CN113267577A

CN113267577A - 一种饮料酒中挥发性酚类物质的检测方法

Info

Publication number: CN113267577A
Application number: CN202110529227.5A
Authority: CN
Inventors: 孙细珍; 熊亚青; 钱全全; 杜佳炜; 陈雅慧; 唐娟; 张思
Original assignee: Jing Brand Co ltd
Current assignee: Jing Brand Co ltd
Priority date: 2021-05-14
Filing date: 2021-05-14
Publication date: 2021-08-17

Abstract

本发明公开了一种饮料酒中挥发性酚类物质的检测方法。所述检测方法，包括以下步骤：将样品用水稀释后，用柠檬酸调整PH值为1～2；按照比例加入有机溶剂、对应内标物混合形成样液，向样液中加入氯化钠至饱和，离心后静置12h后取上清液；将上清液用无水Na₂SO₄干燥12h以上，得样品溶液；精密称取挥发性酚类物质标准品，加乙酸溶解，定容并加入对应内标物，得标准品溶液。将样品溶液和标准品溶液分别注入气相色谱‑三重四极杆串联质谱仪分析，采用内标标准曲线法测定样品溶液中挥发性酚类物质的含量。本发明的方法能够同时检测饮料酒中多种挥发性酚类化合物，检出限为1.0～10.0μg/L，具有适用范围广、操作简便、检测限低、准确度高的优点。

Description

一种饮料酒中挥发性酚类物质的检测方法

技术领域

本发明属于饮料酒检测领域，具体涉及一种检测饮料酒中挥发性酚类物质含量的方法。

背景技术

风味是饮料酒质量与品质的一项重要指标，挥发性酚类化合物是饮料酒中的一类重要风味物质，由于它们大部分有着极低的风味阈值，对于饮料酒的风味、口感以及稳定性等方面具有重要作用，越来越受到人们的重视。

研究表明，酚类物质主要来源于酿酒原料中的阿魏酸、木质素、单宁等，经过细菌和酵母的发酵形成，或是由微生物转化制曲过程的中间产物而形成。白酒中酚类物质具有不同的风味特征，例如：愈创木酚具有水果香、焦酱香，4-乙基愈创木酚和4-乙烯基愈创木酚带有木瓜香、甜香，苯酚具有药气味、烟臭味，4-甲基苯酚具有窖泥气味，4-乙基苯酚呈动物臭、马厩臭，丁香酚含有丁香味，4-甲基愈创木酚具有烟熏风味和酱油味；同时酚类物质也具有多种生物活性，4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚能够通过抑制自由基的生成来维持细胞稳态，是优良的自由基清除剂，4-乙基愈创木酚还可以通过抑制炎症因子和炎性体的表达，从而起到细胞内抗炎的作用；愈创木酚可用于慢性支气管炎多痰咳嗽的治疗，丁香酚可以抗菌、抗氧化，同时还具有解热镇痛、麻醉等药效。由于这些酚类化合物的对于饮料酒的风味、品质等具有重要的影响，因此控制酚类化合物在白酒中的含量对提高白酒的质量十分重要。

近年来，随着现代分析技术的发展，一些精密的分析手段被应用于饮料酒中酚类物质的分离及鉴定，包括液-液萃取法、固相萃取法、顶空固相微萃取和浸入式固相微萃取法及直接进样法等分离提取方法及气相色谱、气相色谱-质谱联用等技术手段，如徐岩等采用固相微萃取结合GC-MS法建立了一种检测白酒中挥发性酚类化合物的方法，孙啸涛等采用涡旋辅助液液萃取结合GC-MS法建立了白酒中4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚的方法，赵雅敏等采用液液微萃取结合气相色谱-质谱联用技术建立了一种快速检测饮料酒中9种挥发性酚类化合物的方法，李俊等采用固相萃取结合GC-MS法建立了一种测定酱香型白酒中9种挥发性酚的方法。液液萃取法是提取样品中目标物的经典方法，但该方法实验样品用量大，溶剂消耗量大，耗时较长；固相微萃取法样品需求量小、样品处理流程简单、耗时较短的特点，但是存在样品检测重现性较差等不足；液液微萃取法根据相似相溶原理对目标物进行提取、富集，相较于液液萃取法样品及溶剂消耗量、前处理时间等都大大减少。

气相色谱-三重四极杆串联质谱法同时具有气相色谱分离效率高以及质谱的选择性高、鉴别能力强、提供丰富的结构信息便于定性及定量分析。因此，应用液液微萃取方法结合气相色谱-三重四极杆串联质谱法具有操作简单、耗时较短、定量准确、重复性好、样品用量少等优点，可以更好的用于分析饮料酒中的酚类化合物。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供一种检测饮料酒中挥发性酚类物质含量的方法，包括采用液液微萃取进行样品前处理提取目标化合物，再采用气相色谱-三重四极杆串联质谱仪进行检测，基于内标标准曲线法计算获得挥发性酚类物质的含量。

8)其中样品的前处理具体包括：将待测饮料酒样品用水稀释后，用柠檬酸将PH值调整为1～2；再与挥发性酚类物质的同位素对应内标物混合，加入氯化钠至溶液饱和，然后用有机溶剂进行提取，得到样品溶液。

本发明针对饮料酒中的挥发性酚类物质，采用气相色谱-三重四极杆串联质谱仪进行分析检测，具有灵敏度高、选择性好、高能量和抗干扰能力强等优点，且采用的多反应监测模式(MRM)解决了气相色谱法和液相色谱法在检测灵敏度及检测技术上存在的不足，可有效消除GC-MS选择离子扫描(SIM)中存在的离子信息少、定性不准的问题。

本发明在样品前处理时通过采用柠檬酸将样品溶液PH值调整为1～2，可以提高有机溶剂对挥发性酚类物质的提取效率，从而提高方法的检出限。

进一步，采用4种挥发性酚类物质的同位素作为对应内标物，其与待测挥发性酚类物质性质及分配系数基本一致，以其为对照标准，可以减小检测误差。另外，通过加水稀释体系中乙醇浓度，再加氯化钠使乙醇水溶液饱和，提高水溶液的极性，促使挥发性酚类物质向提取溶剂中转移，提高提取效率；而且其中采用了液液微萃取的方法，仅使用很少量的有机溶剂进行提取，大幅降低有机溶剂的使用量，降低成本以及减少对环境的污染。

进一步地，所述有机溶剂为乙酸乙酯。使用乙酸乙酯的提取效果和上机检测效果都是比较好的，检测结果更准确。

进一步地，所述待测饮料酒样品、所述同位素对应内标物和水的用量比为3～5mL:0.05～0.1μg:5～20mL；所述待测饮料酒样品与乙酸乙酯的体积比为2:1。

进一步地，建立标准曲线时，以所述标准溶液中目标化合物与对应内标物的色谱峰面积比为纵坐标，以所述标准溶液中目标化合物与对应内标物的浓度比为横坐标。

进一步地，所述挥发性酚类物质为苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚中的一种或多种。

本发明涉及的饮料酒包括白酒、保健酒、威士忌等。本发明的方法可以检测饮料酒中的一种挥发性酚类物质，也可以同时检测多种挥发性酚类物质。优选地，检测上述10种酚类物质中的一种或多种时，效果更好，即检测重复性好、灵敏度高、结果更准确。

当所述酚类物质为愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚中的一种或多种时，所述同位素对应内标物为2-甲氧基-苯酚-d₃；当所述酚类物质为苯酚、4-甲基苯酚中的一种或两种时，所述同位素同标物为4-甲基苯酚-d₇；当所述酚类物质为4-乙基苯酚时，所述同位素对应内标物4-乙基苯酚-d₁₀；当所述酚类物质为丁香酚、2,6-二甲氧基苯酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚中的一种或多种时，所述同位素对应内标物为丁香酚-d₃。

进一步地，其中气相色谱检测条件包括：

DB-FFAP毛细管色谱柱(60m×0.25mm，0.25μm)，进样口温度为250℃，进样量为1μL，不分流进样；载气为高纯He(纯度≥99.999％)，恒流模式，流速为1.0mL/min；升温程序为初温60℃，保持1min，以20℃/min升至180℃，再以3.5℃/min升至240℃。

进一步地，其中三重四极杆串联质谱仪检测条件包括：

电离模式：电子轰击源，能量为70eV；四极杆温度：150℃；离子源温度：230℃；溶剂延迟：10min；辅助通道加热温度280℃；动态多反应监测模式(dMRM)。

在本发明一个优选实施方式中，所述方法具体包括：

a.将待测饮料酒样品和水按照3～5mL:5～20mL比例混合，用柠檬酸将PH值调整为1～2，加入0.05～0.1μg对应内标物，得到混合溶液，向其中加入氯化钠至饱和，然后用乙酸乙酯进行提取，乙酸乙酯体积为所述待测饮料酒样品体积的1/2，离心分离，静置12h后收集上层清液，得到样品溶液；

b.以乙酸乙酯为溶剂溶解苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚标准品，加入对应内标物，得到混合标准溶液；

c.将上述步骤a得到的样品溶液和上述步骤b得到的标准溶液分别进行气相色谱-三重四极杆串联质谱检测分析；

d.以标准溶液中酚类物质与对应内标物的色谱峰面积比为纵坐标，酚类物质与对应内标物的浓度比为横坐标，建立标准曲线；

e.将测得的样品溶液中酚类物质与对应内标物的色谱峰面积比代入计算公式中，计算出所述待测饮料酒样品中酚类物质的含量。

进一步地，离心分离时，以8000～10000rpm的转速离心7～10min。

进一步地，加入无水Na₂SO₄脱水干燥的时间为12小时以上。

本发明的有益效果：

本发明采用液液微萃取提取饮料酒中挥发性酚类物质，经气相色谱-三重四极杆串联质谱仪进行检测，以4种酚类物质的稳定同位素作为对应内标物，可以有效减小误差，保证检测结果的准确性。本发明的方法能够同时检测饮料酒中多种挥发性酚类物质，检出限为1.0～10.0μg/L，具有适用范围广、操作简便、检测限低、准确度高的优点。

附图说明

图1为实施例1中挥发性酚类物质混合标准溶液及对应内标物溶液的质谱图；

图2为实施例1中愈创木酚的标准曲线图；

图3为实施例1中4-甲基愈创木酚的标准曲线图；

图4为实施例1中苯酚的标准曲线图；

图5为实施例1中4-乙基愈创木酚的标准曲线图；

图6为实施例1中4-甲基苯酚的标准曲线图；

图7为实施例1中丁香酚的标准曲线图；

图8为实施例1中4-乙基苯酚的标准曲线图；

图9为实施例1中4-乙烯基愈创木酚的标准曲线图；

图10为实施例1中2,6-二甲氧基苯酚的标准曲线图；

图11为实施例1中2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚的标准曲线图；

图12为实施例1中小曲清香型白酒待测样品的质谱图；

图13为实施例1中小曲清香型白酒待测样品回收率实验的质谱图；

图14为实施例2中浓香型白酒待测样品溶液的质谱图；

图15为实施例3中酱香型白酒待测样品溶液的质谱图；

图16为实施例4中米香型白酒待测样品溶液的质谱图；

图17为实施例5中保健酒待测样品溶液的质谱图；

图18为实施例6中威士忌酒待测样品溶液的质谱图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明提供的饮料酒中酚类物质检测方法进行详细说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

本实施例提供一种小曲清香型白酒中挥发性酚类物质(包括苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚)含量的方法，具体如下：

1.试剂

无水乙醇、乙酸乙酯均为色谱纯；氯化钠(NaCl)、无水硫酸钠(Na₂SO₄)、柠檬酸均为分析纯；所用水均为超纯水，为本实验室自制。

2.标准品

苯酚、4-甲基苯酚、愈创木酚、4-乙基苯酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚、4-甲基苯酚-d₇、2-甲氧基-苯酚-d₃、4-乙基苯酚-d₁₀、丁香酚-d₃均为色谱纯。

3.待测样品

小曲清香型白酒，酒精度50％vol，由湖北省劲牌有限公司提供。

4.标准溶液配制

4.1混合标准溶液的配制

以乙酸乙酯为溶剂配制苯酚、4-甲基苯酚、愈创木酚、4-乙基苯酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚共10种目标化合物混合标准溶液，质量浓度均为5.0mg/L，-20℃保存。

4.2内标液的配制

以乙酸乙酯为溶剂配制4-甲基苯酚-d₇、2-甲氧基-苯酚-d₃、4-乙基苯酚-d₁₀、丁香酚-d₃混合溶液，质量浓度均为5.0mg/L，-20℃保存。

4.3标准系列工作液

用乙酸乙酯为溶剂将4.1中混合标准溶液逐级稀释成标准系列工作液，浓度依次为2.0、1.0、0.5、0.2、0.1、0.05、0.02、0.01mg/L，现配现用。

5.样品处理过程

移取4mL待测样品于50mL离心管中，加入16mL水，加入柠檬酸使PH＝1.5，加入20μL内标液，加入7～8g氯化钠，涡旋混匀，加入2mL乙酸乙酯，涡旋振荡提取5min后，离心7～10min(8000～10000rpm)，静置12h，收集上层萃取液，向其中加入无水Na₂SO₄干燥12h，过滤即得样液，供GC-MS/MS分析。。

6.样品测定

6.1仪器条件

8890B-7000D气相色谱-三重四极杆串联质谱仪(GC-MS/MS，美国Agilent科技有限公司)。气相色谱条件DB-FFAP毛细管色谱柱(60m柱长，0.25mm内径，0.25μm膜厚)，载气为高纯He(纯度≥99.999％)，恒流模式，流速为1.0mL/min；升温程序为初温60℃，保持1min，以20℃/min升至180℃，再以3.5℃/min升至240℃；进样口温度为250℃，进样量为1μL，不分流进样；三重四极杆串联质谱仪条件为电子轰击源能量70eV；离子源温度230℃；四级杆温度150℃；辅助通道加热温度280℃；动态多反应监测模式(dMRM)。

10种酚类物质和4种同位素对应内标物经气相色谱-质谱仪进行SCAN模式的全扫描(50～550m/z)，得到全扫描质谱图。选择丰度较高，质荷比合适的碎片离子作为母离子，进行二级质谱扫描，从二级质谱图中选择响应较高的碎片离子作为子离子。通过改变碰撞电压来优化能量，最终选取表1中的保留时间和质谱特征离子对。本实施例中10种挥发性酚类物质混合标准溶液及对应内标物溶液的质谱图如图1所示。

表1 10种挥发性酚类化合物保留时间、监测离子对和碰撞电压表

6.2标准曲线的制作

取8个样品瓶，分别吸取1mL4.3节中标准系列工作液，加入10μL4.2节中内标液，混合均匀，供GC-MS/MS分析，以各化合物与对应内标物的峰面积比为纵坐标(y)，以相应质量浓度比为横坐标(x)绘制标准曲线，得到各待测化合物的线性方程。以3倍信噪比(S/N＝3)计算检出限(LOD)，以10倍信噪比(S/N＝10)计算定量限(LOQ)。实验结果见表2，从表中结果可以看出10种挥发性酚类化合物在相应的浓度范围内线性关系良好，相关系数R²均大于0.998，10种挥发性酚类化合物的LOD为1.0～10.0μg/L，LOQ为3.5～35.0μg/L。本实施例中10种酚类物质标准曲线图如图2～图11所示。

表2 10种酚类化合物的线性范围、线性关系、检出限(LODs)及定量限(LOQs)

6.3测定

将样品溶液与标准溶液在相同检测条件下进行测定，将目标化合物的峰面积A_s与对应对应内标物的峰面积A_i代入标准曲线，计算试样中相应目标化合物的含量C_s。本实施例中小曲清香型白酒待测样品的质谱图如图12所示。

6.4计算

样品中10种酚类物质的含量按下式计算：

式中：

C_s------试样中酚类化合物s的浓度，单位为微克每升(μg/L)；

A_s------酚类化合物s的峰面积；

A_i------酚类化合物s对应对应内标物的峰面积；

C_i------对应对应内标物的浓度，单位为微克每升(μg/L)；

V₁------吸取试样的体积，单位为毫升(mL)；

V₂------加入乙酸乙酯的体积，单位为毫升(mL)；

b------标准曲线的截距值；

k------标准曲线的斜率。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留至小数点后2位。

7.重复性试验

取6份待测样品，向其中加入40μL浓度为5.0mg/L为标准溶液，标记为C-1～C-6，按上述方法处理样品溶液，测定10种酚类物质含量，并计算10种酚类物质测定结果重复性，具体计算结果如表3所示，从表中可知10种酚类物质检测结果RSD值均小于5％，表明方法重复性良好。

表3 10种酚类化合物重复性实验结果

8.准确度试验

准确吸取4mL待测样品于50mL离心管中，共6份，分别标记为R1-1和R1-2、R2-1和R2-2、R3-1和R3-2；取4.1中酚类物质混合标准溶液(浓度为5.0mg/L)，向R1-1和R1-2中加入40μL，向R2-1和R2-2中加入80μL，向R3-1和R3-2中加入120μL；再各加入内标液20μL，加入16mL水，加入7.5g氯化钠，超声溶解，加入2mL乙酸乙酯，涡旋振荡提取1min后，以8000rpm离心10min，静置12h，收集上层萃取液，向其中加入无水Na₂SO₄干燥12h，过滤即得样液，供GC-MS/MS分析。本实施例中小曲清香型白酒待测样品回收率实验的质谱图如图13所示。

将10种酚类物质与对应对应内标物的峰面积代入计算公式，计算各酚类物质的含量及回收率，10种酚类物质的回收率均大于90％，RSD值均小于5％，表明本方法准确度良好，具体计算结果如表4所示。

表4待测样品中10种酚类化合物检测结果与回收率

实施例2

本实施例提供一种浓香型白酒中挥发性酚类物质(包括苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚)含量的方法，具体如下：

1.试剂与标准溶液：同实施例1。

2.待测样品：浓香型白酒，酒精度为60％vol，由四川省宜宾六尺巷酒业提供。

3.样品处理过程：移取4mL待测样品于50mL离心管中，加入20mL水，加入柠檬酸使PH＝1.5，加入20μL内标液，加入8～9g氯化钠，涡旋混匀，加入2mL乙酸乙酯，涡旋振荡提取5min后，离心7～10min(8000～10000rpm)，静置12h，收集上层萃取液，向其中加入无水Na₂SO₄干燥12h，过滤即得样液，供GC-MS/MS分析。。

4.标准曲线的绘制与计算公式：同实施例1。

5.样品测定：测定条件及方法与实施例1相同，本实施例中浓香型白酒待测样品的质谱图如图14所示。将酚类化合物与对应内标物的峰面积代入计算公式，计算得到各酚类化合物的含量，本实施例待测样品中10种酚类化合物计算结果如表5所示。

表5待测样品中10种酚类化合物检测结果

实施例3

本实施例提供一种酱香型白酒中挥发性酚类物质(包括苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚)含量的方法，具体如下：

1.试剂与标准溶液：同实施例1。

2.待测样品：酱香型白酒，酒精度为54.2％vol，由劲牌茅台镇酒业提供。

3.样品处理过程：移取4mL待测样品于50mL离心管中，加入18mL水，加入柠檬酸使PH＝1.5，加入20μL内标液，加入7～8g氯化钠，涡旋混匀，加入2mL乙酸乙酯，涡旋振荡提取5min后，离心7～10min(8000～10000rpm)，静置12h，收集上层萃取液，向其中加入无水Na₂SO₄干燥12h，过滤即得样液，供GC-MS/MS分析。

4.标准曲线的绘制与计算公式：同实施例1。

5.样品测定：测定条件及方法与实施例1相同，本实施例中浓香型白酒待测样品的质谱图如图15所示。将酚类化合物与对应内标物的峰面积代入计算公式，计算得到各酚类化合物的含量，本实施例待测样品中10种酚类化合物计算结果如表6所示。

表6待测样品中10种酚类化合物检测结果

实施例4

本实施例提供一种米香型白酒中挥发性酚类物质(包括苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚)含量的方法，具体如下：

1.试剂与标准溶液：同实施例1。

2.待测样品：米香型白酒，酒精度为57.7％vol，由广西天龙泉酒业提供。

3.样品处理过程：移取4mL待测样品于50mL离心管中，加入19mL水，加入柠檬酸使PH＝1.5，加入20μL内标液，加入8～9g氯化钠，涡旋混匀，加入2mL乙酸乙酯，涡旋振荡提取5min后，离心7～10min(8000～10000rpm)，静置12h，收集上层萃取液，向其中加入无水Na₂SO4干燥12h，过滤即得样液，供GC-MS/MS分析。

4.标准曲线的绘制与计算公式：同实施例1。

5.样品测定：测定条件及方法与实施例1相同，本实施例中浓香型白酒待测样品的质谱图如图16所示。将酚类化合物与对应内标物的峰面积代入计算公式，计算得到各酚类化合物的含量，本实施例待测样品中10种酚类化合物计算结果如表7所示。

表7待测样品中10种酚类化合物检测结果

实施例5

本实施例提供一种保健酒中挥发性酚类物质(包括苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚)含量的方法，具体如下：

1.试剂与标准溶液：同实施例1。

2.待测样品：保健酒，酒精度为35％vol，由劲牌有限公司提供。

3.样品处理过程：移取4mL待测样品于50mL离心管中，加入10mL水，加入柠檬酸使PH＝1.5，加入20μL内标液，加入5～6g氯化钠，涡旋混匀，加入2mL乙酸乙酯，涡旋振荡提取5min后，离心7～10min(8000～10000rpm)，静置12h，收集上层萃取液，向其中加入无水Na2SO4干燥12h，过滤即得样液，供GC-MS/MS分析。

4.标准曲线的绘制与计算公式：同实施例1。

5.样品测定：测定条件及方法与实施例1相同，本实施例中保健酒待测样品的质谱图如图17所示，将酚类化合物与对应内标物的峰面积代入计算公式，计算得到各酚类化合物的含量，本实施例待测样品中10种酚类化合物计算结果如表8所示。

表8待测样品中10种酚类化合物检测结果

实施例6

本实施例提供一种威士忌中挥发性酚类物质(包括苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚)含量的方法，具体如下：

1.试剂与标准溶液：同实施例1。

2.待测样品：市售威士忌酒样，酒精度为40％vol，美国杰克丹尼威士忌。

3.样品处理过程：移取4mL待测样品于50mL离心管中，加入12mL水，加入柠檬酸使PH＝1.5，加入20μL内标液，加入5～6g氯化钠，涡旋混匀，加入2mL乙酸乙酯，涡旋振荡提取5min后，离心7～10min(8000～10000rpm)，静置12h，收集上层萃取液，向其中加入无水Na₂SO4干燥12h，过滤即得样液，供GC-MS/MS分析。。

4.标准曲线的绘制与计算公式：同实施例1。

5.样品测定：测定条件及方法与实施例1相同，本实施例中威士忌酒待测样品的质谱图如图18所示。将酚类化合物与对应内标物的峰面积代入计算公式，计算得到各酚类化合物的含量，本实施例待测样品中10种酚类化合物计算结果如表9所示。

表9待测样品(6)中10种酚类化合物检测结果

Claims

1.一种饮料酒中挥发性酚类物质的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)将样品的酒精度调整至5～15％vol，形成样液，向样液中加入柠檬酸，将PH值调整为1～2；

2)向所述步骤1)得到的样液中加入对应内标物，混合后加入氯化钠至饱和，将饱和氯化钠溶液与有机溶剂混合，离心7～10min(8000～10000rpm)，静置12h，收集上层萃取液；

3)向上述步骤2)得到的萃取液中加入无水Na₂SO₄干燥12h，过滤即得样液，供GC-MS/MS分析。；

4)将上述步骤3)得到的样液注入气相色谱-三重四极杆串联质谱仪，获得目标化合物的峰面积；

5)称取苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、2,6-二甲氧基苯酚、丁香酚、4-乙烯基愈创木酚、2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚标准品适量，加乙酸乙酯溶解，并加入对应内标物，得标准溶液；

6)将上述步骤5)得到的标准溶液用乙酸乙酯逐级稀释，得到标准系列工作液，加入对应内标物，注入气相色谱-三重四极杆串联质谱仪，以目标化合物与对应内标物的峰面积比为纵坐标，对应浓度比为横坐标绘制标准曲线；

7)将上述步骤4)获得的目标化合物和对应内标物的峰面积代入步骤6)标准曲线，计算得到样液中目标化合物的浓度。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中样品的质量或体积、水的体积按照4(mL或g):8～20mL混合。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤2)中样品与有机溶剂的体积比为2:1；

所述步骤2)中有机溶剂为乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、乙醚中的一种或两种混合物；

步骤2)中对应内标物包含4-甲基苯酚-d₇、2-甲氧基-苯酚-d₃、4-乙基苯酚-d₁₀、丁香酚-d₃。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤3)中样液与无水Na₂SO₄按照1mL:100mg混合。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤4)中气相色谱仪条件为采用硝基对苯二甲酸改性的聚乙二醇毛细管色谱柱；载气为高纯He(纯度≥99.999％)，恒流模式，流速为1.0mL/min；升温程序为初温60℃，保持1min，以20℃/min升至180℃，再以3.5℃/min升至240℃；进样口温度为250℃，进样量为1μL，不分流进样。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤4)中三重四极杆串联质谱仪条件为电子轰击源能量70eV；离子源温度230℃；四级杆温度150℃；辅助通道加热温度280℃；动态多反应监测模式(dMRM)。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤5)中标准溶液的浓度为2～10mg/L。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤6)中标准系列工作液浓度为0.01～2.0mg/L。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤6)中标准系列工作液与对应内标物的体积比为1mL:10μL。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤7)中目标化合物的计算公式为：

式中：

C_s------试样中酚类化合物s的浓度，单位为微克每升(μg/L)；

A_s------酚类化合物s的峰面积；

A_i------酚类化合物s对应内标物的峰面积；

C_i------对应内标物的浓度，单位为微克每升(μg/L)；

V₁------吸取试样的体积，单位为毫升(mL)；

V₂------加入乙酸乙酯的体积，单位为毫升(mL)；

b------标准曲线的截距值；

k------标准曲线的斜率。