CN102895685B - 培养基的灭菌系统、利用该系统的灭菌方法以及蛹虫草的培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种培养基的灭菌系统，利用该灭菌系统对培养基进行灭菌的方法，以及蛹虫草的培养方法。所述培养基的灭菌系统，包括：用排气管道连接的蒸汽发生器和灭菌柜，所述灭菌柜末端连接的排气管道分为两条支路，一条直排，另一条安装依次连接的真空罐和水循环式真空泵。本发明的技术增加了培养基空隙度，扩大菌丝生长空间，培养基冷却速度快、干燥程度高，最终达到提高生物转化率的目的；并且降低了生产成本，有利于相应技术的推广和应用，具有很高的实用价值和应用价值。

Description

培养基的灭菌系统、利用该系统的灭菌方法以及蛹虫草的培养方法

技术领域

本发明涉及蛹虫草的栽培技术领域，具体地，涉及一种培养基的灭菌系统，利用该灭菌系统对培养基进行灭菌的方法，以及蛹虫草的培养方法。

背景技术

蛹虫草（Cordyceps militaris(L.Fr)Link），属子囊菌门（Ascomycota）、核菌纲（Pyrenomycetes）、球壳目（Sphaeriales)、麦角菌科（Clavicipitaceae)、虫草属（Cordyceps（Fr.）Link）真菌。蛹虫草是虫草属真菌的模式种，在自然界多寄生在多种鳞翅日昆虫的幼虫和蛹上。

近年来，研究表明，人工栽培的蛹虫草化学成分及药理作用与冬虫夏草相似。因此，蛹虫草的开发应用具有极大的潜在市场，人工培养蛹虫草是解决野生虫草来源不足的良好途径。

目前的规模化蛹虫草生产中均采用半人工合成培养基进行规模化栽培，主要的原因是原料（大米、小米、高粱、玉米、奶粉、黄豆等）的来源广泛且容易保存不受季节的限制。无论大米、小米、小麦、高粱等培养基原料在高温高压灭菌过程中都会发生淀粉糊化的现象，培养基中的原料相互粘连，最终导致培养基原料中菌丝生长空间小或者菌丝无法生长的现象发生，最终导致培养基原料生物转化率很低。通过降低水分的办法虽然能在一定程度上增加培养基中的孔隙度，但由于培养基含水量低，会导致子实体提早停止发育，最终还是无法提高培养基的生物转化率。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的之一在于，提供一种培养基的灭菌系统。

本发明的另一目的在于，提供一种利用所述灭菌系统对培养基进行灭菌的方法。

本发明的又一目的在于，提供一种利用所述灭菌系统对蛹虫草进行培养的方法。

本发明提供的培养基的灭菌系统，包括：用排气管道连接的蒸汽发生器和灭菌柜，所述灭菌柜末端连接的排气管道分为两条支路，一条直排，另一条安装依次连接的真空罐和水循环式真空泵。

其中，所述水循环式真空泵还配有真空度表。

本发明在另一条排气管道上加装水循环式真空泵，并配有真空度表，目的是：第一，负压使培养基颗粒物之间间隙度加大；第二，负压使培养基颗粒物之间的游离水分抽出，从而在接种阶段液体菌种能均匀进入培养基的底部。

其中，所述灭菌柜具有内胆和外胆的结构，内胆和外胆之间用排气管道相连通。

其中，所述真空罐的体积为灭菌柜内胆体积的1~10倍，优选5倍。

进一步地，将真空罐浸泡在冷却循环水槽内。目的是急速的降温使蒸汽冷凝，同时也加速了灭菌柜的排空。

进一步地，连通所述灭菌柜内胆和外胆的排气管道上又引出一条排气管道，安装有空气过滤器。

更进一步地，空气过滤器的粒径为0.2μm。

其中，两条支路，即直排管道和安装有水循环式真空泵的管道上都装有排气开关。

其中，所述空气过滤器与灭菌柜连接的前端安装有开关。加装 的空气过滤器的作用是：当保持一定的真空度强制排蒸汽结束后，打开空气过滤器前的开关，从空气过滤器中导入无菌空气进入灭菌柜，平衡灭菌柜内外压力，使灭菌柜可以打开，培养基出柜；当然也可采用打开蒸汽直排管道开关的方式，导入外界空气，使灭菌柜内外压力平衡，但这种处理方式可能会向灭菌柜内引入外界污染。

在培养基灭菌系统的改造中，在真空泵的前方添加了一个真空罐，其目的就是为了加强培养基的干燥程度：加了真空罐后，在抽真空的过程中，灭菌柜内胆的蒸汽就能更好的扩散在真空罐中，而不加真空罐的方法，蒸汽没有扩散的空间，因此干燥程度差，而加了真空罐的干燥程度好；进一步地，加了真空罐后，当抽真空过程结束后，若打开空气过滤器向灭菌柜内胆进入无菌空气时，由于真空罐的存在，能够将灭菌柜内胆的蒸汽吸入真空罐中，也加强了培养基的干燥程度。

本发明提供的利用所述灭菌系统对培养基进行灭菌的方法，包括以下步骤：

（1）将培养基放入灭菌柜，并由蒸汽发生器向灭菌柜供入蒸汽进行灭菌；

（2）打开两条支路的排气管道排蒸汽，当蒸汽压力下降到一半时，关闭直排管道，开启水循环式真空泵强制排蒸汽；

（3）当水循环式真空泵的压力指示为-0.05至-0.1MPa时，同时关闭装有水循环式真空泵支路的排气管道和水循环式真空泵，让灭菌柜保持当前的压力（-0.05至-0.1MPa）5~10min；

（4）当灭菌柜内外压力平衡后，灭菌过程结束。

其中，可以打开所述空气过滤器，向灭菌柜导入无菌空气。这样可以平衡灭菌柜内外的压力，使灭菌柜可以打开，培养基出柜；这样也可以使灭菌柜里导入的是经过过滤的无菌空气，保证灭菌柜不被污染。当然也可采用打开蒸汽直排管道开关的方式，导入外界 空气，使灭菌柜内外压力平衡，但这种处理方式可能会向灭菌柜内引入外界污染。

其中，步骤（1）中，在温度121℃下进行灭菌，保持20分钟。

其中，步骤（1）中，蒸汽压力为0.11MPa。

进一步地，步骤（3）中，水循环式真空泵的压力指示优选为-0.05MPa。

进一步地，步骤（3）中，保持灭菌柜的压力优选8min。

本发明提供的一种蛹虫草的培养方法，包括以下步骤：

1）培养基制备：将谷物原料用食用油浸润后，与营养液进行复配，得到蛹虫草子实体生长用的培养基；

2）灭菌：按上述利用所述灭菌系统对培养基进行灭菌的方法对步骤1）得到的培养基进行灭菌处理；

3）接种：将蛹虫草菌种接种至步骤2）灭菌后的培养基上；

4）对接种好的蛹虫草菌种进行暗培养和光照培养；

5）采收蛹虫草子实体。

对蛹虫草子实体生长用的培养基灭菌不但加速了培养基的冷却（抽蒸汽和水，尤其是游离水，并带出热量），更重要的是可以提高培养基上菌种的生物转化率。并且，在灭菌系统的改造中，在真空泵的前方添加了一个真空罐，加强了培养基的干燥程度。

其中，步骤1）中，所述谷物原料选自：大米、小米、小麦和高粱等主要谷物原料中的一种或几种，包含但不限于这几种谷物原料。

其中，步骤1）中，将谷物原料用其重量0.1~5.0%的食用油进行浸润，食用油优选谷物原料重量的2.0%。

其中，步骤1）中，所述食用油选自：豆油、花生油和菜籽油等中的一种或几种，包含但不限于这几种食用油。浸润之后，立即使用，不要长时间放置。

其中，步骤1）中，谷物原料与营养液进行复配，两者的质量体 积比为1:1.2~1.8，优选1:1.5。这里的质量体积比指的是g:mL（谷物原料：营养液）。

其中，步骤1）中，所述营养液的配方为：黄豆2.2%、葡萄糖1.5%、奶粉4.5%、磷酸二氢钾0.8%、硫酸镁0.06%和维生素B 115mg∕1000mL，加水定容至1000mL；调整pH为5.6～7.2。这里的百分号“%”指的是质量百分含量。

本发明所述蛹虫草的培养方法，在步骤3）将蛹虫草液体菌种接种至步骤2）经过灭菌处理的培养基前，先将蛹虫草菌株保存在固体PDA培养基斜面上；然后在液体种子培养基上接入保存在PDA培养基斜面上的蛹虫草菌株，成为蛹虫草液体菌种；之后再将所述蛹虫草液体菌种接入步骤2）经过灭菌处理的培养基上进行后续的培养。

其中，所述蛹虫草菌株为编号为HX-64的蛹虫草菌株。

其中，所述液体种子培养基的配方为：土豆250克、葡萄糖8克、蛋白胨2.5克、磷酸二氢钾0.6克、硫酸镁1.2克，加水1000毫升。

进一步地，所述固体PDA培养基和液体种子培养基可以采用本领域的常规方式进行灭菌，也可以采用本发明所述的灭菌方法进行灭菌；利用本发明的灭菌方法，可以加速培养基的冷却。

其中，步骤4）中，暗培养阶段：将接种后的蛹虫草液体菌种保持温度18~22℃进行避光培养，4~5天后菌丝覆盖整个表面，暗培养结束。

其中，步骤4）中，光照培养阶段：在温度20~23℃下光照培养8~12小时/天，培养35~41天直至子实体成熟。

其中，步骤4）中，光照培养的光照强度为50~100勒克斯。

本发明具有的有益效果如下：

1、灭菌系统和方法中，主要利用真空泵强制快速排蒸汽，形成负压，使培养基颗粒物之间间隙度加大，并且使培养基颗粒物之间 的游离水分抽出，从而在接种阶段液体菌种能均匀进入培养基的底部。

2、灭菌系统和方法中抽真空的过程加速了培养基的冷却，便于下一步的接种操作。

3、灭菌系统和方法中使用真空罐，可以加强培养基的干燥程度。

4、灭菌系统和方法中的还加装有空气过滤器，可以向灭菌柜导入无菌空气，平衡灭菌柜内外的压力，使灭菌柜可以打开；也可以使灭菌柜里导入的是经过过滤的无菌空气，保证灭菌柜不被污染。

5、对子实体生长的培养基中所用主要原料进行预处理，避免在灭菌过程中淀粉的糊化造成的谷物等颗粒原料之间的粘连，而使培养基原料中菌丝生长空间小或者菌丝无法生长的现象发生。

6、栽培试验证明子实体原基出现早，子实体条形整齐，收获期提前3~8天。

总之，本发明的技术增加了培养基空隙度，扩大菌丝生长空间，培养基冷却速度快、干燥程度高，最终达到提高生物转化率（提高了15~25%）的目的。并且降低了生产成本，有利于相应技术的推广和应用，具有很高的实用价值和应用价值。

附图说明

图1为完全没有经过改造的传统培养基灭菌系统；

图2为加装空气过滤器和真空泵的培养基灭菌系统；

图3为本发明加装空气过滤器、真空罐（将真空罐浸泡在冷却循环水槽内）和真空泵的培养基灭菌系统；

图中：1为蒸汽发生器，2整体为灭菌柜（其中2a为灭菌柜内胆，2b为灭菌柜外胆），3为真空泵，4为空气过滤器，5为真空罐。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

本发明的水循环式真空泵为佛山东山真空科技公司生产的 2BV-2071水环真空泵；空气过滤器的供应商为德国赛多利斯Sartorius发酵罐专用空气过滤器。

本发明的技术若涉及其他操作，均为所属技术领域的常规选择。

实施例1：培养基的灭菌系统

本发明培养基的灭菌系统，包括：用排气管道连接的蒸汽发生器1和灭菌柜2（有内胆2a和外胆2b，内胆和外胆之间用排气管道相连通），灭菌柜2末端连接的排气管道分为两条支路，一条直排管道（如图3右下角，安装有排气开关），另一条排气管道（安装有排气开关）加装依次连接的真空罐5（其体积为灭菌柜内胆2a体积的5倍，且将真空罐浸泡在冷却循环水槽内）和水循环式真空泵3（配有真空度表），连通灭菌柜内胆2a和外胆2b的排气管道上又引出一条管道，加装空气过滤器4（粒径为0.2μm，空气过滤器4与灭菌柜2连接的前端加装有开关）。高压蒸汽从蒸汽发生器1经排气管道进入灭菌柜外胆2b，再从灭菌柜外胆2b经排气管道进入灭菌柜内胆2a，最后从灭菌柜内胆2a经由如图3右下角的直排管道或者安装有真空罐5和水循环式真空泵3的排气管道排出。

实施例2：利用实施例1的灭菌系统对培养基进行灭菌

具体方法：

本实施例方法既能对蛹虫草培养过程中的培养基进行灭菌，也可以对其他固体培养基，尤其是颗粒物料培养基进行灭菌，不但能去除游离水分、加强干燥程度，还能加速物料的冷却。

（1）将培养基放入灭菌柜，并由蒸汽发生器向灭菌柜供入压力为0.11MPa的蒸汽，在温度121℃进行灭菌，保持20分钟；

（2）打开两条支路上的排气开关排蒸汽，当蒸汽压力下降到一半（0.055MPa）时，关闭直排管道上的排气开关，开启水循环式真空泵强制排蒸汽；

（3）当水循环式真空泵的压力指示为-0.05MPa时，同时关闭 装有水循环式真空泵管道上的排气开关和水循环式真空泵，让灭菌柜保持当前的压力（-0.05MPa）8min；

（4）打开空气过滤器，向灭菌柜导入经过过滤的无菌空气，平衡灭菌柜内外的压力；当灭菌柜内外压力平衡后，打开灭菌柜，拿出培养基，灭菌过程结束。

自然排空出炉时，灭菌炉内胆温度度表一般显示为95~100℃，而抽真空的操作，加速了蒸汽的排出，形成的相对真空有强制导入了外界的冷空气，在出炉时，灭菌炉内胆温度度表一般显示为60~80℃。本发明加了抽真空过程，在排气的过程加了抽真空强制排气和强制导入无菌冷空气两个过程。排空时间的缩短，意味着灭菌周期的缩短，从而提高了工作效率。

并且，抽真空强制排气，加速了灭菌柜内胆蒸汽的排出，随着抽真空时间的延伸，培养基空隙内的蒸汽也被强制抽出，这一过程最终的效果是使培养基较为干燥，干燥的结果就导致了培养基中原料（如米粒）之间空隙度的加大。这个结果表现为灭菌后的培养基进行接种时，相同的接种量，抽真空处理的菌液很容易渗入到培养基中，而未经抽真空处理的，相同的菌液会很难渗入到培养基中。那么相同的培养基，测定浸没过培养基原料（如米饼）表面所需要的水量，抽真空处理的用水量大，而未进过抽真空处理的用水量小，就表示经本发明灭菌处理的培养基干燥程度高。

实施例3：本发明蛹虫草经过改进的培养方法

一、实验时间：2012年4月

二、实验材料：

（1）菌种：采用菌株编号为HX-64的蛹虫草菌株（来自北京市农林科学院生物中心）；

（2）菌种固体培养基：固体PDA斜面，成分为：马铃薯300克，葡萄糖20克，琼脂20克，加水1000毫升，自然pH。

（3）液体摇瓶用种子培养基：去皮土豆250克（煮汁）、葡萄糖8克、蛋白胨2.5克、磷酸二氢钾0.6克、硫酸镁1.2克、加水1000毫升，pH自然。

（4）子实体生产营养液：黄豆2.2%、葡萄糖1.5%、奶粉4.5%、磷酸二氢钾0.8%、硫酸镁0.06%、维生素B 115mg/1000ml的比例，加水定容至1000mL配成营养液，调整pH为6.4。（5）常规栽培培养容器：高12cm，直径8cm。

三、具体方法：

1）原材料的预处理及培养基制备：将大米30g，用与其重量2.0%的食用花生油浸润后（浸润后立即使用，不要长时间放置），与上述子实体生产营养液45mL进行复配，得到蛹虫草子实体生长所用培养基；

2）培养基的灭菌：利用实施例2的灭菌方法对本实施例步骤1）得到的培养基、上述实验材料中固体PDA培养基和液体摇瓶用种子培养基均进行灭菌处理；

3）接种工艺：先将上述蛹虫草菌株（HX-64）保存在上述固体PDA培养基斜面上，然后在上述液体摇瓶用种子培养基上接入保存在PDA培养基斜面上的蛹虫草菌株，成为蛹虫草液体菌种；之后再将接种头做成莲蓬状对该蛹虫草液体菌种进行喷淋式接种，接入到本实施例步骤2）经过灭菌处理的蛹虫草子实体生长所用培养基上；

4）对上步接种好的蛹虫草菌种培养基容器直接放入暗培养室进行培养即可，保持温度20℃进行避光培养，4~5天后菌丝覆盖整个表面，暗培养结束；之后将培养室温度调整为21.5℃，光照强度为80勒克斯下光照培养10小时/天；在子实体培养后期，逐渐加大培养室内的空气流通和交换，培养室培养阶段若发现污染应立即清除；

5）待蛹虫草的子实体总的培养时间为40天时，及时进行采收，采收后的蛹虫草子实体条形非常整齐，平均干重达到2.85克/瓶，生 物转化率为9.5%。

采用食用油处理，防止了大米颗粒之间的粘连；抽真空处理增加了培养的空隙度。这两个过程导致了培养基米饼内部蛹虫草菌丝体的无性生长空间大，生长速度快，物质积累迅速，从而导致了原基发育出现的早。培养基物质转化空间大，供给子实体的养分充足，也加速了子实体的成熟，所以采收期提前。

实施例4

其他条件同实施例3，所不同的是：

二、实验材料

（4）子实体生产营养液：调整pH值为：5.6。

三、具体方法：

1）原材料的预处理及培养基制备：将小麦30g，用与其重量0.1%的豆油浸润后（浸润后立即使用，不要长时间放置），与上述子实体生产营养液54mL（1:1.8-g:mL）进行复配，得到蛹虫草子实体生长所用培养基；

2）培养基的灭菌：利用实施例2的灭菌方法对本实施例步骤1）得到的培养基、上述实验材料中固体PDA培养基和液体摇瓶用种子培养基均进行灭菌处理；

3）接种工艺：先将上述蛹虫草菌株保存在上述固体PDA培养基斜面上，然后在上述液体摇瓶用种子培养基上接入保存在PDA培养基斜面上的蛹虫草菌株，成为蛹虫草液体菌种；之后再将接种头做成莲蓬状对该蛹虫草液体菌种进行喷淋式接种，接入到本实施例步骤2）经过灭菌处理的蛹虫草子实体生长所用培养基上；

4）对上步接种好的蛹虫草菌种培养基容器直接放入暗培养室进行培养即可，保持温度22℃进行避光培养，4~5天后菌丝覆盖整个表面，暗培养结束；之后将培养室温度调整为20℃，光照强度为100勒克斯下光照培养8小时/天；在子实体培养后期，逐渐加大培养室 内的空气流通和交换，培养室培养阶段若发现污染应立即清除；

5）待蛹虫草的子实体总的培养时间为42天时，及时进行采收，采收后的蛹虫草子实体条形较为整齐，平均干重达到2.73克/瓶，生物转化率为9.1%。

实施例5

其他条件同实施例3，所不同的是：

二、实验材料

（4）子实体生产营养液：调整pH值为：7.2。

三、具体方法：

1）原材料的预处理及培养基制备：将高粱30g，用与其重量5.0%的菜籽油浸润后（浸润后立即使用，不要长时间放置），与上述子实体生产营养液36mL（1:1.2-g:mL）进行复配，得到蛹虫草子实体生长所用培养基；

2）培养基的灭菌：利用实施例2的灭菌方法对本实施例步骤1）得到的培养基、上述实验材料中固体PDA培养基和液体摇瓶用种子培养基均进行灭菌处理；

3）接种工艺：先将上述蛹虫草菌株保存在上述固体PDA培养基斜面上，然后在上述液体摇瓶用种子培养基上接入保存在PDA培养基斜面上的蛹虫草菌株，成为蛹虫草液体菌种；之后再将接种头做成莲蓬状对该蛹虫草液体菌种进行喷淋式接种，接入到本实施例步骤2）经过灭菌处理的蛹虫草子实体生长所用培养基上；

4）对上步接种好的蛹虫草菌种培养基容器直接放入暗培养室进行培养即可，保持温度18℃进行避光培养，4~5天后菌丝覆盖整个表面，暗培养结束；之后将培养室温度调整为23℃，光照强度为50勒克斯下光照培养12小时/天；在子实体培养后期，逐渐加大培养室内的空气流通和交换，培养室培养阶段若发现污染应立即清除；

5）待蛹虫草的子实体总的培养时间为45天时，及时进行采收， 采收后的蛹虫草子实体条形较为整齐，平均干重达到2.64克/瓶，生物转化率为8.8%。

对比例：蛹虫草传统的培养方法

其他条件同实施例3，所不同的是：

A．没有对原材料进行预处理，即没有将大米与其重量2.0%的食用花生油进行浸润；

B.采用传统方法对培养基进行灭菌，即直接利用图1所示灭菌系统（高压蒸汽从蒸汽发生器1经排气管道进入灭菌柜外胆2b，再从灭菌柜外胆2b经排气管道进入灭菌柜内胆2a，最后从灭菌柜内胆2a经由如图1右下角的直排管道排出）对所用到的所有培养基在121℃下灭菌，保持20分钟。

采收后传统方法子实体条形不是非常整齐，平均干重达到2.28克/瓶，生物转化率为7.6%。且采收期比本申请实施例3的晚了8天。

结论：采后本发明方法的生物转化率为8.8~9.5%，而常规栽培的生物转化率只有7.6%，本发明增产15~25%，采收期提前3~8天。总之，本发明降低了生产成本，而且提高了培养基的生物转化率。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (12)

1.一种对培养基进行灭菌的方法，其特征在于，该方法所利用的灭菌系统，包括：用排气管道连接的蒸汽发生器和灭菌柜，所述灭菌柜末端连接的排气管道分为两条支路，一条直排，另一条安装依次连接的真空罐和水循环式真空泵；所述灭菌柜具有内胆和外胆的结构，内胆和外胆之间用排气管道相连通；所述真空罐的体积为灭菌柜内胆体积的1～10倍；将所述真空罐浸泡在冷却循环水槽内；连通所述灭菌柜内胆和外胆的排气管道上引出一条排气管道，安装有空气过滤器；

该方法包括以下步骤：

（1）将培养基放入灭菌柜，并由蒸汽发生器向灭菌柜供入蒸汽进行灭菌；

（2）打开两条支路的排气管道排蒸汽，当蒸汽压力下降到一半时，关闭直排管道，开启水循环式真空泵强制排蒸汽；

（3）当水循环式真空泵的压力指示为-0.05至-0.1MPa时，同时关闭装有水循环式真空泵支路的排气管道和水循环式真空泵，让灭菌柜保持当前的压力5～10min；

（4）当灭菌柜内外压力平衡后，灭菌过程结束。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，打开空气过滤器，向灭菌柜导入无菌空气。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述真空罐的体积为灭菌柜内胆体积的5倍。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤（3），当水循环式真空泵的压力指示为-0.05MPa时，同时关闭装有水循环式真空泵支路的排气管道和水循环式真空泵，让灭菌柜保持当前的压力8min。

5.一种蛹虫草的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）培养基制备：将谷物原料用食用油浸润后，与营养液进行复配，得到蛹虫草子实体生长用的培养基；

2）灭菌：按权利要求1～4任意一项所述方法对步骤1）得到的培养基进行灭菌处理；

3）接种：将蛹虫草菌种接种至步骤2）灭菌后的培养基上；

4）对接种好的蛹虫草菌种进行暗培养和光照培养；

5）采收蛹虫草子实体。

6.根据权利要求5所述蛹虫草的培养方法，其特征在于，步骤1）中，所述谷物原料选自：大米、小米、小麦和高粱中的一种或几种；所述食用油选自：豆油、花生油和菜籽油中的一种或几种；将谷物原料用其重量0.1～5.0%的食用油进行浸润。

7.根据权利要求6所述蛹虫草的培养方法，其特征在于，食用油为谷物原料重量的2.0%。

8.根据权利要求5所述蛹虫草的培养方法，其特征在于，步骤1）中，谷物原料与营养液的质量体积比为1:1.2～1.8。

9.根据权利要求8所述蛹虫草的培养方法，其特征在于，步骤1）中，谷物原料与营养液的质量体积比为1:1.5。

10.根据权利要求5～9任意一项所述蛹虫草的培养方法，其特征在于，步骤1）中，所述营养液的配方为：黄豆2.2%、葡萄糖1.5%、奶粉4.5%、磷酸二氢钾0.8%、硫酸镁0.06%和维生素B115mg/1000mL，加水定容至1000mL；pH为5.6～7.2。

11.根据权利要求5～9任意一项所述蛹虫草的培养方法，其特征在于，在步骤3）之前，先将蛹虫草菌株保存在固体PDA培养基斜面上；然后在液体种子培养基上接入保存在PDA培养基斜面上的蛹虫草菌株，成为蛹虫草液体菌种；之后再将所述蛹虫草液体菌种接入步骤2）经过灭菌处理的培养基上进行后续的培养；

所述液体种子培养基的配方为：土豆250克、葡萄糖8克、蛋白胨2.5克、磷酸二氢钾0.6克、硫酸镁1.2克，加水1000毫升；

步骤4）中，暗培养阶段：将接种后的蛹虫草液体菌种保持温度18～22℃进行避光培养4～5天；光照培养阶段：在温度20～23℃、光照强度50～100勒克斯的条件下光照培养8～12小时/天，培养35～41天。

12.根据权利要求11所述蛹虫草的培养方法，其特征在于，所述固体PDA培养基和液体种子培养基均采用权利要求1～4任意一项所述方法进行灭菌。