CN1149219C

CN1149219C - 治疗癌症的新化合物

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Publication number: CN1149219C
Application number: CNB998150878A
Authority: CN
Inventors: O��˹��׳�ŵ��; O·斯特雷彻诺克
Original assignee: Ardenia Investments Ltd
Current assignee: Ardenia Investments Ltd
Priority date: 1999-03-11
Filing date: 1999-12-28
Publication date: 2004-05-12
Anticipated expiration: 2019-12-28
Also published as: AU1581800A; EP1159756A2; AU766256B2; DE69932187T2; JP4643009B2; EP1159756B1; ID29246A; JP2002535251A; CN1332745A; ATE332013T1; CA2358420A1; HK1041889A1; DE69932187D1; HK1041889B; WO2000042832A3; WO2000042832A2; CA2358420C

Abstract

应用多不饱和脂肪酸的酰胺类化合物，尤其是特定组合的这类化合物与阿霉素形成复合物且可以增强抗癌药物如本申请例举的阿霉素的功效。此外，提供一种修饰形式的阿霉素。

Description

治疗癌症的新化合物

发明领域

本发明涉及适用于治疗癌症的新化合物。这些化合物增强了常规细胞毒性药物的作用。

发明背景

细胞抑制或细胞毒性化合物被广泛应用在癌症的治疗中。阿霉素是一种氨基糖苷蒽环霉素类抗生素，它被作为此类化合物的典型代表物使用。

细胞膜代表一个物理屏障并且存在一些决定阿霉素摄取速率的因素。主要因素是疏水性(其增高将使摄取速率提高)和氨基的质子化程度-pKa(其降低将导致摄入速率的增高)。阿霉素抑制细胞生长，并且对核物质具有显著作用，使核物质非特异性地加厚、凝集或破碎。阿霉素和DNA之间的主要结合力是平面发色团的嵌入作用，通过带正电氨基糖残基和DNA的带负电磷酸基的外部静电结合来稳定。

嵌入的药物分子可以防止螺旋构象的改变，螺旋构象的改变是预先引发核酸合成所必需的。阿霉素的主要致命作用是抑制核酸合成。由此，该药物更加主动地对抗分裂细胞并且在细胞周期的S期效应最高(BTown J.R.，“阿霉素和相关蒽环霉素类抗生素在：医学化学中的进展”G.P.Ellis和G.B.West编辑，Elsevier/North-HollandBiomedical Press v.15，125-164页，1978)。

某些观察坚持认为阿霉素的正电性氨基酸和磷脂(例如心肌磷脂、磷脂酰基丝氨酸、磷脂酰基肌醇和磷脂酸)的负电性磷酸基之间形成静电本质的复合体。心肌磷脂几乎是线粒体内膜的特征组成，其大量存在于心肌内。线粒体损害的发病机理是一个重要且更加特异性的亚细胞病变，是阿霉素心脏毒性所特有的。阿霉素对于线粒体的相对选择的毒性可以归因于心肌磷脂在心肌线粒体中的高浓度(Duarte-Karim M.等.《生物化学和生物物理学研究通讯》(Biochem.Biophys.Res.Comm.)71卷，2期，658-663页，1976)。

人们已经利用大量单层脂质体(LUVET)来研究阿霉素与脂质之间的相互作用，单层脂质体是由阴离子磷脂类化合物和多种两性离子型磷脂类化合物的混合物组成。用两性离子脂质稀释阴离子脂质可导致药物的膜缔合作用降低，因为静电力在阿霉素-膜的相互作用中非常重要。然而，阿霉素与由磷脂酰乙醇胺(PE)和阴离子磷脂组成的LUVET的结合比阿霉素与由阴离子脂质加多种其它两性离子脂质(如磷脂酰胆碱和PE的N-甲基乙醇胺和N，N-二甲基乙醇胺衍生物)组成的LUVET的结合作用强得多(Speelmans G等，《生物化学》(Biochemistry)36卷，28期，8657-8662页，1997)。

对于阿霉素与人体红细胞的相互作用的研究为的是测定膜结合位点和生成物结构干扰。电子显微镜揭示出，人血浆中与治疗浓度的药物一起培养的红细胞由其圆盘形改变成为胃形红细胞(stomatocyte)和钝锯齿状红细胞。该药物与分子模型一起培养。其中之一是由二肉豆蔻酰磷脂酰胆硷和二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺多层构成，它们分别是位于红细胞的外小叶和内小叶的磷脂代表。X射线衍射显示阿霉素的相互作用扰乱了这两种磷脂的极性头部和酰基链区。可推断阿霉素掺混到红细胞两种小叶内影响其膜结构(Suwalsky M.，Z Naturforsch[C]54卷，3-4期，271-277页，1999)。

二棕榈酰磷脂酰胆硷脂质体与大豆衍生的甾醇的不同物理化学性质业已被研究。脂质体阿霉素比其游离药物提高了药理学效应，据认为这是由于减小副作用并且长时间循环(Maitani Y.，YakugakuZasshi，116卷，12期，901-910页，1996)。

含有聚乙二醇衍生磷脂的脂质体能够避开网状内皮系统，由此长时间维持在循环中。包封在这些位阻空间上稳定的脂质体中的阿霉素可以抑制严重混合型免疫缺损小鼠中已建成人体肺部肿瘤异种移植物的生长，并且抑制这些肿瘤的自发转移(Sakakibara T.等人，《癌症研究》(Cancer Res.)，56卷，16期，3743-3746页，1996)。

脂质体包封可以使周围组织在皮下(s.c.)给药后免受药物的细胞毒性作用。由“流体态”磷脂组成的脂质体只能够延迟皮下注射阿霉素的损伤作用，具有更刚性的脂质体当皮下给药时可以更加有效地在较长时间内预防局部组织损伤(Oussoren C.等人.，《生物化学和生物物理学学报》(Biochim.Biophys.Acta)，1369卷，1期，159-172页，1998)。

外源性多不饱和脂肪酸可以调节抗癌药物在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231中的细胞毒活性。在试验的所有多不饱和脂肪酸中，二十二碳六烯酸在增强阿霉素细胞毒性中最为有效(E.Germain等人，《国际癌症学杂志》(Int.J.Cancer)，75卷，578-583页，1998)。

癌症的治疗势必仍然需要新的化合物和方法。本发明的目的在于提高目前所用抗癌药物如阿霉素的药理学活性，并且引入治疗癌症的新途径。

发明简述

本发明采用新的化合物和新的化合物与已知细胞毒性或细胞抑制药物一起组成的联合形式，介绍改进了的抗癌可能性。另外，本发明公开了这些化合物的合成方法，和一种细胞抑制药用化合物阿霉素的修饰形式。

发明描述

现已显示在人体乳腺癌细胞(细胞系MDA-MB-231)中脂质过氧化物的量在二十二碳六烯酸和氧化剂的存在下经阿霉素(DXR)的作用后有所升高。这可能赋予肿瘤细胞以代谢特征，由此减小其在阿霉素作用下存活的倾向。

本发明人已制备出新的全反式视黄酸或13-顺式视黄酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸和二十二碳五烯酸或亚麻酸与含磷酸基的2-氨基乙醇、α-L-丝氨酸、α-L-苏氨酸、α-L-酪氨酸的酰胺类化合物(WO-A-0047589)。本发明公开了特定化合物的用途，特别是其在提高阿霉素的药理学活性中的应用。

这些新化合物含有多不饱和脂肪酸的疏水基团、视黄酸残基和磷酸基，磷酸基具有负电荷。由此，通过脂肪酸基团或视黄酸残基与阿霉素平面发色团之间的疏水作用，以及两种化合物相反电荷官能团之间的静电作用，可实现新化合物与阿霉素两类分子之间的相互反应。

另一方面，二元复合物具有经癌细胞膜直接转运并且装配“特洛伊木马”的全部必备特性。另一方面，这些二元复合物在癌细胞的内部释放出“天然的”、带正电荷的阿霉素分子，由此为阿霉素嵌入DNA制造适宜条件。

下列1-4、1a至4a和5至20的化合物构成本发明的基础。它们已经部分公开在WO-A-0047589中。

视黄酸衍生物：

1.N-(全反式-视黄酰基)-O-磷酸-2-氨基乙醇，

1a.N-(13-顺式-视黄酰基)-O-磷酸-2-氨基乙醇，

2.N-(全反式-视黄酰基)-O-磷酸-L-丝氨酸，

2a.N-(13-顺式-视黄酰基)-O-磷酸-L-丝氨酸，

3.N-(全反式-视黄酰基)-O-磷酸-L-苏氨酸，

3a.N-(13-顺式-视黄酰基)-O-磷酸-L-苏氨酸，

4.N-(全反式-视黄酰基)-O-磷酸-L-酪氨酸，

4a.N-(13-顺式-视黄酰基)-O-磷酸-L-酪氨酸，

花生四烯酸类衍生物：

5.N-花生四烯酰基-O-磷酸-2-氨基乙醇，

6.N-花生四烯酰基-O-磷酸-L-丝氨酸，

7.N-花生四烯酰基-O-磷酸-L-苏氨酸，

8.N-花生四烯酰基-O-磷酸-L-酪氨酸，

二十二碳六烯酸类衍生物：

9.N-二十二碳六烯酰基-O-磷酸-2-氨基乙醇，

10.N-二十二碳六烯酰基-O-磷酸-L-丝氨酸，

11.N-二十二碳六烯酰基-O-磷酸-L-苏氨酸，

12.N-二十二碳六烯酰基-O-磷酸-L-酪氨酸，

二十碳五烯酸类衍生物：

13.N-二十碳五烯酰基-O-磷酸-2-氨基乙醇，

14.N-二十碳五烯酰基-O-磷酸-L-丝氨酸，

15.N-二十碳五烯酰基-O-磷酸-L-苏氨酸，

16.N-二十碳五烯酰基-O-磷酸-L-酪氨酸，

亚麻酸类衍生物：

17.N-亚麻酰基-O-磷酸-2-氨基乙醇，

18.N-亚麻酰基-O-磷酸-L-丝氨酸，

19.N-亚麻酰基-O-磷酸-L-苏氨酸，

20.N-亚麻酰基-O-磷酸-L-酪氨酸。

在下列描述和实施例中，上述化合物被称作C1-C4、C1a-C4a和C5-C20。

利用患有EAC(艾氏腹水癌)的小鼠、与单用DXR对比，进行阿霉素(DXR)和上述C1-C4、C1a-C4a和C5-C20任一化合物的复合物的抗肿瘤作用的研究。与DXR比较，用试验化合物抑制小鼠中EAC生长的程度来评价各试验DXR/化合物复合物的抗肿瘤活性。

实验已经显示，DXR和任何单独化合物(C1-C4、C1a-C4a和C5-C20)的复合物没有表现出抗肿瘤效应。特别是，在DXR/C4复合物中，化合物C4抵销了DXR的抗肿瘤作用，甚至对小鼠中EAC生长表现出某些(较小的)促进作用。在DXR/C5复合物中，化合物C5抵消了DXR的抗肿瘤作用。

然而，本发明人发现，DXR和C4或C4a与C5一起的复合物，DXR/C4(C4a)与C9的复合物，DXR/C4(C4a)与C13的复合物，和DXR/C4(C4a)与C17的复合物表现出抗肿瘤效果。

所附的系列试验结果支持了这一发现。采用下列剂量：

DXR-3.5mg/kg体重，

C4-8.15mg/kg体重，

在摩尔比C4∶C5等于1∶3、1∶2.9、1∶2.8、1∶2.7和1∶2.6时，EAC生长抑制率分别为45.0％、43.6％、46.0％、48.2％、50.4％，

在摩尔比C4∶C5等于1∶2.5、1∶2.4、1∶2.3和1∶2.2时，EAC生长抑制率分别为48.7％、51.5％、53.4％和57.0％，

在摩尔比C4∶C5等于1∶2.1、1∶2、1∶1.9和1∶1.8时，EAC生长抑制率分别为58.0％、59.5％、62.0％和65.2％。

在摩尔比C4∶C5等于1∶1.7、1∶1.6、1∶1.5和1∶1.4时，EAC生长抑制率分别是67.9％、69.1％和70.0％。

在摩尔比C4∶C5等于1∶13、1∶1.2、1∶1.1和1∶1时，EAC生长抑制率分别是69.4％、66.7％、62.5％和65.2％。

应注意，当摩尔比C4∶C5等于1∶1.7、1∶1.6、1∶1.5、1∶1.4和1∶1.3时，EAC生长抑制率(相对于DXR组，阳性对照)分别为38.8％、40.3％、42.6％、44.2％和41.1％。

DXR-3.5mg/kg体重

C5-6.4mg/kg体重

当摩尔比C4∶C5等于1∶1、1.1∶1、1.2∶1、1. 3∶1和1.4∶1时，EAC生长抑制率分别是65.2％、61.6％、66.2％、69.3％和69.8％。

当摩尔比C4∶C5等于1.5∶1、1.6∶1、1.7∶1和1.8∶1时，EAC生长抑制率分别是74.9％、78.1％、74.1％和66.4％。

当摩尔比C4∶C5等于1.9∶1、2∶1、2.1∶1和2.2∶1时，EAC生长抑制率分别是65.1％、61.8％、63.2％和58.0％。

当摩尔比C4∶C5等于2.3∶1、2.4∶1、2.5∶1和2.6∶1，EAC生长抑制率分别是55.5％、58.7％、56.7％和57.6％。

当摩尔比C4∶C5等于2.7∶1、2.8∶1、2.9∶1和3∶1时，EAC生长抑制率分别是56.6％、55.0％、50.4％和45.3％。

应当注意，当摩尔比C4∶C5等于1.3∶1、1.4∶1、1.5∶1、1.6∶1和1.7∶1时，EAC生长抑制率(相对于DXR组，阳性对照)分别为43.2％、44.1、％51.4％、57.7％和49.8％。

特别是，一些试验DXR/C4+C9类复合物、DXR/C4+C13类复合物、DXR/C4+C17类复合物、DXR/C4a+C5类复合物抗肿瘤作用的实验显示如此。

DXR/C4+C9类复合物：

DXR-3.5mg/kg体重，C4-8.15mg/kg体重。

当摩尔比C4∶C9等于1∶1、1∶1.4、1∶1.8和1∶2.3时，EAC生长抑制率分别为61.8％、67.3％、62.5％和49.7％。

当摩尔比C4∶C9等于1∶1.4时，EAC生长抑制率(相对于DXR组，阳性对照)为49.3％。

DXR/C4+C13复合物：

DXR-3.5mg/kg体重，C4-8.15mg/kg体重。

当摩尔比C4∶C1 3等于1∶1.3、1∶1.6、1∶2和1∶2.5时，EAC生长抑制率分别为67.0％、64.6％、54.2％和45.1％。

当摩尔比C4∶C13等于1∶1.3和1∶1.6时，EAC生长抑制率(相对于DXR组，阳性对照)分别为47.6％和43.8％。

DXR/C4+C17复合物：

DXR-3.5mg/kg体重，C17-6.0mg/kg体重。

摩尔比C4∶C17等于1∶1、1.4∶1、2∶1和2.7∶1时，EAC生长抑制率分别为62.9％、67.4％、60.3％和51.8％。

摩尔比C4∶C17等于1.4∶1时，EAC生长抑制率(相对于DXR组，阳性对照)为45.0％。

DXR/C4a+C5复合物：

DXR-3.5mg/kg体重，C5-6.4mg/kg体重

摩尔比C4a∶C5等于1.2∶1、1.6∶1、1.9∶1和2.5∶1时，EAC生长抑制率分别为64.4％、72.4％、62.2％和52.5％。

摩尔比C4a∶C5等于1.6∶1时，EAC生长抑制率(相对于DXR组，阳性对照)为49.4％。

本发明人业已指出DXR/(C4+C4a)+C5类复合物、DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13)类复合物、DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13+C17)类复合物具有抗肿瘤作用。有关抗肿瘤效果的实验也支持这一发现。

DXR/(C4+C4a)+C5(C4+C4a)+C5类复合物：DXR-3.5mg/kg体重

C5-6.4mg/kg体重

摩尔比(C4+C4a)∶C5等于1.2∶1、1.6∶1、1.9∶1和2.5∶1时，EAC生长抑制率分别为63.1％、71.6％、61.0％和47.3％。

摩尔比(C4+C4a)∶C5等于1.6∶1，EAC生长抑制率(相对于DXR组，阳性对照)为53.1％。

DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13)类复合物：DXR-3.5mg/kg体重

(C4+C4a)-8.15mg/kg体重

摩尔比(C4+C4a)∶(C5+C9+C13)等于1∶1、1∶1.4、1∶1.8和1∶2.3时，EAC生长抑制率分别为60.1％、68.3％、61.3％和47.2％。

摩尔比(C4+C4a)∶(C5+C9+C13)等于1∶1.4，EAC生长抑制率(相对于DXR组，阳性对照)为49.8％。

DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13+C17)类复合物：DXR-3.5mg/kg体重

(C4+C4a)-8.15mg/kg体重

摩尔比(C4+C4a)∶(C5+C9+C13+C17)等于1∶1.3、1∶1.6、1∶2和1∶2.5时，EAC生长抑制率分别为68.0％、69.7％、56.3％和43.5％。

摩尔比(C4+C4a)∶(C5+C9+C13+C17)等于1∶1.3和1∶1.6时，EAC生长抑制率(相对于DXR组，阳性对照)分别为45.3％和48.1％。

DXR/C4+C5类复合物、DXR/C4+C9类复合物、DXR/C4+C13类复合物、DXR/C4+C17类复合物、DXR/C4a+C5类复合物抗肿瘤作用研究得到以下结论：

当摩尔比C4(或C4a)∶C5(或C9或C13或C17)为1∶3-1∶1和1∶1-3∶1时，复合物的抗肿瘤作用超过单独DXR的作用。结果表明范围1∶2-1∶1和1∶1-2∶1内的复合物作用显著，并且相应于更窄的区间1∶1.7-1∶1.3和1.3∶1-1.7∶1具有增强效应。

DXR/(C4+C4a)+C5类复合物、DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13)类复合物、DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13+C17)类复合物的抗肿瘤作用研究证实了这个结论。此外，含2至6种化合物(4、4a、5、9、13、17)的复合物确实参与和DXR的相互作用。

这些结果是在新化合物(C4、C4a、C5、C9、C13、C17)明显高于其临界胶束浓度下获得。

水溶性芳族化合物如阿霉素可以在水溶液中成为胶束的形式。本发明人惊奇地发现，在1-2mg/ml浓度范围内的阿霉素更有效地与新化合物(C4、C4a、C5、C9、C13、C17)形成混合胶束。而且，这些混合胶束的抗肿瘤活性明显高于在相同浓度下单独使用阿霉素。

所以，由全反式-视黄酸和/或13-顺式-视黄酸与O-磷酸-L-酪氨酸的酰胺(C4或C4a；C4+C4a)、多不饱和酸与O-磷酰乙醇胺的酰胺(C5或C9或C13或C17；C5+C9；C5+C13；C5+C17；C9+C13；C9+C1 7；C13+C17；C5+C9+C13；C5+C9+C17；C5+C13+C17；C9+C13+C17；C5+C9+C13+C17)和阿霉素组成的混合胶束表现出抗肿瘤活性。

因此，由全反式-视黄酸或13-顺式-视黄酸与O-磷酸-L-酪氨酸的酰胺(C4或C4a)、多不饱和酸与O-磷酰乙醇胺的酰胺(C5或C9或C13或C17)和阿霉素组成的混合胶束表现出抗肿瘤活性。

本发明人早已公开了合成视黄酸类化合物和多不饱和酸与含磷酸基的羟基氨基酸和乙醇胺的酰胺类化合物的一般性方法。在本申请中，本发明人公开了合成N-酰基-O-磷酸-2-氨基乙醇和N-视黄酰基-O-磷酸-L-酪氨酸的方法。

所述方法与现有方法相比具有下列优点：

-合成一步完成，

-收率高，达到90％，

-合成简化且省时

-终产物无需层析就可纯化。

实施例

材料和方法：

阿霉素与化合物4(C4)或化合物4a(C4a)和化合物5(C5)或化合物9(C9)或化合物13(C13)或化合物17(C17)的复合物和阿霉素(DXR)对比的抗肿瘤作用研究是在患有艾氏腹水癌(EAC)的小鼠中进行。研究中选用来自同系繁殖的雄性和雌性ICR系的随即育种白化病小鼠。向笼养动物的房间提供每小时更换15次的过滤空气，温度为19-21℃，相对湿度为50-60％并且12小时调整光照，在上午6时和下午6时变为光照和黑暗。小鼠被保持在透明聚碳酸酯笼中，该笼的占地面积为600cm²，其中包含软木屑褥。动物自由地使用装有家用质量饮用水的瓶子，并且随意进食饲养动物的标准饲料。2-2.5月龄且体重为19-22g的小鼠随即分配为对照组和试验组，使平均体重标准化。对照组和试验组相应地包括10和7只动物。各组的小鼠通过特殊耳标记来识别。各组动物的笼子利用笼卡识别，笼卡标明研究日期、组号、动物的数目和性别。

通过腹膜内接种由1或2只腹膜内生长EAC的动物在第7天获取的0.2ml天然腹水液或0.5ml用盐水1∶1稀释的腹水液使EAC株系在ICR小鼠体内繁殖。根据台盼蓝排除试验，腹水液含有98％以上的活肿瘤细胞。对于各个研究，在无菌条件下在第7天由携带EAC的小鼠的腹水制备EAC在灭菌盐水中的混悬液，浓度为10⁷个活肿瘤细胞/ml。

在第0天，通过腹膜内注射体积为0.2ml的2×10⁶个EAC细胞接种各个对照和试验组的小鼠。研究中每隔一天在小鼠的后侧尾静脉处静脉内注射一次，EAC细胞接种后共注射3次(第2，4和6天)。给对照组的小鼠静脉内注射体积为2.5ml/kg体重(给予20g体重的小鼠50ul)的载体(阴性对照)。其他组的动物(阳性对照)静脉内接受DXR的水溶液(浓度为1.4mg/ml)，剂量为3.5mg/kg体重并且体积为2.5ml/kg体重(50ul中70μg的DXR，给予20g体重的小鼠)。试验组的小鼠静脉内注射：DXR/C4+C5的复合物(2组试验)；DXR/C4+C9(一些试验)；DXR/C4+C13的复合物(一些试验)；DXR/C4+C17的复合物(一些试验)；DXR/C4a+C5(一些试验)。试验组的小鼠接受DXR(复合物形式)的剂量为3.5mg/kg体重且体积为2.5ml/kg体重(相当于50μl中70pg的DXR，给予20g体重的小鼠)，DXR的浓度为1.4mg/ml。一组试验设计为研究DXR/C4+C5的复合物的抗肿瘤作用，C4的含量恒定(8.15mg/kg体重)，但C5的含量不同，摩尔比C4∶C5在1∶3-1∶1内变化。其他组的试验设计为研究DXR/C4+C5的复合物的抗肿瘤作用，C5的含量恒定(6.4mg/kg体重)但C4的含量不同，摩尔比C4∶C5在1∶1-3∶1内变化。复合物和阿霉素的溶液严格静脉内注射，因为偶然部分皮下注射可能导致动物的疼痛反应，局部刺激损害，或有时溃疡和坏死。

用试验复合物末次处理之后2天，在第8天利用颈部脱位处死小鼠。取出腹水液，收集并且记录其体积，腹腔用盐水洗涤6-7次并且合并腹水液。在1000r.p.m.下离心10分钟后，记录肿瘤细胞沉积物的体积。利用血细胞计数器计算活肿瘤细胞数。利用学生t检验比较对照组和检验组的肿瘤细胞数。试验制剂对于EAC生长抑制率的影响通过下式评估：

小鼠中受到试验制剂影响的EAC生长的抑制程度与DXR比较用于评价试验复合物的抗肿瘤活性。

实施例1.DXR/C4复合物的抗肿瘤作用

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠只接受剂量为3.5mg/kg的DXR。试验组的小鼠接受DXR/C4的复合物(DXR-3.5mg/kg；C4-22.5mg/kg)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组小鼠腹腔中具有(680.0±59.1)×10⁶个EAC细胞。在单独接受DXR的组中，肿瘤细胞数为(510.9±52.9)×10⁶个EAC细胞且EAC生长抑制率为24，9％，p＜0.05。在接受DXR/C4复合物的试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(787.2±141.8)×10⁶个EAC细胞，p＞0.05。

因此，DXR/C4复合物未表现出抗肿瘤作用。此外，参照阴性对照组，化合物11抵销了DXR的抗肿瘤作用，并且对小鼠中EAC生长产生不明显的、少许的促进作用。

实施例2.DXR/C5复合物的抗肿瘤作用

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠只接受剂量为3.5mg/kg的DXR。试验组的小鼠接受DXR/C5的复合物(DXR-3.5mg/kg；C5-12mg/kg)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组小鼠腹腔中具有(680.0±59.1)×10⁶个EAC细胞。在单独接受DXR的组中，肿瘤细胞数为(510.9±52.9)×10⁶个EAC细胞且EAC生长抑制率为24，9％，p＜0.05。在接受DXR/C5复合物的试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(635.6±122.2)×10⁶个EAC细胞，p＞0.05。

因此，DXR/C5复合物未表现出抗肿瘤作用。此外C5抵销了DXR的抗肿瘤作用。

用多组试验测试DXR/C4+C5复合物抗肿瘤作用。DXR-3.5mg/kg体重。C4-8.15mg/kg体重。C4∶C5摩尔比由1∶3改变为1∶1。

实施例3.DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用，C4∶C5摩尔比等于1∶3；1∶2.9；1∶2.8；1∶2.7和1∶2.6

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积相当于2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C15摩尔比等于1∶3)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶2.9)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4+C5摩尔比等于1∶2.8)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶2.7)。第5试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶2.6)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(657.5±72.6)×10⁶个EAC细胞。在用DXR单独处理组中，肿瘤细胞的数目为(407.4±75.9)×10⁶，EAC生长抑制率为38.0％，p＜0.05。在第一试验组的小鼠中，肿瘤细胞数目为(361.3±98.5)×10⁶，EAC生长抑制率为45.0％，p＜0.05。在第二试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(370.6±94.9)×10⁶，EAC生长抑制率为43.6％，p＜0.05。第三试验组的小鼠中，肿瘤细胞数为(354.9±101.2)×10⁶，EAC生长抑制率为46.0％，p＜0.05。在第四试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(340.8±104.7)×10⁶，EAC生长抑制率为48.2％，p＜0.05。在第5试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(326.1+93.3)×10⁶，EAC生长抑制率为50.4％，p＜0.05。

所以，DXR/C4+C5复合物在1∶3.0至1∶2.6的不同C4∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例4.DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用，C4∶C5摩尔比等于1∶2.5；1∶2.4；1∶2.3和1∶2.2

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶2.5)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶2.4)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶2.3)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶2.2)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(935.1±107.8)×10⁶个EAC细胞。用DXR单独处理的组中，肿瘤细胞的数目为(548.5±81.7)×10⁶和EAC生长抑制率为41.3％，p＜0.02。在第一试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(479.4±103.8)×10⁶和EAC生长抑制率为48.7％，p＜0.01。在第二试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(453.7±125.1)×10⁶和EAC生长抑制率为51.5％，p＜0.02。在第三试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(435.5±99.8)×10⁶且EAC生长抑制率为53.4％，p＜0.01。在第四试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(402.0±116.9)×10⁶和EAC生长抑制率为57.0％，p＜0.01。

因此，DXR/C4+C5复合物在1∶2.5至1∶2.2的不同C4∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例5.DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用，C4∶C5摩尔比等于1∶2.1；1∶2；1∶1.9和1∶1.8

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶2.1)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶2)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1.9)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1.8)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(862.4±125.0)×10⁶个EAC细胞。在单独用DXR处理的组中，肿瘤细胞的数目为(455.3±131.3)×10⁶，EAC生长抑制率为47.2％，p＜0.05。第一试验组中的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(361.8±79.4)×10⁶，EAC生长抑制率为58.0％，p＜0.01。在第二试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(349.3±92.2)×10⁶，EAC生长抑制率为59.5％，p＜0.01。在第三试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(327.5±108.6)×10⁶，EAC生长抑制率为62.0％，p＜0.01。在第四试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(300.2±84.7)×10⁶，EAC生长抑制率为65.2％，p＜0.01。

因此，DXR/C4+C5复合物在1∶2.1至1∶1.8的C4∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例6.DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用，C4∶C5摩尔比等于1∶1.7；1∶1.6；1∶1.5和1∶1.4

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1.7)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1.6)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1.5)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1.4)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(779.1±76.7)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中，肿瘤细胞的数目为(419.0±53.4)×10⁶，EAC生长抑制率为为46.2％，p＜0.002。在第一试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(256.3±54.1)×10⁶，EAC生长抑制率为67.1％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为38.8％，p＜0.05。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(250.1±57.7)×10⁶，EAC生长抑制率为67.9％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为40.3％，p＜0.05。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(240.7±61.8)×10⁶，EAC生长抑制率为69.1％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为42.6％，p＜0.05。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(233.7±50.8)×10⁶，EAC生长抑制率为70.0％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为44.2％，p＜0.05。

因此，DXR/C4+C5复合物在1∶1.7至1∶1.4的C4∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例7.DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用，C4∶C5摩尔比等于1∶1.3；1∶1.2；1∶1.1和1∶1

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1.3)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1.2)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1.1)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(793.4±72.8)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中肿瘤细胞的数目为(411.9±57.1)×10⁶，EAC生长抑制率为48.1％，p＜0.02。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(242.6±54.3)×10⁶，EAC生长抑制率为69.4％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为41.1％，p＜0.05。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(264.1±87.6)×10⁶，EAC生长抑制率为66.7％，p＜0.001。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(297.7±94.3)×10⁶，EAC生长抑制率为62.5％，p＜0.001。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(276.1±76.5)×10⁶个EAC细胞，EAC生长抑制率为65.2％，p＜0.001。

因此，DXR/C4+C5复合物在1∶1.3至1∶1的C4∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

测试DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用的系列试验。DXR-3.5mg/kg 体重。C5-6.4mg/kg体重。C4∶C5摩尔比由1∶1改变至3∶1。

实施例8.DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用，C4∶C5摩尔比等于1∶1；1.1∶1；1.2∶1；1.3∶1和1.4∶1

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1∶1)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1.1∶1)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1.2∶1)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1.3∶1)。第五试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1.4∶1)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(742.2±66.2)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中，肿瘤细胞的数目为(400.3±63.5)×10⁶个EAC细胞，EAC生长抑制率为46.1％，p＜0.001。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(258.3±40.4)×10⁶，EAC生长抑制率为65.2％，p＜0.001。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(284.8±97.5)×10⁶，EAC生长抑制率为61.6％，p＜0.002。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(251.2±103.6)×10⁶，EAC生长抑制率为66.2％，p＜0.001。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(227.5±43.3)×10⁶，EAC生长抑制率69.3％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率43.2％，p＜0.05。在第五试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(223.8±43.2)×10⁶和EAC生长抑制率69.8％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率44.1％，p＜0.05。

因此，DXR/C4+C5复合物在1∶1至1.4∶1的C4∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例9.DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用，C4∶C5摩尔比等于1.5∶1；1.6∶1；1.7∶1和1.8∶1

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1.5∶1)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1.6∶1)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4+C5摩尔比等于1.7∶1)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1.8∶1)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(953.5±167.3)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中，肿瘤细胞的数目为(492.1±85.3)×10⁶并且EAC生长抑制率为48.4％，p＜0.05。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(239.3±93.5)×10⁶且EAC生长抑制率为74.9％，p＜0.002，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为51.4％，p＜0.05。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(208.4±89.0)×10⁶且EAC生长抑制率为78.1％，p＜0.002，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为57.7％，p＜0.05。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(247.1±76.8)×10⁶且EAC生长抑制率为74.1％，p＜0.002，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为49.8％，p＜0.05。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(320.4±120.6)×10⁶且EAC生长抑制率为66.4％，p＜0.01。

因此，DXR/C4+C5复合物在1.5∶1至1.8∶1的C4∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例10.DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用，C4∶C5摩尔比等于1.9∶1；2∶1；2.1∶1和2.2∶1

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于1.9∶1)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于2∶1)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于2.1∶1)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于2.2∶1)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(924.6±145.2)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中肿瘤细胞的数目为(481.0±105.3)×10⁶，EAC生长抑制率为48.0％，p＜0.01。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(322.8±93.5)×10⁶，EAC生长抑制率为65.1％，p＜0.01。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(353.2±74.4)×10⁶，EAC生长抑制率为61.8％，p＜0.01。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(340.3±86.8)×10⁶，EAC生长抑制率为63.2％，p＜0.01。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(388.3±91.6)×10⁶，EAC生长抑制率为58.0％，p＜0.01。

因此，DXR/C4+C5复合物在1.9∶1至2.2∶1的C4∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例11.DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用，C4∶C5摩尔比等于2.3∶1；2.4∶1；2.5∶1和2.6∶1

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于2.3∶1)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于2.4∶1)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于2.5∶1)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于2.6∶1)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(857.6±113.9)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理组中肿瘤细胞的数目为(525.2±104.5)×10⁶且EAC生长抑制率为38.8％，p＜0.05。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(381.4±64.8)×10⁶且EAC生长抑制率为55.5％，p＜0.01。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(354.2±78.1)×10⁶且EAC生长抑制率为58.7％，p＜0.01。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(371.4±136.5)×10⁶且EAC生长抑制率为56.7％，p＜0.02。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(363.7±158.4)×10⁶且EAC生长的抑制率为57.6％，p＜0.05。

因此，DXR/C4+C5复合物在2.3∶1至2.6∶1的C4∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单独的效果。

实施例12.DXR/C4+C5复合物的抗肿瘤作用，C4∶C5摩尔比等于2.7∶1；2.8∶1；2.9∶1和3∶1

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于2.7∶1)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于2.8∶1)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于2.9∶1)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C5复合物(C4∶C5摩尔比等于3∶1)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(721.3±76.4)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中肿瘤细胞的数目为(503.8±64.5)×10⁶且EAC生长抑制率为30.2％，p＜0.05。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(312.7±79.6)×10⁶且EAC生长抑制率为56.6％，p＜0.002。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(324.5±72.8)×10⁶且EAC生长抑制率为55.0％，p＜0.002。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(357.9±75.3)×10⁶且EAC生长抑制率为50.4％，p＜0.01。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(394.6±67.7)×10⁶且EAC生长抑制率为45.3％，p＜0.01。

因此，DXR/C4+C5复合物在2.7∶1至3∶1的C4∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单独的效果。

实施例13.DXR/C4+C9复合物的抗肿瘤作用，C4∶C9摩尔比等于1∶1；1∶1.4；1∶1.8和1∶2.3。DXR-3.5mg/kg体重。C4-8.15mg/kg体重

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C9复合物(C4∶C9摩尔比等于1∶1)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C9复合物(C4∶C9摩尔比等于1∶1.4)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C9复合物(C4∶C9摩尔比等于1∶1.8)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C9复合物(C4∶C9摩尔比等于1∶2.3)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(696.7±68.2)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中肿瘤细胞的数目为(449.4±77.1)×10⁶且EAC生长抑制率为35.5％，p＜0.05。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(266.1±97.9)×10⁶且EAC生长抑制率为61. 8％，p＜0.01。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(227.8±69.1)×10⁶个EAC细胞且EAC生长抑制率为67.3％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为49.3％，p＜0.05。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(261.0±101.2)×10⁶个EAC细胞且EAC生长抑制率为62.5％，p＜0.01。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(350.4±103.7)×10⁶且EAC生长抑制率为49.7％，p＜0.02。

因此，DXR/C4+C9复合物在1∶1；1∶1.4；1∶1.8和1∶2.3的C4∶C9摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例14.DXR/C4+C13复合物的抗肿瘤作用。C4∶C13摩尔比等于1∶1.3；1∶1.6；1∶2和1∶2.5。DXR-3.5mg/kg体重。C4-8.15mg/kg体重

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C13复合物(C4∶C13摩尔比等于1∶1.3)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C13复合物(C4∶C13摩尔比等于1∶1.6)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C13复合物(C4∶C13摩尔比等于1∶2)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C13复合物(C4∶C13摩尔比等于1∶2.5)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(645.8±62.5)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中肿瘤细胞的数目为(406.7±60.1)×10⁶且EAC生长抑制率为37.0％，p＜0.05。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(213.1±53.0)×10⁶且EAC生长抑制率为67.0％，p＜0.01，相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为47.6％，p＜0.05。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(228.6±57.0)×10⁶且EAC生长抑制率为64.6％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为43.8％，p＜0.05。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(295.8±94.0)×10⁶且EAC生长抑制率为54.2％，p＜0.01。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(354.5±75.6)×10⁶且EAC生长抑制率为45.1％，p＜0.01。

因此，DXR/C4+C13复合物在1∶1.3；1∶1.6；1∶2和1∶2.5的C4∶C13摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例15.DXR/C4+C17复合物的抗肿瘤作用。C4∶C17摩尔比等于 1∶1；1.4∶1；2∶1和2.7∶1。DXR-3.5mg/kg体重。C17-6.0mg/kg体重

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4+C17复合物(C4∶C17摩尔比等于1∶1)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4+C17复合物(C4∶C17摩尔比等于1.4∶1)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4+C17复合物(C4∶C17摩尔比等于2∶1)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4+C17复合物(C4∶C17摩尔比等于2.7∶1)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(834.9±71.1)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中肿瘤细胞的数目为(495.1±68.0)×10⁶，EAC生长抑制率为40.7％，p＜0.01。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(309.7±71.7)×10⁶，EAC生长抑制率为62.9％，p＜0.001。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(272.2±68.5)×10⁶，EAC生长抑制率为67.4％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为45.0％，p＜0.05。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(331.5±74.8)×10⁶，EAC生长抑制率为60.3％，p＜0.001。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(402.4±83.9)×10⁶，EAC生长抑制率为51.8％，p＜0.002。

因此，DXR/C4+C17复合物在1∶1；1.4∶1；2∶1和2.7∶1的C4∶C17摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例16.DXR/C4a+C5复合物的抗肿瘤作用。C4a∶C5摩尔比等于1.2∶1；1.6∶1；1.9∶1和2.5∶1。DXR-3.5mg/kg体重。C5-6.4mg/kg体重

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/C4a+C5复合物(C4a∶C5摩尔比等于1.2∶1)。第二试验组的小鼠接受DXR/C4a+C5复合物(C4a∶C5摩尔比等于1.6∶1)。第三试验组的小鼠接受DXR/C4a+C5复合物(C4a∶C5摩尔比等于1.9∶1)。第四试验组的小鼠接受DXR/C4a+C5复合物(C4a∶C5摩尔比等于2.5∶1)。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(811.3±73.8)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中肿瘤细胞的数目为(442.2±51.5)×10⁶，EAC生长抑制率为45.5％，p＜0.001。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(288.8±89.6)×10⁶，EAC生长抑制率64.4％，p＜0.001。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(223.9±68.8)×10⁶，EAC生长抑制率为72.4％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为49.4％，p＜0.05。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(306.7±91.3)×10⁶，EAC生长抑制率为62.2％，p＜0.001。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(385.4±94.7)×10⁶，EAC生长抑制率为52.5％，p＜0.01。

因此，DXR/C4a+C5复合物在1.2∶1；1.6∶1；1.9∶1和2.5∶1的C4a∶C5摩尔比下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例17.N-酰基-O-磷酸-2-氨基乙醇的合成

其中酰基为：

-顺式-5，8，11，14-二十碳四烯酰基(花生四烯酰基)(5)

-顺式-4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酰基(9)

-顺式-5，8，11，14，17-二十碳五烯酰基(13)

-顺式-9，12，15-十八碳三烯酰基(亚麻酰基)(17)

将多不饱和酸(1mmol)和三乙胺(142μl，1,02mmol)溶解在2ml无水四氢呋喃中，随后加入无水乙腈(4ml)，将该混合物冷却到-15℃，并且加入131ul(1.02mmol)氯甲酸丁酯。30分钟后，将不含有沉淀三乙胺盐酸盐的混合物吸移到O-磷酰乙醇胺(″Sigma-Aldrich″)(212mg，1，5mmol)在3ml的1M Na₂CO₃和3ml H₂O中的溶液内。在20-25℃下将所得混合物搅拌1小时，用1M HCl酸化为pH 2-3并且用氯仿-甲醇(2∶1，v/v)提取。提取液用甲醇-水(10∶9，v/v)洗涤，减压下浓缩并且溶解在氯仿-甲醇-NH3水(13∶5∶1，v/v/v)中。所得溶液在减压下浓缩并且溶解在乙醇-水(2∶3，v/v，15ml)中。所得乳液用乙醚(2×10ml)洗涤并且减压下浓缩，得到N-酰基-O-磷酸-2-氨基乙醇的铵盐。

收率：84％(5)；88％(9)；83％(13)；73％(17)。

所有制得的产物与通过用β-氰基乙基磷酸酯磷酰化N-酰基衍生物的方法制得的化合物相同。

为测定’H-NMR波谱，利用1M HCl洗涤该氯仿-甲醇溶液(2∶1，v/v)的方式将铵盐转化为酸化形式。

实施例18.N-视黄酰基-O-磷酸-L-酪氨酸的合成

其中视黄酰基为：

-全反式-视黄酰基(4)

-13-顺式-视黄酰基(4a)

将视黄酸(1mmol)和三乙胺(142ul，1,02mmol)溶解在6ml四氢呋喃中，将该混合物冷却至-15℃，并且加入131μl(1.02mmol)氯甲酸丁酯。30分钟后，加入261mg(1mmol)O-磷酸-L-酪氨酸(″Sigma-Aldrich″)在3ml 1M Na₂CO₃和3ml H₂O中的溶液。随后加入3ml EtOH。20-25℃下将所得混合物搅拌4小时，用1M HCl酸化至pH 2-3并且用氯仿-甲醇(2∶1，v/v)提取。提取物用甲醇-水(10∶9，v/v)洗涤，减压下浓缩并且溶解在氯仿-甲醇-NH₃水(13∶5∶1，v/v/v)中。所得溶液在减压下蒸发并且溶解在乙醇-水(2∶3，v/v，15ml)中。所得乳液用乙醚(5×10ml)洗涤并且减压蒸发，得到N-视黄酰基-O-磷酸-L-酪氨酸的铵盐。

收率：52％(4)；49％(4a)。

本发明进一步涉及治疗有效的化合物和所述化合物在癌症治疗中的应用。本发明也涉及具有以下结构的全反式视黄酸和13-顺式-视黄酸与阿霉素的酰胺类化合物的合成：

1.N-(全反式-视黄酰基)-阿霉素

2.N-(13-顺式-视黄酰基)-阿霉素

已知天然维生素A类在化学预防中的应用性因其毒性而受到局限。具有化学预防作用的合成维生素A酰胺类化合物比天然维生素A类物质的毒性低(Shealy Y.F.等人.J.Med.Chem.31卷.，190-196页，1988)。标题化合物对肿瘤细胞显示出较高的细胞毒性，而且明显减小了其制剂的毒性。

我们的试验结果表明，通过C3H小鼠，化合物1对艾氏腹水癌具有较高的抗肿瘤活性。化合物1的抗肿瘤作用是剂量依赖性的。显然，化合物1比等剂量的游离阿霉素具有更高的抗肿瘤活性。化合物1以50mcg/小鼠(2.5mcg/kg)的剂量注射对肿瘤生长的抑制达57％，而相同剂量的阿霉素抑制45％EAC生长。

较高的细胞毒性影响多不饱和脂肪酸与柔红霉素对产α胎蛋白(AFP)大鼠肝细胞的偶联，应归因于AFP对花生四烯酸和二十二碳六烯酸的高亲和力。被柔红霉素改性的AFP与脂肪酸的复合物选择性地释放于产生AFP大鼠肝细胞。

我们的试验采用不产生AFP的EAC。其建立使制剂中存在的蛋白质(AFP)引起化合物1抗肿瘤活性的降低，所述制剂给小鼠注射。这些试验的结果可解释为存在着AFR和视黄酸之间形成(被阿霉素改性的)可逆性平衡复合物。因此，与阿霉素相比，化合物1较高的细胞毒活性可以归因于其结构特征。化合物1包括两种抗肿瘤剂-视黄酸类化合物的酰胺和阿霉素。

实施例19.

N-(全反式-视黄酰基)-阿霉素(化合物1)的合成

将全反式-视黄酸(300mg，1mmol)和三乙胺(104mg，1.02mmol)溶解在1ml无水四氢呋喃中，随后加入无水乙腈(4ml)，将该混合物冷却至-15℃。随后加入140mg(1.02mmol)氯甲酸丁酯。30分钟后，将不含有三乙胺盐酸盐沉淀的混合物吸移到含有400mg阿霉素盐酸盐和2g乳糖的Doxolem制剂在1ml甲醇和0.1ml三乙胺中的搅拌混悬液内，在-15℃下连续搅拌15分钟，随后令所得混合物升至室温。氩气下将该混合物室温下搅拌2小时后，用20ml苯-乙醇(4∶1)处理。将该混悬液在3000rpm下离心5分钟，沉淀用20ml苯-乙醇(4∶1)处理并且通过离心收集(5分钟，3000rpm)。合并两批所得上清液并且真空蒸发至干。将残余物溶解在氯仿中，和N-(全反式-视黄酰基)-阿霉素利用闪式硅胶层析(230-400目)纯化。层析柱依次用氯仿、丙酮-氯仿(1∶9，v/v)、丙酮-氯仿(1∶4，v/v)且最后用苯-乙醇(4∶1)洗脱。纯的产物用苯-乙醇(4∶1)洗脱，其为深红色带。真空下蒸发溶剂，得到445mg(78％)的N-(全反式-视黄酰基)-阿霉素，其为深红色蜡；TLC(苯-二恶烷-乙酸10∶5∶1)R_f 0.5(对于阿霉素0.08)；UV(乙醇)A^0.1％(345nm)＝817；A^0.1％(497nm)＝196；1H-NMR(CDCl₃，200MHz)6 0.9-1.0(t和s，6H，视黄酸中3个CH₂环)，1.2-1.3(d，3H，CH₃-5’)，1.4-2.4(m，19H，5CH₃-RA，CH₂-2’和CH₂-8)，2.9-3.3(q，2H，CH₂-10)，3.7(s，1H，H-4’)，3.9-4.3(m，6H，OH-4’，OCH₃，H-3’，H-5’)，4.6(s，IH，COCH₂OH)，4.8(s，2H，COCH₂OH)，5.0-5.1(d，1H，OH-9)，5.3(s，1H，H-7)，5.5(s，1H，H-1’)，5.6-7.0(m，7H，6HC＝C-RA和NH)，7.3-7.4(d，1H，H-3)，7.7-7.8(t，1H，H-2)，8.0-8.1(d，1H，H-1)，13.1和14.0(双峰，2H，OH-6和OH-11)

实施例20.N-(全反式-视黄酰基)-阿霉素(化合物1)对EAC细胞的抗肿瘤作用

在通过C3H小鼠的EAC中进行化合物1与阿霉素对比的抗肿瘤作用的研究。采用20-22g雄性C3H小鼠。对照组和试验组包括7只动物，在第0天在其腹膜内(i.p.)接种体积0.2ml中含有的5×10⁶个EAC细胞。在接种后第2、4和6天静脉内注射存在于200μl正常小鼠血清(NMS)中的剂量为20、50和100μg/小鼠的化合物1和等量的阿霉素。给三组动物施用剂量为1、2.5和5μg/kg体重(20、50和100μg/20g体重的小鼠)的阿霉素水溶液。一组小鼠是未处理对照组。试验结果在第9天报告。用颈部脱位处死小鼠。取出腹水液，收集并且记录其体积，腹腔用盐水洗涤6-7次。合并所得腹水液。利用台盼蓝排除试验，经血细胞计数器计算活肿瘤细胞数。计算各组鼠的均值和平均标准偏差。利用学生t检验比较对照组和试验组的肿瘤细胞。试验制剂对于EAC生长抑制率的影响通过下式评估：

表1中所示的试验结果表明，化合物1对于EAC具有高抗肿瘤活性。化合物1的抗肿瘤作用依赖于剂量。与对照未处理动物(p＜0.01)对比，接种后第2、4和6天反复注射三次剂量为1mg/kg(20μg/小鼠)的化合物1，EAC生长抑制率为47％。显然，化合物1具有比等剂量游离阿霉素更高的活性。在按照选定方案注射剂量为2.5mg/kg(50μg/小鼠)的化合物1的情况中，肿瘤生长抑制率达到56％(p＜0.01)，而游离阿霉素在相同剂量下抑制45％的EAC生长(p＜0.01)。在化合物1以相当5mg/kg(100μg/小鼠)阿霉素的剂量注射的情况中，获得较低效果(EAC生长抑制率为53％)。可以看出，游离阿霉素在此剂量下的细胞毒作用高于化合物1。

因此，试验表明化合物1在相应于1和2.5mg/kg阿霉素的剂量下对EAC具有高度抗肿瘤作用，而且化合物1的细胞毒性高于游离阿霉素。

表1

给EAC小鼠反复三次静脉内注射化合物1和阿霉素的抗肿瘤作用(M±m，n＝7)

动物组	制剂	剂量μg小鼠i.v.	腹水体积ml	肿瘤细胞量×10°	EAC生长抑制，以对照计的％	P
动物组	制剂	剂量μg小鼠i.v.	腹水体积ml	肿瘤细胞量×10°	EAC生长抑制，以对照计的％	P	对照未处理 5,05±0,85 1213,6±137,96 - -试验1 化合物1 20 3,50±1,30 640,0±78,04 47,3 ＜0,01试验2 阿霉素 20 2,85±1,35 765,8±127,52 36,9 ＜0,05试验3 化合物1 50 2,10±1,70 535,0±167,90 55,9 ＜0,01试验4 阿霉素 50 1,85±1,10 662,1±99,17 45,4 ＜0,01试验5 化合物1 100 3,30±1,20 571,4±66,96 52,9 ＜0,002试验6 阿霉素 100 0,80±0,60 350,0±108,21 71,2 ＜0,001

实施倒21.N-(全反式-视黄酰基)-阿霉素(化合物l)和AFP对于小鼠中EAC生长的作用

研究具有不同量的AFP的化合物1对EAC生长的影响。试验是在具有20-23g起始体重的同系繁殖C3H小鼠上进行。通过腹膜内传代给同系的小鼠提供所用的肿瘤细胞株。在研究开始时(第0天)，组成4个组，每组包括7只小鼠。所有动物腹膜内接种肿瘤细胞的盐水溶液(5×10⁶个EAC细胞(存在于0.2ml)/小鼠)。

含AFP的化合物1和阿霉素的不同制剂是在给小鼠腹膜内植入EAC细胞后第2、4和6天注射。第一组动物未经处理(阴性对照)。利用NMS给小鼠注射。给第2组的小鼠静脉内注射所含阿霉素剂量为1μg/kg体重(20μg/小鼠)的化合物1，用NMS作为溶剂。给第3组和4组的小鼠注射相同剂量的化合物1，向NMS中加入蛋白质(相应于2.5和5ug/小鼠)。在接种EAC细胞后第9天处死小鼠并且收集腹水液且定量评估。制备肿瘤细胞的混悬液，将等份试样与等体积0.1％台盼蓝溶液混合。用血细胞计数器计算肿瘤细胞的数量。

试验的结果通过变差统计法利用学生t-检验评估。制剂的抑制作用的数值表示为与对照相比的百分比。

由提供的试验数据(表2)可以看出，剂量为1mg/kg(20μg/小鼠)的化合物1抑制45％的EAC生长(p＜0,01)。这与前面的试验数据一致。同时，带有AFP(2.5μg/小鼠)的化合物1(20μg/小鼠)使肿瘤生长抑制率降低到33％(p＜0,01)。注射液中具有双倍含量AFP的化合物1的抗肿瘤作用值基本没有改变(31％，p＜0,02)。可以认为具有AFP(2，5和5,0μg/小鼠)的化合物1的作用接近于游离阿霉素。

表2

以1mg/kg(20g/小鼠)的剂量反复三次给小鼠C3H静脉内注射具有AFP的化合物1的作用(M± m，n＝7)

处理	AFP的剂量μg/小鼠	腹水体积ml	肿瘤细胞量，×10⁶	EAC生长抑制百分率，以对照计	p
处理	AFP的剂量μg/小鼠	腹水体积ml	肿瘤细胞量，×10⁶	EAC生长抑制百分率，以对照计	p	1.NMS 无 3,4±1,01 2157,8±207,0 - -2.化合物1 无 2,0±0,25 1185,7±266,2 45,0 ＜0,013.化合物1+AFP 2,5 3,0±0,60 1442,9±108,3 33,1 ＜0,014.化合物1+AFP 5,0 2,8±0,65 1481,4±171,3 31,3 ＜0,025.阿霉素无 - - 36,9^* ＜0,01

^*参见表1

实施例22.N-(13-顺式-视黄酰基)-阿霉素(化合物2)对于小鼠中EAC生长的抗肿瘤作用

给20-22g的C3H小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为10ml/kg体重或200μl/20g体重的小鼠)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受NMS。在两个DXR组(阳性对照)中，小鼠单独接受剂量为1或2.5mg/kg体重的阿霉素(20或50μg/20g体重的小鼠)。两个试验组的小鼠接受存在于NMS中的化合物2，相应地含有剂量为1或2.5mg/kg体重(20或50μg/20g体重的小鼠)的阿霉素。用试验化合物末次处理小鼠后3天，在第9天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(975.4±81.37)×10⁶个EAC细胞。在单独用1mg/kg阿霉素处理的组中肿瘤细胞的数目为(635.9±122.78)×10⁶个，EAC生长抑制率为34.8％，p＜0.05。在用含有1mg/kg剂量阿霉素的化合物2处理的试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(533.5±94.23)×10⁶个，EAC生长抑制率为45.3％，p＜0.01。在单独用剂量为2.5mg/kg的阿霉素处理的组中肿瘤细胞为(537.4±92.89)×10⁶个，EAC生长抑制率为44.9％，p＜0.01。在用含有2.5mg/kg剂量阿霉素的化合物2处理的试验组的小鼠中，肿瘤细胞的数目为(405.7±120.62)×10⁶个，EAC生长抑制率为58.4％，p＜0.002。

因此，相当于1和2.5mg/kg阿霉素剂量的化合物2对于EAC具有高度的抗肿瘤作用，超过阿霉素单用的效果。

实施例23.N-(13-顺式-视黄酰基)-阿霉素/化合物2/的合成

本化合物按照上述制备化合物1的方法、利用1mmol(300mg)的13-顺式-视黄酸制备；收率429mg(75％)。

TLC(苯-二恶烷-乙酸10∶5∶1)Rf0.5(阿霉素为0.08)；

UV(乙醇)A^0.1％(347nm)＝817；A^0.1％(497nm)＝196；

’H-NMR(CDCl₃，200MHz)δ0.9-1.0(t和s，6H，视黄酸中3个CH₂环)，1，2-2，4(m，22H，CH₃-5’，5 CH₃-RA，CH₂-2’和CH₂-8)，(q，2H，CH₂-10)，3.7(s，1H，H-4’)，3.94.3(m，6H，OH-4’，OCH₃，H-3’，H-5’)，4.6(s，1H，COCH₂OH)，4.8(s，2H，COCH₂OH)，5.05.1(d，1H，OH-9)，5.3(s，1H，H-7)，5.5(s，1H，H-1’)，5.6-7.0(m，7H，6HC＝C-RA和NH)，7.3-7.4(d，1H，H-3)，7.7-7.8(t，1H，H-2)，8.0-8.1(d，1H，H-1)，13.1和14.0(双峰，2H，OH-6和OH-11).

实施例24.DXR/(C4+C4a)+C5复合物的抗肿瘤作用

(C4+C4a)∶C5摩尔比等于1.2∶1；1.6∶1；1.9∶1和2.5∶1，C4∶C4a摩尔比等于3∶2.。DXR-3.5mg/kg体重，C5-6.4mg/kg体重。

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+C5复合物。(C4+C4a)∶C5摩尔比等于1.2∶1。第二试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+C5复合物。(C4+C4a)∶C5摩尔比等于1.6∶1。第三试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+C5复合物。(C4+C4a)∶C5摩尔比等于1.9∶1。第四试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)∶C5复合物。(C4+C4a)∶C5摩尔比等于2.5∶1。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(768.7±102.8)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中肿瘤细胞的数目为(465.1±62.8)×10⁶个，EAC生长抑制率为39.5％，p＜0.05。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(283.6±71.4)×10⁶个，EAC生长抑制率为63.1％，p＜0.002。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(218.3±65.3)×10⁶个，EAC生长抑制率为71.6％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为53.1％m p＜0.02。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(299.7±73.6)×10⁶，EAC生长抑制率为61.0％，p＜0.002。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(405.1±81.5)×10⁶，EAC生长抑制率为47.3％，p＜0.02。

因此，DXR/(C4+C4a)+C5复合物在(C4+C4a)∶C5摩尔比等于1.2∶1；1.6∶1；1.9∶1和2.5∶1下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例25.DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13)复合物的抗肿瘤作用

(C4+C4a)∶(C5+C9+C13)摩尔比等于1∶1.1；1∶1.4；1∶1.8和1∶2.3。C4∶C4a摩尔比等于2∶3，C5+C9+C13摩尔比等于0.5∶1∶1。DXR-3.5mg/kg体重，(C4+C4a)-8.15mg/kg体重。

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13)复合物。(C4+C4a)∶(C5+C9+C13)摩尔比等于1∶1。第二试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13)复合物。(C4+C4a)∶(C5+C9+C13)摩尔比等于1∶1.4。第三试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C1 3)复合物。(C4+C4a)∶(C5+C9+C13)摩尔比等于1∶1.8。第四试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13)复合物。(C4+C4a)∶(C5+C9+C13)摩尔比等于1∶2.3。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(817.2±99.9)×10⁶个在DXR单独处理的组中肿瘤细胞的数目为(517.7±74.9)×10⁶个，EAC生长抑制率为36.9％，p＜0.05。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(326.1±92.8)×10⁶个，EAC生长抑制率为60.1％，p＜0.01。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(259.0±72.6)×10⁶个，EAC生长抑制率为68.3％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为49.8％，p＜0.05。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(316.3±81.3)×10⁶个，EAC生长抑制率为61.3％，p＜0.002。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(431.5±74.1)×10⁶个，EAC生长抑制率为47.2％，p＜0.01。

因此，DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13)复合物在(C4+C4a)∶(C5+C9+C13)摩尔比为1∶1；1∶1.4；1∶1.8和1∶2.3下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

实施例26.DXR/(C4+C4a)+(C+C9+C13+C17)复合物的抗肿瘤作用

(C4+C4a)∶(C5+C9+C13+C17)摩尔比等于1∶1.3；1∶1.6；1∶2和1∶2.5。C4∶C4a摩尔比等于1∶1.C5∶C9∶C13∶C17摩尔比等于1∶1∶1∶1。DXR-3.5mg/kg体重。(C4+C4a)-8.15mg/kg体重。

给20-22g的ICR小鼠腹膜内接种2×10⁶个活EAC细胞。开始2天后(第2天)，每隔一天给小鼠静脉内注射(体积为2.5ml/kg体重)1次，共3次(第2，4和6天)。对照组的小鼠接受载体。在DXR组中，小鼠单独接受剂量为3.5mg/kg的DXR。第一试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13+C17)复合物。(C4+C4a)∶(C5+C9+C13+C17)摩尔比等于1∶1.3。第二试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13+C17)复合物。(C4+C4a)∶(C5+C9+C13+C17)摩尔比等于1∶1.6。第三试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13+C17)复合物。(C4+C4a)∶(C5+C9+C13)摩尔比等于1∶2。第四试验组的小鼠接受DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13+C17)复合物。(C4+C4a)∶(C5+C9+C13+C17)摩尔比等于1∶2.5。用试验复合物末次处理后2天，在第8天通过颈部脱位术处死小鼠。将肿瘤细胞计数并且评价小鼠中EAC生长的抑制程度。

对照组的小鼠腹腔内具有(738.1±73.9)×10⁶个EAC细胞。在DXR单独处理的组中肿瘤细胞的数目为(431.1±57.4)×10⁶个，EAC生长抑制率为41.6％，p＜0.01。在第一试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(235.9±65.1)×10⁶个，EAC生长抑制率为68.0％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为45.3％，p＜0.05。在第二试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(223.7±70.3)×10⁶个，EAC生长抑制率为69.7％，p＜0.001，并且相对于DXR组(阳性对照)的EAC生长抑制率为48.1％，p＜0.05。在第三试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(322.6±88.5)×10⁶个，EAC生长抑制率为56.3％，p＜0.01。在第四试验组的小鼠中肿瘤细胞的数目为(417.2±69.7)×10⁶个，EAC生长抑制率为43.5％，p＜0.01。

因此，DXR/(C4+C4a)+(C5+C9+C13+C17)复合物在(C4+C4a)∶(C5+C9+C13+C1 7)摩尔比为1∶1.3；1∶1.6；1∶2和1∶2.5下的抗肿瘤活性超过DXR单用的效果。

Claims

1.一种具有下式的化合物：

或

2.N-(全反式-视黄酰基)-阿霉素(I)在制备治疗剂中的应用。

3.N-(13-顺式-视黄酰基)-阿霉素(II)在制备治疗剂中的应用。

4.N-(全反式-视黄酰基)-阿霉素(I)在制备治疗癌症的治疗剂中的应用。

5.N-(13-顺式-视黄酰基)-阿霉素(II)在制备治疗癌症的治疗剂中的应用。

6.N-(全反式-视黄酰基)-阿霉素(I)在制备用于静脉给药治疗癌症的治疗剂中的应用。

7.N-(13-顺式-视黄酰基)-阿霉素(II)在制备用于静脉给药治疗癌症的治疗剂中的应用。