CN115014835A - 一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，涉及显微组织切片技术领域，配置10ml固定剂(75％OCT+25％无菌水)待用，准备高压灭菌镊子、刀片、无RNA酶的离心管、培养皿、包埋盒，选择长势良好的大白菜植株，将外叶切除，保留中间部分，包含长度约0.5cm的幼叶及叶原基包裹的顶端分生组织；将根部切除，保留下部2mm左右的胚轴，将此部分白菜组织浸泡在装有10ml 75％OCT的离心管中，置于冰上，抽真空10min以固定组织。本发明解决了现有技术因固定液含有乙醇导致的植物组织活性丧失的问题，同时克服了白菜组织含水量大，易形成冰晶，难以保持组织结构完整的问题，保证了样品中RNA不被降解，为大白菜茎尖组织结构观察及后续相关转录组学研究提供了强有力的保障。

Description

一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法
技术领域
本发明涉及显微组织切片技术领域，尤其涉及一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法。
背景技术
大白菜属于十字花科芸苔属植物，原分布于中国华北地区，现于中国各地区广泛栽培。大白菜主要以结球叶片做为食用器官，叶球营养丰富，既可作炒食也可生食、腌制，亦可作家禽家畜的饲料，同时还有药用价值。大白菜茎尖组织结构复杂，包含顶端分生组织、叶原基、幼叶等，是研究大白菜叶片发育及叶球形成的关键部位。因此，制备茎尖组织细胞结构完整、RNA等大分子保存完好的切片，将为观察茎尖细胞结构，开展后续分子生物学研究，改良作物分子遗传，提供良好基础。
常见的植物组织切片方法包括徒手切片法，但该方法制作出的切片较为粗糙，厚度不均，容易损伤植物组织；其次有石蜡切片法，该方法操作步骤复杂繁琐、制作周期长，容易对植物组织材料造成损伤，染色过程涉及脱蜡入水、抗原修复等较为复杂繁琐。而冷冻切片不同于以上两种方法，较之徒手切片，它的成片质量更高，较之石蜡切片，它的制作步骤更加简单、易操作，制作周期更短，而且能够减少对植物组织的损伤，保持植物细胞的抗原活力和酶活，适合对新鲜植物组织的制片。但是，不同的制片方法制作出的植物组织冷冻切片的成片效果各不相同制备方法存在差异。现有的冷冻切片制作过程中所采用的固定液多为酒精、二甲苯一类的有机溶剂制作而成，容易造成植物组织抗原活性和各种酶活性的丧失，且大白菜组织冰冻时组织内水份多，容易形成冰晶，造成组织破碎，成片不完整，因此为了更好地保证白菜组织结构的完整，亟需一种能完整表现白菜组织结构的切片的方法来改变这一现状。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法。其优点在于解决了现有技术因固定液含有乙醇导致的植物组织活性丧失的问题，同时克服了白菜组织含水量大，易形成冰晶，难以保持组织结构完整的问题，保证了RNA不被降解，为白菜组织结构研究及后续高通量转录组学等分子实验提供了强有力的保障。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：配置10ml固定剂(75％OCT+25％无菌水)待用，准备高压灭菌镊子、刀片、无RNA酶的离心管、培养皿、包埋盒；
步骤二：选择长势良好的大白菜植株：将外叶切除，保留中间部分，包含长度约0.5cm的幼叶及叶原基包裹的顶端分生组织；将根部切除，保留下部2mm左右的胚轴，将此部分白菜组织浸泡在装有10ml75％OCT的离心管中，置于冰上，抽真空10min以固定组织；
步骤三：取一次性培养皿，向培养皿中放入5-10ml的100％OCT包埋剂备用。用镊子将固定后的大白菜茎尖组织小心地从离心管中取出，放入培养皿中包裹一层100％OCT。在白菜组织被OCT完全包裹后，使用镊子等尖锐物品将白菜组织周围的气泡挑出，室温下静置5min。将100％OCT包埋剂覆盖包埋盒底层，用镊子轻轻将培养皿中的白菜组织取出，缓慢放入底层覆盖了包埋剂的包埋盒后，再次向包埋盒中加入100％OCT包埋剂，覆盖白菜组织，调整样品在包埋盒中位置后，然后去除包埋剂中样品周围的气泡，室温下静置1h。然后，调整组织在包埋盒中的位置，并再次察看样品周围气泡情况，并将其挑出。将调整好的包埋盒放置于干冰粉上凝固，待OCT由透明转变为完全不透明的白色后取出包埋盒并作好样品信息标记；
步骤四：调试冷冻切片机，固定切片使用的刀片，使用100％OCT将样品包埋块固定在样品托上。然后，将固定在样品托上的白菜组织与刀片平行方向放置，调整好样品与刀片之间的距离，设定切片厚度为20um,开始切片。切片时，切片速度选择“慢切”，将切下的切片吸附在粘附性载玻片上并标记好样品信息。注意：切片应置于切片机内，使其保持低温冷冻状态，减少切片样品的失水，等待后续操作；
步骤五：样品切片制备完成后，将从切片机中取出，置于室温条件下，待载玻片上的样品切片由白色转为透明时，使用显微镜进行观察，并拍照记录下样品切片图像。
本发明进一步设置为，所述固定剂由7.5ml的lO0％OCT和2.5ml的蒸馏水配制而成。使用75％的OCT试剂作为包埋剂，处理白菜样品，避免常规固定剂对样品组织活性的伤害。
本发明进一步设置为，在将样品放入包埋盒之前，使用100％OCT先对样品进行包裹，减少后续包埋过程中气泡进入样品的机率。在后续过程中，及时将白菜组织周围的气泡挑出，并尤其注意茎尖分生组织部位的气泡需要仔细挑出。
本发明进一步设置为，先使用100％OCT包埋剂覆盖包埋盒底层(尽量不要产生气泡)，可防止样品在包埋后裸露在冷冻模块外，并且对包埋盒做好标记，以便分清方向。
本发明进一步设置为，在使用OCT包埋剂时，将包埋剂瓶身平放，一次性将所有包埋盒底部都覆盖上OCT，防止包埋剂瓶身反复挤压，减少包埋剂瓶中的气泡，从而减少包埋盒中的气泡。
本发明进一步设置为，在样品托上涂上100％OCT时，通过增加切面面积，将更有利于样品切割，获得完成的样品切片。
本发明进一步设置为，切下来的样品切片吸附在粘附性载玻片上时，应注意载玻片不能过冷，否则会影响样品吸附性。
本发明的有益效果为：
本发明制备的白菜组织冷冻切片操作流程简单、制作周期短，切出的成片厚度均匀、结构清晰，采用75％OCT真空的方法对白菜组织进行固定，解决了现有技术因固定液含有乙醇导致的植物组织活性丧失的问题，同时克服了白菜组织含水量大，易形成冰晶，难以保持组织结构完整的问题，保证了RNA不被降解，为白菜组织结构研究及后续高通量转录组学等分子实验提供了强有力的保障。
附图说明
图1为本发明提出的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法的制备流程结构示意图；
图2为本发明提出的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法的选取的白菜苗结构示意图；
图3为本发明提出的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法的包裹在包埋盒中的白菜组织放置正面和侧面示意图；
图4为本发明提出的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法的吸附在载玻片上的白菜组织冷冻切片结构示意图；
图5为本发明实施例1提出的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法的白菜组织切片显微图像结构示意图；
图6为本发明实施例1中提出的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法的白菜组织中RNA质量检测结果。经过本方法固定、包埋的组织样品中可提取高质量的RNA。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
下面详细描述本专利的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利，而不能理解为对本专利的限制。
在本专利的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利的限制。
在本专利的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“设置”应做广义理解，例如，可以是固定相连、设置，也可以是可拆卸连接、设置，或一体地连接、设置。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本专利中的具体含义。
参照图1-5，一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，包括以下步骤：
步骤一：配置10ml固定剂(75％OCT+25％无菌水)待用，准备高压灭菌镊子、刀片、无RNA酶的离心管、培养皿、包埋盒；
步骤二：选择长势良好的大白菜植株：将外叶切除，保留中间部分，包含长度约0.5cm的幼叶及叶原基包裹的顶端分生组织；将根部切除，保留下部2mm左右的胚轴，将此部分白菜组织浸泡在装有10ml75％OCT的离心管中，置于冰上，抽真空10min以固定组织；
步骤三：取一次性培养皿，向培养皿中放入5-10ml的100％OCT包埋剂备用。用镊子将固定后的大白菜茎尖组织小心地从离心管中取出，放入培养皿中包裹一层100％OCT。在白菜组织被OCT完全包裹后，使用镊子等尖锐物品将白菜组织周围的气泡挑出，室温下静置5min。将100％OCT包埋剂覆盖包埋盒底层，用镊子轻轻将培养皿中的白菜组织取出，缓慢放入底层覆盖了包埋剂的包埋盒后，再次向包埋盒中加入100％OCT包埋剂，覆盖白菜组织，调整样品在包埋盒中位置后，然后去除包埋剂中样品周围的气泡，室温下静置1h。然后，调整组织在包埋盒中的位置，并再次察看样品周围气泡情况，并将其挑出。将调整好的包埋盒放置于干冰粉上凝固，待OCT由透明转变为完全不透明的白色后取出包埋盒并作好样品信息标记；
步骤四：调试冷冻切片机，固定切片使用的刀片，使用100％OCT将样品包埋块固定在样品托上。然后，将固定在样品托上的白菜组织与刀片平行方向放置，调整好样品与刀片之间的距离，设定切片厚度为20um,开始切片。切片时，切片速度选择“慢切”，将切下的切片吸附在粘附性载玻片上并标记好样品信息。注意：切片应置于切片机内，使其保持低温冷冻状态，减少切片样品的失水，等待后续操作；
步骤五：样品切片制备完成后，将从切片机中取出，置于室温条件下，待载玻片上的样品切片由白色转为透明时，使用显微镜进行观察，并拍照记录下样品切片图像。
在本实施例中，固定剂由7.5ml的lO0％OCT和2.5ml的蒸馏水配制而成。使用75％的OCT试剂作为包埋剂，处理白菜样品，避免常规固定剂对样品组织活性的伤害。
在本实施例中，在将样品放入包埋盒之前，使用100％OCT先对样品进行包裹，减少后续包埋过程中，气泡进入样品的机率。在后续过程中，及时将白菜组织周围的气泡挑出，并尤其注意茎尖分生组织部位的气泡需要仔细挑出。
在本实施例中，先使用100％OCT包埋剂覆盖包埋盒底层(尽量不要产生气泡)，可防止样品在包埋后裸露在冷冻模块外，并且对包埋盒做好标记，以便分清方向。
在本实施例中，在使用OCT包埋剂时，将包埋剂瓶身平放，一次性将所有包埋盒底部都覆盖上OCT，防止包埋剂瓶身反复挤压，减少包埋剂瓶中的气泡，从而减少包埋盒中的气泡。
在本实施例中，在样品托上涂上100％OCT时，通过增加切面面积，将更有利于样品切割，获得完成的样品切片。
在本实施例中，切下来的样品切片吸附在粘附性载玻片上时，应注意载玻片不能过冷，否则会影响样品吸附性。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：固定液制备和材料准备
配置10ml固定剂(75％OCT+25％无菌水)待用，准备高压灭菌镊子、刀片、无RNA酶的离心管、培养皿、包埋盒；
步骤二：取材固定
选择长势良好的大白菜植株：将外叶切除，保留中间部分，包含长度约0.5cm的幼叶及叶原基包裹的顶端分生组织；将根部切除，保留下部2mm左右的胚轴，将此部分白菜组织浸泡在装有10ml 75％OCT的离心管中，置于冰上，抽真空10min以固定组织；
步骤三：包埋
取一次性培养皿，向培养皿中放入5-10ml的100％OCT包埋剂备用。用镊子将固定后的大白菜茎尖组织小心地从离心管中取出，放入培养皿中包裹一层100％OCT。在白菜组织被OCT完全包裹后，使用镊子等尖锐物品将白菜组织周围的气泡挑出，室温下静置5min。将100％OCT包埋剂覆盖包埋盒底层，用镊子轻轻将培养皿中的白菜组织取出，缓慢放入底层覆盖了包埋剂的包埋盒后，再次向包埋盒中加入100％OCT包埋剂，覆盖白菜组织，调整样品在包埋盒中位置后，然后去除包埋剂中样品周围的气泡，室温下静置1h。然后，调整组织在包埋盒中的位置，并再次察看样品周围气泡情况，并将其挑出。将调整好的包埋盒放置于干冰粉上凝固，待OCT由透明转变为完全不透明的白色后取出包埋盒并作好样品信息标记；
步骤四：切片
调试冷冻切片机，固定切片使用的刀片，使用100％OCT将样品包埋块固定在样品托上。然后，将固定在样品托上的白菜组织与刀片平行方向放置，调整好样品与刀片之间的距离，设定切片厚度为20um,开始切片。切片时，切片速度选择“慢切”，将切下的切片吸附在粘附性载玻片上并标记好样品信息。注意：切片应置于切片机内，使其保持低温冷冻状态，减少切片样品的失水，等待后续操作；
步骤五：展片与观察
样品切片制备完成后，将从切片机中取出，置于室温条件下，待载玻片上的样品切片由白色转为透明时，使用显微镜进行观察，并拍照记录下样品切片图像。
2.根据权利要求1所述的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，其特征在于，所述固定剂由7.5mlO0％的OCT和2.5ml蒸馏水配制而成。
3.根据权利要求2所述的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，其特征在于，在将样品放入包埋盒之前，使用100％OCT先对样品进行包裹，减少后续包埋过程中，气泡进入样品的机率。
4.根据权利要求3所述的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，其特征在于，先使用100％OCT包埋剂覆盖包埋盒底层(尽量不要产生气泡)，可防止样品在包埋后裸露在冷冻模块外，并且对包埋盒做好标记，以便分清方向。
5.根据权利要求4所述的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，其特征在于，在使用OCT包埋剂时，将包埋剂瓶身平放，一次性将所有包埋盒底部都覆盖上OCT，防止包埋剂瓶身反复挤压，减少包埋剂瓶中的气泡，从而减少包埋盒中的气泡。
6.根据权利要求5所述的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，其特征在于，在样品托上涂上100％OCT时，通过增加切面面积，将更有利于样品切割，获得完成的样品切片。
7.根据权利要求6所述的一种大白菜茎尖冷冻切片的制备方法，其特征在于，切下来的样品切片吸附在粘附性载玻片上时，应注意载玻片不能过冷，否则会影响样品吸附性。
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Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004205246A (ja) * 2002-12-24 2004-07-22 Kanebo Ltd シミの状況分析方法およびシミに対する効能評価方法
JP2011209067A (ja) * 2010-03-29 2011-10-20 Mayekawa Mfg Co Ltd 氷結晶観察用試料作製方法
JP2012042414A (ja) * 2010-08-23 2012-03-01 Kyushu Univ 組織標本の凍結方法及び保存方法
US20140053664A1 (en) * 2012-07-24 2014-02-27 Cryoxtract Instruments, Llc Apparatus and methods for aliquotting frozen samples
US20150093335A1 (en) * 2012-01-19 2015-04-02 Institute Of Geology And Geophysics, Chinese Academy Of Sciences Cell-targeted magnetic nano-material and biomedical uses thereof
JP2015072212A (ja) * 2013-10-03 2015-04-16 学校法人慶應義塾 凍結切片作製方法
US20170108414A1 (en) * 2015-10-20 2017-04-20 University Of Washington High-resolution three-dimensional imaging of mammalian hearts
CN108037147A (zh) * 2017-11-29 2018-05-15 云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所 一种用于同步辐射x射线荧光微分析的植物根部冷冻切片制作方法
CN110926851A (zh) * 2019-11-15 2020-03-27 华南农业大学 一种获取木本植物维管形成层的方法及其应用
CN114295444A (zh) * 2021-12-30 2022-04-08 河南大学 一种用于桃果实组织空间转录组学分析的冰冻切片方法

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004205246A (ja) * 2002-12-24 2004-07-22 Kanebo Ltd シミの状況分析方法およびシミに対する効能評価方法
JP2011209067A (ja) * 2010-03-29 2011-10-20 Mayekawa Mfg Co Ltd 氷結晶観察用試料作製方法
JP2012042414A (ja) * 2010-08-23 2012-03-01 Kyushu Univ 組織標本の凍結方法及び保存方法
US20150093335A1 (en) * 2012-01-19 2015-04-02 Institute Of Geology And Geophysics, Chinese Academy Of Sciences Cell-targeted magnetic nano-material and biomedical uses thereof
US20140053664A1 (en) * 2012-07-24 2014-02-27 Cryoxtract Instruments, Llc Apparatus and methods for aliquotting frozen samples
JP2015072212A (ja) * 2013-10-03 2015-04-16 学校法人慶應義塾 凍結切片作製方法
US20170108414A1 (en) * 2015-10-20 2017-04-20 University Of Washington High-resolution three-dimensional imaging of mammalian hearts
CN108037147A (zh) * 2017-11-29 2018-05-15 云南省农业科学院质量标准与检测技术研究所 一种用于同步辐射x射线荧光微分析的植物根部冷冻切片制作方法
CN110926851A (zh) * 2019-11-15 2020-03-27 华南农业大学 一种获取木本植物维管形成层的方法及其应用
CN114295444A (zh) * 2021-12-30 2022-04-08 河南大学 一种用于桃果实组织空间转录组学分析的冰冻切片方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TADAFUMI KAWAMOTO: "Use of a new adhesive film for the preparation of multi-purpose fresh-frozen sections from hard tissues, whole-animals, insects and plants", 《ARCH HISTOL CYTOL》 *
陈雪平等: "茄子雄性不育系花粉败育的细胞学观察", 《植物遗传资源学报》 *

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