CN115948253B

CN115948253B - 一种红托竹荪菌株黔pr12及其应用

Info

Publication number: CN115948253B
Application number: CN202211607854.7A
Authority: CN
Inventors: 陈旭; 王晓敏; 李启华; 张邦喜; 卢征华; 阳旭; 杨仁德; 杜慕云; 朱森林; 杨珍; 陈波; 张钦语; 唐玲
Original assignee: GUIZHOU INSTITUTE OF SOIL AND FERTILIZER; Guizhou Jinsun Biotechnology Development Co ltd
Current assignee: GUIZHOU INSTITUTE OF SOIL AND FERTILIZER; Guizhou Jinsun Biotechnology Development Co ltd
Priority date: 2022-12-14
Filing date: 2022-12-14
Publication date: 2023-07-28
Anticipated expiration: 2042-12-14
Also published as: CN115948253A

Abstract

本发明公开了一种红托竹荪(Dictyophora rubrovolvata)菌株黔PR12，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；其保藏编号为CGMCC No.40105。本发明还公开了黔PR12在食品、保健品或饮料中的用途。本发明黔PR12子实体朵型大，鲜菇单重可达75.5g，且多糖和蛋白等成分含量高，商品价值和营养价值高；其次，产量高，亩产量可达1379kg；此外，栽培周期短，管理成本低。

Description

一种红托竹荪菌株黔PR12及其应用

技术领域

本发明属于食用菌领域，具体涉及一种红托竹荪菌株，还涉及该红托竹荪用途。

背景技术

红托竹荪(Dictyophora rubrovolvata)属于竹荪属红托竹荪种。因形态优美，又有“菌中皇后”的美誉。红托竹荪味道鲜美，质地脆嫩，含有丰富的氨基酸、维生素以及多种矿物元素。此外，从红托竹荪中提取的多糖物质和其他活性物质，具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、降血脂和免疫调节等生理活性功能，其抗癌活性远优于冬虫夏草和香菇等，因此红托竹荪的营养价值和经济价值较高。

目前，我国红托竹荪生产中存在的主要问题是：(1)品种少。(2)菌丝生长速度慢，栽培周期长。目前主栽的红托竹荪菌株从播种到第一茬出菇采收的栽培周期普遍为90～120天左右，栽培周期长意味着管理成本高，以及面临更多的气候风险。(3)产量低。通常亩产量为400-600kg。(4)子实体朵型小，商品价值相对较低。目前，市场上销售的红托竹荪以干品为主，烘干后子实体会缩小，较大的朵型烘干后，商品价值更高。因此，培育性状稳定、出菇快、栽培周期短、产量高、朵型优良的红托竹荪品种，对红托竹荪产业稳定发展十分重要。

发明内容

针对目前红托竹荪生产中存在的产量低、栽培周期长等问题，本发明目的在于提供一种红托竹荪菌株。

本发明另一目的在于提供上述红托竹荪菌株的栽培方法。

本发明第三目的在于提供上述红托竹荪菌株的用途。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明一种红托竹荪(Dictyophora rubrovolvata)菌株黔PR12，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；其保藏编号为CGMCCNo.40105；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期为2022年2月17日。

本发明还提供上述菌株黔PR12在食品或保健品中的应用。

本发明还提供一种食品或保健品，所述的食品或保健品中含有上述菌株黔PR12或黔PR12的提取物。

本发明还提供上述菌株黔PR12在饮料中的应用。

本发明还提供一种饮料，所述的饮料中含有上述菌株黔PR12或黔PR12的提取物。

本发明还提供上述菌株黔PR12在制备提高人体免疫力药物上的应用。

本发明还提供一种红托竹荪基因工程菌，所述的红托竹荪基因工程菌的出发菌株为上述菌株黔PR12。

上述红托竹荪菌株黔PR12的栽培方法，包括如下步骤：

(1)母种培养：用灭菌冷却后的接种钩将5mm×5mm的黔PR12菌种块接种于母种培养基平板中央，在23℃、空气相对湿度65～75％、避光条件下培养30天，得黔PR12母种；

(2)原种培养：用灭菌冷却后的菌种铲挖取步骤(1)中所得黔PR12母种，按照1:30的质量比比例接种于原种培养基上，在18℃、空气相对湿度65～75％，避光条件下培养50天，菌丝长满菌袋，得黔PR12原种；

(3)栽培种培养：用灭菌冷却后的菌种铲挖取步骤(2)中所得黔PR12原种，按照1:30的质量比比例接种于栽培种培养基上，在18℃、空气相对湿度60～75％，避光条件下培养50天，菌丝长满菌袋，得黔PR12栽培种；

(4)开厢播种与覆膜：选择PH为6～6.5且土质较细的温室大棚内耕地，清除杂草后翻耕土壤开畦，畦面高5cm、宽40cm、长10米，两个畦面间留60cm走道，土壤含水量45％，用小刀将步骤(3)得到的栽培种的菌袋表面划开，脱除菌袋，取出圆柱形栽培种棒，顺着畦面宽度摆放棒状栽培种，棒身1/3没入畦面，棒与棒之间间隔8～10cm，每亩耕地摆放5000袋栽培种，播种后立刻均匀覆盖一层土，覆土深度5cm，覆土后盖上黑色聚丙烯膜；

(5)菌丝培养与原基分化：播种后，棚内气温控制在20～25℃，空气相对湿度80～85％，土壤含水量60～65％，光照强度100～200lux，培养18～20天，黔PR12菌丝在土壤中大量生长，菌丝接近覆土表面时，揭开黑色聚丙烯膜，用消过毒的松针覆盖2～3cm厚，再培养7～10天，菌丝分化形成菌索，菌索顶端扭结形成原基；

(6)出菇管理和采收：原基进一步生长形成竹荪蛋，竹荪蛋生长阶段温度控制在15～22℃，空气相对湿度70～80％，土壤含水量50～60％，光照强度500～800lux，自然通风，竹荪蛋30～35天成熟，成熟竹荪蛋从顶部长出竹荪子实体只需2～8小时；菌柄伸长后当菌裙伸出2～3cm时及时采收；用小刀割断菌索，去掉菌盖菌、菌托，只留菌柄和菌裙。

上述方法步骤(1)中所述的母种培养基的组成成分及其比例为：去皮马铃薯200g取汁，葡萄糖20g，琼脂20g，黄豆粉10g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，混匀后用纯净水定容至1000mL，pH自然。

所述的母种培养基的制备方法：将马铃薯200g去皮切成1cm左右方块，放入800mLRO水中煮沸20min，3层纱布过滤取浸提液，再加入葡萄糖20g，琼脂20g，黄豆粉10g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，用纯净水定容至1000mL，121℃灭菌30min，倒入直径9cm平板，备用。

上述方法步骤(2)中所述原种培养基和步骤(3)中所述栽培种培养基的组成成分及其重量百分比比例为：木屑72％，麦麸20％，黄豆粉2％，玉米粉2％，蔗糖2％，石膏1％，硫酸镁0.5％，磷酸二氢钾0.5％，培养基含水量60％。

所述步骤(2)中原种培养基和步骤(3)中栽培种培养基的制备方法：按重量比例取：木屑72％，麦麸20％，黄豆粉2％，玉米粉2％，蔗糖2％，石膏1％，硫酸镁0.5％，磷酸二氢钾0.5％，混合均匀，然后按照比例加水，搅拌均匀，装入聚丙烯塑料袋(16cm×35cm×0.005cm)后聚丙烯绳扎口，121℃灭菌2小时冷却备用。

本发明具有的优点和有益技术效果：(1)本发明红托竹荪菌株黔PR12，菌柄菌裙洁白，菌柄圆柱形且空心，菌裙呈钟形，商品价值高。(2)子实体朵型大。黔PR12鲜菇平均单重为75.5g，明显大于目前已知的红托竹荪品种的40～60g的鲜菇单重，朵型大的红托竹荪商品价值高，因此，本发明黔PR12的商品价值高，经济价值高。(3)本发明菌株黔PR12的栽培产量高。目前已知红托竹荪品种的亩产量一般为400～600kg，而本发明黔PR12的亩产量平均为1379kg，至少相当于目前主栽品种产量的2-3倍。(4)本发明黔PR12的栽培周期短，从播种到开始出菇采收的周期为55～75天，短于现有红托竹荪品种的90～120天的栽培周期，栽培周期短意味着管理成本低，面临的气候风险低。(5)本发明黔PR12干菇的粗多糖含量为3.10％，粗蛋白含量为24.31％，粗脂肪含量为1.12％，其营养价值和药用价值高。

生物保藏：本发明红托竹荪(Dictyophora rubrovolvata)菌株黔PR12是本发明人于2015年4月在贵州省毕节市织金县地区采集，并经筛选、驯化而成；该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.40105，保藏日期为2022年2月17日。

附图说明

图1.本发明红托竹荪黔PR12的子实体照片。

图2.本发明红托竹荪黔PR12的系统发育树图。

具体实施方式

以下通过具体实施例对本发明作进一步说明，但是对本发明不构成任何限制。

实施例1本发明红托竹荪黔PR12的采集、分离驯化过程：

2015年4月，本发明人在贵州省毕节市织金县桂果地区，野外采集多株红托竹荪子实体，通过子实体组织分离得到菌丝(菌种)；将组织分离后的菌种进行栽培出菇试验，再对朵型良好的子实体进行菌种分离，于PDA培养基上进行培养，筛选菌丝生长速度快，长势均匀的菌株，继续栽培人工驯化；经过数代培养，反复验证其性状稳定性，最终筛选出一个遗传性状稳定、出菇周期短、朵型大、产量高的红托竹荪菌株，命名为：黔PR12。

实施例2本发明菌株黔PR12的分类鉴定：

(1)黔PR12的形态学鉴定：

菌蕾单生或簇生，直径3～6cm，重量55～160g，成熟的子实体由菌柄、菌盖、菌裙和菌托组成。菌柄白色，柱状海绵体、嫩脆、柄中空，顶部稍小，长14～21cm，直径3～6cm。菌裙网状、白色，网眼圆形、椭圆形或多角形，长7～10cm，下摆直径6～10cm。菌盖呈钟形，孢体附着在菌盖表面呈暗绿色或青褐色。菌托紫红色，高3～5cm，直径4～7cm。担孢子4～5×1.5～2μm，椭圆形。根据《中国大型菌物资源图鉴》(李玉、李泰辉等，中原农民出版社，2015)中第1166页有关红托竹荪的相应形态特征描述及照片，黔PR12与红托竹荪的形态特征一致，说明黔PR12属于红托竹荪(Dictyophora rubrovolvata)。

(2)黔PR12的分子分类鉴定

采用新型植物基因组DNA提取试剂盒CW0531(北京康为世纪公司)提取黔PR12的基因组DNA，以ITS4和ITS5为引物进行PCR扩增。其中所述的引物如下：

ITS5：5'-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3'，

ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'；

其中PCR扩增的反应体系(总体积20μL)为：20-50ng/μL的DNA模板1μL，10×Buffer(with Mg²⁺)2μL，2.5mM dNTP 0.5μL，5U/μl DNA聚合酶0.2μL，0.2μM引物各0.5μL，加双蒸水至20μL。PCR扩增的反应条件为：预变性94℃4min；94℃30s，56℃30s，72℃1min，35个循环；72℃延伸10min。结果扩增得到大小为563bp的DNA分子片段，将其送交上海生工进行测序。将测序所得序列(见SEQ ID No：1)在Genbank进行BLAST比对，同时构建系统发育树。

结果黔PR12与红托竹荪的ITS序列相似度最高，可达98.41％；从系统发育树图((见图2))可以看出，黔PR12属于竹荪属红托竹荪种(Dictyophora rubrovolvata)，并且与所有已知红托竹荪菌株不同，是一个新菌株。

实施例3本发明红托竹荪黔PR12的栽培试验

(1)母种培养：用灭菌冷却后的接种钩将5mm×5mm的黔PR12菌种(本菌种已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.40105)接种于母种培养基平板中央，在23℃、空气相对湿度65～75％、避光条件下培养30天，得黔PR12母种；所述母种培养基按照如下方法制备：将马铃薯200g去皮切成1cm左右方块，放入700mL纯净水中煮沸30min，4层纱布过滤取浸提液，再加入葡萄糖20g，琼脂粉20g，黄豆粉10g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，用纯净水定容至1000mL，121℃灭菌30min，倒入直径9cm平板，备用。

(2)原种培养：用灭菌冷却后的菌种铲挖取步骤(1)中所得黔PR12母种，按照1:30的质量比比例接种于原种培养基上，在18℃、空气相对湿度65～75％，避光条件下培养50天，菌丝长满菌袋，得黔PR12原种；所述原种培养基的组成成分及其重量百分比为：木屑72％，麦麸20％，黄豆粉2％，玉米粉2％，蔗糖2％，石膏1％，硫酸镁0.5％，磷酸二氢钾0.5％，混合均匀，然后按照比例加水，搅拌均匀，装入聚丙烯塑料袋(16cm×35cm×0.005cm)后聚丙烯绳扎口，121℃灭菌2小时冷却备用。

(3)栽培种培养：用灭菌冷却后的菌种铲挖取步骤(2)中所得黔PR12原种，按照1:30的质量比比例接种于栽培种培养基上，在18℃、空气相对湿度60～75％，避光条件下培养50天，菌丝长满菌袋，得黔PR12栽培种；所述栽培种培养基的组成成分及其重量百分比与步骤(2)的原种培养基相同，制备方法亦与步骤(2)相同。

(4)开厢播种与覆膜：选择pH为5.5～6.5、且土质较细的温室大棚内耕地，清除杂草后翻耕土壤开畦，畦面高5cm、宽40cm、长10米，两个畦面间留60cm走道，土壤含水量45％，用小刀将步骤(3)得到的栽培种的菌袋表面划开，脱除菌袋，取出圆柱形的栽培种棒，顺着畦面宽度摆放栽培种棒，棒身1/3没入畦面，棒与棒之间间隔8～10cm，每亩耕地摆放5000袋栽培种，播种后立刻均匀覆盖一层土，覆土深度5cm，覆土后盖上黑色聚丙烯膜。

(5)菌丝培养与原基分化：黔PR12播种后，棚内气温控制在20～25℃，空气相对湿度80～85％，土壤含水量60～65％，光照强度100～200lux，培养18～20天，菌丝在土壤中大量生长，菌丝接近覆土表面时，揭开黑色聚丙烯膜，用消过毒的松针覆盖2～3cm厚，再培养7～10天，菌丝分化形成菌索，菌索顶端扭结形成原基。

(6)出菇管理和采收：原基进一步生长形成竹荪蛋，竹荪蛋生长阶段温度控制在15～22℃，空气相对湿度70～80％，土壤含水量50～60％，光照强度500～800lux，自然通风，竹荪蛋30～35天可以成熟。成熟竹荪蛋从顶部长出竹荪子实体只需2～8小时，菌柄伸长后当菌裙伸出2～3cm时及时采收。用干净的刀片割断菌索，不要沾上底部泥土，采收后去掉菌盖菌、菌托，只留菌柄和菌裙，完成采收。

对采收的黔PR12子实体进行观测、测产和营养检测。

结果(见图1)本发明红托竹荪菌株黔PR12菌柄菌裙洁白，菌柄圆柱形且空心，菌裙呈钟形，朵型较大，鲜菇平均单重75.5g，大大高于常见红托竹荪40～60g的鲜菇单重，其商品价值高。其次，黔PR12栽培周期短，从播种到开始出菇采收的周期为55～75天，短于现有红托竹荪品种的90～120天。再其次，经测产，黔PR12栽培平均新鲜子实体亩产量为1379kg，相当于现有主栽红托竹荪品种亩产量的400～600kg的2-3倍，经济效益高。此外，经检测，本发明红托竹荪菌株黔PR12干菇的粗多糖含量为3.10％，粗蛋白含量为24.31％，粗脂肪含量为1.12％，说明本发明红托竹荪菌株黔PR12的营养价值高，可用于开发功能性食品和饮料，商品附加值高。

Claims

1.一种红托竹荪（Dictyophora rubrovolvata）菌株黔PR12，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；其保藏编号为CGMCC No.40105。

2.权利要求1所述的菌株黔PR12在制备食品或保健品中的应用。

3.一种食品或保健品，所述的食品或保健品中含有权利要求1所述的菌株黔PR12。

4.权利要求1所述的菌株黔PR12在制备饮料中的应用。

5.一种饮料，所述的饮料中含有权利要求1所述的菌株黔PR12。

6.权利要求1所述的菌株黔PR12在制备提高人体免疫力药物上的应用。