CN115184511A - 原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，属于白酒风味研究领域。原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，通过大体积直接进样技术与气相色谱‑三重四极杆串联质谱法相结合测定白酒中的挥发性酚类物质；所述大体积直接进样技术采用大体积进样捕集衬管，该衬管为气相色谱去活不分流衬管，在衬管底部依次填装有多孔聚合物吸附剂，以及防止多孔聚合物吸附剂被吹出的去活玻璃毛。本发明能适用于不同酒精度的白酒中10种挥发性酚类化合物的定量分析，其线性关系相关系数均大于0.998，检测限均小于0.2μg/L，相对标准偏差小于5％，回收率为80‑110％，可有效解决现有技术样品前处理繁琐、准确度和精密度差的问题。

Description

原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法

技术领域

本发明属于白酒风味研究领域，具体涉及一种原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法。

背景技术

挥发性酚类化合物是在各类酒精饮料中贡献一种类似酚味、中药、草本、杏子、马厩味等的气味，是非常重要的风味化合物。中国的白酒中常见的酚类化合物有苯酚、4-甲基苯酚、4-乙基苯酚、愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基愈创木酚等。这些化合物对白酒的风味与口感有非常重要的作用，控制其再白酒中地含量，是白酒风味研究的重点之一，对白酒地品质提升具有重要意义。

快速、稳定、精确的直接测定白酒中的挥发性酚类化合物一直是一个挑战。目前，白酒中的挥发性酚类化合物主要是通过液液萃取、固相萃取、顶空或浸入式固相微萃取等前处理技术与气相色谱、气相色谱-质谱联用、液相色谱、液相色谱质谱联用等技术相结合进行定量检测，如发明专利“一种测定白酒中挥发性苯酚类化合物的方法”(公开号为CN101762664A)中，先将酒样稀释到5-20％的酒精度，再应用浸入式固相微萃取技术富集白酒中的酚类化合物，并利用气相色谱-质谱联用技术对7种酚类化合物进行定量分析；发明专利“白酒中挥发性酚类化合物的高效液相色谱测定方法”(公开号为CN102621239A)中，将酒样稀释后，利用液液萃取富集酚类化合物，然后采用高效色谱-荧光分析技术对10种酚类化合物进行定量分析；发明专利“一种饮料酒中挥发性酚类物质的检测方法”(公开号为CN113267577A)中，将饮料酒稀释酒精度至5-15％vol，并调整PH后，利用液液微萃取技术提取酚类化合物，并采用入气相色谱-三重四极杆串联质谱仪进行分析。以上定量方法都需要将酒样进行稀释后，采用不同的样品前处理手段进行分析物的富集，其中液液萃取法，存在着样品用量大，有机溶剂消耗大，前处理耗时长等缺点；而固相微萃取虽不具备这些缺点，但难以规避由于溶剂影响、竞争性吸附等带来重现性差的缺陷。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有测定白酒中的挥发性酚类化合物需要进行繁琐的样品前处理工序以及准确度和精密度较差的问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：通过大体积直接进样技术与气相色谱-三重四极杆串联质谱法相结合测定白酒中的挥发性酚类物质；所述大体积直接进样技术采用大体积进样捕集衬管，所述大体积进样捕集衬管为体积800-900μL，内径4mm的气相色谱去活不分流衬管，在衬管底部依次填装有20-100mg的多孔聚合物吸附剂，以及适量的防止多孔聚合物吸附剂被吹出的去活玻璃毛。

上述大体积进样捕集衬管的制备方法为：将多孔聚合物吸附剂和去活玻璃毛依次填装进气相色谱去活不分流衬管底部，然后用甲醇清洗2-4次并晾干，放入进样口进行老化后，得到大体积进样捕集衬管。

进一步的是，上述老化为设置进样口温度为280-300℃，分流模式，分流比为100-200∶1，色谱柱柱流速为1ml/min，老化时间1-2h。

进一步的是，上述气相色谱去活不分流衬管底部有砂芯或去活玻璃毛。

进一步的是，上述多孔聚合物吸附剂为Tenax TA填料，粒径为60-80目。

进一步的是，上述去活玻璃毛的填装量为100-200mg。

上述原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，包括如下步骤：

A.采用大体积进样捕集衬管将酒样通过大体积直接进样至气相色谱-三重四极杆质谱联用仪；

B.通过dMRM模式进行检测分析，得到样品中挥发性酚类化合物的响应值；

C.根据样品中目标物质与对应稳定同位素内标的响应比，对照标准曲线计算得到白酒中挥发性酚类物质的含量。

上述步骤A中，设置大体积直接进样的参数为进样量5-20μL，进样速度0.3-1μL/s，放空流量150-250ml/min，放空时间0.5-1min，放空压力3-5psi，进样口初始温度40-60℃，保持0.5-1min，以600℃/min的升温速率升至250-260℃，进样时间为2-3min，进样流速为2-3ml/min。

上述步骤B中，设置气相色谱部分为Hp-innowax毛细色谱柱，载气为高纯氦气，进样结束后保持恒流，流速为1-2ml/min；升温程序为初始温度40-60℃，保持5min，以4-5℃/min的速率升至250℃，保持10-15min；设置三重四极杆质谱部分为电离模式；电子轰击能，能量为70ev；四极杆温度为150℃，离子源温度为280℃，辅助通道加热温度为250-260℃；M1scan模式，扫描范围m/z为35-350，驻留时间300ms。

上述步骤C中，所述标准曲线由下述方法得到：

a.将挥发性酚类物质的标准品用52％乙醇水溶液稀释成不同浓度梯度的标样溶液；

b.选择对应稳定同位素内标，配制成稳定同位素内标溶液；

c.在不同浓度梯度的标样溶液中加入稳定同位素内标溶液；

d.通过大体积直接进样-气相色谱-三重四极杆质谱联用仪，利用dMRM模式采集信号，以标准品与稳定同位素内标的响应比为纵坐标，标准品与稳定同位素内标的浓度比为横坐标，绘制标准曲线。

本发明的有益效果是：直接进样是一种没有样品前处理过程，且获得一些特定的风味化合物原位信息的进样技术。白酒是通过固体发酵而来的一种蒸馏酒，其透明干净，不含色素和添加剂的特点，使其具备开发直接进样方法的可能性。气相色谱-三重四极杆串联质谱法是具备高选择性、高灵敏度、高抗干扰能力的一种分析技术，广泛应用于食品和环境领域中的痕量化合物的定量分析。但常规技术中小体积的直接进样存在检出限低，受溶剂影响大的缺陷，而传统大体积进样，虽可除去溶剂干扰，但大幅度提高分析物的响应具有很大难度。为了解决这些技术问题，发明人经过长期的研究和实验，创新性地设计了一种专用的大体积进样捕集衬管，并在此基础上，开发了适用于白酒的大体积直接进样技术，与气相色谱-三重四极杆串联质谱法相结合形成了一种原位测定白酒中的挥发性酚类物质的分析技术，对白酒的品质提升具有重要意义。

本发明本发明的技术可测定白酒中的挥发性酚类化合物，采用大体积进样技术无需进行繁琐的样品前处理，是一种简单、快速、准确的原位分析方法；用气相色谱-三重四极杆串联质谱技术进行分析，能降低机械噪音的干扰，提高结果的准确度和精密度。该方法能适用于不同酒精度的白酒中10种挥发性酚类化合物的定量分析，其线性关系相关系数均大于0.998，检测限均小于0.2μg/L，相对标准偏差小于5％，回收率为80-110％。

本发明快速准确的定量了白酒中10种挥发性化合物，为进一步研究酚类物质对白酒风味的影响奠定了基础，对提高白酒品质有着重要意义。

附图说明

图1为本发明大体积进样捕集衬管的一种结构示意图。

图中标记为：1是气相色谱去活不分流衬管，2是砂芯或去活玻璃毛，3是Tenax TA填料，4是去活玻璃毛。

图2为本发明大体积直接进样影响因素P-B实验柏拉图分析结果(A为苯酚类化合物、B为愈创木酚类化合物)；

图3为实施例中挥发性酚类物质混合标准溶液及对应内标物溶液的质谱图

图4为实施例中愈创木酚的标准曲线图；

图5为实施例中2,6-二甲基苯酚的标准曲线图；

图6为实施例中4-甲基愈创木酚的标准曲线图；

图7为实施例中邻甲酚的标准曲线图；

图8为实施例中苯酚的标准曲线图；

图9为实施例中4-乙基愈创木酚的标准曲线图；

图10为实施例中对甲酚的标准曲线图；

图11为实施例中间甲酚的标准曲线图；

图12为实施例中4-乙基苯酚的标准曲线图；

图13为实施例中丁香酚的标准曲线图；

图14为实施例1中浓香型白酒待测样品的质谱图；

图15为实施例2中酱香型白酒待测样品的质谱图；

图16为实施例3中清香型白酒待测样品的质谱图。

具体实施方式

本发明的技术方案，具体可以按照以下方式实施。

原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，通过大体积直接进样技术与气相色谱-三重四极杆串联质谱法相结合测定白酒中的挥发性酚类物质；所述大体积直接进样技术采用大体积进样捕集衬管，所述大体积进样捕集衬管为体积800-900μL，内径4mm的气相色谱去活不分流衬管(1)，在衬管底部依次填装有20-100mg的多孔聚合物吸附剂，以及防止多孔聚合物吸附剂被吹出的去活玻璃毛(4)。

上述大体积进样捕集衬管的制备方法为：将多孔聚合物吸附剂和去活玻璃毛(4)依次填装进气相色谱去活不分流衬管(1)底部，然后用甲醇清洗2-4次并晾干，放入进样口进行老化后，得到大体积进样捕集衬管；本发明所述大体积进样捕集衬管的一种填装方式示意图如1所示，优选的是，上述气相色谱去活不分流衬管底部有砂芯或去活玻璃毛(3)；多孔聚合物吸附剂为Tenax TA填料(2)，粒径为60-80目；去活玻璃毛(4)的填装量为100-200mg。

优选的，上述老化为设置进样口温度为280-300℃，分流模式，分流比为100-200∶1，色谱柱柱流速为1ml/min，老化时间1-2h。由于流速变大，分流出口的流速也会变大，冲洗衬管的流量就会变大，因此限定色谱柱柱流速为固定值，调节分流比即可。

针对传统大体积直接进样分析物响应提高较难的问题，本发明选用安捷伦气相色谱的不分流衬管进行改装，选用衬管需经过脱活处理，并在底部预装有去活玻璃毛或砂芯。本发明采用的Tenax TA填料是一种商品化吸附填料，广泛应用于环境与风味领域中挥发性有机物的捕集。由于具有良好的疏水性且不吸附乙醇，因此Tenax TA填料用于白酒大体积进样，将显著降低溶剂放空过程中的分析物的损失，从而提高响应。

上述原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，包括如下步骤：

A.采用大体积进样捕集衬管将酒样通过大体积直接进样至气相色谱-三重四极杆质谱联用仪；

B.通过dMRM模式进行检测分析，得到样品中挥发性酚类化合物的响应值；

C.根据样品中目标物质与对应稳定同位素内标的响应比，对照标准曲线计算得到白酒中挥发性酚类物质的含量。

上述步骤A中，设置大体积直接进样的参数为进样量5-20μL，进样速度0.3-1μL/s，放空流量150-250ml/min，放空时间0.5-1min，放空压力3-5psi，进样口初始温度40-60℃，保持0.5-1min，以600℃/min的升温速率升至250-260℃，进样时间为2-3min，进样流速为2-3ml/min。

为解决传统小体积进样分析物检出限过低的问题，本发明采用加大样品进样量以此来提高分析物的响应，并在安捷伦的多功能进样口(MMI进样口)中采用溶剂放空模式，除去样品中的乙醇和水，减小溶剂对分析的影响并保护色谱柱。为降低溶剂放空过程中分析物的损失，本发明采用制作的大体积进样-捕集衬管，在放空过程中吸附分析物，之后通过程序升温解吸附填料上的分析物，完成样品进样。

为获得更好的分析物灵敏度，本发明通过Plackett-Burman Design(P-B设计)筛选出了对大体积直接进样影响最大的因素，并以此找到了最优的条件。具体优化过程如下所示：

通过对前期单因子实验的结果，本次设计选择(A)放空温度(40-60℃)，(B)放空流速(50-150ml/min)，(C)放空时间(0.2-0.6min)，(D)解析附温度(220-280℃)，(E)放空压力(3-7psi)，(F)解析附时间(0.5-3.5min)，(G)解析附流速(1-3ml/min)，(K)吹扫流速(200-300ml/min)的8个因子进行考察，每个实验分别取低和高两个水平。为保证实验准确性，本次实验设计含有3个虚拟项，并设置了3个中心点，因此选择了n＝15的P-B设计。具体实验设计方案如表1所示。

表1P-B实验的设计方案(n＝15)

将挥发性酚类物质分成愈创木酚类和苯酚类两大类化合物，分别以这两类化合物的定量离子响应值总和作为实验判别依据。根据柏拉图分析结果所示(图2)，解析附时间、解析附流速和解析附温度等三个因子对酚类化合物具有显著的正向影响，且影响贡献在所有因子中占比最大，是主要的影响因子；而放空温度、放空压力、放空流速具有负向影响，仅在愈创木酚类物质中具有显著的影响，且影响贡献很小。

因此根据单因素实验与P-B实验结果的结合，优选的是，上述步骤A中，设置大体积直接进样的参数为进样量20μL，进样速度1μL/s，放空流量250ml/min，放空时间1min，放空压力3psi，进样口初始温度60℃，保持1min，以600℃/min的升温速率升至250℃，进样时间为3min，进样流速为3ml/min。

上述步骤B中，设置气相色谱部分为Hp-innowax毛细色谱柱(60m×0.25mm×0.25um)，载气为高纯氦气(纯度≧99.999％)，进样结束后保持恒流，流速为1ml/min；升温程序为初始温度为60℃，保持5min，以4℃/min的速率升至250℃，保持15min；设置三重四极杆质谱部分为电离模式；电子轰击能，能量为70ev；四极杆温度为150℃，离子源温度为280℃，辅助通道加热温度为250℃；M1scan模式，扫描范围m/z为35-350，驻留时间300ms。

上述步骤C中，所述标准曲线由下述方法得到：

a.将挥发性酚类物质的标准品用52％乙醇水溶液稀释成不同浓度梯度的标样溶液；

b.选择对应稳定同位素内标，配制成稳定同位素内标溶液；

c.在不同浓度梯度的标样溶液中加入稳定同位素内标溶液；

d.通过大体积直接进样-气相色谱-三重四极杆质谱联用仪，利用dMRM模式采集信号，以标准品与稳定同位素内标的响应比为纵坐标，标准品与稳定同位素内标的浓度比为横坐标，绘制标准曲线。

下面通过实际的例子对本发明的技术方案和效果做进一步的说明。

实施例

本发明提供三组采用本发明方法检测原位测定白酒中挥发性酚类物质的实施例1-3，具体实验过程如下。

主要仪器：

多功能前处理平台：MPS Robotic pro,德国Gerstel；气相色谱-三重四极杆质谱联用仪：8890GC-7000D，配置有多功能进样口(MMI进样口)，美国安捷伦；电子天平：LA-400分析天平(精度0.1mg)，美国美国Cole-Parmer；色谱柱：HP-INNOWax(60m×0.25mm×0.25mm)，美国安捷伦；进样口衬管：不分流衬管，5190-5112，美国安捷伦。

主要试剂与材料：

苯酚、对甲酚、愈创木酚、4-乙基愈创木酚、4-甲基愈创木酚、4-乙基苯酚和2,6-二甲基苯酚购于日本梯希爱公司；间甲酚、邻甲酚和丁香酚购于美国西格玛奥德里齐公司；愈创木酚-3,4,5,6-d4、2,6-二甲基苯酚-3,4,5-d3、4-甲基愈创木酚-3,5,6-d3、2-甲基苯酚-d3、苯酚-2,4，6-d3、4-甲基苯酚-d3、3-甲基苯酚-d7、4-乙基苯酚-d10购于加拿大CDN公司；色谱级乙醇、色谱级甲醇购于美国西格玛奥德里齐公司；Tenax TA填料(60/80mesh)购于美国色谱科；实验室专用水∶超纯水(Mi1li-Q系统,Mi1lipore,Badford,MA,USA)煮沸5-10分钟冷却。五粮液来自宜宾五粮液股份有限公司；茅台酒、汾酒购自于网络酒类销售平台。

一、大体积进样-捕集衬管的制作

在安捷伦的不分流衬管(5190-5112)中加入20mg的Tenax TA填料(60/80mesh,Supelco,USA)，之后填入100mg的去活玻璃毛，并将填料塞进。装好的衬管用甲醇清洗3次，晾干后放入进样口，进行老化。老化过程进样口温度设置为300℃，分流模式，分流比为200:1，色谱柱柱流速为1ml/min。老化1h后，衬管可进行使用。

二、标准曲线的制作

(1)配制混合标准品

将10种挥发性酚类物质的标准品用色谱级乙醇配制成一定浓度的储备液，然后将储备液用52％vol乙醇水溶液稀释成不同浓度梯度的混合标样溶液。

(2)稳定同位素内标物的选择与配制

本发明定量方法主要针对白酒中10种挥发性酚类风味物质。为保证定量方法的准确性，选择了这些物质对应的稳定同位素作为内标，没有稳定同位素的物质采用结构性质相似的物质作为内标，具体内标选择情况见表2。将选定的稳定同位素内标用色谱级乙醇分别配制为浓度约10000mg/L的储备液，再将各内标物混合，稀释至每种内标的含量均为1mg/L，作为混合内标使用。

表2目标化合物与稳定同位素内标对应表

序号	化合物	对应的稳定同位素内标
			1	愈创木酚	愈创木酚-3,4,5,6-d4
2	2,6-二甲基苯酚	2，6-二甲基苯酚-3,4,5-d3
			3	4-甲基愈创木酚	4-甲基愈创木酚-3,5,6-d3
4	2-甲基苯酚	2-甲基苯酚-d3
			5	苯酚	苯酚-2,4,6-d3
6	4-乙基愈创木酚	4-甲基愈创木酚-3,5,6-d3
			7	4-甲基苯酚	4-甲基苯酚-d3
8	3-甲基苯酚	3-甲基苯酚-d7
			9	丁香酚	4-乙基苯酚-d10
10	4-乙基苯酚	4-乙基苯酚-d10

(3)标准曲线的绘制

各取不同浓度梯度的混合标样溶液1ml，放入2ml样品瓶中，加入20μL混合稳定同位素内标溶液，采用大体积直接进样-气相色谱-三重四极杆质谱联用仪，通过dMRM模式进行检测分析(见图3)。

进样方式采用溶剂放空模式，进样量20μL，进样速度0.3μL/s，放空流量250ml/min，放空时间1min，放空压力3psi，进样口初始温度50℃，保持1min，以600℃/min的升温速率升至250℃，进样时间为2.5min，进样流速为1ml/min。

气相色谱条件：Hp-innowax毛细色谱柱(60m×0.25mm×0.25um),载气为高纯氦气(纯度≧99.999％)，进样结束后保持恒流，流速为1ml/min，；升温程序为初始温度为60℃，保持5min，以4℃/min的速率升至250℃，保持15min。

三重四极杆串联质谱检测条件：电离模式；电子轰击能，能量为70ev；四极杆温度为150℃，离子源温度为280℃，辅助通道加热温度为250℃；碰撞气为高纯氮气(纯度≧99.999％)，流速为2.5ml/min；动态多反应监测模式(dMRM)。

10种酚类物质和8种同位素采用表3中的质谱特征离子对、碰撞电压和驻留时间进行分析。以标准品与稳定同位素内标的响应比为纵坐标，标准品与稳定同位素内标的浓度比为横坐标，绘制标准曲线(如图4-图13)，各项参数见表4。

表310种酚类物质与8种稳定同位素内标的dMRM参数

表4原位测定白酒中挥发性酚类物质定量方法的检出限、定量限及线性参数

化合物	检出限	定量限	线性范围	线性相关系数R<sup>2</sup>
					愈创木酚	0.03μg/L	0.11μg/L	1-500μg/L	0.9998
2,6-二甲基苯酚	0.06μg/L	0.20μg/L	1-500μg/L	0.9999
					4-甲基愈创木酚	0.05μg/L	0.17μg/L	1-500μg/L	0.9999
邻甲酚	0.08μg/L	0.28μg/L	1-500μg/L	0.9999
					苯酚	0.04μg/L	0.14μg/L	1-500μg/L	0.9996
4-乙基愈创木酚	0.03μg/L	0.10μg/L	1-500μg/L	0.9994
					对甲酚	0.04μg/L	0.15μg/L	1-1000μg/L	0.9995
间甲酚	0.04μg/L	0.13μg/L	1-500μg/L	0.9996
					4-乙基苯酚	0.05μg/L	0.17μg/L	1-500μg/L	0.9995
丁香酚	0.20μg/L	0.66μg/L	1-500μg/L	0.9999

三、实施例1-3白酒中挥发性酚类化合物含量的测定

实施例1-3分别测定了五粮液(浓香型)、茅台(酱香型)、汾酒(清香型)三种香型代表性品牌白酒中的挥发性酚类物质，具体步骤为：

A.实施例1采用大体积进样捕集衬管将1ml五粮液酒样，放入2ml样品瓶中，加入20μL混合稳定同位素内标溶液，采用大体积直接进样至气相色谱-三重四极杆质谱联用仪；

实施例2采用大体积进样捕集衬管将1ml茅台酒样，放入2ml样品瓶中，加入20μL混合稳定同位素内标溶液，采用大体积直接进样至气相色谱-三重四极杆质谱联用仪；

实施例3采用大体积进样捕集衬管将1ml汾酒酒样，放入2ml样品瓶中，加入20μL混合稳定同位素内标溶液，采用大体积直接进样至气相色谱-三重四极杆质谱联用仪；

进样方式采用溶剂放空模式，进样量20μL，进样速度0.3μL/s，放空流量250ml/min，放空时间1min，放空压力3psi，进样口初始温度50℃，保持1min，以600℃/min的升温速率升至250℃，进样时间为2.5min，进样流速为1ml/min。

B.通过dMRM模式进行检测分析，分别得到三个酒样中挥发性酚类化合物的响应值；

气相色谱条件：Hp-innowax毛细色谱柱(60m×0.25mm×0.25um)，载气为高纯氦气(纯度≧99.999％)，进样结束后保持恒流，流速为1ml/min；升温程序为初始温度为60℃，保持5min，以4℃/min的速率升至250℃，保持15min。

三重四极杆串联质谱检测条件：电离模式；电子轰击能，能量为70ev；四极杆温度为150℃，离子源温度为280℃，辅助通道加热温度为250℃；碰撞气为高纯氮气(纯度≧99.999％)，流速为2.5ml/min；

C.根据样品中目标物质与对应稳定同位素内标的响应比，对照标准曲线计算得到白酒中挥发性酚类物质的含量，结果如表5所示，实施例1-3中挥发性酚类化合物的色谱图如图14-16所示。

表5实施例1-3白酒中挥发性酚类化合物的含量

注：nd表示未检测到。

四、回收率与精密度测定

为了验证定量检测结果的可靠性，进行了回收率与精密度的测定。

(1)回收率的测定

对实施例1-3所选酒样进行测定，定量其挥发性酚类物质的含量(重复测定5次)。在三种香型白酒中分别设置三个不同浓度的标准物混合液，使试样的浓度分别增加10μg/L、50μg/L、100μg/L，并对各个加标样进行测定(重复5次)。回收率通过以下公式计算：加标回收率＝(加标试样测定值－试样测定值)÷加标量×100％。检测结果如表6所示。

表6实施例1-3的回收率

(2)精密度的测定

选择实施例1酒样为试样酒，分别加入三个不同浓度的标准物混合液，使试样的浓度分别增加10μg/L、50μg/L、100μg/L。根据连续重复测定10次这些试样酒样的挥发性酚类物质，并根据分析结果计算相对标准偏差，表示方法的日内准确性；连续5天在同一时间段分析三个浓度酒样3次，根据计过计算相对标准偏差，表示方法的日间准确性。结果如表7所示。

表7实施例1的精密度

五、大体积进样捕集衬管的优势

为展示本发明设计的大体积进样捕集衬管的优势，本发明将制作的衬管与传统大体积进样的衬管(5190-2297，安捷伦)进行了比较。

(1)实验样品

在1ml第八代五粮液(52％vol)中加入20μL浓度为1000μg/L10种酚类化合物混合标准品，作为实验样品，用于两种衬管的对比实验。

(2)大体积进样条件

进样方式采用溶剂放空模式，进样量20μL，进样速度0.3μL/s，放空流量250ml/min，放空时间1min，放空压力3psi，进样口初始温度50℃，保持1min，以600℃/min的升温速率升至250℃，进样时间为2.5min，进样流速为1ml/min。

(3)气相色谱-三重四极杆质谱条件

气相色谱：Hp-innowax毛细色谱柱(60m×0.25mm×0.25um)，载气为高纯氦气(纯度≧99.999％)，进样结束后保持恒流，流速为1ml/min，；升温程序为初始温度为60℃，保持5min，以4℃/min的速率升至250℃，保持15min。

三重四极杆质谱条件：电离模式；电子轰击能，能量为70ev；四极杆温度为150℃，离子源温度为280℃，辅助通道加热温度为250℃；M1scan模式，扫描范围m/z为35-350，驻留时间300ms。

(4)结果

检测结果如表8所示。

表8两种衬管的对比

由表8可知，采用本发明制作的大体积进样捕集衬管获得的10种酚类化合物的定量离子响应值与信噪比均显著高于传统大体积进样衬管；其中4-乙基愈创木酚差异最大，是传统大体积进样衬管的33倍。说明本发明制作衬管能显著增加酚类化合物分析灵敏度，更适用于与大体积直接进样的分析手段。

Claims (10)

1.原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，其特征在于：通过大体积直接进样技术与气相色谱-三重四极杆串联质谱法相结合测定白酒中的挥发性酚类物质；

所述大体积直接进样技术采用大体积进样捕集衬管，所述大体积进样捕集衬管为体积800-900μL，内径4mm的气相色谱去活不分流衬管，在衬管底部依次填装有20-100mg的多孔聚合物吸附剂，以及适量的防止多孔聚合物吸附剂被吹出的去活玻璃毛。

2.根据权利要求1所述的原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，其特征在于：所述气相色谱去活不分流衬管底部有砂芯或去活玻璃毛。

3.根据权利要求1所述的原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，其特征在于：所述多孔聚合物吸附剂为TenaxTA填料，粒径为60-80目。

4.根据权利要求1所述的原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，其特征在于：所述去活玻璃毛的填装量为100-200mg。

5.根据权利要求1所述原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，其特征在于：所述大体积进样捕集衬管的制备方法为：将多孔聚合物吸附剂和去活玻璃毛依次填装进气相色谱去活不分流衬管底部，然后用甲醇清洗2-4次并晾干，放入进样口进行老化后，得到大体积进样捕集衬管。

6.根据权利要求5所述原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，其特征在于：所述老化为设置进样口温度为280-300℃，分流模式，分流比为100-200∶1，色谱柱柱流速为1ml/min，老化时间1-2h。

7.根据权利要求1所述的原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，其特征在于包括如下步骤：

A.采用大体积进样捕集衬管将酒样通过大体积直接进样至气相色谱-三重四极杆质谱联用仪；

B.通过dMRM模式进行检测分析，得到样品中挥发性酚类化合物的响应值；

C.根据样品中目标物质与对应稳定同位素内标的响应比，对照标准曲线计算得到白酒中挥发性酚类物质的含量。

8.根据权利要求7所述的原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，其特征在于：步骤A中，设置大体积直接进样的参数为进样量5-20uL，进样速度0.3-1ul/s，放空流量150-250ml/min，放空时间0.5-1min，放空压力3-5psi，进样口初始温度40-60℃，保持0.5-1min，以600℃/min的升温速率升至250-260℃，进样时间为2-3min，进样流速为2-3ml/min。

9.根据权利要求7所述的原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，其特征在于：步骤B中，设置气相色谱部分为Hp-innowax毛细色谱柱，载气为高纯氦气，进样结束后保持恒流，流速为1-2ml/min；升温程序为初始温度40-60℃，保持5min，以4-5℃/min的速率升至250℃，保持10-15min；设置三重四极杆质谱部分为电离模式；电子轰击能，能量为70ev；四极杆温度为150℃，离子源温度为280℃，辅助通道加热温度为250-260℃；M1scan模式，扫描范围m/z为35-350，驻留时间300ms。

10.根据权利要求7所述的原位测定白酒中挥发性酚类物质的方法，其特征在于：步骤C中，所述标准曲线由下述方法得到：

a.将挥发性酚类物质的标准品用52％乙醇水溶液稀释成不同浓度梯度的标样溶液；

b.选择对应稳定同位素内标，配制成稳定同位素内标溶液；

c.在不同浓度梯度的标样溶液中加入稳定同位素内标溶液；

d.通过大体积直接进样-气相色谱-三重四极杆质谱联用仪，利用dMRM模式采集信号，以标准品与稳定同位素内标的响应比为纵坐标，标准品与稳定同位素内标的浓度比为横坐标，绘制标准曲线。

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