CN115362877A - 在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法 - Google Patents

Abstract

在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法。本发明将银耳菌可亲和混合芽孢经过专用的银耳菌菌丝诱导培养基Y1，于24±1℃培养6‑10天，诱导培养成银耳菌菌丝，再将上述获得的银耳菌菌丝转接到专用的银耳菌子实体诱导培养基Y2，置于24±1℃培养10‑15天，即可获得健壮的银耳菌子实体，实现了单独的银耳菌在脱离其伴生菌香灰菌时在琼脂培养基上快速、高效生长形成健壮子实体，银耳菌菌丝形成子实体的能力达到100%，为选育银耳菌新品种提供了一种新方法，解决了传统育种方法存在的育种工作量大、时间长、过程烦琐、效率低等问题。

Description

在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法

技术领域

本发明属于食用菌生产技术领域，具体涉及一种在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法。

背景技术

银耳（Tremella fuciformis Berk）隶属担子菌门（Basidiomycota）银耳纲（Tremellomycetes）银耳目（Tremellales）银耳科（Tremellaceae），是公认的高级滋补品，具有很高的食用价值和药用价值。近年来，随着产业的不断发展，生产实践中越来越多的问题也更加凸显，如品种单一、菌种退化、出耳率低、产量不稳定等问题，严重影响了产业的发展，而这归根结底是由于银耳特殊的生长要求决定的：（1）银耳菌的生长发育离不开其伴生菌——香灰菌（Hypoxylonsp.），只有当分解木质素、纤维素能力较强的香灰菌辅助时银耳才能正常生长形成子实体，即单独银耳菌在木质纤维素培养料上不能生长形成子实体；（2）银耳菌为二型态真菌，即在环境条件的影响下其存在酵母型及菌丝型两种型态。在常规琼脂培养基上银耳菌常以酵母状芽孢存在，而很难获得银耳菌菌丝，即使获得银耳菌菌丝，不仅生长缓慢，而且菌丝型转接也极容易转向酵母型芽孢态或极易变黄发生胶质化，不能获得健壮的银耳子实体；（3）由于银耳担孢子以芽殖方式进行无性繁殖，形成酵母状分生抱子，单孢子之间的杂交几乎无法进行，即难以进行银耳菌的杂交育种。以上这些现象给银耳二型态转变、银耳菌杂交育种、新品种选育及银耳菌相关基础研究等带来很大的困难。

传统银耳品种选育常用的方法是将银耳菌和香灰菌混合制成菌种，其菌种制作一级种需要约30天，二级种需要约30天，三级种需要7-10天，即仅菌种生产需要约60-70天，然后进行栽培实验，反复测评，从生长出的子实体中进行筛选选育出优良的菌株，存在的不足是：（1）育种周期长；（2）因单独银耳菌不能形成健壮子实体，难以评价其品种特异性状（如：子实体颜色、朵型、耳片厚度等），难以筛选出有特异性状、优良性状的银耳菌菌株；（3）即使在传统育种过程中筛选出表现较好的菌株，但因与香灰菌配合出菇，难以评价二者各自的性状特征，而且同时需要进一步研究其伴生菌香灰菌的菌株特性，以及二者的配比问题，育种工作量大、时间长、过程烦琐、育种效率低。因此，开发出一种新的培养基及方法既能够快速获得银耳菌菌丝并稳定保存又在不依赖香灰菌的情况下生长出健壮的银耳菌子实体是目前加快银耳菌育种，解决上述存在问题的关键，同时对银耳菌二型态转变、银耳菌杂交育种、新品种选育及银耳菌相关基础研究具有重大作用。

参考文献可见：

[1]彭卫红,王勇,黄忠乾,甘炳成.我国银耳研究现状与存在问题[J].食用菌学报,2005,(01):51-56.

[2]黄年来.银耳菌种生产的原理和方法[J].食用菌,2007,(01):25-27.

[3]田云霞,童江云,汪威,等.银耳属伴生现象研究进展[J].食用菌,2019,41(04):1-3.

[4]孔旭强,柳婷,刘云超,许欣,陈剑秋,刘英丽,孙淑静.古田银耳Tr01和Tr21的生理生化特性及生产农艺性状比较[J].食用菌学报,2019,(04):39-49.

[5]刘云超,孔旭强,张琪辉,刘新展,孙淑静.银耳育种体系的建立及其问题分析[A].中国菌物学会（Mycological Society of China）.多彩菌物 美丽中国——中国菌物学会2019年学术年会论文摘要[C].中国菌物学会（Mycological Society of China）:中国菌物学会,2019:116.

[6]贺元川,陈仕江,杨勇,贺宗毅,张德利,柴佳炎.有性杂交选育银耳优良菌株的初步研究[J].生物技术通报,2015,(02):148-152.

[7]贺元川,陈仕江,张德利,贺宗毅.银耳育种研究进展综述[J].食药用菌,2013,(03):154-155。

发明内容

发明的目的在于解决现有技术存在的问题，提供一种可在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法。

本发明采取的技术方案如下：

在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法，方法如下：

（1）制备银耳菌菌丝诱导培养基：银耳菌菌丝诱导培养基Y1配方为：蛋白胨4.0-5.0g/L，酵母粉1.0-2.0 g/L，硫酸铵1.2-1.5 g/L，过磷酸钙1.0-1.3 g/L，琼脂25-30 g/L，剩余用香灰菌滤液定容至1L；所述香灰菌滤液为银耳出菇包或香灰菌菌包的培养料基质按干料120-150g放入1L水中，煮沸浸提后经过滤获得，或者香灰菌的液体培养液经过滤获得；

（2）进行银耳菌菌丝的诱导培养：将银耳菌可亲和混合芽孢接种于所述银耳菌菌丝诱导培养基Y1，置于24±1℃培养6-10天，获得银耳菌菌丝；所述银耳菌可亲和混合芽孢是将银耳担孢子在PDA培养基上萌发获得，或通过银耳菌组织萌发获得；

（3）制备银耳菌子实体诱导培养基：银耳菌子实体诱导培养基Y2配方为：麦芽糖10-15g/L，葡萄糖10-15g/L，蔗糖10-15g/L，酵母粉0.8-1.2g/L，蛋白胨4-6g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁1g/L，1/2MS 0.8-1g/L，小麦全粉4-6g/L，6-BA 0.8-1.2mg/L，2,4-D 0.4-0.6mg/L，NAA0.4-0.6mg/L，琼脂25-30g/L，剩余用香灰菌滤液定容至1L；

（4）进行银耳菌子实体的诱导培养：将步骤（2）获得的银耳菌菌丝接种于所述银耳菌子实体诱导培养基Y2，置于24±1℃培养10-15天，即获得银耳菌子实体。

进一步地，所述银耳菌菌丝诱导培养基Y1的制作方法如下：

（1）称取银耳出菇包或香灰菌菌包的培养基质120-150g打碎，放入水中，煮沸浸提，过滤，取滤液1 L；或将香灰菌液体培养液过滤，取滤液1L；

（2）称取蛋白胨4.0-5.0g，酵母粉1.0-2.0g，硫酸铵1.2-1.5g，过磷酸钙1.0-1.3g，琼脂25-30 g，加入到上述滤液中融化后装瓶进行灭菌，得到培养基；

（3）将上述培养基无菌操作分装至培养皿中，冷却即可。

进一步地，所述银耳菌子实体诱导培养基Y2的配制如下：

（1）称取0.01g水溶性NAA，用水加热溶解，再用水定容至10mL，配成1mg/mL的NAA母液备用；

（2）称取0.01g 6-BA，用稀盐酸加热溶解，再用水定容至10mL，配成1mg/mL的6-BA母液备用；

（3）称取0.01g 2,4-D，用乙醇加热溶解，再用水定容至10mL，配成1mg/mL的2,4-D母液备用；

（4）称取麦芽糖10-15g，葡萄糖10-15g，蔗糖10-15g，酵母粉0.8-1.2g，蛋白胨4-6g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁1g，1/2MS 0.8-1g，小麦全粉4-6g，琼脂25-30g，溶于800mL香灰菌滤液中，再分别加入上述1mg/mL 的NAA母液400-600μL，1mg/mL的6-BA母液800-1200μL，1mg/mL的2,4-D母液400-600μL，最后再用香灰菌滤液定容至1L；

（5）将上述定容后的溶液分装至350mL广口组培瓶，每瓶分装50mL培养基，灭菌、冷却备用；或将上述定容后的溶液灭菌后分装于培养皿中，冷却备用。

相比现有技术，本发明至少具有以下有益效果：

（1）本发明提供了一种在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法，首先提供了一种快速、高效获得银耳菌菌丝的方法，通过专用菌丝诱导培养基Y1能够实现银耳菌的酵母状分生孢子与菌丝之间的相互转换，使银耳菌酵母状芽孢能在培养6～10天的时间内达到100%的芽孢态菌落萌发出菌丝，解决了目前银耳菌常以酵母状芽孢无限芽殖，而不能轻易萌发菌丝的问题，对研究银耳二型态转变、银耳菌杂交育种、新品种选育及银耳菌相关基础研究具有重大意义。

（2）本发明还提供了一种快速、高效获得银耳菌子实体的方法，将诱导后的银耳菌菌丝转接到专用的银耳菌子实体诱导培养基Y2，能够实现单独的银耳菌在脱离其伴生菌香灰菌时在琼脂培养基上生长形成健壮子实体，使银耳菌菌丝能在培养10-15天的时间内即可获得健壮的银耳菌子实体，在该配方中银耳菌菌丝形成子实体的能力达到100%。因此，可以通过评价银耳菌品种特性（如子实体颜色、朵型、耳片厚度等），快速、高效实现银耳菌的品种特异性筛选，为选育银耳菌新品种提供一种新方法，解决传统育种方法存在的育种工作量大、时间长、过程烦琐、效率低等问题。

附图说明

图1为银耳菌酵母状芽孢在PDA培养基中的生长情况；

图2为银耳菌酵母状芽孢在加富PDA培养基中的生长情况；

图3为银耳菌酵母状芽孢在本发明配方Y1中的菌丝萌发情况；

图4为银耳菌菌丝在PDA培养基中以菌丝型生长的情况；

图5为银耳菌菌丝在加富PDA培养基中以菌丝型生长的情况；

图6为银耳菌菌丝在ZM培养基中以菌丝型生长的情况；

图7为银耳菌菌丝在WG培养基中以菌丝型生长的情况；

图8为银耳菌菌丝在CL培养基中以菌丝型生长的情况；

图9为银耳菌菌丝在L6培养基中以菌丝型生长的情况；

图10为银耳菌菌丝在本发明的菌丝诱导培养基Y1中以菌丝型生长的情况；

图11为实施例1的银耳菌菌丝在本发明的银耳菌子实体诱导培养基Y2中的子实体生长情况；

图12为实施例2的银耳菌菌丝在本发明的银耳菌子实体诱导培养基Y2中的子实体生长情况。

图13为不同配方中芽孢萌发菌丝率及子实体形成情况；

图14为酵母状芽孢萌发菌丝率的计算方式；

图15为银耳菌子实体形成率的计算方式。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的内容进行进一步的阐述。

实施例1

一种在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法，方法如下：

（1）通过银耳担孢子在PDA培养基上萌发获得银耳菌可亲和混合芽孢；

（2）制作银耳菌菌丝诱导培养基Y1，Y1配方为：蛋白胨5.0g/L，酵母粉1.0g/L，硫酸铵1.2 g/L，过磷酸钙1.0g/L，琼脂28 g/L ，用香灰菌滤液定容至1L，制作方法如下：

a.称取银耳出菇包或香灰菌菌包的培养基质150g（干物质），打碎，放入1L水中，煮沸浸提30min，过滤，取滤液1 L，即为香灰菌滤液；

b.称取蛋白胨5.0g，酵母粉1.0g，硫酸铵1.2g，过磷酸钙1.0g，琼脂28g，加入到上述滤液中融化后装瓶进行灭菌，得到培养基；

c.将上述培养基无菌操作分装至培养皿中，冷却即可。其中，培养皿规格优选130*130mm方型培养皿；

（3）将银耳菌可亲和混合芽孢接种于上述培养皿中的银耳菌菌丝诱导培养基Y1，置于24±1℃培养8天，获得银耳菌菌丝，如图3所示；

（4）制作银耳菌子实体诱导培养基Y2，Y2配方为：麦芽糖10g/L，葡萄糖10g/L，蔗糖10g/L，酵母粉1g/L，蛋白胨5g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁1g/L，1/2MS 1g/L，小麦全粉5g/L，6-BA 1.0mg/L，2,4-D 0.5mg/L，NAA 0.5mg/L，琼脂25g/L，用香灰菌滤液定容至1L；制作方法如下：

a.称取0.01g水溶性NAA，用少量水加热溶解，再用水定容至10mL，配成1mg/mL的NAA母液备用；

b.称取0.01g 6-BA，用少量浓度0.1mol/L的稀盐酸加热溶解，再用水定容至10mL，配成1mg/mL的6-BA母液备用；

c.称取0.01g 2,4-D，用少量乙醇加热溶解，再用水定容至10mL，配成1mg/mL的2,4-D母液备用；

d.称取麦芽糖10g，葡萄糖10g，蔗糖10g，酵母粉1g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁1g，1/2MS 1g，小麦全粉5g，琼脂25g，溶于800mL香灰菌滤液中，再分别加入上述1mg/mL的NAA母液500μL，1mg/mL的6-BA母液1000μL，1mg/mL的2,4-D母液500μL，最后将上述溶液用香灰菌滤液定容至1L；

e.将上述定容后的溶液灭菌后分装于培养皿中，冷却备用；

（5）将上述步骤（3）获得的银耳菌菌丝接种于所述银耳菌子实体诱导培养基Y2，置于24±1℃培养13天，即获得银耳菌子实体，如图11所示。

实施例2

一种在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法，方法如下：

（1）通过银耳菌组织在液态PDA培养基中培养获得银耳菌可亲和混合芽孢;

（2）将银耳菌可亲和混合芽孢接种于专用的银耳菌菌丝诱导培养基Y1，Y1配方为：蛋白胨4.5g/L，酵母粉2g/L，硫酸铵1.3g/L，过磷酸钙1.1g/L，琼脂25g/L，用香灰菌滤液定容至1L。银耳菌菌丝诱导培养基Y1的制作方法如下：

a.称取银耳出菇包或香灰菌菌包的培养基质150g（干物质），打碎，放入1L 水中，煮沸浸提30min，过滤，取滤液1 L，即为香灰菌滤液；

b.称取蛋白胨4.5g，酵母粉2g，硫酸铵1.3g，过磷酸钙1.1g，琼脂25g，加入到上述滤液中融化后装瓶进行灭菌，得到培养基；

c.将上述培养基无菌操作分装至培养皿中，冷却即可。其中，培养皿规格优选130*130mm方型培养皿；

（3）将银耳菌可亲和混合芽孢接种于上述制备的培养皿中的银耳菌菌丝诱导培养基Y1，置于24±1℃培养9天，获得银耳菌菌丝；

（4）将上述步骤（3）获得的银耳菌菌丝转接到专用的银耳菌子实体诱导培养基Y2，Y2的配方为：麦芽糖15g/L，葡萄糖15g/L，蔗糖15g/L，酵母粉1.2g/L，蛋白胨4.5g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁1g/L，1/2MS 0.9g/L，小麦全粉4.0g/L，6-BA 1.2mg/L，2,4-D 0.6mg/L，NAA 0.4mg/L，琼脂30g/L，用香灰菌滤液定容至1L。银耳菌子实体诱导培养基Y2的制作方法如下：

a.称取0.01g水溶性NAA，用少量水加热溶解，用水定容至10mL，配成1mg/mL的NAA母液备用；

b.称取0.01g 6-BA，用少量稀盐酸（0.1mol/L）加热溶解，用水定容至10mL，配成1mg/mL的6-BA母液备用；

c.称取0.01g 2,4-D，用少量乙醇加热溶解，用水定容至10mL，配成1mg/mL的2,4-D母液备用；

d.称取麦芽糖15g，葡萄糖15g，蔗糖15g，酵母粉1.2g，蛋白胨4.5g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁1g，1/2MS 0.9g，小麦全粉4.0g，琼脂30g，溶于800mL香灰菌滤液中，再分别加入上述1mg/mL 的NAA母液400μL，1mg/mL 的6-BA母液1200μL，1mg/mL 的2,4-D母液600μL，最后将上述溶液用香灰菌滤液定容至1L；

e.将上述定容的溶液分装至350mL广口组培瓶，每瓶分装50mL培养基，灭菌、冷却备用；

（5）将上述步骤（3）获得的银耳菌菌丝转接到上述制备好的银耳菌子实体诱导培养基Y2，置于24±1℃培养14天即可获得银耳菌子实体，如图12所示。

实施例3

一种在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法，方法如下：

（1）将银耳菌可亲和混合芽孢接种于专用银耳菌菌丝诱导培养基Y1，Y1配方为：蛋白胨4.0g/L，酵母粉1.2g/L，硫酸铵1.5g/L，过磷酸钙1.3g/L，琼脂30 g/L ，用香灰菌滤液定容至1。Y1的制作方法如下：

a.将培养了5-10天的香灰菌液体培养液，过滤，取滤液1 L即为香灰菌滤液。所用香灰菌液体培养基配方为：麦芽糖10g/L，葡萄糖10g/L，酵母粉1g/L，鱼粉蛋白胨2g/L，硫酸镁1g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，小麦粉5g/L，1/2MS 1g/L，剩余为水，定容至1L；

b.称取蛋白胨4.0g，酵母粉1.2g，硫酸铵1.5g，过磷酸钙1.3g，琼脂30g，加入到上述滤液中融化后装瓶进行灭菌，得到培养基；

c.将上述培养基无菌操作分装至培养皿中，冷却即可。其中，培养皿规格优选130*130mm方型培养皿；

（2）将银耳菌可亲和混合芽孢接种于上述制备的培养皿的银耳菌菌丝诱导培养基Y1，置于24±1℃培养10天，获得银耳菌菌丝；

（3）将上述步骤（2）获得的银耳菌菌丝转接到专用的银耳菌子实体诱导培养基Y2，Y2的配方为：麦芽糖11g/L，葡萄糖11g/L，蔗糖11g/L，酵母粉0.8g/L，蛋白胨6g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁1g/L，1/2MS 0.8g/L，小麦全粉6g/L，6-BA 0.8mg/L，2,4-D 0.4mg/L，NAA0.6mg/L，琼脂28g/L，用香灰菌滤液定容至1L。Y2配方的配制方法为：

a.称取0.01g水溶性NAA，用少量水加热溶解，用水定容至10mL，配成1mg/mL的母液备用；

b.称取0.01g 6-BA，用少量稀盐酸（0.1mol/L）加热溶解，用水定容至10mL，配成1mg/mL的母液备用；

c.称取0.01g 2,4-D，用少量乙醇加热溶解，用水定容至10mL，配成1mg/mL的母液备用；

d.称取麦芽糖11g，葡萄糖11g，蔗糖11g，酵母粉0.8g，蛋白胨6g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁1g，1/2MS 0.8g，小麦全粉6g，琼脂28g，溶于800mL香灰菌滤液中，再分别加入上述1mg/mL 的NAA母液600μL，6-BA母液800μL，2,4-D母液400μL，最后将上述溶液用香灰菌滤液定容至1L；

e.将上述定容的溶液分装至350mL广口组培瓶，每瓶分装50mL培养基，灭菌、冷却备用；或将上述溶液灭菌后分装于培养皿中，冷却备用；

（4）将上述步骤（2）获得的银耳菌菌丝转接到上述制备好的培养皿中的银耳菌子实体诱导培养基Y2，置于24±1℃培养13天即可获得银耳菌子实体。

配方对比试验：

1．供试菌株：银耳菌株Tr01购自福建古田食用菌研究所。

2．供试培养基配方见图13的表1。

3．方法

3.1培养基配制方法

ZM、WG、CL培养基的配制方法分别参照参考文献[8]、[9]、[10]，Y1、Y2培养基的配制方法参照本发明，PDA、加富PDA及L6培养基的配制方法按照现有技术的常规操作进行即可。

3.2 接种及数据测量方法

用无菌接种环刮取一环银耳菌可亲和混合芽孢（酵母状芽孢）分别接种于上述ZM、WG、CL、 Y1、Y2 、PDA、加富PDA及L6培养基中，置于24±1℃条件下培养，每天观察芽孢形态及萌发菌丝情况，并记录最早出现菌丝的时间；培养至第30天，观察统计酵母状芽孢萌发菌丝率，其计算方式见图14。

用直径1cm（内径0.8cm）的打孔器将培养皿内的银耳菌菌丝菌落依次打孔，然后用接种针挑取直径为0.8cm的银耳菌菌丝块分别接种于上述ZM、WG、CL、 Y1、Y2 、PDA、加富PDA及L6培养基中，置于24±1℃条件下培养，观察菌丝生长情况及银耳菌子实体形成情况，培养至第30天，观察统计银耳菌子实体形成率，其计算方式见图15。

4．结果与分析

由图13的表1所示，酵母状芽孢在常规培养基PDA及加富PDA培养基中30天未见萌发菌丝，芽孢菌落形态光滑、较粘稠、米黄色。图1为银耳菌酵母状芽孢在PDA培养基中的生长情况，图2为银耳菌酵母状芽孢在加富PDA培养基中的生长情况。ZM培养基中酵母状芽孢最早萌发菌丝的时间为15天，第30天统计其酵母状芽孢萌发菌丝率为60%，芽孢菌落边缘稍皱缩、粘稠、鲜黄色。WG培养基中酵母状芽孢最早萌发菌丝的时间为20天，第30天统计其酵母状芽孢萌发菌丝率为37.5%，芽孢菌落形态较光滑、粘稠、米黄色。CL培养基中酵母状芽孢最早萌发菌丝的时间为13天，第30天统计其酵母状芽孢萌发菌丝率为62.5%，芽孢菌落形态皱缩、粘稠、黄色、菌落表面较干。L6培养基中酵母状芽孢最早萌发菌丝的时间为10天，第30天统计其酵母状芽孢萌发菌丝率为62.5%，芽孢菌落形态较光滑、粘稠、米黄色。本发明培养基Y1中酵母状芽孢最早萌发菌丝的时间为6天，第30天统计其酵母状芽孢萌发菌丝率为100%，芽孢菌落形态边缘稍皱缩、粘稠、黄色。由此可见，本发明的银耳菌菌丝诱导培养基Y1中酵母状芽孢萌发菌丝率显著高于其他培养基。

由图13的表1所示，由银耳菌菌丝转接至各供试培养基后，在常规培养基PDA及加富PDA培养基中未形成银耳菌子实体，菌丝偏黄、易胶质化，且极易转向芽孢态，见图4、图5。ZM培养基中未形成银耳菌子实体，边缘生长中菌丝较白，但后期易变黄、老化、胶质化，生长较慢，较易转向芽孢态，见图6。WG培养基中未形成银耳菌子实体，菌丝较粗壮、较洁白，生长缓慢，较易转向芽孢态，见图7。CL培养基中未形成银耳菌子实体，菌丝生长较快，但偏黄，较弱、纤细，见图8。L6培养基中有部分可以形成银耳菌子实体，其形成率为52.9%，见图9。Y1培养基中银耳菌菌丝较粗、洁白，不转向芽孢态，而始终以菌丝态生长，但不形成银耳菌子实体，见图10。本发明的银耳菌子实体诱导培养基Y2中菌丝粗壮、洁白，生长较快，菌丝不易转向芽孢态，且极易诱导形成健壮银耳菌子实体，其形成率达到100%，见图11。由此可见，本发明的银耳菌子实体诱导培养基Y2中银耳菌子实体形成率显著高于其他配方。

以上实施例只是本发明的部分典型实施例，并非对本发明保护范围的限定，凡是在本发明权利要求书的技术方案限定范围内的实施例，均属于本发明的保护范围。

进一步的实施例，银耳菌菌丝诱导培养基Y1配方范围为：蛋白胨4.0-5.0g/L，酵母粉1.0-2.0 g/L，硫酸铵1.2-1.5 g/L，过磷酸钙1.0-1.3 g/L，琼脂25-30 g/L，剩余用香灰菌滤液定容至1L；所述香灰菌滤液为银耳出菇包或香灰菌菌包的培养料基质按干料120-150g放入1L水中，煮沸浸提后经过滤获得，或者香灰菌的液体培养液经过滤获得。将银耳菌可亲和混合芽孢接种于银耳菌菌丝诱导培养基Y1，置于24±1℃培养6-10天，可获得银耳菌菌丝。银耳菌子实体诱导培养基Y2配方范围为：麦芽糖10-15g/L，葡萄糖10-15g/L，蔗糖10-15g/L，酵母粉0.8-1.2g/L，蛋白胨4-6g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁1g/L，1/2MS 0.8-1g/L，小麦全粉4-6g/L，6-BA 0.8-1.2mg/L，2,4-D 0.4-0.6mg/L，NAA0.4-0.6mg/L，琼脂25-30g/L，剩余用香灰菌滤液定容至1L。将银耳菌菌丝接种于银耳菌子实体诱导培养基Y2，置于24±1℃培养10-15天，可获得银耳菌子实体。

参考文献[8]周玉林,房贵.银耳芽孢诱发菌丝的营养条件初探[J].中国食用菌,1985,(01):7-8.

参考文献[9]汪国莲,陈立国,陈明.银耳菌丝体生长营养条件的初步研究[J].中国食用菌,2001,(04):12-14.

参考文献[10]陈利丁,刘云超,孔旭强,张琪辉,纪君仪,李帆,孙淑静.银耳子实体及菌丝体胶质化产生的双核酵母状孢子萌发条件探索[J].中国食用菌,2021,(02):11-18.

Claims (3)

1.在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法，其特征在于，方法如下：

（1）制备银耳菌菌丝诱导培养基：银耳菌菌丝诱导培养基Y1配方为：蛋白胨4.0-5.0g/L，酵母粉1.0-2.0 g/L，硫酸铵1.2-1.5 g/L，过磷酸钙1.0-1.3 g/L，琼脂25-30 g/L，剩余用香灰菌滤液定容至1L；所述香灰菌滤液为银耳出菇包或香灰菌菌包的培养料基质按干料120-150g放入1L水中，煮沸浸提后经过滤获得，或者香灰菌的液体培养液经过滤获得；

（2）进行银耳菌菌丝的诱导培养：将银耳菌可亲和混合芽孢接种于所述银耳菌菌丝诱导培养基Y1，置于24±1℃培养6-10天，获得银耳菌菌丝；所述银耳菌可亲和混合芽孢是将银耳担孢子在PDA培养基上萌发获得，或通过银耳菌组织萌发获得；

（3）制备银耳菌子实体诱导培养基：银耳菌子实体诱导培养基Y2配方为：麦芽糖10-15g/L，葡萄糖10-15g/L，蔗糖10-15g/L，酵母粉0.8-1.2g/L，蛋白胨4-6g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，硫酸镁1g/L，1/2MS 0.8-1g/L，小麦全粉4-6g/L，6-BA 0.8-1.2mg/L，2,4-D 0.4-0.6mg/L，NAA0.4-0.6mg/L，琼脂25-30g/L，剩余用香灰菌滤液定容至1L；

（4）进行银耳菌子实体的诱导培养：将步骤（2）获得的银耳菌菌丝接种于所述银耳菌子实体诱导培养基Y2，置于24±1℃培养10-15天，即获得银耳菌子实体。

2.如权利要求1所述的在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法，其特征在于，所述银耳菌菌丝诱导培养基Y1的制作方法如下：

（1）称取银耳出菇包或香灰菌菌包的培养基质120-150g打碎，放入水中，煮沸浸提，过滤，取滤液1 L；或将香灰菌液体培养液过滤，取滤液1L；

（2）称取蛋白胨4.0-5.0g，酵母粉1.0-2.0g，硫酸铵1.2-1.5g，过磷酸钙1.0-1.3g，琼脂25-30 g，加入到上述滤液中融化后装瓶进行灭菌，得到培养基；

（3）将上述培养基无菌操作分装至培养皿中，冷却即可。

3.如权利要求1或2所述的在琼脂培养基上快速高效获得银耳菌子实体的方法，其特征在于，所述银耳菌子实体诱导培养基Y2的配制如下：

（1）称取0.01g水溶性NAA，用水加热溶解，再用水定容至10mL，配成1mg/mL的NAA母液备用；

（2）称取0.01g 6-BA，用稀盐酸加热溶解，再用水定容至10mL，配成1mg/mL的6-BA母液备用；

（3）称取0.01g 2,4-D，用乙醇加热溶解，再用水定容至10mL，配成1mg/mL的2,4-D母液备用；

（4）称取麦芽糖10-15g，葡萄糖10-15g，蔗糖10-15g，酵母粉0.8-1.2g，蛋白胨4-6g，磷酸二氢钾1.5g，硫酸镁1g，1/2MS 0.8-1g，小麦全粉4-6g，琼脂25-30g，溶于800mL香灰菌滤液中，再分别加入上述1mg/mL 的NAA母液400-600μL，1mg/mL的6-BA母液800-1200μL，1mg/mL的2,4-D母液400-600μL，最后再用香灰菌滤液定容至1L；

（5）将上述定容后的溶液分装至350mL广口组培瓶，每瓶分装50mL培养基，灭菌、冷却备用；或将上述定容后的溶液灭菌后分装于培养皿中，冷却备用。

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