CN102090270A - 蛹虫草菌株的复壮方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及退化食用菌菌株的复壮，具体的讲是一种蛹虫草菌株的复壮方法，主要包括蛹虫草菌株活化培养、蛹虫草菌株复壮和蛹虫草菌株保种，其特征是所述的复壮培养是指将活化后的蛹虫草菌株接种于含有一种或者多种抗生素复配的PDA平板上进行第一次复壮培养，再将经过第一次复壮培养后的菌株，再次接种于含一种或者多种抗生素复配的PDA平板培养基上进行第二次复壮培养。本发明突破了传统的菌株复壮方法，采用抗生素法对菌株进行复壮，此方法操作容易，简单易行，且效果显著。经过此种方法复壮后的菌株，其菌丝粗壮，致密，生长速度相较于复壮前有了较大的提高，约为复壮前的8倍。
Description
技术领域
本发明涉及退化食用菌菌株的复壮，具体的讲是一种蛹虫草菌株的复壮方法。
背景技术
栽培食用菌，需要获得高产，菌株是关键。蛹虫草为子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科、虫草属的模式种。学名为Cordycepsmilitaris，又名北冬虫夏草、北蛹虫草，是冬虫夏草的同属近缘种，其有效组分与冬虫夏草类似，含有核苷类、多糖类、甾醇类以及S O D酶等，且虫草素含量更是高于冬虫夏草，具有提高机体免疫力、抗肿瘤、防衰老、保护心肺组织、镇静催眠等多种药理作用。因此，蛹虫草作为冬虫夏草替代品用在保健药品和食品上，市场需求量大。近些年来，我国人工栽培蛹虫草的关键技术得以突破，使得大规模人工培养蛹虫草得以现实。然而在生产栽培和实践过程中，必然会遇到菌种的衰退或退化问题，使菌种的优良性状在一定程度上衰退或丧失。蛹虫草菌株的衰退主要表现在，菌丝生长速度减慢，菌丝稀疏，子实体产生率低或子实体个体矮小，畸变，发酵过程中，所需代谢产物的产量大幅降低等现象。
导致微生物菌株的衰退是多方面原因引起，可以是由自发突变的量变到质变的产生，可以是由环境因素不适宜导致发生变异，或者是由它种微生物的侵袭所导致，或者保藏方式不当，一味的移接、传代，而使群体中的负变异不断扩大等诸方面原因所造成。
微生物菌株衰退后，需要采取复壮的方法来恢复其原有的优良性状，通常采用的方法是进行纯种分离后测定其典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，或通过其它的实验手段进行复壮，使退化菌株恢复原有优良性状的相应措施。
现阶段，食用菌的复壮主要方法有以下几种：
1. 组织分离：是将退化菌株出菇后，选择相对出菇时间早，子实体外观健壮，抗病能力强等性状的子实体采摘下来，在无菌条件下用PDA培养基进行组织分离。分离获得的菌株，经生物学性能测定，选择出优良性状的菌株，进行出菇试验，若出菇后的子实体能恢复原有性状，将其分离后的菌株可作为后续栽培原种使用；若出菇后的子实体还未回复原有性状，则必须再次进行组织分离复壮。
2. 菌丝纯化与尖端菌丝分离：挑取健壮的菌丝体顶端部分，进行纯化培养，使菌丝恢复以保持菌种的纯度，是菌种恢复原来生活力和优良性状，达到复壮的目的。
3. 有性孢子分离筛选：选择形态好，生长势健壮的八成熟的子实体，采用孢子收集器收集有性孢子，进行多孢或单孢分离培养。获得的单核菌丝，还需和另一可亲和的单核菌丝杂交后形成双核菌丝，再进行出菇培养。孢子分离需要反复试验，出菇性能好的，才能作为优良菌株投入生产栽培中。
在蛹虫草工厂化栽培的过程中如何解决菌种衰退，菌丝体生长速度减慢，菌丝稀疏，粉孢子量增多，子实体形成率降低或子实体个体矮小，畸形以及发酵过程中，所需代谢产物的产量大幅降低等问题，已经成为蛹虫草工厂化栽培的关键问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蛹虫草菌株的复壮方法，以达到解决由于反复传代而导致蛹虫草菌株出现退化等问题。
为实现上述目的，本发明提供的蛹虫草菌株复壮的方法，主要包括以下步骤：
a）将退化的蛹虫草菌株接种于PDA斜面培养基中，25℃进行活化培养；
PDA斜面培养基为：土豆 200g/L，蔗糖 20g/L，琼脂 20g/L，pH 7.0
b）将活化后的蛹虫草菌株接种于含有一种或两种抗生素的的PDA培养基上，25℃培养3-5 d；
c）将经过第一次复壮后的菌株，再次接种于含有一种或两种抗生素的PDA培养基上，25℃培养3-5 d；
d）将第二次复壮后的菌株接种于PDA斜面上，作为栽培原种使用。
所述的抗生素为：氨基糖苷类抗生素和青霉素类抗生素。氨基糖苷类抗生素是指链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、核糖霉素、小诺霉素。青霉素类抗生素是指：氨苄青霉素、头孢拉定、先锋IV、先锋V号。
采用两种抗生素时，所用的抗生素应分别是氨基糖苷类抗生素和青霉素类抗生素中的一种。两种抗菌素之间按任意比例复合配制，复配后抗生素在PDA培养基中的终浓度为0.02～2mg/ml。
采用本发明所述的方法，适用于由于反复传代而导致菌种退化的菌株复壮。退化具体表现为：出现菌丝稀疏、生长速度变慢、粉孢子增多、子实体形成率低、畸形量多、代谢产物虫草素的含量降低等现象。
本发明突破了传统的菌株复壮方法，采用抗生素法对菌株进行复壮，此方法操作容易，简单易行，且效果显著。经过此种方法复壮后的菌株，其菌丝粗壮，致密，生长速度相较于复壮前有了较大的提高，在固体栽培中，子实体形成率大幅提高，个体大小较均匀，畸形率降低，，在液体发酵中，发酵液的虫草素的产量也大幅度提高，约为复壮前的8倍。相较于传统复壮方法而言，此方法更加有效简单易于操作，实用性强。
具体实施方式
以下的实施例可以使本专业技术领域的技术人员更全面的了解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株，由教育部工业微生物工程中心免费提供。
1）蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株接种于PDA斜面培养基中，25℃进行活化；
PDA斜面培养基为：土豆 200g/L，蔗糖 20g/L，琼脂 20g/L，pH 7.0
2）将活化后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株接种于含有0.1mg/ml氨苄青霉素的PDA平板上，25℃复壮培养3d；
3）将经过第一次复壮后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株再次接种于含有0.3mg/ml氨苄青霉素的PDA平板上，25℃复壮培养3d；
4）将复壮后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株接种于PDA斜面上，用于菌种保存。
5）对复壮后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株进行菌丝生长速度，产子实体能力以及产虫草素能力的检测。
6）实验结果显示，复壮后的菌株，其菌丝生长速度较复壮前大幅提高，菌丝体粗壮，致密；复壮后的菌株接种于固体培养基上，子实体形成率大幅提高，个体大小较均匀，畸形率降低；发酵液中虫草素含量约为复壮前的7.5-8.0倍。
实施例2
蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株，由教育部工业微生物工程中心提供。
1）蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株接种于PDA斜面培养基中，25℃进行活化培养；
2）将活化后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株接种于各含有0.2mg/ml卡那霉素和氨苄青霉素的PDA平板上，25℃复壮培养3d；
3）将经过一次复壮后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株再次接种于含有1mg/ml链霉素的PDA平板上，25℃复壮培养3d
4）将复壮后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株接种于PDA斜面上，用于菌种保存。
5）对复壮后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株进行菌丝生长速度、产子实体能力以及产虫草素能力的测定。
6）实验结果显示，复壮后菌株的菌丝生长速度较复壮前大幅提高，菌丝体粗壮，致密；将复壮后的菌株接种于固体培养基上，子实体形成率大幅度提高，子实体大小较均匀，畸形率降低；发酵液中虫草素含量约为复壮前的7.3-7.7倍。
实施例3
蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株由教育部工业微生物工程中心提供。
1）蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株接种于PDA斜面中，25℃进行活化；
2）将活化后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株接种于各含有0.025mg/ml小诺霉素和头孢霉素IV的PDA平板上，25℃复壮培养3d
3）将经过第一次复壮后的菌株再次接种于含有卡那霉素1.0mg/ml +0.3mg/ml氨苄青霉素的PDA平板上，25℃进行复壮培养3d；
4）将复壮后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株接种于PDA斜面上，用于菌种保存。
5）将复壮后的蛹虫草（Cordycepsmilitaris）菌株进行菌丝生长速度、产子实体能力以及产虫草素能力的测定。
6）实验结果显示，复壮后菌株的菌丝生长速度较复壮前大幅提高，菌丝体粗壮、致密；将复壮后菌株接种于固体培养基上，其子实体形成率大幅提高，子实体大小较均匀，畸形率降低；发酵液中虫草素含量约为复壮前的8.0～8.5倍。
以上是结合具体实施例子对本发明所做的进一步描述。本领域技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (6)
1.一种蛹虫草菌株的复壮方法，主要包括蛹虫草菌株活化培养、蛹虫草菌株复壮和蛹虫草菌株保种，其特征是所述的复壮培养是指将活化后的蛹虫草菌株接种于含有一种或者多种抗生素复配的PDA平板上进行第一次复壮培养，再将经过第一次复壮培养后的菌株，再次接种于含有一种或者多种抗生素复配的PDA平板培养基上进行第二次复壮培养。
2.根据权利要求1所述的蛹虫草菌株的复壮方法，其特征在于所述的抗生素为：氨基糖苷类抗生素和青霉素类抗生素。
3.根据权利要求2所述的蛹虫草菌株的复壮方法，其特征在于所述的氨基糖苷类抗生素是指链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、核糖霉素、小诺霉素。
4.根据权利要求2所述的蛹虫草菌株的复壮方法，其特征在于所述的青霉素类抗生素是指：氨苄青霉素、头孢拉定、先锋IV、先锋V号。
5.根据权利要求1所述的一种蛹虫草菌株的复壮方法，其特征在于所述的复配抗生素是指一种或者多种上述抗生素按一定比例的复合配制，复配后抗生素在PDA培养基中的终浓度为0.02～2mg/ml。
6.根据权利要求1所述的蛹虫草菌株的复壮方法，其特征在于所述的复壮培养，是用PDA培养基，25℃条件下进行的，培养时间3～5d。
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Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102726216A (zh) * | 2012-07-17 | 2012-10-17 | 杨毅 | 培育蛹虫草抗退化菌种的方法 |
| CN103478080A (zh) * | 2013-07-12 | 2014-01-01 | 重庆市中药研究院 | 一种人工繁殖虫草寄主昆虫的种性复壮培养方法 |
| CN105154296A (zh) * | 2015-07-15 | 2015-12-16 | 十堰神农武当医药科技园有限公司 | 一种虫草酒的制备方法 |
| CN105441336A (zh) * | 2015-12-23 | 2016-03-30 | 上海市农业科学院 | 一种有效防止丝状真菌退化及恢复产孢的方法 |
| CN105493887A (zh) * | 2015-12-05 | 2016-04-20 | 正源堂（天津）生物科技有限公司 | 蛹虫草的复壮培养方法 |
| CN112021068A (zh) * | 2020-09-10 | 2020-12-04 | 云南菌视界生物科技有限公司 | 一种金耳子实体菌种的复壮方法 |
| CN113711842A (zh) * | 2021-09-22 | 2021-11-30 | 辽宁省农业科学院 | 一种简易黑木耳菌种复壮的方法 |
| CN114717120A (zh) * | 2022-04-19 | 2022-07-08 | 沈阳农业大学 | 一种虫草属菌株的培养方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1094091A (zh) * | 1994-02-05 | 1994-10-26 | 李春燕 | 蛹虫草优良菌种的选育及高产栽培方法 |
| CN1772876A (zh) * | 2005-09-30 | 2006-05-17 | 袁有宝 | 一种蛹虫草培育基质配方和蛹虫草增氧培育方法 |
| CN102037856A (zh) * | 2009-10-16 | 2011-05-04 | 北京农业生物技术研究中心 | 一种简易蛹虫草菌种复壮的方法 |
-
2011
- 2011-01-13 CN CN 201110005899 patent/CN102090270B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1094091A (zh) * | 1994-02-05 | 1994-10-26 | 李春燕 | 蛹虫草优良菌种的选育及高产栽培方法 |
| CN1772876A (zh) * | 2005-09-30 | 2006-05-17 | 袁有宝 | 一种蛹虫草培育基质配方和蛹虫草增氧培育方法 |
| CN102037856A (zh) * | 2009-10-16 | 2011-05-04 | 北京农业生物技术研究中心 | 一种简易蛹虫草菌种复壮的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 《食用菌》 20061231 李亚洁等 蛹虫草菌种复壮技术的研究 第18-19页 1-6 , 第2期 2 * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102726216A (zh) * | 2012-07-17 | 2012-10-17 | 杨毅 | 培育蛹虫草抗退化菌种的方法 |
| CN103478080A (zh) * | 2013-07-12 | 2014-01-01 | 重庆市中药研究院 | 一种人工繁殖虫草寄主昆虫的种性复壮培养方法 |
| WO2015003546A1 (zh) * | 2013-07-12 | 2015-01-15 | 重庆市中药研究院 | 一种人工繁育虫草寄主昆虫的种性复壮培养方法 |
| CN105154296A (zh) * | 2015-07-15 | 2015-12-16 | 十堰神农武当医药科技园有限公司 | 一种虫草酒的制备方法 |
| CN105493887A (zh) * | 2015-12-05 | 2016-04-20 | 正源堂（天津）生物科技有限公司 | 蛹虫草的复壮培养方法 |
| CN105441336A (zh) * | 2015-12-23 | 2016-03-30 | 上海市农业科学院 | 一种有效防止丝状真菌退化及恢复产孢的方法 |
| CN105441336B (zh) * | 2015-12-23 | 2019-09-10 | 上海市农业科学院 | 一种有效防止丝状真菌退化及恢复产孢的方法 |
| CN112021068A (zh) * | 2020-09-10 | 2020-12-04 | 云南菌视界生物科技有限公司 | 一种金耳子实体菌种的复壮方法 |
| CN113711842A (zh) * | 2021-09-22 | 2021-11-30 | 辽宁省农业科学院 | 一种简易黑木耳菌种复壮的方法 |
| CN114717120A (zh) * | 2022-04-19 | 2022-07-08 | 沈阳农业大学 | 一种虫草属菌株的培养方法 |
| CN114717120B (zh) * | 2022-04-19 | 2023-09-15 | 沈阳农业大学 | 一种虫草属菌株的培养方法 |
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