CN115364128A - 含锌组合物及其护肝酒、应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及护肝功能性产品技术领域，具体涉及含锌组合物及其护肝酒、应用，本发明的含锌组合物包括以下组分：酿酒酵母提取物1~50重量份；锌盐0.01~10重量份；所述锌盐为硫酸锌和/或乳酸锌。与现有技术相比，本发明提供的含锌组合物的各组分通过协同作用，能够缓解酒精对肝脏的损伤。
Description
技术领域
本发明涉及护肝功能性产品技术领域，更具体地说，涉及含锌组合物及其护肝酒、应用。
背景技术
肝脏是人体最大的消化腺，也是人体最大的解毒器官。酒精被广泛认为对肝脏具有毒害作用。饮酒后，酒精在胃里吸收进入循环系统，当肝脏的解酒速度弱于酒精摄入速度的时候，血液酒精浓度增加，进而增加了肝脏的负担，因此，长期饮酒易导致肝脏受累。当肝脏承受能力达到极限以后，一些肝细胞就可能会彻底崩塌，引起酒精性肝损伤。酒精性肝损伤是指长期大量饮酒造成的肝脏疾患，包括酒精性脂肪肝（AFL）、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化、轻症酒精性肝病、酒精性肝硬化等。酒精性肝损伤通常始于酒精性脂肪肝，其特征是肝脏脂肪变性（甘油三酯在肝细胞中积聚）。部分酒精性脂肪肝会发展成肝脏炎症，这在组织学上被定义为酒精性脂肪性肝炎（ASH）。ASH进展缓慢，持续的慢性肝损伤和炎症最终导致进行性纤维化和肝硬化，最终可能导致肝细胞癌（HCC）的发展。
近年来，随着乙肝疫苗的普及以及抗病毒药物的应用，新发病毒性肝炎病例显著减少。但由于饮酒导致的酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）的发病率却明显增加。据Gao B等2011年的调查研究发现，在重度饮酒者中，约90%（酒精摄入多于60克/天）呈现脂肪肝，10%~35%会发展成酒精性肝炎，5%~15%会发展为肝硬化。
现有技术中已有一些护肝产品，用于在饮酒之前或之后服用，以缓解酒精对肝脏的毒性，但这些产品的护肝功效不理想。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供含锌组合物及其护肝酒、应用，能够有效缓解酒精对肝脏的损伤的功能。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
含锌组合物，包括以下组分：
酿酒酵母提取物1~50重量份；
锌盐0.01~10重量份；
所述锌盐为硫酸锌和/或乳酸锌。
酿酒酵母提取物中的蛋白质含量较高，富含多种氨基酸、功能性肽类物质谷胱甘肽、葡聚糖、甘露聚糖、海藻糖、呈味核苷酸、B族维生素、生物素、微量元素和挥发性芳香化合物等组分。酿酒酵母提取物还含有钙、磷和铁、钾、镁等微量元素。不含胆固醇及饱和脂肪酸，具有纯天然的强烈的呈味性能以及营养成分。
在本发明中，所述含锌组合物优选包括以下组分：
酿酒酵母提取物10~45重量份；
锌盐1~2重量份。
在本发明的一个实施例中，所述含锌组合物包括以下组分：
酿酒酵母提取物11重量份；
锌盐1重量份。
在本发明的一个实施例中，所述含锌组合物包括以下组分：
酿酒酵母提取物22重量份；
锌盐1重量份。
在本发明的一个实施例中，所述含锌组合物包括以下组分：
酿酒酵母提取物45重量份；
锌盐1重量份。
在本发明中，锌盐优选为硫酸锌；所述酿酒酵母提取物所用的酿酒酵母购买自大连兴和酵母有限公司。
在本发明中，所述酿酒酵母提取物的制备方法包括：
将酿酒酵母用水提取1~3次，合并各次提取液，浓缩，得到酿酒酵母提取物。
在本发明中，浓缩后的酿酒酵母提取物的体积与提取液的体积比为1:（10~20），优选为1:15；所述提取的料液比为1:（5~20），优选为1:18；所述提取的温度为80~90℃，优选为85℃；优选的提取次数为2次；每次提取的时间为0.1~1h，优选为20min；所述过筛的目数为200~300目；本发明对提取的溶剂没有特殊限制，采用本领域常用的溶剂即可，优选为水、乙醇、甲醇、丙酮，再优选为去离子水。
在本发明中，浓缩后，所述提取还包括除杂，除杂可采用常用的固液分离方法，优选用离心的方法除去杂质。
在本发明的一个实施例中，所述提取包括以下步骤：将酵母粉碎后过筛，加水提取一定时间，再继续加水提取，合并两次提取液，浓缩，去除杂质，得到酿酒酵母提取物。
本发明还提供了上述含锌组合物在制备护肝产品中的应用。
在本发明中，所述产品可以为食品或饮品，优选为含酒精饮品或不含酒精饮品。
本发明还提供了一种护肝酒，包括上述含锌组合物。
在本发明中，所述含锌组合物在护肝酒中的质量分数为0.01%~0.5%，优选为0.04%~0.1%。
在本发明中，所述酿酒酵母提取物和锌盐的质量比为（1~25）:1，优选为（2~10）:1；
锌盐优选为硫酸锌；
酒为酒精含量为7%-55%的白酒、葡萄酒、黄酒或啤酒；更优选为白酒或葡萄酒，最优选为白酒；
白酒优选为酒精含量大于等于38%的白酒，更优选为酒精含量38%-55%的白酒，最优选为酒精含量40%-55%的白酒，可以为酱香型、浓香型白酒或其他市售的白酒品种；
葡萄酒优选为酒精含量7%-20%的葡萄酒，更优选为酒精含量8%-20%的葡萄酒，葡萄酒可以为市售任意品种的葡萄酒。
在本发明中，所述护肝酒还包括辅料；所述辅料优选为糖、糖醇、果酸、矿物质、食用色素、植物提取物中的一种或多种；
糖优选为蔗糖、葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖中的一种或多种；
糖醇优选为赤藓糖醇、麦芽糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、异麦芽酮糖醇和木糖醇中的一种或多种；
果酸优选为甘蔗酸、葡萄酸、苹果酸、柑橘酸、乳酸、酒石酸、杏仁酸和柠檬酸中的一种或多种；
矿物质优选为钙、镁、钾、钠、磷、硫、氯中的一种或多种；
食用色素优选为天然β胡萝卜素、甜菜红、姜黄素、红花黄、紫胶红、越橘红、辣椒红、辣椒橙、红米红、菊花黄浸膏、黑豆红、高梁红、玉米黄、萝卜红、苋菜红、苋菜红铝色淀、胭脂红、胭脂红铝色淀、赤藓红、赤藓红铝色淀中的一种或多种；
植物提取物优选为薄荷提取物、葡萄籽提取物、绿茶提取物、松树皮提取物、银杏叶提取物、莲子心提取物、红景天提取物、甘草提取物、甜叶菊提取物中的一种或多种。
在本发明中，本发明护肝酒中，除酿酒酵母提取物、锌盐外，不添加任何防腐剂。
人们在摄入上述护肝酒的同时，其中的酿酒酵母提取物和锌盐能够发挥较好的缓解酒精对肝脏损伤的作用。
上述护肝酒的制备方法，包括以下步骤：
将锌盐与酵母提取物混合、溶解得到第一混合物，将第一混合物再与水或酒混合得到第二混合物，将第二混合物去除不溶物后灭菌。
在本发明中，在去除不溶物前，将第二混合物进行超声溶解。
本发明还提供了上述含锌组合物和/或护肝酒在降低谷草转氨酶和/或谷丙转氨酶活性中的应用，优选为上述护肝酒在降低谷草转氨酶和/或谷丙转氨酶活性中的应用。
本发明以小鼠为受试对象，利用所述的护肝酒灌胃处理小鼠，结果表明，所述护肝酒相较于不添加所述含锌组合物的酒精组，能够明显降低小鼠体内谷草转氨酶、谷丙转氨酶的活性，进而避免小鼠急性肝损伤。
本发明还提供了上述含锌组合物和/或护肝酒在提高乙醛脱氢酶活性中的应用，优选为上述护肝酒在提高乙醛脱氢酶活性中的应用。
本发明以小鼠为受试对象，利用所述的护肝酒灌胃处理小鼠，结果表明，所述护肝酒相较于不添加所述含锌组合物的酒精组，能够明显提高小鼠体内乙醛脱氢酶的活性，进而避免小鼠急性肝损伤。
上述含锌组合物和/或护肝酒还能够缩短小鼠的醒酒时间，醒酒的标准为小鼠能够正常活动，无体位改变。
本发明的有益效果在于：本发明提供含有酿酒酵母提取物与锌盐的含锌组合物，酿酒酵母提取物与锌盐联合使用能够极大地提高各组分的协同作用，发挥有效缓解酒精对肝脏损伤的功效。
本发明提供的护肝酒具有较好的护肝作用，能够有效缓解酒精对肝脏的损伤，其中，护肝酒能够在摄入酒精的同时摄入酿酒酵母提取物和锌，能够发挥优异的缓解酒精对肝脏损伤的作用，另外，护肝酒的成分简单，安全性较高。
附图说明
图1为本发明实验例中小鼠的醒酒时间结果；
图2为本发明实验例中小鼠的血清的AST水平测定结果，
图3为本发明实验例中小鼠的血清的ALT水平测定结果；
图4为本发明实验例中小鼠的肝组织ALDH活性的测定结果；
图5为本发明实验例中小鼠的肝组织病理学H&E染色结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为了进一步说明本发明，下面通过以下实施例进行详细说明。本发明以下实施例所用的原料均为市售商品。
实施例1酿酒酵母提取物
本实施例提供了一种酿酒酵母提取物。
提取方法如下：称取5克酿酒酵母，粉碎后过200-300目筛，再加入10倍量的85℃去离子水，提取20 min；提取两次，第二次再加入8倍量的85℃去离子水，提取20 min；合并两次提取液，浓缩至6毫升，离心去除沉淀杂质，得到酿酒酵母提取物，酿酒酵母提取物的密度为0.5g/cm3。酿酒酵母来自大连兴和酵母有限公司的兴和饲料酵母。
实施例2护肝酒
酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组（组别A）
将217 mL的纯水加入283 mL酒精含量53%的酱香型白酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒a。
将实施例1得到的酿酒酵母提取物0.27mL加入500mL 实验用酒a中，形成酒精终浓度为30%的含酿酒酵母提取物的实验用酒，将60 mg硫酸锌加入500 mL酒精终浓度为30%的实验用酒中，即酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组（组别A），含有酿酒酵母提取物0.54 mL/L，含锌离子48.4mg/L（浓度计算过程为：锌离子48.4 mg/L =(60 mg硫酸锌/161)*65/ 0.5L），酿酒酵母提取物0.54 mL/L=1mL* (270/500)/ 1 L）。
本实施例还提供了上述护肝酒的制备方法，具体如下：将硫酸锌加入到酵母提取物中，充分溶解后，再与酱香型白酒混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，分装。
实施例3护肝酒
酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组（组别B）
将实施例1得到的酿酒酵母提取物0.54mL加入500mL 实验用酒a中，形成酒精终浓度为30%的含酿酒酵母提取物的实验用酒，将60 mg硫酸锌加入500 mL酒精终浓度为30%的实验用酒中，即酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组（组别B），含有酿酒酵母提取物1.08 mL/L，含锌离子48.4mg/L （浓度计算过程为：锌离子48.4 mg/L =(60 mg硫酸锌/161)*65/ 0.5L），酿酒酵母提取物1.08 mL/L=1mL* (270/500)/ 0.5 L）。
实施例4护肝酒
酒精+锌+酿酒酵母提取物组（组别C）
将实施例1得到的酿酒酵母提取物1.08 mL加入500mL 实验用酒a中，形成酒精终浓度为30%的含酿酒酵母提取物的实验用酒，将60 mg硫酸锌加入500 mL酒精终浓度为30%的实验用酒中，即酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组（组别C），含有酿酒酵母提取物2.16 mL/L ，含锌离子48.4mg/L（浓度计算过程为：锌离子48.4 mg/L =(60 mg硫酸锌/161)*65/ 0.5L），酿酒酵母提取物2.16 mL/L=1mL* (270/500)/ 0.25 L）。
对比例1
酒精+葡萄糖酸锌+酿酒酵母提取物组
将实施例1得到的酿酒酵母提取物0.54 mL加入500mL 实验用酒a中，形成酒精终浓度为30%的含酿酒酵母提取物的实验用酒，将169 mg葡萄糖酸锌加入500 mL酒精终浓度为30%的实验用酒中，含锌离子48.4mg/L （浓度计算过程为：锌离子48.4 mg/L =(169 mg葡萄糖酸锌/455)*65/ 0.5 L），含有酿酒酵母提取物1.08 mL/L（浓度计算过程为：酿酒酵母提取物1.08 mL/L=1mL* (270/500)/ 0.5 L）。
对比例2
酒精+硫酸锌+裂殖酵母提取物组
将裂殖酵母提取物0.54 mL加入500mL 实验用酒a中，形成酒精终浓度为30%的含酿酒酵母提取物的实验用酒，将60 mg硫酸锌加入500 mL酒精终浓度为30%的实验用酒中，含锌离子48.4mg/L （浓度计算过程为：锌离子48.4 mg/L =(60 mg硫酸锌/161)*65/ 0.5L），含有裂殖酵母提取物1.08 mL/L （浓度计算过程为：酵母提取物1.08 mL/L=1mL* (270/500)/ 0.5 L）。
实验例护肝效果检测
对以上实施例和对比例的护肝酒和无酒精护肝保健饮品（对照组）的护肝效果进行检测，具体如下：
采用Carson等（Carson E J,Pruett S B,Development and characterizationof a binge drinking model in mice for evaluation of the immunological effectsof ethanol.[J] .Alcohol Clin Exp Res, 1996, 20: 132-8.）开发的短期大量狂饮模型（6 g乙醇/kg），用于模拟人类大量饮酒后所造成的急性乙醇损伤。酒精含量53%的酱香型白酒以及各实施例的保健酒通过添加不同比例纯水的方式统一稀释成酒精终浓度为30%的实验用酒。通过灌胃方式给予小鼠20 g/kg体重（6 g乙醇/kg换算为30%的白酒，计算方式为6/30%=20g/kg）的单次口服剂量实验用酒，来模拟人类因短期大量饮酒而造成的急性肝损伤的动物实验模型。
1、实验用酒的配制
将217 mL的纯水加入283 mL酒精含量53%的酱香型白酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒a，即酒精组。
将酿酒酵母提取物0.55 mL加入500mL 实验用酒a中，形成酒精终浓度为30%的含酿酒酵母提取物的实验用酒b，即酒精+酿酒酵母提取物组，实验用酒b中，酿酒酵母提取物的浓度为1.1 mL/L （浓度计算过程为：酿酒酵母提取物1.1 mL/L=1mL* (283/500)/ 0.5L）；
将60 mg硫酸锌加入500 mL酒精终浓度为30%的实验用酒a中，形成酒精终浓度为30%的含锌实验用酒c，即酒精+硫酸锌组，其中含锌离子48.4mg/L （浓度计算过程为：锌离子48.4 mg/L = (60 mg硫酸锌/161)*65/ 0.5 L）；
将实施例2、3、4的护肝酒分别作为实验用酒d、e、f，对比例1、2分别作为实验用酒g、h。
2、动物模型及分组
小鼠：雄性，C57bl/6，周龄（7-8w）。
对照组小鼠通过灌胃接受等热量麦芽糖水；
小鼠通过灌胃以20 g/kg体重的单次口服剂量被给予上述酒精终浓度为53%的实验用酒（酒精组）（20 g/kg的53%酒精度实验用酒的乙醇总量为6 g乙醇/kg），含锌实验用酒（酒精+锌组），含酿酒酵母提取物实验用酒，以及由实施例2中的保健酒为实验用酒和锌与酿酒酵母提取物的终浓度为53%的实验用酒；
分组方法：
将26只C57bl/6小鼠，分入以下各组：
对照组（n=5，等热量麦芽糖水）；
酒精组(n=8，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒a)；
酒精+酿酒酵母提取物组(n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的含锌实验用酒b,其中含酿酒酵母提取物1.1 mL/L)；
酒精+锌组(n=5，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的含锌实验用酒c，其中含锌离子48.4 mg/L)；
酒精+锌+酿酒酵母提取物组(n=5，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒D，其中含锌离子48.4 mg/L，酿酒酵母提取物1.08 mL/L)。
3、根据上述造模及分组方法对各实施例的护肝酒、无酒精护肝保健饮品的功效进行测定，具体方法如下：
酒精灌胃处理后，对小鼠的行为学进行评分，使用先前发表的标准Carson 等（Carson E J,Pruett S B,Development and characterization of a binge drinkingmodel in mice for evaluation of the immunological effects of ethanol.[J].Alcohol Clin Exp Res, 1996, 20: 132-8.）来评估小鼠的醒酒情况， 4个阶段的醉酒状态：完全醒酒，活动正常=1；醒酒，有自发活动，体位轻微改变，但腹部仍高于笼子=2；醉酒，如果有自发活动，明显摇晃，腹部在运动时接触笼子的底部=3；完全醉酒，翻正反射丧失=4，从完全醉酒到完全醒酒的时间为小鼠醒酒时间。并记录小鼠生存率。
在酒精灌胃处理24h后对各组的实验动物进行采血，取材。
采血：眼眶采血。
肝脏：动物通过脱颈致死。沿小鼠腹部中线剖开，使腹部暴露后剥离出肝脏。完整剥离肝脏，分离不同叶。用刀片左叶分成三段，右叶分成两段。
肝脏各叶的组织分配：用刀片左叶分成三段，右叶分成两段：左叶和右叶第一段用于制作病理切片，进行组织学检测；其他叶存于液氮用于分子检测分析等。
（1）醒酒时间：
本实验对急性大量酒精摄入后的醒酒时间进行了观察，结果如图1所示：酒精组的平均醒酒时间是8.4 h，酒精+酿酒酵母提取物组平均醒酒时间是8.8 h，相比于酒精组没有差异，而酒精+硫酸锌组平均醒酒时间为6.9 h, 相比酒精组有一定的减少，而酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组A、B、C分别为7.1 h， 3.2 h和6.1 h，不同浓度的含锌组合物对于小鼠醒酒时间的影响不同，其中B组相比于酒精组尤其显著的减少了醒酒时间。而酒精+葡萄糖酸锌+酿酒酵母提取物组平均醒酒时间为6.8 h，相较于酒精组有一定减少，但是没有含锌组合物的B组显著，酒精+硫酸锌+裂殖酵母提取物组的小鼠平均醒酒时间为8.2 h，相比于酒精组没有差异。
（2）肝损伤指标：
采用比色法对血液样本中的谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）进行分析
谷草转氨酶（AST）主要分布在心肌，其次是肝脏、骨骼肌和肾脏等组织中。在急性肝炎时，血清AST活性可明显增高，一般为正常参考值上限的10～30倍，不高于同时测定的血清ALT活性。当血清AST活性增高持续超过ALT活性时，提示肝炎病变呈慢性化和进展性。
谷丙转氨酶(ALT)主要存在于肝脏、心脏组织细胞中，当这些组织发生病变时，该酶活力增多。一般以ALT超过正常参考值上限2.5倍，持续异常超过半个月，作为诊断肝炎的标准。
测定方法：收集血液后，采集的全血常温放置30 min，待血液凝固后，3500 g离心15 min，分离血清，及时检测各参数。血清中AST和ALT检测均采用试剂盒（南京建成生物工程研究所），按产品说明书进行操作。
测定结果如图2、3所示：
图2表明，酒精组与对照组比较，血清中AST含量由10.98升高至50.64，升高了4.6倍，提示单次大剂量酒精刺激后小鼠出现明显的急性肝损伤。
而酒精+硫酸锌组（33.24）相较于酒精组（50.64），有一定程度的降低；酒精+酿酒酵母提取物组为36.92，有降低的趋势。
尤其是，酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组A、B、C与酒精组比较，由50.64降低至31.40，16.52，27.10，均有显著性的降低，尤其是B组甚至恢复接近正常水平。而酒精+葡萄糖酸锌+酿酒酵母提取物组降低至37.80，相较于酒精组有一定减少，但是没有含锌组合物的B组显著，酒精+硫酸锌+裂殖酵母提取物组的小鼠为41.44，相比于酒精组没有显著性差异。
图3表明，酒精组与对照组比较，血清中ALT含量由12.14升高至53.64，升高了4.4倍，而酒精+硫酸锌组（36.30）相较于酒精组（53.64），有一定程度的降低，酒精+酿酒酵母提取物组（46.24）相较于酒精组有降低的趋势，而酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组A、B、C为41.32，17.42，35.88，其中B组有显著性的降低。酒精+葡萄糖酸锌+酿酒酵母提取物组降低至39.84，相较于酒精组有一定减少，但是没有显著差异，酒精+硫酸锌+裂殖酵母提取物组的小鼠为44.76，相比于酒精组没有差异。验证了本发明的含锌组合物中酿酒酵母与硫酸锌具有协同作用。
肝组织ALDH含量检测
乙醛脱氢酶（Acetaldehyde Dehydrogenase，ALDH）是肝脏中重要的一类代谢酶，在酒精的代谢过程中起到了至关重要的作用，其活性的高低可以反映肝脏在酒精代谢过程中的能力。
测定方法：将肝块（0.75-1.0g）在低温预冷过的放射免疫沉淀分析缓冲液（150 mM氯化钠、5 mM乙二胺四乙酸、50 mM Tris碱、0.3% Triton X-100、0.03%十二烷基硫酸钠、0.3%脱氧胆酸钠和1%蛋白酶抑制剂复合物，pH 7.4）中彻底切碎，然后在冰上孵育30 min。然后将匀浆在4℃下以15000 g离心20 min。将上清液移至干净的试管中，并在4℃下以15000 g再次离心20 min。然后将该旋转的上清液用于ALDH检测,使用ALDH试剂盒（南京建成生物工程研究所），总蛋白使用BCA试剂盒（Thermo Fisher ,USA）。
测定结果如图4所示：
图4表明，酒精组与对照组比较，ALDH活性由11.82升高至22.72，而酒精+硫酸锌组（29.60）相较于酒精组（22.72），有一定增高的趋势，但是无明显差异，酒精+酿酒酵母提取物组为18.62，酿酒酵母提取物对于小鼠的肝脏中ALDH的活性没有提升，而酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组A、B、C为24.82，43.24，32.06，含锌组合物B和C均提高了小鼠肝脏中ALDH的活性，其中B浓度更加显著。酒精+葡萄糖酸锌+酿酒酵母提取物组为25.88，相较于酒精组没有显著差异，酒精+硫酸锌+裂殖酵母提取物组的小鼠为13.70，相比于酒精组没有差异。
综上，从小鼠肝功能血清测定结果来看，酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物，以及单独添加硫酸锌组、酿酒酵母提取物，以及其他种类的锌与其他种类酵母提取物比较，肝功能损伤指标均有明显降低，提示其显著抑制了酒精引起的小鼠的肝脏损伤，其中，酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物B尤为明显。从小鼠肝脏中酒精代谢酶（乙醛脱氢酶）的检测结果也显示酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物B显著提高了ALDH活性。
（3）对肝脏组织进行病理学检测
用苏木精伊红（H&E）染色法对肝组织进行病理学染色，可大体观察肝脏形态和结构的变化，判断肝细胞的凋亡状态，进而反应肝脏的损伤程度。
测定方法：组织石蜡切片参照实验室常规方法进行，包括组织石蜡包埋，切片，染色及镜下观察。
数据处理与统计分析：本发明中所有实验数据使用GraphPad Prime6统计分析软件进行分析。
测定结果如图5所示，通过HE染色观察组织病理变化，酒精组小鼠出现明显的脂肪变性，表现为脂滴明显增多（图中箭头所示），可以看到细胞凋亡，表现为核固缩，破碎（图中箭头所示）。相比于酒精组，酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组，均无明显细胞凋亡，肝组织脂质堆积减少，肝脏形态得到改善；单独加硫酸锌与单独加酿酒酵母提取物组出现细胞脂肪变性以及肝细胞凋亡，添加葡萄糖酸锌+酿酒酵母以及添加硫酸锌+裂殖酵母提取物组的小鼠也出现了明显的脂肪变性和细胞凋亡。
综上，通过HE染色观察组织病理变化结果来看，酒精+硫酸锌+酿酒酵母提取物组与其他组相比肝组织脂质堆积减少，肝脏形态得到改善。
所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (10)
1.含锌组合物，其特征在于，由以下组分组成：
酿酒酵母提取物1~50重量份；
锌盐0.01~10重量份；
所述锌盐为硫酸锌和/或乳酸锌。
2.根据权利要求1所述的含锌组合物，其特征在于，由以下组分组成：
酿酒酵母提取物10~45重量份；
锌盐1~2重量份。
3.根据权利要求1或2所述的含锌组合物，其特征在于，所述酿酒酵母提取物所用的酿酒酵母购买自大连兴和酵母有限公司。
4.根据权利要求1或2所述的含锌组合物，其特征在于，所述酿酒酵母提取物的制备方法包括：
将酿酒酵母用水提取1~3次，合并各次提取液，浓缩，得到酿酒酵母提取物。
5.如权利要求1~4任一项所述的含锌组合物在制备护肝产品中的应用。
6.一种护肝酒，其特征在于，包括如权利要求1~4任一项所述的含锌组合物。
7.根据权利要求6所述的护肝酒，其特征在于，所述含锌组合物在护肝酒中的质量分数为0.01%~0.5%。
8.根据权利要求6或7所述的护肝酒，其特征在于，所述酿酒酵母提取物和锌盐的质量比为（1~25）:1。
9.如权利要求1~4任一项所述的含锌组合物和/或权利要求6~8任一项所述的护肝酒在降低谷草转氨酶和/或谷丙转氨酶活性中的应用。
10.如权利要求1~4任一项所述的含锌组合物和/或权利要求6~8任一项所述的护肝酒在提高乙醛脱氢酶活性中的应用。
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