CN105890919A - 一种玉米初生根组织冰冻切片方法 - Google Patents

一种玉米初生根组织冰冻切片方法 Download PDF

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徐洪伟
周晓馥
杜丰平
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    • G01N1/06—Devices for withdrawing samples in the solid state, e.g. by cutting providing a thin slice, e.g. microtome
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    • G01N1/42—Low-temperature sample treatment, e.g. cryofixation

Abstract

本发明涉及一种玉米初生根组织冰冻切片方法，包括以下步骤：①、取材：将玉米种子用75%酒精消毒1 min，去离子水冲洗3次，黑暗条件中催芽，待种子露白后正常光条件下培养至7d，得新鲜的植物材料；②、包埋：将①中新鲜的植物材料徒手切片成2 cm，用包埋剂将其固定9 min后至于冷冻台上；③、切片：将②中冷冻后的样品放置到冷冻切片机上，将冷冻切片机上的切片厚度调至50μm，用样品快进按钮将样品移近刀口开始修片，修好后放下防卷板切片；④、展片和观察：将③中的切片挑到载玻片上，用蒸馏水洗干净，在洗净后切片上滴加一滴10%甘油，转移到显微镜下10倍观察。该方法可以解决植物组织化学、免疫定位和原位杂交等研究中切片组织难以完整获得的难题。

Description

一种玉米初生根组织冰冻切片方法
技术领域
本发明涉及能在植物组织中进行组织化学切片分析的方法，具体涉及一种玉米初生根组织冰冻切片方法。
背景技术
目前常规的植物切片技术可分为三种：徒手切片技术、石蜡切片技术和冷冻切片技术。徒手切片法是直接利用手拿刀片将植物新鲜材料切成薄片，制成切片的一种方法。但徒手切片质量不高，对材料有较高的要求。石蜡切片技术制作过程各步骤所需时间过长(一周左右)，易对植物组织造成损伤，并不适用于植物幼嫩组织。与上述两种常规的切片方法相比，冰冻切片具有快速、简便、易操作等特点，且有利于进行如免疫定位和原位杂交的研究。冷冻切片法的原理是将组织放在一定温度下冻结，当材料凝固后，再进行切片。冷冻切片法因其不经过脱水和透明等步骤，可以缩短石蜡切片缓慢而复杂的处理过程，具有快速，简便且易操作等的特点。同时冷冻切片技术可减少对样品组织结构的损伤，更好地保存生物分子的活性。
采用常规的冷冻切片法对玉米初生根组织切片存在切片制备不完整、切片厚度不均匀等问题。本发明与现有的技术相比，找到了一种玉米初生根组织冰冻切片方法，制备的切片完整、无褶皱、切片薄、厚度均匀，镜下结果清晰。
发明内容
本发明的目的在于提供一种玉米初生根组织冰冻切片方法，该方法可以解决植物组织化学、免疫定位和原位杂交等研究中切片组织难以完整获得的难题。
本发明的目的是这样实现的，该切片方法包括以下步骤：
①、取材：选取长势饱满的玉米种子，将玉米种子用75%酒精消毒 1 min后，去离子水冲洗3次，转移到人工智能气候培养箱黑暗条件中催芽，待种子露白后置于人工智能气候培养箱正常光条件下培养至7d，得新鲜的植物材料；所述人工智能气候培养箱条件：温度25℃、湿度60%、光周期：光照：黑暗=8h:16h；
②、包埋：启动冷冻切片机将冷台温度调至-17℃，样品头温度调至-15℃，将①中新鲜的植物材料徒手切片成 2 cm，用包埋剂将其固定 9 min后至于冷冻台上，制备冷冻样品；
③、切片：将②中冷冻后的样品放置到冷冻切片机的样品头上，将冷冻切片机上的切片厚度调至50μm，用样品快进按钮将样品移近刀口，调整要切的平面，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷板切片，切片时需注意用力均匀；
④、展片和观察：用毛笔轻轻将③中的切片挑到载玻片上，用蒸馏水将切片上包埋液清洗干净，在洗净后切片上滴加一滴10%甘油，转移到显微镜下10倍观察，所获得的玉米初生根冷冻切片解剖结构完整清晰。
本发明的优点和效果是：
1、本发明方法解决了植物组织化学、免疫定位和原位杂交等研究中切片组织难以完整获得的难题。
2、本发明与现有的技术相比，找到了一种玉米初生根组织冰冻切片方法，制备的切片完整、无褶皱、切片薄、厚度均匀，镜下结果清晰。
附图说明
图1是采用本发明方法获得的玉米初生根7d冷冻切片图。
具体实施方式
下面结合实施案例对本发明作进一步说明：
①、取材：选取长势饱满的玉米种子，将玉米种子用75%酒精消毒 1 min后，去离子水冲洗3次，转移到人工智能气候培养箱黑暗条件中催芽，待种子露白后置于人工智能气候培养箱正常光条件下培养至7d，得新鲜的植物材料；所述人工智能气候培养箱条件：温度25℃、湿度60%、光周期：光照：黑暗=8h:16h；
②、包埋：启动冷冻切片机（Leica 1950，德国）将冷台温度调至-17℃，样品头温度调至-15℃，将①中新鲜的植物材料徒手切片成 2 cm，用包埋剂(Leica Tissue Freezing Medium)将其固定 9 min后至于冷冻台上，制备冷冻样品；
③、切片：将②中冷冻后的样品放置到冷冻切片机的样品头上，将冷冻切片机上的切片厚度调至50μm，用样品快进按钮将样品移近刀口，调整要切的平面，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷板切片，切片时需注意用力均匀；
④、展片和观察：用毛笔轻轻将③中的切片挑到载玻片上，用蒸馏水将切片上包埋液清洗干净，在洗净后切片上滴加一滴10%甘油，转移到显微镜下10倍观察，如附图1所示：，所获得的玉米初生根冷冻切片解剖结构完整清晰。

Claims (1)

1.一种玉米初生根组织冰冻切片方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
①、取材：选取长势饱满的玉米种子，将玉米种子用75%酒精消毒 1 min后，去离子水冲洗3次，转移到人工智能气候培养箱黑暗条件中催芽，待种子露白后置于人工智能气候培养箱正常光条件下培养至7d，得新鲜的植物材料；所述人工智能气候培养箱条件：温度25℃、湿度60%、光周期：光照：黑暗=8h:16h；
②、包埋：启动冷冻切片机将冷台温度调至-17℃，样品头温度调至-15℃，将①中新鲜的植物材料徒手切片成 2 cm，用包埋剂将其固定 9 min后至于冷冻台上，制备冷冻样品；
③、切片：将②中冷冻后的样品放置到冷冻切片机的样品头上，将冷冻切片机上的切片厚度调至50μm，用样品快进按钮将样品移近刀口，调整要切的平面，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷板切片，切片时需注意用力均匀；
④、展片和观察：用毛笔轻轻将③中的切片挑到载玻片上，用蒸馏水将切片上包埋液清洗干净，在洗净后切片上滴加一滴10%甘油，转移到显微镜下10倍观察，所获得的玉米初生根冷冻切片解剖结构完整清晰。
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