CN112592835A - 一种适宜于工厂化栽培的金耳菌株 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食用菌育种领域，具体涉及一种适宜于工厂化栽培的金耳菌株JSJ‑X9。该菌株具有如SEQ ID NO:4所示的ITS序列和SEQ ID NO:1所示的SCAR标记的特征序列。该金耳菌株生产性状和商品性状优良且稳定，解决了金耳工厂化栽培的用种问题，具有极高的经济价值和应用前景。
Description
技术领域
本发明属于食用菌育种领域，具体涉及一种适宜于工厂化栽培的 金耳菌株。
背景技术
金耳菌是一种寄生真菌，寄生于毛韧革菌，金耳菌菌丝的生长要 依靠毛韧革菌为其提供营养。金耳子实体是异质型子实体，是由金耳 菌菌丝和毛韧革菌菌丝组成的复合体。
对于金耳菌种的研究的报道较少，都是涉及常规的菌种扩繁方法， 对于菌种质量的描述也只涉及有效菌种和无效菌种的区别[1-3]。金耳人 工驯化栽培[4]成功后的几十年来，菌种基本上都是从野生金耳子实体中 分离得到菌种，然后不断地转代繁殖使用，造成种源来源少，多代营 养繁殖后致使菌种生产性能退化、菌种携带病毒或杂菌等问题。目前市场上流通的金耳菌种，遗传背景不清，且只在段木栽培和使用简易 设施的袋料栽培这两种常规栽培方法中使用。这些菌种的生产性能指 标为：出菇率<80％、生物学效率<40％、成品率<70％，不具备工厂化 栽培的应用价值。
金耳的工厂化栽培目前处于起步阶段，没有直接可用的适用于工 厂化栽培的菌株。
发明概述
本发明目的在于提供一种适用于工厂化栽培的金耳菌株，其具有 如SEQ ID NO:1所示序列或与SEQ ID NO:1具有85％以上(例如85％， 90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％甚至99.5％，99.6％，99.7％，99.8％或99.9％)同一性序列的SCAR标记。
根据本发明，SCAR标记的正向和反向引物分别如SEQ ID NOs:2 和3所示。
本发明具体提供一种适用于工厂化栽培的金耳菌株JSJ-X9。
根据本发明，JSJ-X9号金耳菌株中金耳菌无性芽孢的ITS序列大 小为524bp，如SEQ ID NO:4所示。
根据本发明，JSJ-X9号金耳菌株具有SCAR标记，其序列如SEQ ID NO:1所示，或与SEQ ID NO:1具有85％以上的同一性。
根据本发明，JSJ-X9号金耳菌株适宜的培养温度为16-25℃，湿度 为75-98％，光照强度为600-1200lx，CO2浓度为500-2000ppm。
根据本发明，JSJ-X9号金耳菌株适宜的培养基原料包括木屑、棉 籽壳、麦麸。
根据本发明，JSJ-X9号金耳菌株育种材料中的金耳菌保藏号为 CGMCC No.20271，毛韧革菌保藏号为CGMCC No.19659。
根据本发明，JSJ-X9号金耳菌株用作育种母本进行衍生菌株的开 发选育。
根据本发明，从JSJ-X9号金耳菌株中分离出金耳菌用作育种母本 进行衍生菌株的开发选育。
根据本发明，JSJ-X9号菌株用于段木和袋料的林下或塑料大棚栽 培。
本发明另提供一种工厂化栽培金耳的方法，其包括使用金耳菌株 JSJ-X9的步骤。
本发明还提供SEQ ID NOs:2和3所示的正向和反向引物在鉴定 JSJ-X9号金耳菌株的SCAR标记中的用途。
发明内容
本发明涉及的各种生物材料定义如下：
金耳：包含有金耳菌(学名：Naematelia aurantialba(Bandoni&M. Zang)Millanes&Wedin,主要异名：Tremella aurantialba Bandoni&M. Zang)和毛韧革菌(学名：Sterem hirsutum(Willd.)Fr.)两个物种的复合 生物体，如金耳子实体。
金耳菌：只含有单纯金耳菌(学名：Naematelia aurantialba,主要 异名：Tremella aurantialba)一个物种的生物体，存在形式为菌丝或担 孢子或酵母状芽孢等。
毛韧革菌：只含有单纯毛韧革菌(学名：Sterem hirsutum)一个物种 的生物体。
金耳菌株：包含有金耳菌和毛韧革菌两个物种且两个物种间已经 建立寄生关系的培养物，如本发明中的JSJ-X9菌株。
金耳菌菌株：只含有单纯金耳菌一个物种的培养物，如本发明中 的X9菌株。
毛韧革菌菌株：只含有单纯毛韧革菌一个物种的培养物，如本发 明中的JSJ-JEGJ-X18菌株。
为解决金耳工厂化栽培的用种问题，发明人依据生物多样性原理， 人为地将不同遗传背景的金耳菌和毛韧革菌组合，创建新的组合，从 中进行金耳新菌株或品种的选育。通过多年的选育，筛选出一种适用 于工厂化栽培的金耳菌株，编号为JSJ-X9。该菌株育种材料中的金耳 菌菌株为从福贡高黎贡山采集到的金耳子实体中分离出金耳无性芽 孢，并从中筛选培育出的金耳菌(Tremella aurantialba)菌株(无性芽 孢)，编号X9(保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心(CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微 生物研究所)，保藏编号为CGMCC No.20271，保藏日期为2020年9 月18日)；毛韧革菌(Stereum hirsutum)菌株(编号JSJ-JEGJ-X18) 为采集自丽江老君山的金耳出菇的菇木中分离出的毛韧革菌纯培养物 (保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC， 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC No.19659，保藏日期为2020年6月11日)。
JSJ-X9号金耳菌株的金耳无性芽孢ITS序列大小为524bp，序列 信息如下：
GAAAGCTGTCCTTTCGGACGGTTAGAAAGCGCGTCTCCACA GAAGCAAGCGCAACCACAGCGTAGATAATTATCACACCGAGGCG CACGTCGCCAACAAGACGCACTAATGCATTATGAGAGGAGCCGA GCGGTGAAGCCCGGCAAAACCTCCAAGTCCAATTCCACTACGTTC ACTTTAAAAAAAATGAAGAGGGTTGAGAATTTCACGACACTCAA ACAGGTGTGCCCTTCGGAATACCAAAGGGCGCAAGGTGCGTTCA CAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTAT CGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAGCCAAGAGATCCG TTGTTGAAAGTTGTATTAGATGCGTTTTATTACATCGAGTAGACA TTCTTAAGACATACAAAGGGTGTGTAAAGGGACGCGAGCCTCTTC GAGTTAACAAAGAGGCCCCCGCGAAGGTGCACAGTGTGTGTGTG GATTAGTGAAAGGAGCGTGCACATGCCGTTTTTAAAGG(SEQ ID NO:4)
JSJ-X9号金耳菌株的金耳无性芽孢ITS序列在NCBI数据库中BLAST结果为金耳(Tremella aurantialba)，根据最新研究报道 [5]Tremella aurantialba为金耳异名，金耳学名为Naematelia aurantialba。 即，金耳JSJ-X9号金耳菌株使用的学名为Naemateliaaurantialba，异 名为Tremella aurantialba。
JSJ-X9号金耳菌株子实体为异质型，包含金耳菌和毛韧革菌两个 物种。JSJ-X9号金耳菌株培养物中各部分物种组成如图1所示。
本发明金耳菌株带有特异的SCAR标记，为特征性状，也为品种 保护提供了可靠的分子鉴定依据。通过下列引物对，可扩增得到JSJ-X9 号金耳菌株的独有SCAR标记(特征性标记)。
本发明特征性标记的SCAR引物对如下：
正向U829-S3-F：TGTGTGTGTGTGTGTGCGTCTCTGC(SEQ ID NO:2)
反向U829-S3-R：TGTGTGTGTGTGTGTGCGGGGGGGG(SEQ ID NO:3)
SCAR标记的特异序列(NCBI登录号：MW92637)大小为1369bp 序列信息如下：
JSJ-X9号金耳菌株适宜的培养温度为16-25℃，湿度为75-98％， 光照强度为600-1200lx，CO2浓度为1000-2000ppm；适宜的培养基原 料为木屑、棉籽壳、麦麸。
发明效果
发明人通过将采集自福贡高黎贡山的金耳子实体中分离得到的金 耳菌(Tremella aurantialba)无性芽孢(保藏日：2020年9月18日， 保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (CGMCC)，保藏编号为：CGMCC No.20271)；采集自丽江老君山 的金耳出菇的菇木中分离出的毛韧革菌(Stereum hirsutum)纯培养(保 藏日：2020年6月11日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为：CGMCC No.19659)；组 合培养出新的金耳子实体菌株JSJ-X9号菌株，使用组织分离法进行菌 种扩繁，经工厂化栽培出菇实验证明该菌株生产性能稳定，生产性能 指标为：出菇率>95％、一潮菇生物学效率80％-85％、成品率>95％、 培养周期45-50天；遗传性状稳定，子实体半球形或扁半球形，直径 60-130mm，高度30-80mm，外观呈脑状具有沟回样褶皱，基础褶皱宽 2-3mm，厚3-6mm，子实体表层颜色呈橘黄色(与PANTONE-GP1601A 国际标准专色色卡在自然光下比色，色号包含：137C、138C、1375C、 2010C、2012C、3588C)为市场认可的金耳鲜菇的一级菇的颜色，中 稍空或实心，菌肉厚度10-40mm，米黄色具白色大理石纹。本发明金 耳菌株的子实体较目前市场上可见的其他金耳菌种的子实体的基础褶
附图及其简要说明
为了更清楚地描述本发明的技术方案，下面将结合附图作简要介 绍。显而易见，这些附图仅是本申请记载的一些具体实施方式。本发 明包括但不限于下列附图：
图1示出金耳培养物各部分物种组成，其中胶图为金耳培养物各 部分ITS序列扩增产物琼脂糖凝胶电泳图，其中大小约500bp的条带 为金耳菌的ITS条带(SEQ ID NO:4)(ITS1： TCCGTAGGTGAACCTGCGG(SEQ ID NO:5)，ITS4： TCCTCCGCTTATTGATATGC(SEQ ID NO:6))，大小约700bp的条 带为毛韧革菌的ITS条带(SEQ ID NO:7)(ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG(SEQ ID NO:5)，ITS4： TCCTCCGCTTATTGATATGC(SEQ ID NO:6))。a.金耳子实体表层 组织包含金耳菌和毛韧革菌，b.金耳子实体髓部组织包含金耳菌和毛韧革菌，c.金耳子实体与培养料交界处包含金耳菌和毛韧革菌，d.金耳培 养料上层只含毛韧革菌，e.金耳培养料中层只含毛韧革菌，f.金耳培养 料下层只含毛韧革菌；
图2示出JSJ-X9号金耳菌株与常规金耳菌株子实体形态对比，其 中A1.JSJ-X9号金耳菌株子实体外观；A2.JSJ-X9号金耳菌株子实体纵 剖面；B1.常规金耳菌株子实体外观；B2.常规金耳菌株子实体纵剖面；
图3示出常规金耳菌株及其应用场景：1.段木栽培，2.袋料栽培；
图4示出JSJ-X9号金耳菌株及其应用场景：工厂化栽培；以及
图5示出JSJ-X9号金耳菌株与NL、CX、YR、NL、ZY、YL、SC 号金耳菌株的SCAR标记检测结果。
具体实施方式
为了进一步理解本发明，下面将结合本发明具体实施例对本发明 的技术方案进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施例是本发明 一部分，而非全部。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在无需 作出创造性劳动前提下所获得的所有变例，都落入本发明要求保护的 范围。除非特别说明，本发明百分比为重量百分比。
实施例
1.育种母本金耳菌株收集及金耳菌菌株(无性芽孢)分离
1.1育种母本金耳子实体的收集及金耳菌株培养
采集到福贡高黎贡山的金耳幼嫩子实体，以吸水纸包裹置于4℃ 下密封保存，48小时内使用组织分离法进行菌种分离。分离菌种时先 将金耳子实体表面消毒，然后取5×5×5mm3大小的一块金耳子实体组织 块接种于金耳母种培养基上。金耳母种培养基配方(1L)：马铃薯200g， 蔗糖20g，琼脂粉20g，KH2PO4 4g，MgSO4 3g。接种后黑暗培养，温 度20℃，培养25天后金耳子实体组织块再生为小金耳即得育种母本金 耳菌株，置于4℃冰箱保存备用。
1.2育种母本金耳菌菌株(无性芽孢)分离
取纯化好的金耳育种母本的子实体组织块，以金耳菌无性芽孢分 离方法从中分离出酵母状细胞并培养，取酵母状培养物样品提取DNA， 利用引物对(ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG(SEQ ID NO:5)， ITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC(SEQ ID NO:6))进行ITS序列 扩增并测序，测序结果为该ITS序列大小为524bp，序列信息如下：
GAAAGCTGTCCTTTCGGACGGTTAGAAAGCGCGTCTCCACA GAAGCAAGCGCAACCACAGCGTAGATAATTATCACACCGAGGCG CACGTCGCCAACAAGACGCACTAATGCATTATGAGAGGAGCCGA GCGGTGAAGCCCGGCAAAACCTCCAAGTCCAATTCCACTACGTTC ACTTTAAAAAAAATGAAGAGGGTTGAGAATTTCACGACACTCAA ACAGGTGTGCCCTTCGGAATACCAAAGGGCGCAAGGTGCGTTCA CAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTAT CGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAGCCAAGAGATCCG TTGTTGAAAGTTGTATTAGATGCGTTTTATTACATCGAGTAGACA TTCTTAAGACATACAAAGGGTGTGTAAAGGGACGCGAGCCTCTTC GAGTTAACAAAGAGGCCCCCGCGAAGGTGCACAGTGTGTGTGTG GATTAGTGAAAGGAGCGTGCACATGCCGTTTTTAAAGG(SEQ ID NO:4)
通过在NCBI数据库中进行BLAST将该菌株鉴定为金耳(Tremella aurantialba)Naematelia aurantialba。从而确定该酵母状培养物为金耳 菌无性芽孢，再从中分离、纯化、筛选出培养性状优异者，作为育种 母本金耳菌菌株(无性芽孢)保存备用。
2.育种母本毛韧革菌菌株的收集
在采集丽江老君山长有金耳子实体的菇木，常温干燥保存，3个 月内进行菌种分离。分离菌种时先将菇木表面切削平整，然后消毒， 在无菌环境中将菇木劈开，在金耳子实体着生点处距离菇木表面5mm 以下部位取小块木屑接种于金耳母种培养基上。接种后黑暗培养，温 度24℃，培养6天后木屑上萌发的菌丝长成的菌落直径达5cm时进行 纯化，经2次纯化后的培养物即为育种母本毛韧革菌菌株，置于4℃冰 箱保存备用。取革菌菌株样品提取DNA，利用引物对(ITS1： TCCGTAGGTGAACCTGCGG(SEQ ID NO:5)，ITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC(SEQ ID NO:6))进行ITS序列扩增并 测序，序列长度644bp，序列信息如下：
TTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTAATGAAATTTAT GACTGGAGTTGTAGCTGGCCTTTAAAAACGGCATGTGCACGCTCC TTTCACTAATCCACACACACCTGTGCACCTTCGCGGGGGCCTCTT TGTTAACTCGAAGAGGCTCGCGTCCCTTTACACACCCTTTGTATG TCTTAAGAATGTCTACTCGATGTAATAAAACGCATCTAATACAAC TTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAG CGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATACAGTGAATCAT CGAATCCTTGAACGCACCTTGCGCCCTTTGGTACTCCGAAGGGCA CACCTGTTTGAGTGTCGTGAAATTCTCAACCCTCTTCATTTTTTTT AAAGTGAACGTAGTGGATTGGACTTGGAGGTTTTGCCGGGCTTCA CCGCTCGGCTCCTCTCAAATGCATTAGTGCGTCTTGTTGCGACGT GCGCCTCGGTGTGATAATTATCTACGCTGTGGTGCGCTTGCTTCT GTGGAGACGCGCTTTCTAACCGTCCGAAAGGACAGCTTTCATCGA ACTTTGACCTCAAATCAGGTGGGACTACCCGCTGAACTTAAGCAT ATCAATAAGCGGAGGAA(SEQ ID NO:7)
测序结果在NCBI数据库中BLAST结果为毛韧革菌Sterem hirsutum。
3.育种母本金耳菌无性芽孢与毛韧革菌的组合及重组金耳子实体 诱导培养
3.1金耳子实体诱导培养基制作
配方：木屑56.8％、棉籽壳25％、麦麸15％、蔗糖3％、硫酸镁 0.1％、磷酸二氢钾0.1％，含水量62％。配制好的培养基装入350ml组 培瓶，每瓶装120g，压实，灭菌备用。
3.2毛韧革菌菌丝培养
将纯化好的育种母本毛韧革菌菌种接种到金耳子实体诱导培养基 中，24℃下黑暗培养7天后毛韧革菌菌丝覆盖满料面，既可用于与育 种母本金耳菌无性芽孢配对。
3.3重组金耳子实体诱导培养
在育种母本毛韧革菌菌丝上接种育种母本金耳菌无性芽孢液体培 养物0.5ml，然后22℃下黑暗培养60天，在组培瓶内长出小金耳子实 体即为重组成功，选取生长状态最佳的小金耳子实体，通过组织分离 法进行转接纯化，纯化3次后得到重组金耳菌株编号JSJ-X9，保存备 用。
4.出菇实验
取纯化后的重组金耳菌株JSJ-X9，通过组织分离法扩繁为栽培种 接种栽培袋，进行出菇实验，金耳栽培袋培养基配方：棉籽壳58.9％， 杂木屑25％，麦麸15％，石膏粉1％，KH2PO4 0.1％，含水量65％，自 然pH，每袋装料2000g，重复5次，记录生产性状(表1)及商品性 状数据(表2)。
表1生产性状
表2商品性状
5.重复栽培组织分离选育
重组成功的金耳菌株JSJ-X9进行工厂化规模栽培，对出菇早，菇 形态好，转色快的子实体进行组织分离获得新菌种，如此重复栽培和 组织分离20次之后获得：具有一致性、稳定性和SCAR标记的特异性 的金耳菌株，创新选育出了适宜于工厂化栽培的专用金耳菌株JSJ-X9, 此菌株也可用于林下或塑料大棚栽培。
6.菌株SCAR标记检验
随机选取出菇实验中收获的JSJ-X9号金耳菌株的新鲜金耳子实 体，收集担孢子提取DNA，同时取市场上可见的金耳菌株(宁蒗NL、 楚雄CX、永仁YR、曲靖QJ、云龙YL、张掖ZY、四川SC)的担孢 子分别提取DNA，使用JSJ-X9号金耳菌株的SCAR标记引物U829-S3-F 和U829-S3-R对各菌株DNA进行PCR扩增，扩增产物进行琼脂糖凝 胶电泳检测。结果如图5所示，只有JSJ-X9号金耳菌株扩增出特异条 带。
效果例
常规菌株应用于段木栽培及简易设施袋料栽培，出菇率<80％、生 物学效率<40％、成品率<70％，一致度低，如图3所示；JSJ-X9号菌株 应用于工厂化栽培，出菇率>95％、生物学效率>80％、成品率>95％， 一致度高，如图4所示。
参考文献
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SEQUENCE LISTING
<110> 云南菌视界生物科技有限公司
<120> 一种适宜于工厂化栽培的金耳菌株
<130> SPI204781-13
<160> 7
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1369
<212> DNA
<213> SCAR标记
<400> 1
ttgtgtgtgt gtgtgtgcgt ctctgcgagt aagcattatt gtatgcgagt ctgcgcagat 60
gtgcgtcggg tgagatccgg caaactcggg cggagcctat ctctgcatga ttcaaaagtc 120
atagcgactg aagcactttt gcatgcggca gcacgccacg cagacacgca gacacgcagc 180
atcgcagaca cgcagcatcg cagcatcgca gcatcgcagc atcgcagcca agcatcgcag 240
acacgcatcg caacaaactg ccgacaatgt ccacgtcgac gccgtcgttc tcgccaaaca 300
cgtcgtcctc gccgatcccg acgatcgacc tgtcgtccga ctctgcggcg cggcaggcag 360
agctgatccg ccgcgcgctg agcacggtcg ggttctttgt ggtggtgaat tcgggggtgg 420
cggcgggcga ggtagccggg atgtttcaca atgtacgtgt gtgaagagac tgtcgaggga 480
gagtgtgtgt cgagtgagag catgtcgagc gagagagcaa gtcgagcgag agagcggtgt 540
cgagtgtgtc gagcgagaga ggtgttgagc tcgagagcgt gtcgagtcag tcgctgacgc 600
agacagatga aagcgctatt cgccaacccg cgcgaggtga aagaagcgta tcccgcagac 660
aagattggtt cgggctacat caagccgctc gcgcagagtc tcgggccgta ccgccgcgat 720
tacagagagt gagtgctggg gcggggctgc tagctgcgtg ctcggtcgtt gtgctcggtc 780
gtgcgtgctc ggtcgttgtg ctcggtcgtg cgtgctcggt cgttgtgctc ggtcgttgtg 840
ctcggtcgtt gtgctcggtc gttgtgctcg ttctcgtgct cgtgccgagg actaggacta 900
ggacctccga caggagcatg accacgacca cgactcggtc tcgacgacca gatcagctag 960
ctaatgacca gagcattcca gtacggccgg caatctgcac actggaagca gcccctgccg 1020
ccgccgttca aggacggctc ggccgctctc gccgatatga aggcgtttta ccggtcgtgc 1080
catgatacct ctgagcgctt gctcgagctc tttgcgctcg ctttggatgt gagtgacggt 1140
ggcctctgcg ctgtgccttc tgttcttcgt cttctacgtc tctgcatctc ctctcgtctc 1200
ttgtcgtctg tcatacgtct ctcctgacgc tcctctctat ggaatgcacc gacgatccag 1260
gtcttcgatt cttcgatttt gtccttgtcc ttgtgccagt gctgccactg ctccacctgt 1320
ctctgcgttc agcccctccc cccccccccc cgcacacaca cacacacaa 1369
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 正向引物U829-S3-F
<400> 2
tgtgtgtgtg tgtgtgcgtc tctgc 25
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 反向引物U829-S3-R
<400> 3
tgtgtgtgtg tgtgtgcggg ggggg 25
<210> 4
<211> 524
<212> DNA
<213> 金耳菌ITS序列
<400> 4
gaaagctgtc ctttcggacg gttagaaagc gcgtctccac agaagcaagc gcaaccacag 60
cgtagataat tatcacaccg aggcgcacgt cgccaacaag acgcactaat gcattatgag 120
aggagccgag cggtgaagcc cggcaaaacc tccaagtcca attccactac gttcacttta 180
aaaaaaatga agagggttga gaatttcacg acactcaaac aggtgtgccc ttcggaatac 240
caaagggcgc aaggtgcgtt cacaaagatt cgatgattca ctgaattctg caattcacat 300
tacttatcgc atttcgctgc gttcttcatc gatgcgagag ccaagagatc cgttgttgaa 360
agttgtatta gatgcgtttt attacatcga gtagacattc ttaagacata caaagggtgt 420
gtaaagggac gcgagcctct tcgagttaac aaagaggccc ccgcgaaggt gcacagtgtg 480
tgtgtggatt agtgaaagga gcgtgcacat gccgttttta aagg 524
<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> 引物ITS1
<400> 5
tccgtaggtg aacctgcgg 19
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物ITS4
<400> 6
tcctccgctt attgatatgc 20
<210> 7
<211> 644
<212> DNA
<213> 毛韧革菌ITS序列
<400> 7
ttccgtaggt gaacctgcgg aaggatcatt aatgaaattt atgactggag ttgtagctgg 60
cctttaaaaa cggcatgtgc acgctccttt cactaatcca cacacacctg tgcaccttcg 120
cgggggcctc tttgttaact cgaagaggct cgcgtccctt tacacaccct ttgtatgtct 180
taagaatgtc tactcgatgt aataaaacgc atctaataca actttcaaca acggatctct 240
tggctctcgc atcgatgaag aacgcagcga aatgcgataa gtaatgtgaa ttgcagaata 300
cagtgaatca tcgaatcctt gaacgcacct tgcgcccttt ggtactccga agggcacacc 360
tgtttgagtg tcgtgaaatt ctcaaccctc ttcatttttt ttaaagtgaa cgtagtggat 420
tggacttgga ggttttgccg ggcttcaccg ctcggctcct ctcaaatgca ttagtgcgtc 480
ttgttgcgac gtgcgcctcg gtgtgataat tatctacgct gtggtgcgct tgcttctgtg 540
gagacgcgct ttctaaccgt ccgaaaggac agctttcatc gaactttgac ctcaaatcag 600
gtgggactac ccgctgaact taagcatatc aataagcgga ggaa 644
Claims (12)
1.一种适用于工厂化栽培的金耳菌株，其具有SCAR标记，所述标记的序列如SEQ IDNO:1所示，或与SEQ ID NO:1具有85％以上(例如85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％甚至99.5％，99.6％，99.7％，99.8％或99.9％)的同一性。
2.权利要求1所述的金耳菌株，其中SCAR标记的正向和反向引物分别如SEQ ID NOs:2和3所示。
3.一种适用于工厂化栽培的金耳菌株JSJ-X9。
4.权利要求3所述的金耳菌株JSJ-X9，其中金耳菌无性芽孢的ITS序列大小为524bp，如SEQ ID NO:4所示。
5.权利要求3或4所述的金耳菌株，其具有SCAR标记，所述标记的序列如SEQ ID NO:1所示，或与SEQ ID NO:1具有85％以上的同一性。
6.权利要求3-5任一项所述的金耳菌株，其适宜的培养温度为16-25℃，湿度为75-98％，光照强度为600-1200lx，CO2浓度为500-2000ppm。
7.权利要求3-6任一项所述的金耳菌株，其适宜的培养基原料选自木屑、棉籽壳和麦麸。
8.权利要求3所述的金耳菌株，其育种材料中的金耳菌菌株保藏号为CGMCC No.20271，毛韧革菌菌株保藏号为CGMCC No.19659。
9.权利要求1-8任一项所述的金耳菌株或从中分离出的金耳菌菌株用作育种母本进行衍生菌株的开发选育。
10.权利要求1-8任一项所述的金耳菌株用于段木和袋料的林下或塑料大棚栽培。
11.一种工厂化栽培金耳的方法，其包括使用权利要求1-8任一项所述的金耳菌株的步骤。
12.SEQ ID NOs:2和3所示的正向和反向引物在鉴定权利要求1-8任一项所述的金耳菌株或从中分离出的金耳菌菌株的SCAR标记中的用途。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| CI02 | Correction of invention patent application | ||
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Correction item: Description Correct: The 41st paragraph of the manual is correct False: There is an error in paragraph 41 of the manual Number: 14-02 Page: ?? Volume: 37 |