CN114868843A - 一种无菌幼鼠专用人工乳及其制备方法 - Google Patents

一种无菌幼鼠专用人工乳及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种无菌幼鼠专用人工乳及制备方法,以驴奶、蛋黄蛋白多肽、小鼠血清、水果浆液、维生素A、维生素D、维生素E、海藻、无菌水为原料制备无菌幼鼠专用人工乳,取消牛奶、氨基酸、维生素等单独添加的成分,添加驴奶、蛋黄蛋白多肽、水果浆液、海藻等物质,各物质之间相互作用,显著促进幼鼠发育、生长,能激发免疫蛋白的产生,消除不利幼鼠的物质,具有提高免疫力,增强蛋白质的作用,增加幼鼠的成活率、减少腹泻、胀气等问题。

Description

一种无菌幼鼠专用人工乳及其制备方法
技术领域
本发明涉及动物人工饲养技术领域,尤其涉及一种无菌幼鼠专用人工乳及其制备方法。
背景技术
无菌鼠是指无细菌、病毒、真菌、原生动物和其他腐生或寄生相关生命形式的鼠(大鼠或小鼠)。这类鼠是在无菌条件下人工剖宫产获得的子代鼠,再放在无菌隔离系统内用人工喂乳或无菌“奶妈”鼠代乳饲育而成,其无菌性可通过需氧、厌氧粪便培养及粪便样品聚合酶链式反应。
无菌鼠由于其自身的特殊性,可用于制造人源化小鼠或被移植特定肠道菌群,在进行特定肠道菌群特性研究、肠道菌群作用机制研究。
无菌大鼠在培育过程中,由于肠道菌群的缺失,乳鼠在喂奶后往往出现消化不良,吸收障碍,腹泻、腹部胀气进而腹部发黑,相继死亡,这一过程是造成无菌大鼠培育失败的主要原因之一。配方奶中蛋白质为大分子颗粒,对于幼鼠的吸收很困难,在胃肠微生物缺失的环境下,更易出现各种消化问题。另外在肠道中,由于乳糖酶的缺少会产生乳糖不耐,进而产气。
已有的人工乳配方在饲养乳鼠时,常有消化不良,胀气现象发生,且成本高,不易于推广应用。
CN108713636A公开了一种无菌大小鼠人工乳及其制备方法,属于动物人工饲养用乳制品技术领域。所述无菌大小鼠人工乳,以100mL计,由如下原料制成:婴儿配方奶粉8-9g、磷酸氢二钠1.2-1.3g、磷酸二氢钾0.1-0.15g、维生素复合物2.5-3.5g、兔乳18-22mL、余量为双蒸水。本发明还公开了上述无菌大小鼠人工乳的制备方法。本发明的无菌大小鼠人工乳,原料组成简单,材料易得,适口性好,能满足无菌大小鼠幼仔的营养需求,动物体重增加明显,人工哺乳的成活率提高。但是小鼠存活率有待进一步提高。
发明内容
为实现上述目的,本发明提供了一种无菌幼鼠专用人工乳及其制备方法。
一种无菌幼鼠专用人工乳,包括以下原料,以100mL计:
Figure BDA0003718526650000021
所述水果浆液的制备方法,包括以下步骤:将水果进行清洗、去皮、去核,然后将经处理的水果加入水中进行榨汁,过100-200目筛取滤液,得到水果浆液;
所述水果与水的浴比为1g:(5-10)mL;
所述水果为桃子、李子、苹果中的一种或两种以上混合物。优选的,所述水果由桃子、李子、苹果按质量比(1-3):(1-3):(1-3)混合而成。
所述海藻为海藻粉末,海藻粉末的粒径为300-400目;
所述蛋黄蛋白多肽的制备方法,包括以下步骤:
S1、将鸡蛋蛋黄加入混合溶剂中在室温下萃取1-4h,用冷冻离心机将固液分离,固体冷冻干燥,溶剂回收。将干燥后的固体磨碎,加入水搅拌均匀,冷冻离心机分离固液,取上清液,冷冻干燥,得到蛋黄蛋白;
S2、将蛋黄蛋白粉碎过80-100目筛,得到蛋黄蛋白粉末;将蛋黄蛋白粉末加入水中混合均匀并浸泡1h,再加入酶制剂,加热至40-50℃酶解1-5h,最后加热至100℃灭酶10-30min,冷却至室温后,过滤取上清液,浓缩、冷冻干燥,得到蛋黄蛋白多肽。
步骤S1中所述的混合溶剂由无水乙醇、正己烷按质量比(1-2):(1-2)混合而成;
步骤S1中所述鸡蛋蛋黄与混合溶剂的浴比为1g:(10-30)mL;
步骤S1中所述干燥后的固体与水的浴比为1g:(10-30)mL;
步骤S2中所述蛋黄蛋白粉末、水的浴比为1g:(20-50)mL;
所述酶制剂为碱性蛋白酶、脂肪酶中的一种或两种以上混合物。
所述酶制剂的用量为蛋黄蛋白粉末质量的2-5%。
驴奶中含有90%的水分、1.5%脂肪、1.8%蛋白质、6.3%乳糖、灰分0.4%。驴奶属于乳清蛋白乳类,乳清蛋白中含有β-乳球蛋白、ɑ-乳白蛋白、血清白蛋白、免疫球蛋白、乳铁蛋白、糖聚肽等,这些高生物活性的优质蛋白质,是必需氨基酸的最佳来源,同时提供丰富的维生素、矿物质,同时含有高生物活性益生素,调节消化、补充能量等作用。驴奶中蛋白质氨基酸种类齐全,含有婴幼儿必须的组氨酸;驴奶中还含有人体必需脂肪酸、富硒等活性物质,硒为幼鼠发育、生长不可缺少的物质,能激发免疫蛋白的产生,消除不利幼鼠的物质,具有提高免疫力,增强蛋白质的作用。
海藻中含有丰富的食物纤维、多种维他命、微量元素、二十多种人体必需氨基酸。其中食物纤维能有效促进幼鼠消化、促进排泄,避免体内有害细菌的生长,具有整场作用;含有主要的维他命B12、维生素C、维生素E、生物素、烟碱酸,具有促进人体新陈代谢、疾病预防的作用微量元素主要以钠、钾、钙、铁含量居多;主要的必需氨基酸含有牛磺酸、甲硫氨酸、胱氨酸等物质,有效促进幼鼠生长、且提高免疫力。
现有技术中无菌幼鼠专用人工乳常添加蛋白质,但是蛋白质常含有乳糖,幼鼠由于小肠黏膜缺乏乳糖酶,导致母乳中的乳糖在小肠无法被消化吸收,未消化的乳糖进入结肠后,被细菌发酵产生乳酸和其他有机酸等短链脂肪酸、二氧化碳和氢气,导致肠胃胀气、腹痛甚至腹泻等乳糖不耐症的症状,对哺乳动物有很大的影响,阻碍着养殖业的发展。本发明中添加水果浆液,水果浆液采用的原料主要是桃、杏、苹果,桃、杏、苹果中存在些许的乳糖酶,补充幼鼠所需的乳糖酶,有效将肠道中未消化的乳糖进行降解,缓解乳糖不耐性引起的腹泻,进一步改善幼鼠肠胃胀气、腹泻等现状,为无菌幼鼠的培育在增加可能性。
同时添加易被吸收的小分子肽,增加幼鼠营养,促进幼鼠生长,同时改善幼鼠肠胃胀气等现象。蛋黄多肽与蛋白质相比更容易被消化吸收,鸡蛋黄中含有促进骨骼成长的成分,可以通过增加造骨细胞的数量,强化骨骼生长动力,摄取促进骨形成的钙、胶原等成分帮助幼鼠成长。
但是整个酶制剂分子中,活性中心只占其中很小的组成部分,因此本发明引入金属离子,金属离子增加酶活性,使其便于与底物结合,使酶促反应更加顺利进行,缩短酶解时间、增加产率。
进一步优选的,所述蛋黄蛋白多肽的制备方法,包括以下步骤:
S1、将鸡蛋蛋黄加入混合溶剂中在室温下萃取1-4h,用冷冻离心机将固液分离,固体冷冻干燥,溶剂回收。将干燥后的固体磨碎,加入水搅拌均匀,冷冻离心机分离固液,取上清液,冷冻干燥,得到蛋黄蛋白;
S2、将蛋黄蛋白粉碎过80-100目筛,得到蛋黄蛋白粉末;将蛋黄蛋白粉末加入水中混合均匀并浸泡1h,再加入蛋壳膜固定化酶,加热至40-50℃酶解1-5h,最后加热至100℃灭酶10-30min,冷却至室温后,过滤取上清液,浓缩、冷冻干燥,得到蛋黄蛋白多肽。
所述蛋壳膜固定化酶的用量为蛋黄蛋白粉末质量的2-5%。
所述蛋壳膜固定化酶的制备方法,包括以下步骤:
(1)将鸡蛋壳清洗干净后剥去蛋壳,得到蛋壳膜;将蛋壳膜加入0.2-0.5mol/L盐酸中浸泡20-40min,去除残留的钙杂质,最后取出蛋壳膜、清洗、干燥,得到预处理蛋壳膜;
(2)将预处理蛋壳膜加入0.5-2wt%戊二醛水溶液中,在20-25℃反应1-2h,反应后,将预处理蛋壳膜取出,用0.05mol/L、pH=7的PBS溶液进行清洗,得到醛基化蛋壳膜,最后将醛基化蛋壳膜置于0.05mol/L、pH=7的PBS溶液中储存备用;
(3)将醛基化蛋壳膜加入5-8mg/mL酶溶液中,20-25℃反应1-2h,反应结束后,采用0.05mol/L、pH=7的PBS溶液进行清洗,得到酶处理蛋壳膜,最后将酶处理蛋壳膜置于0.05mol/L、pH=7的PBS溶液中储存备用;
(4)将3-5g步骤(3)得到的酶处理蛋壳膜加入300-500mL甲苯中混合均匀,然后加入30-55g苯甲酚,在20-25℃反应1-2h,然后用鼓泡氩气浸泡20-30min去除溶解氧,最后在紫外光下照射1-4min,然后加入5-10mL金属制剂溶液,在紫外光下持续照射10-20min,反应结束后,分别采用甲苯、水、乙醇进行洗涤,最后低温干燥,得到蛋壳膜固定化酶。
所述步骤(1)中蛋壳膜、盐酸的浴比为1g:(10-30)mL;
所述步骤(2)中预处理蛋壳膜、1wt%戊二醛水溶液的浴比为(1-5)g:(100-200)mL;
所述步骤(3)中所述酶溶液为将酶制剂加入0.05mol/L、pH=7的PBS溶液中混合均匀,得到5-8mg/mL酶溶液;
所述步骤(4)中所述金属制剂溶液为将15-20g金属制剂加入300-400mL二甲基亚砜中混合均匀得到金属制剂溶液;
所述金属制剂为锌离子、铅离子中的一种或两种以上混合物。优选的,所述金属制剂由锌离子、铅离子按质量比(1-3):(1-3)混合而成。
所述锌离子为氯化锌;
所述铅离子为氯化铅。
所述步骤(4)中紫外光照射条件为250-380nm、27.9mWcm-2
在上述基础上,本发明人以蛋壳膜为载体、以碱性蛋白酶、脂肪酶作为酶制剂,采用金属离子作为激活剂制备蛋壳膜固定化酶,并将蛋壳膜固定化酶应用于蛋黄蛋白多肽的制备过程中,有效促进蛋壳膜固定化酶与蛋黄蛋白粉末的结合,促进酶解反应,缩短酶解时间、增加蛋黄蛋白多肽的产率,小分子量的蛋黄蛋白多肽以被幼鼠肠道吸收,促进幼鼠生长,改善幼鼠吸收障碍造成的肠胃胀气、腹泻、腹部发黑等现象,进而增加小鼠的成活率。
该无菌幼鼠专用人工乳的制备方法,包括以下步骤:将驴奶、蛋黄蛋白多肽、水果浆液、维生素A、维生素D、维生素E采用50KGy60Co辐照进行处理1-5min;小鼠血清、无菌水通过110-125℃高压灭菌进行处理30-90min,并按前述原料组成成分的比例进行混匀,完成配制。
本发明的有益效果:
1、本发明公开了一种无菌幼鼠专用人工乳,以驴奶、蛋黄蛋白多肽、小鼠血清、水果浆液、维生素A、维生素D、维生素E、海藻、无菌水为原料制备无菌幼鼠专用人工乳,取消牛奶、氨基酸、维生素等单独添加的成分,添加驴奶、蛋黄蛋白多肽、水果浆液、海藻等物质,各物质之间相互作用,显著促进幼鼠发育、生长,能激发免疫蛋白的产生,消除不利幼鼠的物质,具有提高免疫力,增强蛋白质的作用,增加幼鼠的成活率、减少腹泻、胀气等问题。
2、本发明以蛋壳膜为载体、以碱性蛋白酶、脂肪酶作为酶制剂,采用金属离子作为激活剂制备蛋壳膜固定化酶,并将蛋壳膜固定化酶应用于蛋黄蛋白多肽的制备过程中,有效促进蛋壳膜固定化酶与蛋黄蛋白粉末的结合,促进酶解反应,缩短酶解时间、增加蛋黄蛋白多肽的产率,小分子量的蛋黄蛋白多肽以被幼鼠肠道吸收,促进幼鼠生长,改善幼鼠吸收障碍造成的肠胃胀气、腹泻、腹部发黑等现象,进而增加小鼠的成活率。
具体实施方式
各实施例中采用物质的来源:
驴奶来自于现场采集的新鲜驴奶。
小鼠血清,货号:SHSJ0061,购买自滁州市进优生物技术有限公司明光分公司。
碱性蛋白酶,产品编号:P824138,酶活力:200u/mg,购买自上海麦克林生化科技有限公司。
脂肪酶,产品编号:L812480,酶活力10万U/g,购买自上海麦克林生化科技有限公司。
实施例1
一种无菌幼鼠专用人工乳,包括以下原料,以100mL计:
Figure BDA0003718526650000071
所述水果浆液的制备方法,包括以下步骤:将水果进行清洗、去皮、去核,然后将经处理的水果加入水中进行榨汁,过200目筛取滤液,得到水果浆液;
所述水果与水的浴比为1g:5mL;
所述水果由桃子、李子、苹果按质量比1:1:1混合而成。
所述海藻为海藻粉末,海藻粉末的粒径为400目;
所述蛋黄蛋白多肽的制备方法,包括以下步骤:
S1、将蛋黄加入混合溶剂中在室温下萃取4h,用冷冻离心机将固液分离,固体冷冻干燥,溶剂回收。将干燥后的固体磨碎,加入水搅拌一定时间,冷冻离心机分离固液,取上清液,冷冻干燥,得到蛋黄蛋白;
S2、将蛋黄蛋白粉碎过100目筛,得到蛋黄蛋白粉末;将蛋黄蛋白粉末加入水中混合均匀并浸泡1h,再加入酶制剂,加热至50℃酶解1h,最后加热至100℃灭酶20min,冷却至室温后,过滤取上清液,浓缩、冷冻干燥,得到蛋黄蛋白多肽。
步骤S1中所述的混合溶剂由无水乙醇、正己烷按质量比1:2混合而成;
步骤S1中所述蛋黄与混合溶剂的浴比为1g:15mL;
步骤S2中所述蛋黄蛋白粉末、水的浴比为1g:30mL;
所述酶制剂由碱性蛋白酶、脂肪酶按质量比1:2混合而成。
所述酶制剂的用量为蛋黄蛋白粉末质量的3%。
所述无菌幼鼠专用人工乳的制备方法,包括以下步骤:将驴奶、蛋黄蛋白多肽、水果浆液、维生素A、维生素D、维生素E、海藻采用50KGy 60Co辐照进行处理5min;小鼠血清、无菌水通过121℃高压灭菌进行处理60min,并按前述原料组成成分的比例进行混匀,完成配制。
实施例2
一种无菌幼鼠专用人工乳,包括以下原料,以100mL计:
Figure BDA0003718526650000091
所述水果浆液的制备方法,包括以下步骤:将水果进行清洗、去皮、去核,然后将经处理的水果加入水中进行榨汁,过200目筛取滤液,得到水果浆液;
所述水果与水的浴比为1g:5mL;
所述水果由桃子、李子、苹果按质量比1:1:1混合而成。
所述海藻为海藻粉末,海藻粉末的粒径为400目;
所述无菌幼鼠专用人工乳的制备方法,包括以下步骤:将驴奶、水果浆液、维生素A、维生素D、维生素E、海藻采用50KGy 60Co辐照进行处理5min;小鼠血清、无菌水通过121℃高压灭菌进行处理60min,并按前述原料组成成分的比例进行混匀,完成配制。
实施例3
一种无菌幼鼠专用人工乳,包括以下原料,以100mL计:
Figure BDA0003718526650000092
Figure BDA0003718526650000101
所述海藻为海藻粉末,海藻粉末的粒径为400目;
所述蛋黄蛋白多肽的制备方法,包括以下步骤:
S1、将蛋黄加入混合溶剂中在室温下萃取4h,用冷冻离心机将固液分离,固体冷冻干燥,溶剂回收。将干燥后的固体磨碎,加入水搅拌均匀,冷冻离心机分离固液,取上清液,冷冻干燥,得到蛋黄蛋白;
S2、将蛋黄蛋白粉碎过100目筛,得到蛋黄蛋白粉末;将蛋黄蛋白粉末加入水中混合均匀并浸泡1h,再加入酶制剂,加热至50℃酶解1h,最后加热至100℃灭酶20min,冷却至室温后,过滤取上清液,浓缩、冷冻干燥,得到蛋黄蛋白多肽。
步骤S1中所述的混合溶剂由无水乙醇、正己烷按质量比1:2混合而成;
步骤S1中所述蛋黄与混合溶剂的浴比为1g:15mL;
步骤S1中所述干燥后的固体与水的浴比为1g:15mL;
步骤S2中所述蛋黄蛋白粉末、水的浴比为1g:30mL;
所述酶制剂由碱性蛋白酶、脂肪酶按质量比1:2混合而成。
所述酶制剂的用量为蛋黄蛋白粉末质量的3%。
所述无菌幼鼠专用人工乳的制备方法,包括以下步骤:将驴奶、蛋黄蛋白多肽、维生素A、维生素D、维生素E、海藻采用50KGy 60Co辐照进行处理5min;小鼠血清、无菌水通过121℃高压灭菌进行处理60min,并按前述原料组成成分的比例进行混匀,完成配制。
实施例4
与实施例1基本相同,区别仅仅在于:所述蛋黄蛋白多肽的制备方法,包括以下步骤:
S1、将鸡蛋蛋黄加入混合溶剂中在室温下萃取4h,用冷冻离心机将固液分离,固体冷冻干燥,溶剂回收。将干燥后的固体磨碎,加入水搅拌均匀,冷冻离心机分离固液,取上清液,冷冻干燥,得到蛋黄蛋白;
S2、将蛋黄蛋白粉碎过100目筛,得到蛋黄蛋白粉末;将蛋黄蛋白粉末加入水中混合均匀并浸泡1h,再加入蛋壳膜固定化酶,加热至50℃酶解1h,最后加热至100℃灭酶20min,冷却至室温后,过滤取上清液,浓缩、冷冻干燥,得到蛋黄蛋白多肽。
步骤S1中所述的混合溶剂由无水乙醇、正己烷按质量比1:2混合而成;
步骤S1中所述蛋黄与混合溶剂的浴比为1g:15mL;
步骤S1中所述干燥后的固体与水的浴比为1g:15mL;
步骤S2中所述蛋黄蛋白粉末、水的浴比为1g:30mL;
所述蛋壳膜固定化酶的用量为蛋黄蛋白粉末质量的3%。
所述蛋壳膜固定化酶的制备方法,包括以下步骤:
(1)将鸡蛋壳清洗干净后剥去蛋壳,得到蛋壳膜;将蛋壳膜加入0.5mol/L盐酸中浸泡30min,去除残留的钙杂质,最后取出蛋壳膜、清洗、干燥,得到预处理蛋壳膜;
(2)将预处理蛋壳膜加入1wt%戊二醛水溶液中,在25℃反应2h,反应结束后,将预处理蛋壳膜取出,用0.05mol/L、pH=7的PBS溶液进行清洗,得到醛基化蛋壳膜,最后将醛基化蛋壳膜置于0.05mol/L、pH=7的PBS溶液中储存备用;
(3)将醛基化蛋壳膜加入8mg/mL酶溶液中,25℃反应2h,反应结束后,采用0.05mol/L、pH=7的PBS溶液进行清洗,得到酶处理蛋壳膜,最后将酶处理蛋壳膜置于0.05mol/L、pH=7的PBS溶液中储存备用;
(4)将5g步骤(3)得到的酶处理蛋壳膜加入500mL甲苯中混合均匀,然后加入55g苯甲酚,在25℃反应2h,然后用鼓泡氩气浸泡30min去除溶解氧,最后在紫外光下照射3min,然后加入10mL金属制剂溶液,在紫外光下持续照射12min,反应结束后,分别采用甲苯、水、无水乙醇进行洗涤,最后低温干燥,得到蛋壳膜固定化酶。
所述步骤(1)中蛋壳膜、盐酸的浴比为1g:15mL;
所述步骤(2)中预处理蛋壳膜、戊二醛水溶液的浴比为1g:40mL;
所述步骤(3)中所述酶溶液为将酶制剂加入0.05mol/L、pH=7的PBS溶液中混合均匀,得到8mg/mL酶溶液;所述酶制剂由碱性蛋白酶、脂肪酶按质量比1:2混合而成。
所述步骤(4)中所述金属制剂溶液为将20g金属制剂加入400mL二甲基亚砜中混合均匀得到金属制剂溶液;
所述金属制剂由锌离子、铅离子按质量比2:1混合而成。
所述锌离子为氯化锌;所述铅离子为氯化铅。
所述步骤(4)中紫外光照射条件为365nm、27.9mWcm-2
实施例5
与实施例4基本相同,区别仅仅在于:所述蛋黄蛋白多肽的制备方法,包括以下步骤:
S1、将鸡蛋蛋黄加入混合溶剂中在室温下萃取4h,用冷冻离心机将固液分离,固体冷冻干燥,溶剂回收。将干燥后的固体磨碎,加入水搅拌均匀,冷冻离心机分离固液,取上清液,冷冻干燥,得到蛋黄蛋白;
S2、将蛋黄蛋白粉碎过100目筛,得到蛋黄蛋白粉末;将蛋黄蛋白粉末加入水中混合均匀并浸泡1h,再加入蛋壳膜固定化酶,加热至50℃酶解1h,最后加热至100℃灭酶20min,冷却至室温后,过滤取上清液,浓缩、冷冻干燥,得到蛋黄蛋白多肽。
步骤S1中所述的混合溶剂由无水乙醇、正己烷按质量比1:2混合而成;
步骤S1中所述蛋黄与混合溶剂的浴比为1g:15mL;
步骤S1中所述干燥后的固体与水的浴比为1g:15mL;
步骤S2中所述蛋黄蛋白粉末、水的浴比为1g:30mL;
所述蛋壳膜固定化酶的用量为蛋黄蛋白粉末质量的3%。
所述蛋壳膜固定化酶的制备方法,包括以下步骤:
(1)将鸡蛋壳清洗干净后剥去蛋壳,得到蛋壳膜;将蛋壳膜加入0.5mol/L盐酸中浸泡30min,去除残留的钙杂质,最后取出蛋壳膜、清洗、干燥,得到预处理蛋壳膜;
(2)将预处理蛋壳膜加入1wt%戊二醛水溶液中,在25℃反应2h,反应后,将预处理蛋壳膜取出,用0.05mol/L、pH=7的PBS溶液进行清洗,得到醛基化蛋壳膜,最后将醛基化蛋壳膜置于0.05mol/L、pH=7的PBS溶液中储存备用;
(3)将醛基化蛋壳膜加入8mg/mL酶溶液中,25℃反应2h,反应后,采用0.05mol/L、pH=7的PBS溶液进行清洗,最后低温干燥,得到蛋壳膜固定化酶,最后将酶处理蛋壳膜置于0.05mol/L、pH=7的PBS溶液中储存备用;
所述步骤(1)中蛋壳膜、盐酸的浴比为1g:15mL;
所述步骤(2)中预处理蛋壳膜、1wt%戊二醛水溶液的浴比为1g:40mL;
所述步骤(3)中所述酶溶液为将酶制剂加入0.05mol/L、pH=7的PBS溶液中混合均匀,得到8mg/mL酶溶液;所述酶制剂由碱性蛋白酶、脂肪酶按质量比1:2混合而成。
实施例6
与实施例4基本相同,其区别仅仅在于:所述金属制剂为锌离子;所述锌离子为氯化锌。
实施例7
与实施例4基本相同,其区别仅仅在于:所述金属制剂为铅离子;所述铅离子为氯化铅。
测试例1
喂养由SPF级KM孕鼠经剖腹产手术而得的210只无菌KM小鼠,随机分配为7组,对幼鼠分别进行饲喂各实施例制备的无菌幼鼠专用人工乳,总共饲养21天,其余饲养条件相同。记载21天后幼鼠的成活率,体重。
表1幼鼠的成活率、体重测试结果
成活率/% 体重/g
实施例1 40 9
实施例2 37 7
实施例3 23 5
实施例4 63 13
实施例5 46 10
实施例6 60 12
实施例7 53 12
由表1可知,实施例4的成活率、体重显著优于实施例1-3,其可能的原因是驴奶属于乳清蛋白乳类,乳清蛋白中含有β-乳球蛋白、ɑ-乳白蛋白、血清白蛋白、免疫球蛋白、乳铁蛋白、糖聚肽等,这些高生物活性的优质蛋白质,是必需氨基酸的最佳来源,同时提供丰富的维生素、矿物质,同时含有高生物活性益生素,调节消化、补充能量等作用。但是蛋白质常含有乳糖,幼鼠由于小肠黏膜缺乏乳糖酶,导致母乳中的乳糖在小肠无法被消化吸收,未消化的乳糖进入结肠后,被细菌发酵产生乳酸和其他有机酸等短链脂肪酸、二氧化碳和氢气,导致肠胃胀气、腹痛甚至腹泻等乳糖不耐症的症状,对哺乳动物有很大的影响,阻碍着养殖业的发展。本发明中添加水果浆液,水果浆液采用的原料主要是桃、杏、苹果,桃、杏、苹果中存在些许的乳糖酶,补充幼鼠所需的乳糖酶,有效将肠道中未消化的乳糖进行降解,缓解乳糖不耐性引起的腹泻,进一步改善幼鼠肠胃胀气、腹泻等现状,为无菌幼鼠的培育在增加可能性。海藻中含有丰富的食物纤维、多种维他命、微量元素、二十多种人体必需氨基酸。其中食物纤维能有效促进幼鼠消化、促进排泄,避免体内有害细菌的生长,具有整场作用;主要的必需氨基酸含有牛磺酸、甲硫氨酸、胱氨酸等物质,有效促进幼鼠生长、且提高免疫力。本发明以驴奶、蛋黄蛋白多肽、小鼠血清、水果浆液、维生素A、维生素D、维生素E、海藻、无菌水为原料制备无菌幼鼠专用人工乳,取消牛奶、氨基酸、维生素等单独添加的成分,添加驴奶、蛋黄蛋白多肽、水果浆液、海藻等物质,各物质之间相互作用,显著促进幼鼠发育、生长,能激发免疫蛋白的产生,消除不利幼鼠的物质,具有提高免疫力,增强蛋白质的作用,增加幼鼠的成活率、减少腹泻、胀气等问题。
测试例2
参照(《小麦蛋白低苦味肽的制备及其脱苦机理研究》,刘伯业,博士论文)中第2.3.7节的测试方法测试各个实施例中蛋黄蛋白多肽中多肽分子量分布。
表2蛋白多肽的测试结果
Figure BDA0003718526650000151
由表2可知,采用实施例4制备的蛋黄蛋白多肽中小于2000道尔顿的多肽分子量的比例占96.2,显著优于实施例1、实施例5,可能的原因是:本发明以蛋壳膜为载体、以碱性蛋白酶、脂肪酶作为酶制剂,采用金属离子作为激活剂制备蛋壳膜固定化酶,并将蛋壳膜固定化酶应用于蛋黄蛋白多肽的制备过程中,有效促进蛋壳膜固定化酶与蛋黄蛋白粉末的结合,促进酶解反应,缩短酶解时间、增加蛋黄蛋白多肽的产率,小分子量的蛋黄蛋白多肽以被幼鼠肠道吸收,促进幼鼠生长,改善幼鼠吸收障碍造成的肠胃胀气、腹泻、腹部发黑等现象,进而增加小鼠的成活率。
实施例4中制备的蛋黄蛋白多肽中小于2000道尔顿的多肽分子量的含量显著优于实施例6-7,归因于锌离子、铅离子协同作用,显著改善酶制剂的酶活力,促进酶促反应顺利进行,增加小分子肽的制备。

Claims (10)

1.一种无菌幼鼠专用人工乳,其特征在于:包括以下原料:驴奶、蛋黄蛋白多肽、小鼠血清、水果浆液、维生素A、维生素D、维生素E、海藻、水。
2.如权利要求1所述的无菌幼鼠专用人工乳,其特征在于:包括以下原料,以100mL计:
Figure FDA0003718526640000011
3.如权利要求1所述的无菌幼鼠专用人工乳,其特征在于:所述水果浆液的制备方法,包括以下步骤:将水果进行清洗、去皮、去核,然后将经处理的水果加入水中进行榨汁,过筛取滤液,得到水果浆液;
所述水果为桃子、李子、苹果中的一种或两种以上混合物。
4.如权利要求1所述的无菌幼鼠专用人工乳,其特征在于所述蛋黄蛋白多肽的制备方法,包括以下步骤:
S1、将蛋黄加入混合溶剂中在室温下萃取,用冷冻离心机将固液分离,固体冷冻干燥,溶剂回收;将干燥后的固体磨碎,加入水搅拌均匀,冷冻离心机分离固液,取上清液,冷冻干燥,得到蛋黄蛋白;
S2、将蛋黄蛋白粉碎过筛,得到蛋黄蛋白粉末;将蛋黄蛋白粉末加入水中混合均匀并浸泡,再加入蛋壳膜固定化酶,加热酶解,最后灭酶,冷却至室温后,过滤取上清液,浓缩、冷冻干燥,得到蛋黄蛋白多肽。
5.如权利要求1所述的无菌幼鼠专用人工乳,其特征在于:
步骤S1中所述的混合溶剂由无水乙醇、正己烷按质量比(1-2):(1-2)混合而成;
步骤S1中所述蛋黄与混合溶剂的浴比为1g:(10-30)mL;
步骤S1中所述干燥后的固体与水的浴比为1g:(10-30)mL;
步骤S2所述蛋黄蛋白粉末、水的浴比为1g:(20-50)mL。
6.如权利要求4所述的无菌幼鼠专用人工乳,其特征在于:所述蛋壳膜固定化酶的用量为蛋黄蛋白粉末重量的2-5%。
7.如权利要求4所述的无菌幼鼠专用人工乳,其特征在于:所述蛋壳膜固定化酶的制备方法,包括以下步骤:
(1)将鸡蛋壳清洗干净后剥去蛋壳,得到蛋壳膜;将蛋壳膜加入盐酸中浸泡,去除残留的钙杂质,最后取出蛋壳膜、清洗、干燥,得到预处理蛋壳膜;
(2)将预处理蛋壳膜加入戊二醛水溶液中,在室温反应,反应后,将预处理蛋壳膜取出,用PBS溶液进行清洗,得到醛基化蛋壳膜,最后将醛基化蛋壳膜置于PBS溶液中储存备用;
(3)将醛基化蛋壳膜加入酶溶液中,加热反应,反应结束后,采用PBS溶液进行清洗,得到酶处理蛋壳膜,最后将酶处理蛋壳膜置于PBS溶液中储存备用;
(4)将步骤(3)得到的酶处理蛋壳膜加入甲苯中混合均匀,然后加入苯甲酚,在室温反应,然后用鼓泡氩气浸泡去除溶解氧,最后在紫外光下照射,然后加入金属制剂溶液,在紫外光下持续照射,反应结束后,分别采用甲苯、水、乙醇进行洗涤,最后低温干燥,得到蛋壳膜固定化酶。
8.如权利要求7所述的无菌幼鼠专用人工乳,其特征在于:所述步骤(1)中蛋壳膜、盐酸的浴比为1g:(10-30)mL;
所述步骤(2)中预处理蛋壳膜、1wt%戊二醛水溶液的浴比为(1-5)g:(100-200)mL;
所述步骤(3)中所述酶溶液为将酶制剂加入0.05mol/L、pH=7的PBS溶液中混合均匀,得到5-8mg/mL酶溶液;
所述酶制剂为碱性蛋白酶、脂肪酶中的一种或两种以上混合物;
所述步骤(4)中所述金属制剂溶液为将15-20g金属制剂加入300-400mL二甲基亚砜中混合均匀得到金属制剂溶液;
所述步骤(4)中紫外光照射条件为250-380nm、27.9mWcm-2
9.如权利要求8所述的无菌幼鼠专用人工乳,其特征在于:所述金属制剂为锌离子、铅离子中的一种或两种以上混合物。
10.如权利要求1-9任一项所述的无菌幼鼠专用人工乳的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:将驴奶、蛋黄蛋白多肽、水果浆液、维生素A、维生素D、维生素E辐照处理,小鼠血清、无菌水通过灭菌处理,并按前述原料组成成分的比例进行混匀,完成配制。
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