CN113559152A - 护肝中药组合物、饮品及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及护肝功能性产品技术领域，具体涉及护肝中药组合物、饮品及其制备方法和应用。本发明提供含有莲子提取物、葛根提取物、蛤蚧提取物和阿胶提取物的中药组合物，该中药组合物中各组分协同作用，具有缓解酒精对肝脏损伤的功效，并且能够与锌的护肝功效协同作用，与锌联合使用能够发挥优异的缓解酒精对肝脏损伤的功效。本发明提供的护肝保健酒能够在摄入酒精的同时摄入中药组合物和锌，有效缓解酒精对肝脏的损伤，同时该保健酒还具有与酒相当的口感风味。

Description

护肝中药组合物、饮品及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及护肝功能性产品技术领域，具体涉及护肝中药组合物、饮品及其制备方法和应用。
背景技术
肝脏是人体最大的消化腺，也是人体最大的解毒器官。酒精被广泛认为对肝脏具有毒害作用。饮酒后，酒精在胃里吸收进入循环系统，当肝脏的解酒速度弱于酒精摄入速度的时候，血液酒精浓度增加，进而增加了肝脏的负担，因此，长期饮酒易导致肝脏受累。当肝脏承受能力达到极限以后，一些肝细胞就可能会彻底崩塌，引起酒精性肝损伤。酒精性肝损伤是指长期大量饮酒造成的肝脏疾患，包括酒精性脂肪肝（AFL）、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化、轻症酒精性肝病、酒精性肝硬化等。酒精性肝损伤通常始于酒精性脂肪肝，其特征是肝脏脂肪变性（甘油三酯在肝细胞中积聚）。部分酒精性脂肪肝会发展成肝脏炎症，这在组织学上被定义为酒精性脂肪性肝炎（ASH）。ASH进展缓慢，持续的慢性肝损伤和炎症最终导致进行性纤维化和肝硬化，最终可能导致肝细胞癌（HCC）的发展。
近年来，随着乙肝疫苗的普及以及抗病毒药物的应用，新发病毒性肝炎病例显著减少。但由于饮酒导致的酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）的发病率却明显增加。据Gao B等2011年的调查研究发现，在重度饮酒者中，约90%（酒精摄入多于60克/天）呈现脂肪肝，10%~35%会发展成酒精性肝炎，5%~15%会发展为肝硬化。美国NIAAA/NIH调查显示仅2007年死于肝硬化患者中就已有48%和酒精相关。
现有技术中已有一些护肝产品，用于在饮酒之前或之后服用，以缓解酒精对肝脏的毒性。这些产品通常包括抗氧化剂、微量矿物质、传统的护肝药物或食物等，但这些产品仍存在护肝功效不理想，口感差等问题。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种中药组合物，该中药组合物具有缓解酒精对肝脏的损伤的功能。
本发明的另一目的在于提供含有该中药组合物的饮品及其制备方法。
目前已有的很多护肝产品在缓解酒精对肝脏损伤方面的功效并不理想，一些护肝产品仅针对氧化应激和脂质过氧化机制，通过添加抗氧化活性物质以期减少氧化作用对肝脏造成的损伤，但是，酒精损伤肝脏的机制十分复杂，此类产品的护肝效果较为有限。而有些护肝产品虽然具有相对更好的护肝效果，但是，其组成十分复杂，多则含有十余种组分，此类产品不仅不利于制备过程和成本控制，而且，过多的组分也会增加人体代谢负担。此外，一些护肝酒类饮品中为提高护肝功效，添加了中药组分，但是这些中药组分会对酒类饮品的口感和风味造成明显的不利影响，进而影响了酒类饮品本身的品质。本发明首先以开发具有优异的缓解酒精对肝脏损伤功效的中药组合物为目的，同时考察中药组合物在酒类饮品中的适用性。在研发过程中，本发明对大量的中药组分进行了复配、筛选和验证，并意外地发现，相比于其他配方，莲子提取物、葛根提取物、蛤蚧提取物和阿胶提取物组合使用不仅能够在护肝功效方面协同作用，发挥优异的缓解酒精对肝脏损伤功效，而且，其复配得到的组合物在用于酒类饮品时，也不会明显降低酒类饮品本身的口感和风味。
基于上述发现，本发明提供以下技术方案：
首先，本发明提供一种中药组合物，所述中药组合物包括莲子提取物、葛根提取物、蛤蚧提取物和阿胶提取物。
以上所述的中药组合物可仅由莲子提取物、葛根提取物、蛤蚧提取物和阿胶提取物组成。
以上所述的中药组合物可制备为固体制剂或液体制剂，当将所述中药组合物用于制备饮品时，优选将其制备为液体制剂。
优选地，所述中药组合物包括如下体积份的组分：莲子提取物5-15份，葛根提取物5-15份，蛤蚧提取物0.5-2份，阿胶提取物2-6份。
以上所述的莲子提取物、葛根提取物、蛤蚧提取物和阿胶提取物优选为莲子提取液、葛根提取液、蛤蚧提取液和阿胶提取液。
本发明发现，进一步控制中药提取物中的莲子提取物和蛤蚧提取物的体积比为（5-10）：1，能够使得中药组合物发挥更好的缓解酒精对肝脏损伤的功效。
在用于酒类饮品时，优选控制蛤蚧提取物和阿胶提取物的总体积占所述中药组合物体积的15-25%。本发明发现，将蛤蚧提取物和阿胶提取物的含量控制在上述范围内，能够降低中药组合物在添加至酒类饮品时，对酒类饮品的口感和风味的不利影响，使得添加中药组合物后的饮品的口感风味基本能够保持酒类饮品本身的口感风味，同时兼顾组合物的护肝功效。
优选地，以上所述的莲子提取物、葛根提取物、蛤蚧提取物和阿胶提取物均为水提物。
其中，所述莲子提取物或葛根提取物的提取方法包括：将莲子或葛根粉碎后过筛，按照1：（6-12）的料液比，用水在35-40℃超声条件下提取1-3次，每次提取1.5-2.5h，合并各次提取液。
所述蛤蚧提取物的提取方法包括：将蛤蚧粉碎后过筛，按照1：（40-60）的料液比，用水在35-40℃超声条件下提取1-3次，每次提取1.5-2.5h，合并各次提取液。
所述阿胶提取物的提取方法包括：将阿胶捣碎后，按照1：（40-60）的料液比，用水在35-40℃超声条件下提取1-3次，每次提取1.5-2.5h，合并各次提取液。
上述提取方法中，优选的提取次数为2次。
以上所述的提取方法中，粉碎后过筛优选使用200-300目筛。
以上所述的提取方法中，在合并各次提取液后，还包括浓缩和去除沉淀的步骤。
其中，莲子提取物或葛根提取物的提取方法中，所述浓缩为将合并后的提取液浓缩至与中药材原料的质量体积比g：ml为1：（0.8-1.2）。
蛤蚧提取物或阿胶提取物的提取方法中，所述浓缩为将合并后的提取液浓缩至与中药材原料的质量体积比g：ml为1：（4.8-5.2）。
所述去除沉淀可采用常用的固液分离方法，例如：离心等。
以上所述的中药材原料是指粉碎前的中药材。
采用上述提取方法制备的各提取物复配后，具有护肝功能，能够缓解酒精造成的肝脏损伤，而且复配的组合物直接添加至酒类饮品中时，也不会影响酒类饮品本身的口感风味。
本发明还提供以上所述的中药组合物的制备方法，其为：将莲子提取物、葛根提取物、蛤蚧提取物、阿胶提取物混合，灭菌后去除沉淀，即得。
在上述中药组合物的基础上，本发明还发现，上述中药组合物能够与锌的护肝作用产生协同作用，与锌联合使用时，中药组合物中的各组分有明显的协同作用，在护肝功能上相互促进，提升对酒精性肝脏损伤的缓解功效。
基于此，本发明还提供一种组合物，所述组合物包括以上所述的中药组合物和含锌物质。
以上所述的含锌物质为人体能够接受的含锌化合物。优选为锌盐。更优选为选自硫酸锌、葡萄糖酸锌、乳酸锌中的任意一种或多种的组合。
所述组合物中，含锌物质和中药组合物的质量体积比为（50-100）mg：（10-50）ml。
本发明提供以上所述的中药组合物、或含有中药组合物和含锌物质的组合物的以下任一种应用：
（1）在制备用于缓解酒精对肝脏损伤的产品中的应用；
（2）在制备用于降低血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶或肿瘤坏死因子含量的产品中的应用；
（3）在制备用于预防或辅助治疗酒精性肝损伤的产品中的应用。
以上所述的产品可为食品、保健品或药品。
以上（2）中，所述应用具体为用于降低酒精摄入导致的谷草转氨酶、谷丙转氨酶或肿瘤坏死因子含量升高时，血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶或肿瘤坏死因子的含量。
以上（3）中，所述酒精性肝损伤为选自酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化、轻症酒精性肝病、酒精性肝硬化中的一种。
进一步地，本发明提供一种护肝产品，所述产品包括所述中药组合物，或者包括含有中药组合物和含锌物质的组合物。
所述护肝产品为食品、保健品或药品。
所述护肝产品可为含酒精饮品或无酒精饮品。
作为本发明的一种实施方式，所述护肝产品为护肝保健酒，所述护肝保健酒包括如下组分：中药组合物20-80mL/L，锌盐150-250mg/L，酒920-980mL/L。
其中，锌盐优选为硫酸锌。
优选地，酒为酒精含量为7-55%的白酒、葡萄酒、黄酒或啤酒。更优选为白酒或葡萄酒。最优选为白酒。
其中，白酒优选为酒精含量大于等于38%的白酒，更优选为酒精含量38%-55%的白酒，最优选为酒精含量40%-55%的白酒，可以为酱香型、浓香型白酒或其他市售的白酒品种。
葡萄酒优选为酒精含量7%-20%的葡萄酒，更优选为酒精含量8%-20%的葡萄酒，葡萄酒可以为市售任意品种的葡萄酒。
上述护肝保健酒在摄入酒的同时，其中的中药组合物和锌盐能够发挥较好的缓解酒精对肝脏损伤的作用，而且该护肝保健酒的口感风味与正常的酒类饮品无明显差别。
作为本发明的另一种实施方式，所述护肝产品为无酒精护肝保健饮品，所述无酒精护肝保健饮品包括如下组分：中药组合物20-80mL/L，锌盐80-150mg/L，水920-980mL/L。
其中，锌盐优选为硫酸锌。
本发明还提供上述护肝产品的制备方法，所述方法包括：将锌盐与中药组合物混合、溶解得到第一混合物，将第一混合物再与水或酒混合得到第二混合物，将第二混合物去除不溶物后灭菌。
优选地，在去除不溶物前，将第二混合物进行超声溶解。
优选地，本发明护肝产品中，除中药提取液、含锌物质外，不含任何防腐剂。
本发明的有益效果在于：本发明提供含有莲子提取物、葛根提取物、蛤蚧提取物和阿胶提取物的中药组合物，该中药组合物中各组分之间存在协同作用，能够发挥护肝作用，缓解酒精对肝脏的损伤。该中药组合物还能够与锌的护肝功效协同作用，与锌联合使用能够极大地提高其各组分的协同作用，发挥有效缓解酒精对肝脏损伤的功效。
本发明提供的护肝保健饮品具有较好的护肝作用，能够有效缓解酒精对肝脏的损伤，其中，护肝保健酒能够在摄入酒精的同时摄入中药组合物和锌，能够发挥优异的缓解酒精对肝脏损伤的作用，同时该保健酒还具有与酒相当的口感风味。
附图说明
图1为本发明实验例1中护肝保健酒及饮品的血清ALT和AST水平测定结果。
图2为本发明实验例1中护肝保健酒及饮品的肝组织TNF-α水平的测定结果。
图3为本发明实验例1中护肝保健酒及饮品的肝组织病理学H&E染色结果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1 中药组合物（1）
本实施例提供一种中药组合物，其包含体积比为10:10:1:4的莲子提取液、葛根提取液、蛤蚧提取液和阿胶提取液。
其中，莲子提取液的提取方法如下：称取50克莲子，粉碎后过200-300目筛，再加入10倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入8倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到莲子提取液。
葛根提取液的提取方法如下：称取50克葛根，粉碎后过200-300目筛，再加入10倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入8倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到葛根提取液。
蛤蚧提取液的提取方法如下：称取10克蛤蚧，粉碎后过200-300目筛，再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到蛤蚧提取液。
阿胶提取液的提取方法如下：称取10克阿胶，捣碎后，再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到阿胶提取液。
本实施例还提供上述中药组合物的制备方法，具体如下：将莲子提取液、葛根提取液、蛤蚧提取液和阿胶提取液按照液体体积比10:10:1:4混合均匀后，灭菌，离心去除沉淀，得到中药组合物。
实施例2 中药组合物（2）
本实施例提供一种中药组合物，其包含体积比为5:5:0.5:2的莲子提取液、葛根提取液、蛤蚧提取液和阿胶提取液。
其中，莲子提取液的提取方法如下：称取50克莲子，粉碎后过200-300目筛，再加入10倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入8倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到莲子提取液。
葛根提取液的提取方法如下：称取50克葛根，粉碎后过200-300目筛，再加入10倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入8倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到葛根提取液。
蛤蚧提取液的提取方法如下：称取10克蛤蚧，粉碎后过200-300目筛，再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到蛤蚧提取液。
阿胶提取液的提取方法如下：称取10克阿胶，捣碎后，再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到阿胶提取液。
本实施例还提供上述中药组合物的制备方法，具体如下：将莲子提取液、葛根提取液、蛤蚧提取液和阿胶提取液按照液体体积比5:5:0.5:2混合均匀后，灭菌，离心去除沉淀，得到中药组合物。
实施例3 中药组合物（3）
本实施例提供一种中药组合物，其包含体积比为15:15:2:6的莲子提取液、葛根提取液、蛤蚧提取液和阿胶提取液。
其中，莲子提取液的提取方法如下：称取50克莲子，粉碎后过200-300目筛，再加入10倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入8倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到莲子提取液。
葛根提取液的提取方法如下：称取50克葛根，粉碎后过200-300目筛，再加入10倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入8倍量的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到葛根提取液。
蛤蚧提取液的提取方法如下：称取10克蛤蚧，粉碎后过200-300目筛，再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到蛤蚧提取液。
阿胶提取液的提取方法如下：称取10克阿胶，捣碎后，再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；提取两次，第二次再加入500毫升的去离子水，超声40℃提取2小时；合并两次提取液，浓缩至50毫升，离心去除沉淀，得到阿胶提取液。
本实施例还提供上述中药组合物的制备方法，具体如下：将莲子提取液、葛根提取液、蛤蚧提取液和阿胶提取液按照液体体积比15:15:2:6混合均匀后，灭菌，离心去除沉淀，得到中药组合物。
实施例4 护肝保健酒（1）
本实施例提供一种护肝保健酒，其组成如下：硫酸锌100 mg，实施例1的中药组合物1 ml，酒精含量53%的酱香型白酒499 ml。
本实施例还提供上述护肝保健酒的制备方法，具体如下：将硫酸锌加入到中药组合物中，充分溶解后，再与酱香型白酒混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，分装。
实施例5 护肝保健酒（2）
本实施例提供一种护肝保健酒，其组成如下：硫酸锌100 mg，实施例1的中药组合物10 ml，酒精含量53%的酱香型白酒490 ml。
本实施例还提供上述护肝保健酒的制备方法，具体如下：将硫酸锌加入到中药组合物中，充分溶解后，再与酱香型白酒混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，分装。
实施例6 护肝保健酒（3）
本实施例提供一种护肝保健酒，其组成如下：硫酸锌100 mg，实施例1的中药组合物20 ml，酒精含量53%的酱香型白酒480 ml。
本实施例还提供上述护肝保健酒的制备方法，具体如下：将硫酸锌加入到中药组合物中，充分溶解后，再与酱香型白酒混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，分装。
实施例7 护肝保健酒（4）
本实施例提供一种护肝保健酒，其组成如下：硫酸锌100 mg，实施例1的中药组合物40 ml，酒精含量53%的酱香型白酒460 ml。
本实施例还提供上述护肝保健酒的制备方法，具体如下：将硫酸锌加入到中药组合物中，充分溶解后，再与酱香型白酒混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，分装。
实施例8 护肝保健酒（5）
本实施例提供一种护肝保健酒，其组成如下：硫酸锌100 mg，实施例1的中药组合物100ml，酒精含量53%的酱香型白酒400 ml。
本实施例还提供上述护肝保健酒的制备方法，具体如下：将硫酸锌加入到中药组合物中，充分溶解后，再与酱香型白酒混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，分装。
实施例9 护肝保健酒（6）
本实施例提供一种护肝保健酒，其组成如下：硫酸锌100 mg，实施例2的中药组合物20ml，酒精含量53%的酱香型白酒480 ml。
本实施例还提供上述护肝保健酒的制备方法，具体如下：将硫酸锌加入到中药组合物中，充分溶解后，再与酱香型白酒混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，分装。
实施例10 护肝保健酒（7）
本实施例提供一种护肝保健酒，其组成如下：硫酸锌100 mg，实施例3的中药组合物20ml，酒精含量53%的酱香型白酒480 ml。
本实施例还提供上述护肝保健酒的制备方法，具体如下：将硫酸锌加入到中药组合物中，充分溶解后，再与酱香型白酒混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，分装。
实施例11护肝保健酒（8）
本实施例提供一种护肝保健酒，其组成如下：实施例1的中药组合物20 ml，酒精含量53%的酱香型白酒480 ml。
本实施例还提供上述护肝保健酒的制备方法，具体如下：将中药组合物与酱香型白酒混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，分装。
实施例12 无酒精护肝保健饮品
本实施例提供一种无酒精护肝保健饮品，其组成如下：硫酸锌50mg，实施例1的中药组合物20 ml，无醇的纯水480ml。
本实施例还提供上述护肝保健酒的制备方法，具体如下：将硫酸锌加入到中药组合物中，充分溶解后，再与无醇的纯水混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，分装。
实验例1 护肝效果检测
对以上各实施例的护肝保健酒和无酒精护肝保健饮品的护肝效果进行检测，具体如下：
采用的造模方法为Carson等（Carson E J,Pruett S B,Development andcharacterization of a binge drinking model in mice for evaluation of theimmunological effects of ethanol.[J] .Alcohol Clin Exp Res, 1996, 20: 132-8.）开发的短期大量饮酒模型（6 g乙醇/kg），用于模拟人类大量饮酒后所造成的急性乙醇损伤。将酒精含量53%的酱香型白酒以及各实施例的保健酒通过添加不同比例纯水的方式统一稀释成酒精终浓度为30%的实验用酒。通过灌胃方式给予小鼠20 g/kg体重（6 g乙醇/kg换算为30%的白酒，计算方式为6/30%=20g/kg）的单次口服剂量实验用酒，来模拟人类因短期大量饮酒而造成的急性肝损伤的动物实验模型。
1、实验用酒的配制
将217 mL的纯水加入283 mL酒精含量53%的酱香型白酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒。
将60 mg硫酸锌加入500 mL酒精终浓度为30%的实验用酒中，形成酒精终浓度为30%的含锌实验用酒，其中含锌离子48.4mg/L （浓度计算过程为：锌离子48.4 mg/L =(60mg硫酸锌/161)*65/ 0.5 L）；
将216 mL的纯水加入284 mL的实施例4中的保健酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒A，其中含锌离子45.9 mg/L，中药组合物1.1 mL/L（浓度计算过程为：锌离子45.9mg/L=(100 mg硫酸锌/161)*65*(284/500)/ 0.5 L; 中药组合物1.1 mL/L=1mL* (284/500)/ 0.5 L）；
将211 mL的纯水加入289 mL的实施例5中的保健酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒B，其中含锌离子46.7 mg/L，中药组合物11.6 mL/L；
将205 mL的纯水加入295 mL的实施例6中的保健酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒C，其中含锌离子47.6 mg/L，中药组合物23.6 mL/L；
将192 mL的纯水加入308 mL的实施例7中的保健酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒D，其中含锌离子49.7 mg/L，中药组合物49.3mL/L；
将146 mL的纯水加入354mL的实施例8中的保健酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒E，其中含锌离子57.2 mg/L，中药组合物141.6 mL/L；
将205 mL的纯水加入295 mL的实施例11中的保健酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒K，其中含中药组合物23.6 mL/L；
将205 mL的纯水加入295mL的实施例9中的保健酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒C1，其中含锌离子47.6 mg/L，中药组合物23.6mL/L；
将205 mL的纯水加入295mL的实施例10中的保健酒中，形成酒精终浓度为30%的实验用酒C2，其中含锌离子47.6mg/L，中药组合物23.6 mL/L；
将100 mg硫酸锌加入20 mL莲子提取液中，充分溶解后，再与酒精含量53%的酱香型白酒480 ml混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，并稀释成酒精终浓度为30%的实验用酒G，其中含锌离子47.6mg/L，莲子提取液23.6 mL/L。
将100 mg硫酸锌加入20 mL葛根提取液中，充分溶解后，再与酒精含量53%的酱香型白酒480 ml混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，并稀释成酒精终浓度为30%的实验用酒H，其中含锌离子47.6 mg/L，葛根提取液23.6 mL/L。
将100 mg硫酸锌加入20 mL蛤蚧提取液中，充分溶解后，再与酒精含量53%的酱香型白酒480 ml混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，并稀释成酒精终浓度为30%的实验用酒I，其中含锌离子47.6mg/L，蛤蚧提取液23.6 mL/L。
将100 mg硫酸锌加入20 mL阿胶提取液中，充分溶解后，再与酒精含量53%的酱香型白酒480 ml混合均匀，超声加速溶解，再离心去除不溶物，灭菌，并稀释成酒精终浓度为30%的实验用酒J，其中含锌离子47.6 mg/L，阿胶提取液23.6 mL/L。
2、动物模型及分组
小鼠：雄性，C57bl/6，周龄（7-8w）。
对照组小鼠通过灌胃接受等热量麦芽糖水；
小鼠通过灌胃以20 g/kg体重的单次口服剂量被给予上述酒精终浓度为30%的实验用酒（酒精组）（20 g/kg的30%酒精度实验用酒的乙醇总量为6 g乙醇/kg），含锌实验用酒（酒精+锌组），以及由实施例4-实施例10中的保健酒稀释而成的酒精终浓度为30%的实验用酒和单一中药组分的酒精终浓度为30%的实验用酒（实验组A-E、C1-C2以及G-K）；
小鼠通过灌胃以20 g/kg体重的剂量预处理实施例12的保健饮品1h后，再给予20g/kg体重的酒精终浓度为30%的实验用酒灌胃处理，作为实验组F。
分组方法：
将96只C57bl/6小鼠，分入以下各组：
对照组（n=6，等热量麦芽糖水）；
酒精组(n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒)；
酒精+锌组(n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的含锌实验用酒，其中含锌离子48 mg/L)；
酒精+锌+中药提取物超低剂量组(n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒A，其中含锌离子45.4 mg/L，中药组合物1.2 mL/L)；
酒精+锌+中药提取物低剂量组 (n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒B，其中含锌离子46.2 mg/L，中药组合物11.6 mL/L)；
酒精+锌+中药提取物中剂量组 (n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒C，其中含锌离子47.6 mg/L，中药组合物23.6 mL/L)；
酒精+锌+中药提取物高剂量组 (n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒D，其中含锌离子49.2 mg/L，中药组合物49.2 mL/L)；
酒精+锌+中药提取物超高剂量组(n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒E，其中含锌离子56.6 mg/L，中药组合物142 mL/L)；
酒精+含锌和中药提取物的保健饮品组（n=6，20 g/kg体重，保健饮品F+酒精终浓度为30%的实验用酒，其中含锌离子40 mg/L，中药组合物40 mL/L）；
酒精+锌+莲子提取物组 (n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒G，其中含锌离子47.6 mg/L，莲子提取液23.6 mL/L) ；
酒精+锌+葛根提取物组 (n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒H，其中含锌离子47.6 mg/L，葛根提取液23.6 mL/L) ；
酒精+锌+蛤蚧提取物组 (n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒I，其中含锌离子47.6 mg/L，蛤蚧提取液23.6 mL/L)；
酒精+锌+阿胶提取物组 (n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒J，其中含锌离子47.6 mg/L，阿胶提取液23.6 mL/L)；
酒精+中药提取物组 (n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒K，其中含中药组合物23.6 mL/L)；
酒精+锌+中药提取物中剂量组 (n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒C1，其中含锌离子47.2 mg/L，中药组合物23.6 mL/L)；
酒精+锌+中药提取物中剂量组 (n=6，20 g/kg体重，酒精终浓度为30%的实验用酒C2，其中含锌离子47.2 mg/L，中药组合物23.6 mL/L)。
3、根据上述造模及分组方法对各实施例的护肝保健酒、无酒精护肝保健饮品的功效进行测定，具体方法如下：
在酒精灌胃处理4h后对各组的实验动物进行采血，取材。
采血：眼眶采血。
肝脏：动物通过脱颈致死。沿小鼠腹部中线剖开，使腹部暴露后剥离出肝脏。完整剥离肝脏，分离不同叶。用刀片左叶分成三段，右叶分成两段。
肝脏各叶的组织分配：用刀片左叶分成三段，右叶分成两段：左叶和右叶第一段用于制作病理切片，进行组织学检测；其他叶存于液氮用于分子检测分析等。
肝损伤指标：
（1）采用比色法对血液样本中的谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）进行分析
谷草转氨酶（AST）主要分布在心肌，其次是肝脏、骨骼肌和肾脏等组织中。在急性肝炎时，血清AST活性可明显增高，一般为正常参考值上限的10～30倍，不高于同时测定的血清ALT活性。当血清AST活性增高持续超过ALT活性时，提示肝炎病变呈慢性化和进展性。
谷丙转氨酶(ALT)主要存在于肝脏、心脏组织细胞中，当这些组织发生病变时，该酶活力增多。一般以ALT超过正常参考值上限2.5倍，持续异常超过半个月，作为诊断肝炎的标准。
测定方法：收集血液后，采集的全血37℃放置30 min，待血液凝固后，2000 g离心10 min，分离血清，及时检测各参数。血清中AST和AST检测均采用试剂盒（南京建成生物工程研究所），按产品说明书进行操作。
测定结果如图1所示：
图1的A表明，酒精组与对照组比较，血清中ALT含量由11.8升高至42.76，升高了2.6倍，提示单次大剂量酒精刺激后小鼠出现明显的急性肝损伤。
而酒精+锌组（35.88）相较于酒精组（42.76），有降低的趋势，但是无明显差异；酒精+锌+中药提取物组A、B、C、D、E分别为40.18, 26.13, 13.13, 14.95, 52.68，中药提取物不同浓度对于小鼠的血清中ALT含量影响不同，其中B、C、D组对于小鼠血清中ALT有显著性的降低，C组降低尤为明显。A组无明显差异，E组由于中药提取物含量较高，增加了肝脏毒性，导致ALT数值进一步上升。
同时，经测定：酒精组与酒精+保健饮品组比较，从42.76降低至26.45，有较显著的差异；C1、C2组血清中ALT含量分别为13.05、13.11，与C组无显著差异。
图1的B表明，酒精组与对照组比较，血清中AST含量由21.80升高至72.77，升高了2.3倍，而酒精+锌组（65.88）相较于酒精组（72.77），有降低的趋势，但是无明显差异，酒精+锌+中药提取物组A、B、C、D、E分别为70.18, 52.80, 23.13, 24.95, 72.68，中药提取物不同浓度对于小鼠的血清中AST含量影响不同，其中B、C、D组对于小鼠血清中AST有显著性的降低，C组降低尤为明显。A组无明显差异，E组由于中药提取物含量较高，增加了肝脏毒性，导致AST数值进一步上升。同时，经测定：酒精组与酒精+保健饮品组比较，从72.77降低至52.33，有较显著的差异；C1、C2组血清中AST含量分别为23.04、23.19，与C组无显著差异。
为了验证本发明的中药组合物中各中药成分具有协同作用，针对中药组合物与单独中药成分，以及单独添加硫酸锌分别制备的实验用酒也进行了分组对比实验，如图1的C中ALT含量检测结果显示，酒精+锌+中药提取物组C（13.13）相较于酒精组（42.77、酒精+锌+莲子提取物组（29.22）、酒精+锌+葛根提取物组（35.23）、酒精+锌+蛤蚧提取物组（38.9）、酒精+锌+阿胶提取物组（39.42），以及酒精+中药提取物组（40.77）均显著降低；如图1的D中AST含量检测结果显示，酒精+锌+中药提取物组C（23.13）相较于酒精组（72.77）、酒精+锌+莲子提取物组（50.02）、酒精+锌+葛根提取物组（62.58）、酒精+锌+蛤蚧提取物组（68.38）、酒精+锌+阿胶提取物组（65.17），以及酒精+中药提取物组（68.92）均显著降低。
（2）肝组织TNF-α含量检测
肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）是最早发现的能使肿瘤组织细胞发生出血性坏死的细胞因子，TNF-α主要由活化的肝巨噬细胞产生，可以反应炎症水平。
测定方法：将肝块（0.75-1.0g）在低温预冷过的放射免疫沉淀分析缓冲液（150 mM氯化钠、5 mM乙二胺四乙酸、50 mM Tris碱、0.3% Triton X-100、0.03%十二烷基硫酸钠、0.3%脱氧胆酸钠和1%蛋白酶抑制剂复合物，pH 7.4）中彻底切碎，然后在冰上孵育30 min。然后将匀浆在4℃下以15000 g离心20 min。将上清液移至干净的试管中，并在4℃下以15000 g再次离心20 min。然后将该旋转的上清液用于TNF-α酶联免疫吸附测定(kit no.KMC3012; BioSource International, Camarillo, CA)。
测定结果如图2所示：
图2的A表明，酒精组与对照组比较，TNF-α含量由291.97升高至1213.12，升高了3.15倍，而酒精+锌组（990.53）相较于酒精组（1213.12），有降低的趋势，但是无明显差异，酒精+锌+中药提取物组A、B、C、D、E分别为1156.7， 826.48， 424.15， 553.80， 1663.067，中药提取物不同浓度对于小鼠的肝脏中肿瘤坏死因子TNF-α影响不同，其中B、C、D组对于TNF-α有显著性的降低， C组降低尤为明显。A组无明显差异，E组由于中药提取物含量较高，增加了肝脏毒性，导致TNF-α数值进一步上升。同时，经测定：酒精组与酒精+保健饮品组比较，从1213.12降低至801.92，有较显著的差异；C1、C2组TNF-α含量分别为424.04、424.16，与C组无显著差异。
为了验证本发明的中药组合物中各中药成分存在协同作用，针对中药组合物与单独中药成分，以及单独添加硫酸锌分别制备的实验用酒也进行了分组对比实验，如图2 的B中TNF-α含量检测结果显示：酒精+锌+中药提取物组C（424.15）相较于酒精组（1213.12）、酒精+锌+莲子提取物组（774.25）、酒精+锌+葛根提取物组（972.8）、酒精+锌+蛤蚧提取物组（1083.85）、酒精+锌+阿胶提取物组（1095.03），以及酒精+中药提取物组（1157.37）均显著降低。
综上，从小鼠肝功能血清测定结果来看，酒精+锌+中药提取物B、C、D，即低、中、高剂量组与酒精组、中药提取物超高剂量组、中药提取物超低剂量组、单独中药成分组，以及单独添加硫酸锌组比较，肝功能损伤指标均有明显降低，提示其显著抑制了酒精引起的小鼠的肝脏损伤，其中，酒精+锌+中药提取物C，即中剂量组尤为明显。
（3）对肝脏组织进行病理学检测
用苏木精伊红（H&E）染色法对肝组织进行病理学染色，可大体观察肝脏形态和结构的变化，判断肝细胞的凋亡状态，进而反应肝脏的损伤程度。
测定方法：组织石蜡切片参照实验室常规方法进行，包括组织石蜡包埋，切片，染色及镜下观察。
数据处理与统计分析：本发明中所有实验数据使用GraphPad Prime6统计分析软件进行分析。p < 0.05即具有统计学差异。
测定结果如图3所示，通过HE染色观察组织病理变化，酒精组小鼠出现明显的脂肪变性，表现为脂滴明显增多（图中箭头所示），可以看到细胞凋亡，表现为核固缩，破碎（图中箭头所示）。相比于酒精组，酒精+锌+中药提取物组，无明显细胞凋亡，肝组织脂质堆积减少，肝脏形态得到改善；单独加硫酸锌与单独加中药提取物组出现细胞脂肪变性以及肝细胞凋亡，莲子提取物组与葛根提取物组也出现细胞脂肪变性以及肝细胞凋亡，而蛤蚧提取物组和阿胶提取物组有较明显的脂肪变性和细胞凋亡。
综上，通过HE染色观察组织病理变化结果来看，酒精+锌+中药提取物组与酒精组、单独中药成分组，以及单独添加硫酸锌组比较，无明显细胞凋亡，肝组织脂质堆积减少，肝脏形态得到改善。
实验例2 护肝保健酒的口感风味评价
选取20人对本发明实施例6制备的护肝保健酒与市售53度红花郎酒进行口感测试对比，评价结果如表1所示。
表1 口感风味评价结果
Figure 664573DEST_PATH_IMAGE001
经调查发现，20人中仅有一人表示有异味，剩余19人均表示与市售酱酒口感近似，证明实施例6制备的护肝保健酒的口感与未添加中药组合物的酒无明显差异。
另外，对实施例6制备的护肝保健酒进行为期24个月的观察发现，未见其外观有明显变化，证明本发明护肝保健酒具有较高的稳定性。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包括莲子提取物、葛根提取物、蛤蚧提取物和阿胶提取物。
2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包括如下体积份的组分：莲子提取物5-15份，葛根提取物5-15份，蛤蚧提取物0.5-2份，阿胶提取物2-6份。
3.根据权利要求1~2任一项所述的中药组合物，其特征在于，所述莲子提取物、葛根提取物、蛤蚧提取物和阿胶提取物均为水提物。
4.根据权利要求3所述的中药组合物，其特征在于，所述莲子提取物或葛根提取物的提取方法包括：将莲子或葛根粉碎后过筛，按照1：（6-12）的料液比，用水在35-40℃超声条件下提取1-3次，每次提取1.5-2.5h，合并各次提取液；
和/或，所述蛤蚧提取物的提取方法包括：将蛤蚧粉碎后过筛，按照1：（40-60）的料液比，用水在35-40℃超声条件下提取1-3次，每次提取1.5-2.5h，合并各次提取液；
和/或，所述阿胶提取物的提取方法包括：将阿胶捣碎后，按照1：（40-60）的料液比，用水在35-40℃超声条件下提取1-3次，每次提取1.5-2.5h，合并各次提取液。
5.根据权利要求4所述的中药组合物，其特征在于，所述提取方法中，在合并各次提取液后，还包括浓缩和去除沉淀的步骤；
其中，莲子提取物、葛根提取物的提取方法中，所述浓缩为将合并后的提取液浓缩至与中药材原料的质量体积比g：ml为1：（0.8-1.2）；
蛤蚧提取物、阿胶提取物的提取方法中，所述浓缩为将合并后的提取液浓缩至与中药材原料的质量体积比g：ml为1：（4.8-5.2）。
6.组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1~5任一项所述的中药组合物和含锌物质；
所述含锌物质优选为锌盐，所述锌盐为选自硫酸锌、葡萄糖酸锌、乳酸锌中的任意一种或多种的组合；
所述组合物中，含锌物质和中药组合物的质量体积比为（50-100）mg：（10-50）ml。
7.权利要求1~5任一项所述的中药组合物或权利要求6所述的组合物的以下任一种应用：
（1）在制备用于缓解酒精对肝脏损伤的产品中的应用；
（2）在制备用于降低血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶或肿瘤坏死因子含量的产品中的应用；
（3）在制备用于预防或辅助治疗酒精性肝损伤的产品中的应用。
8.一种护肝产品，其特征在于，所述产品包括权利要求1~5任一项所述的中药组合物，或者包括权利要求6所述的组合物。
9.根据权利要求8所述的护肝产品，其特征在于，所述护肝产品为护肝保健酒，所述护肝保健酒包括如下组分：中药组合物20-80mL/L，锌盐150-250mg/L，酒920-980mL/L；所述酒优选为酒精含量为7-55%的白酒、葡萄酒、黄酒或啤酒；
或者，所述护肝产品为无酒精护肝保健饮品，所述无酒精护肝保健饮品包括如下组分：中药组合物20-80mL/L，锌盐80-150mg/L，水920-980mL/L。
10.权利要求8或9所述的护肝产品的制备方法，其特征在于，包括：将锌盐与中药组合物混合、溶解得到第一混合物，将第一混合物再与水或酒混合得到第二混合物，将第二混合物去除不溶物后灭菌。
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