CN114145179B - 一种白色肺形侧耳及其栽培方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于食用菌领域，具体公开了一种肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius(Fr.)Quél.)菌株黔侧02，其保藏编号为CCTCC NO:M2021259。本发明还公开了该菌株在食品、保健品或饮料中的用途。已知的肺形侧耳菌株的子实体颜色为灰色或褐色，而本发明菌株黔侧02的子实体呈纯白色，洁白美观，是一种新的肺形侧耳菌株类型，商品价值极高；其次，该菌株子实体质地紧密，口感清脆，食用品质好；此外，该菌株的栽培周期比已知肺形侧耳菌株缩短10～20天，其栽培周期短；另外，黔侧02的产量高，平均每袋产量310.7g。因而黔侧02的市场前景极广。

Description

一种白色肺形侧耳及其栽培方法
技术领域
本发明属于食用菌领域，具体涉及一种白色肺形侧耳菌株，以及该白色肺形侧耳菌株的栽培方法。
背景技术
肺形侧耳(又名秀珍菇。别名：凤尾菇、凤尾侧耳、印度平菇或喜马拉雅平菇等；其拉丁名为：Pleurotus pulmonarius(Fr.)Quél.)属于侧耳科侧耳属。肺形侧耳外形小巧秀美，不仅质地细嫩，味道鲜美，而且营养丰富，含有丰富的蛋白质、糖类、不饱和脂肪酸、维生素、叶酸和多种微量元素等；肺形侧耳的蛋白质含量比香菇、草菇都高；其子实体中含有18种氨基酸，其中天冬氨酸和谷氨酸含量较高。另外，肺形侧耳具有的蛋白含量高、低脂肪酸特性，可作为减肥保健食品；其含有的多糖成分具有抗肿瘤功能，还能用于提高人体免疫力。故肺形侧耳被视为是一种营养价值极高的珍稀食用菌，有“菇中极品”的美誉。
目前，已知肺形侧耳的子实体菌盖颜色为灰色或褐色，颜色较为单一；其次，肺形侧耳品种较少，国家认定的肺形侧耳品种仅有2个；此外，栽培周期长。难以满足人们高水平生活的消费需求。
我国从南到北的原始森林中具有丰富的野生食用菌资源，其中包括野生的肺形侧耳资源。对野生的肺形侧耳资源进行开发，不仅可以丰富人们的餐桌，而且还可以利用食用菌药食兼用的特性，开发出附加值更高的食品、饮料和保健品等，从而大大提高菇农的收入和出口创汇能力。
经检索，没有发现菌盖颜色为白色的肺形侧耳。
发明内容
本发明目的在于提供一种白色的肺形侧耳菌株。
本发明另一目的在于提供上述肺形侧耳菌株的栽培方法。
本发明的目的通过如下技术方案实现：
本发明提供一种肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius(Fr.)Quél.)菌株黔侧02，已于2021年3月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国武汉武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO:M2021259。
上述菌株黔侧02，其子实体菌盖颜色为白色。
本发明还提供上述菌株黔侧02在食品或保健品中的应用。
本发明还提供一种食品或保健品，其所述的食品或保健品中含有上述菌株黔侧02或黔侧02的提取物。
本发明还提供上述菌株黔侧02在饮料中的应用。
本发明还提供一种饮料，其所述的饮料中含有上述菌株黔侧02或黔侧02的提取物。
本发明还提供上述菌株黔侧02在制备提高人体免疫力药物中的应用。
本发明还提供一种肺形侧耳基因工程菌株，所述的基因工程菌株的出发菌为上述菌株黔侧02。
本发明还提供了上述肺形侧耳菌株黔侧02的栽培方法，包括如下步骤：
(1)母种培养：将黔侧02菌种接种于母种培养基上，在25℃、空气相对湿度60～75％、避光条件下培养8天，得黔侧02母种；
(2)原种培养：按照1:30的质量比将步骤(1)中所得的黔侧02母种接种于原种培养基上，在25℃、空气相对湿度60～75％、避光条件下培养25～30天，得黔侧02原种；
(3)栽培种培养：按照1:30的质量比将步骤(2)中所得的黔侧02原种接种到栽培种培养基上，在25℃、空气相对湿度60～75％、避光条件下培养25～30天，得黔侧02栽培种；
(4)栽培培养料接种：在无菌环境中，取出菌袋中心的塑料棒，按照1:30的质量比将步骤(3)中所得的黔侧02栽培种接种到栽培培养料中心的棒孔中，再用套环和棉塞封口；在25℃、空气相对湿度60～75％、避光条件下培养30～35天，菌丝长满培养料；
(5)搔菌：将菌袋袋口打开，再用灭菌后的小铲刀将表面的老菌皮挖去，露出新鲜菌丝；
(6)低温刺激：将菌袋置于4℃环境中低温刺激12小时，低温刺激促进出菇整齐；
(7)出菇管理和采收：出现原基后，在温度23℃、空气相对湿度80～90％、散射光500～600lx，通风良好条件下培养6～8天；当子实体菌盖平展，孢子未弹射时，采收子实体。
上述栽培方法步骤(1)中所述的母种培养基的组成成分及其比例为：去皮马铃薯200g取汁，葡萄糖20g，琼脂18g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，混匀，用纯净水定容至1000mL。
所述的母种培养基的制备方法：将马铃薯200g去皮切成1.5cm左右方块，放入800mL纯净水中煮沸20min，3层纱布过滤，取浸提液，再加入葡萄糖20g，琼脂18g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，混匀；用纯净水定容至1000mL，121℃灭菌30min；倒入直径9cm平板，备用。
上述栽培方法步骤(2)中所述原种培养基的组成成分及其重量百分比为：玉米芯40％，棉籽壳40％，麦麸15％，豆粨2％，石灰2％，轻质碳酸钙1％；培养基含水量为60～65％。
所述步骤(2)中原种培养基的制备方法：按步骤比例取玉米芯40％，棉籽壳40％，麦麸15％，豆粨2％，石灰2％，轻质碳酸钙1％，混合均匀；然后按照比例加水，搅拌均匀，装入聚丙烯塑料袋(规格15cm×33cm×0.005cm)，121℃灭菌2小时，备用。
上述栽培方法步骤(3)中所述栽培种培养基的组成成分及其重量百分比与步骤(2)中所述的原种培养基相同，制备方法亦相同。
上述方法步骤(4)中所述的栽培培养料的组成成分及其重量百分比与步骤(2)中所述的原种培养基相同，制备方法也相同，区别是在将栽培料装入袋中时，袋口中心插入13cm空心塑料棒，3.5cm套环配套棉塞封口，121℃灭菌2小时，再冷却至常温；备用。
本发明具有的优点和有益技术效果：(1)本发明肺形侧耳黔侧02的子实体呈纯白色，洁白美观，商品价值高，而已知的肺形侧耳菌株的子实体一般为灰色或褐色，尚无白色肺形侧耳，本发明为消费者提供了一种新的肺形侧耳类型。(2)本发明菌株黔侧02的子实体质地紧密，口感清脆，食用品质好。(3)本发明菌株黔侧02栽培周期短，从栽培培养料接种到出菇采收的周期为50～60天，而现有的肺形侧耳主栽品种凤尾菇、京秀1号、秀03、夏秀004、中农秀珍(国品认菌2008027)、秀珍菇5号(国品认菌2008026)的栽培周期分别为60～80天、60～70天、70～90天、70～80、70～90天、70～90天；黔侧02比现有肺形侧耳主栽品种栽培周期缩短10～20天。(4)黔侧02产量高，其农业式栽培每袋平均产量为310.7g，菇农经济效益高。
生物保藏：本发明肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius(Fr.)Quél.)菌株黔侧02是本发明人在贵州省铜仁梵净山地区采集，并经筛选、培育而成；该菌株已于2021年3月22日保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏地址为：地址中国武汉武汉大学；其保藏编号为CCTCC NO:M2021259。
附图说明:
图1.本发明菌株黔侧02的子实体照片。
图2.本发明菌株黔侧02的系统发育树图。
图3.采用RAPD引物S18扩增的不同肺形侧耳菌种的PAPD对比电泳图谱；其中M为DNA分子量标准，1为黔侧02；2为凤尾菇；3为京秀1号；4为秀03；5为夏秀004。
图4.采用RAPD引物S2056扩增的不同肺形侧耳菌种的PAPD对比电泳图谱；其中M为DNA分子量标准，1为黔侧02；2为凤尾菇；3为京秀1号；4为秀03；5为夏秀004。
具体实施方式
以下通过实例对本发明作进一步说明，但是对本发明不构成任何限制。
实施例1本发明菌株黔侧02的采集、分离驯化过程
2019年8月，本发明人在贵州铜仁梵净山地区，梵净山山顶发现了野生的白色食用菌子实体。将野生的子实体组织分离得到菌丝(菌种)，然后将组织分离后的菌种进行栽培出菇试验，再对朵型良好的子实体进行组织分离，接种于PDA培养基上进行培养，筛选菌丝生长速度快，长势均匀的菌株，的菌株继续栽培驯化，经过数代培养，筛选出一个遗传性状稳定、纯白色的食用菌菌株，命名为：黔侧02。
实施例2本发明菌株黔侧02的分类鉴定
(1)黔侧02的形态学鉴定：
子实体丛生，纯白色；菌盖呈扇形，菌盖截面平整，中部稍凹，菌盖直径5.1～12.3cm，平均8.2cm；菌盖厚度适中，0.8～1.2cm，平均1.0cm；菌柄长0.8～2.3cm；菌褶无网纹，菌褶延生至菌柄顶端；子实体质地紧密。根据《中国大型菌物资源图鉴》(李玉主编，中原农民出版社，2015年出版)第990页有关肺形侧耳的照片及相应特征描述，黔侧02与肺形侧耳的形态特征一致，说明黔侧02在分类上属于侧耳属肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius(Fr.)Quél.)。
(2)黔侧02分子生物学鉴定
采用植物基因组DNA提取试剂盒CW0531(北京康为世纪公司)提取黔侧02菌株的DNA，以ITS1和ITS4为引物进行PCR扩增，并对扩增产物进行测序。所述的引物序列如下：
ITS1：5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'；
ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'。
ITS-PCR反应体系为：总体积20μL：20-50ng/μL的DNA模板1μL，10×Buffer(withMg2+)2μL，2.5mM dNTP 0.5μL，5U/μl DNA聚合酶0.2μL，0.2μM引物各0.5μL，加双蒸水至20μL。ITS-PCR反应条件为：预变性94℃5min；94℃1min，60℃1min，72℃75s，30个循环；72℃延伸10min。将PCR扩增产物进行凝胶电泳。结果所得PCR扩增产物为长度为573bp的DNA分子片段。
将该DNA分子片段送交上海生工进行测序，结果该DNA分子片段的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示(ITS序列)。
将本发明菌株黔侧02的ITS序列在GeneBank上进行BLAST比对，并构建系统发育树。结果本发明菌株黔侧02与肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)的相似度最高，相似度达99.83％；结合系统给发育树图(见图2)可以看出，本发明菌株黔侧02在分类上属于侧耳属肺形侧耳种(Pleurotus pulmonarius(Fr.)Quél.)。此外，从相似度对比结果可以看出，黔侧02与任何已知的肺形侧耳菌株都不同，是一种新的肺形侧耳(又名秀珍菇)菌株。
实施例3本发明菌株黔侧02与其他肺形侧耳品种的PAPD对比分析试验(一)、试验菌株：1、黔侧02；2、凤尾菇(北京吉蕈园选育出的淡灰色肺形侧耳)；3、京秀1号(北京吉蕈园选育出的淡褐色肺形侧耳)；4、秀03(黔东南创健台江的灰色肺形侧耳)，5、夏秀004(江苏天龙菌业选育出的褐色肺形侧耳)。
(二)试验方法
采用植物基因组DNA提取试剂盒CW0531(北京康为世纪公司)分别提取黔侧02、凤尾菇、京秀1号、秀03和夏秀004菌株的基因组DNA，选取20条RAPD引物(见表1)进行PCR扩增。
表1RAPD随机引物序列
引物名称 引物序列5’-3’ 引物名称 引物序列5’-3’
S18 CCACAGCAGT S80 ACTTCGCCAC
S24 AATCGGGCTG S90 AGGGCCGTCT
S27 GAAACGGGTG S94 GGATGAGACC
S30 GTGATCGCAG S159 ACGGCGTATG
S32 TCGGCGATAG S242 CTGAGGTCTC
S39 CAAACGTCGG S484 AGTGCGCTGA
S43 GTCGCCGTCA S1017 CAGTGGGGAG
S64 CCGCATCTAC S1398 TGGTCCAGCC
S75 GACGGATCAG S2056 CTGGTGCTCA
S79 GTTGCCAGCC S2111 GACGACCGCA
RAPD-PCR扩增反应体系为：总体积20μL：20-50ng/μL的DNA模板1μL，10×Buffer(with Mg2+)2μL，2.5mM dNTP 0.5μL，5U/μl EasyTaq酶0.2μL，0.2μM引物1μL，加双蒸水至20μL。RAPD-PCR反应条件为：预变性95℃5min；94℃45s，36℃1min，72℃2min，35个循环；72℃延伸10min。
结果从以S18为引物扩增的RAPD电泳图谱(见图3)和以S2056为引物扩增的RAPD电泳图谱(见图4)中均可以看出，黔侧02相对于凤尾菇、京秀1号、秀03和夏秀004之间均存在明显区别的特异性条带，说明黔侧02与现有的肺形侧耳菌株不同，是一种新的肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius(Fr.)Quél.)菌株。
实施例4本发明肺形侧耳菌株黔侧02的栽培试验：
(1)母种培养：将黔侧02菌种(本菌种已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M2021259，保藏日期为2021年3月29日)接种于母种培养基上，在25℃、空气相对湿度70％、避光条件下培养8天，得黔侧02母种；所述的母种培养基的制备方法：将200g去皮马铃薯切成1.5cm左右方块，放入800mL水中煮沸20min，3层纱布过滤取浸提液，加入葡萄糖20g，琼脂18g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，混匀后定容至1000mL，121℃灭菌30min；倒入直径90mm平板；备用。
(2)原种培养：按照1:30的质量比将步骤(1)中黔侧02号母种接种于原种培养基上培养，在25℃、空气相对湿度70％、避光条件下培养30天，得黔侧02原种。所述原种培养基的组成成分及其重量百分比为：玉米芯40％，棉籽壳40％，麦麸15％，豆粨2％，石灰2％，轻质碳酸钙1％，培养基含水量65％。所述的原种培养基按照如下方法制备，按比例将各组分混合均匀，然后按比例加入水，搅拌均匀，即得原种培养基。将混匀的原种培养基装入聚丙烯塑料袋(规格15cm×33cm×0.005cm)，121℃灭菌2小时。
(3)栽培种培养：按照1:30的质量比将步骤(2)中所得黔侧02原种接种到栽培种培养基上。在25℃、空气相对湿度70％，避光条件下培养30天，得黔侧02栽培种。所述的栽培种培养基的组成成分及其重量百分比、配制方法、装袋和灭菌方式与步骤(2)的原种培养基相同。
(4)栽培培养料接种：在无菌环境中，取出菌袋中心的塑料棒，按照1:30的质量比将步骤(3)中所得黔侧02栽培种接种到栽培培养料中心的棒孔内，再用套环和棉塞封口，在25℃、空气相对湿度70％、避光条件下培养35天。其中所述的栽培培养料与步骤(2)所述的原种培养基的组成成分和配制方法相同，但是在装袋时在袋口中心插入13cm空心塑料棒，3.5cm套环配套棉塞封口，121℃灭菌2小时；备用。
(5)搔菌：将步骤(4)的菌袋袋口打开，用灭菌后的小铲刀将表面的老菌皮挖去，露出新鲜菌丝。
(6)低温刺激：将菌袋置于4℃环境中低温刺激12小时，低温刺激促进菇蕾整齐。
(7)出菇管理和采收：出现原基后，在温度23℃、空气相对湿度85％、散射光500lx、通风良好条件下培养8天；当子实体菌盖平展，菌盖边缘平伸，为最适宜采收期，可采收子实体。采收时左手按住栽培袋，右手握住菌柄基部，轻轻旋钮即可完成采摘，采摘后用保鲜盒封装。
对采收后的黔侧02子实体进行观测、称重。
结果(见图1)本发明菌株黔侧02的子实体呈纯白色，洁白美观，商品价值高，市场上尚无白色肺形侧耳，本发明为消费者提供了一种新的肺形侧耳类型。其次，本发明菌株黔侧02的子实体质地紧密，口感清脆，食用品质好。另外，本发明菌株黔侧02栽培周期短，从栽培培养料接种到出菇采收的周期为50～60天，如凤尾菇、京秀1号、秀03、夏秀004、中农秀珍(国品认菌2008027)、秀珍菇5号(国品认菌2008026)等肺形侧耳的栽培周期分别为60～80天、60～70天、70～90天、70～80、70～90天、70～90天，黔侧02比现有肺形侧耳栽培品种的栽培周期缩短10～20天。此外，黔侧02的产量高，其农业式栽培每袋平均产量为310.7g，菇农经济效益高。
序列表
<110> 贵州省土壤肥料研究所（贵州省生态农业工程技术研究中心）（贵州省农业资源与环境研究所）
<120> 一种白色肺形侧耳及其栽培方法
<141> 2021-11-12
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 573
<212> DNA
<213> Pleurotus pulmonarius
<400> 1
ttgctggcct ctaggggcat gtgcacgctt cactagtctt tcaaccacct gtgaactttt 60
gatagatctg cgaagtcgtc cttcaagtcg tcagacttgg tttgctggga tttaaacgtc 120
tcggtgtgac aacgcagtct atttacttaa cacaccccaa atgtatgtct acgaatgtca 180
tttaatgggc cttgtgccta taaaccataa tacaactttc aacaacggat ctcttggctc 240
tcgcatcgat gaagaacgca gcgaaatgcg ataagtaatg tgaattgcag aattcagtga 300
atcatcgaat ctttgaacgc accttgcgcc ccttggtatt ccgaggggca tgcctgtttg 360
agtgtcatta aattctcaaa ctcacattta tttgtgatgt ttggattgtt gggggttgct 420
ggctgtaaca agtcggctcc tcttaaatgc attagcagga cttctcattg cctctgcgca 480
tgatgtgata attatcactc atcaatagca cgcatgaata gagtccagct ctctaatcgt 540
ccgcaaggac aatttgacaa tttgacctaa aat 573

Claims (6)

1.一种肺形侧耳（Pleurotus pulmonarius (Fr.) Quél.）菌株黔侧02，保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2021259；所述的黔侧02的子实体菌盖颜色为白色。
2.权利要求1所述的菌株黔侧02在食品或保健品中的应用。
3.一种食品或保健品，其特征在于，所述的食品或保健品中含有权利要求1所述的菌株黔侧02或黔侧02的提取物。
4.权利要求1所述的菌株黔侧02在饮料中的应用。
5.一种饮料，其特征在于，所述的饮料中含有权利要求1所述的菌株黔侧02或黔侧02的提取物。
6.权利要求1所述的菌株黔侧02在制备提高人体免疫力药物中的应用。
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