CN114634880B - 一种诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基及制备、培养方法 - Google Patents
一种诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基及制备、培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114634880B CN114634880B CN202210537560.5A CN202210537560A CN114634880B CN 114634880 B CN114634880 B CN 114634880B CN 202210537560 A CN202210537560 A CN 202210537560A CN 114634880 B CN114634880 B CN 114634880B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture medium
- fungus
- tremella aurantialba
- hyphae
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
一种诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基及制备、培养方法。制备所述培养基的原料及质量为:金耳出菇包菌渣100 g‑200 g、琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g、水1 L。本发明提供了一种能够成功诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基,通过这一培养基能够实现金耳这一二型态真菌的酵母状分生孢子与菌丝之间的相互转换,使金耳菌酵母状芽孢能在培养12~15天的时间内萌发出菌丝,解决了目前金耳菌只能大量以酵母状芽孢无限芽殖,而不能轻易萌发菌丝的问题。
Description
技术领域
本发明属于微生物培养技术领域,具体涉及一种用于诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基及其制备和培养方法。
背景技术
金耳子实体是金耳菌(Naematelia aurantialba(Bandoni & M. Zang)Millanes& Wedin)与毛韧革菌(Sterem hirsutum (Willd.) Fr.)共同形成的金黄色脑状子实体。金耳属于异质复合体,隶属于耳包革科(Naemateliaceae X.Z. Liu, F.Y. Bai, M.Groenew. & Boekhout),耳包革属(Naematelia Fr.)。金耳为二型态真菌,即在环境的影响下其存在酵母型及菌丝型两种型态。在通常情况下,金耳子实体弹射的担孢子在普通培养基上(如:PDA、CYM、马铃薯综合培养基、马铃薯蔗糖培养基、玉米粉综合培养基、周氏培养基等使用的大量食用菌常用培养基)不能萌发转化为菌丝,而是以芽殖的方式不断形成酵母状芽孢菌落。目前仅有刘正南的研究工作中提到金耳芽孢在木屑、棉籽壳等代料栽培基质、适宜的温湿度下能萌发出洁白、细弱的金耳型菌丝体,但未表明培养基配方以及培养方法等。所以目前尚未见如何诱导金耳菌芽孢向菌丝转化的相关报道,这一问题极大地影响了金耳的基础生物学研究,造成了对金耳菌交配系统研究的困难,不能清楚了解金耳菌的有性生殖过程,将会导致金耳育种相应滞后,无法对金耳进行杂交育种等问题。
参考文献可见:
[1]杨林雷,李荣春,曹瑶,等.金耳的学名及分类地位考证[J].食药用菌,2020,28(04):252-255+276.
[2]田云霞,童江云,汪威,等.银耳属伴生现象研究进展[J].食用菌,2019,41(04):1-3.
[3]刘正南,郑淑芳.金耳的生理特性及有效优良菌种的制备原理[J].中国食用菌,1995(05):10-11.。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术存在的问题,提供一种可诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基及其培养方法,以及利用所述培养基诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的方法。
本发明采取的技术方案如下:
一种诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基,制备所述培养基的原料及质量为:金耳出菇包菌渣100 g-200 g、琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g、水1 L。
进一步地,所述金耳出菇包菌渣为金耳第一茬菇采收后无污染的干净菌渣,菌渣含水量为33%-38%。
本发明所述诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基的制作方法如下:
(1)选取刚采摘完金耳子实体后无污染的干净菌包,将菌包中菌渣打碎;
(2)称取打碎后的菌渣100 g-200 g,放入水中,小火煮20 min,过滤后取滤液1 L;
(3)称取琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g,加入到滤液中融化后装瓶进行灭菌,得到培养基;
(4)将培养基分装至培养皿中即可。
进一步地,上述步骤(4)中,将培养基分装至直径9cm的培养皿中,每皿15 mL培养基。
采用本发明所述的培养基诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的方法,是将金耳菌酵母状芽孢接种至所述培养基内,置于21 ℃~25℃恒温恒湿培养箱中避光培养12~15 d即可。
本发明具有以下有益效果:本发明提供了一种能够成功诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基,通过这一培养基能够实现金耳这一二型态真菌的酵母状分生孢子与菌丝之间的相互转换,使金耳菌酵母状芽孢能在培养12~15天的时间内萌发出菌丝,解决了目前金耳菌只能大量以酵母状芽孢无限芽殖,而不能轻易萌发菌丝的问题,对金耳后续基础生物学研究工作具有重大意义。同时,金耳菌渣也能被有效地进行二次利用,并且培养基原料来源充足,培养基制作简单、便捷,制备成本低。
附图说明
图1为JSJ-F1芽孢于PDA培养基上的生长情况;
图2为JSJ-F1芽孢于马铃薯综合培养基上的生长情况;
图3为JSJ-F1芽孢于CYM培养基上的生长情况;
图4为JSJ-F1芽孢于玉米粉综合培养基上的生长情况;
图5为JSJ-F1芽孢于周氏培养基上的生长情况;
图6为 JSJ-F1芽孢于本发明培养基上的生长情况;
图7为JSJ-F1芽孢于本发明培养基上萌发菌丝的ITS结果;
图8 为ITS序列与NCBI比对结果。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明的内容进行清楚、完整的描述。
实施例1
诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基,制备所述培养基的原料及质量为:金耳出菇包菌渣200 g、琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g、水1 L。所述金耳出菇包菌渣为金耳第一茬菇采收后无污染的干净菌渣,菌渣含水量为35%。
培养基的制作方法如下:
(1)选取刚采摘完金耳子实体后无污染的干净菌包,将菌包中菌渣打碎。金耳出菇菌包的配方为棉籽壳38.9%、杂木屑40%、麦麸20%、石膏粉1%、KH2PO4 0.1%,含水率62%;
(2)称取打碎后的菌渣200 g,放入水中,小火煮20 min,过滤后取滤液1 L;
(3)称取琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g,加入到滤液中加热融化,装瓶于121 ℃灭菌30 min,得到培养基;
(4)将培养基分装至直径9cm的培养皿中,每皿15 mL培养基,冷却后待用。
采用上述培养基诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的方法如下:
(1)收集金耳菌担孢子:金耳菌担孢子从云南菌视界生物科技有限公司生产的新鲜金耳子实体收集所得。将新鲜金耳子实体利用无菌水冲洗干净后放至超净工作台,吹干子实体表面残留水分,利用悬钩法收集到金耳子实体担孢子后与无菌水混合制作孢子悬浮液;
(2)获取金耳菌酵母状芽孢:将孢子悬浮液接种至PDA培养基中,置于20℃恒温恒湿培养箱暗培养,获得金耳酵母状芽孢,命名为JSJ-F1芽孢;
(3)将金耳菌酵母状芽孢(JSJ-F1芽孢)接种至所述培养基内,封口后放至23℃恒温恒湿培养箱内进行暗培养14 d,即得到金耳菌芽孢萌发的菌丝。
萌发菌丝的ITS鉴定:
将接种芽孢后成功诱导出的菌丝挑取至离心管中,根据试剂盒提取DNA(百泰克生物科技有限公司真菌基因组DNA提取试剂盒)。使用真菌核糖体基因转录间隔区通用引物ITS1(5,-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)和ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)分别为正向、反向引物进行PCR扩增,PCR反应扩增总体系为50uL:混合Mix:25uL,ddH2O:22uL,ITS1、ITS4各1uL,DNA模板:1uL。混匀后,于PCR仪中进行扩增反应,PCR扩增程序为:94℃—5min,94℃—30s,56℃—45s,72℃—1min,35个循环,72℃—10min,4℃—不限时间。将PCR扩增产物送至上海生工生物工程股份有限公司进行双向测序,得到一条483 bp左右的序列,见图7。提交NCBI进行BLAST,其序列片段与GenBank中Tremella aurantialba同源性为97.26%~98.69%,见图8。因此,所属物种鉴定为金耳菌。
图1为JSJ-F1芽孢于PDA培养基上的生长情况,图2为JSJ-F1芽孢于马铃薯综合培养基上的生长情况,图3为JSJ-F1芽孢于CYM培养基上的生长情况,图4为JSJ-F1芽孢于玉米粉综合培养基上的生长情况,图5为JSJ-F1芽孢于周氏培养基上的生长情况,图6为 JSJ-F1芽孢于本发明培养基上的生长情况。从图1~图5可以看到,JSJ-F1芽孢于传统的各类培养基上都未能萌发菌丝,只能以芽殖的方式无限繁殖生成大量的酵母状芽孢。而从图6中可清楚地看到,JSJ-F1芽孢在本发明的培养基上,芽孢周围能萌发出菌丝。证明本发明的培养基能够成功诱导金耳菌芽孢萌发菌丝,从而可以解决目前金耳菌只能大量以酵母状芽孢无限芽殖,而不能轻易萌发菌丝的问题。
实施例2
诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基,制备所述培养基的原料及质量为:金耳出菇包菌渣100 g、琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g、水1 L。所述金耳出菇包菌渣为金耳第一茬菇采收后无污染的干净菌渣,菌渣含水量为33%。
培养基的制作方法如下:
(1)选取刚采摘完金耳子实体后无污染的干净菌包,将菌包中菌渣打碎;
(2)称取打碎后的菌渣100 g,放入水中,小火煮20 min,过滤后取滤液1 L;
(3)称取琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g,加入到滤液中加热融化,装瓶于123 ℃灭菌30 min,得到培养基;
(4)将培养基分装至直径9cm的培养皿中,每皿15 mL培养基,冷却后待用。
采用上述培养基诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的方法如下:
(1)收集金耳菌担孢子:金耳菌担孢子从云南菌视界生物科技有限公司生产的新鲜金耳子实体收集所得。将新鲜金耳子实体利用无菌水冲洗干净后放至超净工作台,吹干子实体表面残留水分,利用悬钩法收集到金耳子实体担孢子后与无菌水混合制作孢子悬浮液;
(2)获取金耳菌酵母状芽孢:将孢子悬浮液接种至PDA培养基中,置于21℃恒温恒湿培养箱暗培养,获得金耳酵母状芽孢;
(3)将金耳菌酵母状芽孢接种至所述培养基内,封口后放至21℃恒温恒湿培养箱内进行暗培养15 d,即得到金耳菌芽孢萌发的菌丝。
实施例3
诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基,制备所述培养基的原料及质量为:金耳出菇包菌渣150 g、琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g、水1 L。所述金耳出菇包菌渣为金耳第一茬菇采收后无污染的干净菌渣,菌渣含水量为38%。
培养基的制作方法如下:
(1)选取刚采摘完金耳子实体后无污染的干净菌包,将菌包中菌渣打碎;
(2)称取打碎后的菌渣150 g,放入水中,小火煮20 min,过滤后取滤液1 L;
(3)称取琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g,加入到滤液中加热融化,装瓶于123 ℃灭菌30 min,得到培养基;
(4)将培养基分装至直径9cm的培养皿中,每皿15 mL培养基,冷却后待用。
采用上述培养基诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的方法如下:
(1)收集金耳菌担孢子:金耳菌担孢子从云南菌视界生物科技有限公司生产的新鲜金耳子实体收集所得。将新鲜金耳子实体利用无菌水冲洗干净后放至超净工作台,吹干子实体表面残留水分,利用悬钩法收集到金耳子实体担孢子后与无菌水混合制作孢子悬浮液;
(2)获取金耳菌酵母状芽孢:将孢子悬浮液接种至PDA培养基中,置于20℃恒温恒湿培养箱暗培养,获得金耳酵母状芽孢;
(3)将金耳菌酵母状芽孢接种至所述培养基内,封口后放至25℃恒温恒湿培养箱内进行暗培养12 d,即得到金耳菌芽孢萌发的菌丝。
除非另有说明,本发明所述百分数均为质量百分数。
Claims (3)
1.一种诱导金耳菌(Naematelia aurantialba)芽孢萌发菌丝的培养基,其特征在于,制备所述培养基的原料及质量为:金耳出菇包菌渣100 g-200 g、琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g、水1 L;所述培养基的制作方法如下:
(1)选取刚采摘完金耳子实体后无污染的干净菌包,将菌包中菌渣打碎;
(2)称取打碎后的菌渣100 g-200 g,放入水中,小火煮20 min,过滤后取滤液1 L;
(3)称取琼脂25 g、磷酸二氢钾1.24 g、硫酸镁0.71 g,加入到滤液中融化后装瓶进行灭菌,得到培养基;
(4)将培养基分装至培养皿中即可。
2.如权利要求1所述的一种诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基,其特征在于,所述金耳出菇包菌渣为金耳第一茬菇采收后无污染的干净菌渣,菌渣含水量为33%-38%。
3.如权利要求1或2所述的培养基诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的方法,其特征在于,将金耳菌酵母状芽孢接种至所述培养基内,置于21 ℃~25℃恒温恒湿培养箱中避光培养12~15 d即可。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210537560.5A CN114634880B (zh) | 2022-05-18 | 2022-05-18 | 一种诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基及制备、培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210537560.5A CN114634880B (zh) | 2022-05-18 | 2022-05-18 | 一种诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基及制备、培养方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114634880A CN114634880A (zh) | 2022-06-17 |
CN114634880B true CN114634880B (zh) | 2022-08-19 |
Family
ID=81952930
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210537560.5A Active CN114634880B (zh) | 2022-05-18 | 2022-05-18 | 一种诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基及制备、培养方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114634880B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116836817B (zh) * | 2023-07-28 | 2024-05-14 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种金荞麦黑粉菌休眠孢子的诱导萌发培养基及其制备方法和诱导萌发方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111328627A (zh) * | 2020-04-01 | 2020-06-26 | 云南菌视界生物科技有限公司 | 一种金耳子实体直接再生培养法 |
CN111990164A (zh) * | 2020-09-21 | 2020-11-27 | 中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所 | 一种金耳新菌株中菌金耳1号菌株及其栽培方法 |
CN112042465A (zh) * | 2020-09-10 | 2020-12-08 | 云南菌视界生物科技有限公司 | 一种通过金耳子实体与外源毛韧革菌组合选育金耳新品种的方法 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2002244133A1 (en) * | 2001-02-20 | 2002-09-04 | Paul Stamets | Delivery systems for mycotechnologies, mycofiltration and mycoremediation |
CN102899368A (zh) * | 2012-11-19 | 2013-01-30 | 江南大学 | 一种深层液体发酵法制备富硒金耳粗多糖粉的方法 |
CN103396198B (zh) * | 2013-08-22 | 2014-10-22 | 昆明云蕈科技开发有限责任公司 | 一种金耳菌种培养基及菌种制备的方法 |
CN111386963A (zh) * | 2020-05-07 | 2020-07-10 | 云南菌视界生物科技有限公司 | 一种使用金耳苗接种的金耳栽培法 |
CN111386964A (zh) * | 2020-05-07 | 2020-07-10 | 云南菌视界生物科技有限公司 | 一种金耳液化菌种接种培养法 |
CN112205242A (zh) * | 2020-11-19 | 2021-01-12 | 中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所 | 一种金耳液体菌种接耳栽培方法 |
CN112592835A (zh) * | 2020-12-11 | 2021-04-02 | 云南菌视界生物科技有限公司 | 一种适宜于工厂化栽培的金耳菌株 |
-
2022
- 2022-05-18 CN CN202210537560.5A patent/CN114634880B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111328627A (zh) * | 2020-04-01 | 2020-06-26 | 云南菌视界生物科技有限公司 | 一种金耳子实体直接再生培养法 |
CN112042465A (zh) * | 2020-09-10 | 2020-12-08 | 云南菌视界生物科技有限公司 | 一种通过金耳子实体与外源毛韧革菌组合选育金耳新品种的方法 |
CN111990164A (zh) * | 2020-09-21 | 2020-11-27 | 中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所 | 一种金耳新菌株中菌金耳1号菌株及其栽培方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114634880A (zh) | 2022-06-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106635842B (zh) | 一株蜜环菌yn01(wt)及其应用 | |
CN112226372B (zh) | 一种耐高温的总状毛霉及其应用 | |
CN113388526B (zh) | 一种内生真菌fo-r20及其应用 | |
CN114634880B (zh) | 一种诱导金耳菌芽孢萌发菌丝的培养基及制备、培养方法 | |
CN113249229B (zh) | 一种假瓶霉属内生真菌p-b313及其应用 | |
US12010999B2 (en) | Application of endophytic Falciphora oryzae FO-R20 in controlling panicle blast | |
Shnyreva et al. | The commercially cultivated edible oyster mushrooms Pleurotus sajor-caju and P. pulmonarius are two separate species, similar in morphology but reproductively isolated | |
Rossi et al. | Inoculum production of the ectomycorrhizal fungus Pisolithus microcarpus in an airlift bioreactor | |
CN113025505A (zh) | 一种莱氏绿僵菌及其在草地贪夜蛾蛹期的生物防治方法与应用 | |
WO2009093634A1 (ja) | マツタケ子実体の誘導方法 | |
CN117004649A (zh) | 一种农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法 | |
CN110004070B (zh) | 一株产木聚糖酶黑曲霉基因工程菌及其构建方法与应用 | |
Hofsten et al. | Submerged cultivation of a thermotolerant basidiomycete on cereal flours and other substrates | |
CN114292757B (zh) | 一种用于冠突散囊菌分生孢子纯化培养的培养基及其制备方法和应用 | |
CN109467594A (zh) | Bcdmt2蛋白质及其编码基因在调控灰霉菌致病力与分生孢子产生中的应用 | |
CN115948265A (zh) | 一种马克斯克鲁维单倍体酵母及其构建方法与应用 | |
CN113273458B (zh) | 一种提高水稻镉耐受性和降低水稻谷粒中镉含量的方法 | |
CN111996128B (zh) | 一种适合工厂化栽培的金针菇及其分子鉴定方法 | |
CN113317124A (zh) | 一种羊肚菌结实率快速鉴定方法 | |
CN111088292A (zh) | 一种可提高可可球二孢菌色素产量和生长速度的分段式培养方法 | |
Kumar et al. | First report from India on identification and domestication of Morchella importuna strain ANI1 | |
CN114540198B (zh) | 一株高温出菇型翘鳞香菇jaucc3146及其栽培方法 | |
CN117487671B (zh) | 一种适宜工厂化栽培的金黄色绣球菌菌株及其栽培方法 | |
CN117701397B (zh) | 一种促进杜鹃兰种子萌发的小鬼伞属庭院小鬼伞菌及其应用 | |
CN1059236C (zh) | 脆壁克鲁维酵母的高效转化系统 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A culture medium and preparation and culture method for inducing spore germination hyphae of Auricularia auricula Effective date of registration: 20230726 Granted publication date: 20220819 Pledgee: Industrial Bank Co.,Ltd. Kunming Branch Pledgor: YUNNAN MUSHROOM WORLD BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Registration number: Y2023530000048 |
|
PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |