CN114540198B - 一株高温出菇型翘鳞香菇jaucc3146及其栽培方法 - Google Patents

一株高温出菇型翘鳞香菇jaucc3146及其栽培方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株高温出菇型翘鳞香菇JAUCC3146及其栽培方法。翘鳞香菇(Lentinus squarrosulus)JAUCC3146，保藏编号为：CGMCCNo.23885。本发明提供了一株高温出菇型翘鳞香菇JAUCC3146菌株，该菌株所制备的菌棒在无降温措施条件下，能耐受38.1℃‑46.9℃，且能出菇，是一种高温出菇型翘鳞香菇。有利于我国食用菌产业的发展。

Description

一株高温出菇型翘鳞香菇JAUCC3146及其栽培方法
技术领域：
本发明属于食用菌技术领域，具体涉及一株高温出菇型翘鳞香菇JAUCC3146及其栽培方法。
背景技术：
翘鳞香菇(Lentinus squarrosulus Mont.)隶属于真菌界(Fungi)、担子菌门(Basidiomycota)、伞菌亚门(Agaricomycotina)、伞菌纲(Agaricomycetes)、多孔菌目(Polyporales)、多孔菌科(Polyporaceae)、香菇属(Lentinus)。翘鳞香菇味道鲜美、营养丰富，且具有抗肿瘤、抗菌、免疫调节、降胆固醇等药用和保健功能，具有广阔的市场前景。目前报道的翘鳞香菇菌丝生长温度最高为38℃(张国广，张泽宏，赵晓丹，洪雅珍，邹金美.一株野生翘鳞香菇的培养特性研究[J].湖北农业科学，2015，54(8)：1923-1927.)，出菇温度通常低于35℃。
我国是食用菌生产大国，年产量约占全世界年产量的75％。我国食用菌生产的主要方式是菇农和合作社的大棚栽培模式。食用菌大棚无法做到像工厂化生产一样的温度控制，通常是冬天温度低，夏天温度高。
长期以来，我国的食用菌产业都是作为粮食作物生产的一个辅助性产业来对待，因此，其生产时期尽量要与粮食作物的生产季节错开。我国南方地区粮食生产最繁忙的季节通常是夏季(水稻双抢时期)，而冬季农民相对较清闲。因此，我国南方地区食用菌通常以低温品种为主。
我国食用菌产业近年来快速发展，食用菌大棚面积更是快速增长。然而，由于缺少高温品种，这些大棚在高温季节只能闲置，造成资源的极大浪费。而且，随着食用菌产业的不断发展和我国农民专业化的不断提升，专业从事食用菌生产的菇农队伍正在逐年扩大。由于高温期无菇可种，这批专业菇农只能靠在其他行业打短工度过，这对我国食用菌产业的发展极为不利。
因此，食用菌产业急需开发耐高温、高产、优质的食用菌品种。
发明内容：
本发明的第一个目的在于提供一株高温出菇型翘鳞香菇JAUCC3146菌株，该菌株所制备的菌棒在无降温措施条件下，能耐受38.1℃-46.9℃，且能出菇，是一种高温出菇型翘鳞香菇。
本发明的菌株从江西省宁都县一株野生翘鳞香菇子实体组织分离获得，对其进行了形态学、ITS测序鉴定及分子系统发育分析，该菌株属于真菌界(Fungi)、担子菌门(Basidiomycota)、伞菌亚门(Agaricomycotina)、伞菌纲(Agaricomycetes)、多孔菌目(Polyporales)、多孔菌科 (Polyporaceae)、香菇属(Lentinus)，翘鳞香菇(Lentinussquarrosulus)种，命名为翘鳞香菇 (Lentinus squarrosulus)JAUCC3146，其于2021年11月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101，保藏编号为：CGMCCNo.23885。
本发明的第二个目的是提供一种翘鳞香菇JAUCC3146的栽培方法，其是将翘鳞香菇 JAUCC3146菌液接种到含有栽培种培养基的菌袋中，菌丝长满菌袋，再经后熟培养后进行出菇培养，获得翘鳞香菇子实体。
优选，所述的栽培种培养基是按质量分数计，包括桉树皮9.5％，木屑9.51％，甘蔗渣 19.02％，棉籽壳28.52％，豆粕7.61％，玉米粉1.90％，麸皮19.02％，石灰1.90％，矿粉3.02％。
优选，所述的翘鳞香菇JAUCC3146菌液是通过以下方法制备的：
A、将翘鳞香菇JAUCC3146转接于种子培养基中，振荡培养，所述的种子培养基配方为：每500ml含葡萄糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，蛋白胨3g，豆粕粉2g，水500mL， pH自然，培养获得种子液；
B、将种子液接种到发酵培养基中，发酵培养基配方为：每升含有蔗糖10g，豆粕1.5g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.25g，消泡剂0.25mL，水1L，pH自然，发酵培养获得翘鳞香菇JAUCC3146菌液。
优选，所述的培养获得种子液是在24℃培养6天获得种子液。
优选，所述的发酵培养获得翘鳞香菇JAUCC3146菌液是在24℃培养4天获得翘鳞香菇 JAUCC3146菌液。
优选，所述的菌丝长满菌袋是温度23-25℃下培养菌丝长满菌袋。
优选，所述的出菇培养是将菌袋移至大棚，布置好遮光网，避免阳光直射，培养期间控制空气湿度80-95％rh下出菇培养。
本发明的翘鳞香菇(Lentinus squarrosulus)JAUCC3146菌株，用常规设备按常规方法均可扩大发酵培养。
本发明的JAUCC3146菌株的生物学效率在大棚栽培条件下可达50％-150％。
本发明提供了一株高温出菇型翘鳞香菇JAUCC3146菌株，该菌株所制备的菌棒在无降温措施条件下，能耐受38.1℃-46.9℃，且能出菇，是一种高温出菇型翘鳞香菇。有利于我国食用菌产业的发展。
翘鳞香菇(Lentinus squarrosulus)JAUCC3146，其于2021年11月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101，保藏编号为：CGMCC No.23885。
附图说明
图1是菌株JAUCC3146在GenBank中的比对结果；
图2是基于ITS序列的最大似然法系统发育树；
图3是翘鳞香菇子实体。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1 野生型菌株的分离和保藏
野生型翘鳞香菇JAUCC3146采自江西省宁都县，生长基质为枫香树段木，将其子实体采集后带回实验室。采用组织分离法将野生型翘鳞香菇进行分离。详细步骤如下：
野外采摘将菌柄底部泥土清除，摘下菌柄。将采摘的子实体用75％浓度的酒精棉进行表面消毒后，移入无菌操作台内，在酒精灯旁边，切下一小块子实体组织，挑取菌盖与菌柄连接处的菌肉，将组织块移入PDA培养基，放在25℃培养箱内培养，观察菌丝生长状态。待菌落长大后进行转接，获得纯培养物。
野生型翘鳞香菇JAUCC3146的保藏步骤：菌落刚长满培养皿时，用接种刀在培养皿中划出网格状菌块，面积约为0.5cm2，取5-8小块放入含有无菌水的冻存管中，将冻存管管盖密封，4℃保藏，该菌株实验室编号为JAUCC3146。
实施例2 JAUCC3146菌株的鉴定
1、JAUCC3146菌株形态学鉴定
JAUCC3146菌株子实体群生或丛生；幼嫩时菌盖较平展，浅黄色，较光滑，成熟后为漏斗形，边缘被灰褐色鳞片，中间为黄棕色鳞片，且为径向分布。菌盖圆形，中心凹陷，呈浅漏斗形，直径约0.5-9.2cm，淡黄色，鳞片褐色。菌褶不等长，延生，很密，幼嫩时为白色，成熟后变为浅黄色；菌柄中生，易弯曲，中空，菌柄表面附有白色粉末，白色粉末去掉为黄棕色，靠近菌盖部分较粗，实心，菌柄菌肉白色，菌柄幼嫩时松软有韧性，成熟老后变得很硬，木栓质化，不宜食用，长度约2.9-11.5cm，直径约0.4-1.1cm；菌柄处能明显看到锯齿状绒毛；无菌环、菌托结构。
2、JAUCC3146菌株的ITS序列测定
本研究采用CTAB法提取菌株JAUCC3146总DNA，采用Mix混合试剂(北京擎科生物科技有限公司，2×TSINGKE Master Mix(blue)，cat:#TSE004(blue))以ITSl(TCCGTAGGTGAACCTGCGG)和ITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC)为引物扩增ITS序列。PCR扩增体系为(25μL)：2×Mix 12.5μL，10μM引物各0.5μL，ddH2O 11μL，DNA模板0.5μL。PCR扩增程序为：95℃预变性5min；95℃变性40s，50℃退火40s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min。PCR产物送往北京擎科生物有限公司进行测序，得到ITS序列，其核苷酸序列如SEQID NO.1所示。
将菌株JAUCC3146的ITS序列在GenBank(美国国家生物技术信息中心： https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/)中进行Blast比对，结果表明(图1)JAUCC3146菌株为翘鳞香菇(Lentinus squarrosulus)。数据库中，与菌株JAUCC3146的ITS序列最相近的序列为MG208851.1，但是其相似率只有98.98％，表明本发明的翘鳞香菇菌株JAUCC3146与现有GenBank中所有翘鳞香菇都存在明显遗传差异。
将本菌株JAUCC3146的ITS序列在GenBank中比对到的相似性较高的翘鳞香菇(Lentinussquarrosulus)菌株序列作为参比菌株，利用RAxML v.7.2.6软件，使用最大似然法(Maximum Likelihood，下称ML)构建基于ITS序列的系统发育树(图2)，结果表明本发明的翘鳞香菇菌株JAUCC3146与现有翘鳞香菇菌株都聚在一个分支上，且其支持率达 98％，说明菌株JAUCC3146为翘鳞香菇物种，菌株JAUCC3146与其它翘鳞香菇菌株存在明显的遗传差异，具有显著的遗传独特性。
将菌株JAUCC3146命名为：翘鳞香菇(Lentinus squarrosulus)JAUCC3146，其于2021 年11月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101，保藏编号为：CGMCC No.23885。
实施例3 翘鳞香菇JAUCC3146的菌丝生长
1、翘鳞香菇JAUCC3146的菌丝形态
翘鳞香菇JAUCC3146的菌丝在PDA培养基上洁白、浓密，菌落边缘整齐，呈绒毛状，后期菌丝开始出现中央菌丝老化变色的现象，菌丝变的坚韧不易挑破，颜色为淡黄色、褐色，从中央向外慢慢变色老化，直至全部老化，最后会出现黄色液滴。
2、菌丝生长速度测定方法
将翘鳞香菇JAUCC314的直径4㎜的菌块接种到PDA培养基中央，在培养皿背面以接种菌块为中心，画十字线，十字线把皿分成四块，在菌丝生长处做标记测量菌丝长度。每个温度设置3皿重复组，记录菌丝生长速度，单位为mm/d。
3、菌丝生长速度(表1)
表1菌丝生长速度
Figure BDA0003446859880000071
培养温度为38.1℃时，翘鳞香菇JAUCC3146菌株在接种第3天和第4天的生长速度分别为12.3mm/d,10.3mm/d，接种第4天菌丝长满皿。
培养温度为39℃时，翘鳞香菇JAUCC3146菌株在接种第3天和第4天的生长速度分别为13.8mm/d,10.7mm/d，接种第4天菌丝长满皿。
培养温度为42℃时，翘鳞香菇JAUCC3146菌株在接种第3天和第4天的生长速度分别为5.2mm/d,2.8mm/d，接种第10天菌丝长度为10.8mm。
结果显示在38.1-42℃，JAUCC3146菌株的菌丝均能生长，属于菌丝耐高温菇。
实施例4 翘鳞香菇JAUCC3146菌株的大棚栽培
1.将翘鳞香菇JAUCC3146菌株原种按无菌操作转接于种子培养基(放置摇瓶中)，放入摇床中培养，转速165r/min，24℃，避光培养，种子培养基配方为：葡萄糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，蛋白胨3g，过120目筛的豆粕粉2g，水500mL，ph自然，其配制方法是：将各成分混合均匀，灭菌备用。在摇瓶内培养6天即可进行接种。
2.将500mL的摇瓶内菌种移入大发酵罐进行发酵培养，发酵温度24℃，避光培养，其中发酵罐内液体发酵培养基配方为：蔗糖10kg，豆粕1.5kg，磷酸二氢钾0.5kg，硫酸镁0.25 kg，消泡剂(上海恒生化工有限公司，HS-508发酵级消泡剂)250mL，水1000L，pH自然。其配制方法是：将各成分混合均匀，灭菌备用。在发酵罐内培养4天即可进行接种。
3.发酵罐内液体菌种接种至栽培种培养基的菌袋中，栽培种培养基配方为按质量分数计，包括桉树皮9.5％，细木屑9.51％，细甘蔗渣19.02％，棉籽壳28.52％，豆粕7.61％，玉米粉1.90％，麸皮19.02％，石灰1.90％，矿粉(即贝壳粉，是指贝壳经过粉碎研磨制成的粉末，其95％的成分是碳酸钙，另含有少量甲壳素，少量氨基酸和多糖等物质)3.02％。将各成分按其含量混合均匀，装袋，按含水量60％补足水分后，每个菌袋装栽培种培养基大约1000 g，然后灭菌，待冷却后，按无菌操作在每个菌袋接种液体菌种30mL。
4.接种后转移到菌丝培养室，温度23-25℃，放置于菇架上避光培养，20天长满整个菌袋，长满菌丝后，继续放置，待其后熟培养5天，然后转移至大棚开袋出菇培养，具体为：将36个菌袋移至大棚，布置好遮光网，避免阳光直射，培养期间控制空气湿度80-95％rh。子实体长至菌盖平展即采收。
在翘鳞香菇JAUCC3146栽培的出菇期(2-4天)，连续3天的下午高温天气，第1天即7月28日最低26.2℃最高44.5℃，第2天即7月29日最低25.6℃最高46.9℃，第3天即 7月30日最低25.1℃最高39.6℃，菌棒从原基分化期进入出菇期，菌棒出菇，第4天即7 月31日最低25.9℃最高36.5℃，子实体继续生长(超过30℃的温度见表2)。
表2出菇培养温度(℃)
Figure BDA0003446859880000081
Figure BDA0003446859880000091
翘鳞香菇JAUCC3146成熟即可采收，图3是翘鳞香菇子实体。采收后称其鲜重，并计算每个菌袋的生物学效率，计算公式为：鲜菇湿重/菌袋栽培料干重×100％。
本发明的翘鳞香菇JAUCC3146的生物学效率在大棚栽培条件下可达50％-150％(见表3)。
表3翘鳞香菇JAUCC3146的生物学效率
Figure BDA0003446859880000101
Figure BDA0003446859880000111
序列表
<110> 江西农业大学
<120> 一株高温出菇型翘鳞香菇JAUCC3146及其栽培方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 684
<212> DNA
<213> 翘鳞香菇(Lentinus squarrosulus)
<400> 1
tccgtaggtg aacctgcgga aggatcatta tcgagttttg aaacgggttg tagctggcct 60
tccgaggcat gtgcacgccc tgctcatcca ctctacacct gtgcacttac tgcgggtttc 120
aggagcttcg aaagcgagaa agaggggcct tcacgggctt tttcttgcct agttgttact 180
gggcctacgt ttcactacaa gcacttataa agtatcagaa tgtgtattgc gattaaacgc 240
atctatatac aactttcagc aacggatctc ttggctctcg catcgatgaa gaacgcagcg 300
aaatgcgata agtaatgtga attgcagaat tcagtgaatc atcgaatctt tgaacgcacc 360
ttgcgctcct tggtattccg aggagcatgc ctgtttgagt gtcatgaaat tctcaaccta 420
acgggttctt aacgggactt gcttaggctt ggactttgga ggttcttgtc ggcttgcttc 480
aatgtcaggt cggctcctct taaatgcatt agcttggttc ctgtgcggat cggctcacgg 540
tgtgataatt gtctacgccg cgaccgttga agcgttttat aggccagctt ctagtcgtct 600
ctttacgaga caataatcat cgaactctga cctcaaatca ggtaggacta cccgctgaac 660
ttaagcatat caataagcgg agga 684

Claims (8)

1.翘鳞香菇(Lentinus squarrosulus)JAUCC3146，保藏编号为：CGMCC No.23885。
2.一种翘鳞香菇JAUCC3146的栽培方法，其特征在于，是将权利要求1的翘鳞香菇JAUCC3146菌液接种到含有栽培种培养基的菌袋中，菌丝长满菌袋，再经后熟培养后进行出菇培养，获得翘鳞香菇子实体。
3.根据权利要求2所述的栽培方法，其特征在于，所述的栽培种培养基是按质量分数计，包括桉树皮9.5％，木屑9.51％，甘蔗渣19.02％，棉籽壳28.52％，豆粕7.61％，玉米粉1.90％，麸皮19.02％，石灰1.90％，矿粉3.02％。
4.根据权利要求2所述的栽培方法，其特征在于，所述的翘鳞香菇JAUCC3146菌液是通过以下方法制备的：
A、将翘鳞香菇JAUCC3146转接于种子培养基中，振荡培养，所述的种子培养基配方为：每500ml含葡萄糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，蛋白胨3g，豆粕粉2g，水500mL，pH自然，培养获得种子液；
B、将种子液接种到发酵培养基中，发酵培养基配方为：每升含有蔗糖10g，豆粕1.5g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.25g，消泡剂0.25mL，水1L，pH自然，发酵培养获得翘鳞香菇JAUCC3146菌液。
5.根据权利要求4所述的栽培方法，其特征在于，所述的培养获得种子液是在24℃培养6天获得种子液。
6.根据权利要求4所述的栽培方法，其特征在于，所述的发酵培养获得翘鳞香菇JAUCC3146菌液是在24℃培养4天获得翘鳞香菇JAUCC3146菌液。
7.根据权利要求2所述的栽培方法，其特征在于，所述的菌丝长满菌袋是温度23-25℃下培养菌丝长满菌袋。
8.根据权利要求2所述的栽培方法，其特征在于，所述的出菇培养是将菌袋移至大棚，布置好遮光网，避免阳光直射，培养期间控制空气湿度80-95％rh下出菇培养。
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CN110964645B (zh) * 2019-11-12 2021-05-18 北京市农林科学院 一种耐高温香菇菌株及其栽培方法

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