CN111454936A - 一种高三萜含量灵芝新品种选育方法 - Google Patents
一种高三萜含量灵芝新品种选育方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种高三萜含量灵芝新品种选育方法，包括以下步骤：S1：选取野生灵芝为亲本，通过灵芝组织分离法分离培养获得纯菌丝体，经过栽培试验，筛选获得产孢量较高的灵芝品种；S2：将得到的灵芝孢子制成孢子悬浮液，并将其等分为两份；S3：将其中一份孢子悬浮液通过紫外线灯进行诱变。本发明提供的高三萜含量灵芝新品种选育方法具有通过选择野生灵芝作为亲本，然后分别对孢子悬浮液做紫外线诱变和低能氮离子诱变，并进行分别培养，然后将两种稳定的诱变灵芝进行杂交产生新的的灵芝品种，并进行不少于20代的连续培养，产生稳定的灵芝子体作为亲本，该灵芝同时具备两种诱变灵芝的优点，提高灵芝中灵芝三萜类化合物等有益物质的含量。
Description
技术领域
本发明涉及灵芝选育领域，尤其涉及一种高三萜含量灵芝新品种选育方法。
背景技术
灵芝又称为瑞草、神芝、仙草、瑶草、还阳草、林中灵、菌灵芝、万年蕈、灵草、赤芝、丹芝、琼珍等，是一种多孔菌科真菌灵芝的子实体。其外形呈伞状，菌盖肾形、半圆形或近圆形。灵芝，中药材名。本品为多孔蓖科真菌灵芝的子实体。全年可采，阴干或晒干。功能主治为：滋补强壮。用于健脑、消炎、利尿、益肾，在明代大医学家李时珍编著的《本草纲目》中有灵芝的记载，现代药理学研究表明灵芝三萜类化合物是灵芝的主要活性成分，目前从子实体、菌丝体和发酵液中分离获得灵芝酸A、灵芝酸B、灵芝烯酸B、灵芝酸C等150多种灵芝三萜单体化合物，基本结构为羊毛甾烷四环三萜，具有杀灭肿瘤细胞、抗氧化、降血糖、保护肝脏、抗HIV-1病毒等多种生物学活。
灵芝中灵芝三萜类化合物是灵芝的主要活性成分，提高灵芝中三萜类化合物的含量，选种是关键之一，现有对灵芝通过选取野生灵芝进行栽培并通过紫外线或者氮离子等对灵芝进行诱变，提高灵芝中有益物质的含量，但这两种诱变方法所产生的灵芝品种只具备各自的优点，不能更进一步的提高灵芝中三萜类化合物等有益物质的含量。
因此，有必要提供一种高三萜含量灵芝新品种选育方法解决上述技术问题。
发明内容
本发明提供一种高三萜含量灵芝新品种选育方法，解决了现有通过紫外线或者氮离子等对灵芝进行诱变，但这两种诱变方法所产生的灵芝品种只具备各自的优点，不能更进一步的提高灵芝中三萜类化合物等有益物质的含量的问题。
为解决上述技术问题，本发明提供的高三萜含量灵芝新品种选育方法，包括以下步骤：
S1：选取野生灵芝为亲本，通过灵芝组织分离法分离培养获得纯菌丝体，经过栽培试验，筛选获得产孢量较高的灵芝品种；
S2：将得到的灵芝孢子制成孢子悬浮液，并将其等分为两份；
S3：将其中一份孢子悬浮液通过紫外线灯进行诱变，然后用无菌水将紫外线照射后的孢子悬浮液稀释，再将其涂布在培养皿进行培养，得到菌落，选纯正、健壮的单个菌落移入斜面试管内，待斜面菌丝长好后，再分别接入原种中，进行栽培试验，择优留取；
S4：将另一份孢子悬浮液，通过无菌水稀释孢子悬浮液，然后使注入低能氮离子进行化学诱变，然后将其涂覆在培养皿中进行培养，在平板上得到菌落，选纯正、健壮的单个菌落移入斜面试管内，待斜面菌丝长好后，再分别接入原种中，进行栽培试验，择优留取；
S5：将两种诱变方式获取的灵芝配种进行连续培育20代，选取稳定健康的诱变灵芝，然后对两种诱变灵芝产生的孢子进行杂交培养，得到子实体。
通过选择野生灵芝作为亲本，然后分别对孢子悬浮液做紫外线诱变和低能氮离子诱变，并进行分别培养，然后将两种稳定的诱变灵芝进行杂交产生新的的灵芝品种，并进行不少于20代的连续培养，产生稳定的灵芝子体作为亲本，该灵芝同时具备两种诱变灵芝的优点，提高灵芝中灵芝三萜类化合物等有益物质的含量。
优选的，所述S3和S4中孢子悬浮液在培养皿中培养培养培养7～12d，且培养温度在在24.5～26.5℃下。
保证生长有充足的时间和合适的温度条件。
优选的，所述S3中培养皿中包含葡糖糖13.2g、蔗糖13g、麦芽糖12.2g、可溶性淀粉11.4、和糖蜜12.8g，琼脂2.1g、无菌水1L。
提高碳源，提供足够的营养，提高灵芝胞外多糖含量。
优选的，所述S4中培养基中包括硫酸铵9.9g、硝酸钾5.4g、豆饼粉13.3g、蛋白胨13,1g、酵母膏、玉米浆14g、琼脂2.1g、无菌水1L。
提供足够氮源，提高灵芝胞外多糖含量。
优选的，所述S3中和S4中在长处菌丝后，然后对生物量进行测定，选择生物量重量高于发菌株5％重量的菌株进行培养。
优选的，所述S2中孢子首先通过氯氨T溶液进行处理。
优选的，所述S5中将得到的子实体连续培育不少于20代，然后选择稳定的灵芝子体。
通过不少于二十代的培养，使所培养的灵芝更加具有稳定性。
优选的，所述S1中选择朵型完整、菌盖厚实、菌柄长、抗病性强、刚开伞的野生灵芝子实体为亲本。
优选的，还包括一种培养皿，所述培养皿包括皿体，所述皿体的内部设置有放置盘，所述放置盘上开设有多个培养孔，所述皿体的周侧面开设有三个活动槽，所述活动槽内壁的顶部的一侧连通有放入口，所述放置盘的周侧面的顶部固定连接有三个带动柄，带动柄通过活动槽延伸至所述皿体的外部，多个所述培养孔通过第一连接槽和第二连接槽连通，所述带动柄的两侧均粘接有橡胶块。
通过设置放置盘，在培养灵芝时，将其放置到不同的培养孔，可以使灵芝培养更加的均匀的分布在培养皿中，且可以极大减小灵芝培养体之间相互接触，与培养体触面积变小，影响生长，且通过带动柄可以往复转动放置盘，使其振动，提高灵芝培养体与培养体之间的接触面积，提高灵芝培养的生长速度和质量；
放置盘2的高度值小于皿体1的深度，第一连接槽4和第二连接槽5开设在放置盘2的顶部，用于连通多个培养孔，这样在调加培养液时，可以快速流入到每个培养孔3中，放入口7的宽度与带动柄6的宽度相同，小于带动柄6和橡胶块9宽度之和，两个橡胶块9宽度之和在1.5毫米，通过设置橡胶块，时带动柄6不易通过放入口7移出。
与相关技术相比较，本发明提供的高三萜含量灵芝新品种选育方法具有如下有益效果：
本发明提供一种高三萜含量灵芝新品种选育方法，通过选择野生灵芝作为亲本，然后分别对孢子悬浮液做紫外线诱变和低能氮离子诱变，并进行分别培养，然后将两种稳定的诱变灵芝进行杂交产生新的的灵芝品种，并进行不少于20代的连续培养，产生稳定的灵芝子体作为亲本，该灵芝同时具备两种诱变灵芝的优点，提高灵芝中灵芝三萜类化合物等有益物质的含量。
附图说明
图1为本发明提供的高三萜含量灵芝新品种选育方法的一种较佳实施例的结构示意图；
图2为本发明中培养皿的结构示意图；
图3为图2所示的培养皿的侧视图。
图中标号：1、皿体，2、放置盘，3、培养孔，4、第一连接槽，5、第二连接槽，6、带动柄，7、放入口，8、活动槽，9、橡胶块。
具体实施方式
下面结合附图和实施方式对本发明作进一步说明。
请结合参阅图1、图2和图3，其中，图1为本发明提供的高三萜含量灵芝新品种选育方法的一种较佳实施例的结构示意图；图2为本发明中培养皿的结构示意图；图3为图2所示的培养皿的侧视图。高三萜含量灵芝新品种选育方法，包括以下步骤：
S1：选取野生灵芝为亲本，通过灵芝组织分离法分离培养获得纯菌丝体，经过栽培试验，筛选获得产孢量较高的灵芝品种；
S2：将得到的灵芝孢子制成孢子悬浮液，并将其等分为两份；
S3：将其中一份孢子悬浮液通过紫外线灯进行诱变，然后用无菌水将紫外线照射后的孢子悬浮液稀释，再将其涂布在培养皿进行培养，得到菌落，选纯正、健壮的单个菌落移入斜面试管内，待斜面菌丝长好后，再分别接入原种中，进行栽培试验，择优留取；
S4：将另一份孢子悬浮液，通过无菌水稀释孢子悬浮液，然后使注入低能氮离子进行化学诱变，然后将其涂覆在培养皿中进行培养，在平板上得到菌落，选纯正、健壮的单个菌落移入斜面试管内，待斜面菌丝长好后，再分别接入原种中，进行栽培试验，择优留取；
S5：将两种诱变方式获取的灵芝配种进行连续培育20代，选取稳定健康的诱变灵芝，然后对两种诱变灵芝产生的孢子进行杂交培养，得到子实体。
灵芝孢子有四种性别：a1、a2、b1、b2，只有a、b两类不同性别的孢子交配才能长出子实体；
孢子培养皿中PH优选为5.5到6.5。
所述S3和S4中孢子悬浮液在培养皿中培养培养培养7～12d，且培养温度在在24.5～26.5℃下。
优选培养时间为10天，有限培养温度为25摄氏度，有限PH为6。
所述S3中培养皿中包含葡糖糖13.2g、蔗糖13g、麦芽糖12.2g、可溶性淀粉11.4、和糖蜜12.8g，琼脂2.1g、无菌水1L。
所述S4中培养基中包括硫酸铵9.9g、硝酸钾5.4g、豆饼粉13.3g、蛋白胨13,1g、酵母膏、玉米浆14g、琼脂2.1g、无菌水1L。
所述S3中和S4中在长处菌丝后，然后对生物量进行测定，选择生物量重量高于发菌株5％重量的菌株进行培养。
所述S2中孢子首先通过氯氨T溶液进行处理。
所述S5中将得到的子实体连续培育不少于20代，然后选择稳定的灵芝子体。
且培养过程中，每代中选取最优的灵芝颗体进行再次培养直到灵芝中各种含量元素稳定在一个相对的值。
所述S1中选择朵型完整、菌盖厚实、菌柄长、抗病性强、刚开伞的野生灵芝子实体为亲本。
还包括一种培养皿，所述培养皿包括皿体1，所述皿体1的内部设置有放置盘2，所述放置盘2上开设有多个培养孔3，所述皿体1的周侧面开设有三个活动槽8，所述活动槽8内壁的顶部的一侧连通有放入口7，所述放置盘2的周侧面的顶部固定连接有三个带动柄6，带动柄6通过活动槽8延伸至所述皿体1的外部，多个所述培养孔3通过第一连接槽4和第二连接槽5连通，所述带动柄6的两侧均粘接有橡胶块9。
放置盘2的高度值小于皿体1的深度，第一连接槽4和第二连接槽5开设在放置盘2的顶部，用于连通多个培养孔，这样在调加培养液时，可以快速流入到每个培养孔3中，放入口7的宽度与带动柄6的宽度相同，小于带动柄6和橡胶块9宽度之和，两个橡胶块9宽度之和在1.5毫米，通过设置橡胶块，时带动柄6不易通过放入口7移出。
通过设置放置盘，在培养灵芝时，将其放置到不同的培养孔3，可以使灵芝培养更加的均匀的分布在培养皿中，且可以极大减小灵芝培养体之间相互接触，与培养体触面积变小，影响生长，且通过带动柄6可以往复转动放置盘，使其振动，提高灵芝培养体与培养体之间的接触面积，提高灵芝培养的生长速度和质量；
且通过转动带动柄6，使带动柄6对应放入口7，可以将放置盘2取下，取下时，压缩橡胶块9，方便对放置盘2和皿体1进行清洗消毒，安装时，将带动柄6对应放入口7放入，按压带动柄6，使放置口7的两侧挤压橡胶块9，进入到活动槽8，然后转动带动柄6，使活动槽8对其进行限位，安装简单；
皿体1可以通过限位件卡接皿盖，皿盖内表面设置硅胶圈。
本发明提供的高三萜含量灵芝新品种选育方法的工作原理如下：
选取野生灵芝为亲本，选择朵型完整、菌盖厚实、菌柄长、抗病性强、刚开伞的野生灵芝子实体，通过灵芝组织分离法分离培养获得纯菌丝体，经过栽培试验，筛选获得产孢量较高的灵芝品种；
将得到的灵芝孢子制成孢子悬浮液，并将其等分为两份；
将其中一份孢子悬浮液通过紫外线灯进行诱变，然后用无菌水将紫外线照射后的孢子悬浮液稀释，再将其涂布在培养皿进行培养，且孢子悬浮液在培养皿中培养培养培养7～12d，且培养温度在在24.5～26.5℃下得到菌落，培养基中包括硫酸铵9.9g、硝酸钾5.4g、豆饼粉13.3g、蛋白胨13,1g、酵母膏、玉米浆14g、琼脂2.1g、无菌水1L，选纯正、健壮的单个菌落移入斜面试管内，待斜面菌丝长好后，再分别接入原种中，进行栽培试验，择优留取；
将另一份孢子悬浮液，通过无菌水稀释孢子悬浮液，然后使注入正氮离子进行化学诱变，然后将其涂覆在培养皿中进行培养，培养基中包括硫酸铵9.9g、硝酸钾5.4g、豆饼粉13.3g、蛋白胨13,1g、酵母膏、玉米浆14g、琼脂2.1g、无菌水1L，且孢子悬浮液在培养皿中培养培养培养7～12d，且培养温度在在24.5～26.5℃下在平板上得到菌落，选纯正、健壮的单个菌落移入斜面试管内，待斜面菌丝长好后，再分别接入原种中，进行栽培试验，择优留取；
将两种诱变方式获取的灵芝配种进行连续培育20代，选取稳定健康的诱变灵芝，然后对两种诱变灵芝产生的孢子进行杂交培养，得到子实体，并进行连续培育不少于20代，然后选择稳定发育的灵芝子实体作为亲本。
与相关技术相比较，本发明提供的高三萜含量灵芝新品种选育方法具有如下有益效果：
通过选择野生灵芝作为亲本，然后分别对孢子悬浮液做紫外线诱变和低能氮离子诱变，并进行分别培养，然后将两种稳定的诱变灵芝进行杂交产生新的的灵芝品种，并进行不少于20代的连续培养，产生稳定的灵芝子体作为亲本，该灵芝同时具备两种诱变灵芝的优点，提高灵芝中灵芝三萜类化合物等有益物质的含量。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (9)
1.一种高三萜含量灵芝新品种选育方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：选取野生灵芝为亲本，通过灵芝组织分离法分离培养获得纯菌丝体，经过栽培试验，筛选获得产孢量较高的灵芝品种；
S2：将得到的灵芝孢子制成孢子悬浮液，并将其等分为两份；
S3：将其中一份孢子悬浮液通过紫外线灯进行诱变，然后用无菌水将紫外线照射后的孢子悬浮液稀释，再将其涂布在培养皿进行培养，得到菌落，选纯正、健壮的单个菌落移入斜面试管内，待斜面菌丝长好后，再分别接入原种中，进行栽培试验，择优留取；
S4：将另一份孢子悬浮液，通过无菌水稀释孢子悬浮液，然后使注入低能氮离子进行化学诱变，然后将其涂覆在培养皿中进行培养，在平板上得到菌落，选纯正、健壮的单个菌落移入斜面试管内，待斜面菌丝长好后，再分别接入原种中，进行栽培试验，择优留取；
S5：将两种诱变方式获取的灵芝配种进行连续培育20代，选取稳定健康的诱变灵芝，然后对两种诱变灵芝产生的孢子进行杂交培养，得到子实体。
2.根据权利要求1所述的高三萜含量灵芝新品种选育方法，其特征在于，所述S3和S4中孢子悬浮液在培养皿中培养培养培养7～12d，且培养温度在在24.5～26.5℃下。
3.根据权利要求1所述的高三萜含量灵芝新品种选育方法，其特征在于，所述S3中培养皿中包含葡糖糖13.2g、蔗糖13g、麦芽糖12.2g、可溶性淀粉11.4、和糖蜜12.8g，琼脂2.1g、无菌水1L。
4.根据权利要求1所述的高三萜含量灵芝新品种选育方法，其特征在于，所述S4中培养基中包括硫酸铵9.9g、硝酸钾5.4g、豆饼粉13.3g、蛋白胨13,1g、酵母膏、玉米浆14g、琼脂2.1g、无菌水1L。
5.根据权利要求1所述的高三萜含量灵芝新品种选育方法，其特征在于，所述S3中和S4中在长处菌丝后，然后对生物量进行测定，选择生物量重量高于发菌株5％重量的菌株进行培养。
6.根据权利要求1所述的高三萜含量灵芝新品种选育方法，其特征在于，所述S2中孢子首先通过氯氨T溶液进行处理。
7.根据权利要求1所述的高三萜含量灵芝新品种选育方法，其特征在于，所述S5中将得到的子实体连续培育不少于20代，然后选择稳定的灵芝子体。
8.根据权利要求1所述的高三萜含量灵芝新品种选育方法，其特征在于，所述S1中选择朵型完整、菌盖厚实、菌柄长、抗病性强、刚开伞的野生灵芝子实体为亲本。
9.根据权利要求1所述的高三萜含量灵芝新品种选育方法，其特征在于，还包括一种培养皿。
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