CN112890064A - 一种复合胶原蛋白肽固体饮料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的技术方案公开了一种复合胶原蛋白肽固体饮料，包括动物骨胶原蛋白肽粉、谷类胶原蛋白肽粉、海洋软体动物胶原蛋白肽粉和γ‑氨基丁酸；所述动物骨胶原蛋白肽粉，包括鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉和鹿骨胶原蛋白肽粉；所述谷类胶原蛋白肽粉，包括小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉和火麻仁低聚肽粉；所述海洋软体动物胶原蛋白肽粉，包括海参肽粉和牡蛎肽粉。通过不同种类的胶原蛋白肽粉和γ‑氨基丁酸的协同作用，能够实现显著的提高免疫力、改善机体微循环、改善机体状态、提高骨密度、强健消化道等效果。
Description
技术领域
本发明涉及胶原蛋白肽食品加工技术领域，具体涉及一种复合胶原蛋白肽固体饮料及其制备方法。
背景技术
肽是两个或两个以上的氨基酸以肽键相连的化合物，是介于氨基酸和蛋白质的中间物质，是蛋白质的功能片段和结构片段，是蛋白质的活性基因部分，是生命的营养物质和基础物质。人体内存在多种多样、成干上万种的肽，涉及人体的激素、神经、细胞生长和生殖等领域，主导着人体的生长、发育、繁衍、代谢和行为等生命过程。它们既是人体组织细胞再生的基础物质，又具有独特的生理功能：可促进细胞的新陈代谢，修复人体病变细胞；肽还和免疫功能直接相关，是机体完成免疫功能和进行免疫调节的重要活性物质。故肽类物质在保证生理功能的正常进行和维护机体健康方面起着重要作用。
动物骨胶原蛋白肽粉包括鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉、鹿骨胶原蛋白肽粉等。鲜牛骨胶原蛋白肽粉是以新鲜牛骨为原料，将大分子蛋白质通过酶解作用而制成的高纯度胶原蛋白肽粉。牦牛骨胶原蛋白肽粉是以新鲜牦牛骨为原料，经过蛋白酶酶解，再经过多级纯化方法所得到的低分子量的寡肽混合物。山羊骨胶原蛋白肽粉以新鲜山羊骨为原料，通过正己烷混合脱脂粉碎，脱钙处理后经蛋白酶裂解，再经过多级纯化得到低分子量的山羊骨胶原肽粉。鹿骨胶原蛋白肽粉以新鲜鹿骨为原料，通过脱脂、粉碎、脱钙处理后经蛋白酶裂解，再经过多级纯化得到低分子量的鹿骨胶原肽粉。
谷类胶原蛋白肽粉包括小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉和火麻仁低聚肽粉，小米低聚肽粉是以小米为原料，利用低温复合酶解等多环节生物技术，提取的富含多种氨基酸及矿物质的小米低聚肽粉。藜麦米低聚肽粉是以藜麦米为原料，经过脱脂、粉碎、酶解、干燥、包装等工艺加工而成的小分子肽粉。火麻仁低聚肽是从火麻仁蛋白粉中，经过低温复合酶解技术提取的小分子肽。
海洋软体动物胶原蛋白肽粉包含海参肽粉、牡蛎肽粉，海参肽粉是海参经蛋白酶水解并分离提纯后得到的小分子肽，主要是胶原肽类，另含有神经肽、糖肽及抗菌肽等多种活性肽。牡蛎肽粉是以牡蛎肉为原料，通过采用低温复合酶解等多环节生物技术制得的小分子活性肽，最大程度的保留了牡蛎中的牛磺酸、多糖、矿物质等有效成分。
γ-氨基丁酸是中枢神经系统里面非常重要的一种神经传导物质，对于身体多种的功能调节有很好的作用。氨基丁酸是以天然的形式存在于动植物体内的一种非蛋白物质，对身体有着重要的作用，比如能够改善精神上的不安，缓解各种不良情绪，改善精神压力，促进睡眠质量。
单品类的肽效果比较单一，无法达到明显的机体整体调理的目的。且为了实现相应的肽粉的效果，往往需要极大量的摄入肽粉，以至于在未产生有益效果之前，就对人体产生其他的危害，例如消化系统产生极大负担，重金属、微量元素过量等，吸收效果差。因此，现有的肽粉并没有明显的功效，需要进一步的改进肽粉的配方及制备方法，以最大化的发挥肽粉的功效。
发明内容
为了解决现有的单一肽粉功效性差的技术问题，本发明提供了一种复合胶原蛋白肽固体饮料，涵盖动物骨胶原蛋白肽粉、谷类胶原蛋白肽粉和海洋软体动物胶原蛋白肽粉；，通过4种动物骨胶原蛋白肽粉、3种谷类胶原蛋白肽粉和2种海洋软体动物胶原蛋白肽粉，并添加γ-氨基丁酸配置而成复合胶原蛋白肽固体饮料，实现不同种类肽粉的协同作用，显著的提高免疫力、改善机体微循环、改善机体状态、提高骨密度、强健消化道等效果，通过合理搭配达到协同及增强效果的作用。
本发明的技术方案是：一种复合胶原蛋白肽固体饮料，按照重量份数计，包括动物骨胶原蛋白肽粉35～40份、谷类胶原蛋白肽粉30～35份、海洋软体动物胶原蛋白肽粉10～15份和γ-氨基丁酸0.1～0.4份。
所述动物骨胶原蛋白肽粉，按照重量份数计，包括鲜牛骨胶原蛋白肽粉16～18份、牦牛骨胶原蛋白肽粉11～14份、山羊骨胶原蛋白肽粉5～7份和鹿骨胶原蛋白肽粉2～4份；
所述谷类胶原蛋白肽粉，按照重量份数计，包括小米低聚肽粉15～18份、藜麦米低聚肽粉10～13份和火麻仁低聚肽粉5～8份；
所述海洋软体动物胶原蛋白肽粉，按照重量份数计，包括海参肽粉2～5份和牡蛎肽粉7～10份。
优选地，所述复合胶原蛋白肽固体饮料，按照重量份数计，包括鲜牛骨胶原蛋白肽粉17份、牦牛骨胶原蛋白肽粉13份、山羊骨胶原蛋白肽粉5份、鹿骨胶原蛋白肽粉3份、小米低聚肽粉16份、藜麦米低聚肽粉12份、火麻仁低聚肽粉7份、海参肽粉3份、牡蛎肽粉8份和γ-氨基丁酸0.3份。
本发明还提供了所述复合胶原蛋白肽固体饮料的制备方法，包括以下步骤：
S1，制备动物骨胶原蛋白肽粉浸提液，按照重量份数，称取鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉和鹿骨胶原蛋白肽粉进行混合，然后将混合后的动物骨胶原蛋白肽粉加入3倍质量的水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为1h，通过50目筛网过滤后，得到动物骨胶原蛋白肽粉浸提液；
S2，制备海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液，按照重量份数，称取海参肽粉和牡蛎肽粉进行混合，然后将混合后的海洋软体动物胶原蛋白肽粉加入3倍质量的水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为1h，通过50目筛网过滤后，得到海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液；
S3，制备谷类胶原蛋白肽粉浸提液，按照重量份数，称取小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉和火麻仁低聚肽粉进行混合，然后将混合后的谷类胶原蛋白肽粉加入4倍质量的水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为2h，通过50目筛网过滤后，得到谷类胶原蛋白肽粉浸提液；
S4，制备复合胶原蛋白肽浓缩液，按照重量份数，将S1制备的动物骨胶原蛋白肽粉浸提液、S2制备的海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液、S3制备的谷类胶原蛋白肽粉浸提液和γ-氨基丁酸混合均匀，放入低温真空浓缩器中进行真空浓缩处理，真空度为0.02Mpa，温度为20℃，进行浓缩处理1h，得到复合胶原蛋白肽浓缩液；
S5，制备复合胶原蛋白肽固体饮料，将S4制备的复合胶原蛋白肽浓缩液进行喷雾干燥，进风温度120℃，进料流速0.2L/h，得到复合胶原蛋白肽固体粉末，分装后得到复合胶原蛋白肽固体饮料。
进一步地，所述鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉、鹿骨胶原蛋白肽粉、小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉、火麻仁低聚肽粉、海参肽粉和牡蛎肽粉为商品肽粉。
进一步地，所述鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉、鹿骨胶原蛋白肽粉、小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉、火麻仁低聚肽粉、海参肽粉和牡蛎肽粉的制备方法，包括以下步骤：
T1，脱脂，分别将鲜牛骨、牦牛骨、山羊骨、鹿骨、海参和牡蛎粉碎至体积为1～2cm3的碎块，然后以CO2超临界萃取的方式进行脱脂，分别得到脱脂后的鲜牛骨、牦牛骨、山羊骨、鹿骨、海参和牡蛎；分别将小米、藜麦米和火麻仁以CO2超临界萃取的方式进行脱脂，分别得到脱脂后的小米、藜麦米和火麻仁；
T2，粉碎，分别将脱脂后的鲜牛骨、牦牛骨、山羊骨、鹿骨、海参、牡蛎、小米、藜麦米和火麻仁通入液氮进行研磨，分别得到鲜牛骨粉、牦牛骨粉、山羊骨粉、鹿骨粉、海参粉、牡蛎粉、小米粉、藜麦米粉和火麻仁粉；
T3，初级浸提，分别将1g的鲜牛骨粉、牦牛骨粉、山羊骨粉、鹿骨粉、海参粉、牡蛎粉、小米粉、藜麦米粉和火麻仁粉置于10～20ml Tris-HCl缓冲溶液中，在15～30℃以匀浆器研磨20min，3400～5000转/min离心15～25min，取上清液，重复提取2-3次，合并上清液，回收溶剂，得到热不稳定性蛋白；再分别将1g的鲜牛骨粉、牦牛骨粉、山羊骨粉、鹿骨粉、海参粉、牡蛎粉、小米粉、藜麦米粉和火麻仁粉置于10～20ml Tris-HCl缓冲溶液中，在100～150℃的条件下提取1.5～2.5h，3400-5000转/min离心15～25min，取上清液，重复提取2-3次，合并上清液，回收溶剂，得到热稳定性蛋白；
T4，纯化，将热不稳定性蛋白和热稳定性蛋白按照质量比为1:(0.5～1.5)混合，以葡聚糖凝胶柱G-50纯化，然后进行冷冻干燥，分别得到鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉、鹿骨胶原蛋白肽粉、小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉、火麻仁低聚肽粉、海参肽粉和牡蛎肽粉。
进一步地，所述S1中CO2超临界萃取的条件为：压力为15-35MPa，温度为20-25℃，时间为100-140min，CO2流量为15-25L/min。
每种动物骨胶原蛋白肽粉、谷类胶原蛋白肽粉或海洋软体动物胶原蛋白肽粉单独服用时，在人体内的吸收利用度低。本发明中的使用的4种动物骨胶原蛋白肽粉的组合具有协同作用，可更好的促进成骨细胞增殖、促进伤口愈合、调节免疫功能、清除自由基等作用。本发明中3种谷类胶原蛋白肽粉的组合具有协同作用，可更好的提供身体所必需的氨基酸，改善身体的酸碱平衡，缓解血管的压力，促进胰岛素分泌调节血糖，补充丰富的铁、钙、镁、磷、钾、锌等矿物元素。本发明中2种海洋生物肽粉组合具有协同作用，可抗疲劳、提高免疫力、延缓皮肤衰老、美白、抑制癌细胞、预防动脉粥样硬化、增强男性功能、辅助降血糖、降血压等。此外，本发明中动物骨胶原蛋白肽粉、谷类胶原蛋白肽粉、海洋软体动物胶原蛋白肽粉和γ-氨基丁酸之间具有协同作用，通过合理的适量的搭配，实现1+1＞2的效果，通过适量服用本发明的复合胶原蛋白肽固体饮料，每次服用25g，每天2次，即可显著的提高免疫力、改善机体微循环、改善机体状态、提高骨密度、强健消化道。无需大量摄入复合胶原蛋白肽固体饮料，因此，重金属或有害物质就不容易超标，且人体的肝肾不会超负荷运转，有利于身体健康。
采用上述技术方案，本发明实现的有益效果如下：
(1)本发明创新性的选取动物骨胶原蛋白肽粉、谷类胶原蛋白肽粉、海洋软体动物胶原蛋白肽粉和γ-氨基丁酸配置而成复合胶原蛋白肽固体饮料，获得功效全面、适用性广、效果显著的复合肽粉组合，达到不同种类的胶原蛋白肽粉和γ-氨基丁酸的协同作用，实现1+1＞2的效果，能够实现显著的提高免疫力、改善机体微循环、改善机体状态、提高骨密度、强健消化道等效果。
(2)本发明通过将动物骨胶原蛋白肽粉(鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉和鹿骨胶原蛋白肽粉)、谷类胶原蛋白肽粉(小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉和火麻仁低聚肽粉)和海洋软体动物胶原蛋白肽粉(海参肽粉、牡蛎肽粉)共3大种类9种肽粉分别进行脱脂、粉碎、浸提和纯化等，获得单一小分子肽后再进行不同比例组合，提高了提取的效率和肽的功效，实现了复合胶原蛋白肽的低分子量、高溶解性。
(3)动物骨胶原蛋白肽粉、谷类胶原蛋白肽粉、海洋软体动物胶原蛋白肽粉的复合胶原蛋白肽粉的种类比例为4：3：2，以动物骨胶原蛋白肽粉为基础，提供丰富的小分子胶原蛋白，身体吸收迅速，补充机体所需蛋白，保持细胞活性。以谷类肽粉为辅助，提供丰富的植物粗纤维肽、维生素、矿物质等，更好的促进机体吸收，保持机体的功能平衡。以海洋软体动物胶原蛋白肽粉为补充，提供功能性的胶原蛋白肽，改善机体免疫力，具有特异性功效。
(4)本发明创新性的在复合胶原蛋白肽粉添加γ-氨基丁酸，提高复合胶原蛋白肽粉的功效，改善脑血流流通，改善脂质代谢。
(5)本发明的复合胶原蛋白肽粉适用群体广，从儿童、青年到老年都可食用，在不同的群体中具有显著的作用。
(6)各类肽粉独立制备，生产效率高。原料来源广泛，简单易得，复合胶原蛋白肽粉调配容易操作。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
一种复合胶原蛋白肽固体饮料，包括鲜牛骨胶原蛋白肽粉17g、牦牛骨胶原蛋白肽粉13g、山羊骨胶原蛋白肽粉5g、鹿骨胶原蛋白肽粉3g、小米低聚肽粉16g、藜麦米低聚肽粉12g、火麻仁低聚肽粉7g、海参肽粉3g、牡蛎肽粉8g和γ-氨基丁酸0.3g。
本实施例1还提供了所述复合胶原蛋白肽固体饮料的制备方法，包括以下步骤：
S1，制备动物骨胶原蛋白肽粉浸提液，称取鲜牛骨胶原蛋白肽粉17g、牦牛骨胶原蛋白肽粉13g、山羊骨胶原蛋白肽粉5g和鹿骨胶原蛋白肽粉3g进行混合，然后将混合后的动物骨胶原蛋白肽粉加入114g水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为1h，通过50目筛网过滤后，得到动物骨胶原蛋白肽粉浸提液；
S2，制备海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液，称取海参肽粉3g和牡蛎肽粉8g进行混合，然后将混合后的海洋软体动物胶原蛋白肽粉加入33g的水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为1h，通过50目筛网过滤后，得到海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液；
S3，制备谷类胶原蛋白肽粉浸提液，称取小米低聚肽粉16g、藜麦米低聚肽粉12g和火麻仁低聚肽粉7g进行混合，然后将混合后的谷类胶原蛋白肽粉加入140g的水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为2h，通过50目筛网过滤后，得到谷类胶原蛋白肽粉浸提液；
S4，制备复合胶原蛋白肽浓缩液，将S1制备的动物骨胶原蛋白肽粉浸提液、S2制备的海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液、S3制备的谷类胶原蛋白肽粉浸提液和0.3gγ-氨基丁酸混合均匀，放入低温真空浓缩器中进行真空浓缩处理，真空度为0.02Mpa，温度为20℃，进行浓缩处理1h，得到复合胶原蛋白肽浓缩液；
S5，制备复合胶原蛋白肽固体饮料，将S4制备的复合胶原蛋白肽浓缩液进行喷雾干燥，进风温度120℃，进料流速0.2L/h，得到复合胶原蛋白肽固体粉末，分装后得到复合胶原蛋白肽固体饮料。
进一步地，所述鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉、鹿骨胶原蛋白肽粉、小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉、火麻仁低聚肽粉、海参肽粉和牡蛎肽粉为商品肽粉。
实施例2
一种复合胶原蛋白肽固体饮料，包括鲜牛骨胶原蛋白肽粉16g、牦牛骨胶原蛋白肽粉11g、山羊骨胶原蛋白肽粉7g、鹿骨胶原蛋白肽粉2g、小米低聚肽粉15g、藜麦米低聚肽粉10g、火麻仁低聚肽粉8g、海参肽粉2g、牡蛎肽粉10g和γ-氨基丁酸0.1g。
本发明还提供了所述复合胶原蛋白肽固体饮料的制备方法，包括以下步骤：
S1，脱脂，分别将鲜牛骨、牦牛骨、山羊骨、鹿骨、海参和牡蛎粉碎至体积为2cm3的碎块，然后以CO2超临界萃取的方式进行脱脂，分别得到脱脂后的鲜牛骨、牦牛骨、山羊骨、鹿骨、海参和牡蛎；分别将小米、藜麦米和火麻仁以CO2超临界萃取的方式进行脱脂，分别得到脱脂后的小米、藜麦米和火麻仁；
S2，粉碎，分别将脱脂后的鲜牛骨、牦牛骨、山羊骨、鹿骨、海参、牡蛎、小米、藜麦米和火麻仁通入液氮进行研磨，分别得到鲜牛骨粉、牦牛骨粉、山羊骨粉、鹿骨粉、海参粉、牡蛎粉、小米粉、藜麦米粉和火麻仁粉；
S3，初级浸提，分别将1g的鲜牛骨粉、牦牛骨粉、山羊骨粉、鹿骨粉、海参粉、牡蛎粉、小米粉、藜麦米粉和火麻仁粉置于20ml Tris-HCl缓冲溶液中，在30℃以匀浆器研磨20min，5000转/min离心25min，取上清液，重复提取3次，合并上清液，回收溶剂，得到热不稳定性蛋白；再分别将1g的鲜牛骨粉、牦牛骨粉、山羊骨粉、鹿骨粉、海参粉、牡蛎粉、小米粉、藜麦米粉和火麻仁粉置于20ml Tris-HCl缓冲溶液中，在150℃的条件下提取2.5h，5000转/min离心25min，取上清液，重复提取3次，合并上清液，回收溶剂，得到热稳定性蛋白；
S4，纯化，将热不稳定性蛋白和热稳定性蛋白按照质量比为1:1.5混合，以葡聚糖凝胶柱G-50纯化，然后进行冷冻干燥，分别得到鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉、鹿骨胶原蛋白肽粉、小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉、火麻仁低聚肽粉、海参肽粉和牡蛎肽粉；
S5，制备动物骨胶原蛋白肽粉浸提液，称取鲜牛骨胶原蛋白肽粉16g、牦牛骨胶原蛋白肽粉11g、山羊骨胶原蛋白肽粉7g和鹿骨胶原蛋白肽粉2g进行混合，然后将混合后的动物骨胶原蛋白肽粉加入108g的水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为1h，通过50目筛网过滤后，得到动物骨胶原蛋白肽粉浸提液；
S6，制备海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液，称取海参肽粉2g和牡蛎肽粉10g进行混合，然后将混合后的海洋软体动物胶原蛋白肽粉加入36g水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为1h，通过50目筛网过滤后，得到海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液；
S7，制备谷类胶原蛋白肽粉浸提液，称取小米低聚肽粉15g、藜麦米低聚肽粉10g和火麻仁低聚肽粉8g进行混合，然后将混合后的谷类胶原蛋白肽粉加入132g水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为2h，通过50目筛网过滤后，得到谷类胶原蛋白肽粉浸提液；
S8，制备复合胶原蛋白肽浓缩液，将S1制备的动物骨胶原蛋白肽粉浸提液、S2制备的海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液、S3制备的谷类胶原蛋白肽粉浸提液和0.1gγ-氨基丁酸混合均匀，放入低温真空浓缩器中进行真空浓缩处理，真空度为0.02Mpa，温度为20℃，进行浓缩处理1h，得到复合胶原蛋白肽浓缩液；
S9，制备复合胶原蛋白肽固体饮料，将S4制备的复合胶原蛋白肽浓缩液进行喷雾干燥，进风温度120℃，进料流速0.2L/h，得到复合胶原蛋白肽固体粉末，分装后得到复合胶原蛋白肽固体饮料。
进一步地，所述S1中CO2超临界萃取的条件为：压力为15MPa，温度为20℃，时间为100min，CO2流量为15L/min。
实施例3
一种复合胶原蛋白肽固体饮料，包括鲜牛骨胶原蛋白肽粉18g、牦牛骨胶原蛋白肽粉12g、山羊骨胶原蛋白肽粉6g、鹿骨胶原蛋白肽粉4g、小米低聚肽粉17g、藜麦米低聚肽粉13g、火麻仁低聚肽粉5g、海参肽粉5g、牡蛎肽粉10g和γ-氨基丁酸0.4g。
本发明还提供了所述复合胶原蛋白肽固体饮料的制备方法，包括以下步骤：
S1，制备动物骨胶原蛋白肽粉浸提液，称取鲜牛骨胶原蛋白肽粉18g、牦牛骨胶原蛋白肽粉12g、山羊骨胶原蛋白肽粉6g和鹿骨胶原蛋白肽粉4g进行混合，然后将混合后的动物骨胶原蛋白肽粉加入120g水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为1h，通过50目筛网过滤后，得到动物骨胶原蛋白肽粉浸提液；
S2，制备海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液，称取海参肽粉5g和牡蛎肽粉10g进行混合，然后将混合后的海洋软体动物胶原蛋白肽粉加入45g水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为1h，通过50目筛网过滤后，得到海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液；
S3，制备谷类胶原蛋白肽粉浸提液，称取小米低聚肽粉17g、藜麦米低聚肽粉13g和火麻仁低聚肽粉5g进行混合，然后将混合后的谷类胶原蛋白肽粉加入140g水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为2h，通过50目筛网过滤后，得到谷类胶原蛋白肽粉浸提液；
S4，制备复合胶原蛋白肽浓缩液，将S1制备的动物骨胶原蛋白肽粉浸提液、S2制备的海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液、S3制备的谷类胶原蛋白肽粉浸提液和0.4gγ-氨基丁酸混合均匀，放入低温真空浓缩器中进行真空浓缩处理，真空度为0.02Mpa，温度为20℃，进行浓缩处理1h，得到复合胶原蛋白肽浓缩液；
S5，制备复合胶原蛋白肽固体饮料，将S4制备的复合胶原蛋白肽浓缩液进行喷雾干燥，进风温度120℃，进料流速0.2L/h，得到复合胶原蛋白肽固体粉末，分装后得到复合胶原蛋白肽固体饮料。
进一步地，所述鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉、鹿骨胶原蛋白肽粉、小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉、火麻仁低聚肽粉、海参肽粉和牡蛎肽粉为商品肽粉。
对比例1
对比例1与实施例1的区别在于删除γ-氨基丁酸。
对比例2
对比例2与实施例1的区别在于删除鹿骨胶原蛋白肽粉。
对比例3
对比例2与实施例1的区别在于删除火麻仁低聚肽粉。
对比例4
对比例4与实施例1的区别在于删除海参肽粉和牡蛎肽粉。
对比例5
对比例5与实施例1的区别在于制备方法如下：将鲜牛骨胶原蛋白肽粉17g、牦牛骨胶原蛋白肽粉13g、山羊骨胶原蛋白肽粉5g、鹿骨胶原蛋白肽粉3g、小米低聚肽粉16g、藜麦米低聚肽粉12g、火麻仁低聚肽粉7g、海参肽粉3g、牡蛎肽粉8g和γ-氨基丁酸0.3g混合均匀，进行分装得到复合胶原蛋白肽固体饮料。
一、复合胶原蛋白肽固体饮料对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响
按照卫生部《保健食品检验与技术评价规范》(2003年)，将120只昆明小鼠按体重随机分为4组，每组30只，连续30天。
实验组：将实施例1～3制备的复合胶原蛋白肽固体饮料用水溶解至浓度为0.1g/mL，灌胃给予小鼠，灌胃量为10mL/kg。
对照组：将对比例1～5制备的复合胶原蛋白肽固体饮料用水溶解至浓度为0.1g/mL，灌胃给予小鼠，灌胃量为10mL/kg。
空白对照组：去离子水灌胃给予小鼠，灌胃量为10mL/kg。
从每组中随机选取10只小鼠，连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1mL，30min后，颈椎脱臼处死，将其固定在鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min，吸出腹腔洗液1mL，平均滴于2张载玻片上，置湿盒37℃30min；取出在生理盐水中漂洗、晾干、固定，Giemsa PBS染色3min，蒸馏水漂洗晾干，镜检。计算吞噬百分率及吞噬指数。结果如表1所示。
表1小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能结果
| 组别 | 吞噬百分率(％) | 吞噬指数 |
| 实施例1 | 46.32±6.01 | 1.49±0.26 |
| 实施例2 | 44.58±5.69 | 1.41±0.22 |
| 实施例3 | 43.61±5.24 | 1.42±0.21 |
| 对比例1 | 34.58±5.32 | 1.26±0.15 |
| 对比例2 | 36.42±4.93 | 1.24±0.17 |
| 对比例3 | 35.69±4.65 | 1.22±0.12 |
| 对比例4 | 35.98±4.36 | 1.23±0.16 |
| 对比例5 | 34.02±3.84 | 1.19±0.18 |
| 空白对照组 | 32.59±4.05 | 1.18±0.16 |
从表1内容可知，对比例1～5的吞噬百分率和吞噬指数与空白对照组相比略有增高，而实施例1～3与空白对照组相比具有显著差异，且实施例1～3与对比例1～5相比，吞噬百分率增高，说明实施例1～3的单核-巨噬细胞吞噬功能显著提高。
二、复合胶原蛋白肽固体饮料对小鼠NK细胞活性的影响
按照卫生部《保健食品检验与技术评价规范》(2003年)，将120只昆明小鼠按体重随机分为4组，每组30只，连续30天。
实验组：将实施例1～3提供的复合胶原蛋白肽固体饮料溶解至浓度为0.1g/mL，灌胃给予小鼠，灌胃量为10mL/kg。
对照组：将对比例1～5提供的复合胶原蛋白肽固体饮料溶解至浓度为0.1g/mL，灌胃给予小鼠，灌胃量为10mL/kg。
空白对照组：去离子水灌胃给予小鼠，灌胃量为10mL/kg。
从每组中随机选取10只小鼠，连续灌胃30天后，颈椎脱臼法处死小鼠，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，用镊子轻轻将脾撕碎，经200目筛网过滤，制成单细胞悬液备用。用Hank’s液洗细胞悬液2次，每次1000r/min离心10min。弃上清液，将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20s，裂解红细胞后再加入0.5mL 2倍Hank’s液及8mL Hank’s液，1000r/min离心10min，用1mL含10％小牛血清RPMI1640完全培养液重悬，用台盼兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2×107个/mL。取靶细胞和效应细胞各100μL(效靶比50:1))，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL；上述各项均设三个平行孔，于37℃、5％CO2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，反应3min，每孔加入1mol/L的HCL 30μL，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)，计算NK细胞活性，结果如表2所示。
表2 NK细胞活性结果
| 组别 | NK细胞活性(％) |
| 实施例1 | 29.68±13.86 |
| 实施例2 | 28.97±13.69 |
| 实施例3 | 29.05±13.53 |
| 对比例1 | 25.89±14.56 |
| 对比例2 | 26.34±14.69 |
| 对比例3 | 25.76±15.31 |
| 对比例4 | 25.64±15.67 |
| 对比例5 | 26.13±14.67 |
| 空白对照组 | 25.46±13.87 |
从表2内容可知，对比例1～5的NK细胞活性与空白对照组相比无明显差异，而实施例1～3与空白对照组相比具有显著差异，说明实施例1～3的NK细胞活性显著提高。
三、复合胶原蛋白肽固体饮料对足跖肿胀度、淋巴细胞增值能力和半数溶血值的影响
选择70只小鼠，雌雄各半，平均分成7组，每组10只。
实验组：将实施例1提供的复合胶原蛋白肽固体饮料溶解至浓度为0.1g/mL，灌胃给予小鼠，灌胃量为10mL/kg。
对照组：将对比例1～5提供的复合胶原蛋白肽固体饮料溶解至浓度为0.1g/mL，灌胃给予小鼠，灌胃量为10mL/kg。
空白对照组：去离子水灌胃给予小鼠，灌胃量为10mL/kg。
每天灌胃依次，连续灌胃30天，30天后按照《保健食品检验与技术评价规范》(2003年)，对小鼠淋巴细胞增殖能力OD差值、足跖肿胀度和半数溶血值(HC50)进行评价，结果如表3所示。
表3足跖肿胀度、淋巴细胞增值能力和半数溶血值结果
从表3内容可知，对比例1～5的淋巴细胞增殖能力OD差值、足跖肿胀度和半数溶血值(HC50)与空白对照组相比无明显差异，而实施例1的淋巴细胞增殖能力OD差值、足跖肿胀度和半数溶血值(HC50)显著优于与空白对照组，说明实施例1的显著促进淋巴细胞增殖。
综合表1～3的结果可知，实施例1～3显著提高小鼠的免疫力，对比例对小鼠免疫力无明显影响。
四、复合胶原蛋白肽固体饮料对骨密度的影响
选取Wistar大鼠96只，雌性，3月龄，大鼠经适应性饲养后，按照体重随机分成8组，每组大鼠为12只。构建卵巢切除去势大鼠模型，构建方法参考《保健食品检验与评价技术规范实施手册》。
实验组：将实施例1提供的复合胶原蛋白肽固体饮料溶解至浓度为0.1g/mL，灌胃给予切除卵巢大鼠，手术后3天开始灌胃，灌胃量为10mL/kg。
对照组：将对比例1～5提供的复合胶原蛋白肽固体饮料溶解至浓度为0.1g/mL，灌胃给予切除卵巢大鼠，手术后3天开始灌胃，灌胃量为10mL/kg。
空白对照组：生理盐水灌胃给予切除卵巢大鼠，手术后3天开始灌胃，灌胃量为10mL/kg。
正常组：生理盐水灌胃给予未切除卵巢大鼠，其他组大鼠手术后3天开始灌胃，灌胃量为10mL/kg。
90天后大鼠股动脉放血处死，取出左侧和右侧股骨，于105℃烘箱中，烤至恒重，称量骨重。采用DPX-L双能X线骨密度仪扫描整个左股骨测定骨密度(g/cm2)和右股骨测定骨密度(g/cm2)，以骨的平均骨密度代表该大鼠骨密度。每组的骨重和骨密度取平均值，结果如表4所示。
表4骨密度和骨重的结果
| 组别 | 骨密度(g/cm<sup>2</sup>) | 骨重(g) |
| 实施例1 | 0.1949±0.0176 | 0.5802±0.0206 |
| 对比例1 | 0.1726±0.0203 | 0.5008±0.0213 |
| 对比例2 | 0.1763±0.0205 | 0.5262±0.0196 |
| 对比例3 | 0.1749±0.0196 | 0.5163±0.0183 |
| 对比例4 | 0.1794±0.0186 | 0.5241±0.0164 |
| 对比例5 | 0.1719±0.0163 | 0.5046±0.0195 |
| 空白对照组 | 0.1631±0.0162 | 0.4873±0.0286 |
| 正常组 | 0.1942±0.0104 | 0.5796±0.0398 |
从表4内容可以看出，正常组和空白对照组的骨密度和骨重的结果相比，说明造模成功。实施例1和对比例1-5的结果和空白对照组、正常组比较，说明实施例1和对比例1-5均有一定的增加骨密度和骨重的功效，对比例1-5的增加骨密度和骨重的功效较小，实施例1显著增加骨密度和骨重。
Claims (6)
1.一种复合胶原蛋白肽固体饮料，其特征在于：按照重量份数计，包括动物骨胶原蛋白肽粉35～40份、谷类胶原蛋白肽粉30～35份、海洋软体动物胶原蛋白肽粉10～15份和γ-氨基丁酸0.1～0.4份；
所述动物骨胶原蛋白肽粉，按照重量份数计，包括鲜牛骨胶原蛋白肽粉16～18份、牦牛骨胶原蛋白肽粉11～14份、山羊骨胶原蛋白肽粉5～7份和鹿骨胶原蛋白肽粉2～4份；
所述谷类胶原蛋白肽粉，按照重量份数计，包括小米低聚肽粉15～18份、藜麦米低聚肽粉10～13份和火麻仁低聚肽粉5～8份；
所述海洋软体动物胶原蛋白肽粉，按照重量份数计，包括海参肽粉2～5份和牡蛎肽粉7～10份。
2.根据权利要求1所述的一种复合胶原蛋白肽固体饮料，其特征在于：所述复合胶原蛋白肽固体饮料，按照重量份数计，包括鲜牛骨胶原蛋白肽粉17份、牦牛骨胶原蛋白肽粉13份、山羊骨胶原蛋白肽粉5份、鹿骨胶原蛋白肽粉3份、小米低聚肽粉16份、藜麦米低聚肽粉12份、火麻仁低聚肽粉7份、海参肽粉3份、牡蛎肽粉8份和γ-氨基丁酸0.3份。
3.如权利要求1所述的一种复合胶原蛋白肽固体饮料的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1，制备动物骨胶原蛋白肽粉浸提液，按照重量份数，称取鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉和鹿骨胶原蛋白肽粉进行混合，然后将混合后的动物骨胶原蛋白肽粉加入3倍质量的水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为1h，通过50目筛网过滤后，得到动物骨胶原蛋白肽粉浸提液；
S2，制备海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液，按照重量份数，称取海参肽粉和牡蛎肽粉进行混合，然后将混合后的海洋软体动物胶原蛋白肽粉加入3倍质量的水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为1h，通过50目筛网过滤后，得到海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液；
S3，制备谷类胶原蛋白肽粉浸提液，按照重量份数，称取小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉和火麻仁低聚肽粉进行混合，然后将混合后的谷类胶原蛋白肽粉加入4倍质量的水进行煎煮浸提，水的温度设置在58℃，浸提时间为2h，通过50目筛网过滤后，得到谷类胶原蛋白肽粉浸提液；
S4，制备复合胶原蛋白肽浓缩液，按照重量份数，将S1制备的动物骨胶原蛋白肽粉浸提液、S2制备的海洋软体动物胶原蛋白肽粉浸提液、S3制备的谷类胶原蛋白肽粉浸提液和γ-氨基丁酸混合均匀，放入低温真空浓缩器中进行真空浓缩处理，真空度为0.02Mpa，温度为20℃，进行浓缩处理1h，得到复合胶原蛋白肽浓缩液；
S5，制备复合胶原蛋白肽固体饮料，将S4制备的复合胶原蛋白肽浓缩液进行喷雾干燥，进风温度120℃，进料流速0.2L/h，得到复合胶原蛋白肽固体粉末，分装后得到复合胶原蛋白肽固体饮料。
4.根据权利要求3所述的一种复合胶原蛋白肽固体饮料的制备方法，其特征在于：所述鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉、鹿骨胶原蛋白肽粉、小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉、火麻仁低聚肽粉、海参肽粉和牡蛎肽粉为商品肽粉。
5.根据权利要求3所述的一种复合胶原蛋白肽固体饮料的制备方法，其特征在于：所述鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉、鹿骨胶原蛋白肽粉、小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉、火麻仁低聚肽粉、海参肽粉和牡蛎肽粉的制备方法，包括以下步骤：
T1，脱脂，分别将鲜牛骨、牦牛骨、山羊骨、鹿骨、海参和牡蛎粉碎至体积为1～2cm3的碎块，然后以CO2超临界萃取的方式进行脱脂，分别得到脱脂后的鲜牛骨、牦牛骨、山羊骨、鹿骨、海参和牡蛎；分别将小米、藜麦米和火麻仁以CO2超临界萃取的方式进行脱脂，分别得到脱脂后的小米、藜麦米和火麻仁；
T2，粉碎，分别将脱脂后的鲜牛骨、牦牛骨、山羊骨、鹿骨、海参、牡蛎、小米、藜麦米和火麻仁通入液氮进行研磨，分别得到鲜牛骨粉、牦牛骨粉、山羊骨粉、鹿骨粉、海参粉、牡蛎粉、小米粉、藜麦米粉和火麻仁粉；
T3，初级浸提，分别将1g的鲜牛骨粉、牦牛骨粉、山羊骨粉、鹿骨粉、海参粉、牡蛎粉、小米粉、藜麦米粉和火麻仁粉置于10～20ml Tris-HCl缓冲溶液中，在15～30℃以匀浆器研磨20min，3400～5000转/min离心15～25min，取上清液，重复提取2-3次，合并上清液，回收溶剂，得到热不稳定性蛋白；再分别将1g的鲜牛骨粉、牦牛骨粉、山羊骨粉、鹿骨粉、海参粉、牡蛎粉、小米粉、藜麦米粉和火麻仁粉置于10～20ml Tris-HCl缓冲溶液中，在100～150℃的条件下提取1.5～2.5h，3400-5000转/min离心15～25min，取上清液，重复提取2-3次，合并上清液，回收溶剂，得到热稳定性蛋白；
T4，纯化，将热不稳定性蛋白和热稳定性蛋白按照质量比为1:(0.5～1.5)混合，以葡聚糖凝胶柱G-50纯化，然后进行冷冻干燥，分别得到鲜牛骨胶原蛋白肽粉、牦牛骨胶原蛋白肽粉、山羊骨胶原蛋白肽粉、鹿骨胶原蛋白肽粉、小米低聚肽粉、藜麦米低聚肽粉、火麻仁低聚肽粉、海参肽粉和牡蛎肽粉。
6.根据权利要求5所述的一种复合胶原蛋白肽固体饮料的制备方法，其特征在于：所述T1中CO2超临界萃取的条件为：压力为15-35MPa，温度为20-25℃，时间为100-140min，CO2流量为15-25L/min。
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