图；
图11为不同柱温条件下丝瓜络药材的UPLC色谱图；
图12为不同流速条件下丝瓜络药材的UPLC色谱图；
图13为不同仪器条件下丝瓜络药材的UPLC色谱图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例1
所述丝瓜络药材UPLC特征图谱的构建方法步骤如下：
1仪器、试剂与样品
Waters ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱仪系统；Waters QuaternarySolvent Manager四元泵；Sample Manager-FTN自动进样器；Waters UPLC PDA检测器；Empower 3色谱工作站；Agilent G6530 Accurate-Mass Q-TOF质谱联用仪(Agilent公司)；Agilent Mass Hunter Workstation数据采集及定性分析软件(Agilent公司)；AgilentTechnologies 1290 Infinity超高效液相色谱仪；1290DAD二极管阵列检测器；1290MCT柱温箱；1290Vialsampler自动进样器；1290Fiexible pump四元泵；OpenLAB CDS 2.3色谱工作站。METTLER TOLEDO XP6百万分之一天平；ME204E型电子分析天平；KQ-250B超声清洗机；Milli-Q IQ型纯水系统；AS165W型离心机；GKC114控温水浴锅。乙腈；水为超纯水；磷酸；原儿茶酸；香草酸；咖啡酸；对羟基苯甲酸。
2色谱条件的确定
2.1检测波长的确定
取丝瓜络药材约1.5g，精密称定，加水25ml，加热回流60分钟，放冷，滤过，滤液转移至分液漏斗中，残渣及容器用少量水分次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次25ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干。残渣加70％体积浓度的甲醇水溶液使溶解，转移至5ml量瓶中，加70％体积浓度的甲醇水溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
取上述供试品溶液，按照表1进行梯度洗脱，记录200～400nm范围内的吸收光谱。
表1梯度洗脱表
结果如图1及图2所示，在230nm～270nm之间，丝瓜络样品中可检测的色谱峰较多，且分离效果较好。其中，254nm可作为优选的检测波长。
2.2供试品溶液的制备
(1)提取溶剂的考察
取丝瓜络药材粉末约1.5g，平行5组，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入25ml水、30％体积浓度的甲醇水溶液、50％体积浓度的甲醇水溶液、70％体积浓度的甲醇水溶液和甲醇，加热回流60分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，用25ml水溶解并转移至分液漏斗中，残渣及容器用少量水分次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次25ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干。残渣加70％体积浓度的甲醇水溶液使溶解，转移至5ml量瓶中，加70％体积浓度的甲醇水溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见图3。
按“2.1”项下色谱条件进样，得到丝瓜络特征图谱不同提取溶剂考察结果见表2，图3。
表2丝瓜络特征图谱提取溶剂考察(峰面积/称样量)
实验结果：由不同提取溶剂的UPLC图可知，高浓度甲醇外其他提取溶剂均处在7个色谱峰，计算提取溶剂得暂定的7个色谱峰的总峰面积与称样量的比值，水提取时相对较高，可作为优选的提取溶剂。
(2)提取方式的考察
取丝瓜络药材粉末约1.5g，平行3组，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，分别超声处理(功率250W，频率40kHz)、振摇提取、加热回流60分钟，放冷，滤过，滤液转移至分液漏斗中，残渣及容器用少量水分次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次25ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干。残渣加70％体积浓度的甲醇水溶液使溶解，转移至5ml量瓶中，加70％体积浓度的甲醇水溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按“2.1”项下色谱条件进样，得到丝瓜络特征图谱不同提取方式的考察结果见图4。
实验结果：比较不同提取方式的色谱图可知，只有加热回流的色谱峰较完整，因此加热回流可作为丝瓜络药材特征图谱优选的提取方式。
(3)提取时间的考察
取丝瓜络药材粉末约1.5g，平行4组，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，分别加热回流30分钟、60分钟、90分钟、120分钟，放冷，滤过，滤液转移至分液漏斗中，残渣及容器用少量水分次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次25ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干。残渣加70％体积浓度的甲醇水溶液使溶解，转移至5ml量瓶中，加70％体积浓度的甲醇水溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
按“2.1”项下色谱条件进样，得到丝瓜络特征图谱不同提取时间考察结果见表3，图5。
表3丝瓜络特征图谱提取时间考察(峰面积/称样量)
实验结果：由结果可知，不同提取时间时各色谱峰总峰面积与称样量的比值发现除30分钟外，其他时间的提取效率相差不大，60分钟可作为优选的提取时间。
(4)萃取时间的考察
取丝瓜络药材粉末约1.5g，平行3组，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25ml，加热回流60分钟，放冷，滤过，滤液转移至分液漏斗中，残渣及容器用少量水分次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用乙酸乙酯分别振摇提取1次、2次、3次，每次25ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干。残渣加70％体积浓度的甲醇水溶液使溶解，转移至5ml量瓶中，加70％体积浓度的甲醇水溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按“2.1”项下色谱条件进样，得到丝瓜络特征图谱不同萃取次数考察结果见表4，图6。
表4丝瓜络药材图谱峰结果不同萃取次数比较
实验结果：由结果可知，不同萃取次数时各色谱峰总峰面积与称样量的比值萃取两次与萃取三次相差较小，因此萃取次数为2次可作为优选的参数。
3特征图谱的建立
3.1精密吸取多批次供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪。
3.2测定16批丝瓜络药材并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成UPLC特征图谱，如图7所示，包含7个共有特征峰。
将选定的多批次批样品，将其导入国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.0版本)”，选取时间窗宽度为0.1min，以中位数生成对照图谱，经多点校正后Mark峰匹配，生成丝瓜络药材特征图谱共有模式见图8，以峰4为参照峰，计算出该特征图谱具有的共有峰的相对保留时间及相对峰面积见表5～6。
表5 16批丝瓜络药材相对保留时间
表6 16批丝瓜络药材相对峰面积
结果表明，以上样品中特征峰的保留时间比值较稳定，RSD均小于2％，各特征峰的相对峰面积的差异较大，说明不同批次产品各成分个体的相对量上有较大差异，故特征峰相对峰面积暂不列入标准。
4共有峰的归属
取原儿茶酸对照品、对羟基苯甲酸对照品、香草酸对照品、咖啡酸对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含原儿茶酸5μg、对羟基苯甲酸10μg、香草酸5μg、咖啡酸5μg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪。供试品中峰1、峰2、峰4、峰5的保留时间及紫外光谱分别与参照物中原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸、咖啡酸对照品溶液吻合，故分别归属为原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸、咖啡酸。具体见图9。
实施例2
特征图谱构建方法的方法学验证
(1)精密度考察
取实施例1中同一供试品溶液，连续进样6次，以峰4为参照峰，计算出7个共有特征峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值(表7、表8)均小于3％，表明仪器方法稳定，精密度良好。
表7精密度实验结果(相对保留时间)
表8精密度实验结果(相对峰面积)
(2)重复性考察
取实施例1中同一批次丝瓜络粉末，精密称取6份，按实施例1供试品制备方法平行制备6份供试品溶液，分别进样，以4号峰为参照峰，计算出7个共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值(表9、表10)均小于3％，表明所述构建方法重复性良好。
表9重复性实验结果(相对保留时间)
表10重复性实验结果(相对峰面积)
(3)稳定性考察
取同一份供试品溶液，分别于0、4、8、12、16、20、24h进样分析，以4号峰为参照峰，计算7个共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值(表11、表12)均小于3％，表明供试品溶液至少在24小时内稳定。
表11稳定性实验结果(相对保留时间)
表12稳定性实验结果(相对峰面积)
(4)耐用性考察
1)不同色谱柱的考察
比较了3种色谱柱，分别是：Waters Acquity CORTECS UPLC T3(100mm×2.1mm,1.6μm)、Agilent SB C18 RRHD(100mm×2.1mm,1.8μm)、Agilent Ecplise C18(100mm×2.1mm,1.8μm)，3根色谱柱对丝瓜络药材特征图谱耐用性的影响。
结果见图10，实验结果发现不同类型色谱柱各峰分离效果均较好。3种色谱柱对比发现，各峰相对保留时间较稳定。
2)不同温度考察
比较不同温度，分别是：30℃，35℃，40℃对丝瓜络药材特征图谱耐用性影响。
结果见图11，结果表明，该分析方法在柱温为30℃～40℃时，耐用性较好。较小的柱温变动能满足系统适用性要求。
3)不同流速考察
比较不同流速，分别是：0.25ml/min、0.30ml/min、0.35ml/min对丝瓜络药材图谱耐用性影响。
结果见图12，流速0.25～0.30ml/min范围内，小的流速变动能满足系统适用性要求。耐用性良好。
4)不同仪器考察
本研究考察了两种不同型号仪器(Waters UPLC和Agilent 1290)的分离效果。
结果见图13，在不同仪器中时，丝瓜络药材暂定的7个色谱峰均能得到良好的分离，耐用性较好。
Claims (4)
1.一种丝瓜络UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取丝瓜络，加入提取溶剂进行提取，所述提取溶剂为甲醇，水，体积浓度为30-70%甲醇水溶液或30-70%乙醇水溶液中的任意一种，放冷，滤过，滤液转移至分液漏斗中，残渣及容器用水分次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用乙酸乙酯振摇提取两次，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，残渣加70%体积浓度的甲醇水溶液使溶解，转移至量瓶中，加70%体积浓度的甲醇水溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液；
（2）特征图谱的建立：吸取上述的供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，得到UPLC特征图谱；超高效液相色谱的条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液或水为流动相B，按以下梯度进行洗脱：0min-3min-9min-15min-21min-28min-30min，流动相A：2%-3%-6%-8%-9%-10%-10%；
（3）色谱峰的归属：与对照品比对，对其共有峰进行归属，其中4个峰经指认为有机酸类成分，分别为原儿茶酸、对羟基苯甲酸、香草酸和咖啡酸。
2.根据权利要求1所述的丝瓜络的UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，步骤（1）中提取方式为超声处理、振摇提取或加热回流，提取时间为15-60min。
3.根据权利要求1所述的丝瓜络的UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，色谱柱柱温为30-40℃；检测波长为235nm~260nm。
4.根据权利要求1所述的丝瓜络的UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，流动相流速为0.25-0.35ml/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211108737.6A CN115436520B (zh) | 2022-09-13 | 2022-09-13 | 一种丝瓜络uplc特征图谱的构建和检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211108737.6A CN115436520B (zh) | 2022-09-13 | 2022-09-13 | 一种丝瓜络uplc特征图谱的构建和检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115436520A CN115436520A (zh) | 2022-12-06 |
| CN115436520B true CN115436520B (zh) | 2023-11-07 |
Family
ID=84247043
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211108737.6A Active CN115436520B (zh) | 2022-09-13 | 2022-09-13 | 一种丝瓜络uplc特征图谱的构建和检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115436520B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102426211A (zh) * | 2011-07-20 | 2012-04-25 | 石河子大学 | 大麦籽粒中酚酸类化合物的定量测定方法 |
| CN105203670A (zh) * | 2015-11-02 | 2015-12-30 | 黑龙江大学 | 一种丝瓜络的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用途 |
| CN112730671A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-04-30 | 江阴天江药业有限公司 | 一种丝瓜络标准汤剂的超高效液相色谱检测方法及其应用 |
-
2022
- 2022-09-13 CN CN202211108737.6A patent/CN115436520B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102426211A (zh) * | 2011-07-20 | 2012-04-25 | 石河子大学 | 大麦籽粒中酚酸类化合物的定量测定方法 |
| CN105203670A (zh) * | 2015-11-02 | 2015-12-30 | 黑龙江大学 | 一种丝瓜络的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱和用途 |
| CN112730671A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-04-30 | 江阴天江药业有限公司 | 一种丝瓜络标准汤剂的超高效液相色谱检测方法及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Antioxidant Constituents in the Fruits of Luffa cylindrica (L.) Roem;QIZHEN DU et al;J. Agric. Food Chem.;第54卷;4186−4190 * |
| 丝瓜多酚组成、提取分离、含量测定及生物活性的研究进展;张强 等;中国药房;第31卷(第23期);2928-2932 * |
| 基于代谢组学分析丝瓜果肉褐变过程酚酸类物质变化;王雅慧 等;中国农业科学;第54卷(第22期);4869-4879 * |
| 超高效液相色谱法分析丝瓜酚类物质组分及其含量;温文旭 等;园艺学报;第43卷(第7期);1391-1401 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115436520A (zh) | 2022-12-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102520079B (zh) | 一种利用uplc快速测定烟叶中茄尼醇含量的方法 | |
| CN107356691B (zh) | 建曲指纹图谱的检测方法 | |
| CN115060822B (zh) | 基于中药“印迹模板”成分簇的指纹图谱谱量学分析方法 | |
| CN107941950B (zh) | 超高效液相色谱-串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法 | |
| CN111239282B (zh) | 一种测定血液中苯巴比妥的方法、试剂盒及应用 | |
| CN110514775B (zh) | 一种单宁酸的高效液相色谱分析方法 | |
| CN109001311A (zh) | 一种水产品中内外源性雌性激素的液相色谱串联质谱检测方法 | |
| CN105486775A (zh) | 一种右归丸中多种成分含量的检测方法 | |
| CN110927322B (zh) | 一种藿香正气合剂的检测方法 | |
| CN115436520B (zh) | 一种丝瓜络uplc特征图谱的构建和检测方法 | |
| Deng et al. | Quality assessment and origin tracing of Guangdong Liangcha granules using direct mass spectrometry fingerprinting | |
| CN107102078B (zh) | 一种测定栀子黄中黄曲霉毒素b1的方法 | |
| CN114755338A (zh) | 一种藿香及其制剂的检测方法 | |
| CN108267529A (zh) | 伤科黄水制剂的质量控制方法 | |
| CN110687224B (zh) | 雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法 | |
| CN110672751B (zh) | 鲜鱼腥草药材的uplc特征图谱建立方法和检测方法 | |
| CN110031577B (zh) | 一种中药或中药组合物制剂的质量检测方法与鉴别应用 | |
| CN113341031A (zh) | 鉴别红景天药材正品、伪品及代用品的方法 | |
| CN115078588B (zh) | 一种九香虫及其炮制品的质量评价方法 | |
| CN114778730B (zh) | 一种同时检测紫菀药材或紫菀制品中6种有机酸的方法 | |
| CN115266982B (zh) | 一种全面控制落花生枝叶质量的检测方法 | |
| CN114965758B (zh) | 一种泽泻或其药物制剂的特征图谱的构建方法及其用途 | |
| CN112924593B (zh) | 一种久强脑立清的检测方法 | |
| CN113640401B (zh) | 一种土壤中马兜铃酸的检测方法 | |
| CN118090985A (zh) | 一种柿蒂样品uplc特征图谱的构建方法及检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |