CN115112804A - 一种白酒中甾醇的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明主要涉及化学技术分析领域。为了解决白酒中的甾醇含量难以测量的问题，本发明提供一种白酒中甾醇的检测方法，所述方法以白酒作为样品进行甾醇含量检测；白酒样品采用固相萃取小柱进行预处理得到待测样品，采用气相质谱法对待测样品进行检测，计算甾醇含量。
Description
技术领域
本发明主要涉及化学分析技术领域，尤其是涉及一种白酒中甾醇的检测方法。
背景技术
甾醇，一类由3个己烷环及一个环戊烷稠合而成的环戊烷多氢菲衍生物。除细菌中缺少外，是广泛存在于生物体内的一种重要的天然活性物质，按其原料来源分为动物性甾醇、植物性甾醇和菌类甾醇等三大类。甾醇有多种不同的生物学功能，如作为细胞膜的成分及构成肾上腺皮质激素和性激素等。不少植物甾醇还具有很强的药理或毒理效应，如β－谷甾醇有降胆固醇、止咳、祛痰及抑制肿瘤和修复组织作用。
白酒属于固态发酵蒸馏酒，主要以粮食为原料，酒曲作为发酵剂，经长时间自然固态发酵后蒸馏所得。固态发酵过程中，原辅材料中的各种活性成分在各酶系、微生物代谢等作用下释放到酒糟中，一些活性成分再经以酒糟为填料的精馏塔式的特殊蒸馏方式，随着酒精蒸汽或水蒸气的拖带作用进入酒体，使白酒区别于液态发酵蒸馏酒，而含有大量由粮食原料及发酵过程所产生的风味及活性成分。研究白酒中的甾醇类物质，阐明其生理活性，对白酒产品的市场推广有重要的意义。同时，对比分析液态发酵蒸馏酒与固态发酵白酒中的微量活性成分甾醇，并以此评价固态发酵白酒的真实性，有利于提升白酒品质，并有助于白酒的质量的有效监控。
甾醇具有高沸点、不挥发、弱极性的物理化学性质，普通的蒸馏方式很难蒸馏得到，而白酒蒸馏过程中层层酒糟所形成的精馏塔，使得甾醇可以在乙醇蒸气的拖带作用下进入酒体，但是含量很低，由此未见白酒中甾醇检出的相关报道，因此，亟需提供一种操作简便、灵敏度高、准确度高的检测方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：
提供一种白酒中甾醇的检测方法，解决白酒中的微量甾醇的含量无法测定的问题。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案：
一种白酒中甾醇的检测方法，所述方法以白酒作为样品进行甾醇含量检测；白酒样品采用固相萃取小柱进行预处理得到待测样品，采用气相质谱法对待测样品进行检测，计算甾醇含量。
进一步的，采用固相萃取小柱进行预处理的步骤包括小柱活化、平衡、上样，淋洗，洗脱，浓缩洗脱液；
以甲醇或乙腈作为小柱活化溶剂；
采用0.1％甲酸水溶液进行平衡；
将白酒样品稀释至酒精浓度5％～20％后进行上样；
淋洗液为浓度80％～90％甲醇水溶液；
洗脱液为甲醇或乙腈。
进一步的，所述甾醇为β－谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、麦角甾醇四种甾醇中的至少两种的混合物。
进一步的，使用气相色谱－三重四极杆质谱仪对待测样品进行气相质谱检测；
所述气相色谱的检测条件为：色谱柱：HP-5MS毛细管色谱柱；程序升温：200℃保持0min，以15℃/min升至300℃，保持20min；采用恒流模式，载气He流速1.0mL/min，不分流进样，进样量1μL，进样口温度300℃；
所述质谱检测条件为：电子轰击电离源：电子能量70eV；离子源温度230℃；传输线温度230℃；四极杆温度150℃；定性采用全扫描模式，质量扫描范围M/Z45-500，MRM模式。
进一步的，所述甾醇含量计算包括以下步骤：
绘制标准曲线：配制甾醇混合标准母液，以甾醇混合标准母液浓度为横坐标，以甾醇母离子－子离子对质荷比信号峰的峰面积为纵坐标，绘制浓度－峰面积标准曲线；
检测并计算甾醇含量：将待测样品进样至气相色谱－三重四极杆质谱仪；根据甾醇母离子－子离子对质荷比信号峰的峰面积与绘制的标准曲线计算出各种甾醇的含量。
本发明的有益效果：
本发明所述的方法能检出白酒中的微量甾醇含量，灵敏度高，结果准确；选择固相萃取小柱进行预处理，预处理方法简便快捷，一方面能同时吸附白酒样品中的甾醇化合物，另一方面又可以有效除去白酒样品中的酸、酯、醇类物质，避免对甾醇的检测造成干扰；本发明所述的方法选择的上样浓度，能确保甾醇类物质能很好地被吸附，并减少其他化合物的吸附，以避免小柱饱和，本发明所述的方法选择的淋洗液为80-90％的甲醇水溶液，可以将吸附在小柱上的醇类、脂肪酸类和脂肪酸酯类化合物淋洗掉，而弱极性的甾醇类化合物可以保留在小柱上，再以甲醇或乙腈洗脱下来，可以充分实现杂质的分离和甾醇类化合物的富集、净化。
附图说明
图1为标准溶液浓度为50mg/L时4种标准物质的MRM色谱图。
图2为固态发酵白酒样品的MRM色谱图。
图3为麦角甾醇质谱图。
图4为菜油甾醇质谱图。
图5为豆甾醇质谱图。
图6为β－谷甾醇质谱图。
具体实施方式
液态发酵蒸馏酒是以粮谷、薯类、糖蜜等原料，经短时间液态发酵、单塔或多塔蒸馏成食用酒精的工艺路线、再经串香、勾兑、调配而成的白酒。发酵时间短，且通常通过多塔蒸馏、精馏尽可能除去酒体中除酒精以外的杂质成分，由此其中不含有高沸点、不挥发的活性甾醇物质是合理的；固态发酵型白酒因发酵周期长达70天以上，发酵过程中产生大量的有机酸，酵母生长环境受到破坏，出现自溶，释放出麦角甾醇，分布于酒糟中。固态发酵型白酒蒸馏是以酒糟为填料的蒸馏方式，酒糟中的风味及活性成分可以尽可能地进入到酒体，由此分布在酒糟中的麦角甾醇及酒糟中由粮食作物水解释放出的植物甾醇——β－谷甾醇、菜油甾醇和豆甾醇，随着蒸馏过程在酒精蒸气的拖带作用下进入到酒体中，使固态发酵白酒中含有一定量的甾醇物质。
本实施例中以本发明所述法方法分别对固态发酵型白酒和液态发酵蒸馏酒中的甾醇类化合物进行检测；对样品采用固相萃取小柱进行预处理得到待测样品，采用气相质谱法对待测样品进行检测，计算甾醇含量；最后对所述方法的回收率进行测定。
本发明实施例中采用的固相萃取小柱为CNW Technologies公司的LC-C18小(500mg,6ml)。
本发明实施例中气相质谱检测使用的气相质谱仪为气相色谱－三重四极杆质谱仪；气相色谱的检测条件为：色谱柱：HP-5MS毛细管色谱柱；程序升温：200℃保持0min，以15℃/min升至300℃，保持20min；采用恒流模式，载气(He)流速1.0ml/min，不分流进样，进样量1μL，进样口温度300℃。本实施例中质谱检测条件为：电子轰击(EI)电离源：电子能量70eV；离子源温度230℃；传输线温度230℃；四极杆温度150℃。定性采用全扫描模式，质量扫描范围m/z 45-500，多反应检测(MRM)模式。
本发明实施例中标准曲线的绘制方法：以乙醇为溶剂，配制甾醇混合标准母液20ml(β－谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、麦角甾醇四种甾醇分别为500mg/L)，用甲醇稀释母液，分别配制浓度为0.05mg/L、0.5mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L的标准溶液并进样气质联用仪，根据各溶液浓度与其对应的M/Z的峰面积计算得到了浓度－峰面积标准曲线。各甾醇类化合物的线性范围、标准曲线性方程、R2值、检测限、检测灵敏度(RSD)如表1所示：
表1各甾醇类化合物的标准曲线
各甾酵母离子－子离子对质荷比(M/Z)如表2所示：
表2各甾醇的母离子-子离子对质荷比(M/Z)
标准溶液浓度为50mg/L时的四种甾醇的MRM色谱图如图1所示，图3-6分别为麦角甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、β－谷甾醇的质谱图。
实施例1：采用本发明所述的方法检测固态发酵型白酒中的甾醇化合物：
对固态萃取小柱以甲醇进行活化，并且以0.1％的甲酸水溶液进行平衡，取固态发酵型白酒样品三份各100ml，在其中两份中加入含量分别为2mg/L，5mg/L的甾醇混合标准液，取超纯水稀释至酒精度20％vol后进行固相萃取小柱上样，以10ml 90％的甲醇水溶液进行淋洗，10ml甲醇洗脱，收集洗脱液，氮吹浓缩，甲醇定容至1ml，作为待测样品进样气相色谱－质谱仪；另一样品用于测定所取固态发酵型白酒样品本身的甾醇含量。
在MRM检测模式下得到母离子－子离子对质荷比(M/Z)色谱图如图2所示(图中横坐标表示时间/min，纵坐标表示离子强度)，进行积分，根据甾醇母离子－子离子对质荷比信号峰的峰面积与所绘制的标准曲线计算出各种甾醇的含量。根据固态发酵型白酒本身的甾醇含量和测得的加入甾醇混合标准液后的白酒样品中的甾醇含量对本发明所述的方法的回收率进行测定，其测定结果如表3所示：
表3固态发酵型白酒样品的回收率测定结果
加标回收率检测结果在94.8％～106.2％之间，由此说明该固态发酵蒸馏酒中确实含有所述的4种甾醇。
实施例2：采用本发明所述的方法检测液态发酵蒸馏酒中的甾醇化合物：
对固态萃取小柱以甲醇进行活化，并且以0.1％的甲酸水溶液进行平衡，分别取液态发酵蒸馏酒样品三份(以95％食用酒精为样品)，各100ml，其中的两份分别加入甾醇混合标准溶液0.5mg/L，1mg/L，用超纯水稀释释至酒精度20％vol后上样，以10ml 90％的甲醇水溶液淋洗，10ml甲醇洗脱，收集洗脱液，氮吹浓缩，甲醇定容至1ml，作为待测样品进样气相色谱－质谱仪，另一份样品用于测定所取液态发酵蒸馏酒样品本身的甾醇含量。
在MRM检测模式下得到母离子－子离子对质荷比(M/Z)色谱图，并积分，根据甾醇母离子－子离子对质荷比信号峰的峰面积与所绘制的标准曲线计算出各种甾醇的含量。根据液态发酵蒸馏酒本身的甾醇含量和测得的加入甾醇混合标准液后的白酒样品中的甾醇含量对本发明所述的方法的回收率进行测定，其测定结果如表4所示：
表4液态发酵蒸馏酒样品的回收率测定结果
回收率检测结果在99.8％～107.2％之间，满足检测要求，结果准确。由此说明该液态发酵蒸馏酒中确实不存在所述的4种甾醇。
对比析实施例2和实施例1中液态发酵蒸馏酒与固态发酵白酒中的微量活性成分甾醇含量以及回收率，可以证明以酒样中是否存在甾醇来评估样品是否是固态发酵蒸馏酒是可行的，能够对固态发酵白酒的真实性进行评价，有利于提升白酒品质，并有助于对白酒的质量进行的有效监控。
Claims (10)
1.一种白酒中甾醇的检测方法，其特征在于，所述方法以白酒作为样品进行甾醇含量检测：白酒样品采用固相萃取小柱进行预处理得到待测样品，采用气相质谱法对待测样品进行检测，计算甾醇含量。
2.根据权利要求1所述的一种白酒中甾醇的检测方法，其特征在于，采用固相萃取小柱进行预处理的步骤包括小柱活化、平衡、上样，淋洗，洗脱，浓缩洗脱液。
3.根据权利要求2所述的一种白酒中甾醇的检测方法，其特征在于，所述小柱活化中以甲醇或乙腈作为小柱活化溶剂。
4.根据权利要求2所述的一种白酒中甾醇的检测方法，其特征在于，所述平衡中采用0.1％甲酸水溶液进行平衡。
5.根据权利要求2所述的一种白酒中甾醇的检测方法，其特征在于，所述上样包括：将白酒样品稀释至酒精浓度5％～20％后进行上样。
6.根据权利要求2所述的一种白酒中甾醇的检测方法，其特征在于，所述淋洗中淋洗液为浓度80％～90％的甲醇水溶液。
7.根据权利要求2所述的一种白酒中甾醇的检测方法，其特征在于，所述洗脱中洗脱液为甲醇或乙腈。
8.根据权利要求1所述的一种白酒中甾醇的检测方法，其特征在于，所述甾醇为β－谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、麦角甾醇四种甾醇中的至少两种的混合物。
9.根据权利要求1所述的一种白酒中甾醇的检测方法，其特征在于，使用气相色谱－三重四极杆质谱仪对待测样品进行气相质谱检测；
所述气相色谱的检测条件为：色谱柱：HP-5MS毛细管色谱柱；程序升温：200℃保持0min，以15℃/min升至300℃，保持20min；采用恒流模式，载气He流速1.0mL/min，不分流进样，进样量1μL，进样口温度300℃；
所述质谱检测条件为：电子轰击电离源：电子能量70eV；离子源温度230℃；传输线温度230℃；四极杆温度150℃；定性采用全扫描模式，质量扫描范围M/Z45-500，MRM模式。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的一种白酒中甾醇的检测方法，其特征在于，所述甾醇含量计算方法包括以下步骤：
绘制标准曲线：配制甾醇混合标准母液，以甾醇混合标准母液浓度为横坐标，以甾醇母离子－子离子对质荷比信号峰的峰面积为纵坐标，绘制浓度－峰面积标准曲线；
检测并计算甾醇含量：将待测样品进样至气相色谱－三重四极杆质谱仪，根据甾醇母离子－子离子对质荷比信号峰的峰面积与绘制的标准曲线计算出各种甾醇的含量。
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|---|---|
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Citations (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1778831A1 (en) * | 2004-07-27 | 2007-05-02 | The Regents of the University of California | Genetically modified host cells and use of same for producing isoprenoid compounds |
| CN102095812A (zh) * | 2010-11-25 | 2011-06-15 | 中国检验检疫科学研究院 | 气相色谱-质谱法测定化妆品中的丙烯腈的方法 |
| CN103506094A (zh) * | 2013-07-16 | 2014-01-15 | 江苏省家禽科学研究所 | 一种净化三聚氰胺的层析柱及含有该层析柱的试剂盒及利用该试剂盒净化三聚氰胺的方法 |
| CN104267123A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-07 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 食用油样品中游离甾醇组份分析方法及地沟油鉴别方法 |
| CN104634895A (zh) * | 2015-02-11 | 2015-05-20 | 安徽古井贡酒股份有限公司 | 一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测白酒中6种甜味剂的方法 |
| CN105067734A (zh) * | 2015-07-21 | 2015-11-18 | 中国农业大学 | 一种葡萄酒中纳他霉素含量的测定方法 |
| CN105223278A (zh) * | 2014-05-27 | 2016-01-06 | 中华人民共和国苏州出入境检验检疫局 | 固相萃取液质联用法测定葡萄酒中甲霜灵、多菌灵的方法 |
| CN106596792A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-04-26 | 四川剑南春（集团）有限责任公司 | 一种检测白酒中芳香酯类物质含量的方法 |
| CN107290472A (zh) * | 2017-08-21 | 2017-10-24 | 宜宾五粮液股份有限公司 | 酒和/或酿酒副产物中酚酸和/或其酯的检测方法 |
| CN108220032A (zh) * | 2018-03-29 | 2018-06-29 | 中国农业大学 | 一种改善红葡萄酒香气品质的酿造方法 |
| CN108333288A (zh) * | 2018-02-07 | 2018-07-27 | 绿城农科检测技术有限公司 | 一种气相色谱法串联质谱法用于检测白酒中18种塑化剂的方法 |
| US20190000911A1 (en) * | 2018-09-11 | 2019-01-03 | Fariba Sepahvand | Herbal composition for healing of wound, cuts and burns and a method of synthesizing thereof |
| CN109254104A (zh) * | 2018-09-26 | 2019-01-22 | 新疆农垦科学院 | 一种葡萄酒中有机磷农残的检测方法 |
| CN109633014A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-04-16 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种测定烟叶中21种萜类化合物含量的方法及其应用 |
| CN110927269A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-03-27 | 宜宾五粮液股份有限公司 | 定量检测酒中dl-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法 |
| CN111337602A (zh) * | 2020-04-26 | 2020-06-26 | 梧州市食品药品检验所 | 一种高效液相色谱串联质谱法测定神经甾体类激素的方法 |
| CN113267577A (zh) * | 2021-05-14 | 2021-08-17 | 劲牌有限公司 | 一种饮料酒中挥发性酚类物质的检测方法 |
| CN113583077A (zh) * | 2021-08-25 | 2021-11-02 | 宜宾五粮液股份有限公司 | 甾醇的制备方法 |
-
2022
- 2022-07-28 CN CN202210897445.9A patent/CN115112804B/zh active Active
Patent Citations (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1778831A1 (en) * | 2004-07-27 | 2007-05-02 | The Regents of the University of California | Genetically modified host cells and use of same for producing isoprenoid compounds |
| CN102095812A (zh) * | 2010-11-25 | 2011-06-15 | 中国检验检疫科学研究院 | 气相色谱-质谱法测定化妆品中的丙烯腈的方法 |
| CN103506094A (zh) * | 2013-07-16 | 2014-01-15 | 江苏省家禽科学研究所 | 一种净化三聚氰胺的层析柱及含有该层析柱的试剂盒及利用该试剂盒净化三聚氰胺的方法 |
| CN105223278A (zh) * | 2014-05-27 | 2016-01-06 | 中华人民共和国苏州出入境检验检疫局 | 固相萃取液质联用法测定葡萄酒中甲霜灵、多菌灵的方法 |
| CN104267123A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-07 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 食用油样品中游离甾醇组份分析方法及地沟油鉴别方法 |
| CN104634895A (zh) * | 2015-02-11 | 2015-05-20 | 安徽古井贡酒股份有限公司 | 一种超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪同时检测白酒中6种甜味剂的方法 |
| CN105067734A (zh) * | 2015-07-21 | 2015-11-18 | 中国农业大学 | 一种葡萄酒中纳他霉素含量的测定方法 |
| CN106596792A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-04-26 | 四川剑南春（集团）有限责任公司 | 一种检测白酒中芳香酯类物质含量的方法 |
| CN107290472A (zh) * | 2017-08-21 | 2017-10-24 | 宜宾五粮液股份有限公司 | 酒和/或酿酒副产物中酚酸和/或其酯的检测方法 |
| CN108333288A (zh) * | 2018-02-07 | 2018-07-27 | 绿城农科检测技术有限公司 | 一种气相色谱法串联质谱法用于检测白酒中18种塑化剂的方法 |
| CN108220032A (zh) * | 2018-03-29 | 2018-06-29 | 中国农业大学 | 一种改善红葡萄酒香气品质的酿造方法 |
| US20190000911A1 (en) * | 2018-09-11 | 2019-01-03 | Fariba Sepahvand | Herbal composition for healing of wound, cuts and burns and a method of synthesizing thereof |
| CN109254104A (zh) * | 2018-09-26 | 2019-01-22 | 新疆农垦科学院 | 一种葡萄酒中有机磷农残的检测方法 |
| CN109633014A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-04-16 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | 一种测定烟叶中21种萜类化合物含量的方法及其应用 |
| CN110927269A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-03-27 | 宜宾五粮液股份有限公司 | 定量检测酒中dl-2-羟基-4-甲基戊酸乙酯的方法 |
| CN111337602A (zh) * | 2020-04-26 | 2020-06-26 | 梧州市食品药品检验所 | 一种高效液相色谱串联质谱法测定神经甾体类激素的方法 |
| CN113267577A (zh) * | 2021-05-14 | 2021-08-17 | 劲牌有限公司 | 一种饮料酒中挥发性酚类物质的检测方法 |
| CN113583077A (zh) * | 2021-08-25 | 2021-11-02 | 宜宾五粮液股份有限公司 | 甾醇的制备方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| IRITI M ET AL: "Cardioprotective effects of moderate red wine consumption: Polyphenols vs. ethanol", 《JOURNAL OF APPLIED BIOMEDICINE》, vol. 12, no. 4, pages 193 - 202 * |
| PENG LIXIA ET AL: "The extraction and identification of phytosterols in the grape seed oil", 《JOURNAL OF CHINESE INSTITUTE OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY》, vol. 12, no. 3, pages 185 - 191 * |
| TIAN WF ET AL: "A comprehensive review of wheat phytochemicals: From farm to fork and beyond", 《COMPREHENSIVE REVIEWS IN FOOD SCIENCE AND FOOD SAFETY》, vol. 21, no. 3, pages 2274 - 2308 * |
| 王晨慧等: "山药酒中甾醇含量测定及清除DPPH自由基活性研究", 《中国酿造》, vol. 39, no. 11, pages 62 - 65 * |
| 胡娇等: "气相色谱-质谱法测定白酒中的甾醇类化合物", 《中国酿造》, vol. 42, no. 4, pages 234 - 237 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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