CN105493887A - 蛹虫草的复壮培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种蛹虫草的复壮培养方法，包括以下步骤：按以下配比配制蛹虫草菌种培养基：蛋白胨10～20g/L、酵母粉3～5g/L、黄豆粉3～5g/L、玉米浆5～10g/L、葡萄糖15～30g/L、磷酸二氢钾1.2～1.5g/L、氯化钠0.8～1.2g/L、硫酸镁1～1.2g/L、生物素3～5g/L、2％卵黄1～3g/L；按1:100的体积比接种蛹虫草菌种，然后在22℃条件下避光静置培养18-30h，再在22℃、170rpm下继续振荡培养60-72h，使菌液浓度达到每毫升3-5个菌球；活化菌种的培养。该方法可有效提高蛹虫草人工栽培的出草率，提高蛹虫草产量，解决菌种退化等问题。

Description

蛹虫草的复壮培养方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种蛹虫草的复壮培养方法。
背景技术
蛹虫草是以蚕蛹为宿主的真菌，与冬虫夏草同科同属，化学成分基本一致，其抗肿瘤成分虫草素含量高于冬虫夏草，且是卫生部批准的新资源食品，具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎症、延缓衰老、提高免疫力等多种功效，适用人群广泛。近年来蛹虫草的人工栽培与开发迅速发展，然而蛹虫草的菌种经过几代培养会出现菌丝体生长慢，转色慢，生活力下降，出草率下降，出草慢等菌种衰退现象。
发明内容
针对以上现有问题，本发明提供一种蛹虫草的复壮培养方法，该方法可有效提高蛹虫草人工栽培的出草率，提高蛹虫草产量，解决菌种退化等问题。
本发明所采用的技术方案为：
一种蛹虫草的复壮培养方法，该方法包括以下步骤：
(1)配制蛹虫草菌种培养基：
菌种培养基以水为溶剂，由如下浓度的成分构成：
(2)蛹虫草菌种的活化：
按1:100的体积比接种蛹虫草菌种，然后在22℃条件下避光静置培养18-30h，再在22℃、170rpm下继续振荡培养60-72h，使菌液浓度达到每毫升3-5个菌球；
(3)活化菌种的培养。
作为优选配方，所述步骤(1)中菌种培养基由如下浓度的成分构成：
作为再优选，上述蛹虫草菌种培养基还可以包括：水解酪蛋白0.5-1g/L、L-氨基酸0.1-0.5g/L。
所述步骤(1)中菌种培养基的制备如下：按重量配方称取各成分，以纯净水将各组分溶解并充分混匀，定容至1L，然后分装入培养瓶，密封，灭菌，冷却。所述灭菌的条件为：121℃、1.1Mpa灭菌20～45min。
所述步骤(2)中蛹虫草菌种为已经明显退化的Cordycepsmilitaris(L)Link。
所述步骤(3)中活化菌种的培养具体包括以下步骤：
(a)按1:50的体积比接种活化的蛹虫草菌体至固体培养基；
(b)在温度18℃、湿度75～85％条件下避光培养4～6天；
(c)第5～25天：白天12小时日光灯光照，温度15～18℃(最好为18℃)、湿度80～85％，光照强度100～150Lx；晚上12小时闭光，温度13～15℃(最好15℃)、湿度75～85％；
(d)第26～45天：白天12小时自然光加日光灯照射，温度15～18℃(最好为18℃)、湿度75％～85％，光照强度1000～1200Lx；晚上12小时闭光，温度13～15℃(最好15℃)、湿度75～85％；
(e)收获长出的子实体，清理干燥。
所述步骤(a)中固体培养基的配方为：干蚕蛹粉25～35g/L、大米粉110～130g/L、玉米粉45～55g/L、磷酸二氢钾1.0～1.5g/L、磷酸二氢钠0.8～1.2g/L、牛肉膏1～1.5g/L。麦麸煮汁5～10g/L、硫酸镁1～1.2g/L、维生素B12-3片，pH6-6.3。
本发明蛹虫草菌种培养基配方合理，营养全面均衡，各成分间协同作用良好。使用本发明方法培养已经明显退化的蛹虫草菌种，可有效改变菌丝体生长慢、转色慢、出草慢，活力低，出草率低等现象，获得的虫草子实体产量稳定，可有效降低或减缓蛹虫草菌种的退化现象。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步具体描述，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
实施例1：
一、蛹虫草菌种培养基的配制：
本实施例蛹虫草菌种培养基以水为溶液，由如下浓度的成分构成：
制备如下：按以上重量配方称取各成分，加纯净水充分溶解和混匀，定容至1L，然后分装入三角培养瓶，每瓶装200ml，121℃、1.1Mpa灭菌30～40min，待其自然冷却后备用。
二、蛹虫草菌种的活化
1、在超净台中使用上述配制的菌种培养基接种已经明显退化的虫草菌体(菌种为Cordycepsmilitaris(L)Link)，接种比例为1:100。
2、在温度22℃条件下避光静置培养24h，然后温度22℃、170rpm下继续培养60-72h，使菌液浓度达到每毫升3-5个菌球。
三、蛹虫草的培养
采用以下方法进行蛹虫草的无菌培养、收获以及干燥。具体如下：
1、在超净台中，每瓶50ml固体培养基接种1mL活化菌液。固体培养基配方如下：干蚕蛹粉30g/L、大米粉120g/L、玉米粉50g/L、磷酸二氢钾1.2g/L、磷酸二氢钠0.8g/L、硫酸镁1g/L、牛肉膏1g/L、麦麸煮汁10g/L、维生素B12片，pH6-6.3。
2、在温度18℃、湿度75～85％条件下避光培养4～6天，使虫草菌丝长满培养基表面，防止其他杂菌在培养基表面生长。
3、第5～25天光照培养，白天12小时日光灯光照，温度15～18℃(最好为18℃)、湿度80～85％，光照强度控制在100～150Lx；晚上12小时闭光，温度13～15℃(最好15℃)、湿度75～85％。每天通风2次，早晚各一次，气温相对低的时候进行每次20～30分钟。白天晚上温差有利于原基的分化形成。
4、第26～45天白天12小时光照(自然光加日光灯)，温度15～18℃(最好为18℃)、湿度75％～85％，光照强度控制在1000～1200Lx；晚上12小时闭光，温度13～15℃(最好15℃)、湿度75～85％。此时间为子实体生长时期，强光对子实体的生长有利，使其呈棒状生长并不断成熟、健壮、色泽变为鲜艳的橙黄色，在此生长阶段每天通风2次，早晚各一次，气温相对低的时候进行每次20～30分钟。
5、收获及再培养，旋开培养瓶盖，镊子用75％酒精消毒后，将子实体取出(只取出培养基上面的部分)，将取出的子实体置于干净的不锈钢盘中，挑选色泽均匀、粗壮、完整的子实体，去除残存的培养基后置于新的不锈钢盘中称重备用；培养瓶中剩余部分按第26～45天的培养条件及方法继续培养，再次收获。
实施例2：
本实施例蛹虫草菌种培养基以水为溶液，由如下浓度的成分构成：
制备如下：按以上重量配方称取各成分，加纯净水充分溶解和混匀，定容至1L，然后分装入三角培养瓶，每瓶装200ml，121℃、1.1Mpa灭菌30～40min，待其自然冷却后备用。
按实施例1相同的方法进行Cordycepsmilitaris(L)Link退化菌种的活化和培养。
实施例3：
本实施例蛹虫草菌种培养基以水为溶液，由如下浓度的成分构成：
制备如下：按以上重量配方称取各成分，加纯净水充分溶解和混匀，定容至1L，然后分装入三角培养瓶，每瓶装200ml，121℃、1.1Mpa灭菌30～40min，待其自然冷却后备用。
按实施例1相同的方法进行Cordycepsmilitaris(L)Link退化菌种的活化和培养。
实施例4：
本实施例蛹虫草菌种培养基以水为溶液，由如下浓度的成分构成：
制备如下：按以上重量配方称取各成分，加纯净水充分溶解和混匀，定容至1L，然后分装入三角培养瓶，每瓶装200ml，121℃、1.1Mpa灭菌30～40min，待其自然冷却后备用。
按实施例1相同的方法进行Cordycepsmilitaris(L)Link退化菌种的活化和培养。
实施例5：
本实施例蛹虫草菌种培养基以水为溶液，由如下浓度的成分构成：
制备如下：按以上重量配方称取各成分，加纯净水充分溶解和混匀，定容至1L，然后分装入三角培养瓶，每瓶装200ml，121℃、1.1Mpa灭菌30～40min，待其自然冷却后备用。
按实施例1相同的方法进行Cordycepsmilitaris(L)Link退化菌种的活化和培养。
将以上实施例获得的蛹虫草干品进行称重计算，结果如下表1所示。
表1：蛹虫草干品重量
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5
重量(g) 1.09 0.97 0.99 1.05 1.10
由以上实施例可知，使用本发明方法培养已经明显退化的蛹虫草菌种Cordycepsmilitaris(L)Link，获得的蛹虫草子实体干品产量在0.97～1.10g之间，而按照正常培养每瓶子实体干重产率由原来的1～1.2g下降至0.8g左右。所以利用本发明所提供的菌种培养基及活化方法可以有效缓解蛹虫草菌种的退化现象。
本发明的上述实施例是对本发明的说明而不能用于限制本发明，与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在权利要求书的范围内。

Claims (10)

1.一种蛹虫草的复壮培养方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)配制蛹虫草菌种培养基：
菌种培养基以水为溶剂，由如下浓度的成分构成：
(2)蛹虫草菌种的活化：
按1:100的体积比接种蛹虫草菌种，然后在22℃条件下避光静置培养18-30h，再在22℃、170rpm下继续振荡培养60-72h，使菌液浓度达到每毫升3-5个菌球；
(3)活化菌种的培养。
2.根据权利要求1所述的蛹虫草的复壮培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中菌种培养基由如下浓度的成分构成：
3.根据权利要求1所述的蛹虫草的复壮培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中菌种培养基由如下浓度的成分构成：
4.根据权利要求1所述的蛹虫草的复壮培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中菌种培养基的制备如下：按重量配方称取各成分，以纯净水将各组分溶解并充分混匀，定容至1L，然后分装入培养瓶，密封，灭菌，冷却。
5.根据权利要求4所述的蛹虫草的复壮培养方法，其特征在于：所述灭菌的条件为：121℃、1.1Mpa灭菌20～45min。
6.根据权利要求1所述的蛹虫草的复壮培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中蛹虫草菌种为已经明显退化的Cordycepsmilitaris(L)Link。
7.根据权利要求1所述的蛹虫草的复壮培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中活化菌种的培养具体包括以下步骤：
(a)按1:50的体积比接种活化的蛹虫草菌体至固体培养基；
(b)在温度18℃、湿度75～85％条件下避光培养4～6天；
(c)第5～25天：白天12小时日光灯光照，温度15～18℃、湿度80～85％，光照强度100～150Lx；晚上12小时闭光，温度13～15℃、湿度75～85％；
(d)第26～45天：白天12小时自然光加日光灯照射，温度15～18℃、湿度75％～85％，光照强度1000～1200Lx；晚上12小时闭光，温度13～15℃、湿度75～85％；
(e)收获长出的子实体，清理干燥。
8.根据权利要求7所述的蛹虫草的复壮培养方法，其特征在于：所述步骤(a)中固体培养基的配方为：干蚕蛹粉25～35g/L、大米粉110～130g/L、玉米粉45～55g/L、磷酸二氢钾1.0～1.5g/L、磷酸二氢钠0.8～1.2g/L、硫酸镁1～1.2g/L、牛肉膏1～1.5g/L、麦麸煮汁5～10g/L、维生素B12-3片，pH6-6.3。
9.根据权利要求7所述的蛹虫草的复壮培养方法，其特征在于：所述步骤(c)中白天温度为18℃，晚上温度为15℃。
10.根据权利要求7所述的蛹虫草的复壮培养方法，其特征在于：所述步骤(d)中白天温度为18℃，晚上温度为15℃。
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