CN112961787B - 一种杨柳田头菇菌株及其栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种杨柳田头菇菌株及其栽培方法，所述的杨柳田头菇JZ527菌株保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2020年7月24日，保藏编号：CGMCC No.20231。栽培方法包括栽培种制备和覆土栽培步骤。本发明利用云南原产地杨柳田头菇子实体获得出杨柳田头菇菌株，其在大棚覆土栽培时出菇时间长，产量稳定，为杨柳田头菇人工栽培提供优良菌种。

Description

一种杨柳田头菇菌株及其栽培方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种杨柳田头菇菌株及其栽培方法。

背景技术

杨柳田头菇(Agrocybe salicacola)也称柳生田头菇、杨柳菇、柳树菇，是云南特有珍稀食用菌。该菌于每年3-11月发生，6-10月为盛产期，主要于温带、亚热带地区柳树和杨树上。杨柳田头菇味道鲜美、菇质脆嫩，深受当地人们喜爱。刘绍雄等对杨柳田头菇子实体营养成分分析表明，杨柳田头菇子实体不仅蛋白质含量高，粗纤维、矿物质和氨基酸非常丰富，特别是人体必需氨基酸缬氨酸、苏氨酸、赖氨酸含量较高，还含有人体必需的微量元素硒，具有较高的食用价值和保健价值，是一种开发潜力巨大的食药用菌。

目前，杨柳田头菇研究主要集中在分类地位、生活史及遗传基因等方面，如周会明等研究了杨柳田头菇生活史及分类地位，何莹莹等开展了云南田头菇属两个物种遗传多样性的AFLP分析。杨柳田头菇为近些年来成功驯化栽培的野生食用菌品种之一，驯化栽培研究并不多，仅有少数几篇研究报道。前人研究表明，该菌栽培方法简单，适应范围广、出菇快，有较大的推广前景，但目前并未进行规模化、商业化栽培生产，这可能与缺少优良菌种的选育及栽培技术系统化研究具有密切关系。因此，开展野生杨柳田头菇菌株资源的收集及驯化栽培研究，对优良菌种的筛选和规模化栽培推广具有重要作用。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种杨柳田头菇菌株；第二目的在于提供所述的杨柳田头菇菌株（Agrocybe salicacola）JZ527的栽培方法。

除非另有说明外，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

本发明的第一目的是这样实现的，杨柳田头菇菌株（Agrocybe salicacola）JZ527，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2020年7月24日，保藏编号：CGMCC No.20231。

——杨柳田头菇菌株（Agrocybe salicacola）JZ527的获得与鉴定

1、杨柳田头菇菌株的分离培养

（1）对采集的野生杨柳田头菇子实体进行组织分离，将杨柳田头菇内壁组织块接种到试管琼脂培养基斜面上，于20-25℃下培养7-10d，对分离培养的试管每天观察记录，及时剔除已污染的试管，挑选出无污染、长势良好的菌株，获得杨柳田头菇分离试管种。所述的试管琼脂培养基为PDA综合培养基，其配方为：马铃薯20%、葡萄糖2.0%、蛋白胨0.2%、KH₂PO₄ 0.1%、MgSO₄ 0.05%、琼脂2.0%，培养温度20-25℃，所述的百分数是质量分数。

（2）将杨柳田头菇分离试管种菌丝体接种到PDA综合培养基平板培养皿上进行菌种纯化，7d后取尖端菌丝块接种在培养基斜面上，于20-25℃下避光培养7-10d，获得杨柳田头菇纯化菌株JZ527，JZ527菌株经驯化栽培能稳定出菇。

2、鉴定及保藏

⑴野生子实体形态特征

杨柳田头菇子实体菌盖直径0.5 -6.0 cm，初期半球形，渐变为扁半球形，后期渐平展，偶尔中部稍下陷；幼时菌缘内卷，后边缘渐平展，成熟时中部米黄色，向盖缘颜色渐浅至白色；表面光滑或中部常龟裂，不粘，无辐射状条纹；边缘常有菌幕残片。菌肉白色，伤不变色，较薄。菌褶延生，稠密，初浅褐色，成熟后灰褐色。菌柄近圆柱形，污白色，密被褐色小鳞片，向下渐稀，内实菌环生柄之上部，大，膜质，上面有辐射状细条纹，下面污白色，被褐黄色鳞片，宿存或易消失，菌盖皮层末端菌丝捧状至近圆柱形，担孢子椭圆形，褐色，7.0~10.5μm×4.0~6.0 μm。

形态鉴定参考《中国大型真菌》(卯晓岚.郑州：河南科学技术出版社,2000)和《中国大型菌物资源图鉴》（李玉, 李太辉, 杨祝良,等. 郑州: 中原农民出版社, 2015）。

（2）菌丝体分子生物学鉴定

取JZ527菌丝体，用Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒分别提取基因组总DNA，进行PCR扩增及ITS序列测定，通过Blast对比样品的ITS序列与NCBI中的杨柳田头菇(A. salicacola)序列Identities= 606/606(100%)，Gaps= 0/606(0%)，分析确定分离得到的杨柳田头菇纯化试管种即新的杨柳田头菇菌株为杨柳田头菇菌丝体。其具体方法如下：

① DNA提取

取纯化菌丝体，经液氮充分研磨，用大连宝生物工程有限公司的Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒分别提取基因组总DNA。

② DNA纯度及浓度检测

取2μl DNA样品，用TE缓冲液定容至50μl，用紫外分光光度计测定波长在230nm、260nm、280nm处的OD值，根据260nm处的OD值计算DNA浓度，根据260/280、260/230值确定DNA的纯度。

③ DNA分子量检测

取DNA样品5μl，上样缓冲液（含0.25%溴酚蓝，40%蔗糖）2μl，混匀，点入含0.75μl核酸染料的0.8%琼脂糖凝胶中，同时点入λ-Lambda mix marker作为标记，用1×TAE缓冲液，在80V电压下电泳80min，最后在凝胶成像仪下观察并照相。

④ ITS-PCR扩增

采用White设计的ITS通用引物ITS4/ITS5对供试材料的rDNA ITS序列进行PCR扩增。其ITS引物如下：

ITS4: 5’—TCCTCCGCTTATTGATATGC—3’

ITS5: 5’—GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG—3’

ITS-PCR扩增体系为50μL，含rTaq(5U/μL)0.5μL，10×PCR Buffer 6.25μL，Mgcl₂(25mmol/L)5.0μL，dNTP混合物(各2.5mmol/L)0.75μL，ITS1/ITS4引物(10μmol/L)各2.5μL，模板DNA(50ng/μL)2.5μL，ddH₂O补足至总体积50μL。

PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性40s；52℃退火45s；72℃延伸1min；共40个循环；最后于72℃补平10min，终止温度为4℃。采用1.8%的琼脂糖凝胶电泳检测ITS-PCR扩增产物，用凝胶成像系统拍照记录电泳谱带。

⑤ ITS扩增产物的序列测定

PCR扩增产物经电泳检测后，用胶回收试剂盒进行回收和纯化，样品送至擎科生物技术测序。

⑥ ITS序列分析

将扩增得到的各样品的ITS序列，进行正反链序列拼接，将拼接好的序列保存为FASTA格式，然后在NCBI网站上进行序列同源性比较，应用BLAST（ww.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST）进行同源性搜索，与数据库中各菌株序列进行相似性分析，与数据库中已有的Agrocybe salicacicola的各个菌株相应序列一致性（Identities）都达到97%~100%。从GeneBank数据库下载同属的物种和香菇的ITS序列，且使用MEGA6.0软件构建NJ系统发育树，使用默认参数，Bootstrap检验为1000次。JZ527菌丝体序列如SEQ ID NO：1所示。

从图1可以看出JZ527的菌丝与GeneBank数据库中的杨柳田头菇同属物种聚为一枝，综合BLAST比对和系统发育树的结果结合形态学鉴定结果，可以得出JZ527为杨柳田头菇（Agrocybe salicacola）。

（3）保藏

① 斜面试管保藏，将菌丝长满试管三分之二时放入冰箱4℃保藏；超低温保藏，切取菌丝块置于20%无菌甘油冻存管内放入-80℃冰箱保存。

② 杨柳田头菇(Agrocybe salicacola)JZ527的保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2020年7月24日；保藏登记入册的编号CGMCC NO.20231。

本发明的第二目的是这样实现的，包括栽培种制备和覆土栽培步骤，具体包括：

A、栽培种制备：

1）原种制备：将杨柳田头菇（Agrocybe salicacola）JZ527的菌块接种到原种培养料上，于温度20~25℃暗培养25~30天得到原种；

2）栽培种制备：将原种接种到栽培种培养料上于温度20~25℃避光培养得到栽培种；

所述的原种培养料配方为：木屑65~75份，小麦25~35份，石膏0.5~1.5份；

所述的栽培种培养料配方为：木屑50~70份、棉籽壳25~35份、麦麸8~12份、石膏0.5~1.5份；

B、覆土栽培：

a、播种：将栽培种菌种播种到畦床上，接着在菌种层上覆盖一层土壤，最后再加盖一层保湿层；

b、管理：覆土5~10天形成原基，进行催菇管理；原基分化3~5天至子实体成熟期间控制温度为15~28℃、湿度为85~95%，同时做好病虫害防治；

C、采收：在杨柳田头菇菌盖开伞前即进行采收。

本发明的杨柳田头菇JZ527的主要形态特征和生理生化性质为：

该菌株的菌落在PDA综合培养基上培养，菌落近圆形，菌丝洁白、浓密、粗壮整齐；在光学显微镜下菌丝无色透明，多分枝，锁状联合明显；子实体担孢子椭圆形，褐色，7.0~10.5 μm×4.0~6.0 μm。

本发明优点：

1. 从杨柳田头菇发生地——云南省剑川县生长的该菌的子实体进行组织分离培养得到菌株JZ527，具有明显的地域性特征；

2. 利用菌株CGMCC NO. 20231制作菌种，菌丝生长快，污染少，菌丝壮；

3. 人工栽培子实体性状稳定；

4. 在大棚覆土种植出菇时间长，产量较高，能实现规模化栽培，具有较高的应用价值。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明利用云南原产地杨柳田头菇子实体获得出杨柳田头菇菌株，其在大棚覆土栽培时出菇时间长，产量稳定，为杨柳田头菇人工栽培提供优良菌种。

附图说明

图1为基于ITS序列构建的系统发育树；

图2为杨柳田头菇JZ527（CGMCC NO.20231）菌丝体照片示意图；

图3 杨柳田头菇JZ527（CGMCC NO.20231）出菇照片一；

图4杨柳田头菇JZ527（CGMCC NO.20231）出菇照片二。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的杨柳田头菇菌株（Agrocybe salicacola）JZ527，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2020年7月24日，保藏编号：CGMCC No.20231。

本发明所述的杨柳田头菇菌株（Agrocybe salicacola）JZ527的栽培方法，包括栽培种制备和覆土栽培步骤，具体包括：

A、栽培种制备：

1）原种制备：将杨柳田头菇（Agrocybe salicacola）JZ527的菌块接种到原种培养料上，于温度20~25℃暗培养25~30天得到原种；

2）栽培种制备：将原种接种到栽培种培养料上于温度20~25℃避光培养得到栽培种；

所述的原种培养料配方为：木屑65~75份，小麦25~35份，石膏0.5~1.5份；

所述的栽培种培养料配方为：木屑50~70份、棉籽壳25~35份、麦麸8~12份、石膏0.5~1.5份；

B、覆土栽培：

a、播种：将栽培种菌种播种到畦床上，接着在菌种层上覆盖一层土壤，最后再加盖一层保湿层；

b、管理：覆土5~10天形成原基，进行催菇管理；原基分化3~5天至子实体成熟期间控制温度为15~28℃、湿度为85~95%，同时做好病虫害防治；

C、采收：在杨柳田头菇菌盖开伞前即进行采收。

A步骤中所述的原种培养料配方为：木屑70份，小麦29份，石膏1份；

A步骤中所述的栽培种培养料配方为：木屑60份、棉籽壳29份、麦麸10份、石膏1份；

B步骤a）中所述的土壤的厚度为2~5cm。

B步骤a）中所述的保湿层为稻草或松针。

所述的保湿层的厚度为0.5~1.5cm。

所述的保湿层需要过石灰水消毒。

B步骤（b）中所述的催菇管理是喷一次催菇重水，加大通风，降低温度为15~20℃，刺激原基形成。

下面以具体实施对本发明做进一步说明：

下述各实施例中使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

杨柳田头菇JZ527（CGMCC NO.20231）的分离、培养、鉴定及保藏

1、杨柳田头菇菌株的分离培养

（1）对采集的野生杨柳田头菇子实体进行组织分离，将杨柳田头菇内壁组织块接种到试管琼脂培养基斜面上，于20-25℃下培养7-10d，对分离培养的试管每天观察记录，及时剔除已污染的试管，挑选出无污染、长势良好的菌株，获得杨柳田头菇分离试管种。所述的试管琼脂培养基为PDA综合培养基，其配方为：马铃薯20%、葡萄糖2.0%、蛋白胨0.2%、KH₂PO₄ 0.1%、MgSO₄ 0.05%、琼脂2.0%，培养温度20-25℃，所述的百分数是质量分数。

（2）将杨柳田头菇分离试管种菌丝体接种到PDA综合培养基平板培养皿上进行菌种纯化， 7d后取尖端菌丝块接种在培养基斜面上，于20-25℃下避光培养7-10d，获得杨柳田头菇纯化菌株JZ527，JZ527菌株经驯化栽培能稳定出菇。

2、鉴定及保藏

⑴野生子实体形态特征

杨柳田头菇子实体菌盖直径0.5 -6.0 cm，初期半球形，渐变为扁半球形，后期渐平展，偶尔中部稍下陷；幼时菌缘内卷，后边缘渐平展，成熟时中部米黄色，向盖缘颜色渐浅至白色；表面光滑或中部常龟裂，不粘，无辐射状条纹；边缘常有菌幕残片。菌肉白色，伤不变色，较薄。菌褶延生，稠密，初浅褐色，成熟后灰褐色。菌柄近圆柱形，污白色，密被褐色小鳞片，向下渐稀，内实菌环生柄之上部，大，膜质，上面有辐射状细条纹，下面污白色，被褐黄色鳞片，宿存或易消失，菌盖皮层末端菌丝捧状至近圆柱形，担孢子椭圆形，褐色，7.0~10.5μm×4.0~6.0 μm。

形态鉴定参考《中国大型真菌》(卯晓岚.郑州：河南科学技术出版社,2000)和《中国大型菌物资源图鉴》（李玉, 李太辉, 杨祝良,等. 郑州: 中原农民出版社, 2015）。

（2）菌丝体分子生物学鉴定

取JZ527菌丝体，用Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒分别提取基因组总DNA，进行PCR扩增及ITS序列测定，通过Blast对比样品的ITS序列与NCBI中的杨柳田头菇(A. salicacola)序列Identities= 606/606(100%)，Gaps= 0/606(0%)，分析确定分离得到的杨柳田头菇纯化试管种即新的杨柳田头菇菌株为杨柳田头菇菌丝体。其具体方法如下：

① DNA提取

取纯化菌丝体，经液氮充分研磨，用大连宝生物工程有限公司的Ezup柱式真菌基因组DNA抽提试剂盒分别提取基因组总DNA。

② DNA纯度及浓度检测

取2μl DNA样品，用TE缓冲液定容至50μl，用紫外分光光度计测定波长在230nm、260nm、280nm处的OD值，根据260nm处的OD值计算DNA浓度，根据260/280、260/230值确定DNA的纯度。

③ DNA分子量检测

取DNA样品5μl，上样缓冲液（含0.25%溴酚蓝，40%蔗糖）2μl，混匀，点入含0.75μl核酸染料的0.8%琼脂糖凝胶中，同时点入λ-Lambda mix marker作为标记，用1×TAE缓冲液，在80V电压下电泳80min，最后在凝胶成像仪下观察并照相。

④ ITS-PCR扩增

采用White设计的ITS通用引物ITS4/ITS5对供试材料的rDNA ITS序列进行PCR扩增。其ITS引物如下：

ITS4: 5’—TCCTCCGCTTATTGATATGC—3’

ITS5: 5’—GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG—3’

ITS-PCR扩增体系为50μL，含rTaq(5U/μL)0.5μL，10×PCR Buffer 6.25μL，Mgcl₂(25mmol/L)5.0μL，dNTP混合物(各2.5mmol/L)0.75μL，ITS1/ITS4引物(10μmol/L)各2.5μL，模板DNA(50ng/μL)2.5μL，ddH₂O补足至总体积50μL。

PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性40s；52℃退火45s；72℃延伸1min；共40个循环；最后于72℃补平10min，终止温度为4℃。采用1.8%的琼脂糖凝胶电泳检测ITS-PCR扩增产物，用凝胶成像系统拍照记录电泳谱带。

⑤ ITS扩增产物的序列测定

PCR扩增产物经电泳检测后，用胶回收试剂盒进行回收和纯化，样品送至擎科生物技术测序。

⑥ ITS序列分析

将扩增得到的各样品的ITS序列，进行正反链序列拼接，将拼接好的序列保存为FASTA格式，然后在NCBI网站上进行序列同源性比较，应用BLAST（ww.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST）进行同源性搜索，与数据库中各菌株序列进行相似性分析，与数据库中已有的Agrocybe salicacicola的各个菌株相应序列一致性（Identities）都达到97%~100%。从GeneBank数据库下载同属的物种和香菇的ITS序列，且使用MEGA6.0软件构建NJ系统发育树，使用默认参数，Bootstrap检验为1000次。JZ527菌丝体序列如SEQ ID NO：1所示。

从图1可以看出JZ527的菌丝与GeneBank数据库中的杨柳田头菇同属物种聚为一枝，综合BLAST比对和系统发育树的结果结合形态学鉴定结果，可以得出JZ527为杨柳田头菇（Agrocybe salicacola）。

（3）保藏

① 斜面试管保藏，将菌丝长满试管三分之二时放入冰箱4℃保藏；超低温保藏，切取菌丝块置于20%无菌甘油冻存管内放入-80℃冰箱保存。

② 杨柳田头菇(Agrocybe salicacola)JZ527的保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2020年7月24日；保藏登记入册的编号CGMCC NO.20231。

实施例2

杨柳田头菇JZ527（CGMCC NO.20231）子实体栽培的方法

1、杨柳田头菇菌种制作

按配方：木屑70%、小麦29%、石膏1%，拌料装瓶，制作原种瓶灭菌、冷却，将杨柳田头菇JZ527长满试管切小块接入，放置于25℃暗培养，待长满后即可使用。按配方：木屑60%、棉籽壳29%、麦麸10%、石膏1%，使用聚丙烯菌种袋（规格17cm×35cm）装袋，每袋约800g，制作栽培种灭菌、冷却，将长好原种接入，25℃暗培养，待长满后即可作为栽培种使用。

2、杨柳田头菇覆土栽培

A、覆土

将长满菌丝的菌包进行脱袋，脱袋后的菌筒，在大棚内排列呈畦状，播种后立即覆土，覆土厚度为2cm-5cm，覆土后浇足水。

B、覆盖物

播种完成后，可加覆盖物，稻草、松针等。要求：覆盖物过石灰水消毒。

C、催菇

覆土7天左右有原基形成，即可进行催菇管理。方法：喷一次催菇重水，加大通风，降低棚内温度15-20℃，刺激原基形成。

D、出菇管理

原基分化到子实体成熟一般需要3-5天。保持温度15-28℃，空气相对湿度90%左右空气调节，注意通风，保持新鲜空气，同时做好病虫害防治工作等。

E、采收

杨柳田头菇不同成熟度的菇品质、口感差异很大，以菇体菌膜未破或微破时为适宜采收期，标准为菇盖颜色黄色、肉质肥厚、 大小均匀，菌柄粗壮近白色、长短整齐一致。因菇柄较脆易折断，采收时注意按住料面，捏住菌柄基部轻轻旋起，不要将培养料大块带下。采收结束后及时清理料面，去除残留菇根及死菇、烂菇，待菌丝恢复生长后进行二潮出菇管理。

实施例3

其它步骤同实施例2，不同点在于原种培养基的配方如下：木屑65份，小麦34份，石膏1份；

栽培种培养料配方为：木屑50份、棉籽壳25份、麦麸24份、石膏1份。

实施例4

其它步骤同实施例2，不同点在于原种培养基的配方如下：木屑75份，小麦24份，石膏1份；

栽培种培养料配方为：木屑70份、棉籽壳17份、麦麸12份、石膏1份。

SEQUENCE LISTING

<110> 中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所

<120> 一种杨柳田头菇菌株及其栽培方法

<130> 2021

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 629

<212> DNA

<213> JZ527菌丝体序列

<400> 1

tctcggtggg cttgatgctg gctttctttg aaggcatgtg caccgcctgt cgtctttatt 60

tcgtttccac ctgtgcaccc tttgtaggct tgaacagctt tttttttttt tggcctttgg 120

gtcagggttg gggactgcta acaaggctgt cctctaccgt tcgagtctat gtttttacac 180

tatacaccat tgttaaccct taaaatgtta aaggctctac gggggcctat ctaaacacta 240

tacaactttc agcaacggat ctcttggctc tcgcatcgat gaaaaacgca gcgaaatgcg 300

ataagtaatg ggaattgcaa aattcaggga atcatcgaat ctttgaacgc accttgcgct 360

ccttggtatt ccgaggagca tgcctgtttg agggtcatta cattctcaac cattggattt 420

tgtttttcga tggcttggac ttgggggatt tttgtgccgg ccctaaaggt cggctcccct 480

taaatgtatt agctggttgc ccctctcgcg tcgacttggg gggataaatc ttactttgcg 540

ccggttttct tgacggggat gtcttttggg gggctgcttt ctaaccgtcc cttggggaca 600

acgataaaaa tcccctcttc aaaggggca 629

Claims (3)

1.一种杨柳田头菇菌株（Agrocybe salicacola）JZ527的栽培方法，其特征在于，杨柳田头菇菌株（Agrocybe salicacola）JZ527的保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2020年7月24日，保藏编号：CGMCC No.20231；栽培方法包括栽培种制备和覆土栽培步骤，具体包括：

A、栽培种制备：

1）原种制备：将杨柳田头菇（Agrocybe salicacola）JZ527的菌块接种到原种培养料上，于温度20~25℃暗培养25~30天得到原种；原种培养料配方为：木屑65~75份，小麦25~35份，石膏0.5~1.5份；

2）栽培种制备：将原种接种到栽培种培养料上于温度20~25℃避光培养得到栽培种；栽培种培养料配方为：木屑50~70份、棉籽壳25~35份、麦麸8~12份、石膏0.5~1.5份；

B、覆土栽培：

a、播种：将长满菌丝的栽培种菌包脱袋，脱袋后的菌筒在大棚内排列到畦床上，接着在菌种层上覆盖一层2~5cm的土壤，最后再加盖一层厚度为0.5~1.5cm的保湿层，保湿层为稻草或松针；保湿层需要过石灰水消毒；

b、管理：覆土5~10天形成原基，进行催菇管理，催菇管理是喷一次催菇重水，加大通风，降低温度为15~20℃，刺激原基形成；原基分化至子实体成熟的3~5天期间控制温度为15~28℃、湿度为85~95%，同时做好病虫害防治；

C、采收：在杨柳田头菇菌盖开伞前即进行采收。

2.根据权利要求1所述的栽培方法，其特征在于，A步骤中原种培养料配方为：木屑70份，小麦29份，石膏1份。

3.根据权利要求1所述的栽培方法，其特征在于，A步骤中栽培种培养料配方为：木屑60份、棉籽壳29份、麦麸10份、石膏1份。

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