CN103396198B - 一种金耳菌种培养基及菌种制备的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种金耳菌种培养基及菌种制备的方法，所述金耳菌种培养基包括主料，辅料，微量的营养元素，所述主料为谷物籽粒，其重量比为89~94%，包括荞、麦、高梁、玉米、稻之籽粒的任意一种或一种以上组合籽粒，所述辅料为生物柴油下脚料或菌糠，其重量比为5~10%，包括桐籽壳、橡胶籽壳、油茶籽壳，所述微量的营养元素为钙、磷、硫、钾，其钙、磷、硫或钾盐化合物的重量比为1%。基于本发明的培养基制备金耳菌种的方法，包括首代试管母种、谷粒母种和谷粒原种及栽培种制备步骤。本发明具有金耳菌丝吃料快，出耳率高达100%，整个生产周期仅为60天，使金耳产量增长可达30%以上的特点，以满足金耳袋料规模化栽培用种的需要。

Description

一种金耳菌种培养基及菌种制备的方法

技术领域

本发明属于野生食用菌栽培技术领域，具体涉及一种金耳菌种培养基及菌种制备的方法。

背景技术

金耳（Tremella aurantialba Bandoni & Zang.sp.nor.）属微生物界，真菌门，担子菌亚门，担子菌纲，异隔担子菌亚纲，银耳目，银耳科，银耳属。金耳又名橙黄银耳、脑耳，其子实体金黄色、气味清香、食味粘糯鲜美，是一种药食兼用菌，也是营养滋补品。现代科学研究证明，金耳富含金耳粘多糖、类胡萝卜素、蛋白质、氨基酸、多种微量元素等和独有的金耳素，其药用机理有：提高机体代谢机能，抑制肿瘤细胞的生长；调节机体代谢机能，改善机体营养状况，提高机体血红蛋白和血浆的含量；提高机体抗衰老、抗缺氧能力，降血脂、降胆固醇；促进肝脏脂代谢，防止脂肪在肝脏积累，提高肝脏解毒功能。因而，金耳是未来最具开发潜力的保健药食用菌之一。

从栽培上分类，金耳属于一种具有伴生菌的木腐菌类，常与毛韧革菌（Stereum hirsutum）（wiud：Fr.）S.F.Gray伴生交织在一起，不能分离。故金耳是所有木腐菌中最难现实袋料人工规模化栽培的品种。长期以来，在金耳人工栽培生产中，金耳制种难题是其伴生菌毛韧革菌占优势，而金耳菌丝处弱势，使段木或袋料栽培的金耳出耳率低、品质差、甚至只出革菌没有金耳的问题，导致金耳人工栽培推广难度大，特别是金耳的袋料栽培近30年来没有关键性的突破。如何解决金耳种制备问题，是实现金耳袋料人工规模化栽培的关键所在。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种金耳菌种培养基；另一目的在于提供一种基于该培养基的简便、快速制备金耳栽培种的方法，有利于实现金耳人工栽培，提高规模化人工袋料栽培金耳的品质和产量，保护森林植被。

本发明的第一目的是这样实现的，一种金耳菌种培养基，包括主料，辅料，微量的营养元素，其特征在于所述的主料为谷物籽粒，其重量比为89~94%，所述的辅料为生物柴油下脚料或菌糠，其重量比为5~10%，所述的微量的营养元素为钙、磷、硫、钾，其钙、磷、硫或钾盐化合物的重量比为1%。

本发明的第二目的是这样实现的，用本发明的培养基制备金耳菌种的方法，包括首代试管母种制备、谷粒母种制备和谷粒原种及栽培种制备步骤，具体包括：

A、首代试管母种制备

采用PDA培养基加入溶积比3~6%的麸皮浸汁或阔叶树皮浸汁制作成试管培养基，选取朵大、色泽金黄、无污染的金耳子实体，经消毒处理，在无菌条件下接种，放置于温度15~25℃，湿度50~65% 的环境下培养10~15d，待种耳膨大至１~3cm时，作为金耳首代试管母种；

Ｂ、谷粒母种制备

选用籽粒饱满且无杂质的谷物籽粒作主料，其重量比89~94%，用清水浸泡48~72h，滤除水分，按重量比5~10%准备辅料生物柴油下脚料或菌糠，将辅料调湿至手握料可成团但不滴水，将调湿后的辅料与主料混合，加入重量比为1％微量的营养元素，充分混匀，然后装瓶/袋封口后，高压灭菌，用1.5㎏/㎝2 保持 2~2.5h，或常压灭菌，上汽后保持12~15h，熄火后再闷6~8h，冷却至25℃以下，接入首代试管母种，在温度20~25℃，湿度50~65%环境下培养15~20d，出现大量耳基即可作金耳谷粒母种；

C、谷粒原种、栽培种制备

按B步骤制备谷粒原种、栽培种，每瓶/袋谷粒母种可接40~50瓶/袋金耳原种；同样，每瓶/袋金耳原种可接金耳栽培种40~50瓶/袋，接种后，在温度20~25℃，湿度50~65%环境下培养15~20d至菌丝长满瓶/袋，生长出耳基可作为金耳原种、栽培菌种。

本发明利用金耳菌丝生长具有好气性和对淀粉吸收快、而对木质素吸收要依靠毛韧革菌的特点，以荞、麦、高梁、玉米、稻谷籽粒为金耳菌种的主要培养基质,即保证了金耳菌丝生长营养所需，同时抑制了毛韧革菌的生长，谷粒培养基有充足的空隙，满足了金耳菌丝生长好气性的特点，使金耳菌丝吃料快，出耳率高达100%，耳基膨大快，制种周期短，从制种到割头茬耳，整个周期为60天。袋料栽培头茬耳单朵鲜耳重150~350g，可使金耳产量增长30%。本发明提供了一种简便、快速的金耳种制备方法，实现了金耳人工袋料栽培，可满足金耳袋料规模化栽培用种需要。

本发明的特点：1.菌种采选优质新鲜。对首代试管母种菌种的采选，在每年夏、秋选取野生在黄栎木上或栽培的色泽金黄、无病虫害的金耳子实体，确保当年采集当年用种，避免了用种老化问题。2.金耳菌种出耳率高。用谷粒制备金耳母种,原种,栽培种培养基，使金耳菌丝吃料快，生长迅速，缩短了制种周期，提高金耳菌种出耳率。3.菌种制备做到有机无公害。在整个金耳菌种的制备过程中，避免了农药的使用，保证了菌种质优无害。

具体实施方式

下面结合本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明的金耳培养基，包括主料，辅料，微量的营养元素，所述的主料为谷物籽粒，其重量比为89~94%，所述的辅料为生物柴油下脚料或菌糠，其重量比为5~10%，所述的微量的营养元素为钙、磷、硫、钾，其钙、磷、硫或钾盐化合物的重量比为1%。

所述的金耳菌种培养基，谷物籽粒为荞、麦、高梁、玉米、稻之籽粒中的任意一种或一种以上组合籽粒。

所述的金耳菌种培养基，辅料之生物柴油下脚料为桐籽壳、橡胶籽壳、油茶籽壳，生产生物柴油后的下脚料的任意一种或一种以上组合物；菌糠为出过菇的菌包干粉。

所述的金耳菌种培养基，微量营养元素中的钙、磷、硫、钾盐为过磷酸钙、轻质碳酸钙、磷酸二氢钾、石膏粉、硫酸钾 中的任意一种或一种以上组合物。

用本发明的培养基制备金耳菌种的方法，包括首代试管母种制备、谷粒母种制备和谷粒原种及栽培种制备步骤，其特征在于具体包括：

A、首代试管母种制备

采用PDA培养基加入溶积比3~6%的麸皮浸汁或阔叶树皮浸汁制作成试管培养基，选取朵大、色泽金黄、无污染的金耳子实体，经消毒处理，在无菌条件下接种，放置于温度15~25℃，湿度50~65% 的环境下培养10~15d，待种耳膨大至１~3cm时，作为金耳首代试管母种；

Ｂ、谷粒母种制备

选用籽粒饱满且无杂质的谷物籽粒作主料，其重量比89~94%，用清水浸泡48~72h，滤除水分，按重量比5~10%准备辅料生物柴油下脚料或菌糠，将辅料调湿至手握料可成团但不滴水，将调湿后的辅料与主料混合，加入重量比为1％微量的营养元素，充分混匀，然后装瓶/袋封口后，高压灭菌，用1.5㎏/㎝2 保持 2~2.5h，或常压灭菌，上汽后保持12~15h，熄火后再闷6~8h，冷却至25℃以下，接入首代试管母种，在温度20~25℃，湿度50~65%环境下培养15~20d，出现大量耳基即可作金耳谷粒母种；

C、谷粒原种、栽培种制备

按B步骤制备谷粒原种、栽培种，每瓶/袋谷粒母种可接40~50瓶/袋金耳原种；同样，每瓶/袋金耳原种可接金耳栽培种40~50瓶/袋，接种后，在温度20~25℃，湿度50~65%环境下培养15~20d至菌丝长满瓶/袋，生长出耳基可作为金耳原种、栽培菌种。

所述的金耳菌种培养基制备菌种的方法，谷物籽粒为荞、麦、高梁、玉米、稻之籽粒中的任意一种或一种以上组合。

所述的金耳菌种培养基制备菌种的方法，辅料之生物柴油下脚料为桐籽壳、橡胶籽壳、油茶籽壳，生产生物柴油后的下脚料的任意一种或一种以上组合物；菌糠为出过菇的菌包干粉。

所述的金耳菌种培养基制备菌种的方法，微量的营养元素中的钙、磷、硫、钾盐为过磷酸钙、轻质碳酸钙、磷酸二氢钾、石膏粉、硫酸钾中的任意一种或一种以上组合物。

所述的金耳菌种培养基制备菌种的方法，金耳栽培种有效栽培期为30~60d，金耳栽培种可供立式袋/瓶栽培，一端接种，每袋/瓶接种60~80包，或卧式腹面接种，每袋/瓶接种3~4点，可接种20~30包。

实施例1：

（1）金耳菌种培养基组分及菌种制备方法

金耳菌种培养基组分为重量比荞籽89%，桐籽壳10%，过磷酸钙1%。下面为菌种制备方法：

A、首代试管母种制备

采用PDA培养基加入溶积比3%的麸皮浸汁制作成试管培养基，选取朵大、色泽金黄、无污染的金耳子实体，经消毒处理，在无菌条件下接种，放置于温度15℃，湿度50% 的环境下培养15d，待种耳膨大至3cm时，作为金耳首代试管母种；

Ｂ、谷粒母种制备

选用籽粒饱满且无杂质的荞籽作主料，其重量89kg，用清水浸泡48h，滤除水分，用粉碎的桐籽壳10kg作辅料，将粉碎的桐籽壳调湿至手握料可成团但不滴水，与浸泡后的荞籽混合，加入磷酸钙1kg作微量营养元素，充分混匀，然后装瓶/袋封口后，高压灭菌法，用1.5㎏/㎝2保持至 2h，冷却至25℃以下，接入首代试管母种，在温度20℃，湿度50%环境下培养20d，出现大量耳基即可作金耳谷粒母种；

C、谷粒原种、栽培种制备

按实施例1的B步骤制备谷粒原种、栽培种，每瓶/袋谷粒母种可接40瓶/袋金耳原种；同样，每瓶/袋金耳原种可接金耳栽培种40瓶/袋，接种后，在温度20℃，湿度50%环境下培养20d至菌丝长满瓶/袋，生长耳基可作为金耳原种、栽培菌种。

（2）栽培

按常规的金耳袋料栽培制备袋料包或栽培料瓶，接种本发明的金耳栽培种，有效栽培期为30天，立式袋料栽培采用一端接种，每瓶/袋栽培菌种可接种60包,在温度22℃，湿度70%下,培养30天出耳。

实施例2：

（1）金耳菌种培养基组分及菌种制备方法

金耳菌种培养基组分为重量比麦粒90%，橡胶籽壳9%，轻质碳酸钙1%。下面为菌种制备方法：

A、首代试管母种制备

采用PDA培养基加入溶积比4%的阔叶树皮浸汁制作成试管培养基，选取朵大、色泽金黄、无污染的金耳子实体，经消毒处理，在无菌条件下接种，放置于温度17℃，湿度53% 的环境下培养14d，待种耳膨大至2cm时，作为金耳首代试管母种；

Ｂ、谷粒母种制备

选用籽粒饱满且无杂质的麦粒作主料，其重量90kg，用清水浸泡50h，滤除水分，用粉碎的橡胶籽壳9kg作辅料，将粉碎的橡胶籽壳调湿至手握料可成团但不滴水，将与浸泡后的麦粒混合，加入轻质磷酸钙1kg作微量的营养元素，充分混匀，然后装瓶/袋封口后，用常压灭菌，上汽后保持12h，熄火后再闷6h，冷却至25℃以下，接入首代试管母种，在温度21℃，湿度54%环境下培养19d，出现大量耳基即可作金耳谷粒母种；

C、谷粒原种、栽培种制备

按实施例2的B步骤制备谷粒原种、栽培种，每瓶/袋谷粒母种可接42瓶/袋金耳原种；同样，每瓶/袋金耳原种可接金耳栽培种41瓶/袋，接种后，在温度21℃，湿度53%环境下培养19d至菌丝长满瓶/袋，生长耳基可作为金耳原种、栽培菌种。

（2）栽培

按常规的金耳袋料栽培制备袋料包或栽培料瓶，接种本发明金耳栽培种，有效栽培期为35天，用卧式腹面接种，每袋接种3点，可接种20包,在温度23℃，湿度76%下,培养28天出耳。

 实施例3：

（1）金耳菌种培养基组分及菌种制备方法

金耳菌种培养基组分为重量比高粱籽91%，油茶籽壳8%，磷酸二氢钾1%。下面为菌种制备方法：

A、首代试管母种制备

采用PDA培养基加入溶积比5%的麸皮浸汁制作成试管培养基，选取朵大、色泽金黄、无污染的金耳子实体，经消毒处理，在无菌条件下接种，放置于温度19℃，湿度55% 的环境下培养13d，待种耳膨大至1cm时，作为金耳首代试管母种；

Ｂ、谷粒母种制备

选用籽粒饱满且无杂质的高梁籽作主料，其重量91kg，用清水浸泡51h，滤除水分，用粉碎的油茶籽壳8kg作辅料，将粉碎的油茶籽壳调湿至手握料可成团但不滴水，与浸泡后的高梁籽混合，加入磷酸二氢钾1kg作微量营养元素，充分混匀，然后装瓶/袋封口后，高压灭菌1.5㎏/㎝2 保持2.5h，冷却至25℃以下，接入首代试管母种，在温度22℃，湿度56%环境下培养18d，出现大量耳基即可作金耳谷粒母种；

C、谷粒原种、栽培种制备

按实施例3的B步骤制备谷粒原种、栽培种，每瓶/袋谷粒母种可接44瓶/袋金耳原种；同样，每瓶/袋金耳原种可接金耳栽培种42瓶/袋，接种后，在温度22℃，湿度55%环境下培养18d至菌丝长满瓶/袋，生长耳基可作为金耳原种、栽培菌种。

（2）栽培

按常规的金耳袋料栽培制备袋料包或栽培料瓶，接种本发明金耳栽培种，有效栽培期为40天，用腹面接种，每袋接种4点，可接种25包,在温度24℃，湿度78%下,培养26天出耳。

实施例4：

（1）金耳菌种培养基组分及菌种制备方法

金耳菌种培养基组分为重量比玉米粒92%，菌糠7%，石膏粉1%。下面为菌种制备方法：

A、首代试管母种制备

采用PDA培养基加入溶积比6%的阔叶树皮浸汁制作成试管培养基，选取朵大、色泽金黄、无污染的金耳子实体，经消毒处理，在无菌条件下接种，放置于温度21℃，湿度57% 的环境下培养12d，待种耳膨大至3cm时，作为金耳首代试管母种；

Ｂ、谷粒母种制备

选用籽粒饱满且无杂质的玉米粒作主料，其重量92kg，用清水浸泡72h，滤除水分，用粉碎的菌糠7kg作辅料，将粉碎的菌糠调湿至手握料可成团但不滴水，与浸泡后的玉米粒混合，加入石膏粉1kg，充分混匀，然后装瓶/袋封口后，用常压灭菌，上汽后保持13h，熄火后再闷7h，冷却至25℃以下，接入首代试管母种，在23℃，湿度58%环境下培养17d，出现大量耳基即可作金耳谷粒母种；

C、谷粒原种、栽培种制备

按实施例4的B步骤制备谷粒原种、栽培种，每瓶/袋谷粒母种可接46瓶/袋金耳原种；同样，每瓶/袋金耳原种可接金耳栽培种46瓶/袋，接种后，在温度23℃，湿度57%环境下培养17d至菌丝长满瓶/袋，生长耳基可作为金耳原种、栽培菌种。

（2）栽培

按常规的金耳袋料栽培制备袋料包或栽培料瓶，接种本发明金耳栽培种，有效栽培期为45天，可供立式袋/瓶栽培，可一端接种，可接种65包，在温度25℃，湿度81%下,培养27天出耳。

实施例5：

（1）金耳菌种培养基组分及菌种制备方法

金耳菌种培养基组分为重量比稻谷粒93%，油茶籽壳4%，橡胶籽壳2%，硫酸钾0.2%，过磷酸钙0.8%。下面为菌种制备方法：

A、首代试管母种制备

采用PDA培养基加入溶积比4%的阔叶树皮浸汁制作成试管培养基，选取朵大、色泽金黄、无污染的金耳子实体，经消毒处理，在无菌条件下接种，放置于温度23℃，湿度59% 的环境下培养11d，待种耳膨大至2cm时，作为金耳首代试管母种；

Ｂ、谷粒母种制备

选用籽粒饱满且无杂质的稻谷粒作主料，其重量93kg，用清水浸泡54h，滤除水分，用粉碎的油茶籽壳4kg和粉碎的橡胶籽壳2kg作辅料，将粉碎的油茶籽壳和粉碎的橡胶籽壳调湿至手握料可成团但不滴水，与浸泡的稻谷粒混合，加入硫酸钾0.2kg，磷酸钙0.8kg作微量营养元素，充分混匀，然后装瓶/袋封口后，常压灭菌，上汽后保持14h，熄火后再闷8h，冷却至25℃以下， 在温度24℃，湿度61%环境下培养16d，出现大量耳基即可作金耳谷粒母种；

C、谷粒原种、栽培种制备

按实施例5的B步骤制备谷粒原种、栽培种，每瓶/袋谷粒母种可接48瓶/袋金耳原种；同样，每瓶/袋金耳原种可接金耳栽培种46瓶/袋，接种后，在温度24℃，湿度59%环境下培养16d至菌丝长满瓶/袋，生长耳基可作为金耳原种、栽培菌种。

（2）栽培

按常规的金耳袋料栽培制备袋料包或栽培料瓶，接种本发明金耳栽培种，有效栽培期为50天，可供卧式腹面接种，每袋接种3点，可接种30包，在温度25℃，湿度85%下,培养28天出耳。

实施例6：

（1）金耳菌种培养基组分及菌种制备方法

金耳菌种培养基组分为重量比荞籽40%，稻谷粒34%，包谷粒20%，菌糠3%，橡胶籽壳2%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸钙0.9%。下面为菌种制备方法：

A、首代试管母种制备

采用PDA培养基加入溶积比3%的麸皮浸汁 制作成试管培养基，选取朵大、色泽金黄、无污染的金耳子实体，经消毒处理，在无菌条件下接种，放置于温度24℃，湿度62% 的环境下培养10d，待种耳膨大至１cm时，作为金耳首代试管母种；

Ｂ、谷粒母种制备

选用籽粒饱满且无杂质的荞籽40kg，稻谷粒34kg，包谷粒20kg作主料，前二者用清水浸泡52h，包谷粒浸泡58h，滤除水分，用粉碎的菌糠3kg，粉碎的橡胶籽壳2kg作辅料，将辅料调湿至手握料可成团但不滴水，与浸泡后主料混合，加入磷酸二氢钾0.1kg，轻质磷酸钙0.9kg作微量营养元素，充分混匀，然后装瓶/袋封口后，常压灭菌，上汽后保持15h，熄火后再闷8h，冷却至25℃以下，在温度24℃，湿度63%环境下培养15d，出现大量耳基即可作金耳谷粒母种；

C、谷粒原种、栽培种制备

按实施例6的B步骤制备谷粒原种、栽培种，每瓶/袋谷粒母种可接50瓶/袋金耳原种；同样，每瓶/袋金耳原种可接金耳栽培种48瓶/袋，接种后，在温度25℃，湿度61%环境下培养15d至菌丝长满瓶/袋，生长耳基可作为金耳原种、栽培菌种。

（2）栽培

按常规的金耳袋料栽培制备袋料包或栽培料瓶，接种本发明金耳栽培种，有效栽培期为55天，可供立式袋/瓶栽培，可一端接种，每袋/瓶可接种75包，在温度23℃，湿度84%下,培养29天出耳。

实施例7：

（1）金耳菌种培养基组分及菌种制备方法

金耳菌种培养基组分为重量比高粱籽15%，荞籽10%，麦粒10%，稻谷粒20%，包谷粒35%，桐籽壳2%，油茶籽壳3%，橡胶籽壳2%，菌糠2%，磷酸二氢钾0.9%，硫酸钙0.1%。下面为菌种制备方法：

A、首代试管母种制备

采用PDA培养基加入溶积比5%的阔叶树皮浸汁制作成试管培养基，选取朵大、色泽金黄、无污染的金耳子实体，经消毒处理，在无菌条件下接种，放置于温度25℃，湿度65% 的环境下培养10d，待种耳膨大至2cm时，作为金耳首代试管母种；

Ｂ、谷粒母种制备

选用籽粒饱满且无杂质的高粱籽，其重量15kg，荞籽10kg，麥粒麦粒10kg，稻谷粒20kg，包谷粒35kg，五种谷物籽粒作主料，合计重量为90kg，用清水浸泡高粱籽，荞籽，麥粒，稻谷粒至48h，泡玉米粒至60h，滤除水分，用粉碎的桐籽壳2kg，粉碎的油茶籽壳3kg，粉碎的胶橡籽壳2kg，粉碎的菌糠2 kg作辅料，辅料合计重量为9kg，将四种辅料混合调湿至手握料可成团但不滴水，与浸泡后的五种谷物主料混合，加入磷酸二氢钾0.1kg，轻质磷酸钙0.9kg作微量营养元素，充分混匀，然后装瓶/袋封口后，常压灭菌，上汽后保持15h，熄火后再闷8h，冷却至25℃以下，接入首代试管母种， 在温度25℃，湿度65%环境下培养15d，出现大量耳基即可作金耳谷粒母种；

C、谷粒原种、栽培种制备

按实施例7的B步骤制备谷粒原种、栽培种，每瓶/袋谷粒母种可接50瓶/袋金耳原种；同样，每瓶/袋金耳原种可接金耳栽培种50瓶/袋，接种后，在温度25℃，湿度65%环境下培养15d至菌丝长满瓶/袋，生长耳基可作为金耳原种、栽培菌种。

（2）栽培

按常规的金耳袋料栽培制备袋料包或栽培料瓶，接种本发明金耳栽培种，有效栽培期为60天，可供立式袋/瓶栽培，一端接种，每袋/瓶可接种80包，在温度25℃，湿度85%下,培养25天出耳。

谷粒籽基质培养金耳原种（栽培种）与出耳、袋料栽培效果

 

Claims (5)

1.一种利用金耳菌种培养基制备金耳菌种的方法，所述的金耳菌种培养基，包括主料，辅料，微量的营养元素，所述的主料为谷物籽粒，其重量比为89~94%，所述的辅料为生物柴油下脚料或菌糠，其重量比为5~10%，所述的微量的营养元素为钙、磷、硫、钾，其钙、磷、硫或钾盐化合物的重量比为1%；制备金耳菌种的方法包括首代试管母种制备、谷粒母种制备和谷粒原种及栽培种制备步骤，其特征在于具体包括：

A、首代试管母种制备

采用PDA培养基加入溶积比3~6%的麸皮浸汁或阔叶树皮浸汁制作成试管培养基，选取朵大、色泽金黄、无污染的金耳子实体，经消毒处理，在无菌条件下接种，放置于温度15~25℃，湿度50~65% 的环境下培养10~15d，待种耳膨大至１~3cm时，作为金耳首代试管母种；

Ｂ、谷粒母种制备

选用籽粒饱满且无杂质的谷物籽粒作主料，其重量比89~94%，用清水浸泡48~72h，滤除水分，按重量比5~10%准备辅料生物柴油下脚料或菌糠，将辅料调湿至手握料可成团但不滴水，将调湿后的辅料与主料混合，加入重量比为1％微量的营养元素，充分混匀，然后装瓶/袋封口后，高压灭菌，用1.5㎏/㎝2 保持 2~2.5h，或常压灭菌，上汽后保持12~15h，熄火后再闷6~8h，冷却至25℃以下，接入首代试管母种，在温度20~25℃，湿度50~65%环境下培养15~20d，出现大量耳基即可作金耳谷粒母种；

C、谷粒原种、栽培种制备

按B步骤制备谷粒原种、栽培种，每瓶/袋谷粒母种可接40~50瓶/袋金耳原种；同样，每瓶/袋金耳原种可接金耳栽培种40~50瓶/袋，接种后，在温度20~25℃，湿度50~65%环境下培养15~20d至菌丝长满瓶/袋，生长出耳基可作为金耳原种、栽培菌种。

2.根据权利要求1所述的利用金耳菌种培养基制备金耳菌种的方法，其特征在于所述的谷物籽粒为荞、麦、高梁、玉米、稻之籽粒中的任意一种或一种以上组合籽粒。

3.根据权利要求1所述的利用金耳菌种培养基制备金耳菌种的方法，其特征在于所述的辅料之生物柴油下脚料为桐籽壳、橡胶籽壳、油茶籽壳，生产生物柴油后的下脚料的任意一种或一种以上组合物；菌糠为出过菇的菌包干粉。

4.根据权利要求1所述的利用金耳菌种培养基制备金耳菌种的方法，其特征在于所述的微量营养元素中的钙、磷、硫、钾盐为过磷酸钙、轻质碳酸钙、磷酸二氢钾、石膏粉、硫酸钾中的任意一种或一种以上组合物。

5.根据权利要求1所述的利用金耳菌种培养基制备金耳菌种的方法，其特征在于所述的金耳栽培种有效栽培期为30~60d，金耳栽培种可供立式袋/瓶栽培，一端接种，每袋/瓶接种60~80包，或卧式腹面接种，每袋/瓶接种3~4点，可接种20~30包。